JPS61231996A - グアニジノ酢酸分解酵素の安定化法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、腎臓機能あるいは尿毒症等の診断指標となる
グアニジノ酢酸の定量等に用いられるグアニジノ酢酸分
解酵素の安定化法に関する。

従来の技術 従来、グアニジノ酢酸分解酵素を安定させる手段につい
ては知られていない。

発明が解決しようとする問題点 グアニジノ酢酸分解酵素は、グアニジノ酢酸を尿素とグ
リシンとに分解する作用を有する酵素で、該酵素は尿又
は血液等のグアニジノ酢酸含有試料中のグアニジノ酢酸
の定量分析に適応することが出来、このグアニジノ酢酸
含有値を臨床的に応用すれば、腎臓障害や尿毒症等の診
断を効率良く行うことが出来る。

しかしながら、その際問題となる点は、該グアニジノ酢
酸分解酵素自体が極めて不安定で保存中に酵素活性が急
速に低下することである。

かくして、腎臓機能あるいは尿毒症等の臨床診断分野に
於いて極めて有用なグアニジ／酢酸分解酵素を長期間の
保存に係わらず酵素活性を実質的に低下させない該酵素
の安定化手段の開発が、業界では強く要望されている。

問題点を解決するための手段 そこで本発明者等は、この問題点を解消する為、鋭意検
討を重ねた結果、グアニジノ酢酸分解酵素含有液に、糖
類、重金属塩、アルカリ金属塩、アミノ酸類、グアニジ
／化合物及び有機酸塩からなる群より選ばれた少なくと
も１種のものを添加するか、又はさらにこれを乾燥すれ
ば、上記添加物を加えない場合に比較して著しく酵素活
性が安定化すること、殊に長期間の保存に著しく安定で
あることを知り、本発明を完成した。

即ち、本発明はグアニジノ酢酸分解酵素含有液に、糖類
、重金属塩、アルカリ金属塩１アミノ酸類、グアニジノ
化合物及び有機酸塩からなる群より選ばれた少なくとも
１種のものを添加するか、又はさらにこれを乾燥するこ
とよりなるグアニジノ酢酸分解酵素の安定化法である０ 以下、本発明の詳細な説明する０ 先ず、本発明に用いられるグアニジノ酢酸分解酵素とし
ては、微生物、動植物等いずれの起源のものでも良く、
例えばシュードモナス・エスピー（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎ
ａｓ　　ｓｐ、）　ＡＴ　ＣＣ１４６７６（アグリカル
チュラル・アンド・バイオロジカル・ケミストリー４１
巻、９５９頁、１９７７年）、コリネバクテリウム（Ｃ
ａｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）　ｓｐ、　　Ｎ−１９
−１、アースロバフタ−（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）
　　ｓｐ、Ｎ−１２−１等が具体例として挙げられる。

そして、上記のコリネバクテリウム　Ｓｐ、　Ｎ　−１
９−１及びアースロバフタ−ｓｐ、Ｎ−１２−１は、い
ずれも本発明者等が千葉県内の土壌中より新たに検索し
て得た菌株で、それぞれの菌学的性質は以下に示す通り
である。

なお菌学的性質は概ねマニュアル・オブ・マイクロバイ
オロジカル・メソッヅ（１９５９年、マグロ−・ヒル・
ブック・カンパニー社出版）記載の方法に準拠した。

コリネバクテリウム　ｓｐ、Ｎ−１９−１の菌学的性質 ａ、形態的性質 顕微鏡的観察（肉汁寒天培地上で３０’Ｃ，６〜４８時
間培養） （１）細胞の形及び大きさ： １）長時間の培養（２４〜４８時間）では球菌または卵
形ないしはこん棒状の短桿菌で端は丸く、単独または二
連をなしており、太きさは０．８〜１．２Ｘ１〜３ミク
ロンである０２）短時間の培養（６〜１６時間）では直
状、こん棒状、突起様または湾曲した桿菌もしくは短桿
菌で端は丸く単独または二連をなしており、大きさは０
．７〜ＩＸ１．５〜６．５ミクロンである。

