JPS6130560B2 - - Google Patents
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- JPS6130560B2 JPS6130560B2 JP53129556A JP12955678A JPS6130560B2 JP S6130560 B2 JPS6130560 B2 JP S6130560B2 JP 53129556 A JP53129556 A JP 53129556A JP 12955678 A JP12955678 A JP 12955678A JP S6130560 B2 JPS6130560 B2 JP S6130560B2
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/42—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving phosphatase
-
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- C12Q2334/10—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases p-Nitrophenol derivatives
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明はアルカリ性ホスフアターゼの活性度の
測定に使用される新規な組成物に係わる。該組成
物はパラ―ニトロフエニルリン酸の塩、マグネシ
ウム塩、ホウ酸ナトリウムおよび２―アミノ―２
―ヒドロキシメチル―１，３―プロパンジオール
でなる。さらに本発明はこの組成物の使用に基く
アルカリ性ホスフアターゼの活性度の測定法にも
係わる。
測定に使用される新規な組成物に係わる。該組成
物はパラ―ニトロフエニルリン酸の塩、マグネシ
ウム塩、ホウ酸ナトリウムおよび２―アミノ―２
―ヒドロキシメチル―１，３―プロパンジオール
でなる。さらに本発明はこの組成物の使用に基く
アルカリ性ホスフアターゼの活性度の測定法にも
係わる。
アルカリ性ホスフアターゼは主として腸管上
皮、成長しつつある骨の端部、腎皮質、乳腺、肝
臓、胆汁、血液および胎盤に存在していることは
公知である。アルカリ性ホスフアターゼは式
（） Ｒ―Ｏ―PO（OH）2＋H2OＲ―OH＋H3PO4 に従つてオルトリン酸塩の加水分解反応における
触媒活性を示し、血液中に高濃度で存在すること
は生体系がある種の病的状態にあることの証拠で
ある。このホスフアターゼ活性の増加は、たとえ
ば肝臓、腸管または骨に係わる病気の発病の指標
である。
皮、成長しつつある骨の端部、腎皮質、乳腺、肝
臓、胆汁、血液および胎盤に存在していることは
公知である。アルカリ性ホスフアターゼは式
（） Ｒ―Ｏ―PO（OH）2＋H2OＲ―OH＋H3PO4 に従つてオルトリン酸塩の加水分解反応における
触媒活性を示し、血液中に高濃度で存在すること
は生体系がある種の病的状態にあることの証拠で
ある。このホスフアターゼ活性の増加は、たとえ
ば肝臓、腸管または骨に係わる病気の発病の指標
である。
人間の血漿中におけるアルカリ性ホスフアター
ゼの測定は1930年から行なわれており（Kay，H.
D.ジヤーナル・オブ・バイオロジカル・ケミス
トリー（Ｊ・Biol.Chem.）89，235（1930）、こ
れ以来、この酵素の活性度を検定する方法は、特
に反応が行なわれる媒体による影響のため各種の
変更がなされている。
ゼの測定は1930年から行なわれており（Kay，H.
D.ジヤーナル・オブ・バイオロジカル・ケミス
トリー（Ｊ・Biol.Chem.）89，235（1930）、こ
れ以来、この酵素の活性度を検定する方法は、特
に反応が行なわれる媒体による影響のため各種の
変更がなされている。
近年採用されているホスフアターゼ活性の測定
法は、Axelrodが発見したホスフアターゼが上記
反応式（）のオルトリン酸塩と受容体として作
用するアルコールとの間のリン酸転移反応に対し
て触媒的に働くとの事実に基くものである（ジヤ
ーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー
172，１（1948））。
法は、Axelrodが発見したホスフアターゼが上記
反応式（）のオルトリン酸塩と受容体として作
用するアルコールとの間のリン酸転移反応に対し
て触媒的に働くとの事実に基くものである（ジヤ
ーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー
172，１（1948））。
現在ではアルカリ性ホスフアターゼの活性度を
測定するためには光学的な方法が広く利用されつ
つあり、この光学的方法は上記リン酸転移反応を
