JPS6122070A - マイコトリエニン関連物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は構造式 で表わされる化合物（Ｔ−２３−■）または構造式り１
１ で表わされる化合物（Ｔ−２３−Ｋ）およびそれらの製
造方法に関する。そして前記Ｔ−２３−■またはＴ−２
３−には新規な化合物であって抗腫瘍性を有するので医
薬として期待されるものである。

本発明曹等嬬ストレプトマイセス・リシリエンシスに属
する新菌株たるストレプトマイセス・リシリエンシスＴ
−２３株（微工研寄託番号第６１４１号）の醗酵生産物
中に抗腫瘍活性を有するアンサマイシン骨格を有するＴ
−２３−１及びＴ−２３−１ｆが存在することを知り、
先にＴ−２３−１及びＴ−２３−１の製造法を特願昭５
６−１８９，２５７号、同第１８９，２３８号（特開昭
５８−９４５９５号、同９２６６２号）として提案した
。それによれば、前記Ｔ−２３株を通常の放射菌培養法
で培養した後に、その培養物を菌体と上清液とに分け、
その菌体からア七トンー水で活性区分を抽出し、ろ液を
非イオン性交換樹脂に通して活性区分を吸着させ次いで
アセトン、低級アルコール等の溶媒で抽出する。−′方
上清液からは直接有機溶媒によシ活性区分を抽出する。

両者を合体し、ついで有機溶媒を除いた水性相からクロ
ロホルム、酢酸エチル等の水非混和性溶媒で抽出し濃縮
後、脂肪族炭化尿素溶媒を加えて活性区分を沈殿させ、
６それを例えばシリカｙル、非イオン性交換樹脂、セフ
ァデックスＬＨ−２０等を充填したカラムに吸着させ、
ベレゼンで洗浄後、ベンゼン−アセトン（４：１　）で
溶出するとＴ−２５−１含有溶液がさらにそのカラムか
らインゼンーアセトン（７：１）で溶出するとＴ−２３
−１含有溶液が得られる。

その後本発明者尋は、前記シリカゲルカラムカラベンゼ
ン−アセトン（Ｃ１）でＴ−２３−１含有溶液を溶出さ
せた後さらに同溶媒で溶出を続けると微量の他の活性物
質が溶出されて来る事、　　゛および前記シリカゲルカ
ラムをさらに、ベンゼン−アセトン（”ｈＪ）で溶出し
、Ｔ−２３−１含有溶液を溶出させた後、同溶媒で溶出
を続けるとさらに異なった微量活性物質が溶出されて来
る事を知った。本発明者らは、これ、ら微量物質を単離
し、それらの物性を確認することによって本発明を完成
するに至った。

すなわち、前記シリカゲルカラムをベンゼン−アセトン
（４：１）で溶出し、その溶出液を一定量ずつの区分に
分取し、各区分を、シリカゲル薄層クロマトグラフィー
に付し、酢酸エチル／ベンゼン（１＋１）溶媒で２＠展
開すると、Ｔ−２５−１を含む区分が溶出された後の区
分にＴ−２３−１（Ｒｆ＝ｏ、ｓ５）とは異なる微量物
質（Ｒｆ＝０．５６　）が存在したのでこの物質なＴ−
２３−■と名付けた。

また、前記シリカゲルカラムをさらにベンゼン−アセト
ン（７：ｉ）で溶出した場合にも、同様に一定量ずつの
区分に分取し、その各区分をシリカゲル薄層クロマトグ
ラフィーに付しベンゼン／クロロホルム／メタノール（
３：７二３）　０ｊＩＨＥ糸で展開すると、Ｔ−２３−
１ｆを含む区分が溶出された後の区分にＴ−２３−１１
（Ｒｆ＝０．５６　）とは異なる微量物質（Ｒｆ−１５
５）が存在したのでこの物質をＴ−２３−にと名付けた
。

このＴ−２３−■とＴ−２３−には、Ｔ−２３−１とＴ
−２３−１１と同様に、酸化型と還元型の関係にある。

すなわち、Ｔ−２３−■をメタノールに溶解し、少量の
へイドロサルファイトを添加して攪拌すると容易に還元
されＴ−２３−Ｋに変換される。また、Ｔ−２３−■を
メタノールに溶解し、少量の塩化第二鉄を添加して攪拌
すると容易に酸化されＴ−２３−■に変換される。

