JPS61274263A - 天然マトリツクス中に於ける前立腺特異抗原の安定化方法 - Google Patents
天然マトリツクス中に於ける前立腺特異抗原の安定化方法Info
- Publication number
- JPS61274263A JPS61274263A JP61070659A JP7065986A JPS61274263A JP S61274263 A JPS61274263 A JP S61274263A JP 61070659 A JP61070659 A JP 61070659A JP 7065986 A JP7065986 A JP 7065986A JP S61274263 A JPS61274263 A JP S61274263A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- serum
- psa
- biological fluid
- matrix
- activity
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/575—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57525—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer of the liver or pancreas
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Measurement Of Force In General (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、血清のような流体中の抗原物質の検出及び定
量に関する。よシ特定的には、本発明は前立腺特異抗原
のイムノアッセイに用いる安定な天然マ） ＩＪラック
ス調製方法に関する。
量に関する。よシ特定的には、本発明は前立腺特異抗原
のイムノアッセイに用いる安定な天然マ） ＩＪラック
ス調製方法に関する。
かなシ研究が進んでいる腫瘍関連抗原である前立腺特異
抗原（ＰＳＡ）は、ヒトの前立腺ガンに於ける１ｉ要な
診断及び予後判定マーカーである。
抗原（ＰＳＡ）は、ヒトの前立腺ガンに於ける１ｉ要な
診断及び予後判定マーカーである。
前立腺腫瘍細胞は血流中にＰＳＡを放出するので、血清
及びその他の体液中のＰＳＡ濃度は原発性及び転移性ガ
ンの進行と相関がある。従って、患者の検体中のＰＳＡ
を定量することにより、治療の養生法を監視し且つ病状
の軽快又は進行を評価する効果的な手段を臨床医に提供
することができる。
及びその他の体液中のＰＳＡ濃度は原発性及び転移性ガ
ンの進行と相関がある。従って、患者の検体中のＰＳＡ
を定量することにより、治療の養生法を監視し且つ病状
の軽快又は進行を評価する効果的な手段を臨床医に提供
することができる。
イムノラジオメトリックアッセイ（Ｉ ＲＭＡ ）及び
酵素結合イムノン−ベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）のよ
うな現在使用されている、患者の流体試料中のＰＳＡ測
定用イムノアッセイでは、検量マトリックス（ｃａｌ
１ｂｒａｔｏｒ ｍａｔｒｌｘ）及び希釈剤（ｄｉ １
ｕｅｎｔ）として、牛血清アルブミンのような人工又は
合成マトリックスを使用している。本明細書中の検量マ
トリックスという用語は、患者試料中の抗原物質の未知
濃度を検量する目的で所定濃度の抗原物質を含むマ）
ＩＪラックス意味する。本明細書中の希釈剤という用語
は、イムノアッセイの範囲内で抗原物質を測定し得るよ
うにすべく、イムノアッセイの範囲を越える濃度の抗原
物質を含む患者試料を希釈するためのマトリックスを意
味する。
酵素結合イムノン−ベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）のよ
うな現在使用されている、患者の流体試料中のＰＳＡ測
定用イムノアッセイでは、検量マトリックス（ｃａｌ
１ｂｒａｔｏｒ ｍａｔｒｌｘ）及び希釈剤（ｄｉ １
ｕｅｎｔ）として、牛血清アルブミンのような人工又は
合成マトリックスを使用している。本明細書中の検量マ
トリックスという用語は、患者試料中の抗原物質の未知
濃度を検量する目的で所定濃度の抗原物質を含むマ）
ＩＪラックス意味する。本明細書中の希釈剤という用語
は、イムノアッセイの範囲内で抗原物質を測定し得るよ
うにすべく、イムノアッセイの範囲を越える濃度の抗原
物質を含む患者試料を希釈するためのマトリックスを意
味する。
血清ベースのマトリックスのように未変性の天然マトリ
ックスは、このマトリックス中にＰＳＡを導入した場合
にそのＰＳＡが不安定であるととト血清ベースのマトリ
ックスに導入した場合２４時間以内に３０％〜７０％の
ＰＳＡ活性損失が起ると報告されている。更に、このよ
うな測定可能ＰＳＡの損失はヒト血清に限ったことでは
なく、牛及び馬血清ベースのマトリックスにＰＳＡを導
入した際にも同様に不安定になる。
ックスは、このマトリックス中にＰＳＡを導入した場合
にそのＰＳＡが不安定であるととト血清ベースのマトリ