実施するための第１の物質としてパラ―ニトロフ
エニルリン酸塩を利用する。この方法によれば、
第１の物質を適当な条件下で第２の物質（受容
体）および酵素と混合し、400〜415nmでの光学
密度を読む。この読みは反応の進行の間徐々に行
なう。経時的な光学密度の増加は転移されつつあ
る生成物の量に比例するものであり、このデータ
を適当に記録することによりこの酵素の活性度を
推定できる。
測定するためには光学的な方法が広く利用されつ
つあり、この光学的方法は上記リン酸転移反応を
実施するための第１の物質としてパラ―ニトロフ
エニルリン酸塩を利用する。この方法によれば、
第１の物質を適当な条件下で第２の物質（受容
体）および酵素と混合し、400〜415nmでの光学
密度を読む。この読みは反応の進行の間徐々に行
なう。経時的な光学密度の増加は転移されつつあ
る生成物の量に比例するものであり、このデータ
を適当に記録することによりこの酵素の活性度を
推定できる。
現在、アルカリ性ホスフアターゼはpH10付近
で最大活性をもつことおよびその活性は無機塩、
特にマグネシウム塩の存在により改善されること
は公知である（たとえば、“酵素（The
Enzymes）”Academic 社発行、1961、第55頁
およびff参照）。これらの事実は、ホスフアター
ゼ活性の測定に一般的に使用される調製物のいず
れについても厳格に限定されかつ合法的に強制さ
れるような成分を使用しなければならないように
している。
で最大活性をもつことおよびその活性は無機塩、
特にマグネシウム塩の存在により改善されること
は公知である（たとえば、“酵素（The
Enzymes）”Academic 社発行、1961、第55頁
およびff参照）。これらの事実は、ホスフアター
ゼ活性の測定に一般的に使用される調製物のいず
れについても厳格に限定されかつ合法的に強制さ
れるような成分を使用しなければならないように
している。
このようにパラ―ニトロフエニルリン酸の誘導
体は有機マグネシウム塩および上記pH域を維持
するために必要な緩衝剤との組合せにおいて広く
使用されるようになつた。初期のものではこの酸
のナトリウム塩および無機緩衝剤を広く使用して
いた。
体は有機マグネシウム塩および上記pH域を維持
するために必要な緩衝剤との組合せにおいて広く
使用されるようになつた。初期のものではこの酸
のナトリウム塩および無機緩衝剤を広く使用して
いた。
ニトロフエニルリン酸ナトリウムは安定性に乏
しいことがわかり、さらに最近ではこの酸の塩を
アミン化合物とともに使用することが好まれてい
る。
しいことがわかり、さらに最近ではこの酸の塩を
アミン化合物とともに使用することが好まれてい
る。
アミン化合物を含有するパラ―ニトロフエニル
リン酸塩の調製物は以前から公知であり、生物学
的な試験法に使用されている（たとえば、ジヤー
ナル・オブ・ザ・アメリカン・ケミカル・ソサエ
テイー（J.A.C，Ｓ）79，（1958）、3741ペー
ジ）。
リン酸塩の調製物は以前から公知であり、生物学
的な試験法に使用されている（たとえば、ジヤー
ナル・オブ・ザ・アメリカン・ケミカル・ソサエ
テイー（J.A.C，Ｓ）79，（1958）、3741ペー
ジ）。
リン酸転移反応の進行を改善するために各種の
試みが行なわれ、初期の組成における受容体物質
の代りに２つの機能、すなわちpHを一定の値に
保つことおよび同時にリン酸転移反応における受
容体として働くこと、を発揮する緩衝剤を使用す
るようになつた。
試みが行なわれ、初期の組成における受容体物質
の代りに２つの機能、すなわちpHを一定の値に
保つことおよび同時にリン酸転移反応における受
容体として働くこと、を発揮する緩衝剤を使用す
るようになつた。
各種の緩衝剤を調製するに当つては、調製物自
体またはこれを使用した分析操作に係わる総合的
な経済性を考慮しなければならない。しかしなが
ら、これまで使用されてきたいずれの組成物（調
製物）も多くの欠点（最も重大な点は経済的に安
定性が失われること）を有していた。このような
組成物を厳格な条件下で保存する場合であつて
も、組成物によつては長くとも調製後２〜２日後
では結果の再現性についての信頼性が失われるこ
とがあり、使用できない。
体またはこれを使用した分析操作に係わる総合的
な経済性を考慮しなければならない。しかしなが
ら、これまで使用されてきたいずれの組成物（調
製物）も多くの欠点（最も重大な点は経済的に安
定性が失われること）を有していた。このような
組成物を厳格な条件下で保存する場合であつて
も、組成物によつては長くとも調製後２〜２日後
では結果の再現性についての信頼性が失われるこ
とがあり、使用できない。
さらに従来のもの（リン酸転移反応における受
容体としてマンニツトおよび同様の多価アルコー