（２）運動性の有無：無し。

（３）胞子の有無：無し。

（４）ダラム染色性：陽性。

（５）抗酸性：陰性。

ｂ、各培地における生育状態 （１）肉汁寒天平板培養 ３０’Ｃ，４８時間の培養で直径１〜２■の円形コロニ
ー０表面は平滑でやや隆起をなし、金縁状で黄色を呈し
光沢がある０ （２）肉汁寒天斜面培養 ３０″Ｃ１４８時間の培養で糸状にバター質の生育を示
す。表面は平滑で色沢は淡黄色を呈し、光沢がある。

（３）肉汁液体培養 ３０°Ｃ１４８時間の静置培養でわずかに濁り）沈渣（
ｓｅｄｉｍｅｎｔ）を生成する。

（４）肉汁ゼラチン穿刺培養 ２０°Ｃ１４２日間の静置培養で、ゆっくりとゼラチン
を液化する。

（５）リドマスミルク培養 ３０°Ｃ１１４日間の静置培養で、やや培地はアルカリ
性となり為リドマスミルクは液化するが凝固しない。

Ｃ０生理的性質 （１）硝酸塩の還元：還元する。

（２）脱窒反応：無し。

（３）ＭＲテスト：陰性。

（４）ＶＰテスト：陰性。

（５）インドールの生成：生成しない。

（６）流化水素の生成：弱いながら生成する。

（７）デンプンの加水分解：分解しない。

（８）クエン酸の利用：利用する（Ｃｂ、ｒｉｓｔｅｎ
ｓｅｎの培地使用）。

（９）無機窒素源の利用：利用する（硝酸塩及びアンモ
ニウム塩）０ （ｌＯ）色素の生成：生成しない。

（］１）ウレアーゼ：陽性。

（１２）オキシダーゼ：陰性。

（１３）カタラーゼ：＠性。

（１４）生育の範囲： 温度：１５〜３６°Ｃ ＰＨ：６〜９．５ （１５）酸素に対する態度：好気性。

（１６）Ｏ〜Ｆテスト　（Ｈｕｇｈ　　Ｌｅｉｆｓｏｎ
法）：陰性。

（１７）糖類からの酸およびガスの生成：Ｌ−アラビノ
ース、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコース、Ｄ−マンノー
ス、Ｄ−７ラクトース、Ｄ−ガラクトース１麦芽糖、シ
目糖為乳糖、トレハロース、Ｄ−ソルビット、Ｄ−マン
ニット１イアジツト、グリセリン、デンプン等の何れか
らも酸生成およびガス生成は認められない。

その他セルロースの分解能は認められない。

上記した菌学的性質を有するコリネバクテリウムＳｐ、
Ｎ−１９−１の分類学上の位置について、バーヂーズ・
マニュアル・オプ・デタミネイティブ・バタテリオロジ
イ第７版（１９５７年）および第８版（１９７４年）の
分類と対比検討した結果、本菌株は生活環にともなう多
形性が認められること、ダラム染色は陽性で陰性になる
ことがないこと、また無胞子桿菌で通常栄養培地に生育
すること、５０℃以上で生育出来ないため耐熱性を有さ
ないこと、そして好気性でカタラーゼ陽性を示すこと）
セルロース分解能を有さないこと等よりコリネバクテリ
ウム属に属するものと判定される。

さらに本菌株の分離源が動物質由来のものでないこと、
運動性がないこと、また硝酸塩を還元すること、および
ゼラチンを液化することから本菌株はコリネバクテリウ
ム・ラサイ　（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅ−ｒｉｕｍ　ｒ
ａｔｈｙｉ）に近縁な菌株と認められるが、本菌株は土
壌中より分離した菌であり、植物性病原菌でなく、シか
もグルコース、ショ糖、乳糖がら酸を生成しないこと、
またゼラチンを強く液化すること為クエン酸を利用する
こと、およびウレアーゼを生成することよりコリネバク
テリウム・ラサイとは異なる菌であることより、コリネ
バクテリウム属に属する新菌種の菌と判定される。

なお上記コリネバクテリウム　ｓｐ、Ｎ−１９−１は工
業技術院微生物工業技術研究所に微工研条寄第５０６号
（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−５０６）として寄託されている。

アースロバフタ−ｓｐ、Ｎ−１２−１の菌学的性質ａ、
形態的性質 顕微鏡的観察（肉汁寒天培地上で３０°Ｃ％　６〜４８
時間培養） （１）細胞の形及び大きさ： １）長時間の培養（２４〜４８時間）では球菌ないし短
桿菌で端は丸く、単独または二連をなしており、大きさ
は０．６〜ＩＸ０．８〜２．５ミクロンである。

