JPS6129932B2 - - Google Patents
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- JPS6129932B2 JPS6129932B2 JP48124338A JP12433873A JPS6129932B2 JP S6129932 B2 JPS6129932 B2 JP S6129932B2 JP 48124338 A JP48124338 A JP 48124338A JP 12433873 A JP12433873 A JP 12433873A JP S6129932 B2 JPS6129932 B2 JP S6129932B2
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- C07K—PEPTIDES
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- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
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- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/085—Staphylococcus
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- G01—MEASURING; TESTING
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- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
- G01N33/545—Synthetic resin
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- G—PHYSICS
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、遊離した形で存在するかあるいは一
つまたは二つ以上の基または物質が任意に結合し
ている抗原に結合されているFc―パート（Fc―
part）をもつて存在している少くとも一つの免疫
グロブリンまたはその遊離のFc―フラグメント
（Fc―fragment）を、液体の存在下で、上記液体
に不溶性の重合体に対して、重合体に付着した物
質の助けによつて結合する方法に関する。本発明
の方法は、重合体に付着した物質が、微性物から
得られた、少くとも一つのポリペプチドであり、
このポリペプチドに対して、免疫グロブリンの
Fc―パートまたは遊離したFc―フラグメントが
結合しうることを特徴とする。
つまたは二つ以上の基または物質が任意に結合し
ている抗原に結合されているFc―パート（Fc―
part）をもつて存在している少くとも一つの免疫
グロブリンまたはその遊離のFc―フラグメント
（Fc―fragment）を、液体の存在下で、上記液体
に不溶性の重合体に対して、重合体に付着した物
質の助けによつて結合する方法に関する。本発明
の方法は、重合体に付着した物質が、微性物から
得られた、少くとも一つのポリペプチドであり、
このポリペプチドに対して、免疫グロブリンの
Fc―パートまたは遊離したFc―フラグメントが
結合しうることを特徴とする。
本明細書に用いられるポリペプチドという用語
は、ポリペプチドとして知られているタンパク質
も含み、ポリペプチドは炭水化物の単位を含有す
ることができる。
は、ポリペプチドとして知られているタンパク質
も含み、ポリペプチドは炭水化物の単位を含有す
ることができる。
本明細書に用いられる抗原という用語はまたハ
プテン（付着体）を含む。
プテン（付着体）を含む。
本発明は、遊離の形で存在するかまたは抗原に
結合したFab―パートをもつて存在する免疫グロ
ブリンを上記液体に不溶性の重合体に結合するた
めの簡便特異的かつ可逆的な方法に関する。とい
うのは、本発明によれば、免疫グロブリンは、そ
のFc―パートを越えて重合体の固相に結合さ
れ、抗原の特異性Fab―パートはそつくりもとの
ままになつているからである。Fab−パートは抗
原に結合されることができる。すなわちそれ自身
を抗原に結合せしめることができる。
結合したFab―パートをもつて存在する免疫グロ
ブリンを上記液体に不溶性の重合体に結合するた
めの簡便特異的かつ可逆的な方法に関する。とい
うのは、本発明によれば、免疫グロブリンは、そ
のFc―パートを越えて重合体の固相に結合さ
れ、抗原の特異性Fab―パートはそつくりもとの
ままになつているからである。Fab−パートは抗
原に結合されることができる。すなわちそれ自身
を抗原に結合せしめることができる。
結合しようとする免疫グロブリンまたはその遊
離のFc―フラグメントはいろいろの種類の動
物、主に背椎動物、好ましく哺乳動物から得られ
る。免疫グロブリンは、周知のように、いろいろ
の免疫グロブリンのクラスに属する。例えばクラ
スＡ（IgA）、クラスＤ（IgD）、クラスＥ
（IgE）、クラスＧ（IgG）およびクラスＭ
（IgM）である。本発明が特に価値があるのは、
IgG―クラスに属する免疫グロブリンについて用
いられるからである。というのは、IgG―クラス
は免疫グロブリンの中でも量が多いからである。
免疫グロブリンのFc―パートは、酵素を用いる
周知の方法によつて、それに該当するFc−フラ
グメントに分割されうる。
離のFc―フラグメントはいろいろの種類の動
物、主に背椎動物、好ましく哺乳動物から得られ
る。免疫グロブリンは、周知のように、いろいろ
の免疫グロブリンのクラスに属する。例えばクラ
スＡ（IgA）、クラスＤ（IgD）、クラスＥ
（IgE）、クラスＧ（IgG）およびクラスＭ
（IgM）である。本発明が特に価値があるのは、
IgG―クラスに属する免疫グロブリンについて用
いられるからである。というのは、IgG―クラス
は免疫グロブリンの中でも量が多いからである。
免疫グロブリンのFc―パートは、酵素を用いる
周知の方法によつて、それに該当するFc−フラ
グメントに分割されうる。
本発明の方法によれば、免疫グロブリンまたは
その遊離のFcフラグメントはラベル付きである
場合もあるし、またラベル付きでない場合もあ
る。「ラベル付きである」というのは、免疫グロ
ブリンまたはその遊離のFc−フラグメントが、
分析のために、特徴のある基または原子をもつて
提供されることを意味する。特徴のある基または
原子とは、放射性の原子、このような原子を含ん
でいる基、螢光を発する基あるいは酵素としての
活性を有する一つまたは二つ以上の置換基であ
る。同様にして、抗原が免疫グロブリンのFab―
パートに結合されているならば、上記のような意
義において、抗原またはこれに結合した基が、ラ
ベル付きでない場合もあるし、またラベル付きの
場合もある。
その遊離のFcフラグメントはラベル付きである
場合もあるし、またラベル付きでない場合もあ
る。「ラベル付きである」というのは、免疫グロ
ブリンまたはその遊離のFc−フラグメントが、
分析のために、特徴のある基または原子をもつて
提供されることを意味する。特徴のある基または
原子とは、放射性の原子、このような原子を含ん
でいる基、螢光を発する基あるいは酵素としての
活性を有する一つまたは二つ以上の置換基であ
る。同様にして、抗原が免疫グロブリンのFab―
パートに結合されているならば、上記のような意
義において、抗原またはこれに結合した基が、ラ
ベル付きでない場合もあるし、またラベル付きの
場合もある。
本発明のもう一つの特徴によれば、微生物から
得た上記ポリペプチドは、スタフイロコツカスオ
ウレアス（Staphylococcus aureus）から得たい
ゆるタンパク質Ａまたは上記タンパク質のフラグ
メントであり、このフラグメントはポリペプチド
の性質を有し、上記免疫グロブリンのFc―パー
トにおいて少くとも一つの免疫グロブリンを結合
することができる〔プロテインＡの性質等につい
ては例えば「Acta path.microbiol.scandinav.」
第75巻（1969年）第466〜480頁および「Eur.J.
Biochem.」第73巻（1977年）第343〜351頁およ
び第78巻（1977年）第471〜490頁等を参照〕。S.
オウレアスから得られる上記ポリペプチド（タン
パク質Ａおよびそのフラグメント）は、IgG―ク
ラスに属する免疫グロブリンを、そのFc―パー
トにおいて結合することができる。その他のポリ
ペプチドの例としてはスタフイロコツカス エピ
デルミジス（Staphylococcus epidermidis）およ
びその他のバクテリア菌株から得たポリペプチド
がある。
得た上記ポリペプチドは、スタフイロコツカスオ
ウレアス（Staphylococcus aureus）から得たい
ゆるタンパク質Ａまたは上記タンパク質のフラグ
メントであり、このフラグメントはポリペプチド
の性質を有し、上記免疫グロブリンのFc―パー
トにおいて少くとも一つの免疫グロブリンを結合
することができる〔プロテインＡの性質等につい
ては例えば「Acta path.microbiol.scandinav.」
第75巻（1969年）第466〜480頁および「Eur.J.
Biochem.」第73巻（1977年）第343〜351頁およ
び第78巻（1977年）第471〜490頁等を参照〕。S.