ックスに導入した場合２４時間以内に３０％〜７０％の
ＰＳＡ活性損失が起ると報告されている。更に、このよ
うな測定可能ＰＳＡの損失はヒト血清に限ったことでは
なく、牛及び馬血清ベースのマトリックスにＰＳＡを導
入した際にも同様に不安定になる。
これらマトリックスの成分と検体成分とは非類似である
ために、人工マトリックスの動的パターン（ｋｉｎｅｔ
ｌｃ ｐａｔｔｅｒｎ）及び非特異的結合特性（ｎｏｎ
−ｓｐｅｃｔｆｉｃ ｂｉｎｄｆｎｇ ｃｈａｒａｃｔ
ｅｒｉｓｔｉｃｓ ）は、ＰＳＡを含む又は含むと考え
られる血清又は他の体液とはかなシ異なるものである。
ために、人工マトリックスの動的パターン（ｋｉｎｅｔ
ｌｃ ｐａｔｔｅｒｎ）及び非特異的結合特性（ｎｏｎ
−ｓｐｅｃｔｆｉｃ ｂｉｎｄｆｎｇ ｃｈａｒａｃｔ
ｅｒｉｓｔｉｃｓ ）は、ＰＳＡを含む又は含むと考え
られる血清又は他の体液とはかなシ異なるものである。
結果的に、これらのマトリックスをＰＳＡのイムノアッ
セイに使用することについては内在的に相当な制限があ
るといえる。
セイに使用することについては内在的に相当な制限があ
るといえる。
従って、ＰＳＡのイムノアッセイの精度及び感度を最大
限にするためには、神１用及び試料希釈用マトリックス
を出来るだけ患者の検体に似ているものにすること、非
特異的結合特性に関しては特にそのようにすることが非
常に重要なことである。
限にするためには、神１用及び試料希釈用マトリックス
を出来るだけ患者の検体に似ているものにすること、非
特異的結合特性に関しては特にそのようにすることが非
常に重要なことである。
このように、患者検体中のＰＳＡ定量測定に用いる血清
ベースマトリックスのような天然マトリックス中で、Ｐ
ＳＡが安定化され得るような手段が必要とされている。
ベースマトリックスのような天然マトリックス中で、Ｐ
ＳＡが安定化され得るような手段が必要とされている。
本発明は天然マトリックス（ｎａｔｕｒａｌ ｍａｔｒ
ｆｃｅｓ）中の前立腺特異抗原（ＰＳＡ）を安定化させ
る方法を提供するものである。この点に関して、患者の
検体ＶＣ類似の動的、ｅターンと非特異的結合特性を持
つように天然マトリックスを変性することが可能であっ
て、これによシマトリックスとしての所望の特性を実質
的に変更することなく、その中でＰＳＡを安定化し得る
ことが本発明に於いて予想外にも知見されたのである。
ｆｃｅｓ）中の前立腺特異抗原（ＰＳＡ）を安定化させ
る方法を提供するものである。この点に関して、患者の
検体ＶＣ類似の動的、ｅターンと非特異的結合特性を持
つように天然マトリックスを変性することが可能であっ
て、これによシマトリックスとしての所望の特性を実質
的に変更することなく、その中でＰＳＡを安定化し得る
ことが本発明に於いて予想外にも知見されたのである。
本発明忙依ると、患者の試料と同じか若しくは実質的に
同じような動的・パターン及び非特異的結合特性を持つ
適当な哺乳動物由来の生物体液（ｂｉ−ｏｌｏｇｉｃａ
ｌ ｆｌｕｉｄ）を変ＪｐＳＡを不安定化させる流体成
分の活性を阻害させるようにする。本発明の好適方法は
、このような生物体液を、正常値（約ｐＨ７）から少な
くとも約ｐＨ９に、ＰＳＡを不安定化させる流体成分活
性を阻害するに有効な期間アルカＩＪ ｐＨシフトさせ
て変性する。その後、この生物体液のｐＨを約７まで低
下させる。
同じような動的・パターン及び非特異的結合特性を持つ
適当な哺乳動物由来の生物体液（ｂｉ−ｏｌｏｇｉｃａ
ｌ ｆｌｕｉｄ）を変ＪｐＳＡを不安定化させる流体成
分の活性を阻害させるようにする。本発明の好適方法は
、このような生物体液を、正常値（約ｐＨ７）から少な
くとも約ｐＨ９に、ＰＳＡを不安定化させる流体成分活
性を阻害するに有効な期間アルカＩＪ ｐＨシフトさせ
て変性する。その後、この生物体液のｐＨを約７まで低
下させる。
上に述べたように１本発明は前立腺特異抗原（ＰＳＡ）
を安定化させるために天然マトリックスを変性する手段
を提供する。本発明に於いて、天然マトリックス（ｎａ
ｔｕｒａｌ ｍａｔｒｉｘ）とは、生物によって産生さ
れる生物学的に発生する組成物であって、それがマトリ
ックスとして使用されるために、患者サンプルと同じ又
はよく似た動的ノ９ターン及び非特異的結合特性を有し
ている本のをいう。
を安定化させるために天然マトリックスを変性する手段
を提供する。本発明に於いて、天然マトリックス（ｎａ
ｔｕｒａｌ ｍａｔｒｉｘ）とは、生物によって産生さ
れる生物学的に発生する組成物であって、それがマトリ
ックスとして使用されるために、患者サンプルと同じ又
はよく似た動的ノ９ターン及び非特異的結合特性を有し
ている本のをいう。
本発明は、通常のイムノアッセイ法によって患者の流体
サンプル中にあるＰＳＡの検出及び／又は定量測定に有
益である。更忙、本発明方法によって調製された安定な
天然マトリックスは、ＰＳＡのイムノアッセイにおける
検量マトリックス及び希釈剤として有益である。
サンプル中にあるＰＳＡの検出及び／又は定量測定に有
益である。更忙、本発明方法によって調製された安定な
天然マトリックスは、ＰＳＡのイムノアッセイにおける
検量マトリックス及び希釈剤として有益である。
流体サンプル中の抗原物質濃度を決定するイムノアッセ