ルを使用したもの）の多くは胎盤性のアルカリ性
ホスフアターゼの活性度をも良好な感度をもつて
測定できる。
容体としてマンニツトおよび同様の多価アルコー
ルを使用したもの）の多くは胎盤性のアルカリ性
ホスフアターゼの活性度をも良好な感度をもつて
測定できる。
多くの場合には、アルカリ性ホスフアターゼの
活性度の測定は肝臓系（黄疽）、骨格系（腫瘍、
ページエツト病）または内臓系によると考えられ
る病的状況を検知するために行なわれる。妊娠中
では、血液中のアルカリ性ホスフアターゼの生理
学的活性度は高く、上記の病理学的なパターンを
マスキングすることになる。
活性度の測定は肝臓系（黄疽）、骨格系（腫瘍、
ページエツト病）または内臓系によると考えられ
る病的状況を検知するために行なわれる。妊娠中
では、血液中のアルカリ性ホスフアターゼの生理
学的活性度は高く、上記の病理学的なパターンを
マスキングすることになる。
本発明者等は、上記欠点を示すことなくアルカ
リ性ホスフアターゼの測定を再現性ある結果を伴
つて実施できる新規な組成物を開発し、本発明に
至つた。
リ性ホスフアターゼの測定を再現性ある結果を伴
つて実施できる新規な組成物を開発し、本発明に
至つた。
該組成物はパラ―ニトロフエニルリン酸の塩、
マグネシウム塩、ホウ酸ナトリウムおよび２―ア
ミノ―２―ヒドロキシメチル―１，３―プロパン
ジオールでなる。
マグネシウム塩、ホウ酸ナトリウムおよび２―ア
ミノ―２―ヒドロキシメチル―１，３―プロパン
ジオールでなる。
この組成物は安定であつて、長時間後であつて
も初期の性質を保持し、しかも胎盤性のホスフア
ターゼの存在に対する感受性がわずかであるため
上記欠点を生ぜず、さらにリン酸転移反応のpH
が組成物自体の構成成分によつて提供されるた
め、緩衝剤を厳格な条件下で調製する必要がな
い。
も初期の性質を保持し、しかも胎盤性のホスフア
ターゼの存在に対する感受性がわずかであるため
上記欠点を生ぜず、さらにリン酸転移反応のpH
が組成物自体の構成成分によつて提供されるた
め、緩衝剤を厳格な条件下で調製する必要がな
い。
これにより提供される反応は次のとおりであ
る。
る。
式中、ALPはアルカリ性ホスフアターゼ
（EC.3.1.3.1）であり、ROHは上記のプロパンジ
オールである。反応はアルカリ性pH域で行なわ
れるため、パラ―ニトロフエニルリン酸の塩のパ
ラ―ニトロフエノールへの加水分解は450nmにお
ける吸光度を測定することにより簡単に監視でき
る。
（EC.3.1.3.1）であり、ROHは上記のプロパンジ
オールである。反応はアルカリ性pH域で行なわ
れるため、パラ―ニトロフエニルリン酸の塩のパ
ラ―ニトロフエノールへの加水分解は450nmにお
ける吸光度を測定することにより簡単に監視でき
る。
実際、アルカリ性pH域ではパラ―ニトロフエ
ノールは強く黄色に着色しており、一方パラ―ニ
トロフエニルリン酸の塩は無色である。
ノールは強く黄色に着色しており、一方パラ―ニ
トロフエニルリン酸の塩は無色である。
本発明によれば、このような化合物からなる組
成物を使用してアルカリ性ホスフアターゼの活性
度を測定できる。この場合、手動的にも使用で
き、また自動の断続―連続流動装置に混合物を供
給するようにしても使用できる。さらに連続測定
にあるいはブロツク剤を添加して一定時間のみの
測定に使用することもできる。
成物を使用してアルカリ性ホスフアターゼの活性
度を測定できる。この場合、手動的にも使用で
き、また自動の断続―連続流動装置に混合物を供
給するようにしても使用できる。さらに連続測定
にあるいはブロツク剤を添加して一定時間のみの
測定に使用することもできる。
この方法を実施するためには各種の原料物質を
使用できるが、パラ―ニトロフエニルリン酸のナ
トリウム塩が自発的に加水分解され易い傾向があ
ることを考慮すればこの塩の使用を避けることが
好ましい。この塩の例としては、２―アミノ―２
―メチル―１，３―ジオールとの塩、２―アミノ
―２―エチル―１，３―ジオールとの塩、２―ア
ミノ―２―ヒドロキシメチル―１，３―プロパン
ジオールとの塩、シクロヘキシルアミンとの塩等
がある。
使用できるが、パラ―ニトロフエニルリン酸のナ
トリウム塩が自発的に加水分解され易い傾向があ
ることを考慮すればこの塩の使用を避けることが
好ましい。この塩の例としては、２―アミノ―２
―メチル―１，３―ジオールとの塩、２―アミノ
―２―エチル―１，３―ジオールとの塩、２―ア
ミノ―２―ヒドロキシメチル―１，３―プロパン
ジオールとの塩、シクロヘキシルアミンとの塩等
がある。
給体物質については酵素に対する親和性が塩化
剤よりはむしろパラ―ニトロフエニルリン酸によ
るために任意に選択できる。
剤よりはむしろパラ―ニトロフエニルリン酸によ
るために任意に選択できる。
同様に、マグネシウム塩についても酢酸塩、ア
