JPS61289885A

JPS61289885A - コラゲナ−ゼおよびコラゲナ−ゼの製造方法

Info

Publication number: JPS61289885A
Application number: JP13062885A
Authority: JP
Inventors: Koji Wada; 浩二和田; Toshiichi Nishio; 西尾　敏一; Shigeo Yasugi; 八杉　重雄
Original assignee: Nitta Gelatin Inc
Current assignee: Nitta Gelatin Inc
Priority date: 1985-06-14
Filing date: 1985-06-14
Publication date: 1986-12-19
Also published as: JPH037357B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は新規のコラゲナーゼおよびその製造方法に関す
る。

〔従来の技術〕

コラゲナーゼはコラーゲンのみに作用し、卵アルブミン
、カゼイン、フィブリン等には作用しない性質を有して
おり、古くには火傷や褥疹の創面浄化、今日では動物組
織からの細胞の分散等、生化学試薬等として広く利用さ
れている。

これまで、コラゲナーゼを得るには嫌気性のクロストリ
ジウム属〔例えば、クロストリジウムヒストリチクム（
Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ　
）を嫌気的条件下で培養し、採取する方法がとられてい
る。嫌気的条件を満たすためには、培地の重層や空気排
除または窒素ガスもしくは二酸化炭素置換などの手段が
考えられるが、いずれにしても煩雑な過程を必要とする
。また、得ようとするコラゲナーゼの収率を上げるため
には、天然栄養分を添加することが端的ではあるが、夾
雑物の多様化により抽出分離工程が複雑になり、経済的
にみても好ましくない等の問題点がある。

これらの問題点を解消するためにストレプトマイセスＣ
−５１株を好気的に培養してコラゲナーゼを採取する方
法を開示している〔農芸化学５９要旨集２０４頁（１９
８４）、農芸化学第２巻２３３頁（１９８５）　）。

しかして、上記公知のコラゲナーゼは、それぞれ分子量
約７万、等電点ｐ＋４．ｓ付近ならびに分子量約１０万
および９〜１１万、等電点ＰＩ５．２である。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明者らは、好気的条件下で培養して新規なコラゲナ
ーゼを産生しうる菌株を得るために、多数の土壌微生物
を分離し、それが産生ずるコラゲナーゼについて検討し
たところ、好気性菌であるストレプトマイセス属の菌株
が新規コラゲナーゼ産生能を有することを見い出した。

従って、本発明の目的は新規コラゲナーゼを提供するこ
とである。

また、本発明の他の目的は上記新規コラゲナーゼの製造
方法を提供することである。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明は、ストレプトマイセス属に属する菌株が産生じ
得、ＴＳＫ　Ｇ３０００　ＳＷゲルを用る高速液体クロ
マトグラフィーによって測定した分子量が約５２０００
である新規コラゲナーゼに関する。特に、本発明は以下
の理化学的性質を有するコラゲナーゼに関する。

■外観：淡黄色粉末（凍結乾燥） ■基質特異性：（ｉ）コラーゲン（分子量３０００００）　１モル相当
のコラゲナーゼ消化物のＮ末端アミノ酸残基数は９３で
グリシンのみである。

（ｉｉ）コラーゲン（分子量３０００００）　１　モル
相当のコラゲナーゼ消化物のＣ末端アミノ酸残基数は次
の通りである：ヒドロキシプロリン　　　１９．２４アスパラギン酸　　　　　　０．４５トレオニン　　　　　　　　２．０４セリン　　　　　　　　　４．８７グルタミン酸　　　　　　　０．４８プロリン　　　　　　　　　　１．４４グリシン　　　
　　　　　　４．９５アラニン　　　　　　　　１５．０８バリン　　　　　　　　　２．２４イソロイシン　　　　　　　０．７１ロイシン　　　　　　　　　２．７１ヒドロキシリジン　　　　　２．８６リジン　　　　　　　　　　３．９４ ■至適温度：３０℃（０，００２％水溶液）、５５℃以上では不活性
となる。

■至適ｐ！（：ｐＨ７，０〜８．０（但し、ｐ１４４以下、ｐＨ１１以
上では不活性となる） ■鉄イオンの存在により酵素活性が促進され、水銀イオ
ン、カドミウムイオン、ＥＤＴＡの存在により酵素活性
が阻害される。