イは当業界においてよく知られているので、詳細に説明
する必要はないものと思われる。
イは当業界においてよく知られているので、詳細に説明
する必要はないものと思われる。
しかしながら、その中でも、本発明が特に有益となるイ
ムノアッセイは、モノクローナル抗体を使用するイムノ
メトリックアッセイであシ、これには米国特許第４，３
７６．１１０号明細書に記載されているような二部位（
ｔｗｏ −５ｉｔｅ）すなわちサンドイッチイムノメト
リックアッセイ等がある。更Ｋ、イムノアッセイを達成
ならしめる手段として、放射性同位元素手段、酵素手段
、螢光物質手段を挙げ得る。
ムノアッセイは、モノクローナル抗体を使用するイムノ
メトリックアッセイであシ、これには米国特許第４，３
７６．１１０号明細書に記載されているような二部位（
ｔｗｏ −５ｉｔｅ）すなわちサンドイッチイムノメト
リックアッセイ等がある。更Ｋ、イムノアッセイを達成
ならしめる手段として、放射性同位元素手段、酵素手段
、螢光物質手段を挙げ得る。
（以下余白）
本発明においては、適当な哺乳動物由来の生物流体が利
用できる。例えば、全崩液、血清、血漿、脳を髄液又は
尿などが本発明において好適に利用され得る。より好ま
しいのはヒトの血液から得られる血清であって、循１１
ＰｓＡの存在がたとえあったとしても、そのわずかな濃
度が検出されないものがよい。特に好ましいのはヒト女
性血液から得られる血清であり、これには循３］Ｐ８Ａ
は存在しない。
用できる。例えば、全崩液、血清、血漿、脳を髄液又は
尿などが本発明において好適に利用され得る。より好ま
しいのはヒトの血液から得られる血清であって、循１１
ＰｓＡの存在がたとえあったとしても、そのわずかな濃
度が検出されないものがよい。特に好ましいのはヒト女
性血液から得られる血清であり、これには循３］Ｐ８Ａ
は存在しない。
本発明の好ましい方法によると、ヒト女性血清を変性し
て、ＰＳＡを不安定化させる血清成分の活性を阻害する
。未変性血清中のＰＳＡの不安定化についての理論に拘
束されるつもりはないが、この不安定性は、少々くとも
部分的に循環する前立腺抗原結合蛋白（ＰＡＢＧ）の存
在によるものと思われる。ＰＡＢＧは前立腺ガンと診断
された男性の血清中にかなりの高レベルで存在するもの
であるが、正常男性及び正常女性の血清中にも存在する
ことが明らかにされている。Ｃｈｕ ｅｔ Ｂ１ 、
。
て、ＰＳＡを不安定化させる血清成分の活性を阻害する
。未変性血清中のＰＳＡの不安定化についての理論に拘
束されるつもりはないが、この不安定性は、少々くとも
部分的に循環する前立腺抗原結合蛋白（ＰＡＢＧ）の存
在によるものと思われる。ＰＡＢＧは前立腺ガンと診断
された男性の血清中にかなりの高レベルで存在するもの
であるが、正常男性及び正常女性の血清中にも存在する
ことが明らかにされている。Ｃｈｕ ｅｔ Ｂ１ 、
。
Ａｎｎａｌｓ ＮＹＡＳ 、 Ｖｏｌ 、 ４１７．
ｐｐ、 ３８３−３８９ 。
ｐｐ、 ３８３−３８９ 。
１９８３参照。
ＰＥＡに対する安定な血清ベースのマ） ＩＪソックス
提供するためのヒト女性血清の変性は、ＰＳＡを不安定
化する血清成分活性を阻害するのに有効な時間ｐＨを少
なくとも約ｐＨ９にシフトさせるアルカリｐＨシフトに
よってなされる。好ましくは、血清ｐＨを約ｐＨ１２に
までシフトし、血清を約５分ないし約４５分間インキユ
ベートシ、次いで血で行うことができる。
提供するためのヒト女性血清の変性は、ＰＳＡを不安定
化する血清成分活性を阻害するのに有効な時間ｐＨを少
なくとも約ｐＨ９にシフトさせるアルカリｐＨシフトに
よってなされる。好ましくは、血清ｐＨを約ｐＨ１２に
までシフトし、血清を約５分ないし約４５分間インキユ
ベートシ、次いで血で行うことができる。
さらに、ＰＳＡに反応性である血清成分の活性を阻害す
る手段として、ｐＨ変性は好ましいものではあるが、本
発明においてはカオトロピック剤（ｃｈａｏｔｒｏｐｉ
ｃ ａｇｅｎｔ ）もまた利用することができる。カオ
トロピック剤（たん白質の３次元構造に不規則性を誘起
するもの）のうち、本発明の使用に適する４のは、尿素
、ＫＢｒ、ＫＩ、ＫＳＣＮ、グアニジン及びＭｇＣｔ、
である。加熱することもまた利用できる。すなわち、血
清成分の活性を阻害するのに十分な時間、流体を高い温
度に加熱しその温度に保持する。しかしながら本発明の
目的には、上記したｐＨ調整が最も有効である。
る手段として、ｐＨ変性は好ましいものではあるが、本
発明においてはカオトロピック剤（ｃｈａｏｔｒｏｐｉ
ｃ ａｇｅｎｔ ）もまた利用することができる。カオ
トロピック剤（たん白質の３次元構造に不規則性を誘起
するもの）のうち、本発明の使用に適する４のは、尿素
、ＫＢｒ、ＫＩ、ＫＳＣＮ、グアニジン及びＭｇＣｔ、
である。加熱することもまた利用できる。すなわち、血
清成分の活性を阻害するのに十分な時間、流体を高い温
度に加熱しその温度に保持する。しかしながら本発明の
目的には、上記したｐＨ調整が最も有効である。
合成マ） ＩＪラックス対比した、本発明の安定な天然
マトリックスの利点を第１表に示す。このような安定な
天然マ） ＩＪラックス非特異的結合特性は患者の検体
に匹敵し得るので、ＰＳＡイムノアッセイの感度と精度