スパラギン酸塩、塩化物、硫酸塩の如く各種の化
合物の中から選択できる。
スパラギン酸塩、塩化物、硫酸塩の如く各種の化
合物の中から選択できる。
たとえば、給体物質としてパラ―ニトロフエニ
ルリン酸のシクロヘキシルアミン塩をおよび酵素
反応の活性化剤として酢酸マグネシウムを使用す
ることにより良好な結果が得られた。
ルリン酸のシクロヘキシルアミン塩をおよび酵素
反応の活性化剤として酢酸マグネシウムを使用す
ることにより良好な結果が得られた。
２―アミノ―２―ヒドロキシメチル―１，３―
プロパンジオール（すなわち受容体）について
は、組成物中における割合は0.7ないし２モルの
範囲でなければならない。
プロパンジオール（すなわち受容体）について
は、組成物中における割合は0.7ないし２モルの
範囲でなければならない。
実施例 １
この実施例はパラ―ニトロフエニルリン酸
（PNPP）と、２―アミノ―２―エチル―１，３
―プロパンジオール（2A2E1，3PD）、２―アミ
ノ―２―メチル―１，３―プロパンジオール
（2A2M1，3PD）、およびシクロヘキシルアミン
（CEA）とを原料とする粉末状の試薬50Kgの調製
に係わる。受容体（すなわち２―アミノ―２―ヒ
ドロキシメチル―１，３―プロパンジオール）を
以下の記載ではTRISと略称する。
（PNPP）と、２―アミノ―２―エチル―１，３
―プロパンジオール（2A2E1，3PD）、２―アミ
ノ―２―メチル―１，３―プロパンジオール
（2A2M1，3PD）、およびシクロヘキシルアミン
（CEA）とを原料とする粉末状の試薬50Kgの調製
に係わる。受容体（すなわち２―アミノ―２―ヒ
ドロキシメチル―１，３―プロパンジオール）を
以下の記載ではTRISと略称する。
PNPP―CEA・H2O1.5Kgを減圧化、P2O5上
で、30℃以下の温度で、暗所において約48時間乾
燥した、最終的な水分濃度は最大1.5％であつ
た。
で、30℃以下の温度で、暗所において約48時間乾
燥した、最終的な水分濃度は最大1.5％であつ
た。
他のPNPP―2A2E1，3PDまたはPNPP―
2A2M1，3PDについても同様乾燥処理を行ない、
最終的な水分濃度は0.5％程度であつた。
2A2M1，3PDについても同様乾燥処理を行ない、
最終的な水分濃度は0.5％程度であつた。
各種成分（TRIS，PNPP、酢酸マグネシウ
ム、ホウ酸ナトリウム）の粒子サイズを粉砕法ま
たは篩分けを介して均一とした。
ム、ホウ酸ナトリウム）の粒子サイズを粉砕法ま
たは篩分けを介して均一とした。
つづいて、TRIS48.35Kgを酢酸マグネシウム・
4H2O68.6ｇ、四ホウ酸ナトリウム・10H2O683.5
ｇと混合し粉体を均一化した。
4H2O68.6ｇ、四ホウ酸ナトリウム・10H2O683.5
ｇと混合し粉体を均一化した。
この粉体をステンレス鋼製のトレー、プレート
あるいは他の適当な支持容器に入れ、70℃で約14
時間乾燥した。
あるいは他の適当な支持容器に入れ、70℃で約14
時間乾燥した。
この粉体を無水雰囲気中で冷却し、つづいて再
び篩を通して混合物の粒子サイズを均一なものと
した。最終的な水分濃度は0.6％以下であつた。
び篩を通して混合物の粒子サイズを均一なものと
した。最終的な水分濃度は0.6％以下であつた。
これにより基礎となる粉体48.76Kgが得られ
た。この基礎粉体をPNPP―CEA1.37Kg（あるい
はPNPP―2A2E1，3PDでは1.49KgまたはPNPP―
2A2M1，3PDでは1.40Kg）とを混合し、全体を完
全に混合した。
た。この基礎粉体をPNPP―CEA1.37Kg（あるい
はPNPP―2A2E1，3PDでは1.49KgまたはPNPP―
2A2M1，3PDでは1.40Kg）とを混合し、全体を完
全に混合した。
混合物の均一性を確認するために、サンプル抽
出し（混合物3.5ｇ＋H2O20ml）、これについて
pH、マグネシウムおよびPNPPを測定することに
より統計学的なチエツクを行う。
出し（混合物3.5ｇ＋H2O20ml）、これについて
pH、マグネシウムおよびPNPPを測定することに
より統計学的なチエツクを行う。
最終的な水分濃度は0.8％以下であつた。
各種のPNPPを使用することによつて各々以下
の組成物が得られた。
の組成物が得られた。
組成物 （PNPP―CEAを使用したもの）
50.13Kg 組成物 （PNPP―2A2E1.3PDを使用したも
の）50.25Kg 組成物 （PNPP―A2M1.3PDを使用したも
の）50.16Kg このような組成物の実際の使用のために以下の
配慮を払つた。各ALPテストは組成物または
483mgおよび組成物484mgに相当する。一定量
の水にこの粉体を溶解する際には容積が約12.5％
増加するため、各フラスコ（H2O20mlが添加され
る）に分配する粒体の重量は算出できる。溶解後
