JPS61225123A - リン脂質リポソ−ム - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 この発明は、リン脂質によって構成されるリポソーム中
にいわゆる鉄（ＩＩ）ポルフィリン錯体を包接したリン
脂質リポソームに関する。

〔従来の技術〕

ヘモグロビンやミオグロビンの鉄（ＩＩ）ポルフィリン
錯体は酸素分子を可逆的に吸脱着する。

に、従来、多くの研究が発表されている。しかし、従来
の錯体は、少量でも水が存在すると、直ちに酸化される
ため、酸素錯体を形成できない。

これを解決し、水中、室温下という生理的条件に近い条
件下で可逆的な酸素吸脱着・運搬をおこなえる材料とし
て、本出願人は、合成の鉄（Ｕ）　−、Ｎルフィリン誘
導体錯体を脂質層内に包接した脂質リポソームを出願し
ている（特開昭５７−２０６６１３号および特開昭５９
−　ｊ　０１４９０号参照）。このリポソームは前記錯
体を包接するものとして天然塘たは合成のリン脂質を用
いている。リン脂質としては、天然または合成のホスフ
ァチジルコリン（卵黄レシチン、大豆レシチン、シミリ
ストイルホスファチジルコリン、ジ／ぐルミトイルホス
ファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリ
ン等）が主に用いられている。

〔発明が解決しようとする問題点〕

これらホスファチジルコリンから構成されるリポソーム
に各種の鉄（ＩＩ）ポルフィリン−イミダゾール誘導体
を包接した場合、生理的条件に近い条件例えば、ｐｉ（
７，Ｏの生理食塩水中３７℃の条件において、酸素錯体
の寿命（酸素錯体の５０％が不可逆的に酸ｆヒする−ま
での時間）は約６時間ないし１日間であり、酸素運搬体
としてより有効に作動するためには、生成した酸素錯体
がさらに安定であり、不可逆的ｍ１ヒを受けに〈込こと
が望ましい。

したがって、この発明の目的は、上記従来の鉄（Ｉｆ）
ポルフィリン錯体を包接したリン脂質リポソームの利点
を損なうことなく、酸素錯体の寿命をさらに延長できる
リポソームを提供することにある。

〔問題点を解決するための手段〕

この発明によれば、上記問題点は、リポソームを構成す
るリン脂質として、分子中に１個以上のアミド結合を有
するアミド系リン脂質を１釉堤上含有するリン脂質系材
料を用いることによって解決される。

すなわち、この発明のリンｊ財質リポソームは、分子中
に１個以上のアミｒ結合全イーするアミド系リン脂質を
ｌ柿以上含有するリン脂質糸祠料によって構成さハ、た
りポソームに鉄（Ｕ）ポルフィリン錯体を包接したこと
を特徴とするものである。

この発明において、リポソームはアミド系リン脂質単独
で構成されていてもよいし、アミド系リン脂質と他のリ
ン脂質および（または）コレステロールとの組合せによ
って構成されていてもよい。この明細１ＶＣおいて、こ
れらリポソーム構成材料をリン脂質系材料ということと
する。

この発明に用いられるアミド系リン脂質は、分子内に少
なくとも１個のアミド結合 Ｎ−Ｃ− ■ を有するものである。このアミド系リン脂質の例を挙げ
ると、一般式 （ここで、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ炭化水素系基であ
って、その少なくとも一方はアミド結合を１個以上有す
る）で示されるリン脂質、一般式（ここで　Ｒ５は炭素
数１ないし２１の飽和もしくは不飽和の＠鎖炭化水素基
、殊に直鎖ヘゾタデシル基）で示される単一あるいは混
合スフィンゴミエリンである。スフィンゴミエリンバ天
然物（卵黄や牛脳からの）であっても合成物であっても
構わない。

場合に応じて上記アミド系リン脂質とともに用いられる
他のリン脂質すなわちアミド結合を持たないリン脂質は
、いづれのものでもかまわないが、例えば、卵黄レシチ
ン、大豆レシチン、シミリストイルホスファチジルコリ
ン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジステアロ
イルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジ
ルコリン、シリルイルホスファチゾルコリン、ホスファ
チジルエタノールアミン、ホスファチ・シン酸などがあ
る。これら他のリン脂質をアミド系リン脂質１００重量
部に対して５重量部ないし１００重量部の割合で配合す
ると酸素錯体の寿命がさらに延長されるので好捷しい。