次にＴ−２５−■及びＴ−２３−■の物理化学的性質を
示す。

Ｔ−２３−■物理化学的性質 を結晶形態　黄色不定形結晶 ２・分子量Ｍ＋６２４ ６、分子式Ｃ５５Ｈ４８Ｎ２０８ ４、元素分析値　　理論値　　実測値 Ｃ：６７．３１チ　　６６．８２９Ａ ｍ＋　　　　７．６９％　　　　　Ｂ、０７！ｓＮ：　
　　４．４９　　　　　４．５１０：　　　２０．５１
　　　　２０．６０５、〔α）Ｄ　　＝＋６９．４°（
ｃ＝０．１４４、ＭｅＯＨ）＆　融　　　点　　１０９
℃ Ｚ　紫外部吸収スはクトル（メタノール中）２Ｂａｚ　
　２６２ｎｍ　（Ｅ２６，７００）２７１ｎｍ　（＃　
３ａ６００） ２１Ｈｎｍ　（ｔ　２８．ＯＯＣＩ） ３８１ｎｍ（ε　２，２００　） ８、赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ錠中）λｍａｚ　　
３４００　２９３０　　１７３０　　１６５０１５００
　　１４５０　　１！１７０　　１２９０１２００　　
１１３０　　１０００　　９００１Ｍ−’９　溶解性　
可溶　メタノール、エタノール、アセトン、酢酸エチル
、クロロホルム、ピリジン 不溶　ｎ−ヘキサン、石油エーテル、水ｉｏ、　　１Ｉ
Ｃ−ＮＭＲスペクトル化学シフト（重メタノール中）Ａ
（δＣ申　　　　　　Ｊ６　　　　　　δＣ申１　　　
１６９．４　　（ｓ）　　　　１９　　　１８８．４　
　（ｓ）２　　　４５．２　　（ｔ）　　　２０　　　
１４５．４　　（ｓ）３　　７９２　　（ｄ）　　　２
１　　　１１４．６　　（ｄ）４　　　１３１５　　（
ｄ）　　　２２　　１８２．５　　（８）ｓ　　　　１
３３．９　　（ａ）　　　２３　　　１３３．３　　（
ａ）６　　　１２９．６　　（ｄ）　　　２４　　　　
９．９　　（ｑ）７　　１３３．９　　（ａ）　　　２
５　　　２１．０　　（ｑ）８　　１３３．３　　（ｃ
ｌ）　　　２６　　　５７．０　　（（１）９　　　１
２．９．６　　（（１）　　　２７　　　１７３．０　
　（ｓ）１０　　　５５．４　　（ｔ）　　　２８　　
　４８．９　　Ｃａ）１１　　７５．４　　（＋１．）
　　　２９　　　１７．７　　（（１）１２　　　４０
．０　　（ｄ）　　　３０　　　１７４．０　　（θ）
ｉ３　　　６８．１　　（ｄ）　　　３１　　　３４．
９　　（ｔ、）１４　　　１４０．０　　（ｓ）　　　
３２　　　３４．９　　（ｔ）１５　　　１２２．４　
　（ｄ）　　　５５　　　２８．０　　Ｃａ）１６　　
　２５．８　　Ｄ）　　　　３４　　　２２．５　　（
ｑ）１７　　　２９．６　　（ｔ）　　　３５　　　２
２．５　　（ｑ）１８　　１３７．８　　（ｇ） 中１５ＣＮＭＲオフレゾナンススペクトル多重度１１　
１１（−ＮＭＲスはクトル（重クロロホルム中）第２図
Ｔ−２３−に物理化学的性質 １結晶形態　無色不定形結晶 ２、分子量Ｍ＋６２６ ３、分子式Ｃ！３５ＨＩ５ＯＮ２０９ ４、元素分析値　　　　理論値　　　実測値Ｃ：　　６
７．０９％　　６７．４８１Ｒ：　　　７．９９　　　
８．１１ Ｎ：　　　４．４７　　　４．２９ ０：　　２０．４５　　２０．１２ ５、〔αＩＤ　　＝＋２１１°（Ｃ＝０．ｉ、ＭｅＯＨ
）６、　融　　　点　　１３９℃ ｚ　紫外部吸収スペクトル（メタノール中）λｍａｘ　
　２６１ｍｍ（８５０，４００）２７１ｎｍ　（ｇ　３
９．ＯＤＤ　） ２８１ｎｍ　（ｇ３１，１１００ ）３０５ｎ　（ｇ　　４，４００） ８、赤外部吸収スペクトル（クロロホルム中）第３図”
ｗａｘ　　５５５０　　２９５０　　１７３０　　１６
４０１２００　　１１００　　１０００ｍ＋−’９　溶
解性　可溶　メタノール、エタノール、アセトン、酢酸
エチル、クロロホルム、ピリジン 不溶　ｎ−ヘキサン、石油エーテル、木本発明によるＴ
−２６−■物質およびＴ−２３−ＩＫ動物質次に示すよ
うな生物活性を示し、抗腫瘍剤としての用途が期待され
る。