オウレアスから得られる上記ポリペプチド（タン
パク質Ａおよびそのフラグメント）は、IgG―ク
ラスに属する免疫グロブリンを、そのFc―パー
トにおいて結合することができる。その他のポリ
ペプチドの例としてはスタフイロコツカス エピ
デルミジス（Staphylococcus epidermidis）およ
びその他のバクテリア菌株から得たポリペプチド
がある。
上述したように、本発明による方法は、液体の
存在で行われる。液体は主として水性液体であ
り、適当なPH、例えば中性付近のPHを有する緩衝
食塩水である。
存在で行われる。液体は主として水性液体であ
り、適当なPH、例えば中性付近のPHを有する緩衝
食塩水である。
本発明によれば、微生物から得られるポリペプ
チド、例えば上記のタンパク質Ａまたはそのフラ
グメントは、重合体に共有結合によつて固着され
ることができる。この方法で、ポリペプチドは固
相から溶解されることもなく、また洗浄中に固相
から離れることもなくなる。ポリペプチド例えば
タンパク質を重合体物質に結合するのに従来から
用いられている方法、例えばハロゲン化シアン、
イソシアネートなどの助けを借りて、ポリペプチ
ドを重合体に結合することができる。ここに用い
られる不溶性の重合体物質は類似の目的に従来か
ら用いられている重合体である。すなわち、タン
パク質を重合体に結合するのに用いられる官能基
を有する重合体である。このような官能基は、水
酸基、メルカプト基、第１級および第２級のアミ
ノ基、カルボニル基、ヒドラジド基、ジアゾ基お
よびカルボキシル基である。このような基は、従
来からの方法によつて重合体からポリペプチド
へ、橋カケを行う場合に用いられ、この場合のポ
リペプチドは微生物から得られたポリペプチド、
例えばタンパク質Ａである。用いる液体に不溶性
の重合体は、上記液体中では膨潤することができ
る。例えば、上記重合体は、水性液体が用いられ
る場合には水の中で膨潤する。上記重合体は三次
元網目構造を有し、例えば、多糖類のような重合
体を交サ結合することによつて得られる。このよ
うに、いろいろ異つた重合体が用いられる。セル
ロース、アガロース、ポリアミノスチレン、交サ
結合した重合体（例えば交サ結合した多糖類）、
例えばエピクロルドヒドリンと交サ結合したデキ
ストラン（セフアデツクス（Sephadex）(R)）ま
たはジエポキシド（例えば１，４―ブタンジオー
ル ジグリシドエーテル）と交サ結合したデキス
トラン、あるいはデンプンまたはセルロース誘導
体、あるいはエピクロルヒドリンまたはジエポキ
シドと交サ結合したポリビニル アルコールなど
が上記重合体のいくつかの例である。その他に、
テトラエチレンペンタミンまたはヘキサメチレン
ジアミンを、エピクロルヒドリンまたはジエポキ
シドと反応せしめて得られる不溶性の重合体があ
る。もう一つの例としては、ｐ―アミノフエニル
基によつて置換された、交サ結合したポリアクリ
ルアミド重合体（エンザクリル（Enzacryl）(R
））がある。重合体で構成される固相はいろいろ
異つた形をしている。多くの場合、重合体は、微
粒子物の形である。その他の例としては、重合体
の試験管の側壁が用いられる。
チド、例えば上記のタンパク質Ａまたはそのフラ
グメントは、重合体に共有結合によつて固着され
ることができる。この方法で、ポリペプチドは固
相から溶解されることもなく、また洗浄中に固相
から離れることもなくなる。ポリペプチド例えば
タンパク質を重合体物質に結合するのに従来から
用いられている方法、例えばハロゲン化シアン、
イソシアネートなどの助けを借りて、ポリペプチ
ドを重合体に結合することができる。ここに用い
られる不溶性の重合体物質は類似の目的に従来か
ら用いられている重合体である。すなわち、タン
パク質を重合体に結合するのに用いられる官能基
を有する重合体である。このような官能基は、水
酸基、メルカプト基、第１級および第２級のアミ
ノ基、カルボニル基、ヒドラジド基、ジアゾ基お
よびカルボキシル基である。このような基は、従
来からの方法によつて重合体からポリペプチド
へ、橋カケを行う場合に用いられ、この場合のポ
リペプチドは微生物から得られたポリペプチド、
例えばタンパク質Ａである。用いる液体に不溶性
の重合体は、上記液体中では膨潤することができ
る。例えば、上記重合体は、水性液体が用いられ
る場合には水の中で膨潤する。上記重合体は三次
元網目構造を有し、例えば、多糖類のような重合
体を交サ結合することによつて得られる。このよ
うに、いろいろ異つた重合体が用いられる。セル
ロース、アガロース、ポリアミノスチレン、交サ
結合した重合体（例えば交サ結合した多糖類）、
例えばエピクロルドヒドリンと交サ結合したデキ
ストラン（セフアデツクス（Sephadex）(R)）ま
たはジエポキシド（例えば１，４―ブタンジオー
ル ジグリシドエーテル）と交サ結合したデキス
トラン、あるいはデンプンまたはセルロース誘導
体、あるいはエピクロルヒドリンまたはジエポキ
シドと交サ結合したポリビニル アルコールなど
が上記重合体のいくつかの例である。その他に、
テトラエチレンペンタミンまたはヘキサメチレン
ジアミンを、エピクロルヒドリンまたはジエポキ
シドと反応せしめて得られる不溶性の重合体があ
る。もう一つの例としては、ｐ―アミノフエニル
基によつて置換された、交サ結合したポリアクリ
ルアミド重合体（エンザクリル（Enzacryl）(R
））がある。重合体で構成される固相はいろいろ
異つた形をしている。多くの場合、重合体は、微
粒子物の形である。その他の例としては、重合体
の試験管の側壁が用いられる。
本発明には、また、本発明の方法を行うのに用
いられる補助剤も含まれている。この補助剤は、
主として、本発明の方法を行うのに用いられる液
体に不溶性の重合体であり、この重合体には、微
生物から得られた少くとも一つのポリペプチドが
結合され、上記ポリペプチドは、一つの免疫グロ
ブリンをそのFc―パートにおいて結合すること
ができ、また、免疫グロブリンの遊離したFc―
フラグメントを結合することができる。
いられる補助剤も含まれている。この補助剤は、
主として、本発明の方法を行うのに用いられる液
体に不溶性の重合体であり、この重合体には、微
生物から得られた少くとも一つのポリペプチドが
結合され、上記ポリペプチドは、一つの免疫グロ
ブリンをそのFc―パートにおいて結合すること
ができ、また、免疫グロブリンの遊離したFc―
フラグメントを結合することができる。
本発明による方法について上述したことは、ま
た補助剤についても適用することができる。
た補助剤についても適用することができる。
本発明の方法は、免疫グロブリンまたはその
Fc―フラグメントを、重合体固相に、特異的
に、かつ望むならば可逆的に、結合することを必
要とする、いろいろの分野に適用することができ
る。このような応用例としては、免疫グロブリン
またはFc―フラグメントを精製する場合であ
る。免疫グロブリンまたはそのFc―フラグメン
トは、おだやかな条件下で、例えばPH値またはイ
オン強度を変えることによつて、結合することが
できたり、また分離することができるので、免疫
グロブリンまたはそのFc―フラグメントは極め
て純粋な形で得ることができる。本発明の方法
は、いろいろの免疫グロブリンの混合物におい
て、例えばクラスＧの１種または２種以上の免疫
グロブリンを、他の免疫グロブリンから分離する
のに用いることもできる。
Fc―フラグメントを、重合体固相に、特異的
に、かつ望むならば可逆的に、結合することを必
要とする、いろいろの分野に適用することができ
る。このような応用例としては、免疫グロブリン
またはFc―フラグメントを精製する場合であ
る。免疫グロブリンまたはそのFc―フラグメン
トは、おだやかな条件下で、例えばPH値またはイ
オン強度を変えることによつて、結合することが
できたり、また分離することができるので、免疫
グロブリンまたはそのFc―フラグメントは極め
て純粋な形で得ることができる。本発明の方法
は、いろいろの免疫グロブリンの混合物におい
て、例えばクラスＧの１種または２種以上の免疫
グロブリンを、他の免疫グロブリンから分離する
のに用いることもできる。
本発明の方法は、また、Fc―フラグメントと
Fab−フラグメントの混合物からFc―フラグメン
トを特異的に結合せしめることができるので、
Fab―フラグメントを純粋な形で容易に分離する
ことができる。結合されたFc―フラグメント
は、その後に、おだやかな条件下で適宜な方法
で、可溶性の重合体から分離でき、純粋な形で得
られる。
Fab−フラグメントの混合物からFc―フラグメン
トを特異的に結合せしめることができるので、
Fab―フラグメントを純粋な形で容易に分離する
ことができる。結合されたFc―フラグメント
は、その後に、おだやかな条件下で適宜な方法
で、可溶性の重合体から分離でき、純粋な形で得
られる。
本発明の方法は、免疫グロブリンまたは抗原を
測定するための、沢山の免疫学的な方法に応用す
ることができる。
測定するための、沢山の免疫学的な方法に応用す
ることができる。
本発明の方法および補助剤は、遊離の形または