２）短時間の培養（６〜１６時間）では直状または湾曲
した桿菌ないしは短桿菌で、端は丸く、単独または二連
をなしており、大きさは０．６〜０．８Ｘ１．５〜５．
５ミクロンである。

（２）運動性の有無：側鞭毛（１本）を有し、運動性あ
り。

（３）胞子の有無：無し。

（４）ダラム染色性：陽性であるが培養時間により陰性
を示すことがある。

（５）抗酸性：陰性。

ｂ、各培地における生育状態 （１）肉汁寒天平板培養 ３０″０１４８時間の培養で直径１〜１．５ｍｍの円形
コロニー０表面は平滑で隆起をなし、全縁状で淡黄色を
呈し光沢がある。

（２）肉汁寒天斜面培養 ３０’Ｃ，４８時間の培養で糸状にパター質の生育を示
す。表面は平滑で色沢は淡黄色を呈し光沢がある。

（３）肉汁液体培養 ３０°Ｃ１４８時間の静置培養でわずかに濁り、沈渣（
ｓｅｄｉｍｅｎｔ）を生成する。

（４）肉汁ゼラチン穿刺培養 ２０”Ｃ，４２日間の静置培養で、ゆっくりとゼラチン
を液化する。

（５）リドマスミルク培養 ３０℃、１４日間の静置培養で、やや培地はアルカリ性
となりリドマスミルクは液化するが凝固しない。

Ｃ１生理的性質 （１）硝酸塩の還元：還元しない０ （２）脱窒反応：無し。

（３）ＭＲテスト：陰性０ （４）ＶＰテスト：陰性。

（５）インドールの生成：生成しない０（６）流化水素
の生成：生成しない。

（７）デンプンの加水分解二分解しない０（８）クエン
酸の利用：利用する（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ）　の培
地使用）０ （９）無機窒素源の利用：利用する（硝酸塩及びアンモ
ニウム塩）。

（１０）色素の生成：生成しない。

（１１）ウレアーゼ：陽性。

（１ｚ）オキシダーゼ：陰性。

（１３）カタラーゼ：＠性０ （１４）生育の範囲： 温度：１５〜３６°Ｃ ｐＨ：６〜９．３ （１５）酸素に対する態度：好気性０ （１６）０〜Ｆテスト（Ｈｕｇｈ　Ｌｅｉｆｓｏｎ法）
：陰性つ（１７）糖類からの酸およびガスの生成：Ｄ−
キシロース、Ｄ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｄ−７
ラクトース、Ｄ−ガラクトース、麦芽糖、シｌ糖、乳糖
、トレハロース、Ｄ−７ルヒ・ント、Ｄ−マンニ・ント
１イノシント、グリセリン、デンプン等の何れからも酸
生成およびガス生成は認められない。またＬ−アラビノ
ースから酸を生成するが、ガス生成は認められない。そ
の他セルロースの分解能は認められない。

上記した菌学的性質を有するアースロバフタ−ｓｐ、Ｎ
−１２−１の分類学上の位置について、バーヂーズ・マ
ニュアル・オブ・デタミネイティブ・バクテリオロジイ
第７版（１９５７年）および第８版（１９７４年）の分
類と対比検討した結果、本菌株は生活環にともなう多形
性が認められること、ダラム染色は陽性であるが培養時
間により陰性を示すこと、運動性（側鞭毛１本）を有す
ること、またグルコースから酸を生成しないこと、カタ
ラーゼ陽性で好気性を示し通常栄養培地に生育すること
、さらにセルロース分解能を有さないこと、スキムミル
ク中６３°Ｃ１３０分間処理で死滅すること等よりアー
スロバフタ−属に属するものと判定される。

さらに本菌株を既知のアースロバフタ−属に属する菌と
比較すると、硝酸塩、アンモニウム塩を利用すること、
またゼラチンを液化すること、さらにデンプンを分解し
ないことから本菌株はアースロバフタ−・シムブレック
ス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｓｉｍｐｌｅｘ　）に近
縁な菌株と認められるが、本菌株は硝酸塩を還元しない
こと１およびウレアーゼを生成することよりアースロバ
フタ−・シムプレックスとは異なる菌でアースロバフタ
−属に属する新菌種の菌であると判定される。