を同士させることができる。
マトリックスの利点を第１表に示す。このような安定な
天然マ） ＩＪラックス非特異的結合特性は患者の検体
に匹敵し得るので、ＰＳＡイムノアッセイの感度と精度
を同士させることができる。
は、Ｐ８Ａイムノアッセイにおける検量マトリックス及
び検体稀釈剤として非常に有効であり且つ望ましいもの
である。第■表及び第１表に示されるようＩｃ、ＰＳＡ
は非変性天然マトリックスと比較してそのようなマトリ
ックス中に於いて実質的により安定である。
び検体稀釈剤として非常に有効であり且つ望ましいもの
である。第■表及び第１表に示されるようＩｃ、ＰＳＡ
は非変性天然マトリックスと比較してそのようなマトリ
ックス中に於いて実質的により安定である。
さらに、本発明は、非変性天然マトリックス中に導入す
ると不安定となる他の抗原を安定化させる方法をも示唆
していることは明らかである。例えば腫瘍関連抗原カル
シトニンについても同じような結果が得られた。
ると不安定となる他の抗原を安定化させる方法をも示唆
していることは明らかである。例えば腫瘍関連抗原カル
シトニンについても同じような結果が得られた。
以下非制限的実施例に基づいて本発明を説明する。
実施例 １
ｐＨ変性血清の調製
テネシー州メンフイス市のインターステート血液銀行か
ら一２０Ｃに保存されたヒト女性血清を入手し、ｐＨ変
性天然マトリックスを調製するためにこれを使用した。
ら一２０Ｃに保存されたヒト女性血清を入手し、ｐＨ変
性天然マトリックスを調製するためにこれを使用した。
攪拌装置を備えた容器中で、１ＯＮのＮａＯＨ１７〜２
０−を添加することによシ１０００−の前記血清を約ｐ
Ｈ１２に調整した。
０−を添加することによシ１０００−の前記血清を約ｐ
Ｈ１２に調整した。
次いでこの塩基性血清溶液を２２〜２８Ｃで３０分間攪
拌しながらインキエベートし、１ＯＮのＨＣノ１５〜１
７−を添加するととＫより約ｐＨ７Ｋ戻した。その後、
ｐＨ７の溶液を１０分間１０００ ｘＩで遠心分離Ｋか
け、０．２μのシープを用いて口過した。
拌しながらインキエベートし、１ＯＮのＨＣノ１５〜１
７−を添加するととＫより約ｐＨ７Ｋ戻した。その後、
ｐＨ７の溶液を１０分間１０００ ｘＩで遠心分離Ｋか
け、０．２μのシープを用いて口過した。
１）Ｈ変性血清の他の調製方法
約０．３ｍｌ〜０．５−の１０ Ｎ ＮａＯＨを攪拌下
に２０−の貯蔵ヒト女性血清に加え、ｐＨを１２に増加
させた。塩基性血清を３０分間インキュベートし、次い
で０．１Ｍのリン酸ナトリウム（０，２７６グラムの一
塩基性リン酸ナトリウム）を攪拌しながら加え、ｐＨを
若干下げた。その後、０．４−〜０．６−の６ＮＨＣノ
を加えてｐＨをｐＨ６に調整し、溶液を室温で２〜３時
間攪拌した。最後に、約０．１０ｓ／ 〜０．５ｙｄの
Ｉ Ｎ ＮａＯＨを用いてｐＨをｐＨ７に調整した。
に２０−の貯蔵ヒト女性血清に加え、ｐＨを１２に増加
させた。塩基性血清を３０分間インキュベートし、次い
で０．１Ｍのリン酸ナトリウム（０，２７６グラムの一
塩基性リン酸ナトリウム）を攪拌しながら加え、ｐＨを
若干下げた。その後、０．４−〜０．６−の６ＮＨＣノ
を加えてｐＨをｐＨ６に調整し、溶液を室温で２〜３時
間攪拌した。最後に、約０．１０ｓ／ 〜０．５ｙｄの
Ｉ Ｎ ＮａＯＨを用いてｐＨをｐＨ７に調整した。
非特異的結合の比較
５％牛血清アルブミン（インディアナ州エルクハルト市
のマイルズラボラトリーズＩｎｃ社製）と２９４ Ｉｇ
Ｇ （アーカンサスのロジャースにあるペルーフリーズ
バイオロジカルズ）とからなる合成マトリックス試料の
非特異的結合の値を、非変性ヒト女性血清試料及び上記
のようにして調製したｐＨ変性血清試料と比較した。非
特異的結合の値は、市販の二部位イムノラジオメトリッ
クアッセイす々わちＴＡＮＤＥＭ■−ＲＰ８Ａ（カリフ
ォルニア州すンデイエザ市のハイプリチックインコーホ
レイテッド社製）を用いて測定した。各マトリックスの
評価は、ＴＡＮＤＥＭ■−ＲＰＳＡ プロトコールに
従って、各チューブに０．０５−を使用し、インキュベ
ーション時間を４時間に延長してそれぞれ１２回繰シ返
すことにより求めた。
のマイルズラボラトリーズＩｎｃ社製）と２９４ Ｉｇ
Ｇ （アーカンサスのロジャースにあるペルーフリーズ
バイオロジカルズ）とからなる合成マトリックス試料の
非特異的結合の値を、非変性ヒト女性血清試料及び上記
のようにして調製したｐＨ変性血清試料と比較した。非
特異的結合の値は、市販の二部位イムノラジオメトリッ
クアッセイす々わちＴＡＮＤＥＭ■−ＲＰ８Ａ（カリフ
ォルニア州すンデイエザ市のハイプリチックインコーホ
レイテッド社製）を用いて測定した。各マトリックスの
評価は、ＴＡＮＤＥＭ■−ＲＰＳＡ プロトコールに
従って、各チューブに０．０５−を使用し、インキュベ
ーション時間を４時間に延長してそれぞれ１２回繰シ返
すことにより求めた。
下記第１表は、合成マ） ＩＪラックス料、非変性血清
試料及びｐＨ変性血清試料それぞれについての平均値を
示したものである。
試料及びｐＨ変性血清試料それぞれについての平均値を
示したものである。
データを、１分間あたりのカラン）（ＣＰＭ）及び標準
曲線に対するＰＳＡ−濃度（ｎｌｉ／１ａｔｔ ）で示
