JPS61218598A - バ−ソポイエチン - Google Patents

Abstract

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め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、一般に、新規なペプチド、とくに選択的Ｂ細
胞の分化を誘導する新規な合成ペプチドに関する。

リンパ球の２つの主要な部類はを推動物の免疫系におい
て発生する：１）胸腺において分化する１９７２球また
はＴ細胞、および２）鳥類のファブリキウス嚢（Ｂｕｒ
ｓａ　　ｏｆ　　Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）においておよび
多分包嚢をもたないを椎動物におけるある相同器官にお
いて分化する８９７７球またはＢ細胞、Ｔ細胞およびＢ
細胞の仲介前駆体は、骨髄に見出され、そして特定のホ
ルモンまたは「誘導物質」により誘導されて成熟細胞に
分化する。Ｔ細胞の場合において、誘導物質はポリペプ
チドのサイモポイエチン（ｔ　ｈｙｍｏ　ｐｏｉｅｔｉ
ｎ）であり、これは広範に研究されてきている０例えば
、米国特許第４，００２，７４０号、米国特許第４，０
７７．９４９号および米国特許第４，１９０，６４６号
参照１本発明者らのうちの一人はこれらの特許の発明者
または共同発明者である。

本発明のペプチドの分化する生物学的特性の重要性の一
般的理解を提供するために、免疫に関する胸腺の機能は
胸Ｓａ導リンパ球（Ｔ細胞と呼ばれる）の生産として広
く述べることができる。Ｔ細胞は循環する小さいリンパ
球のプールの大きい集団を形成する。それらは免疫学的
特異性を有し、そして細胞仲介免疫応答（例えば、同種
移植の応答）にエフェクター細胞として直接参加する。

しかしながら、Ｔ細胞は抗体を分泌せず、この機能はＢ
細胞と名付けられるリンパ球の別の部類により実施され
る。Ｂ細胞は胸腺の影響に対して独立に骨髄中で前駆Ｂ
細胞（Ｐｒｅｃｕｒｓ。

ｒＢ−ｃｅｌｌ）から誘導される。鳥類において、それ
らはファブリキウス嚢と呼ばれる胸腺に類似する器官中
で分化する。哺乳類において、同等の器官は発見されて
きていず、モしてＢ細胞は骨髄自体の内部で分化するこ
とができると考えられる。この分化を命令する生理学的
物質は、本発明まで完全に未知のままであった。

本発明者らの一人などによる早期の研究において、特異
的Ｂ細胞分化誘導物質の存在はニワトリからのファブリ
キウス嚢の抽出物中で立証された。この抽出物中の活性
物質は特徴づけられていなかったが、早期の論文の１つ
の著者らは「小さいポリペプチドであることを推定する
」と述べた。この早期の研究は次の論文に報告されてい
るニブランド（Ｂ　ｒ　ａ　ｎ　ｄ）ら、サイエンス（
Ｓｃｉｅｎｃｅ）、Ｖｏｌ、１９３，３１９−３２１ペ
ージ（１９７６年７月２３日）ニブランド（Ｂｒａｎｄ
）ら、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、Ｖｏ　１．２６９
．５９７−５９８ページ（１９７７年ｌθ月１３日）；
ゴールドシュタイン（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ）ら、ゴール
ド・スプリング・ハーバ−・シンボシア・オン・コンテ
ィタテイブ・バイオロジー（Ｃｏｌｄ　　Ｓｐｒｉｎｇ
　　Ｈａｒｂｅｒ　　Ｓｙｍｐｏｓｉａ　　ｏｎ　　Ｑ
ｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　　Ｂｉｏｌｏｇｙ）、Ｖｏｌ
、ＸＬＩ、５−８ページ（１９７７）；ゴールドシュタ
イン（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ）、ｒモレギュラー〇コント
ロール・オブ・プロリファレイジョン・アンド・ディフ
ァレンシエイション（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　　Ｃｏｎｔ
ｒｏｌ　　ｏｆ　　Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　　ａ
ｎｄ　　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆａｔ　ｉ　ｏｎ）Ｊ　　
、１９７−２０２ページ、アカデミツク争ブレス（Ａｃ
ａｄｅｍｉｃ　　Ｐ　ｒ　ｅ　ｓｓ）　　（１９７７）
。

