JPS61226052A - 機械的剪断コラーゲン組織注入材料およびその調製方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

（産業上の利用分野） 本発明は身体治療成分および方法、および′１．′ｌに
注入可能な機械的に剪断したコラーゲン繊維絹織注人材
料、およびこれの調製と使用方法に関するものである。 （従来の技術） コラーゲンは皮膚、股、軟骨、骨および間質などの硬、
もしくは軟結合Ｍｉ織の置換または増大のための挿入材
料として使用されてきた。初期のコラーゲン挿入材料は
しばしば１機械的性質の改良。 免疫原性の低下、および／もしくは吸収に対する抵抗性
の増大のために、化学薬剤、照射もしくは他のツノ法で
、架橋された固体コラ−ケン４，１１甘（ル）った。固
体架橋１ラーリン挿入祠オ′−１の大きな欠点し４切開
「一段に、１、り夕１ｆ′Ｉ的挿入処置を必９１Ｊとす
ること−である。固体−＋−７−’Ｊ−ン挿入＋、４１
１の他の欠点は変形能および柔軟性の欠如である。 り目Ｉ的挿入固体−ｌラーゲン月１”＋　６．Ｚ対する
有４・１」な代替物か未■４１「１１″ＩＮｏ　３．　
！１４り、　０７３に開示さＪｌ、そ１−７でΦ５？　
＆、ｒｌ嵐を増大さ１！ろための注入ｒｉＪ能な挿入Ｌ
＋　Ｊｌとして！ラー））−ンの分解ペプチ１の（す・
川を含んでイｚ）。本挿入４）ＩＪ：目；ｌ：　：＋己
ず　ｊ１４　型的ｔ＝　Ｌ；ｌ　＝＋−）−’Ｊ’　７
を１つあろいＧ１１それ以１の低ｐＨで作用ずイ、タン
パク分解酵素で処理−づろ、二とに、ｌ：す１分惰ｉ″
ペプチ１：１ラーリーン繊維の溶液を作るごとにより調
製される。可溶化された繊維は繊維溶液のｐｌｌ、イオ
ン強度オンよび／　４）　Ｌ　＜　Ｂン１を島度を−に
げるごとにより再形成され人−繊維＋Ａ　Ｉ−１を形成
する能力を有する。特５７ｌ“０７３の方法を行うには
、可溶化された繊維）

【？罰液を生理的イオン伸度およ
びｐｌｌ条（′１にし、そして皮下性！１・１１１を用
いて増大させるへき部位へ注入する。注入の前に始まり
、増大部（ｉνで持続する繊維の再形成過程番よ固体コ
ラーゲン挿入物に対し２注入可能であることに力ＩＩえ
て２多数の重要な利点を有する繊維コラーリ“ン材「１
を生ずる。 一般的に認められている米国特約Ｎｏ、４，４２４，２
０８は再形成されたコラ−ケンと化学的に架橋された分
解ベプチ１′コラーゲンの双方を含む注入可能なコラー
ゲン材料を開示している。この÷Ａ料は改善された持続
性、ずなわち−に記特許゛０７３に述べられている再形
成された非架橋性挿入材料に対し。 挿入物の容積の一定性、を提４Ｊ１．する。 上述の特許に開示された注入可能なコラーゲン挿入材料
の利点および全般的な有用性にも拘わらず、特に＋Ａ　
Ｉｔを長期間保存した場合に、本材料の注入に（＝Ｊ随
した問題か生した。一つの問題は、適切な大きさの注！
１１　ｔｌを通して本コラーゲン材料を押し出湯のに、
比較的高い押出力、約５０〜６ＯＮにューＩ・ン）、が
必要なことである。関連した問題点は針を通して材料を
押し出すのに必要ｔ「圧の急激な増大により特徴的な”
詰り゛効果が生ずる。 すなわちこの＋Ａ　ｌｌが針の中で部分的につまる傾向
があるというごとである。極端な場合、注η・［四に圧
をかＬＪ続けるとり１あるシｔ＋ａ注射器か凝集し六π
１ラーリ゛ン繊糾により壊れ、斜の連結部からＹｉ人祠
材料注１・ｊ器の外へこほれ出す。高粘性、詰り、およ
び漏出問題が合わさって、コラーゲン注入処理での使用
に対し、ごの材料が不適当となる傾向があり、また保存
１１１１間と共にこれら問題点の程度が増大するので挿
入＋Ａ利の有効保存寿命を制御ｉｔ！　ｌ、ている。 粘性を低下させた改良架橋コラーゲン挿入材料が“注入
可能な架橋コラ−ケン挿入材料゛の名称で１つ８４年１
０月２８１１に差し出された共有のＣＩＰ出願Ｎｒ＋、
６ｆｉ３，４７８号に開示されている。この改良斗４料
ば小供）１１１内架橋を主に４１三する条件下で再形成
分解ペプ千１：１ラーケンを架橋することにより調製さ
れる。粘性低下に力１１え、ｌ−述の２特許の月１′−
１にＩＬべ木架橋＋４「１はまた改良された持続性とタ
ンパイ１分解酵素分）うＹに対−りる抵抗性を示す。ご
才１り、の利点にも拘わらず、詰りおよび注射器破１員
に関する問題か、特に数Ｊ／−月の保存期間後にム」、
注入による木材料投！ｊ、の際に生ずる。 （発明が解決しようとする問題点） 本発明は架橋および非架橋両方のコラ−ケン注入繊維懸
濁液において改良された注入可能特性を提供する１注入
可能なコラ−ケン注入材料を含む。 本材料は再形成され機械的に剪断された分解ペプチドコ
ラーゲン繊維を含む。この繊維は５０〜２００ミクロン
のサイズの範囲にあることが望ましい。 この改良された注入可能特性は投与の際の低い押出力、
典型的には剪断されていない繊維材料より２０〜３０％
低い押出力、および詰りゃ注射器破損の実質的な除去を
含む。本Ｈ料は従って投与が容易でかつ安全であり、一
般に長期間の保存寿命を有する。 本発明の方法では、挿入材料はまず分解ペプチｌ′コラ
ーゲン溶液をコラーゲン繊維の懸濁液を生ずるように再
形成することにより調製される。この懸濁液を最大の繊
維のサイスを低下さセるように、典型的にハ１７２以下
に低下させるように９機械的剪断をかける。好ましい方
法としては、再形成された繊維を２００〜３００ミクロ
ンのメノシュザイスをイ１する硬いスクリーンメソソー
Ｌに複数回ｉ１ずことにより剪断する。ごの再形成され
２機械的剪断を受ｉＪたコラーリーン祠料を出来れば８
〜２４時間保ｌ晶し、ン先浄し、ヒ１．小者へのΦＲへ
の注入に適した形に再懸込Ｈ−る。剪断後の保温シ１．
小供組内架橋を主ζこ生ずる条イ′１下で、架橋剤の存
７ｌＥ１−で行な・）。 本発明の−・つの一般的な目的ｉ；ｔ：　、比較的低い
押出し圧−（皮下？、□ｉ」・１器により投与出来、そ
れにイ・］μｊ５して詰ν）や注射器破損を起ごさない
１機械的に剪断した挿入＋Ａ１′１を提供することであ
る。 本発明の他の目的（１、ｌ架橋型もしくは非架橋型のい
ずれかて、そのような材料を提供する、−とである。 本発明の更に他の目的は注入能の明らか〕、（低下なし
に１年間もしくはそれ以１−の期間、保存可能なコラー
ケン挿入月ネ′−１を提１ハするこ七である。 そのような材料の調製方法を提供することもまた本発明
の他の１−１的である。 本発明のこれらおよび他の「１的と特色４；ｌ：　、以
Ｆの本発明の詳細な説明を添イ」図と共に読めｉｆｆ　