また、場合に応じて配合されるコレステロールは、アミ
ド系リン脂質１００重量部に対して１００重量部までの
割合で用いられる。

さて、上記リン脂質系材料によって形成されるリポソー
ムに包接される鉄−ポルフィリン錯体としては、酸累を
可逆的に吸脱着する機能を有するものであれば特に制限
はない。例えば、特開昭５７−２０６６１３号および特
開昭５８−２１３７７９号に記載されている一般式卸ゝ
（ここで、ｋはスないし１８の整数）で示される鉄（Ｉ
Ｉ）−５，１０，１５，２０−テトラ（α、α、α２α
−ｏ−（Ｈ−アルカノイルアミド）フェニル）ポルフィ
リン、まタハ特開昭５９−１０１４９０　＠　Ｉｃ　ｉ
ｊ’：　ｅ　サれテいる一般式 （ここで、ｎは１ないし２０の整数）で示されるホスホ
コリン基を有する鉄−５，１０，１５，２０−テトラ〔
α、α、α、α−〇−（置換アミド）フェニル〕ポルフ
ィンと上記各特許公報に記載されている、脂溶性（疎水
性）基を少なくとも１個有するイミダゾール化合物とか
ら構成される錯体が特に好オしい。イミダゾール化合物
の使用量は上記各特許公報に記載されている通りである
。

この発明のリン脂質リポソーム全調製するには、上記％
開［５７−２０６６１３号、５９−１０１４９０号また
は５８−２１３７１１号に記載された方法において、そ
こで用いられたリン脂質の代りに、この発明のリン脂質
糸材料を用いればよい。

例えば、所定量の鉄（１）ポルフィリン、イミダゾール
化合物およびリン脂質糸材料をナスフラスコ中で適当な
溶媒（例えば、メタノール、クロロホルム）Ｋ溶解した
後、ロータリーエバポレータにより減圧下で溶媒を留去
するか、捷たは適当な溶媒（例えば、ベンゼンとメタノ
ールとの混合物）から凍結乾燥処理することによって固
形混合物を得る。不活性ガス（窒素ガス、アルゴンガス
等）雰囲気下で、上記固形混合物に所定量の不活性ガス
飽和水を加え、振盪した後、超音波処理することによっ
て鉄（１）ポルフィリン錯体を包接したリポソーム懸濁
液を得る。

ついで、不活性ガス雰囲気下で鉄ポルフィリンに対して
１〜１００倍モル、好捷しくは１〜１０倍モルのＬ−ア
スコルビン酸を加えた後、加温して還元反応をおこなう
ことによって、この発明の鉄（ＩＩ）ポルフィリンを包
接したリン脂質リポソームが得られる。

鉄ポルフィリン錯体を包接した上記リン脂質リポソーム
の平均粒径は、上記調製法における　　　　′超音波処
理操作の超音波出力および時間の制御、普たは適当なリ
ポソーム調製法（Ｃ０Ｇ、Ｋｎ１ｇｈｔ編、　Ｌｌｐｏ
ｓｏｍｓａ：　Ｆｒｏｍ　Ｐｈｙｓｉｃａｌ　５ｔｒｕ
ｃｔｕｒｅ　ｔ。

Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ＡｐｐＨｃａｔＩｏｎａ＊　
ｐ５１−８２．　ＥｌｓｅｖｌｓｒｚＡｍｓｔｅｒｄａ
ｍ、　１９８１参照）を適用することによって、数μｍ
ないし１００Ｘの範囲で調節できる。

なお、水系媒質としては、水、リン酸緩衝水＝１０− （ＰＨ＝５〜９）、生理食塩水、Ｋｒｅｂｓ−Ｒ４ｎｇ
ｅｒａ溶液、あるいはこれらにデキストラン、ヒドロキ
シエチルスターチ、アルブミン等の血液増量剤やアミノ
酸、糖類、ビタミン等を溶解した水溶液を用いることが
できる。特にこの発明のリン脂質リポソームを医用目的
に用いようとする場合は、リポソーム懸濁水のｐｌ（、
浸透圧、粘性等の物性が、ヒトその他の哺乳動物の血液
のそれに近いことが好ましい。

この発明の鉄（ＩＩ）ポルフィリン錯体を包接したリン
脂質リポソームは、その中に包接された鉄（Ｉｆ）ポル
フィリン錯体の、酸素分圧差による可逆的酸素吸脱着機
能を極めて安定に発揮させる。こうしてこの発明のリン
脂質リポソームに包接された鉄（ＩＩ）ポルフィリン錯
体は室温下、水中で極めて安定な酸素錯体を形成し、酸
素吸脱着剤として長期間に渡りその機能を発揮する。

またリポソームを形成するリン脂質系材料はそれ自体毒
性が低いので、生体に適用することも期待できる。また
、この発明のリポソームは工業的な酸素吸脱着剤として
、捷た酸素運搬輸液等として医用目的に利用することも
考えられる。