特異的Ｂ細胞分化因子の発見は、免疫機能の理解および
人間および動物における種々の免疫疾患の診断および処
置においてかなりの価値を有するであろう０例えば、低
γ−グロブリン血症と呼ばれる稀であるが潜在的に致命
的な病気は１個体が抗体を生産することの不能または激
烈な欠損として表われる。このような個体は、抑制され
ない感染に対して感受性であり、そして比較的短い寿命
の予測数量を有する。この病気はいくつかの原因を有す
ると信じられるが、少なくとも１つは機能的Ｂ細胞の不
存在である０機能的Ｂ細胞の不存在はＢ細胞分化ホルモ
ンの生産不足のためである場合、このホルモンの投与は
患者を正常に回復させるであろう。

本発明は、バーツボイエチン（ｂｕｒｓｏｐ。

ｔ　ｅ　ｔ　ｉ　ｎ）の特異的Ｂ細胞分化機能を有する
合成３−アミノ酸ペプチドを提供することである。

したがって１本発明の１つの目的は生物学的に重要な新
規な合成ペプチドを提供することである。

本発明の他の目的は、Ｂ細胞への前駆骨髄細胞の分化を
特異的に誘導する能力を有し、これによりヒトおよび動
物の免疫系において高度に有用である新規な合成ペプチ
ドを提供することである。

本発明の他の目的は、生物学的に重要なペプチドの調製
の新規な中間体１本発明のペプチドを合成する方法、お
よび診断および治療のため、の組成物および方法を提供
することである。

本発明の他の目的および利点は、説明が進行するにつれ
て明らかとなるであろう。

上の目的および利点の達成において、本発明によれば、
次の式： ％式％ を有するペプチドおよびその生物学的に活性な製薬学的
に許容されうる酸付加塩が提供される。

本発明は、また、本発明のペプチドの調製の新規なペプ
チド−樹脂中間体を提供し、前記中間体は、次の式： ％式％（３） 式中Ｒ１およびＲ２は示したアミノ酸の適当な位置上の
適当な７ミノ保護基を表わし、Ｒ３は適当なイミダゾー
ル保護基であり、そして樹脂は反応の支持体として作用
する適当な固相ポリマーである。

を有する。ペプチド合成技術において通常の技術を有す
るものは、適当なアミン保ＷＩ基、イミダゾール、およ
び樹脂から選択することができ、例えば、下に記載する
ボンダンスズキ−（Ｂ　ｏ　ｎ　ｄａｎｓｚｋｙ）の参
考文献に開示されている。

また、本発明によれば、生体内および生体外の両者にお
いて、ヒトおよび動物のＢ細胞の分化を選択的に誘導す
る方法、ならびに選択的Ｂ細胞分化誘導組成物が提供さ
れる。さらに、本発明のペプチドを投与することからな
る、Ｂ細胞分化因子の欠損または欠乏による不十分なり
細胞分化を含む状態または病気を処置する方法が提供さ
れる。

上に示したように、本発明は、新規な合成ペプチド、こ
のペプチドの調製の中間体、このペプチドを使用する方
法およびこのペプチドを含有する組成物に関する。

本発明の好ましい実施態様は、式： ％式％ の合成ペプチドおよびその製薬学的に許容されうる酸付
加塩である。

本発明のトリペプチドとともに塩を形成できる酸として
、次のものを述べることができる：無機酸１例えば、塩
酸、臭化水素酸、過塩素酸、硝酸、チオシアン酸、硫酸
、炭酸、リン酸など、および有機酸、ギ酸、酢酸、プロ
ピオン酸、グリコール酸、ＫＭ、　　ピルビン酸、シュ
ウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、ア
ントラニルＳ、　桂皮酸、ナフタレンスルホン酸、スル
ファニル酸など。