す。
曲線に対するＰＳＡ−濃度（ｎｌｉ／１ａｔｔ ）で示
す。
第１表
サンプルマトリックス ＣＰＭ ＰＳＡ（ｎ
ｇ／＋ｄ）５％ＢＳＡ／２俤ＩｇＧ １１７９
０．２４非変性血清 ９３０ ０．０
７ｐＨ変性血清 ９４６ ０．０９上記
第１表から、非変性血清サンプル及びｐＨ変性血清サン
プルの非特異的結合の値は相互に匹敵しているが、合成
サンプルの非特異的結合の値はかなり高い値となってい
ることが判る。
ｇ／＋ｄ）５％ＢＳＡ／２俤ＩｇＧ １１７９
０．２４非変性血清 ９３０ ０．０
７ｐＨ変性血清 ９４６ ０．０９上記
第１表から、非変性血清サンプル及びｐＨ変性血清サン
プルの非特異的結合の値は相互に匹敵しているが、合成
サンプルの非特異的結合の値はかなり高い値となってい
ることが判る。
ＰＳＡ安定性の決定
ＰＳＡ安定性の研究は、非変性ヒト女性血清及び上記し
たようにして調整したｐＨ変性血清を用いて行った。精
液血漿から得た１０μノ量のＰＳＡ８５５ ｎｇ／−を
各マトリックスサンプル９９０μノに稀釈し、３５Ｃに
維持した。測定可能ＰＳＡの損失チとしてＰＥＡの安定
性を、下記筒■表に示す。このＰＳＡ安定性は、各サン
プルにつき一７０Ｃのコントロールサンプルに対する相
対値として１．３及び５日目に求めたものである。よく
知られてｈる方法で得られた値をそれぞれ４Ｃで１．２
゜３．６及び６．０ケ月に外挿した。
たようにして調整したｐＨ変性血清を用いて行った。精
液血漿から得た１０μノ量のＰＳＡ８５５ ｎｇ／−を
各マトリックスサンプル９９０μノに稀釈し、３５Ｃに
維持した。測定可能ＰＳＡの損失チとしてＰＥＡの安定
性を、下記筒■表に示す。このＰＳＡ安定性は、各サン
プルにつき一７０Ｃのコントロールサンプルに対する相
対値として１．３及び５日目に求めたものである。よく
知られてｈる方法で得られた値をそれぞれ４Ｃで１．２
゜３．６及び６．０ケ月に外挿した。
第■表
非変性 ２１ ３２ ３６
ｐＨＸ２変性 ４ ３ ０
非変性 ２０ ２６ ３０
ｐＨ１２変性 ８ ７ ５
第■表から、ＰＳＡは非変性血清よプもｐＨ変性血清中
でかなシ安定であることがわかる。
でかなシ安定であることがわかる。
ＰＳＡ回収の決定
精液血漿又はヒト男性血清からの測定可能ＰＳＡの損失
を、未処理血清又は上記のごとき変性血清で稀釈した後
に求めた。０．４−のサンプルマトリックスを含有する
４つの試験管中に精液血漿からのＰＳＡ １２５ ｎｇ
／−のｏ、ｉ−を加え、２５ ｎｇ／１ＲｔＰＳＡ仮想
濃度を調整した。１ｇ、１ ｎｇ／ｄＰｓＡを含むこと
が予めわかっているヒト男性血清を用いて、各溶液のア
リコツトを１対１稀釈した。
を、未処理血清又は上記のごとき変性血清で稀釈した後
に求めた。０．４−のサンプルマトリックスを含有する
４つの試験管中に精液血漿からのＰＳＡ １２５ ｎｇ
／−のｏ、ｉ−を加え、２５ ｎｇ／１ＲｔＰＳＡ仮想
濃度を調整した。１ｇ、１ ｎｇ／ｄＰｓＡを含むこと
が予めわかっているヒト男性血清を用いて、各溶液のア
リコツトを１対１稀釈した。
４つの試験管の各々に於けるＰＳＡ量についての評価は
、市販の二部イ１イムノラジオメトリックアッセイ即ち
ＴＡＮＤＥＭ■−ＲＰＳＡ （カリフォルニア州すンデ
ィエゴ市に所在のハイブリテツクインコーｆレーテッド
社製）を用いて行った。ただし、インキュベーション時
間は４時間だった。測定濃度及びＰＳＡの計算上の損失
チを第１表に示す。第■表のデータから、ｐＨ変性マト
リックスについては非常に望ましいＰＳＡ回収が達成さ
れていることがわかるが、非変性血清にあっては顕著な
ＰＳＡ損失が起っていたことがわかる。
、市販の二部イ１イムノラジオメトリックアッセイ即ち
ＴＡＮＤＥＭ■−ＲＰＳＡ （カリフォルニア州すンデ
ィエゴ市に所在のハイブリテツクインコーｆレーテッド
社製）を用いて行った。ただし、インキュベーション時
間は４時間だった。測定濃度及びＰＳＡの計算上の損失
チを第１表に示す。第■表のデータから、ｐＨ変性マト
リックスについては非常に望ましいＰＳＡ回収が達成さ
れていることがわかるが、非変性血清にあっては顕著な
ＰＳＡ損失が起っていたことがわかる。
第１表
精液血漿からのＰＳＡ添加
非変性血清 ２５．０ １２．３３ ５
１ｐＨ変性血清 ２５．０ ２４．１６
３ＰＥＡ含有ヒト血清を用いた稀釈（１：１）非
変性血清 １５．７２ １５．２９ ３
ｐＨ変性血清 ２１．６３ ２２．１７
０以上本発明の好ましい態様について記載したが
、本発明の精神及び範囲を超えることなく上記態様を変
形し変更することは当業者にとって可能である。
１ｐＨ変性血清 ２５．０ ２４．１６
３ＰＥＡ含有ヒト血清を用いた稀釈（１：１）非
変性血清 １５．７２ １５．２９ ３
ｐＨ変性血清 ２１．６３ ２２．１７
０以上本発明の好ましい態様について記載したが
、本発明の精神及び範囲を超えることなく上記態様を変
形し変更することは当業者にとって可能である。
Claims (27)
- （１）イムノアツセイによつて流体サンプル中の前立腺
特異抗原（ＰＳＡ）を測定する際に使用する安定な天然
マトリツクスの調製方法であつて、適当な哺乳動物から
得られる、ＰＳＡの生物学的キヤリヤー流体を変性して