Ｔ〜２３−■物質およびＴ−２３−ＩＫ動物質Ｌ−５１
７８Ｙ腫瘍細胞に対する生育阻害作用（１ｎ　ｖｌｔｒ
ｏ）２．０　　　’　　　−２，０− ｔＯ，−１，０− ａ、’ｓ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ｏ、
ｓ　　　　　　　　−０，２５＋　　　　　　　　０．
２５　　　　　−０．１２５　　　　　　＋　　　　　
　　　０．１２５　　　　　＋前、記のとおり、Ｔ−２
３−■はＴ−２３−１に、またＴ−２３４はＴ−２３−
１１に随伴して溶出されるのでそれぞれ別々に精製する
ことも可能であるが、Ｔ−２５−１およびＴ−２３−■
は、Ｔ−２３−１およびＴ−２３４にくらべてシリカゲ
ルカラムから容易に溶出されるので、次のとおシの方法
で精製することが便利である。

すなわち、前記のとおり、Ｔ−２３−■は酸化型であり
、Ｔ−２３４は還元星であって酸化還元反応によシ可逆
的に相互変換が可能であるので、得られた粗混合物を塩
化第二鉄（ＦｅＣＬｘ）を含むメタノールに溶幣した後
、室温にて攪拌して含まれるＴ−２３−１とＴ−２５−
ＩＸをＴ−２３−１とＴ−２３−■に゛酸化する。次い
で過剰の酢酸エチルを添加した後、水洗なくり返えし、
塩化第二鉄を除去してから減圧濃縮しＴ−２３−１とＴ
−２３−■を含む油状物ン得る。得られた油状物轢、更
に精製するためシリカゾルクロマトグラフィーな行なう
。＠ｌｉ溶媒としては、クロロホルム／メタノール（１
００：１）を用い、溶出液を一定量ずつ分画すると、Ｔ
−２３−１を含む区分が溶９出された後に、Ｔ−２５−
１とＴ−２３−■を含む区分が溶出されて来る。この区
分を集めて減圧濃縮すると、Ｔ−２３−１とＴ−２１■
を含む黄色粉末が得られる。得られた黄色粉末社シリカ
ゲルを用いる調製用薄層クロマトグラフィーにおいてベ
ンゼン／酢酸エチル（１＋１）の混合溶媒系で展開後乾
燥゛して溶媒を除去してから再び同一溶媒で展開すると
、Ｔ−２３−１がＲｆｏ、５８附近に現われ、Ｔ−２５
−■がＲｆＯ，５６附近に現われる。このＴ−２６−■
に相当する区分をかき取〕ソシてクロロホルム／メタノ
ール（ｉｌｌ）の混合溶媒で溶出する。溶出液を減圧下
に濃縮するとＴ−２３−■物質が黄色不定形粉末として
得られる。このようにして得られたＴ−２３−■物質は
前記したような物理化学的性状を有する。