抗原を結合した形の免疫グロブリンまたはその
Fc―フラグメントを不溶性にするのにも用いら
れる。免疫グロブリンまたはそのFc―フラグメ
ントはラベル付きであることもできる。
抗原を結合した形の免疫グロブリンまたはその
Fc―フラグメントを不溶性にするのにも用いら
れる。免疫グロブリンまたはそのFc―フラグメ
ントはラベル付きであることもできる。
免疫グロブリンが遊離の形で結合されるなら
ば、そのFab―パートは、Fab―パートがその方
へ向つて動いて行くような抗原を結合するのに用
いられる。抗原はラベル付きの形で存在すること
もできる。さらにまた、抗原は、上述したような
ラベル付きの基または物質に結合することができ
る。本発明を例をもつて説明する。
ば、そのFab―パートは、Fab―パートがその方
へ向つて動いて行くような抗原を結合するのに用
いられる。抗原はラベル付きの形で存在すること
もできる。さらにまた、抗原は、上述したような
ラベル付きの基または物質に結合することができ
る。本発明を例をもつて説明する。
例 １
S.オウレアスから純粋のタンパク質Ａを調製
すること Ａ スタフイロコツカス オウレアスからタン
パク質Ａの粗製抽出物を調製すること S.オウレアス、ストレイン コワン
（strain Cowan）を、ヨーロピアン ジヤ
ーナル オブ バイオケミストリー
（Enropean J.Biochem.）第29巻（1972）ペ
ージ572（スエキスト（Sjoquist）ら）に記
載されている方法によつて培養した。
すること Ａ スタフイロコツカス オウレアスからタン
パク質Ａの粗製抽出物を調製すること S.オウレアス、ストレイン コワン
（strain Cowan）を、ヨーロピアン ジヤ
ーナル オブ バイオケミストリー
（Enropean J.Biochem.）第29巻（1972）ペ
ージ572（スエキスト（Sjoquist）ら）に記
載されている方法によつて培養した。
タンパク質を、酵素製造リゾスタフイン
（lysostaphin）によつてバクテリアから分離
した。不溶性の物質を遠心分離によつて除
き、液相を回収した。HClを用いてPHを3.5
に調節し、不溶性の物質を遠心分離によつて
除き、液体を回収した。次いでPHをNaOHを
用いて7.0に調節した。
（lysostaphin）によつてバクテリアから分離
した。不溶性の物質を遠心分離によつて除
き、液相を回収した。HClを用いてPHを3.5
に調節し、不溶性の物質を遠心分離によつて
除き、液体を回収した。次いでPHをNaOHを
用いて7.0に調節した。
このようにして得た液体は、タンパク質を
不純物との混合物の形で含有している粗製の
抽出物である。
不純物との混合物の形で含有している粗製の
抽出物である。
Ｂ IgGを結合したアガロースの調製
市販品セフアロース（Sepharose）(R)4B
（フアルマシア フアイン ケミカルス
（Pharmacia Fine Chemicals）AB、ウプサ
ラ、スエーデン）の形でのアガロースを試験
に用いた。
（フアルマシア フアイン ケミカルス
（Pharmacia Fine Chemicals）AB、ウプサ
ラ、スエーデン）の形でのアガロースを試験
に用いた。
アガロースは水の中で膨潤せしめた微粒子
（40〜190μ）の形で用いた。粒状物は４重量
％のアガロースを含有した。粒状物は先づ水
で洗浄した。粒状物の塊100mlに、50mlの水
を加え、これに、水50ml中の臭化シアン10ｇ
の溶液を、20℃においてかきまぜながら加え
て混合し、５規定のNaOHを加えてPHを10〜
11に保つた。10分後に、粒状物を氷水で注意
して洗浄し、次いで0.2Mの炭酸ナトリウム
―炭酸水素ナトリウム緩衝液（PH9.0温度４
℃）を用いて洗浄した。
（40〜190μ）の形で用いた。粒状物は４重量
％のアガロースを含有した。粒状物は先づ水
で洗浄した。粒状物の塊100mlに、50mlの水
を加え、これに、水50ml中の臭化シアン10ｇ
の溶液を、20℃においてかきまぜながら加え
て混合し、５規定のNaOHを加えてPHを10〜
11に保つた。10分後に、粒状物を氷水で注意
して洗浄し、次いで0.2Mの炭酸ナトリウム
―炭酸水素ナトリウム緩衝液（PH9.0温度４
℃）を用いて洗浄した。
臭化シアンで活性化した粒状物を、人間の
IgG（カビ（Kabi）AB、ストツクホルム、
スエーデンから得たもの）３ｇを含有する。
PH9.0の上記緩衝液120mlを用いて、４℃にお
いてかきまぜながらスラリ化した。
IgG（カビ（Kabi）AB、ストツクホルム、
スエーデンから得たもの）３ｇを含有する。
PH9.0の上記緩衝液120mlを用いて、４℃にお
いてかきまぜながらスラリ化した。
４時間の後、粒状物をろ別し、PH9.0の上
記緩衝液で洗浄し、次いで粒状物を、
0.05M2―アミノ―エタノールと0.2M炭酸ナ
トリウム―炭酸水素ナトリウムを含有する水
溶液（PH9.0）1.5中に懸濁し、４℃におい
て18時間かきまぜを行つた。次いで、粒状物
を、4M尿素を含有する0.1Mリン酸ナトリウ
ム緩衝液（PH6.0）を用いて洗浄し、さら
に、0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液（PH7.0）
を用い、洗浄に用いた液体のOD280nmが
0.01以下になるまで洗浄した。次いで、ゲル
状物を0.1Mグリシン―HCl緩衝液（PH7.0）
で洗浄し、上記0.1Mリン酸ナトリウム緩衝
液（PH7.0）を用いて再度洗浄した。このよ
うにして得た生成物は、粒状物１ml中に結合
されたIgG約30mgを含有した。
記緩衝液で洗浄し、次いで粒状物を、
0.05M2―アミノ―エタノールと0.2M炭酸ナ
トリウム―炭酸水素ナトリウムを含有する水
溶液（PH9.0）1.5中に懸濁し、４℃におい
て18時間かきまぜを行つた。次いで、粒状物
を、4M尿素を含有する0.1Mリン酸ナトリウ
ム緩衝液（PH6.0）を用いて洗浄し、さら
に、0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液（PH7.0）
を用い、洗浄に用いた液体のOD280nmが
0.01以下になるまで洗浄した。次いで、ゲル
状物を0.1Mグリシン―HCl緩衝液（PH7.0）
で洗浄し、上記0.1Mリン酸ナトリウム緩衝
液（PH7.0）を用いて再度洗浄した。このよ
うにして得た生成物は、粒状物１ml中に結合
されたIgG約30mgを含有した。
Ｃ S.オウレアスから得た粗製抽出物からタン
パク質Ａを分離すること 上記Ｂによつて得た。PH7.0の、IgGを結合
した粒状物の塊100mlをクロマトグラフイー
の塔に充テンした。上記Ａによつて得た、タ
ンパク質Ａを含有する、PH7.0の粗製抽出物
500mlを、20℃において、粒状物を充テンし
た塔をゆつくり通過せしめた。この時の流速
を１時間当り50mlに調節した。塔の中の粒状
物を、PH7.0の0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液
を用い、洗浄に用いた液体のOD280nmが
0.02以下になるまで、注意して洗浄した。こ
のようにして得た生成物は、粒状物の塊１ml
中に、結合されたタンパク質Ａ約３mgを含有
した。
パク質Ａを分離すること 上記Ｂによつて得た。PH7.0の、IgGを結合
した粒状物の塊100mlをクロマトグラフイー
の塔に充テンした。上記Ａによつて得た、タ
ンパク質Ａを含有する、PH7.0の粗製抽出物
500mlを、20℃において、粒状物を充テンし
た塔をゆつくり通過せしめた。この時の流速
を１時間当り50mlに調節した。塔の中の粒状
物を、PH7.0の0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液
を用い、洗浄に用いた液体のOD280nmが
0.02以下になるまで、注意して洗浄した。こ
のようにして得た生成物は、粒状物の塊１ml
中に、結合されたタンパク質Ａ約３mgを含有
した。
Ｄ 粒状物からタンパク質Ａを分離すること
上記Ｃによつて得た、粒状物に結合したタ
ンパク質Ａを、0.1Mグリシン―HCl緩衝液
（PH3.0）100mlを用い、塔を溶離することに
よつて、粒状物から分離した。タンパク質Ａ
を含有するグリシン―HCl緩衝液を集めて、
蒸留水によつて透析を行つた。その後、タン
パク質Ａを、凍結乾燥によつて固体の形で得
た。約250mgのタンパク質Ａを純粋の形で得
た。（別法では、透析の代りに、ゲルろ過に
よつて脱塩を行つた。）タンパク質Ａに不純
物の含まれていないことが、免疫学的な試験
によつて示された。
ンパク質Ａを、0.1Mグリシン―HCl緩衝液
（PH3.0）100mlを用い、塔を溶離することに
よつて、粒状物から分離した。タンパク質Ａ
を含有するグリシン―HCl緩衝液を集めて、
蒸留水によつて透析を行つた。その後、タン
パク質Ａを、凍結乾燥によつて固体の形で得
た。約250mgのタンパク質Ａを純粋の形で得
た。（別法では、透析の代りに、ゲルろ過に
よつて脱塩を行つた。）タンパク質Ａに不純
物の含まれていないことが、免疫学的な試験