上の構造において、トリペプチドノアミノ酸成分は便宜
上略号により識別する。その上、この明細書に記載する
他の物質も略号により識別する。

これらの略号は次の通りである： 化学名　　　　　　　　　略号 グリシン　　　　　　　　　　　　ＧＬＹＬ−ヒスチジ
ン　　　　　　　　　ＨＩＳＬ−リジン　　　　　　　
　　　　ＬＹＳｔ−ブトキシカルボニル　　　　　ＢＯ
Ｃトリフルオロ酢酸　　　　　　　　ＴＦＡフッ化水素
　　　　　　　　　　　ＨＦベンジルオキシカルボニル
　　　　Ｚ 酢酸　　　　　　　　　　　　　　ＨＯＡ　ｃプロパツ
ール　　　　　　　　　　ＰｒＯＨピリジン　　　　　
　　　　　　Ｐｙｒ本発明のトリペプチドは、自然に産
出するバーツボイエチンの特性を示すことがわかった。

それは、アウドヒャ（Ａ　ｕ　ｄ　ｈ　ｙ　ａ）ら、プ
ロシーディンゲス・オブ・ナショナル・アカデミ−・オ
ブ・サイエンシズ（Ｐｒｏｃ、　　Ｎａｔｌ、　　Ａｃ
ａｄ、　　　Ｓｃｉ、）ＵＳＡ、８１．２８４７−４９
（１９８４）に記載されているアッセイにおいて、約Ｉ
ＩＬｇ／ｍｌの濃度でＬｙｂ−２十　Ｂ細胞（”ｒｈｙ
−ｘ十　Ｂ細胞ではない）の選択的分化を誘導する能力
によりとくに特徴づけられる。Ｌ７ｂ−２はＢ細胞上に
存在するがＴ細胞上に存在しない分化アロ抗原（ａｌ　
１ｏａｎｔ　ｉｇｅｎ）であり、一方’ｒｈｙ−ｔはＴ
細胞上に存在するがＢ細胞上に存在しない分化アロ抗原
である。

いく種類かの物質（「ユビクイチン（ｕｂｉｑｕｉｔｉ
ｎ）Ｊと表示されかつ前述の文献のあるものの中に言及
されている物質を包含する）はＴ細胞およびＢ細胞の両
者の分化を非選択的に誘導することができるが、主題の
物質はＢ細胞の分化を選択的に誘導することができる既
知の構造の最初の物質である。

本発明のペプチドのこの特性のため、前駆骨髄細胞の成
熟Ｂ細胞への分化を誘導するために有用である。こうし
て、本発明は前駆Ｂ細胞と有効分化誘導量の本発明のペ
プチドを接触させることからなる、生体内または生体外
において前駆Ｂ細胞の成熟Ｂ細胞への選択的分化を誘導
する方法を包含する。したがって、主題のペプチドは研
究においてばかりでなく、かつまた成熟Ｂ細胞の欠損ま
たは不存在に関する病気についてヒトおよび動物の処置
において実用性を有する。このペプチドは血液形成組織
中に由来するリンパ球形成幹細胞が体の免疫応答に参加
できる成熟Ｂ細胞へ分化することを誘導する能力を有す
るので、Ｂ細胞の分化を誘導するホルモンの欠損または
不存在から生ずるホルモンの免疫性の欠損が存在する場
合実用性を有する。

主題のペプチドで処理できるであろう典型的な状態は、
いわゆるＸ結合（Ｘ−１ｉｎｋｅｄ）小児低γ−グロブ
リン血症であろう、この病気は、最初に１９５２年にブ
ルトｙ（Ｂｒｕｔｏｎ）により報告され、免疫不全の疾
患の最初に臨床学的記載である。その名称が意味するよ
うに、それは男の子供にほとんどもっばら発生し、そし
てほぼ５〜６か月の年令において経胎盤獲得母性免疫グ
ロブリンの自然の減衰後に表われる。この疾患は、すべ
ての５種類の免疫グロブリンの部類の著しい欠損または
完全な不存在を立証する標準の実験室の試験により容易
に診断される。この状態に悩む患者は骨髄および抹消血
液中に前駆Ｂ細胞を有するが、これらの前駆Ｂ細胞抗体
分泌Ｂ細胞に成熟しないように思われる。

この状態を有する患者は、慢性または反復するバクテリ
アの感染に悩まされる。

この状態は現在ガンマグロブリンの投与により普通に処
置されるが、このような処置はこの病気の治療と考える
べきではない。その上、ガンマグロブリンの置換の療法
はある場合において適切であるように思わることがある
が、多くの患者は慢性の胸の病気を発現するか、あるい
は小児において学期に激烈な感染からの不可逆的損傷に
悩まされることがある。