、更に全体が明らかになるであろう。 （問題点を解決するための手段） 本発明の注入凸Ｊ能なコラーゲン材料は、再形成され機
械的に剪断された分解ペプチドコラーゲン繊維より成る
。 本発明の注入可能なコラーゲン材料は、繊維り一イスが
約５０〜１５０ミクロンの再形成され、架橋されていな
い２機械的に剪断された分解ペプチ）ζコラーゲン繊維
からなる。 本発明の注入可能なコラーゲン材料は、繊維サイズが約
５０〜２００ミクロンの再形成され、架橋され１機械的
に剪断された分解ペプチドコラ−ケン繊維から成る。 本発明のコラーゲン挿入材料を調製する方法は。 再形成された分解ペプチドコラーゲン繊維を供給するこ
と、および繊維サイズを実質的に短くし一す−イズが不
均一になる迄該繊維を機械的に剪断すること、を包含す
る。 ？ｆ番−Ｌ　戸１）−−−−再形ノ戊　−ｌラーケイ手
仙簀ｆｊ））訊ｉ土′（本発明のコラーノ］−ン挿入十
Ａ料ル、１．か７Ｎ２）多数のポア１４類を源とＵ２て
得た：１ラーゲンに由来ｊ−１得ろ。 供給汎（は、イイ舶１か永久的に挿入される宿−トとＧ
：１遺伝的に同じである必要乙３１ない。その人′「の
容易さのため、牛あるい番、！豚の真皮がふつう用いら
れている。 再形成＝１ラーゲン繊維の調製の第１段階は、動物の皮
の真皮より溶液中分解ペプチドを調製することである。 皮を弱酸に浸し１毛１表皮そして脂肪を除くためにこす
ることにより柔らかくする。 毛を抜いた皮を弱酸中ｔ、二再び浸し、そしてごすり減
らしたり、きり刻んたり、粉砕したりあるいは物理的処
理により細かに砕く。粉砕は可溶化のための皮を調製す
る。 分割した＆、１１１ｉｉ１ｉを、水性媒質に分１１にさ
せ非変性状態下で可溶化し、コラヶナーゼ以外のタンパ
ク分解酵素、酸性ｐＨで活性のある酵素の方が好ましい
が、により消化する。変性を防（ためにふつう。 低温で希釈酸溶液を用いる。塩酸のような鉱酸。 もしくは酢酸、マロン酸もしくは乳酸のようなカルボン
酸を使ってもよい。用いた酵素により、ｐｌｌは約１．
５から５の範囲に、また温度は約５℃〜２５℃の範囲に
する。好ましい手順としては、細かく砕いた組織を塩酸
に、？農度を１０〜３０ｇ／βで、　ｐＨは約２で、２
０℃で分散させる。Ｘ、旧：ｉｉｌ！を分散させた後。 酵素を加え、混合液を分解ペプチドや組織の他の可溶成
分を酵素か消化できるように保温する。ヘリックス部分
は変性していないコラ−ケンの分解ペプチド部分に作用
する酵素を用いる。このような酵素の例としてはペプシ
ンとパパインがある。 ペプシンが好ましい、というのは、比較的容易に不活性
化し、可溶化したコラーゲンより除去できるからである
。酵素濃度は、ふつうコラーゲンを基準にした重量の約
０．１％から１０％の範囲にする。 保温期間ば典型的には約２日から２週間の間にする。１
度、可溶化が完了すると、酵素を不活性化しく変性させ
）、除去する。 酵素を変性後、変性した酵素や可溶化時に消化した組織
の部分を除くために溶液を処理する。種々ノ透析、沈ｄ
・ｙ、　＋ｒ、＋、びｉ）９．　ｉｇ　（１術、））＜
、　　、：　ノ、１；　’Ｊ　ｌ；除去を行゛）のに用
いられろ。米ｒＥＩ’ｌ！＋許ｊ１；昌３３．９４’ｌ
。 ０７３、第３（ｒ＊’１．ＩＯか”：＋　２２ｆ−ＩＩ
−１および米国１臀）番′弓４．１１０．５３７第５１
１旧、１８行１−１から第１６１閤１３．１行ｌ］ま−
６を見よ。そこ−Ｃ１ｔｉ４ポ、トれている、二とＣ；
１、二、二てｉｌｌ参考とし２て＆ｌ１１．７＋込５１
看１．′いる。沈殻を）小過し７゜ｉ＋＝液をン櫂４ｉ
Ｗ　ｔ〜て、（多）直（７４事１を［するのに（束材１
できろ実質的に純粋な分ｊｌｉ・１″ペプ千ｌ’　Ｚ７
ラーゲンイ容）１グを生産する。パ分解ペプナｌ’　”
　Ｄｌ：　、　ｊ　、ｌ　’（１，Ｌ　（ｉｉ溶化のカ
ニめの凸￥素処Ｉ甲に、ｌ、す）Ｉ（１、去−さ才１へ
上、＋、、：：ｊのン（（分解ペゾチ＋’　ｈ：ｒを１
４ｉ・−り呵請化１−７た゛ｌラー／、ンとしく定にし
、そＪｌす）えに　巾ら一１！ん二Ｉ：）−りシ奇実′
ｉ″ｊ的に１１＋￥成していイ１゜′１の５）　Ｍ４″
ペプナｌ’　：：１　ノーケン小用い＋１［熔）（ジの
ｉｌ”、１製ム、１．以下の実施例１に訂Ｌ　＜　ｊ４
りへられていイ）。 挿入（Ａ才’４を、ｉｌＡ］　ｊシｊＪする次の段階（
５１，溶液かニー分）１・７ペプーノー１−１−ノー′
ノンに＋、（！ｔｉｌ＋全山形成全孔形成と（ある。 再形成ｉ：Ｉ：　、温度を下し）て、３、−月０’ｃか
ら２５°〔か好ましいか、溶液を中和″４ろごとに３１
、り行・）のか好１；しい。中和した冷液の・イオン強
度ｉｌｌ：　、’ｌ理的条（１−に照らして等張が好ま
しい。イオン強度は約０．０３から０．１の範囲５好ま
しくは０．０６−’ｔ２あるか、で典型的には用いられ
ろたろ・）。中和（，１，水酸化・Ｊ−１〜す・す１、
もしく　Ｌ；ｉリン酸す−１リウムのようなｊ内当な塩
Ｊ！、、あるいは緩Ｈ・百夜を）川えろことにより、２
容、夜のｐＨを典型的に約６から８の間にまで、溶液中
のコラーゲン小繊糾か、ここでε：１繊維と言及してい
る繊維状の会合体を形成する１／−・ルにまで、１−８
げろごとを含む。 これらの条件トで熱線形成１１’、　、　ｐ　ＩＩが約
４．９から１０．０の１・ｎ囲で起ごろ。再形成媒質の
最終ｐＨは、約５と８の間が好ましい。再形成段階の持
続期間は。 通常１７２時間から１２時間の間で、約１〜４１１．ｌ
、間の間か好ましい。本発明に、１、る機械的剪断の有
効な効果シ」−、コラ−ケンを実質的にＪに時間１例え
ば２４時間を越えてｉｌＴ形成さ・）する、とき、Ｌり
も、剪断か再形成の数時間以内に完ｆするとへの方か実
質的に大きい１　ということを本発明を支持するために
行なった実験は示している。牛の１１ラ一ゲン分解ペプ
チド繊維を再形成さ−Ｕる方法は実施例２で許しく述−
２てい２）。２時間もしくは］　１１のｉｌＨｌ酸形成
月間後！ラーリン繊維＋、ｌ　１”ｌにおむ」る機］Ｊ
２（的剪断の効果（ｊ２　実施例６Ｃ４二見られる。 を心２皆）−−１戊）１人１′白仝（剪断−さセ、に一
うニクー／繊着［ｏ）ｐ用便第１図Ｃ１１７本発明の方
法に、ｌ−り再形成シ２ノこ二ｌラーう一ン繊維の：￥
ｔ、　；！ｉ：ｉ液を機械的に剪断するのに用いるシス
クー１、を図式化している。システｌ、は加「した再形
成刊１′１を色に）容器１０を含む。容器は容器の内茗
ミ′吻をシソテノ、操作中充分＋ｕｆ　＋’ｌ’さ４′
するよ）に保つ３Ｊ、・’Ｊ　（ＧＪ＋　＜振と・）器
１２に支えト二ンれでいる。容器からの４．Ｈｌは、約
７・〜８ｆｆ／ｍｉｎまての望ましいポンプ容量を持つ
ポンプ２０によりシステＪ・を通して再循環させろ。望