によつて示された。
Ｓオウレアスから得たタンパク質Ａを結合し
たアガロースの調製 Ｅ タンパク質Ａを結合したアガロースの調製
市販品セフアロース（前出）の形でのアガロ
ースを、試験に用いた。
たアガロースの調製 Ｅ タンパク質Ａを結合したアガロースの調製
市販品セフアロース（前出）の形でのアガロ
ースを、試験に用いた。
アガロースは水で膨潤した微粒子（40〜
190μ）の形で用いた。粒状物は４重量％の
アガロースを含有した。粒状物を最初に水洗
した。水５mlを加えた、粒状物の塊10mlに、
水５ml中の臭化シアン１ｇの溶液を、20℃に
おいてかきまぜながら加えて混合し、１規定
のNaOHを加えてPHを10〜11に保つた。10分
後に、粒状物を氷水で注意して洗浄し、次い
で0.2M炭化ナトリウム―炭酸水素ナトリウ
ム緩衝液（PH9.0.4℃）を用いて洗浄した。
190μ）の形で用いた。粒状物は４重量％の
アガロースを含有した。粒状物を最初に水洗
した。水５mlを加えた、粒状物の塊10mlに、
水５ml中の臭化シアン１ｇの溶液を、20℃に
おいてかきまぜながら加えて混合し、１規定
のNaOHを加えてPHを10〜11に保つた。10分
後に、粒状物を氷水で注意して洗浄し、次い
で0.2M炭化ナトリウム―炭酸水素ナトリウ
ム緩衝液（PH9.0.4℃）を用いて洗浄した。
臭化シアンで活性化した粒状物を、純粋の
タンパク質A50mgを含有する、PH9.0の上記
緩衝液12ml中で、４℃においてかきまぜなが
らスラリ化した。
タンパク質A50mgを含有する、PH9.0の上記
緩衝液12ml中で、４℃においてかきまぜなが
らスラリ化した。
４時間後に、粒状物をろ別し、PH9.0の上
記の緩衝液で洗浄し、その後、粒状物を
0.05M2―アミノ―エタノールと0.2M炭酸ナ
トリウム―炭酸水素ナトリウムの水溶液（PH
9.0）500ml中に懸濁し、４℃において18時
間、かきまぜを行つた。粒状物を、4M尿素
を含有する、0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液
（PH6.0）で洗浄し、次いで0.1Mリン酸ナト
リウム緩衝液（PH7.0）を用い、洗浄に用い
た液体のOD280nmが0.01以下になるまで洗
浄した。ゲル状物を、0.1Mグリシン―HCl緩
衝液（PH3.0）を用いて洗浄し、次いで上記
の0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液（PH7.0）を
用いて再度洗浄した。このようにして得た生
成物は、粒状物の塊１ml当り、結合されたタ
ンパク質Ａ約５mgを含有した。
記の緩衝液で洗浄し、その後、粒状物を
0.05M2―アミノ―エタノールと0.2M炭酸ナ
トリウム―炭酸水素ナトリウムの水溶液（PH
9.0）500ml中に懸濁し、４℃において18時
間、かきまぜを行つた。粒状物を、4M尿素
を含有する、0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液
（PH6.0）で洗浄し、次いで0.1Mリン酸ナト
リウム緩衝液（PH7.0）を用い、洗浄に用い
た液体のOD280nmが0.01以下になるまで洗
浄した。ゲル状物を、0.1Mグリシン―HCl緩
衝液（PH3.0）を用いて洗浄し、次いで上記
の0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液（PH7.0）を
用いて再度洗浄した。このようにして得た生
成物は、粒状物の塊１ml当り、結合されたタ
ンパク質Ａ約５mgを含有した。
人間の血清から得た免疫グロブリンを結合す
ること Ｆ タンパク質Ａを結合したアガロースに結合
すること 上記Ｅにおいて得た、PH7.0の、タンパク
質Ａを共有給合によつて結合している粒状物
の塊10mlをクロマトグラフイーの塔に充テン
した。上記0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液
（PH7.0）10mlを用いて希釈した人間の血清10
mlを、20℃において、粒状物を充テンした塔
の中をゆつくり通過せしめた。通過時間が30
分になるようにした。次いで、粒状物を、塔
の中で、0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液（PH
7.0）を用い、洗浄に用いた液体のOD280nm
が0.02以下になるまで十分に洗浄した。この
ようにして得た生成物は、粒状物に結合され
た、IgGクラスに属する免疫グロブリンを含
有した このように結合された免疫グロブリンは、
簡単な方法、例えばPHまたはイオン強度を変
えることによつて、重合体粒状物から分離す
ることができる。このように、上述したよう
な方法で結合された免疫グロブリンは0.1M
グリシン―HCl緩衝液（PH3.0）を用いて溶
離することによつて粒状物から再分離され
た。粒状物は圧縮されたゲル１ml当り４mgの
ポリペプチドを含有しておりそしてIgG20mg
を結合できた。IgGの回収は約95％であつ
た。グリシン緩衝液（PH3.0）を用いて溶離
されたフラクシヨンを免疫電気泳動法により
検査しそして純粋なIgGであることが明らか
であつた。
ること Ｆ タンパク質Ａを結合したアガロースに結合
すること 上記Ｅにおいて得た、PH7.0の、タンパク
質Ａを共有給合によつて結合している粒状物
の塊10mlをクロマトグラフイーの塔に充テン
した。上記0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液
（PH7.0）10mlを用いて希釈した人間の血清10
mlを、20℃において、粒状物を充テンした塔
の中をゆつくり通過せしめた。通過時間が30
分になるようにした。次いで、粒状物を、塔
の中で、0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液（PH
7.0）を用い、洗浄に用いた液体のOD280nm
が0.02以下になるまで十分に洗浄した。この
ようにして得た生成物は、粒状物に結合され
た、IgGクラスに属する免疫グロブリンを含
有した このように結合された免疫グロブリンは、
簡単な方法、例えばPHまたはイオン強度を変
えることによつて、重合体粒状物から分離す
ることができる。このように、上述したよう
な方法で結合された免疫グロブリンは0.1M
グリシン―HCl緩衝液（PH3.0）を用いて溶
離することによつて粒状物から再分離され
た。粒状物は圧縮されたゲル１ml当り４mgの
ポリペプチドを含有しておりそしてIgG20mg
を結合できた。IgGの回収は約95％であつ
た。グリシン緩衝液（PH3.0）を用いて溶離
されたフラクシヨンを免疫電気泳動法により
検査しそして純粋なIgGであることが明らか
であつた。
例 ２
豚の血清から得た免疫グロブリンを結合するこ
と 例１に記載した方法と類似の方法によつて試験
を行つた。しかしこの場合には、タンパク質Ａを
結合した粒状物は塔の中へ充テンせず、次のよう
にして免疫グロブリンを結合した。タンパク質Ａ
を共有結合によつて結合した粒状物の塊（タンパ
ク質Ａは例１のＥに記載したようにして得られた
ものである）10mlを、0.1Mリン酸ナトリウム
（PH7.0）50ml中に懸濁した。豚の血清10mlを、温
度20℃において10分間かかつて滴下して加えた。
30分後に、粒状物をろ別し、0.1Mリン酸ナトリ
ウム緩衝液（PH7.0）を用いて注意して洗浄し
た。例１の場合と同じようにして、IgGクラスに
属する免疫グロブリンを粒状物に結合せしめた。
このことは、結合された免疫グロブリンを分離
し、次いで例１に記載した方法と類似の方法で分
析することによつて証明された。
と 例１に記載した方法と類似の方法によつて試験
を行つた。しかしこの場合には、タンパク質Ａを
結合した粒状物は塔の中へ充テンせず、次のよう
にして免疫グロブリンを結合した。タンパク質Ａ
を共有結合によつて結合した粒状物の塊（タンパ
ク質Ａは例１のＥに記載したようにして得られた
ものである）10mlを、0.1Mリン酸ナトリウム
（PH7.0）50ml中に懸濁した。豚の血清10mlを、温
度20℃において10分間かかつて滴下して加えた。
30分後に、粒状物をろ別し、0.1Mリン酸ナトリ
ウム緩衝液（PH7.0）を用いて注意して洗浄し
た。例１の場合と同じようにして、IgGクラスに
属する免疫グロブリンを粒状物に結合せしめた。
このことは、結合された免疫グロブリンを分離
し、次いで例１に記載した方法と類似の方法で分
析することによつて証明された。
例 ３
ポリペプチドの調整
Ａ スタフイロコツカス オウレアスからタン
パク質Ａのポリペプチド フラグメントの粗
製抽出物を調製すること S.オウレアス、ストレイン コワンを、
ヨーロピアン ジヤーナル オブ バイオケ
ミストリー第29巻572ページ（スエキスト
ら）に記載の方法によつて培養した。
パク質Ａのポリペプチド フラグメントの粗
製抽出物を調製すること S.オウレアス、ストレイン コワンを、
ヨーロピアン ジヤーナル オブ バイオケ