■分子量：ＴＳＫ　Ｇ３０００　ＳＷ　　ゲルを用いる高速液体ク
ロマトグラフィーによって測定した分子量は約■等電点
：約ｐＩ５．４さらに、本発明はストレプトマイセス属に属する菌株を
培養し、培養物から前記の性質を有するコラゲナーゼを
採取することによる前記コラゲナーゼの製造方法である
。

本発明で使用されるコラゲナーゼ生産菌は、ストレプト
マイセス属に属し、本発明コラゲナーゼを生産する能力
を有するものであれば如何なる微生物でもよい。たとえ
ば、大阪府八尾市二俣、新田ゼラチン社内の土壌から分
離したストレプトマイセス　パルブルス　Ｎ−１株＜以
ｅｔ、ｒＮ−を株」と略称する）、ストレプトマイセス
　アルボグリセオルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ａ
ｌｂｏｇｒｉｃｅｏｌｕｓ　）、ストレプトマイセス　
フミダス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｈｕｍｉｄｕｓ　
）等が挙げられる。好ましくはＮ−１株が使用され、こ
のＮ−１株の細菌学的性質は次の通りである。

（１）形態イースト・麦芽寒天培地に生育した細胞は以下の形態を
示す。

＋ａ）胞子形成菌糸は単純分枝しており、螺旋状で　　
　　　　　　　。

１０以上の胞子を有する。胞子の表面構造は鞭毛、胞子
のう共に存在しない。また、胞子柄は気菌糸上に着生し
、菌核は形成しない。

（ｂｌ各種培地における生育状態 ■シュクロース・硝酸塩寒天培地２７℃、１４日間培養の集落では生育は弱い。

気菌糸の生育は認められず、基土菌糸の色はナチュラル
（Ｎａｔｕｒａｌ）。水溶性色素はなし。

■グルコース・アスパラギン寒天培地２７℃、１４日間培養の集落では生育は良好。

気菌糸の色はシェルピンク（Ｓｈｅｌｌ　Ｐｉｎｋ）。

基土菌糸の色はカナリア色（Ｃａｎａｒｙ　Ｙｅｌｌｏ
ｗ）水溶性色素はなし。

■グリセリン・アスパラギン寒天培地２７℃、１４日間培養の集落では生育は良好。

気菌糸の色は白色。基土菌糸の色はバンブ（Ｂａｍｂｏ
ｏ）。水溶性色素はなし。

■スターチ寒天培地２７℃、１４日間培養の集落では生育は良好。

気菌糸、基土菌糸の色は共に白色。水溶性色素はなし。

■チロシン寒天培地２７℃、１４日間培養の集落では生育は良好。

気菌糸の色はパティ−（Ｐｕｔｔｙ）。基土菌糸の色は
ハニーゴールド（Ｈｏｎｅｙ　Ｇｏｌｄ）。水溶性色素
はなし。

■栄養寒天培地２７℃、１４日間培養の集落では生育は良好。

気菌糸の色は白色。基土菌糸の色はダスティーイエロー
（Ｄｕｓｔｙ　Ｙｅｌｌｏｗ）。水溶性色素はなし。

■イースト・麦芽寒天培地２７°Ｃ１１４日間培養の集落では生育は良好。

気菌糸の色は暗灰色。基土菌糸の色はメロンイエロー（
Ｍｅｌｏｎ　Ｙｅｌｌｏｕ）。水溶性色素はサンライト
イエロー（Ｓｕｎ　Ｌｉｇｈｔ　Ｙｅｌｌｏｗ）。

■オートミール寒天培地２７℃、１４日間培養の集落では生育は良好。

気菌糸の色は白色。基土菌糸の色はアイポリ−ティント
（Ｉｖｏｒｙ　Ｔｉｎｔ）。水溶性色素はりトル　ホイ
ート　（Ｌｔ　ｗｈｅａｔ）　。

なお、色の記載についてはカラー・ハーモニー・マニ、
ｘアル（Ｃｏｌｏｒ　Ｈａｒｍｏｎｙ　Ｍａｎｕａｌ）
に従った。

（以下余白）１Ｃ）生理学的性質（表中、「＋」は陽性、「−」は陰性を意味する。）！
ｄ＋炭素源の同化性（表中、「＋」は同化、「−」は同化しなかった。）以
上の培養所見に基づいて、バージイズ　マニュアル　オ
フ　ディタミネイティブ　バクテリオロジー（Ｂｅｒｇ
ｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔ
ｉｖｅ　Ｂａｃ−ｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第８版およびイ
ンターナショナル　ストレプトマイセス　プロジェクト
　（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ　ｐｒｏｊｅｃｔ）の指針を参考に、近縁菌種を検
討するとストレプトマイセス　パルブルス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｍｙｃｅＳｐａｒｖｕｌｌｕｓ）があげられる。しか
し、前記した培養所見を比較すると、形態はほぼ一致す
るものの、生理学的性質においてＮ−１株は１０％塩化
ナトリウムで生育しない。硝酸塩を還元する。Ｌ−ラム
ノースを同化しない。また、グルコース・アスパラギン
寒天培地において、集落の基体菌糸の色が黄色であるの
に対し、パルブルスは茶色い等の点で相違する。

以上のことから、Ｎ−１株は相違点はあるものの、基本
的には、ストレプトマイセス　パルブルス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｍｙｃｅｓ　ｐａｒｖｕｌｌｕｓ　）と一致するので
、ストレプトマイセス　パルブルス　サブスピーシズ　
シトリナス（Ｓｔｒｅｐｔｍｙｃｅｓ　ｐａｒｖｕｌｌ
ｕｓ　ｓｕｂ　５ｐｃｉｔｒｆｎｕｓ　）と命名した。

木菌は、通産省工業技術院微生物工業研究所へ、昭和６
０年４月３０日に第８２２４号として受託されている。

本閑においては、分子量約５２０００のコラゲナーゼを
生産する性質を失わない限り、他の生理学的生化学的性
状が変異しても本発明に使用することができる。もちろ
ん、それらの変異株が自然の原因に由来するものであっ
ても、人工的に行われるものであってもさしつかえない
。

本発明の方法においては、好ましくは上記のようなＮ−
１株が培養される。ｌ’ｌ−１株は、適当な培養条件下
で発育させると、後記の特性を有する新規コラゲナーゼ
を生産する。

培地には、Ｎ−１株は同化しうる炭素源、消化しうる窒
素源および無機塩などを含有させることができる。さら
にこの培地に０．１重量％〜５重量％程度、好ましくは
０．５重量％〜２重量％程度のゼラチンを含有させるこ
とが望ましい。また、必要に応じて微量栄養促進物質、
前駆物質などの微量有効物質を培地に添加してもよい。

Ｎ−１株が同化しうる炭素源としては、グルコ−ス、マ
ンニット、デンプン、フルクトースなどが挙げられる。

消化しうる窒素源としては、肉エキス、ペプトンなどの
有機窒素化合物または硝酸ナトリウム、硫酸アンモニウ
ムなどの無機窒素化合物が挙げられるが、コラゲナーゼ
の分離精製工程を鑑み、無機窒素化合物が望ましい。

培養を行う場合、Ｎ−１株を適切な培地に接種し、好気
的条件下で培養する。培地は中性付近が良く、培養時の
温度は１０〜３７℃で生育可能であるが、２７〜３３℃
に保つのがよい。培養は４〜５日で終了する。

培養物から当該コラゲナーゼを採取する方法としては、
微生物の生産する代謝産物を採取するのに通常用いられ
る手段を適宜に利用すればよい。

すなわち、濾過、濃縮、活性炭、シリカゲル、アルミナ
および合成吸着剤などによる吸着クロマトグラフィー、
各種溶剤による転溶、沈澱、不純物の除去、あるいは透
析などの手段が単独または、組み合わせて利用される。

特に好ましくは、デアニートヨパール（ＤＥＡＥ−ＴＯ
ＹＯＰＥＡＰＬ）などの陰イオン交換樹脂を使用するク
ロマトグラフィーが使用される。

具体的な方法としては、例えば、培養後遠心分離をし、
陰イオン交換樹脂系の充填剤（例えば、ＤＥＡＥ−ＴＯ
ＹＯＰＥＡＲＬ　　Ｇ−６５０Ｍなど）を使用したカラ
ムクロマトグラフィーで溶出分離して所望のコラゲナー
ゼを得ることができる。