なお上記アースロバフタ−ｓｐ、Ｎ−１２−１は工業技
術院微生物工業技術研究所に微工研条寄第５０５号（Ｆ
ＥＲＭ　　ＢＰ−５０５）として寄託されている。

次に本発明に使用する上記菌株を用いてグアニジノ酢酸
分解酵素を生産するには、通常の固体培養法でもよいが
、液体培養法を採用することが好ましい。そして生産培
地としては、例えば酵母エキス、ペプトン、肉エキス、
コーンスチープリカー、大豆、小麦麹の浸出液、硫安、
硝酸アンモニウム等の１種以上の有機もしくは無機の窒
素源に硫酸マンガン、塩化マンガン、硫酸マグネシウム
、塩化マグネシウム、硫酸第一鉄、硫酸第二鉄、燐酸塩
等の無機塩類の１種以上を加え、必要により炭素源例え
６ば糖類、ビタミン等を適宜添加したものが用いられる
。さらに上記培地に、グアニジノ酢酸を、培地総量に対
し０．０１％（Ｗ／Ｖ）以上、好ましくは０．０２〜１
．０％　（Ｗ／Ｖ）程度添加すれば、グアニジノ酢酸分
解酵素の収率向上に有効である。

上記の如く調製した液体培地を用いてグアニジノ酢酸分
解酵素を生産するには、通気攪拌深部培養又は振盪培養
等により好気的に培養することが好ましい。その際、培
地の初発ＰＨを４．５〜９．０程度に調製し、２５〜３
７°Ｃ好ましくは３０°Ｃ前後の温度で１０時間以上培
養する。培養終了後、培養物からグアニジノ酢酸分解酵
素を採取するには、通常の酵素採取手段を用いることが
できる。

しかしこの酵素は、主に菌体内に存在する酵素であるた
め、培養物から例えば濾過、遠心分離等の操作により菌
体を分離し、この菌体からグアニジノ酢酸分解酵素を採
取することが好ましい。この場合、菌体をそのまま用い
ることもできるが、超音波破壊機、フレンチプレス、ダ
イナミル等の種々の破壊手段を用いて菌体を破壊し、あ
るいはりゾチームのごとき細胞壁溶解酵素を用いて菌体
細胞壁を溶解したのち、使用することが好ましい。

次いで菌体自体又はこれを破壊したもの、あるいは細胞
壁を溶解したものを、水、緩衝液又は適当な溶剤で抽出
し、これをそのまま粗酵素液として使用するか、あるい
は抽出液に必要により凍結乾燥法、アルコール沈澱法、
アセトン沈澱法１硫安塩析法等を適宜に施して、粉末状
の粗酵素を得る。これらからさらに精製酵素原品を得る
には、例えばセファデックス、バイオゲル等を用いるゲ
ル濾過法、イオン交換体を用いる吸着溶出法、ポリアク
リルアミドゲルを用いる電気泳動法、ハイドロオキシア
パタイトを用いる吸着溶出法、シ１糖密度勾配遠心法等
の沈降法、アフイニティクロマト法、分子ふるい膜又は
中空糸膜等を用いる分画法等を適宜選択し、これらを単
独にあるいは組合わせて行う。

次にグアニジ／酢酸分解酵素を含有せしめる溶液として
は、水、緩衝液等グアニジノ酢酸分解酵素を失活させな
い溶媒の溶液であれば如何なるものでも使用することが
出来る。

本発明に於いては、グアニジ／酢酸分解酵素含有液に、
糖類、重金属塩、アルカリ金属塩、アミノ酸類、グアニ
ジノ化合物及び有機酸塩から選ばれた少なくとも１種以
上の添加物を、夫々単独に、又は−緒に添加、溶解し、
均一化する。

上記した糖類としては、グルコース、フラクトース、イ
ノシトール、ラクトース、マルトース、サッカロース及
びソルビトール等が挙げられ、重金属塩としては塩化マ
ンガン、塩化カルシウム、硫酸第一鉄、塩化バリウム、
硫酸亜鉛、塩化コバルト等、アルカリ金属塩としては塩
化ナトリウム、塩化カリウム等、アミノ酸類としてはア
ルギニン塩酸塩、グルタミン酸ソーダ、カザミノ酸、グ
ルシン等八グアニジノ化合物としてはグアニジ／塩酸塩
等、有機酸塩としてはクエン酸ソーダ、リンゴ酸ソーダ
等が挙げられる。

