JPS61290362A - 微粒子測定法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、微粒子の測定法に関する。詳しくは、微粒子
又は微粒子の集合体を自動的に分析し、同時に多種類の
情報を１９る方法に関する。

［従来の技術］ 免疫学の分野で、抗原または抗体を検出するための各種
の方法が研究されている。その中で、フローサイトメト
リー法は、極めて有力な方法である。この方法は、光学
機鼎分析に関するものでありｍ胞を１個づつ流し、細胞
粒子にレーザー光などをあてて、その散乱光を測定する
ことにより、粒子の大ぎさ、色、或いは、予め細胞を蛍
光物質等で標識づけしておぎ、その蛍光強度測定等によ
り細胞の形質を測定するものである。しかしながら、従
来の方法では、測定に使える蛍光物質や、測定できる波
長等に制約があるため、−回の測定で測れる形質の種類
は限られており、多種類の抗原、抗体等を測定するには
、何回も測定をくり返す必要があり、時間的にも、経費
的にも又、精度の面でも好ましいものとは云えない。

［発明が解決しようとする問題点］ 本発明は、上記欠点を除去するためになされたもので、
フローサイトメトリー法において、同時にしかも簡便に
多種類の情報を（することにより、測定を効率的かつ正
確に行なうことを目的とする。

［問題点を解決覆るだめの手段］ 前記目的を達成するためのこの発明の概要は、微粒子を
フローし、測定箇所を通過する微粒子又は微粒子の集合
体のｎ種の形質を、実質的に同時に測定し、そのうち、
選択された（ｎ−１＞種又は（ｎ−２＞種以下の形質に
ついての各測定信号について、予め設定した測定信号の
大きさで、各２以上のグループ分けできる信号弁別回路
により、被測定微粒子又は微粒子の集合体がどのグルー
プに所属するかを判定し、残りの１種又は２種以上につ
いての測定信号の大きさを、同一グループ毎、測定信号
の大きさ毎に積算し、微粒子の形質を多項目同時に判定
することを特徴とする微粒子測定法である。ここで、ｎ
は、２又は３以上の自然数である。

［発明の実施例］ 実施例１ よずｎ−２の例について説明する。

微粒子として、測定−ヒ明らかに異なる大きさと判定で
きる粒径、例えば１μ、２μ、３μのラテックス粒子（
以下粒子Δ、Ｂ、Ｃとする）を用い、粒子の異なる大き
さ毎に異なる抗体を固定する。

この粒子を測定対象物の溶解あるいは懸濁した液と混合
し、抗原・抗体反応により、測定対象物を粒子と結合さ
せる。

更に上記液に蛍光標色された抗体を加え、粒子に結合し
た、抗原・抗体反応により測定対象物の量に見合った蛍
光色素が粒子に結合した状態を作り出す。

この懸濁液を、フローナイトメーターに流し、まず第１
の測定パラメーターである粒子の大きさ或いは容積によ
り測定信号を弁別する。この弁別された信号Ａ、Ｂ、Ｃ
を用い、同時に計測された蛍光強度の信号を、その弁別
信号毎即ち、粒子の大きさ毎に、その蛍光信号の大きさ
毎に計数する。

測定対象物として、血液中の物質抗体として、腫瘍マー
カーを使用すれば、腫瘍マーカー毎の血液中の抗原量を
測定することができる。第１図に実施例１実滴のための
信号処理装置のフローチャートを示す。１，２１は、そ
れぞれ粒子の大きさ及び蛍光強度測定の検出センサーで
ある。粒子の大きさの測定値は、プリアンプ２、ピーク
ホールド３、ＡＤ変換器４で、ディジタル化し、一時記
憶５した後、信号判定回路６で、弁別し、対応するゲー
ト２６へ送られる。一方、同時に測定された蛍光強度の
測定値は、同様にディジタル化され、対応する粒子大き
さのゲート２６を通過し、粒子の大きさのグループ毎に
、データメモリ２７に記憶され、ヒストグラム化される
。