の容量は22.5mlである。
50.13Kg 組成物 （PNPP―2A2E1.3PDを使用したも
の）50.25Kg 組成物 （PNPP―A2M1.3PDを使用したも
の）50.16Kg このような組成物の実際の使用のために以下の
配慮を払つた。各ALPテストは組成物または
483mgおよび組成物484mgに相当する。一定量
の水にこの粉体を溶解する際には容積が約12.5％
増加するため、各フラスコ（H2O20mlが添加され
る）に分配する粒体の重量は算出できる。溶解後
の容量は22.5mlである。
各フラスコ当りの組成物またはの量＝483
×22.5／３＝3622mg 各フラスコ当りの組成物の量＝484×22.5／
３＝3630mg 容積２のフラスコには、組成物または
322ｇまたは組成物323ｇを分配しなければなら
ない。
×22.5／３＝3622mg 各フラスコ当りの組成物の量＝484×22.5／
３＝3630mg 容積２のフラスコには、組成物または
322ｇまたは組成物323ｇを分配しなければなら
ない。
実施例 ２
前記実施例で調製した組成物の１つをアルカリ
性ホスフアターゼの活性度を測定するために使用
した。
性ホスフアターゼの活性度を測定するために使用
した。
組成物を前もつて反応温度に加熱し、その３ml
を検体サンプル0.05mlと混合した。これを分光光
度計に装着し、所望の一定温度において405nmに
おける光学密度の変化（△O.D.分-1が0.750以上
（約2500mu/ml）となる場合には、サンプルを
１：10に希稀して測定を行なつた。この場合には
結果に10をを掛ける必要がある。
を検体サンプル0.05mlと混合した。これを分光光
度計に装着し、所望の一定温度において405nmに
おける光学密度の変化（△O.D.分-1が0.750以上
（約2500mu/ml）となる場合には、サンプルを
１：10に希稀して測定を行なつた。この場合には
結果に10をを掛ける必要がある。
得られた△．O.D.分-1の値を次の計算式に入れ
て算定する（mu/ml）。
て算定する（mu/ml）。
△O.D.分-1×１０００・Ｖｔ／１８．６・Ｌｐ・Ｖｓ
＝mu/ml ここで1000は単位を1000分の１の単位に換算す
るためのフアクタであり、Vtは反応総容積（3.05
ml）であり、18.6はPNPPのミリモル当りの吸光
度係数であり、Lpは光路の長さ（１cm）であ
り、Vsは検体の容量（0.05ml）である。
＝mu/ml ここで1000は単位を1000分の１の単位に換算す
るためのフアクタであり、Vtは反応総容積（3.05
ml）であり、18.6はPNPPのミリモル当りの吸光
度係数であり、Lpは光路の長さ（１cm）であ
り、Vsは検体の容量（0.05ml）である。
したがつてmu/ml＝△O.D.分-1×3280となる。
実施例 ３
アルカリ性ホスフアターゼの測定用としての本
発明による組成物と従来の組成物とについての比
較テストを行なつた。ここで従来の組成物は
PNPPの塩、CEA、アスパラギン酸マグネシウム
およびホウ酸塩緩衝剤でなる。前記実施例と同じ
量の組成物を温度37℃で使用した。
発明による組成物と従来の組成物とについての比
較テストを行なつた。ここで従来の組成物は
PNPPの塩、CEA、アスパラギン酸マグネシウム
およびホウ酸塩緩衝剤でなる。前記実施例と同じ
量の組成物を温度37℃で使用した。
得られた結果を図面のグラフにプロツトした。
このグラフは横軸に本発明による組成物を使用す
る際に得られたmu/mlを示している。
このグラフは横軸に本発明による組成物を使用す
る際に得られたmu/mlを示している。
直線１は両方の組成物が同じ結果を与える際に
得られるはずの理想的なカーブを示している。
得られるはずの理想的なカーブを示している。
記号〓は胎盤性ホスフアターゼのサンプルに係
わる。直線２は本発明の組成物に対する従来の組
成物の実際の直線状回帰線に係わる。このような
回帰は本発明による方法が従来のものよりさらに
20％以上も感度がよいこと（理想カーブに対する
偏向角度参照）の証拠である。
わる。直線２は本発明の組成物に対する従来の組
成物の実際の直線状回帰線に係わる。このような
回帰は本発明による方法が従来のものよりさらに
20％以上も感度がよいこと（理想カーブに対する
偏向角度参照）の証拠である。
このような改善された感度は胎盤性ホスフアタ
ーゼについては経験し得なかつたものである。本
発明の場合には、従来法に比較して胎盤性ホスフ
アターゼについても良好に測定できる。図中、記
号・は異なる源（たとえば肝臓、骨、腸管）のホ
スフアターゼを含有するサンプルに係わるもので
ある。
ーゼについては経験し得なかつたものである。本
発明の場合には、従来法に比較して胎盤性ホスフ
アターゼについても良好に測定できる。図中、記