ミストリー第29巻572ページ（スエキスト
ら）に記載の方法によつて培養した。
遠心分離によつてバクテリアを分離し、
0.9％NaCl水溶液で洗浄した。バクテリア
100ｇ（湿潤重量）を生理的食塩水150ml中で
スラリ化した。これにトリプシン（キモトリ
プシンの含まれていない）10mgを添加した。
PHは7.2であつた。酵素による処理を、30
℃、PH7.2において30分間行い、その後、大
豆から得たトリプシン抑制剤20mgを加えた。
懸濁液を遠心分離した。上澄液を回収し、ミ
リポアーフイルターによつて無菌ろ過した。
0.9％NaCl水溶液で洗浄した。バクテリア
100ｇ（湿潤重量）を生理的食塩水150ml中で
スラリ化した。これにトリプシン（キモトリ
プシンの含まれていない）10mgを添加した。
PHは7.2であつた。酵素による処理を、30
℃、PH7.2において30分間行い、その後、大
豆から得たトリプシン抑制剤20mgを加えた。
懸濁液を遠心分離した。上澄液を回収し、ミ
リポアーフイルターによつて無菌ろ過した。
無菌ろ過した液体は、ポリペプチドの特性
を有するタンパク質Ａのフラグメントを、不
純物との混合物として含有していた。IgG―
分子のFc―パートに結合しうるフラグメン
トを精製するために、IgGを結合したアガロ
ースの助けによつてフラグメントを単離し
た。
を有するタンパク質Ａのフラグメントを、不
純物との混合物として含有していた。IgG―
分子のFc―パートに結合しうるフラグメン
トを精製するために、IgGを結合したアガロ
ースの助けによつてフラグメントを単離し
た。
Ｂ IgGを結合したアガロースの調製
例１のＢに記載したように、アガロースに
人間のIgGを結合した。
人間のIgGを結合した。
Ｃ S.オウレアスからタンパク質Ａのポリペプ
チド フラグメントを分離すること 上記Ｂによつて得た、PH7.0の、IgGを結合
した粒状物の塊100mlを、クロマトグラフイ
ーの塔に充テンした。上記Ａによつて得た。
タンパク質Ａからのポリペプチド フラグメ
ントを含有する。PH7.0の粗製抽出物100ml
を、20℃において、粒状物を充てんした塔の
中をゆつくり通過せしめた。この場合の流速
を１時間当り50mlに調節した。塔の中の粒状
物を、0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液（PH
7.0）を用いて、洗浄に用いた液体のOD
280nmが0.02以下になるまで注意して洗浄し
た。得られた生成物は、粒状物の塊１ml当
り、結合されたポリペプチド約１mgを含有し
た。
チド フラグメントを分離すること 上記Ｂによつて得た、PH7.0の、IgGを結合
した粒状物の塊100mlを、クロマトグラフイ
ーの塔に充テンした。上記Ａによつて得た。
タンパク質Ａからのポリペプチド フラグメ
ントを含有する。PH7.0の粗製抽出物100ml
を、20℃において、粒状物を充てんした塔の
中をゆつくり通過せしめた。この場合の流速
を１時間当り50mlに調節した。塔の中の粒状
物を、0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液（PH
7.0）を用いて、洗浄に用いた液体のOD
280nmが0.02以下になるまで注意して洗浄し
た。得られた生成物は、粒状物の塊１ml当
り、結合されたポリペプチド約１mgを含有し
た。
Ｄ 粒状物からタンパク質Ａのポリペプチド
フラグメントを分離すること 上記Ｃによつて得た、粒状物に結合された
ポリペプチドを、0.1Mグリシン―HCl緩衝液
（PH3.0）100mlを用いて塔を溶離することに
よつて粒状物から分離した。IgG―分子のFc
―パートを結合しうるポリペプチドを含有す
るグリシン―HCl緩衝液を集めて、これを、
セフアデツクスG25(R)（エピクロルヒドリ
ンと交サ結合したデキステランの粒子）の助
けを借りてゲルろ過によつて脱塩した。分子
量約7000のポリペプチド約100mgを、凍結乾
燥によつて単離した。ポリペプチド フラク
シヨンがいくつかの極めて関連性のあるポリ
ペプチドを含有していることが、クロマトグ
ラフイーによつて判つた。これらのポリペプ
チドはすべて、IgG―分子のFc―パートを結
合しうる能力をもつている。ポリペプチド
フラクシヨンが不純物を含まず純粋であるこ
とが、免疫学的な試験によつて判つた。
フラグメントを分離すること 上記Ｃによつて得た、粒状物に結合された
ポリペプチドを、0.1Mグリシン―HCl緩衝液
（PH3.0）100mlを用いて塔を溶離することに
よつて粒状物から分離した。IgG―分子のFc
―パートを結合しうるポリペプチドを含有す
るグリシン―HCl緩衝液を集めて、これを、
セフアデツクスG25(R)（エピクロルヒドリ
ンと交サ結合したデキステランの粒子）の助
けを借りてゲルろ過によつて脱塩した。分子
量約7000のポリペプチド約100mgを、凍結乾
燥によつて単離した。ポリペプチド フラク
シヨンがいくつかの極めて関連性のあるポリ
ペプチドを含有していることが、クロマトグ
ラフイーによつて判つた。これらのポリペプ
チドはすべて、IgG―分子のFc―パートを結
合しうる能力をもつている。ポリペプチド
フラクシヨンが不純物を含まず純粋であるこ
とが、免疫学的な試験によつて判つた。
類似の方法によつて、IgG―分子のFc―パ
ートを結合しうるポリペプチド フラグメン
トを単離するには、先づタンパク質Ａを単離
し、次いで既述したようにして、例えばPH、
8.2の、トリプシンの溶液を用いてタンパク
質Ａを処理することによつて行う。その後、
問題としている特性を有するポリペプチド
フラグメントを分離するには、既述したよう
にして、まづこれを、IgGを結合しているア
ガロースに結合せしめ、次いでこれを分離す
ることによつて行うことができる。
ートを結合しうるポリペプチド フラグメン
トを単離するには、先づタンパク質Ａを単離
し、次いで既述したようにして、例えばPH、
8.2の、トリプシンの溶液を用いてタンパク
質Ａを処理することによつて行う。その後、
問題としている特性を有するポリペプチド
フラグメントを分離するには、既述したよう
にして、まづこれを、IgGを結合しているア
ガロースに結合せしめ、次いでこれを分離す
ることによつて行うことができる。
S.オウレアスから得たタンパク質Ａからのポ
リペプチドを結合したアガロースの調製 Ｅ ポリペプチドを結合したアガロースの調製
市販品セフアロース(R)4B（前出）の形での
アガロースを試験に用いた。
リペプチドを結合したアガロースの調製 Ｅ ポリペプチドを結合したアガロースの調製
市販品セフアロース(R)4B（前出）の形での
アガロースを試験に用いた。
アガロースは水の中で膨潤せしめた微粒子
（40〜190μ）の形で用いた。粒状物は４重量
％のアガロースを含有した。粒状物を最初に
水洗した。水５mlを加えた粒状物の塊10ml
に、水５ml中の臭化シアン１ｇの溶液を、20
℃においてかきまぜながら加えて混合し、１
規定のNaOHを加えてPHを10〜11に保つた。
10分後に、粒状物を氷水で注意して洗浄し、
次いで、0.2M炭酸ナトリウム―炭酸水素ナ
トリウム緩衝液（PH9.0、温度４℃）を用い
て洗浄した。
（40〜190μ）の形で用いた。粒状物は４重量
％のアガロースを含有した。粒状物を最初に
水洗した。水５mlを加えた粒状物の塊10ml
に、水５ml中の臭化シアン１ｇの溶液を、20
℃においてかきまぜながら加えて混合し、１
規定のNaOHを加えてPHを10〜11に保つた。
10分後に、粒状物を氷水で注意して洗浄し、
次いで、0.2M炭酸ナトリウム―炭酸水素ナ
トリウム緩衝液（PH9.0、温度４℃）を用い
て洗浄した。
臭化シアンで活性化した粒状物を、純粋の
ポリペプチド25mgを含有する、PH9.0の上記
緩衝液12ml中において４℃でかきまぜながら
スラリ化した。
ポリペプチド25mgを含有する、PH9.0の上記
緩衝液12ml中において４℃でかきまぜながら
スラリ化した。
４時間後に、粒状物をろ過して分離し、PH
9.0の上記緩衝液を用いて洗浄し、その後、
粒状物を、0.05M2―アミノ―エタノールと
0.2M炭酸ナトリウム―炭酸水素ナトリウム
を含有する水溶液（PH9.0）500ml中に懸濁
し、４℃において18時間かきまぜを行つた。
次いで粒状物を4M尿素を含有する0.1Mリン
酸ナトリウム緩衝液（PH6.0）を用いて洗浄
し、さらに、0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液
（PH7.0）を用い、洗浄に用いた液体の
OD280nmが0.01以上になるまで洗浄した。
次いでゲル状物を0.1Mグリシン―HCl緩衝液
（PH3.0）で洗浄し、上記0.1Mリン酸ナトリ
ウム緩衝液（PH7.0）を用いて再度洗浄し
た。このようにして得た生成物は、IgG―分
子のFc―パートを結合しうる、結合された
ポリペプチドを含有した。
9.0の上記緩衝液を用いて洗浄し、その後、
粒状物を、0.05M2―アミノ―エタノールと
0.2M炭酸ナトリウム―炭酸水素ナトリウム