ま１−７いポンプｉｉ：　４：：ｌｉ動運動型ポンプで
、＋Ａ利か無菌状態で加Ｉされるような４）の゛（ある
。不発明で充分であることを証明した１つの傾動運動型
ポンプｉ；１．　ｌ１ａｎｄｏｌｐｈペリスタル千ツク
ポンプ、干デル＃０団−１旧で、ランドルフ・コーポレ
ーション（マンカッ、ＴＸ）より購入した。 、二のシステＪ・の（；開成的剪断は、フィルターセノ
ｔｌｄ内に支持され、納められている堅めのツノ−７ユ
スクリーン１６をｊｌＩｉじて、再形成しまた二ｌラー
ゲン繊維）イ料をポンプで送ることで成し得た。その１
ピットは、掃除やスクリーンの■ｖ換え用に解体でき得
る。クリエイティ７゛・サイエンティフィソクンＩ（ロ
ングヒーナ、ＣＡ）より１ｊｔ７４人した４７ＩＩＩＮ
のソイルクーのセ、ノＩ・は１本発明を実行するにあた
り充分使えた。１１間なるメ・ノソフ、す′イスを持つ
スクリーンは、この七ソ１〜用に利用できるもので１機
械的に剪断された４わ′−１に最良の利益をもたらすよ
うメソシュ゛す”イスの選択かできる。以下の実施例３
に見られるよ・うに、６０メノシエスクリーンは２約２
５０ミクロンのメソシブ４Ｊイズを持つが、濾過された
材料について観察された注入動性より証明されたように
、優れた機械的剪断の特質を供する。さらに一般的には
、約２００〜３００ミクしＩンの間のスクリーンメソシ
フ、リイズが本発明を実行するのに好ましい。 再循環している利料は、熱交換２柵８をｉｌることによ
り冷やされる。冷水循環イ・Ｉきの従来の水ジャケット
型ν〜交換器で充うｌである。ごの型の熱交換ＢＨＢ　
＋、＋　、　　実施例４　”（！；、！られる、（、う
Ｃに約７７！／ｍｉｎまでのシスう−１，／を６申かｊ
？ｉ当−（ある。 フラスコ、フィルターセラＩ・２熱交ＩＭ　器、　：ｒ
；　、ｔびポンプＬ：ｌ：　、　Ａ１１ｌ！　ｊｌ　（
Ｄ効＜　’＆　Ｄ　１４１ｉ２２　ｉｈ　６　イ！’、
１．”ｃ　ｔｌニ似た。１／２“”　１１ｌ　：＋１、
ナーＪ、−ゾのようなものにより。 図に示しまた。１、ろにして連結している。全体のシノ
テｌ、ｉ：１．　ｋｒｙ）：　Ｌ　＜　１ｆｆ（Ｅ　合
ｊｐ−４Ｈ’！トｕ　−（、殺菌でキロ。 ）Ｊｖ過し７たーＩセラーンＲｌｌ′ｌのある注入４：
＋ｒ質で証明されているよ・うな再形成繊維の所望の→
ノーイスを達成゛４るために、スクリーンメソシコ、ス
“リ−イズ、ポンプの流速、オンよび剪μＪｉシステム
における全容積の循環時間をｊ重訳−りる。皮ド汀９・
１針、典型的にＧ３１２１−３０’Ｊ’　−シ０盲ｉテ
’Ａ’ｒ　Ｚ＊　カ、　ヲｉｍ　シー（、未濾ｉＵ　：
Ｉラーゲン、１Ｉｉｌｌ製物の状態て押出ずと遭遇する
１−記に挙げた問題の面から、これらの特質か理解され
る。 これらの問題の）らの１−バ；ｌ：、　ｔｌを通して材
料を押出すのに必要とされる比較的高い圧力である。 ＴｆＱすｌ：ｌ、Ｐ／：：、１、’ｌ　？コＪｌ　（７
）　問題し１１未；Ｉｖ通過４　月ノ高イｔｘｔ度によ
るものであり、　＋Ａ利を注入する際の田デＩＣに１ｆ
ｆｌじ（（）る。究極的に高い粘１ノ目１１．押出し力
か約７０Ｎより高いよ・うなとごろでＣ３目イ料を役イ
ノだなくしてしまう。本発明により剪断すると、＋１１
（糾挿入祠＄１１ｆｉ実質的に滅し７だ押出し圧力　！
！！！型的には間条件下で未濾過−１ラーゲン挿入４４
　ｆｌを押出すのに必要な４）の、１゛りも２０〜５０
％低い押出し圧力、を示ず。 従来の型の二１ラーリーン挿入＋Ｋ　＃−＋を注入する
ごとに関連する２９の大きな問題、詰りおよび漏れ出す
こと、し、１最適な剪断条（’ｌ　Ｉζで７−１　、ｚ
、出される挿入材料では実質的に除り（される。 スクリーンメソシブ、ザイズ、ポンプのンｌｔ連、およ
び全１ＩＩＩｉ環時間の粘性、詰り、および漏れ出し特
性に対する影響をこれから考える。スクリーンメツシュ
→ノイズは１−に挙げ人―よ・うに、２００〜３００ミ
クロンの間かＩＴ−ｐＥ　シい。、Ｌり小さいメノシュ
ザイスでＣ１１例えば１５（）ミツ１１ンでル１．スク
リーンは容易につまりやすく、システ１、か使えな（な
る。 比較的大きなメソシュザイズ２例えば、約１１もしく心
、１それ以上では、＋オ料は押出し圧力のわずかの減少
を示すが、未濾過材料に対し、詰りおよび漏れ出しにほ
んのわずかの変化しか示ざないであろう。実施例３中の
データは、２５０ミクロンメツシブスクリーンをｉｍし
て織締（４料を；ｌ傷過することば未濾過（ｌ′旧に対
して５０％月二で押出し圧力を６友し。 実質的に押し出し中の詰りゃ、漏れ出しを防くとい・う
こと４示している。比較することにより、　１．１９ｍ
１メツシ７、スクリーンをｉｉｎ　ｌ−７での）慮過Ｌ
４押出し圧力が適切な減少を示すが、材］′−１のかな
りの詰りおよび漏れ１１１シか残っている。 流速の影響を３Ｐ、えると、減少した押出し圧力や濾過
した材料におＬＪる詰りおよび漏れ出しかより起こりに
くいということより証明されてい７．ように、より高い
流速ロ一般的により効果的な機械的剪断が伴う。スクリ
ーンが２５０ミクロンメツシュスクリーンであると、濾
過した材料の良好な押出し特１ノ１が、以下の実施例４
で示されているデータかられかるよう乙こ、およそ６ｆ
ｆ／ｍｉｎから７ｆｆ／ｍｉｎの範囲の流速で得られる
。未濾過＋イ料に幻して押出し圧力の約５０％の減少と
、詰りおよび漏れ出しを事実１−除くということをデー
タは示している。 流速が５ｆｆ／ｍｉｎてし、１．未！１ｖ過材料に対し
て押出し圧力の部分的な減少だけが観察され、押出し中
にある程度の詰りおよび漏れ出しが起こった。比較的高
い流速２例えば８β／ｍｉｎでは、あまりにも多くの熱
が管組織で生じ、繊維材料の変性をもたらず。６ρ／ｍ
ｉｎと７７！／ｍｉｎの両方の流速では、濾過した材料
において好ましい注入特性を生め出すが。 低い６ｎ／ｍｉｎの流速の方がシステムにおける圧力や
熱生成が少なく好ましい。 システムの循環時間は、　＋４料がメツシュスクリーン
を多数回、好ましくは約５０と１８０回の間であるが２
通過できるように選択する。１凹以−１二の必要性は、
未濾過材料の注入特性を−・回の通過もしくは約６０回
の通過による濾過材料の注入特性と比較している実施例
５のデータに示されている。そのデータは、１回通過す
るだ＋）で押出しにおいて中程度の減少があるが、実質
的には押出し中に観察される何回もの詰りは減少しない
ことを示す。 」−記の最適循環時間を越えて、ざらに濾過すると材料
の押出し圧力を増加させることができる。 約２５０ミクロンのメッシュザイズのメッシュスクリー
ンに幻して３、ヘノＧ　Ｒ／　ｍｉｎ　Ｏ）’ｄ、ｊ速