さらに分子篩のできる充填剤（例えば、セファデックス
、トヨパール、セルロファインなど）を用いたゲル濾過
に付すのが望ましい。

〔作用・効果〕

本発明の新規コラゲナーゼは、好気性菌であるストレプ
トマイセス属菌が産生しうるものであり、培養装置とし
て、嫌気培養装置を必要とせず、通常の振盪培養装置に
て培養して産生される。また、培地として高価な天然培
地を使用せずともよく、安価なゼラチンを含む合成培地
にて培養、産生される。

また、本発明の製造方法によれば、夾雑物が少ないので
、分離、精製が容易である。

本発明のコラゲナーゼは、動物組織からの細胞の分散、
コラーゲンゲル内培養におけるゲル消化、創面浄化等に
有用であり、その使用方法は従来既知のコラゲナーゼと
同様である。

〔実施例〕

次に、実施例にて本発明のコラゲナーゼの採取方法とコ
ラゲナーゼの性質について述べる。

実施例ｌＮ−１株を次の成分を含有する培地：デンプン　　　　　　　　　　　　１０ｇゼラチン　　
　　　　　　　　　　１０ｇリン酸水素カリウム　　　
　　　　　１ｇ硫酸マグネシウム・７水和物　　　　１
ｇ塩化ナトリウム　　　　　　　　　　１ｇ硫酸アンモ
ニウム　　　　　　　　　　２ｇ炭酸カルシウム　　　
　　　　　　　２ｇ硫酸第一鉄・７水和物　　　　　　
　１ｍｇ塩化マンガン・４水和物　　　　　　１ｍｇ硫
酸亜鉛・７水和物　　　　　　　　１ｍｇ以上を水１１
２に熔解したもの（作成した培地はｐＨ７，０〜７．４である。）で、３
０℃で５日間振盪培養した。培養液に硫酸アンモニウム
５５％飽和分画を行い、１１００００ｒｐで１０分間遠
心分離をした。その上澄液を０．０２５モルイミダゾー
ル・塩酸溶液（ｐ）１７．０）に透析した。

得られた透析液をデアニートヨバール（ＤＥＡＥ−ＴＯ
ＹＯＰＥＡＲＬ）を充填したカラムに吸着させ、０．１
〜０．２５モルの塩化ナトリウム溶液で溶出した。溶出
液をセファデックスＧ−１００を用い、０．１モルリン
酸緩衝液（ｐＨ７，０）でゲル濾過を行なって目的とす
るコラゲナーゼを得た。かくして、得られたコラゲナー
ゼの特性は以下のとおりである。

■分子量実施例で得たコラゲナーゼをさらに、クロマトフオーカ
シングによって精製し、それを０．１モルの硫酸ナトリ
ウムを含有する５０ミリモルのリン酸ナトリウム緩衝液
（ｐＨ６，８）を用い、ＴＳＫ　Ｇ３０００Ｓ−でゲル
濾過をし、分子量を求めた。その結果を第１図に示す。

その結果、○印で示す分子量５２０００付近に目的物質
であるコラゲナーゼを得た。第１図中、１はアルドラー
ゼ（分子量１５８０００）、２及び３はアルブミン（分
子量はそれぞれ６１３０００．４５０００）、４はキモ
トリプシノーゲンＡ（分子量２８０００）および５はチ
トクロームＣ（分子量１２５００）を示す。

■基質特異性：豚股由来のペプシン可溶化コラーゲン溶液（３ｍｇ／ｍ
／）　２４−に精製コラゲナーゼ液（０，０１％）３ｍ
ｌを加え、更に１．４モル塩化ナトリウムを含む０．１
モルリン酸緩衝液（ｐＨ７，４）を３１１Ｉ！加えて３
７℃ゲル化後、３０℃で２４時間反応させた。反応後ゲ
ルの溶解液を凍結乾燥し、コラゲナーゼ分解物を得た。