を含有する水溶液（PH9.0）500ml中に懸濁
し、４℃において18時間かきまぜを行つた。
次いで粒状物を4M尿素を含有する0.1Mリン
酸ナトリウム緩衝液（PH6.0）を用いて洗浄
し、さらに、0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液
（PH7.0）を用い、洗浄に用いた液体の
OD280nmが0.01以上になるまで洗浄した。
次いでゲル状物を0.1Mグリシン―HCl緩衝液
（PH3.0）で洗浄し、上記0.1Mリン酸ナトリ
ウム緩衝液（PH7.0）を用いて再度洗浄し
た。このようにして得た生成物は、IgG―分
子のFc―パートを結合しうる、結合された
ポリペプチドを含有した。
人間の血清から得た免疫グロブリンを結合す
ること Ｆ ポリペプチドを結合したアガロースに結合
すること 上記Ｅにおいて得た、PH7.0の、ポリペプ
チドを共有結合によつて結合している粒状物
の塊10mlを、クロマトグラフイーの塔に充テ
ンした。上記0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液
（PH7.0）10mlを用いて希釈した人間の血清10
mlを、20℃において、粒状物を充テンした塔
の中をゆつくり通過せしめた。通過時間が30
分になるようにした。次いで、粒状物を、塔
の中で、0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液（PH
7.0）を用い、洗浄に用いた液体のOD280nm
が0.02以下になるまで十分に洗浄した。この
ようにして得た生成物は、粒状物に結合され
た、IgGクラスに属する免疫グロブリンを含
有した。
ること Ｆ ポリペプチドを結合したアガロースに結合
すること 上記Ｅにおいて得た、PH7.0の、ポリペプ
チドを共有結合によつて結合している粒状物
の塊10mlを、クロマトグラフイーの塔に充テ
ンした。上記0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液
（PH7.0）10mlを用いて希釈した人間の血清10
mlを、20℃において、粒状物を充テンした塔
の中をゆつくり通過せしめた。通過時間が30
分になるようにした。次いで、粒状物を、塔
の中で、0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液（PH
7.0）を用い、洗浄に用いた液体のOD280nm
が0.02以下になるまで十分に洗浄した。この
ようにして得た生成物は、粒状物に結合され
た、IgGクラスに属する免疫グロブリンを含
有した。
このように結合された免疫グロブリンは、
簡単な方法、例えばPHまたはイオン強度を変
えることによつて重合体粒状物から分離する
ことができる。このように、上述したような
方法で結合された免疫グロブリンは、0.1M
グリシン―HCl緩衝液（PH3.0）を用いて溶
離することによつて粒状物から分離された。
粒状物は圧縮されたゲル１ml当りの４mgのポ
リペプチドを含有しておりそしてIgG20mgを
結合できた。IgGの回収は約95％であつた。
グリシン緩衝液（PH3.0）を用いて溶離され
たフラクシヨンを免疫電気泳動法により検査
しそして純粋なIgGであることが明らかであ
つた。
簡単な方法、例えばPHまたはイオン強度を変
えることによつて重合体粒状物から分離する
ことができる。このように、上述したような
方法で結合された免疫グロブリンは、0.1M
グリシン―HCl緩衝液（PH3.0）を用いて溶
離することによつて粒状物から分離された。
粒状物は圧縮されたゲル１ml当りの４mgのポ
リペプチドを含有しておりそしてIgG20mgを
結合できた。IgGの回収は約95％であつた。
グリシン緩衝液（PH3.0）を用いて溶離され
たフラクシヨンを免疫電気泳動法により検査
しそして純粋なIgGであることが明らかであ
つた。
例 ４
豚の血清から得た免疫グロブリンを結合するこ
と 例３に記載した方法と類似の方法によつて試験
を行つた。しかし、この場合には、ポリペプチド
を結合した粒状物は塔の中へ充テンせず、次のよ
うにして免疫グロブリンを結合した。ポリペプチ
ドを共有結合によつて結合した粒状物の塊（ポリ
ペプチドは例３のＥに記載したようにして得られ
たものである）10mlを、0.1Mリン酸ナトリウム
緩衝液（PH7.0）50ml中に懸濁した。豚の血清10
mlを、温度20℃において10分間かかつて滴下して
加えた。30分後に、粒状物をろ別し、0.1Mリン
酸ナトリウム緩衝液（PH7.0）を用いて注意して
洗浄した。例３の場合と同じようにして、IgGク
ラスに属する免疫グロブリンを粒状物に結合せし
めた。このことは、結合された免疫グロブリンを
分離し、次いで例３に記載した方法と類似の方法
で分析することによつて証明された。
と 例３に記載した方法と類似の方法によつて試験
を行つた。しかし、この場合には、ポリペプチド
を結合した粒状物は塔の中へ充テンせず、次のよ
うにして免疫グロブリンを結合した。ポリペプチ
ドを共有結合によつて結合した粒状物の塊（ポリ
ペプチドは例３のＥに記載したようにして得られ
たものである）10mlを、0.1Mリン酸ナトリウム
緩衝液（PH7.0）50ml中に懸濁した。豚の血清10
mlを、温度20℃において10分間かかつて滴下して
加えた。30分後に、粒状物をろ別し、0.1Mリン
酸ナトリウム緩衝液（PH7.0）を用いて注意して
洗浄した。例３の場合と同じようにして、IgGク
ラスに属する免疫グロブリンを粒状物に結合せし
めた。このことは、結合された免疫グロブリンを
分離し、次いで例３に記載した方法と類似の方法
で分析することによつて証明された。
上記の例の場合と同じようにして、エピクロル
ヒドリンと交サ結合したデキストランの不溶性の
粒子（セフアデツクス(R)）およびセルロース
を、アガロースの代りに用いて類似の結果を得
た。
ヒドリンと交サ結合したデキストランの不溶性の
粒子（セフアデツクス(R)）およびセルロース
を、アガロースの代りに用いて類似の結果を得
た。
本発明の実施の態様を次に列挙する。
１ 背椎動物好ましくは哺乳動物から得られた、
少くとも一つの免疫グロプリンが結合されてい
ることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載
の方法。
少くとも一つの免疫グロプリンが結合されてい
ることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載
の方法。
２ IgG―クラスから得られた、少くとも一つの
免疫グロブリンが結合されていることを特徴と
する特許請求の範囲第１項または前記第１項記
載の方法。
免疫グロブリンが結合されていることを特徴と
する特許請求の範囲第１項または前記第１項記
載の方法。
３ 免疫グロブリンまたはその遊離のFc―フラ
グメントがラベル付きであることを特徴とする
特許請求の範囲第１項および前記項記載の方
法。
グメントがラベル付きであることを特徴とする
特許請求の範囲第１項および前記項記載の方
法。
４ 免疫グロブリンがそのFc―パートにおいて
抗原を結合している場合に、抗原がラベル付き
であることを特徴とする特許請求の範囲第１項
および前記各項記載の方法。
抗原を結合している場合に、抗原がラベル付き
であることを特徴とする特許請求の範囲第１項
および前記各項記載の方法。
５ 微生物から得られるポリペプチドがバクテリ
ウム スタフイロコツカス オウレアスから得
られることを特徴とする特許請求の範囲第１項
および前記各項記載の方法。
ウム スタフイロコツカス オウレアスから得
られることを特徴とする特許請求の範囲第１項
および前記各項記載の方法。
６ 少くとも一つの免疫グロブリンを精製するの
に関連して用いられることを特徴とする特許請
求の範囲第１項および前記各項記載の方法。
に関連して用いられることを特徴とする特許請
求の範囲第１項および前記各項記載の方法。
７ 免疫学的な測定方法に関連して用いられるこ
とを特徴とする特許請求の範囲第１項および前
記各項記載の方法。
とを特徴とする特許請求の範囲第１項および前
記各項記載の方法。
８ 液体が水性の液体であることを特徴とする特
許請求の範囲第１項および前記各項記載の方
法。
許請求の範囲第１項および前記各項記載の方
法。
９ 微生成から得られたポリペプチドが共有結合
によつて重合体に付着されることを特徴とする
特許請求の範囲第１項および前記各項記載の方
法。
によつて重合体に付着されることを特徴とする
特許請求の範囲第１項および前記各項記載の方
法。
10 重合体が粒子の形で存在することを特徴とす
る特許請求の範囲第１および前記各項記載の方
法。
る特許請求の範囲第１および前記各項記載の方
法。
11 重合体が水に不溶であることを特徴とする特
許請求の範囲第２項記載の薬剤。
許請求の範囲第２項記載の薬剤。
12 微生物から得られたポリペプチドが背椎動物
好ましくは哺乳動物から得られた少くとも一つ
の免疫グロブリンを結合しうることを特徴とす
る特許請求の範囲第２項および前記第11項記載