、前記ＰＳＡを不安定化させる前記生物流体の成分の活
性を阻害することからなる前記方法。 - （２）前記生物流体が血液からなる特許請求の範囲第１
項に記載の方法。 - （３）前記生物流体が血清からなる特許請求の範囲第１
項に記載の方法。 - （４）前記生物流体が血漿からなる特許請求の範囲第１
項記載の方法。 - （５）前記哺乳動物がヒトである特許請求の範囲第１項
〜第４項のいずれかに記載の方法。 - （６）前記哺乳動物がヒト女性である特許請求の範囲第
２項〜第４項のいずれかに記載の方法。 - （７）前記天然マトリツクスを検量マトリツクスとして
使用する特許請求の範囲第１項〜第４項のいずれかに記
載の方法。 - （８）前記天然マトリツクスを希釈剤として使用する特
許請求の範囲第１項〜第３項のいずれかに記載の方法。 - （９）前記イムノアツセイがモノクローナル抗体を用い
るイムノメトリツクアツセイである特許請求の範囲第１
項〜第４項のいずれかに記載の方法。 - （１０）前記イムノアツセイが二部位イムノメトリツク
アツセイである特許請求の範囲第９項に記載の方法。 - （１１）前記イムノメトリツクアツセイを、放射性同位
元素、酵素、螢光物質のグループから選んだものによつ
てなす特許請求の範囲第９項に記載の方法。 - （１２）前記変性ステツプが、前記生物流体の成分の不
安定化活性を阻害するのに有効なｐＨにまで前記生物流
体のｐＨを所定時間をかけて調整することからなる特許
請求の範囲第１〜４項のいずれかに記載の方法。 - （１３）前記変性ステツプが、前記生物流体のｐＨを、
前記生物流体の成分の活性を阻害するのに有効な時間少
なくとも約ｐＨ９にまで増加させ、次いで前記生物流体
のｐＨを約ｐＨ７にまで低下させることからなる特許請
求の範囲第１２項に記載の方法。 - （１４）前記生物流体のｐＨを約ｐＨ１２にまで増加さ
せる特許請求の範囲第１３項に記載の方法。 - （１５）前記変性が、前記生物流体の成分の不安定化活
性を阻害するのに充分な時間カオトロピツク剤で前記生
物流体を処理することからなる特許請求の範囲第１〜４
項のいずれかに記載の方法。 - （１６）イムノアツセイによつて流体サンプル中の前立
腺特異抗原（ＰＳＡ）を測定する際に使用する血清ベー
スのマトリツクス中の前記ＰＳＡの安定化方法であつて
、適当なヒト女性由来の血清を変性し、前記ＰＳＡを不
安定化させる血清成分の活性を阻害することを特徴とす
る前記方法。 - （１７）前記血清ベースのマトリツクスを検量マトリツ
クスとして使用する特許請求の範囲第１６項に記載の方
法。 - （１８）前記血清ベースのマトリツクス組成物を希釈剤
として使用する特許請求の範囲第１６項に記載の方法。 - （１９）前記変性ステツプが、前記血清成分の活性を阻
害するのに有効な時間前記血清のｐＨをシフトさせるこ
とからなる特許請求の範囲第１６項に記載の方法。 - （２０）前記変性ステツプが、前記血清成分の活性を阻
害するのに有効な時間前記血清のｐＨを少なくとも約ｐ
Ｈ９にまで増加させ、次いで前記血清のｐＨを約ｐＨ７
にまで低下させることからなる特許請求の範囲第１９項
に記載の方法。 - （２１）前記血清のｐＨを約ｐＨ１２にまで増加させる
特許請求の範囲第２０項に記載の方法。 - （２２）前記変性ステツプが、血清の成分の不安定化活
性を阻害するのに充分な時間前記血清をカオトロピツク
剤で処理することからなる特許請求の範囲第１６項に記
載の方法。 - （２３）特許請求の範囲第１〜４項の方法によつて調製
された安定な天然マトリツクス。 - （２４）特許請求の範囲第１３項又は第１４項の方法に
よつて調製された安定な天然マトリツクス。 - （２５）特許請求の範囲第１９項又は第２０項の方法に
よつて調製された安定な天然マトリツクス。 - （２６）イムノアツセイによつて流体サンプル中の抗原
を測定する際に使用する安定な天然マトリツクスの製造
方法であつて、適当な哺乳動物から得られた、抗原用生
物学的キヤリヤー流体を変性し、前記抗原を不安定化さ
せる前記生物流体の成分の活性を阻害することからなる
前記方法。 - （２７）前記抗原がカルシトニンである特許請求の範囲
第２６項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US71734585A | 1985-03-29 | 1985-03-29 | |
| US717345 | 1985-03-29 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61274263A true JPS61274263A (ja) | 1986-12-04 |
| JP2547318B2 JP2547318B2 (ja) | 1996-10-23 |
Family
ID=24881645
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61070659A Expired - Lifetime JP2547318B2 (ja) | 1985-03-29 | 1986-03-28 | 天然マトリツクス中に於ける前立腺特異抗原の安定化方法 |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0196845B1 (ja) |