Ｔ−２３−■物質は、Ｔ−２３−■物質をナトリウムへ
イドロサルファイト（Ｎ！Ｌ２８２０ｇ）の様な還元剤
で還元する事によって得られる。Ｔ−２３−■物質を酢
酸エチルに溶解し１チナトリウムハイドロサルフアイト
水溶液とともに攪拌し次後、酢酸エチル層をく少かえし
水洗してから減圧濃縮するとＴ−２３−に物質を含む油
状物が得られる。この油状物は調製薄層クロマトグラフ
ィーにおいてベンゼン／クロロホルム／メタノール（３
２７１３）の混合溶媒系で展開後ｎｆ＝ｏ、ｓｓ附近の
Ｔ−２３−ＩＫ゛　物質に相当する区分をかき取りそし
てクロロホルム／メタノール（７：１）の混合溶媒系で
溶出す゛る。溶出液を減圧下に濃縮するとＴ−２３−Ｉ
Ｋが白色粉末として得られる。このようにして得られた
Ｔ−２３−に物質は前記したような物理化学的性質を有
する。

次に本発明を更、に詳細に理解せしめるために実施例を
掲げる。

実施例　１ 可溶性殿粉ｔＯｑｂ、酵母エキス０．２１および寒天ｔ
ｓｓの組成よりなる試験管斜面培地に継代保存しである
ストレプトミセスチー２３株よシ１白金耳をとり、これ
を可溶性殿粉１０チ、廃糖蜜ｔＯ優、肉エキスｔＯ俤お
よびポリはプトン１０チ（ｐＨＩ　Ｏ）の組成よシなる
種培地１００ｄを含有する坂ロフラスコに接種する。３
０℃で４８時間振盪培養を行ない、゛得られた培養物を
種菌として同じ培地を１００ｍ含んだ坂ロフラスコにα
５−ずつ接種した。３０℃で２４時間振盪培養を行ない
ジャ一式醗酵槽による本培養の種菌とした。

本培養はグルコースｔＯｓ、可溶性殿粉ｔ５−１大豆粉
ｔＳＳ、乾燥酵母０．２％、硫安０．２−１ＮａＣＬ　
Ｑ、　５　ｓ、沈降性炭醗カルシウムｒ：１．４％およ
び消泡剤（東芝シリコンＹＭＡ　６５０９　）α３３饅
よりなる培地（ｐＨ７，０）を１５．０を誉む３０を容
のステンレス製ジャ一式醗酵槽６基を用いて実施した。

すなわち上記した種菌を、４．０％の割合で接種しそし
て３００で２４時間通気攪拌培養（通気量１５．０１７
分、攪拌回転数２０　Ｏｒｐｍ　）を行なった・ 培養終了後直ちに大型連続遠心分離器により菌体なＦ別
後、６０饅アセトン水溶液２０１によシ菌体を浸漬しし
ばらく攪拌操作を行った後、３時間放置した。次いで菌
体を濾過して上清液を得た。同じ処理を２回繰返し得ら
れた抽出液′を合わせて４Ｑｔの抽出液を得た。次いで
抽出液よりアセトンを減圧留去して水溶液１８．　ＯＬ
を得た。得られた水溶液１　Ｂ、　ＯＬ”に並塩６．５
に＃を加えて溶解させ、酢酸エチル９．　ＯＬで２回抽
出を行つ九。得られた酢酸エチル溶液に芒硝ｔａｂを加
え、しばらく放置して脱水後減圧下に濃縮し、得られた
濃縮液にヘキサンを加えてＴ−２３−１，ＩＩ、■およ
びＴ−２３−ＩＫ物質を含む両分を沈殿させた。ヘキサ
ンで洗浄後、乾燥させてＴ−２３−１％Ｔ−２３−１．
　Ｔ−２Ａ−■熟よびＴ−２３−ＩＫを含む粗混合物を
得た。得られた粗混合物は、ＩＬＯメタノールに溶解し
た後、塩化第二鉄を２０を添加し、室温にて５時間攪拌
した。次いで減圧濃−して溶媒を留去するとＴ−２３−
１およびＴ−２３−■を含む油状物が得られた。得られ
た油状物は酢酸エチル２．５ｔに溶解した後、飽和食塩
水で５回洗浄し、酢酸エチル層を減圧下に濃縮して、油
状物を得た。