の薬剤。
好ましくは哺乳動物から得られた少くとも一つ
の免疫グロブリンを結合しうることを特徴とす
る特許請求の範囲第２項および前記第11項記載
の薬剤。
13 微生物から得られたポリペプチドIgG―クラ
スから得られた少くとも一つの免疫グロブリン
に結合しうることを特徴とする特許請求の範囲
第２項および前記第11，12項記載の薬剤。
スから得られた少くとも一つの免疫グロブリン
に結合しうることを特徴とする特許請求の範囲
第２項および前記第11，12項記載の薬剤。
14 微生物から得られるポリペプチドがスタフイ
ロコツカス オウレアスから得られることを特
徴とする特許請求の範囲第２項および前記第１
１〜第１３項記載の薬剤。
ロコツカス オウレアスから得られることを特
徴とする特許請求の範囲第２項および前記第１
１〜第１３項記載の薬剤。
15 微生物から得られるポリペプチドが共有結合
によつて重合体に付着していることを特徴とす
る特許請求の範囲第２項および前記第１１項〜
第１４項記載の薬剤。
によつて重合体に付着していることを特徴とす
る特許請求の範囲第２項および前記第１１項〜
第１４項記載の薬剤。
16 重合体が粒子の形をしていることを特徴とす
る特許請求の範囲第２項および前記第１１〜第
５項記載の薬剤。
る特許請求の範囲第２項および前記第１１〜第
５項記載の薬剤。
Claims (1)
- １ 遊離の形で存在するIgGクラスからの免疫グ
ロブリン、一つまたはそれ以上の基または物質が
順次任意に結合している抗原に結合されている
Fab―パートをもつIgGクラスからの免疫グロブ
リン、またはその遊離のFc―フラグメントの少
くとも一つを、液体の存在下で、該液体に不溶性
の重合体に対しその重合体に付着したたんぱく質
Ａまたはそのフラグメントの助けによつて結合さ
せるにあたり、上記使用されるたんぱく質Ａまた
はそのフラグメントが微生物から得られ且つIgG
クラスからの免疫グロブリンのFc―パートまた
は免疫グロブリンの遊離のFc―フラグメントが
自体結合しうる少くとも一種類のポリペプチドで
あることを特徴とする方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE7214330A SE386368B (sv) | 1972-11-06 | 1972-11-06 | Sett att till en matris medelst biospecifik adsorbtion binde ett immunglobulins fe-del jemte medel for dess genomforande |
| SE7301779A SE400084B (sv) | 1973-02-08 | 1973-02-08 | Sett att till en matris (fast berare) medelst biospecifik adsorbtion binda immunglobuliner eller dess fc-fragment samt hjelpmedel herfor |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS49133518A JPS49133518A (ja) | 1974-12-21 |
| JPS6129932B2 true JPS6129932B2 (ja) | 1986-07-10 |
Family
ID=26655994
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP48124338A Expired JPS6129932B2 (ja) | 1972-11-06 | 1973-11-05 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US3995018B2 (ja) |
| JP (1) | JPS6129932B2 (ja) |
| DE (1) | DE2322533C2 (ja) |
| DK (1) | DK141583B (ja) |
| FR (1) | FR2205531B1 (ja) |
| GB (1) | GB1441979A (ja) |
| IL (1) | IL43462A (ja) |
| NL (1) | NL7315193A (ja) |
Families Citing this family (45)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2322562C2 (de) * | 1972-11-06 | 1984-03-29 | Pharmacia AB, Uppsala | Verfahren zur Bestimmung von Antigenen in einer Probe |
| IL47372A (en) * | 1975-05-27 | 1979-10-31 | Yeda Res & Dev | Fab'dimers bound to daunomycin or adriamycin,their preparation and pharmaceutical compositions containing same |
| US4189466A (en) * | 1975-09-19 | 1980-02-19 | Technical Research Affiliates, Inc. | Detection of rheumatoid factor by antibody sensitized microbial particles |
| DE2643208C2 (de) * | 1976-09-25 | 1985-09-05 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Immunologisches Bestimmungsverfahren |
| ES471585A1 (es) * | 1977-07-15 | 1979-01-16 | Behringwerke Ag | Procedimiento para la determinacion de reactivos fc |
| US4230685A (en) * | 1979-02-28 | 1980-10-28 | Northwestern University | Method of magnetic separation of cells and the like, and microspheres for use therein |
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| US4452773A (en) * | 1982-04-05 | 1984-06-05 | Canadian Patents And Development Limited | Magnetic iron-dextran microspheres |
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| US4470925A (en) * | 1982-05-05 | 1984-09-11 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Immunoglobulin half-molecules and process for producing hybrid antibodies |
| US4479895A (en) * | 1982-05-05 | 1984-10-30 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Immunoglobulin half-molecules and process for producing hybrid antibodies |
| US4591552A (en) * | 1982-09-29 | 1986-05-27 | New York Blood Center, Inc. | Detection of hepatitis B surface antigen (or antibody to same) with labeled synthetic peptide |
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| US4617262A (en) * | 1983-07-22 | 1986-10-14 | Cooperbiomedical, Inc. | Assaying for circulating immune complexes with labeled protein A |
| US4614513A (en) * | 1984-08-13 | 1986-09-30 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Method and apparatus for treatment to remove immunoreactive substances from blood |