免疫グロブリンの生産の不存在または低下を包含する他
の免疫不全は、この問題を生ずる免疫学的欠如の位置に
依存して、主題のペプチドによる処置を受けることがで
きる。この欠如が成熟抗体分泌Ｂ細胞ヘノ前Ｂ細胞（ｐ
ｒｅ−Ｂ−ｃｅｌｌ）の生産における場合、主題のペプ
チドは使用されるであろう、この欠如が免疫学的構造の
ある他の点にある（例えば、骨髄幹細胞の欠損または欠
如）場合、主題のペプチドの投与は欠如を軽減するため
に有効であることが期待される。このような病気につい
ての欠如の点を診断しかつ適切な処置を選択することは
、免疫不全を処置する分野における平均の熟練を有する
臨床医の範囲内である。

これらの免疫不全および慣用されている処置については
、次の文献に詳述されている：　「ベイシックΦアンド
・クリニカル・イムノロジー（Ｂａｓｉｃ　　ａｎｄ　
　Ｃｌ１ｎｉｃａｌ　　Ｉ　　ｍｍｕｎｏ　ｌ　ＯｇＶ
）Ｊ　、　スタイテス（ＡｔｉｒｅＳ）、ストポ（Ｓｔ
ｏｂｏ）、　ヒューデンバーグ（Ｆｕｄｅｎｂｅｒｇ）
およびウェルズ（ＷｅｌＩＳ）纒、第４版、１９８２、
ランジ命メディカル・パブリケイションズ（Ｌａｎｇｅ
　　Ｍｅｄｉｃａｔ　　Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）、
カリフォルニア州、ロスアルトス、とくに章２５を参照
。

本発明は、前駆幹細胞の成熟Ｂ細胞への分化の欠乏また
は欠損から生ずるＢ細胞の欠損に悩む患者に有効前駆幹
細胞分化量の本発明のペプチドを投与することからなる
。前記患者における前駆幹細胞の成熟Ｂ細胞への分化の
欠乏または欠損から生ずるＢ細胞の欠損を処置する方法
を包含する。

本発明のペプチドは約ｌμｇ／ｍｌにおいて最高に活性
であるので、非経口的に投与するとき、約１　ｍ　ｇ　
／　ｋ　ｇ体重において活性であろう、Ｘ結合低γ−グ
ロブリン血症の処置のため、このペプチドを約１〜約ｔ
ｏｍｇ／ｋｇ体重の範囲で非経口的に投与できる。免疫
不全の処置分野の当業者は、不都合な実験を実施しなく
て、主題のペプチドの適切な投与量を、ここにける結果
から推定しかつ選択することは容易であろう。

主題のペプチドは担体を含有する製薬学的組成物の形態
で便利に投与することができ、そして前記組成物は本発
明の他の面である。担体はこの目的によく知られている
。これらの物質は主として注射により投与されることが
考えられるので、典型的な担体は通常の生理的食塩水で
あろう、非経口的処方の分野における当業者は、このよ
うな組成物を調製する方法を容易に認識するであろう。

本発明のトリペプチドは、メリフィールド（Ｍｅｒｒｉ
ｆｉｅｌｄ）、Ｊ、Ａ、Ｃ，Ｓ、、Ｖ。

１．８５．２１４９−２１５４ページ（１９６３）に最
初に記載される固相合成法により調製された。この技術
はよく理解されており、そしてペプチドの普通の調製法
である。固相ペプチド合成に有用な技術はいく種類かの
木、例えば１次の木に記載されている：　「ペプチド・
シンセシス（Ｐｅｐｔｆｄ　　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ）Ｊ
　　、ポダンスズキ−（Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ）ら著、第
２版。

ジョン・ウィリー・アンド拳すンズ、１９７６゜この合
成法は、共有結合により固体樹脂粒子へ結合された生長
するペプチド鎖に、保護されたアミノ酸を段階的に付加
することからなる。この手順により、試薬および副生物
を濾過により除去し、こうして中間体の精製の必要性を
排除する。この方法の一般的概念は、鎖の第１アミノ酸
、を固体ポリマーへ共有結合により取り付け、次いで連
続する保護されたアミノ酸を、１度に１つずつ、段階的
に付加し、こうして所望の配列を組立てることに依存す
る。最後に、保護されたペプチドを固体の樹脂に支持体
から除去し、そして保護基を切離す。