で、約１８０回後（実施例５）に、　４４１１′’Ｉの
押出し圧力増大が観察される。循１１′５を多くした■
％：　４．Ｚ　、ＪＪ、られる増大１〜た押ｊｌｊ　ｌ
−’　圧力効ψ用、小サイａｈ、１７ｌ１ｔｌｌ’ｌ　
（’）　ｉ）７＋　？ｒ＝度ノ４．ＪＴ−ｌ　テＰ想さ
４する増大した祠Ｈの粘度乙、二よるものであると言え
・之）である。かくして３機械剪断１…過稈は。 斜の内壁に沿って詰りをＰ１’ｊ　Ｌ、たり２１１内部
に繊糸１１３１〆１を形成するくらいの用常に大きなも
のと化軸的高い粘１’ｌ効果を生め出ずＪ旨：；言コ小
さなものの間のり−・イスの中間であるような繊維、に
なろような条（′Ｉ−ドて、最適に行ム′えろ。機（〕
、（的剪断のための条（′ロ、ｊ、繊維の」ｊ−イスか
５０から２００ミクしＩンの範囲。 望ましく１ｉｉ５０〜１５０ミクロンリイスであるＩ；
Ｂ　４ｇ挿挿入材料〕ＬＪり出ずようにＪｎ　ｌｌ’ｊ
する、−とが望５１：１ツい。 りし３ｉｉｉＩ−１巾人４４′Ａ′１ｊ’ｉｊ　＜、鍾
虜ｊ昂　しイー人ニー４イ　木１　の工）ｌ製濾過下順
に続いて、注入′１冒’ｌをイＷ進さ−ＩＬるため。 祠オ′−１を再形成なり質中てざらに保温する。２１ｖ
過後の保／晶段階は、所望の最終挿入＋４１１に応して
２選択した濃度と化学反応条件トで行う。架橋していな
い挿入４４利を作るため、再形成し）１Ｇ過した材木−
１を。 典型的に約２〜５１ｙ／ｍ　（！の深度で、約１１℃か
ら２４℃の間て数時間保／１！！する。ｉＪＵ過後の普
通の保温時間は約４時間から２４時間の間であるが、好
ましくυＪ約１２時間である。以下の実施例６は、濾過
しノーコラーゲン繊維）留、）・弱液の押出しシラ１−
一圧力に及ぼず一晩保温することの効果を表している。 一般的に、濾過後の保／２Ａは、第２節および実施例（
３〜６で取り上げているように、プラト−圧力を１１ｑ
著に低１ζさ廿ろのに必要である。おそらく）１υ過後
の保温の効果は、！虜過後の懸濁液内で起にる繊維の会
合状態の（＝１加的な変化によるものである。実施例７
で示されている繊維の測定から、最終的にｌＪヒ過して
、保温した＋４　’１′−１は６０〜１２５ミクＩ−１
ンの範囲の繊維サイズを持一つ。ごの範囲は、同し条件
トーｔ：二おいて機械的剪断なしで調製した祠１−１が
約ＣｊＯ〜３５０１ノイスの範囲であることと異なる。 繊維−リイスの減少４；ｆ：　、広範囲の剪断速度で測
定すると（実施例７）、粘度の約２０〜３０％の減少を
伴・う。 ）虜過し７保＞ＸＡ　した）２（月を心縮し１例えば１
回あるいばそれ以１−の遠心弁面１段階を経て、そして
最終曲に所望の濃度、典型的にｔｉ＋適切な注入媒質で
約２０〜８０■／ｍｌｌ、になるよちに山）旨？罰する
。１つの好ま１−７い最終的な挿入材１′・目；ｌ：、
ｐＨ６〜８の等張な媒質に約（ｉ　５１１１１！　／　
ｆｏｐのタンパク濃度になるよ）に懸濁した繊♀１（よ
り成る。濾過し、保温した（４月は。 架橋していないコラーゲン繊維の挿入材料として用いる
のに適切である。＋Ａ１”ｌば、減少した粘性（実施例
７）と減少した押出し圧力（実施例３〜６）を持ら、注
入時に詰まったり、あるいは洩れたりするごとε１Ｌ実
質的に起こらない。材料の貯蔵性は以Ｆて考察する。 本発明の第２の具体例は、注入可能な架（，１コラーゲ
ン挿入＋Ａ利に関する。Ｈ（イ１’特許出願において詳
しく述へている架橋法に従って、繊維内架橋を主にもた
らず条（’１−１−　’乙　再形成し；・！Ｕ過した）
嗣濁液を保温する、−とであＺ）。典型的な反１．ＩＳ
条イｌ　’Ｆ’　−Ｑ　、　ｊｌ＝過した。Ｘｌラーゲ
ン懸、！ｉａ　？＆を、約０．Ｉ〜１ＯｎｌＩ７／ｍ　
１０）間の深度で、ざらに一般的に（Ｊ１〜５ｍｇ／ｍ
ｌ’の深度で、最終６２度が約０．００１重諺％からｏ
、＋ｏｈｉ甲％の間になるよ）に、クルクルアルテヒ１
のよろなアルテヒ１架橋剤と反Ｉ、１５さ一ロる。架橋
反応の時間はふつう１時間半から約１週間という範囲で
あり。 反応番Ｊふつ・う約１０℃から３５℃の間で行う。反応
は。 遊＾１１シたりシンのような凸１？容（’＋チアミンＪ
川える、二とにより励起できる。再形成と架橋反応か終
結した後２材料を洗浄し、適切な注入緩衝液に懸濁して
タンパク濃度の範囲を典型的な約２０と（ｉ５＋ｎｇ／
ｍ７！の間にしてさらに調製する。以下の実施例９４；
Ｉ。 ｐＨ　７．０の等張な棋衝液に）脈濁した約３５ｍｇ／
ｍ　（！　Ｉ７）繊維を含む濾過し架橋し７た挿入材料
を調製する１順を詳しくｊホベている。 濾過し架橋した繊維のサイズを測定すると、　７！Ｈ過
し架橋していない材料で観察されるものと同じ約８０〜
１２５とい・う繊維サイズの範囲を示す。文・１照的に
、）１Ｇ過していない架橋繊維は約８０〜７］０ミクロ
ンで、上限は未濾過の非架橋材料のそれの大まかに言っ
て２倍、というサイズの範囲を持つ。ひとまとめに言っ
て繊維リーイスのデータは、より小さい濾過した繊維は
、大きい未；慮過繊ｌｌ１（その最も大きいサイズは架
橋により２（Ａになる）よりも繊維間架橋（架橋し７て
も繊維の４）２イスの１・ｎ囲Ｃ，二評価てきるはとの
変１ヒかない去いろ、二とにより示される）を形成し２
ごこくいとい）ごとを示し７ている。 実施例１０て示さ拍ているように、濾過し架橋＋。 た材料の粘度＆；ｌ：　、同様に調製はしたが未濾過の
架］１督Ｕ７た４イｉ′ｌのそれよりも約５０％以下で
ある。非架橋ＩＡ利よりも濾、過することにより作成し
たａ＋＋橋繊維の粘度か、ｌ、り大きく減少しているこ
とｉ；１：、　Ｊｌ架橋＋わ′−１で作成したよりも）
）υ過するごとにより作成した架橋した４Ａネ−１によ
り大きな繊糺→Ｊイスの減少があるといゝノことに一致
する。また２実施例１】に示ずよ）に２７ゲーソの１１
の中を濾過、またｔｅｌ上）慮過架橋４４利を押出すの
に要する圧力の測定活用（Ａ。 ごの−リインおよび粘性のテークに−・致する。未）Ｉ
シ過の架橋月Ｆｌ　６．Ｚ関して５０％かそれ以１−の
押出しＩＩ−力を濾過Ａろごとてδに少さ一υていると
いうことがわかる。 実施例１１に示されている試験も未りＩ通過架橋祠１′
１にμらＡ１ろ顕著ノ：（し・＼ルの詰１：、りや閉塞
か実質的に除かれていることを示している。ごのように
７虜過Ｕ２架１１ｂた］１１′目、１．末゛痘過、未架
橋４４１１て観察されるよりイ１（い押出し７圧力や、
詰まり、ン１［・１器の閉塞が顕著に減少するという点
Ｃ１二おいて、同し利点を不し７ている。 濾過するごＪとこよ２ツ成し１′ｉろ押出し圧力や詰ま
る回数の減少は第５図で４）、’ｒ’ｌ’−られ、そご