そして上記添加物の添加量としては、糖類の場合０．１
〜１０％（Ｗ／ｖ）、重金属塩の場合１〜３０ｍＭ−ア
ルカリ金属塩の場合１〜３０ｍＭ。

アミノ酸類の場合０．１〜１０％（Ｗ／Ｖ）　、グアニ
ジノ化合物の場合０．１〜１０％（Ｗ／Ｖ）、有機酸塩
の場合０．１〜１０％（Ｗ／Ｖ）程度添加するのが好ま
しい。

又上記添加物を添加する際のグアニジノ酢酸分解酵素含
有液のｐＨ値は、グアニジノ酢酸分解酵素の安定なｐＨ
範囲（例えば６〜１０のＰＨ範囲）にあれば良く、前記
溶液のｐＨ調整が必要である場合には適宜な手段により
安定なｐＨ範囲に調整する。

上述した如く１グアニジ／酢酸分解酵素含有液に、糖類
、重金属塩、アルカリ金属塩＼アミノ酸類、グアニジノ
化合物及び有機酸塩からなる群より選ばれた１種以上の
ものを添加すると、安定なグアニジノ酢酸分解酵素含有
溶液が得られるが、さらにこのようにして得たグアニジ
ノ酢酸分解酵素含有液を凍結乾燥、真空乾燥等の通常の
乾燥手段により乾燥すれば、安定化されたグアニジノ酢
酸分解酵素粉末が得られる。

発明の効果 本発明によれば、簡易な操作でグアニジノ酢酸分解酵素
の失活を著しく防止することが出来、腎臓機能あるいは
尿毒症等の診断用酵素剤等とじて極めて有用な酵素剤を
得ることが出来るので、本発明は産業上極めて有意義で
ある。

以下１実施例により本発明を具体的に示す。

実施例 実施例１ グアニジノ酢酸０．５％（Ｗ／Ｖ）、糖蜜ｉ。

％（Ｗ／Ｖ）　、酵母エキス０．５％（Ｗ／Ｖ）、リン
酸１カリウム０．４％（Ｗ／Ｖ）　、硫酸マグネシウム
０．０５％（Ｗ／Ｖ）　、硫酸第１鉄０．００１％（Ｗ
／Ｖ）および水からなる培地（ｐＨ６，０）１０ｍｌを
大型試験管に入れて高圧滅菌したものにフリネバクテリ
ウム　ｓｐ、Ｎ−１９−１（徽工研条寄第５０６号、Ｆ
ＥＲＭＢＰ−５０６）の保存スラントより１白金耳接種
し、３゜°Ｃで２０時間種培養を行った。そしてグアニ
ジノ酢酸０．５％（Ｗ／Ｖ）、糖蜜１０％（Ｗ／Ｖ）、
酵母エキス０．５％（Ｗ／Ｖ）、リン酸１カリウＡ１．
０％（Ｗ／Ｖ）　、硫酸マグネシウム０００５％（Ｗ／
Ｖ）、硫酸第１鉄０．００１％（Ｗ／Ｖ）。

硫酸亜鉛０．０００５％（Ｗ／Ｖ）および水からなる培
地（ｐＨ５，０）２１を攪拌式小型培養装置（いわしや
社製）の培養槽に入れて高圧滅菌したものに、上記種菌
液２０ｍ１を接種し、３０°Ｃで２６時間通気攪拌深部
培養を行った。

このようにして得た培養液を遠心分離して湿潤菌体を集
め、リゾチーム（生化学工業製）０．０２％（Ｗ／Ｖ）
を含有する０　、　０５　Ｍ　ＫＨ２ＰＯ４−ＮａＯＨ
緩衝液（ｐＨ８，０）１０ｔに懸濁した。そして３７℃
で１時間加温して溶菌し、さらにエチレンイミン・ポリ
マー（牛丼化学薬品製）を終濃度が０．００３％（Ｖ／
Ｖ）になるように添加して除核酸を行ったのち、遠心分
離して上清を採取した。