号・は異なる源（たとえば肝臓、骨、腸管）のホ
スフアターゼを含有するサンプルに係わるもので
ある。
直線２はＹ＝0.727X＋0.01を示しており、直線
１はＹ＝Ｘである。
１はＹ＝Ｘである。
図面は本発明による組成物および従来の組成物
についての比較テストの結果を示すグラフであ
る。
についての比較テストの結果を示すグラフであ
る。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ パラ―ニトロフエニルリン酸の塩、マグネシ
ウム塩、ホウ酸ナトリウムおよび２―アミノ―２
―ヒドロキシメチル―１，３―プロパンジオール
でなることを特徴とする、アルカリ性ホスフアタ
ーゼの活性度を測定するための組成物。 ２ ２―アミノ―２―ヒドロキシメチル―１，３
―プロパンジオールが濃度0.7モルないし２モル
で存在する、特許請求の範囲第１項記載の組成
物。 ３ パラ―ニトロフエニルリン酸の塩が、２―ア
ミノ―２―メチル―１，３―プロパンジオールと
の塩、２―アミノ―２―エチル―１，３―プロパ
ンジオールとの塩およびシクロヘキシルアミンと
の塩の中から選ばれるものである、特許請求の範
囲第１項または第２項記載の組成物。 ４ マグネシウム塩が、酢酸マグネシウム、アス
パラギン酸マグネシウム、塩化マグネシウムおよ
び硫酸マグネシウムの中から選ばれるものであ
る、特許請求の範囲第１項ないし第３項のいずれ
か１項に記載の組成物。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT19458/78A IT1108964B (it) | 1978-01-20 | 1978-01-20 | Composizione adatta all'analisi della fosfatasi alcalina e metodo utilizzante la stessa |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS54104390A JPS54104390A (en) | 1979-08-16 |
| JPS6130560B2 true JPS6130560B2 (ja) | 1986-07-14 |
Family
ID=11158184
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12955678A Granted JPS54104390A (en) | 1978-01-20 | 1978-10-23 | Composite substance for measuring activity of alkaline phosphatase |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4306020A (ja) |
| JP (1) | JPS54104390A (ja) |
| AR (1) | AR218954A1 (ja) |
| BR (1) | BR7900801A (ja) |
| CA (1) | CA1113840A (ja) |
| DE (1) | DE2845156A1 (ja) |
| ES (1) | ES477040A1 (ja) |
| FR (1) | FR2415300A1 (ja) |
| IT (1) | IT1108964B (ja) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4555484A (en) * | 1983-07-25 | 1985-11-26 | Eastman Kodak Company | Analytical element and method for alkaline phosphatase assay |
| JPS61110058A (ja) * | 1984-11-02 | 1986-05-28 | Fuji Photo Film Co Ltd | アルカリ性ホスフアタ−ゼ活性測定用一体型多層分析要素 |
| JP2668656B2 (ja) * | 1994-09-05 | 1997-10-27 | コニカ株式会社 | アルカリホスファターゼ用乾式分析素子 |
| US7048914B2 (en) * | 2002-12-12 | 2006-05-23 | Zoltan Laboratories | Placental alkaline phosphatase to control diabetes |
| EP1572230B1 (en) * | 2002-12-12 | 2010-09-08 | Zoltan Laboratories | Placental alkaline phosphatase to control diabetes |