てｔＪ：３０ゲージの１１の伺いたツベルクリンＪＴ旨
１」・１．　ＲＢから架１１ｚコラーケン＋４４′１を
押出ずのに要する圧力を示している。第５　ｉｌｌΔは
０．００７５％ゲルタルアルデヒドで架橋し、３５■タ
ンパク／ｍｐでリン酸緩衝化食塩水に−び５濁し７た未
濾過の織糸１目５に２ラーリ°ンについて。 第５図１３は、同様に調製したか、濾過した架橋材１１
−１について示し７たものである。 ）λＧ過した挿入材料１架橋および一１１架橋の両方で
観察される１ｉｉｌ　、ｌ＝、　Ｌ、た注入特質（：１
５．かなりの貯１代Ｉｊ１間にわたってｊ１１１持され
ている。１２Ｊ　Ｆの実施例１０て報告しているよ）に
、　！１Ｍ過し架橋したＪＩＡギ゛ｌは、注入特質を調
べた２ケ月間Ｊソ１−２押出し圧力あるいは詰）Ｌりゃ
閉塞の程度は顕著に変化（−７ないことを示している。 濾過し７た几架橋＋Ａ利においてし１．未ｆｌｆＪ過４
Ａ利にＩＬべて調ｉｉ！、ｊ物のわ１友少しまた粘１）
１は１２う月間用１−４）♀１１持され、最初の３ケ月
の貯蔵後に粘性の比４１り的小さい初１１１１増加か起
こった後Ｉｔ実質的な変化Ｌ３１示さなかった。ごれら
の４１’ｉ里は実施例１１に詳しくｊボベである。 ｎｉｆ　ｉｕｉのことから、いかに本発明の種々の［１
的と特徴が希望にかなっているかが、評価できる。架橋
そして非架橋両方の機（成約に剪断した挿入材料は朱！
１ヲ過材１（１に要求されるよりも実質的に少ない押出
し圧力で注射により投すすることができる。 減少した押ｊｌｉ　ｌ、圧力は、材料を投与したり、投
Ｅ］。 速度をよりよく制御することがより容易になるように１
．ている。 本発明のｉｌｊ要４１″！Ｉ１１徴によると、手順は詰
まりや投り中の汁躬器の閉塞を実質的になくり、、＋４
籾をより容易に、より安全に使えるようにしている。 詰ま〃）や閉塞の問題は未）！ｇ過の調製物において貯
蔵を増加さ−する傾向にあるので、剪断過程（１日イＨ
の貯蔵１１命を実質的に拡張し７ている。 本発明ａ＝従ってル５成Ｕ７たコラーゲン挿入＋Ａ［ｌ
を皮肉あるいは皮下に注射することにより、軟組織を増
加させたり、先天性胃常、後天性疾患あるいは美容的欠
点を治したりあるいは整形したりすることができる。組
織増量用の特別な使用は、−１−記に挙げた共有特許と
特許出願において詳しく述べている。 本発明は、単一の濾過装置を用いることにより容易に実
現し、またスクリーンサイス、ポンプの流速、そして全
循環時間を含む操作条件を、取り扱う材料の注入特質を
最適にするよう変化させることができる。 以下の実施例は、調製法、剪断手順の効力に及ぼず様々
な因子の影響、そして濾過した架橋および非架橋材料の
１、〒質、を含む本発明の様々な具体例を示している。 これらの実施例は本発明の展望を制限するものではない
。 （１ソ下余白） （実施例） ｌ昼ドに本究明の実施例に−ラいて説明ずこ）。 実ｂ１む例１ う〕〕解ペプー千の牛コラーーー４２−ン？’ｉｉ’ｊ
伐の５円ｉシｌ！ノ１の皮を７ｌ′ゾノシ２．酢酸）ｆ
旨（１を用いた処理に、ｌｉ／１１）ｉｔした。次にそ
の皮を細かく砕き、　（＋１１　２　、　？Ｆ＝度１０
−３０８Ｆ　／　ｉｔ　（７）塩Ｍ　ｎ：　ン１’ｊ　
Ｌ：”−Ｗ、ＩＨ？ｆｊ　シタ。ＶＢ　シ＜　１ｌＫＪ
　ｒＵ７たベゾシ７？Ｗ？ｆｕ、　（０，５ｇ／］Ｏｍ
ｌ！　０．０１Ｍ　ＩＩｃＩ）を１その′冒、ン猫ン１
女に・１−タンパク車−１に文、１して０．１％となる
ように加え、その’ｌ’＋Ｎ合液を１５〜２０’Ｃ（約
１ｏｏ〜３００時間（ｊ、１．温した。ペプシン処理に
続いて３保温媒質のｐＨを７．０以１−にｌ−げてペプ
シンを変＋’ｌ−さ−υ”反Ｌ１さを終結さ・ＩＪるた
めにＮ　ａ　ＯＩｆを加えた。次にその溶液をイｒ＋　
！ｌｑ　シて、希薄１１ｃＩ、　ｐＨｌ〜イ中で最終ン
農度を３＋ｎｇ／ｍρとした。 実施例？− Ｗ弓ｌ！ｌ１−４Ｊ、□−〕−ラニゲ］−ンの材料の再
五キ成０．２Ｍの１１．−１２１１１’ｌ’＋４を力１
１え中和するこ吉本二より実施例１の：Ｉラーゲン小ｔ
Ａｌｉ　ｉｆｔ　？容液がら繊維状コラーゲンを再形成
した。その後溶解させたコラーゲン小繊維を１５〜２２
°（：、２時間で凝集さ−Ｕた。 丈−施例−３− スフ１−二７（７）ノ−ン−ン−り、の−太−き−さ−
の−効盟第１図にＭ示し、Ｉ−１記の第２節で概説した
濾過システＪ、を用いて実施例３〜４を行った。システ
ムのイ／７．成としては、　ＲａｎｄｏｌｐＨ　Ｃｏｒ
ｐ、　（Ｍａｎｃｈａｃａ。 ＴＸ）から購入したＲａｎｄｏ１ｐＨモデル（ｉｌＯ−
１０１ペリスタルチツクポンプ、　Ｃｒｅａｔｉｖｅ　
５Ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ｃｏ。 （Ｌｏｎｇ　ｌ１ｅａｃｈ、　ＣＡ）からｌ１ｇ人した
モデＪし４７８０６−０００４７＋ｎｍフィルターセッ
トそしてＭｉｌｌｉｐｏｒｅＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（
Ｂｅｄｆｏｒｄ、　ＭＡ）からり異人したＩｎｎ（１４
９７７ｍ　）　、　６０（２５０７ｌｍ　）　、　１４
（１，１９ｍｍ）のｔｌ目状ワイヤースクリーンを含ん
でいた。 実施例２のように調製した再形成コラーゲン繊維）腎、
濁液の各々の′す′ンプルを濾過システＪ、容器中に置
いた。各サンプルの体積は約４００ｍｎで、材料の深度
しシ１約３ｍｇ／ｍβであった。ごのシステムのフィル
ターセットにば、　１００メソシユ、〔ｊＯメソシ１ま
たは１４メノシ１．スクリーンのいずれかを使用した。 サンプルは体積速度５７！／ｍｉｎてシステｌ、中を循
環さ−１１，イの間フラスコの内容物を、振イノにより
攪ＩＴ　した。含み１の循環回数は５　その祠利かフィ
ルターを約２２５回、’Ｈｆｉ過するのに相当した。 １００ツノツユスクリーンはすくに目詰まりし。 その材１１　ｉ；ＩそれＪソ後の処理および検査を行わ
なかった。）！似過しない月１′・１（月照）および１
４メソシユと６０ツノシユスクリーンで）１Ｇ過した材
料を室温で一晩保／話し、その後１７，０００　ｇでの
遠心により（Ｉ−ンプルを濃縮し最終濃度が約６５＋ｍ
ｇ／ｍｌ．となるように０．０２Ｍ　Ｎａ２１１Ｐ０４
．０．１：ＩＭ　Ｎａ０１．　ｐＨ７，４に再）跡濁し
た。各々の゛す゛ンプルを１．２５ｃｃシリンダーに入
れ。 押出し速度約３０ｍｍ／ｍｉｎで３０ゲージの針の中を
押出した。押出しプラト−圧力、および押出し中に見ら
れろ詰Ａ：りと洩れの程度を調−１ろために押出しのｊ
尚程を■；１−視し人―。 材料を一定速度で旧をｉ！ｒｌ　シて押出ずのＱこ必要