次にその上清を０．３Ｍ塩化カリウムを含有する０　、
　０５　Ｍ　ＫＨ２ＰＯ４−ＮａＯＨ緩衝液（１）Ｉ（
８，０）で平衡化したＤＥＡＥ−セファデックスＡ−５
０の充填されたカラムに通過させ、本酵素を吸着させた
のち、０．３５Ｍ塩化カリウムを含有する前記緩衝液で
カラムを充分洗浄し、０．４Ｍ塩化カリウムを含有する
前記緩衝液を使用して本酵素の活性区分を分取した。得
られた活性区分を蛋白質濃度が１．０％（Ｗ／Ｖ）とな
るように限外濾過膜を用いて濃縮し、０　、０１　Ｍ　
ＫＨｚＰＯａ　−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ７，０）で透析
脱塩した。

上記の如くにして得られたグアニジノ酢酸分解酵素含有
液５ｍｌずつに、第１表に示す添加物を添加、溶解した
後、常法により凍結乾燥してグアニジノ酢酸分解酵素粉
末を得た。

得られた酵素粉末を１デシケータ内で３０°Ｃｌ２Ｏ日
間保持した結果、残存酵素活性は第１表の通りであった
。又比較のために、対照（無添加）の場合の残存酵素活
性も第１表に示した。

第　　　１　　　表 なお、残存酵素活性の測定は下記の通りである。

基質グアニジノ酢酸を０．０５Ｍ　　Ｂ１５ｔｒｉｓＰ
ｒｏｐａｎｅ　　−ＨＣ１緩衝液（ｐＨ９，０）中に溶
かして基質濃度１０ｍＭに調整する。この基質溶液１．
０ｍｌに本酵素液０．０５ｍ１を加え、３７°Ｃで１０
分間反応させたのち、これに５％四ホウ酸ナトリウム溶
液２．５ｍｌ加えて反応を停止させ、沈澱が生じた場合
には該沈澱物を遠心分離もしくは過して除去したのち、
酵素反応液を得る。

なお対照は、上記の操作中本酵素液０．０５ｍ１の代り
に蒸留水０．０５ｍ１を添加する以外は、すべて同一操
作により調製したものである。

次に上記酵素反応液および対照それぞれに０．２％ビク
リルスルホン酸ナナトリウム溶液１０　ｍｌヲ加え、３
７°Ｃで２３分間反応させたのち、４２０ｎｍにおける
前記酵素反応液および対照それぞれの吸光度を測定した
。次いで酵素反応液と対照との吸光度の差より生成した
グリシンを定量した。

そして力価の表示は３７°Ｃ％　１分間当り１μモルの
グアニジノ酢酸を分解する酵素量を１単位とした。

以下の実施例に於ける酵素活性の測定も同様である。

第１表の結果より明らかな如く、本発明に於ける添加物
を加えた場合のグアニジノ酢酸分解酵素の安定化効果は
、対照に比し何れも著しく優れたものであることが認め
られた。

実施例２ 実施例１に記載したと全く同様に調整したグアニジノ酢
酸分解酵素液５ｍｌに、塩化マンガンを５ｍＭ添加、溶
解し、これに第２表に示すフラクトース１イ／シトール
、ソルビトール、ラクトース、サッカロースを夫々１．
０％（Ｗ／Ｖ）添加、溶解し、常法により凍結乾燥して
酵素粉末を得た。

得られた酵素粉末をデシケータ内で、３０℃、４０日間
、保持した結果、残存酵素活性は第２表の通りであった
。

なお比較のために、対照として前記操作のうち塩化マン
ガン及び糖類の両者を添加しない他は、前記と全く同様
に処理して得た酵素粉末の残存酵素活性、そして塩化マ
ンガンだけを添加する以外は前記と全く同様に処理して
得た酵素粉末の残存酵素活性も併せて第２表に示した。

第２表の結果より明らかな如く、グアニジノ酢酸分解酵
素含有液に塩化マンガン又は塩化マンガンと糖類の両者
を添加し、凍結乾燥した場合は、これらを添加しないで
凍結乾燥した場合（対照）に比較して、酵素活性は著し
く安定化させることが認められた。

なお本発明に係る塩化マンガンと糖類の両者を添加した
酵素粉末は、何れも４°Ｃで６ケ月以上保存しても全く
安定であった。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. グアニジノ酢酸分解酵素含有液に、糖類、重金属塩、ア
   ルカリ金属塩、アミノ酸類、グアニジノ化合物及び有機
   酸塩からなる群より選ばれた少なくとも１種のものを添
   加するか、又はさらにこれを乾燥することよりなるグア
   ニジノ酢酸分解酵素の安定化法。