| DE3435744C2 (de) * | 1984-09-28 | 1986-08-07 | Organogen Medizinisch-Molekularbiologische Forschungsgesellschaft mbH, 6900 Heidelberg | Trägermaterial zur Verwendung für Immunbestimmungen |
| SE448190B (sv) * | 1985-06-03 | 1987-01-26 | Pharmacia Ab | Sett att bestemma fc-dels-bindande bakteriella polypeptider |
| US4900663A (en) * | 1985-09-13 | 1990-02-13 | Environmental Diagnostics, Inc. | Test kit for determining the presence of organic materials and method of utilizing same |
| US5063151A (en) * | 1985-09-20 | 1991-11-05 | Biometallics, Inc. | Immunoassay method and kit |
| US4900660A (en) * | 1985-11-25 | 1990-02-13 | University Of Florida | Streptococcal fc rc |
| US4883754A (en) * | 1986-03-06 | 1989-11-28 | University Of Florida Research Foundation | Bacterial FC receptors |
| US4954617A (en) * | 1986-07-07 | 1990-09-04 | Trustees Of Dartmouth College | Monoclonal antibodies to FC receptors for immunoglobulin G on human mononuclear phagocytes |
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| US5422258A (en) * | 1987-12-31 | 1995-06-06 | Tanox Biosystems, Inc. | Methods for producing high affinity anti-human IgE-monoclonal antibodies which binds to IgE on IgEabearing B cells but not basophils |
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| US9487823B2 (en) | 2002-12-20 | 2016-11-08 | Qiagen Gmbh | Nucleic acid amplification |
| US8043834B2 (en) | 2003-03-31 | 2011-10-25 | Qiagen Gmbh | Universal reagents for rolling circle amplification and methods of use |
| US20050233390A1 (en) * | 2003-04-09 | 2005-10-20 | Allen John W | Device including a proteinaceous factor, a recombinant proteinaceous factor, and a nucleotide sequence encoding the proteinaceous factor |
| JP2005112827A (ja) * | 2003-10-10 | 2005-04-28 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | 抗体アフィニティ担体 |
| US8309303B2 (en) | 2005-04-01 | 2012-11-13 | Qiagen Gmbh | Reverse transcription and amplification of RNA with simultaneous degradation of DNA |
| EP1762627A1 (de) | 2005-09-09 | 2007-03-14 | Qiagen GmbH | Verfahren zur Aktivierung einer Nukleinsäure für eine Polymerase-Reaktion |
| EP2099932A4 (en) * | 2006-12-06 | 2009-11-18 | Repligen Corp | NUCLEIC ACIDS ENCODING THE RECOMBINANT PROTEIN A |
| EP2728000B1 (en) | 2011-06-03 | 2018-12-05 | National Institute of Advanced Industrial Science And Technology | Protein a mutant protein having reduced affinity in acidic region, and antibody capture agent |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| SE337223B (ja) * | 1967-05-23 | 1971-08-02 | Pharmacia Ab | |
| SE343210B (ja) * | 1967-12-20 | 1972-03-06 | Pharmacia Ab | |
| US3790663A (en) * | 1970-07-07 | 1974-02-05 | Us Health | Preparation of dry antiserum coated solid-phase for radioimmunoassay of antigens |
| DE2322552C2 (de) * | 1972-11-06 | 1986-08-28 | Pharmacia AB, Uppsala | Verfahren zum Abtrennen von Protein A aus Staphylococcus aureus aus einer Flüssigkeit |
-
1973
- 1973-05-04 DE DE2322533A patent/DE2322533C2/de not_active Expired
- 1973-10-22 IL IL43462A patent/IL43462A/en unknown
- 1973-10-25 US US05409572 patent/US3995018B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1973-11-02 DK DK593173AA patent/DK141583B/da unknown
- 1973-11-05 JP JP48124338A patent/JPS6129932B2/ja not_active Expired
- 1973-11-05 FR FR7339223A patent/FR2205531B1/fr not_active Expired
- 1973-11-06 NL NL7315193A patent/NL7315193A/xx active Search and Examination
- 1973-11-06 GB GB5146173A patent/GB1441979A/en not_active Expired
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
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| THE JOURNAI OF IMMUNOIOGY=1969 * |
| THE JOURNAL OF IMMUNOIOGY=1966 * |
Also Published As
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|---|---|
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| GB1441979A (en) | 1976-07-07 |
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| US3995018B1 (ja) | 1986-06-24 |
| DE2322533A1 (de) | 1974-05-09 |
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