オｉ′プラト−の、即ら定常の圧力として押出し２圧力
を測定した。シリンクーに加えられた力り、ｌ：　、圧
力変換器Ｑこより測定Ｕ７た。前記の表１の第２憫に示
され、ニュー１ン（Ｎ）で表されている＋　ＩＩらＪ′
ｊたデータは１機械的剪断１特に６０メソシブ、スクリ
ーンを繰り返し通過さ−Ｕるごとによる剪１すｉば、押
出し圧力を濾過しない材料に比へて５０％以上も〃４を
少さセることかできることを示している。 表１ 詰まりは押出し操作中に観察された６ＯＮｌす＋の一時
的な圧力のピークとして測定した。洩れＣ１１シリンダ
ーと釧の間の接続部からの祠Ｈの漏出として検出した。 表１のデータは（合計の押出し体積３〜４ｍ７！につい
て測定した）詰まりと洩れが６０メツシユスクリーンに
何回も通した材ｔ１においてかなり減少したことを示し
ている。 丈」ヒ側−４− ンに速−ｑ効果 再形成した′：１ラーケン繊糾繊維Ｊ、ｉ’！ｉ’ｉ？
＆　（３ｍｇ／ｍ　ｅ　。 ２８、１７間でｎＴ影形成を調製し１材料４（１０ｍｐ
のリーンプルを実施例３の゛）Ｊυ過システム中の容器
に加えた。 フィルターセ／１・に６０メツシフ、のワイヤースクリ
ーンを装着ｊｏ７た。ペリスタルチックポンプは、ポン
プ作動時間を＋」料か約６０回スクリーンをｊｍ過する
ように合わせ−るために、下記の表２の左に示しである
４種の異なるポンプ速度の１って操作した。 対照サンプル（濾過なし）と４種の機械的剪断サンプル
の各々を−１１（θ保温し、遠心により凝縮し２そして
最１．冬ン麿度か吊り６５■７ｍｅ古なるように再懸／
罰した。押出しのプラＩ・−圧力、そしてサンプルを２
７す゛−シ針を１ｌｌｌシて押出した時に起こる詰まり
と洩れの回数を実施例３に述べられた操作に従って調べ
た。結果を下記の表２１こ示ず。 表２ ３／／ｍｉｎの流速で、システム中の熱の蓄積によりコ
ラーゲンタンパクが変性し、その材料についてはそれ以
後の処理および検査を行わなかった。 ５ｐ／ｍｉｎで行われた機械的剪断は、比較的高いゲラ
１−−圧力と、６または７７！／ｍｉｎで処理されたり
一ンブルで見られるよりも多い詰まりと洩れの回数から
明らかなように準最適であった。 犬岸例ｊ 契り１１時−ｎｉ］μ迩呆 実施例２からの再形成コラーゲン繊維懸濁液のサンプル
（３■／ｍρ、２時間で山形成）を、循環回数の選択の
ために第１図のシステムで６０メソシユのスクリーンを
ｊｍ過させて循環させた。 最初に、材料の４００ｍＡ４Ｊンプルを４秒（１回）も
しくは５分（７５回）間循環させ、その後−晩保温し、
遠心により凝縮し最終濃度が約６５■７ｍＡとなるよう
に再）巨澗した。２種のサンプルと対照（濾過していな
い）サンプルを３０リー−ジの針を通して押出し、そし
てプラトー圧力および詰まりと洩れの回数を実施例３の
よ・うに決定した。下記の表３に示Ｕ７た結果は、詰ま
りを減少させ、押出し圧力の最大の減少を得るためには
、材料をメツシュスクリーンに何回も１Ｉｉｌｌ過させ
ることか必要であることを示している。 表３ ６０メソシユスクリーンを１ｆｆｉＬでのさらに多くの
循環の効果を、実質的に同様な実験条件において調べた
。各々４００ｍＡずつの５つのサンプルを６０メツシユ
スクリーンをｊ１１シて、６７！／ｍｉｎの流速で下記
の表４の左の欄に示されている回転故に対応して時間間
隔をｌｌ／ｌ加さ−ｌて循環させた。材料はその後−晩
保温し、遠心により濃縮し、−１−記と同様に最終汐舅
度が約６５■／ｍβとなるように再）ひ、濁した。 ５つの４Ｊンプルと幻１１＜（＜濾過していない）サン
プ３フ ルを３０ゲージの針をｊｍシて押出し３表４の右に示し
であるよ・うなプラト−押出し圧力か得られた。 表４ このデータは、流速約５１２／ｍｉｎで６０メツシユス
クリーンを用い材料を約６０から１）３０回の間で循環
させることにより１機械的濾過操作における最も良いｆ
ｒ効性が生み出され、これ以１−の循環回数は非常に高
い押出しプラト−圧力を起こすことを示している。 丈−施例−０− 機越剪断斯−ｍ　ｎ１Ｈ−？ｉ　ｃζ山」４−不１畿１
（Ｌ免−保−墨一時−間の一効果実施例１からの二１ラ
ーケン繊維懸濁液を最終タンパク法度か約３ｍｇ／ｍρ
となるように調製した。 この＋Ｈ：ｌを２（つのリンプルＣ；二分Ｉｔ　、次の
、ｌ、うに処理した・最初の３、ｌ　ＩＭ＜　（Ｃｏｎ
　１）リンプルζ、１実施例２０）１％Ｘ１’＋にｉＩ
（って２時間の１１百［シ成の後ｊセ心１−２３−での
後ｊ重心Ｑこ、ト　シつ　ン’＝　Ｋ１１ｉ　１ｙ　−
（最＜４．？Ｍ　ｌｉかＮ、勺６５＋ｃ／ｍｌ！　　と
　２．Ｈろ、１、）に山゛１）、＋！：’！　ｌ／人−
０２番＋−’Ｉの文・ｌ１１、＜＋　（［：１ｌ１１　
２）リンプル＋３１：、　’１−１１形成の条イ！ｌ　
Ｆ：て２，１時間（、ｑＨ温し、その後１記と同（毛ａ
ｄ＝し−（遠心り、　Ｎ＞懸濁し７た。実施例３と同様
に１−７で測定１−２た３０ゲージの１１を１ｉＴｉＬ
、ての押出しでの押出Ｕ７プー］１、−圧力を表５の右
側に示す。 このデータＧ：１．再形成時間そわ自体は小繊維状）Ａ
１′−１の押出し圧力に副大きく影響しないことを示し
ている。 表５で３・〜６と示された。さらに４つの４ｊンプルば
、実施例３に従った再形成媒質中での２時間の保温の後
に各々を）虜過した。そのサンプル（各７００ｍ　７！
　）　Ｉ＝：Ｌ？ＡＬ速７ｆｆ／ｍｉｎでそれそわお才
９まかに５０または７５回転に相当する５または７，５
つ１間、６０メノシ１．スクリーンをｌｆｉシて濾過し
た。サンプル３と４６；１痘過後たたらに遠心し、各々
につい°（最１６？農度が約６５１ｍｇ／ｍｌとなるよ
うにｉＩ７　Ｑ、　？Ｆｆ５した。→ｊ゛ンプル５と６
む１表５に示すように；虜過後−晩保温し。 その後遠心により濃縮し、−リーンプル３と４とほぼ同
Ｕ７濃度に再ｊ脈ｐ）；ｉ　シた。４つの→ノーンプル
を個々に３０ゲージの↑１を通して押し出すことにより
表に示されている押出しプラト−圧力を得た。その結果
は、濾過後の保温により押出し圧力をさらに減少さ−ｌ
ることを実証している。 表５で７．８と示されたＲ　ｉｌｚのサンプルは、７ｐ
／ｍｉｎで６０メツシブ、スクリーンで５分間（５０回
）の機械的濾過をする簡に再形成媒質中で２４時間保温
した。その）慮過４Ａ！４：Ｉは、ただｒ）に遠心して
適当な押出し緩衝液に再懸濁する（サンプル７）か。 または遠心と押出し溶液へのＭ　ｊｊ４濁の前に一晩保
温する（サンプル８）かした。２一つの４３′ンプルを
次に表に示す押出しプラ］・−圧力で３０ゲージの針を
通して押出した。その結果は第１に５機械的剪断はわず