〔実施例〕

実施例１ 鉄（ＩＩ）−５，１０，１５，２０−テ　ト　ラ　（ａ
、ａ、ａ、α−０−［２Ｏ−（２’−トリメチルアミノ
エチル）ホスホリルオキシ−２，２−ジメチルエイコサ
ンアミド〕フェニル）ポルフィン（式（４）においてｎ
＝１８の化合物）２．７ミリグラム、Ｎ−ラウリルイミ
ダゾール０．６６ミリグラムおよびスフィンゴミエリン
１７．２ミリグラム（モル比的１：３：５０）をメタノ
ール溶液とし、減圧下で溶媒を留去してナスフラスコの
壁面に薄膜として乾固させた。

窒素ガスで予め飽和しておいたリン酸緩衝水（ｐ）Ｉ　
７．　Ｏ）　１２ミＩＪ　ＩＪットルを加え、？ルテッ
クスミキサーで振盪した。さらに、窒素ガス雰囲気下で
超音波攪拌処理（３０Ｗ、２０分）してほぼ透明なリボ
ン−Ａ懸濁液を得た。窒素がス雰囲気下でこの懸濁液を
紫外・可視吸収スペクトル用の石英セル（光路長１０簡
）に移した後、上記鉄ポルフィリンの１０倍モル量のＬ
−アスコルビン酸を加え、密栓した。３７℃に加温して
還元し、目的とするデオキシ型鉄（ＩＩ）ポルフィリン
錯体（吸収極大波長４２６．５３５　。

５６２ｎｍ）を包接したリポソーム懸濁液を得た。

実施例２〜５および比較例１−２ 実施例１において、スフィンゴミエリン１７．２ミリグ
ラムの代りに、スフィンゴミエリン１７．２ばリグラム
およびコレステロール０．９ミリグラム（実ｍｆｌＪ２
）、スフィンゴミエリン１７．２ミリグラムと卵黄ホス
ファチジルコリン１．８ミリグラム（実施例３）、スフ
ィンゴミエリン１７．２ミリグラムとホスファチジルセ
リン１．６ミリグラム（実施例４）、１．２−シミリス
トイルアミド−１，２−デオキシホスファチジルコリン
１５．５ミリグラム（実施例５）、卵黄ホスファチジル
コリン１８．０ミリグラム（比較例１）、またはＬ−α
−ジ、ｆルミトイルホスファチジルコリン１７、１　ミ
リグラム（比較例２）を用いた以外は全く同様の操作を
おこない、それぞれ鉄（１１）ポルフィリン錯体を包接
したリポソーム懸濁液を得た。羊れぞれの可視吸収ス（
クトルの吸収極太波長は実施例１のそれと一致した。

実験例 実施例１〜５および比較例１〜２で得たデオキシ型鉄（
ＩＩ）ポルフィリン錯体全包接したリポソーム懸濁液に
酸素がス′を通じると、直ちにス（クトルが変ｆヒし、
相当する酸素錯体のスにクトルとなった。吸収極大波長
は５４６ｎｍであった。得られた酸素錯体のリポソーム
懸濁液に窒素ガスを吹込んで再び窒素ガス雰囲気に戻す
と、スペクトルは元のデオキシ型鉄（Ｉｆ）ポルフィリ
ン錯体のそれに戻り、可逆的な酸素の吸脱着が生じるこ
とが確認された。この酸素ガス−窒素ガス吹込みによる
可逆的なスペクトル変ｆとは数十回以上繰返しておこな
うことができた。

次に、得られた酸素錯体リポンームｌＩ！１ｌＩｌ濁液
の経時変化を可視吸収スペクトル（５４６ｎｍ）で追跡
し、２５℃における酸素錯体の寿命（鉄（１１）ポルフ
ィリン錯体の５０９６が鉄（ｍ）錯体に不用を以下の表
に示す。

表　酸素錯体の寿命 リポソーム　　　　酸素錯体の寿命 実施例１２．０ 実施例２２．０ 実施例３２．４ 実施例４２．６ 実施例５２．０ 比較例１０，５ 〔発明の効果〕 以上述べたように、この発明によれば、リポソームに包
接された鉄（ＩＩＬｊ？ルフィリンの酸素錯体の寿命が
比較例のものに比べて４倍以上延長される。特にリポソ
ーム形成相和としてγミド系リン脂債に他のリン脂質を
配合したものを用いると酸素錯体の寿命はさらに延長さ
れる。

＝１５− Ａ２−

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）分子中に１個以上のアミド結合を有するアミド系
   リン脂質を１種以上含有するリン脂質系材料によって構
   成されたリポソームに鉄（II）ポルフィリン錯体を包接
   したことを特徴とするリン脂質リポソーム。
2. （２）アミド系リン脂質がスフィンゴミエリンである特
   許請求の範囲第１項記載のリン脂質リポソーム。