第２図に、粒子の径別ヒストグラムを示す。粒子径を、
Ｏ〜１，５μ、１．５〜２．５μ、２．５μ〜で、Ａ、
Ｂ、Ｃにグループ分けし、Ａ、Ｂ、Ｃグループ毎の蛍光
強度の測定値を、ヒストグラムにしたものを、第３図に
示す。

実施例２ ｎ＝３で２種の形質についての信号で、グループ分はす
る場合の例について説明する。

実施例１と同様に、粒径１μ、２μ、３μのラテックス
粒子（△、Ｂ、Ｃ）を用い、各々の径のも（７）ニ”）
　イＴ、Ｆｒ丁Ｃ（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｉｎ　１ｓｏ
ｔｈｉｃｙａｎａｔｅ）で緑色に標識づけされたものと
（Ａ’　、Ｂ’　。

Ｃ′　）と標識づけされないもの（Ａ、、Ｂ、Ｃ）を用
意する。粒子（Ａ、Ｂ、Ｃ，△’　、Ｂ’　、Ｃ’　）
に、異種の抗体を固定する。この粒子を測定対象物の溶
解あるいは、懸濁した液と混合し、抗原・抗体反応によ
り、測定対象物を粒子と結合さぼる。

更に上記液に、上記とは異なる波長の蛍光標識物質ＰＩ
（Ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ　Ｉｏｄｉｄｅ）で赤色に蛍光標
色された抗体を加え、粒子に結合した抗原・抗体反応に
より測定対象物の最に見合った蛍光色素が粒子に結合し
た状態を作り出ず。

この懸濁液を実施例１と同様に公知のフローメーターに
流し、まず第１の測定パラメーターである粒子の大きさ
或いは容積により測定信号をＡ。

Ｂ、Ｃに弁別づ−る。次に第２の測定パラメーターであ
る緑色蛍光の強度をはかり、その有無によりΔ、Ｂ、Ｃ
を△、Ｂ、ＣとＡ’　、１３’　、Ｃ’　に弁別する。

この弁別されたＡ、Ｂ、Ｃ，Δ１．Ｂ＋　。

Ｃ′について、同時に計測された赤色蛍光の強度をはか
ることにより、６種の異なる抗体Ａ、Ｂ。

Ｃ，Ａ’　、Ｂ’　、Ｃ’　に対する抗原の指を、同時
に測定できる。

第４図に、実施例２実施のための信号処理装置のフロー
チャートを示す。

以上説明した方法と同様に測定センサー及びパラメータ
ーを増やせば、ｎが４以上のものについても同様の測定
ができ、１回の測定で、より多くの情報が得られる。実
施例１，２では、大きさの一定の粒子に、抗体を固定し
たが抗原を固定することも出来るし、実施例２で粒子を
緑色に標識づけしたが、蛍光物質の濃度により、３以上
にグループ分けすることも可能である。

［発明の効果］ 以上説明したように、本発明の方法によれば、微粒子又
は微粒子の集合体を、自動的に分析し、同時に多種類の
正確な情報が得られる。

【図面の簡単な説明】

第１図、第４図は、本発明を実施するための信号処理装
置のフローチャートであり、第２図、第３図は、測定例
を模式的に示したもので第２図は粒子の径別ヒストグラ
ム、第３図は粒子径グループ毎の蛍光強度の測定値のヒ
ストグラムを示す。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 微粒子をフローし、測定箇所を通過する微粒子又は微粒
   子の集合体のｎ種の形質を、実質的に同時に測定し、そ
   のうち、選択された（ｎ−１）種又は（ｎ−２）種以下
   の形質についての各測定信号について、予め設定した測
   定信号の大きさで各２以上のグループ分けできる信号弁
   別回路により、被測定微粒子又は微粒子の集合体がどの
   グループに所属するかを判定し、残りの１種又は、２種
   以上についての測定信号の大きさを、同一グループ毎、
   測定信号の大きさ毎に積算し、微粒子の形質を多項目同
   時に判定することを特徴とする微粒子測定法。