アミノ酸は適当なポリマーへ取り付けることができる。

ポリマーは使用する溶媒に不溶性でなくてはならず、濾
過を容易にさせる安定な物理的形態をもたなくてはなら
ず、そして第ＨＩＩアミン酸を共有結合により堅固に結
合することができる官能基を含有しなくてはならない０
種々のポリマー、例えば、セルロース、ポリビニルアル
コール、ポリメチルメタクリレートおよびポリスチレン
がこの目的に適当である。主題のペプチドアミドの調製
に、スチレンおよびジビニルベンゼンのパラ−メチルベ
ンズヒドリルアミンコポリマーを使用したが、アミド化
されないペプチドの調製に、スチレンおよびジビニルベ
ンゼンのクロロメチル化コポリマーを使用した。

調製の一般手順は、グリシン（そのアミン基が保護され
ている）を樹脂に対して最初にアミド化することを包含
した（溶媒中）、結合したグリシン樹脂を濾過し、洗浄
し、そして乾燥した後、アミノ基上の保護基を除去した
。この保護基は便利にはｔ−ブトキシカルボニル、略号
ＢＯＣ１である。この保護基の除去は、もちろん、グリ
シンと樹脂との間の結合を破壊しないで実施しなくては
ならない。次いで、得られる結合アミノ酸−樹脂にアミ
ン基およびイミダゾール基が保護されたＬ−ヒスチジチ
ンを結合した。この結合は、グリシンアミノ酸の遊離ア
ミノ基とＬ−ヒスチジンアミノ酸の遊離カルボキシル基
との間のアミド結合の形成により起こった。

次に、アミノ酸の間の結合またはグリシンと樹脂との間
の遺伝子またはＬ−ヒスチジンのイミダゾール上の保護
基を乱さないで、Ｌ−ヒスチジンのアミノ基から保護基
を除去し、モしてＬ−リジンアミノ酸（両方のアミノ基
が保護されている）を結合する。最後に、保護されたペ
プチドを樹脂から切離し、そして保護基を除去して、所
望のペプチドを得た。

以下の調製例において、保護基および溶媒の略号を用い
る。これらの略号は、上のテキスト、論文および特許に
記載されている。

主題ペプチドの酸付加塩を調製しようとする場合、これ
は遊離ペプチドを適当量の酸で処理することにより達成
することができる。

次の実施例により、本発明を説明する０本発明はこれら
に実施例により限定されると考えるべきでなく、特許請
求の範囲によってのみ限定される。実施例および明細書
を通じて１部は特記しないかぎり重量による。

このペプチドは固相法により合成した。この合成は３．
００ｇのＢＯＣ−ＧＩ　Ｆ−樹脂エステル、０．６９ｍ
ｅｑ／ｇ、を使用して開始した。

樹脂を５０％のＴＦＡ／ＣＨ２Ｃ１２で３０分間脱保護
し、７％のＤ　Ｉ　ＥＡ／　ＣＨ２Ｃｌ　２で２回中和
し、そして３当量のアミノ＃誘導体およびジシクロへキ
シルカーポジイミドと結合した。ＢＱＣ−Ｈｉｓ（トシ
ル）およびＢＯＣ−Ｌｙｓ（Ｚ）を順次に結合した。Ｂ
ＯＣ基をＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２で除去し、次いで樹脂を
洗浄し、そして乾燥した。ペプチド樹脂は４．０６ｇと
秤量された。この樹脂を４０　ｍ　ｌの蒸留したＨＦお
よび４ｍｌのアニソールで０℃において１時間処理した
。ＨＦを真空除去した後、樹脂を酢酸エチルで洗浄し、
そしてペプチドを１０％の酢酸で抽出した。謹過した抽
出物を凍結乾燥すると、粗製のペプチド、５３０ｍｇ、
が得られた。

このペプチドをＣＭ−セファデックス（Ｓｅｐｈ　ａ　
ｄ　ｅ　ｘ）のクロマトグラフィーにより精製し、０．
２Ｎ　　ｐＨ６，０〜０９５０Ｍ　　ＰＨ７の酢酸アン
モニウムの勾配で溶離した。精製されたペプチドを含有
する分画を凍結乾燥すると、吸湿性のガラス状物質、は
ぼ８００ｍｇ、が得られた。