か２時間で再形成した材料に比べ２４時間で再形成した
材料における押出し圧力を減少さセることに対して実質
的に効果が少ないこと、第２にもっと長い再形成時間を
用いれば２）虜過に続いての−晩の保温ｉ；ｉ押出し圧
力に対し７て実質的に効果かない、ことを示している。 表５ 実遣−例−１− 濾過−−１１−架栖材料のｉ、’ｉ−ｊ；ｌ六鷹維−ｑ
）−太き−を実施例２からのｉＴｊ形成コラーゲン繊維
懸濁液を約６０回の総体積（１ｉ’！　Ｅｆに相当する
時間、６０メツシフ。 スクリーンを１一シて７ｌ２／ｍｉｎの流速で循環さ廿
た。 ｆｉｔ過した祠Ｐ１をさらに一晩保温し、遠心により；
索縮し、最終タンパク濃度が約６５■７ｍｐとなるよう
に０．０２Ｍ　Ｎａｚｌｌｔ’０４．　０．１３Ｍ　Ｎ
ａＣｌ、　ｐＨ７，４に再懸、ン罰した。）虜過しない
材料は、濾過段階を除くことのほかは同一の条件におい
て調製した。 濾過済）■（１および未濾過材料の繊維の大きさを測定
するために、材料の少量のサンプルを２枚の顕微鏡のス
ライｌの間に置き、地質学士の大きさを決める図表から
の大きさの標で１１．物と比較して。 サンプルの粒子の大きさを解剖鏡を用いて評価した。濾
過した粒子の大きさは６２ミクロンと１２５ミクロンの
間であった：濾過していない粒子の大きさは６２〜３５
０ミクロンの間であった。 濾過済４）−ンプルおよび未濾過サンプルの粘性は。 ２０℃の定温において１０−６から１　／ｓｅｃまでの
いろいろな剪断速度で測定した。粘性測定ばＣｏｕｅｌ
：ｔｅナセル取りつしＪたＣｏｎｔｒａｖｅｓ−Ｐｈｅ
ｏｍａｔモデル１３５粘性測定器（Ｃｏｎｔｒａｖｅｓ
　ＡＧ、　Ｚｏｒｉｃｈ、　Ｓｗｉ　ｔｚ＋ｑｒｌａｎ
ｄ）を用いて行った。涯過済材料（△）および未濾過材
料（○）の粘性対剪断速度の図を第２図に示す。 見てわかるように９両方の材料は剪断粘性（η）の対数
と剪断速度（７）の対数とが直線関係となる。各粘性測
定点で、濾過済材料の粘性は未濾過４４　本１のそれと
比・・、て１、勺２ｊ３％１民かった。 実施例８ 濾過７剤−非−架橋４４１Ｎの宏フｉテ性各々実施例７
（１））Ｊ、）にして、ｊｌｉ；Ｉ製した３　Ｉｔの挿
入材料を５℃で最高１２　’ｙ’月までのＩＵ１間ｆ１
！存した。０．５゜］、　２．３．４．　］０および１
２ケ月の保存１す１間て実施例３の手順に実質的に従っ
てイ、１月押出し能についてイＡ料を検査した。第４図
に示す結果Ｃ３１，最初の故ケ月間ｔｉｔ押出し力か徐
々に増加し、その後約３０と４ＯＮの間で力か一定とな
ることを示している。 実施−例−０ 〃喧υ−架椙」小人）Ａ料の言ｌｌ製 実施例１からのコラーゲン懸？ｒ：Ｊ液を実施例２に従
って２時間で再形成し、７７！／ｍｉｎの流速で約６０
回循環Ｑ、二相当するＩＩ；！ｉ間で６０メツシフ−の
ワイヤースクリーンを１ｉｉｉして循環させろ、−とに
より機械的濾過を行った。約１’（ｍ＋？／ｍ、Ａの濃
度の再形成済・機械的＞Ｉ＝過ン斉′：１ラーリ゛ン）
認、’ｌＩ２？（９，１６５ｍ　７！に０．０７５％グ
ｌレタルアルテヒ１ン容７夜Ｔｌｌ＋３を１８．３ｍ　
７７ヲカ１１エノこ。 タルタルアルデヒ１ン容液は、最終濃度が０．００７５
％、１３ となろように攪拌しなから徐々に加えた。１〔１時間の
反応回間後、架橋されたコラーゲンを０．０２ＭＮａｚ
Ｐｆ’１４，０．］３Ｍ　ＮａＣ１，ｐＨ７，４の緩衝
液約］００ｍ４で３１ｉす洗値し、各洗浄の間に１７，
０００　Ｘ　ｇで５〜７分間遠心した。 Ｉ長後の洗浄と遠心の後タンパク濃度か約３５■／ｍＡ
となるよう乙、ニコラーゲンを−１−記の緩衝液で山）
課濁し、その懸濁液を２７ゲーシの斜を取りつけたシリ
ンダーに入れた。機械的濾過段階を行わずに他シ３１″
実質的に同様な方法で調製した対照の＜　ｉＪａ、過し
ていない）架橋済のコラ−ケン）懸濁液が約１５Ｎのプ
ラト一力を示すのに比べ、ごの材料ｉ；Ｉ：　、ｔｌを
通して押出した時に約６Ｎのゲラ１ヘーカを示した。 実施例１０ ′ｉＥ斂ｊ閂−架＋、ｉ　４；ｔ　ｌ−ｉの一ネ′１１
１髪者繊紐の犬きζ実施例９からの）Ｉ朽昌−架橋材料
と、濾過を除いて同様に調製した未濾過−架橋手利″１
を実施例７と同様に地質学の図表の標準物と比較するこ
とにより繊フ１Ｆの大きさについて調べた。；慮過済の
１Ａ判は約８８と１２５ミクＩ′：λンの間の範囲の繊
維の大きさであり、末！ＩＵ　ｉ！旧Ａ籾Ｉｔ約）（８
と７ｌ０ミクロンの間であった。 濾過済と未）虜過の４トンプルの粘性を３実施例７と同
様心、ニして剪断速度をｌ　Ｏ−’＝から１０２／秒の
範囲で測定した。）虜過済利４′１（△）と未濾過飼料
（○）の粘性対剪断速度の図を第３図に示す。実施例７
て観察された結果に類似して１両方の）Ａ「１は剪断粘
性の月数と剪１すｉ連瓜の対数とが直線関係を示Ｕ７た
。粘４ノＦ測定の各点で濾過済の材料の粘性は未ｌ！υ
過の祠Ｈのそれに什べ約５０％少なかった。 実施−例上１ Ｍｊ」−架＋６材−利β）ｙ定性 数組の濾過−架橋祠１′１を実施例１０のように調製し
、未濾過−架橋＋Ａ月も濾過段階のみを除き同様にして
調製した。その４７ｌ月を４℃または３５℃で層高８週
間まで保存した。０．ｌ、２．４．　と８週間の時点で
多数のサンプルを両方の保存温度において２７ゲーシの
針を１ｆｆｌＬで押出し能を調べた。押出しプラトー力
圧力と詰まりの回数を決定した。 この試、験で観察された濾過済材料の平均押出し力は７
．４　（ｌｊ：０．８）Ｎであり、−回の押出しにおけ
る平均の詰まり回数は０．２（±０．３）であった。Ｂ
ａ間の試験期間に渡って、押出し能に大きな変化は見ら
れず、また４℃と３５℃とで大きな違いも見られなかっ
た。未濾過材料でＩＡ平均の押出し力し、目７．８（±
４．６）Ｎで７押出し可能の゛す°ンプルについて。 平均７　（−１＝３）回の詰まりが見られた。期間また
は２９の保存〃１度の間で、大きな変化は見られなかっ
た。 本発明の望ましい具体例を述べてきたが、いろいろな変
更や修正を本発明から離れることなく行うことができる
ことば明らかである。特に２機械的剪断による再形成繊
維状材料の処理について強固メツシュスクリーンを通し
ての繊維の濾過を特定の参照としてｊホベてきたが、こ
こでｊｉｌ＜べた、繊維の大きさを変える所望の効果を
生み出すのに効果的な他の機械的剪断方法も本発明を実
施する場合に用いられることも良いであろ・）。 （要約） 再形成され機械的に剪断された分解ペプチドコラーケン
繊ぶ１１かＣりへろ注入可能な二１ラーゲン＋４　：ｌ
′１てあっ−（、該Ｈｆｉｌ　Ｌ；ｌ：　ｉｌｒ形成さ
れた一１ラーノ１ン繊維を、１分繊糾すイスを低ドさ一