| JP (1) | JP2547318B2 (ja) |
| AT (1) | ATE96910T1 (ja) |
| AU (1) | AU602861B2 (ja) |
| CA (1) | CA1271420A (ja) |
| DE (1) | DE3689240T2 (ja) |
| DK (1) | DK165466C (ja) |
| ES (2) | ES8800440A1 (ja) |
| FI (1) | FI87021C (ja) |
| IE (1) | IE62580B1 (ja) |
| NO (1) | NO168444C (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2669566B2 (ja) * | 1990-07-23 | 1997-10-29 | リルヤ，ハンス | 遊離及び複合体形成した前立腺特異的抗原（ｐｓａ）の分析 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE59202364D1 (de) * | 1992-10-21 | 1995-06-29 | Edith Dr Dr Huland | Verfahren zur quantitativen Bestimmung von krankheitsspezifischen Antigenen und Vorrichtung zur Durchführung des Verfahrens. |
| EP1354206A2 (en) * | 2000-12-13 | 2003-10-22 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Standard diluent for multiplex assays |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4446122A (en) * | 1979-12-28 | 1984-05-01 | Research Corporation | Purified human prostate antigen |
-
1986
- 1986-03-18 AU AU54824/86A patent/AU602861B2/en not_active Ceased
- 1986-03-18 IE IE69686A patent/IE62580B1/en not_active IP Right Cessation
- 1986-03-21 NO NO861116A patent/NO168444C/no unknown
- 1986-03-21 DE DE86302130T patent/DE3689240T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1986-03-21 AT AT86302130T patent/ATE96910T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-03-21 EP EP86302130A patent/EP0196845B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-03-24 DK DK134686A patent/DK165466C/da not_active IP Right Cessation
- 1986-03-26 ES ES553482A patent/ES8800440A1/es not_active Expired
- 1986-03-26 FI FI861321A patent/FI87021C/fi not_active IP Right Cessation
- 1986-03-27 CA CA000505289A patent/CA1271420A/en not_active Expired - Fee Related
- 1986-03-28 JP JP61070659A patent/JP2547318B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1987
- 1987-07-22 ES ES557633A patent/ES8801730A1/es not_active Expired
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2669566B2 (ja) * | 1990-07-23 | 1997-10-29 | リルヤ，ハンス | 遊離及び複合体形成した前立腺特異的抗原（ｐｓａ）の分析 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IE62580B1 (en) | 1995-02-08 |
| DE3689240T2 (de) | 1994-03-03 |
| FI861321L (fi) | 1986-09-30 |
| DE3689240D1 (de) | 1993-12-09 |
| NO168444C (no) | 1992-02-19 |