ＴＬＣ，シリカゲル　６０ｇ：Ｒｆ　　Ｏ，１９，４：
ｌ　　ＴＦＥ／ＮＨ４ＯＨ，Ｒｆ　　Ｏ，２９４：２：
３：Ｉ　　ｎ−ＢｕＯＨ／ＨＯＡｃ／ｐｙｒ；Ｒｆ　　
Ｏ，６０１：ｌ　　ｎ−ＰｒＯＨ／ＮＨａＯＨ。

アミノ酸分析：Ｇｌｙ、０．９６；Ｈｉｓ、１．０２；
Ｌｙｓ、１．０２；３９％のベプチＸ旌鑓旦 Ｌ−リシル−Ｌ−ヒスチジル−グリシンアミド このペプチドはｐ−メチルベンズヒドリルアミンＰＳ−
ＤＶＢ樹脂上の固相法により合成した。

樹脂を５％のＤＩＥＡ／ＣＨ２Ｃ１２で中和し、次いで
３当量のＢＯＣ−Ｇｌｙおよびジシクロへキシルカーポ
ジイミドと３時間結合した。樹脂を洗浄し５次いで５０
％のＴＦＡ／ＣＨ２ＣＩ２で３０分間脱保護し、中和し
、そして前のようにＢＱＣ−Ｈｉｓ（トシル）と結合し
た。このサイクルなｇｏｃ−Ｌｙｓ　（Ｚ）で反復した
。洗浄しかつ乾燥した樹脂の重量は１．９３ｇであった
。この物質を２ｍｌのアニソールを含有する２５ｍ１の
蒸留したＨＦと０℃で１時間反応させた。ＨＦを真空除
去し、そして残留物を酢酸エチルおよびエーテルで洗浄
した。このペプチドを５％の酢酸中に抽出した。抽出を
凍結乾燥すると、１１０ｍｇの吸湿性ガラス状物質が得
られた。

このペプチドをＣＭ−セファデックス（Ｓａｐｈ　ａ　
ｄ　ｅ　ｘ）のクロマトグラフィーにより精製し、０．
５０モルの緩衝化しない酢酸アンモニウムで溶離した。

クロマトグラフの主要ピークを含有する分画を凍結乾燥
すると、吸湿性のガラス状物質として生成物が得られた
。

ＴＬＣ、シリカゲル　６０ｇ：Ｒｆ　　０　．１１．４
：Ｉ　　ＴＦＥ／ＮＨａＯＨ：Ｒｆ　　Ｏ，２５４：２
：３：１　　ｎ−ＢｕＯＨ／ＨＯＡｃ／ｐｙｒ；Ｒｆ　
　Ｏ，４９１：１　　ｎ−ＰｒＯＨ／ＮＨ４０Ｈ。

アミノ酸分析：Ｇｌｙ、１．００；Ｈｉｓ、０．９９；
Ｌｙｓ、１．００；８２％のペプチド。

Ｘ惠輿旦 実施例工および■の手順に従い、グリシル−Ｌ−ヒスチ
ジル−Ｌ−リジンおよびグリシル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ
−リジンアンドを調製した。

実施例■ 主題のペプチド、上の実施例において調製した関連する
ペプチドおよび自然バーツボイエチンの活性および免疫
学的特性を決定するため、アウドヒャ（Ａ　ｕ　ｄ　ｈ
　ｙ　ａ）ら、プロシーディンゲス・オグ・ナショナル
・アカデミー−オプーサイエンシズ（Ｐｒｏｃ、　　Ｎ
ａｔ　１．　　Ａｃａｄ、　　Ｓｃ′ｉ　、）　ＵＳＡ
　、　８１　、２８４７　（１９８４）に実質的に記載
されるように、誘導アッセイを実施した。