１↓、リイスを不均一・化する：Ｊ：て、縁り返し硬い
メツソーｌ−ツクリーンを通ず、二とに、１．２）調ツ
′ｊされろ。この］幾城的に的Ｉすｉされた繊維は挿入
′ｌ冒′Ｉを改苦するためにさり、に架橋されるてあろ
う。 ４、−−図１０ｉΩ簡１１λ４′説明 第１しＩ　ｉｌｌ：　、本発明の方法に従って再形成さ
求１゜機械的にＯｑ断された］Ｉラーリ°ン繊維の４ト
成装置を。 ある程度１１！１１１１１）的に示す図である。第２図
および第３図し；１架橋されていない（第２図）あるい
は架橋されカニ（第３［メ１）リボ１１．１７された（
△）および剪１！Ｊｉされていない（Ｏ）１ラーゲン繊
糾）７（料についての剪１ｊＪｉ速度に幻゛づろ：ｌ′
＋’ｉ度のプロ・）１−で沙）る。第４Ｍは３．ＴＩの
剪断され架橋されていない挿入４．ｔ　１ζ゛ｌサンプ
ルについて、押出し力を１２ケ月間に渡る保存１す１間
の関数としてゾｒ＋　ソトしたものである。第５図は剪
断されていない（八）もしくＬ：１、剪断された（Ｒ）
架橋コラーゲンを注射器から叩出すのに要するカフ を示す。 Ｉ≧２　、、Ｉ−

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、再形成され機械的に剪断された分解ペプチドコラー
   ゲン繊維より成る注入可能なコラーゲン材料。 ２、前記繊維の名目の大きさが約２００ミクロンより小
   さい特許請求の範囲第１項に記載の材料。 ３、前記繊維が約５０〜１５０ミクロンのサイズの範囲
   にある特許請求の範囲第２項に記載の材料。 ４、２０℃で剪断速度が１０＾−＾６〜１０＾−＾２／
   秒の範囲で、そしてタンパク濃度か約６５ｍｇ／ｍｌで
   測定した粘度が、同一条件下で測定した剪断されていな
   い材料の粘度より約２０〜３０％低い特許請求の範囲第
   １項に記載の材料。 ５、機械的に剪断された前記繊維を、小繊維内架橋を優
   先的に生ずる条件下で架橋することにより生ずる特許請
   求の範囲第１項に記載の材料。 ６、約３５ｍｇ／ｍｌの濃度、２０℃で１０＾−＾６〜
   １０＾−＾２／秒の剪断速度範囲で測定した粘度が、同
   一条件下で測定した剪断しない架橋材料の粘度より約４
   ０〜６０％低い特許請求の範囲第５項に記載の材料。 ７、前記繊維が、最大繊維のサイズの１／２以下になる
   条件下で金属メッシュスクリーンを繰返し通すことによ
   り、機械的に剪断される特許請求の範囲第１項に記載の
   材料。 ８、繊維サイズが約５０〜１５０ミクロンの再形成され
   、架橋されていない、機械的に剪断された分解ペプチド
   コラーゲン繊維からなる注入可能なコラーゲン材料。 ９、約２０〜８０ｍｇ／ｍｌの濃度でｐＨ６〜８の実質
   的に等張な媒質に含まれている特許請求の範囲第８項に
   記載の材料。 １０、繊維サイズか約５０〜２００ミクロンの再形成さ
   れ、架橋され、機械的に剪断された分解ペプチドコラー
   ゲン繊維から成る注入可能なコラーゲン材料。 １１、約１５〜７０ｍｇ／ｍｌの濃度でｐＨ６〜８の実
   質的に等張な媒質に含まれている特許請求の範囲第１０
   項に記載の材料。 １２、前記繊維が実質的に小繊維内架橋を含む特許請求
   の範囲第１０項に記載の材料。 １３、再形成された分解ペプチドコラーゲン繊維を供給
   すること、および繊維サイズを実質的に短くしサイズが
   不均一になる迄該繊維を機械的に剪断すること、を包含
   するコラーゲン挿入材料を調製する方法。 １４、前記供給が、分解ペプチドコラーゲン繊維の懸濁
   液をｐＨ６〜８、温度約１０℃〜２５℃で約１〜８時間
   高張液で再形成すること、を含む特許請求の範囲第１３
   項に記載の方法。 １５、前記剪断が、前記再形成繊維を選択されたサイズ
   の硬いメッシュスクリーンを多数回通過させることを含
   む特許請求の範囲第１３項に記載の方法。 １６、前記スクリーンが約２００〜３００ミクロンのメ
   ッシュサイズを有する特許請求の範囲第１５項に記載の
   方法。 １７、前記スクリーンが６０メッシュス（２５０ミクロ
   ン）の金属スクリーンである特許請求の範囲第１６項に
   記載の方法。 １８、前記繊維が約５〜７ｌ／分の流速で前記メッシュ
   を通過する特許請求の範囲第１６項に記載の方法。 １９、前記繊維が約５０〜２００回メッシュを通過する
   特許請求の範囲第１６項に記載の方法。 ２０、前記通過が繊維のサイズを約２００ミクロンより
   下に下げるのに効果的な特許請求の範囲第１５項に記載
   の方法。 ２１、前記通過が繊維のサイズを約１５０ミクロンより
   下に下げるのに効果的な特許請求の範囲第２０項に記載
   の方法。 ２２、剪断された前記繊維を更に６〜２４時間保温する
   ことを更に含む特許請求の範囲第１３項に記載の方法。 ２３、前記剪断が、タンパク濃度６５ｍｇ／ｍｌ、剪断
   速度１０＾−＾６〜１０＾−＾２／秒、２０℃で測定し
   た剪断され保温された材料の粘度を剪断されていない保
   温材料の粘度の約２０〜３０％低下させるのに有効な特
   許請求の範囲第２２項に記載の方法。 ２４、剪断され保温された前記繊維を遠心分離により濃
   縮すること、および該繊維を人間の患者へ注入するのに
   適した媒質へ再懸濁することを更に含む特許請求の範囲
   第２２項に記載の方法。 ２５、前記繊維がタンパク濃度約４０〜８０ｍｇ／ｍｌ
   、ｐＨ６〜８の実質的に等張な媒質に再懸濁される特許
   請求の範囲第２４項に記載の方法。 ２６、前記剪断繊維を架橋剤と反応させることを更に含
   む特許請求の範囲第１３項に記載の方法。 ２７、前記繊維を繊維濃度約０１．〜１０ｍｇ／ｍｌ、
   架橋剤濃度約０．００１〜０．１％で架橋剤と反応させ
   、実質的に小繊維内の架橋を生ずる特許請求の範囲第２
   ６項に記載の方法。 ２８、前記剪断が、タンパク濃度約３５ｍｇ／ｍｌ、剪
   断速度１０＾−＾６〜１０＾−＾２／秒、２０℃で測定
   した剪断され架橋された材料の粘度を剪断されていない
   架橋材料に関し約４０〜６０％低下させるのに有効な特
   許請求の範囲第２７項に記載の方法。 ２９、前記剪断され架橋された繊維を遠心分離により濃
   縮すること、および該繊維を人間の患者へ注入するのに
   適した媒質へ再懸濁することを更に含む特許請求の範囲
   第２７項に記載の方法。 ３０、前記繊維がタンパク濃度１５〜７０ｍｇ／ｍｌで
   ｐＨ６〜８の実質的に等張な媒質に再懸濁される特許請
   求の範囲第２９項に記載の方法。