| EP0196845A2 (en) | 1986-10-08 |
| CA1271420A (en) | 1990-07-10 |
| FI87021B (fi) | 1992-07-31 |
| ATE96910T1 (de) | 1993-11-15 |
| AU5482486A (en) | 1986-10-02 |
| NO168444B (no) | 1991-11-11 |
| ES8801730A1 (es) | 1988-02-16 |
| DK165466B (da) | 1992-11-30 |
| NO861116L (no) | 1986-09-30 |
| ES8800440A1 (es) | 1987-10-16 |
| FI861321A0 (fi) | 1986-03-26 |
| FI87021C (fi) | 1992-11-10 |
| ES553482A0 (es) | 1987-10-16 |
| IE860696L (en) | 1986-09-29 |
| DK134686D0 (da) | 1986-03-24 |
| JP2547318B2 (ja) | 1996-10-23 |
| ES557633A0 (es) | 1988-02-16 |
| DK165466C (da) | 1993-04-19 |
| EP0196845B1 (en) | 1993-11-03 |
| EP0196845A3 (en) | 1987-08-19 |
| AU602861B2 (en) | 1990-11-01 |
| DK134686A (da) | 1986-09-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE69516007T2 (de) | Verfahren zum nachweiss von antikörpern | |
| US4273867A (en) | Method and reagent for counteracting lipemic interference | |
| US4672045A (en) | Method for assaying antigen-antibody reactions and reagent thereof | |
| CA1247523A (en) | Method for reducing non-specific interferences in agglutination immunoassays | |
| JPH04351962A (ja) | 特異結合分析方法および特異結合分析装置 | |
| EP0166623A2 (en) | Antibody lectin sandwich assay | |
| CN109765382A (zh) | 一种心肌肌钙蛋白t的胶乳增强免疫比浊检测试剂盒 | |
| EP0070033B1 (en) | Quantitative determination of adenosine | |
| NL8200587A (nl) | Werkwijze voor een immunochemische enzymbepaling. | |
| CN108362895B (zh) | 叶酸检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN113125748B (zh) | 一种用于检测心脏型脂肪酸结合蛋白的试剂盒 | |
| JP2547318B2 (ja) | 天然マトリツクス中に於ける前立腺特異抗原の安定化方法 | |
| EP0389301A2 (en) | Reagent complex for immunoassay | |
| EP0165669A1 (en) | Improved method of measuring free ligand | |
| US5242802A (en) | Processes for the stabilization of prostate specific antigen in natural matrices | |
| JP2004325414A (ja) | 免疫測定方法及び免疫測定キット | |
| JPH0326787B2 (ja) | ||
| CN111217910B (zh) | 单克隆抗体对及其在检测髓过氧化物酶蛋白中的应用 | |
| EP0184701B1 (en) | A method for determining a ligand | |
| JP2005512074A (ja) | 血清または血漿存在下でのラテックス微粒子の非特異的集合を低減する方法 | |
| US5248615A (en) | Calibrator composition for prolactin assay | |
| JPH08292192A (ja) | 免疫測定法 | |
| JPH08509064A (ja) | 化学的に架橋したタンパクの固相支持体上の固定化 | |
| CN116338173A (zh) | 一种血液尿液α1-微球蛋白测定试剂盒及其制备方法 | |
| EP0092344A1 (en) | Assay method |