簡単に述べると、プロ胸腺細胞（ｐｒｏｔｈｙｍｏｃｙ
ｔ　ｅ）（Ｔｈｙ−１−）およびプローＬＹｂ−２細胞
を、Ｂ６−Ｌｙｂ−２，１コンジエニツク（ｃｏｎｇｅ
ｎｉｃ）マウス牌から、ウシ血清アルブミン勾配遠心に
より濃縮した（Ｐａｔ・ｈ−０−ｃｙｔｅ５、ロット３
５．１ｍｌの３５／２９／２６／２３／１ｇ／１２％）
、２６／２３および２３／１８の界面層を合わせ、モし
てＴｈ７−１＋細胞およびＩ、Ｖ　ｂ−２＋細胞をモノ
クローナルＴｈ７−１．２抗体およびＬｙｂ−２，１抗
体［シェイド（Ｓｈｅｉｄ）ら、イムノジェニテ４−／
クス（ＩｍｍｕｒＬｏｇｅｎｅｔ　ｉ　ｃＳ）、旦、４
２３−４３３　（１９７９）に従い調製した］との反応
、親和精製抗マウスＦ（ａｂ）２で被覆した板への付着
により除去した。洗浄した付着しない細胞を両方のアッ
セイに使用した。この出発集団は３０〜４０％のプロ胸
腺細胞および３０〜４０％のプローＬ７ｂ−２細胞［別
々の始動（ｃ　ｏｍｍｉ　ｔ　ｅ　ｄ）前駆手段を表現
することが知られている］を含有した［シェイド（Ｓｈ
ｅｉｄ）ら、ジャーナル参オブ拳イクスペリメンタル・
メディシン（Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、）、工り支ヱ、１７
２７−１７４３　（１９７８）に記載されているように
１゜ 細胞（５Ｘ１０６細胞１０．５ｍｌのＲＰＭ１１６４７
培養基〕を、５ｍｌ容のプラスチック管中で、湿潤５％
のＣＯ２雰囲気中でＲＰＭＩ・１６４７培養基中の系統
的希釈で等体積の試験化合物とともに３時間インキュベ
ーションした０次いで、最初に述べたシェイド（Ｓｈｅ
ｉｄ）らの文献に記載されるスタフィロコッカル（ｓｔ
ａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ）蛋白質Ａ−ヒツジ赤血球法
により、細胞を最適濃度においてモノクローナル抗体の
’ｒｈｙ−ｔおよびＬ７ｂ−２の発現について別々に７
ツセイした（誘発物質を含まない対照はく５％の誘導さ
れた細胞を記録した）。

この決定の結果を第１図に表わす、これらの結果から理
解できるように、主題のペプチドは天然の分離物の活性
を有するが、実施例Ｉおよびｍの関連するペプチドは同
一濃度において事実上不活性である。

本発明をある好ましい実施態様を参照してここに記載し
た。しかしながら、明らかな変更は当業者にとって自明
であるので、本発明はそれらに限定されないと考えるべ
きである。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明のペプチドおよび他の関連するペプチ
ドを試験した結果を示すグラフである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式Ｈ−ＬＹＳ−ＨＩＳ−ＧＬＹ−ＮＨ＿２のペプチ
   ドおよびその製薬学的に許容されうる酸付加塩。 ２、前駆Ｂ細胞を有効分化誘導量の特許請求の範囲第１
   項記載のペプチドを接触させることを特徴とする前駆Ｂ
   細胞の成熟Ｂ細胞への選択的分化を誘導する方法。 ３、前駆Ｂ細胞の成熟Ｂ細胞への分化の欠乏または欠損
   から生ずるＢ細胞の欠損に悩む患者に有効前駆Ｂ細胞分
   化量の特許請求の範囲第１項記載のペプチドを投与する
   ことを特徴とする前記患者における前駆Ｂ細胞の成熟Ｂ
   細胞への分化の欠乏または欠損から生ずるＢ細胞の欠損
   を処置する方法。 ４、有効前駆Ｂ細胞分化量の特許請求の範囲第１項記載
   のペプチドと製薬学的に許容されうる担体とからことを
   特徴とする治療組成物。 ５、非経口的投与に適合する特許請求の範囲第４項記載
   の組成物。 ６、式α−Ｒ＿１−ε−Ｒ＿２−ＬＹＳ−（Ｒ＿３）−
   ＨＩＳ−ＧＬＹ−樹脂（式中、Ｒ＿１およびＲ＿２は各
   々独立に適当なアミノ保護基から選択され、Ｒ＿３は適
   当なイミダゾール保護基であり、そして樹脂は適当な固
   相ポリマーである）のペプチド樹脂中間体。