（＋）コラーゲン（分子量３０００００）　１モル相当
のコラゲナーゼ消化物のＮ末端アミノ酸残基数は、９３
でグリシンのみであった。（直接エドマン分解によるフ
ェニルチオヒダントイン化法による薄層クロマトグラフ
ィーによって同定）（ｉｉ）コラーゲン（分子量３０００００）　１モル相
当のコラゲナーゼ消化物のＣ末端アミノ酸残基数は、次
の通りである（無水ヒドラジンによる無触媒ヒドラジン
分解を行ないアミノ酸分析計によって定量同定）：ヒドロキシプロリン　　１９．２４アスパラギン酸　　　　　０．４５トレオニン　　　　　　　２．０４セリン　　　　　　　　４．８７グルタミン酸　　　　　　０．４８プロリン　　　　　　　　　１．４４グリシン　　　　　　　　４．９５アラニン　　　　　　　１５．０８バリン　　　　　　　　２．２４イソロイシン　　　　　　０．７１ロイシン　　　　　　　　２．７１ヒドロキシリジン　　　　２．８６リジン　　　　　　　　　３．９４ ■酵素活性測定法（合成基質による測定法）基質（Ｃｂ
ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ：　Ｃｂ
ｚはカルボベンゾキシを意味する）を５０ミリモルトリ
スー塩酸緩衝液（ｐＨ７，４）で２ミリモル溶液として
そのＱ、　５　ｍｌと酵素液Ｑ、　５　ｍｌを混合し、
３０°Ｃで３０分間反応後ニンヒドリン溶液ｉ　ｍｌを
加え、１５分間沸騰水中に保つ。その後ただちに水冷し
５０％エタノール５ｍｌを加え、激しく振盪し、５７０
ｎｍにおける吸光度を測定した。上記条件でＧｌｙ−Ｐ
ｒ。

を１１生成するとき１ｕｎｉｔとした。

ここで用いるニンヒドリン溶ｆ（ｌはメチルセロリルブ
と４Ｍ酢酸緩衝液を３：１に混合し、窒素置換したもの
にニンヒドリンを２％濃度に加え溶解後ヒドリンダンチ
ンを０．１２５％濃度に加えたものである。

■至適温度コラゲナーゼの０．００２％水溶液を作成し、その温度
に対する酵素活性を調べた。その結果を第２図に示す。

至適温度は３０℃付近で、５５°Ｃ以上ではコラゲナー
ゼは失活した。

■熱安定性０．１モルリン酸ナトリウム緩衝液（ｐｌ＋７．０）に
コラゲナーゼが０．００２％になるように熔解し、所定
の温度で１時間加熱した。その結果を第３図に示す。３
０℃付近ではほとんど活性は失われず、４５℃以上でほ
ぼ不活性となった。

■ｐＨに対する酵素活性および安定性緩衝液に１、ｐＨ３〜６付近では酢酸緩衝液、ｐｌ（５
〜８付近ではリン酸緩衝液、ｐＨ８〜１０付近ではホウ
酸緩衝液、ｐＨ９〜１１付近では炭酸水素ナトリウム−
水酸化ナトリウム緩衝液を用い、コラゲナーゼを０．０
０２％溶液となるように加え、酵素活性を調べた。また
、それぞれのコラゲナーゼ溶液を２４時間処理した。そ
の結果を第４図及び第５図に示した。なお第４図はｐＨ
と活性の関係、第５図はｐＨ安定性を示すものである。

その結果、至適ｐ）１は７．０〜８゜０であり、ｐＨ５
，５〜９．５では安定であった。

■（＋）金属イオン系に対する影響最終金属イオン濃度が１０４モルとなるようにコラゲナ
ーゼ０．００２％溶液を作成した。金属イオンを含まな
いコラゲナーゼ溶液の酵素活性を１００％としたとき、
各種金属イオンを含むコラゲナーゼ溶液の酵素活性を調
べ、以下の表１に示した。

表１（ｉｔ）阻害剤系に対する影響最終阻害剤濃度が２ｘｌＯ−”モルとなるようにコラゲ
ナーゼ０．００２％溶液を作成した。阻害剤を含まない
コラゲナーゼ溶液の酵素活性を１００％としたとき、各
種阻害剤を含むコラゲナーゼ溶液の酵素活性を調べ、以
下の表２に示した。

表２（トリプシン阻害剤は１．６６ｍｇ／ｍ＋添加）その結
果、鉄イオンの存在により酵素活性は促進され、水銀イ
オンおよびカドミウムイオンの存在により酵素活性は阻
害された。また、阻害剤としてＥＤＴＡ、８−ヒドロキ
シキノリン、シアン化カリウムで強く阻害された。