| GB0318110D0 (en) * | 2003-08-01 | 2003-09-03 | Isaeo Ltd | Methods and kits for detecting an enzyme capable of modifying a nucleic acid |
| US7695714B2 (en) * | 2005-12-28 | 2010-04-13 | Zoltan Laboratories Llc | Use of alkaline phosphatase to maintain healthy tissue mass in mammals |
| JP4871630B2 (ja) * | 2006-04-12 | 2012-02-08 | 第一三共株式会社 | 脱リン酸化酵素を阻害することを特徴とする細胞増殖阻害方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2359052A (en) * | 1940-07-01 | 1944-09-26 | Scharer Harry | Method for detecting enzyme activity |
| US3466306A (en) * | 1965-08-06 | 1969-09-09 | Warner Lambert Pharmaceutical | Process for the stabilization of organic esters of phosphoric acid |
| US3425912A (en) * | 1966-11-14 | 1969-02-04 | Smithkline Corp | Laboratory reagent for assay of alkaline phosphatase |
| US3595756A (en) * | 1968-11-26 | 1971-07-27 | Smith Kline French Lab | Laboratory reagent for assay of alkaline phosphatase |
| US4132598A (en) * | 1977-06-03 | 1979-01-02 | Modrovich Ivan Endre | Stabilized liquid phosphate containing diagnostic compositions and method of preparing same |
-
1978
- 1978-01-20 IT IT19458/78A patent/IT1108964B/it active
- 1978-10-17 DE DE19782845156 patent/DE2845156A1/de not_active Ceased
- 1978-10-23 JP JP12955678A patent/JPS54104390A/ja active Granted
- 1978-10-31 CA CA315,458A patent/CA1113840A/en not_active Expired
- 1978-11-14 FR FR7832150A patent/FR2415300A1/fr active Granted
-
1979
- 1979-01-12 ES ES477040A patent/ES477040A1/es not_active Expired
- 1979-01-17 AR AR275205A patent/AR218954A1/es active
- 1979-01-22 BR BR7900801A patent/BR7900801A/pt unknown
-
1980
- 1980-09-25 US US06/190,794 patent/US4306020A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AR218954A1 (es) | 1980-07-15 |
| IT1108964B (it) | 1985-12-16 |
| DE2845156A1 (de) | 1979-07-26 |
| US4306020A (en) | 1981-12-15 |
| FR2415300A1 (fr) | 1979-08-17 |
| FR2415300B1 (ja) | 1983-02-18 |
| BR7900801A (pt) | 1979-09-04 |
| JPS54104390A (en) | 1979-08-16 |
| ES477040A1 (es) | 1979-10-16 |
| CA1113840A (en) | 1981-12-08 |
| IT7819458A0 (it) | 1978-01-20 |
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