得られた油状物は、クロロホルム１５０−に溶解してシ
リカゲルカラム（ＢｃＩａｘａｏａｗ）に吸着させ、ク
ロロホルム／メタノール（１００／１　）で溶出を行な
った。最初の溶出液２．５ｔは活性物質を含まないので
除去し、その後は１５−ずつの分取を行なった。各フラ
クションはＫｉ’ｅｓａ１ｇｅ１６０　Ｆ２５４　（Ａ
−ｒｔ　、　５７１５　）のシリカゲル板を用いる薄層
クロマトグラフィー（展開溶媒：酢酸エチル／ベンゼン
＝１７１．２回展開）に付し２５４　ｎｍのＵＶ灯下で
Ｔ−２５物質の確認を行なったところ、第１６番目から
第５０番目のフラクションに純粋なＴ−２３−１が含ま
れ、Ｗ、５１番目から第６５番目のフラクションにＴ−
２３−１とＴ−２ト■を含む区分が溶出された。

Ｔ−２３−１を含む区分は減圧下に濃縮して溶媒を留去
しＴ−２３−１の黄色粉末１２．！ＩＭを得た。

′また、Ｔ−２３−１とＴ−２３−■を含む区分は減圧
下に濃縮してＴ−２５−１およびＴ−２３−■を含む黄
色粉末α６ｆを得た。得られた粉末はアセトンに溶解し
てシリカゲル（西独メルク社に１ｅａｅ１ｇθ１６０７
２５４　Ａｒｔ、　５７４４）の薄層クロマトグラフィ
ーに付し、ベンゼン／酢酸エチル（１：１）の混合溶媒
系で展開した後乾燥してから再び同−溶媒系で展開し、
２５４　ｎｍの紫外線灯、下で確認するとＲｆ＝［１Ｌ
５８附近にＴ−２３−１区分が現われ、Ｒｆ＝０．５６
附近にＴ−２３−■区分が現われる。とのＴ−２３−１
区分線かき取シ、得られたシリカゲルはカラムにつめ、
クロロホルム／メタノール（１０／１　）の混合溶媒を
流してＴ−２３−１物質を溶出し、溶出液な減圧下に濃
縮するとＴ−２３−１物質の黄色粉末が０．５を得られ
た。また、Ｔ−２３−■区分をかき取シ、同様に溶出し
た後、溶出液を減圧下に濃縮するとＴ−２３−■物質の
黄色粉末が５０１ｇ得られたＯ 実施例　２ 実施例１で得られたＴ−２３−■物質５０ηを５０−の
酢酸エチルに溶解した後、０．５−ナトリウムハイドロ
サルファイト水溶液４０−と分液ロート中で、酢酸エチ
ル層の黄色が消えるまで激しく攪拌した。静置後水層を
除去し酢酸エチル層は飽和食塩水で５回洗浄した後、減
圧下に濃縮して油状物５０Ｑを得た。得られた油状物は
少量のアセトンに溶屏した後、シリカゲル（西独メルク
社Ｋｉｅｅｅ１ｇｅｌ　６０　Ｆ２５４、Ａｒｔ、５７
４４）の薄層クロマトグラフィーに付しベンゼン／クロ
ロホルム／メタノール（５１７２５）の混合浴［６で展
開後、Ｒｆ＝０．５５附近のＴ−２３−）ｌ：物質に相
幽する区分を２５４　ｎｍの紫外線灯下に確認してかき
取った。得られたシリカゲルはカラムにつめクロロホル
ム／メタノール（７：１）の混合Ｓ媒を流しＴ−２３−
に物質を溶出した。得られた溶出液線域圧下に濃縮して
Ｔ−２３−Ｘ物質の白色粉末３５譜が得られた。

【図面の簡単な説明】

添付の第１図は本発明のＴ−２３−■の赤外吸収ススク
トル図、第２図はＴ−２６−■のＮ１ｊＲスはクトル図
および第３図はＴ−２５−にの赤外吸収スはクトル図で
ある。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 構造式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる化合物または構造式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる化合物。