【図面の簡単な説明】

第１図はゲル濾過による溶出量と溶出物の分子量との関
係を示すグラフである。○印は本発明のコラゲナーゼを
示す。第２図および第３図は温度と酵素活性との関係を示した
グラフである。第４図および第５図はｐＨと酵素活性との関係を示した
グラフである。特許出願人　新田ゼラヂン株式会社ｔで）２図至道巳監既（°Ｃ）第３図熱系ｔヨ定・ト性Ｌ（’（：）第４図主光ｉｐＨ第５図ｐｉ−１＋二１トする９宣乙・を生手　続　（甫　正　書（自発）昭和６０年１０月３日

Claims

【特許請求の範囲】

（１）ストレプトマイセス属に属する菌株が産生し得、
ＴＳＫ　Ｇ３０００　ＳＷゲルを用る高速液体クロマト
グラフィーによって測定した分子量が約５２０００であ
るコラゲナーゼ。
（２）以下の理化学的性質を有する特許請求の範囲第（
１）項記載のコラゲナーゼ。［１］外観：淡黄色粉末（凍結乾燥）［２］基質特異性：（ｉ）コラーゲン（分子量３０００００）１モル相当の
コラゲナーゼ消化物のＮ末端アミノ酸残基数は９３でグ
リシンのみである。（ｉｉ）コラーゲン（分子量３０００００）１モル相当
のコラゲナーゼ消化物のＣ末端アミノ酸残基数は次の通
りである：ヒドロキシプロリン　１９．２４アスパラギン酸　０．４５トレオニン　２．０４セリン　４．８７グルタミン酸　０．４８プロリン　１．４４グリシン　４．９５アラニン　１５．０８バリン　２．２４イソロイシン　０．７１ロイシン　２．７１ヒドロキシリジン　２．８６リジン　３．９４［３］至適温度：３０℃（０．００２％水溶液）、５５
℃以上では不活性となる。［４］至適ｐＨ：ｐＨ７．０〜８．０（但し、ｐＨ４以
下、ｐＨ１１以上では不活性となる）［５］鉄イオンの存在により酵素活性が促進され、水銀
イオン、カドミウムイオン、ＥＤＴＡの存在により酵素
活性が阻害される。［６］分子量：ＴＳＫ　Ｇ３０００　ＳＷ　ゲルを用い
る高速液体クロマトグラフィーによって測定した分子量
は約５２０００［７］等電点：約ｐＩ５．４
（３）ストレプトマイセス属に属する菌株を培養し、培
養物から以下の性質を有するコラゲナーゼを採取するこ
とを特徴とするコラゲナーゼの製造方法。［１］外観：淡黄色粉末（凍結乾燥）２基質特異性：（ｉ）コラーゲン（分子量３０００００）１モル相当の
コラゲナーゼ消化物のＮ末端アミノ酸残基数は９３でグ
リシンのみである。（ｉｉ）コラーゲン（分子量３０００００）１モル相当
のコラゲナーゼ消化物のＣ末端アミノ酸残基数は次の通
りである：ヒドロキシプロリン　１９．２４アスパラギン酸　０．４５トレオニン　２．０４セリン　４．８７グルタミン酸　０．４８プロリン　１．４４グリシン　４．９５アラニン　１５．０８バリン　２．２４イソロイシン　０．７１ロイシン　２．７１ヒドロキシリジン　２．８６リジン　３．９４［３］至適温度：３０℃（０．００２％水溶液）、５５
℃以上では不活性となる。［４］至適ｐＨ：ｐＨ７．０〜８．０（但し、ｐＨ４以
下、ｐＨ１１以上では不活性となる）［５］鉄イオンの存在により酵素活性が促進され、水銀
イオン、カドミウムイオン、ＥＤＴＡの存在により酵素
活性が阻害される。［６］分子量：ＴＳＫ　Ｇ３０００　ＳＷ　ゲルを用い
る高速液体クロマトグラフィーによって測定した分子量
は約５２０００［７］等電点：約ｐＩ５．４
（４）培養が好気的条件下で行われる特許請求の範囲第
（３）項記載の方法。
（５）培養される菌がストレプトマイセス　パルブルス
　Ｎ−１株である特許請求の範囲第（３）項記載の方法
。
（６）培養される菌が微工研菌寄第８２２４号である特
許請求の範囲第（３）項記載の方法。