JPS6143997A

JPS6143997A - 細菌鞭毛染色液

Info

Publication number: JPS6143997A
Application number: JP59165232A
Authority: JP
Inventors: Wakio Minamide; 南出　和喜夫; Kunihide Nakajima; 中島　久二瑛
Original assignee: Shionogi and Co Ltd
Current assignee: Shionogi and Co Ltd
Priority date: 1984-08-07
Filing date: 1984-08-07
Publication date: 1986-03-03
Also published as: EP0173134B1; DK169881B1; DE173134T1; JPH0478279B2; KR890004808B1; DK357885A; KR860001884A; GB2162945A; DK357885D0; EP0173134A1; GB8518248D0; DE3563270D1; GB2162945B

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】イ１発明の目的星１」Ｊ１犯歴立野本発明は細菌同定に用いる鞭毛染色液に関するものであ
る。

疋米ム韮オ細菌の鞭毛を染色する方法としては、レイフソン（Ｌｅ
ｉｆｓｏｎ）によって考案されたレイフラン法（Ｊ、　
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　、　６２．３７７〜３８９（１
９５１）　）、戸田法（医科学研究所学友会報１細菌学
実習提要、（改訂５版）１２Ｂ頁（丸善）昭和５３年）
および長尾法（臨床と細菌、す、８８〜９２（１９８３
）　）などがある、これらの方法で用いる染色液の組成
を以下に示す。

（以下余白）明が　　しようとする−　点現在の臨床検査は自動機器の開発導入などによる自動化
が盛んに行なわれており、臨床細菌検査領域の菌種同定
、薬剤感受性検査などにおいても、簡易同定キットまた
は自動、半自動測定機器を用いた検査法の導入が盛んに
なりつつある。これらの検査法には細菌の形態検査が欠
けている。

しかしながら、細菌検査の基本はあくまでも形態検査に
あり、特に鞭毛が極子性であるか周毛性であるか等の鞭
毛形態検査は菌種鑑別上、極めて重要である。ところが
、日常検査では必ずしも鞭毛形態検査が繁用きれていな
い。これは従来の鞭毛染色方法が下記の欠点を有するた
めである。

■染色液の調製が煩雑である、 ■染色液が長期保存、特に室温保存に耐えない、■染色
操作が難しく、習熟に時間がかかる、■染色結果が明確
でないために判定が容易でない、など。

本発明者らは上記の欠点を有さす、処理操作が簡易でか
つ明瞭な染色像が得られる染色方法の確立を目的として
研究を行ない、本発明の鞭毛染色液を発明した。

口１発明の構成シ　へを　決するための　段本発明にかかる鞭毛染色液は下記の組成物を含む。

ａ、タンニン酸　　　　　　４．５〜１４．０％（背／
Ｖ）ｂ、ミョウバン　　　　　　　１．５〜４．５２（
ｗ／ｖ）ｃ、フェノール　　　　　　　１．２〜３．２
　％（ｗ／ｖ）ｄ、ビクトリアブルーＢ、ナイトブルー
およびゲンチアナ紫からｊばれた色素０．１〜０．４５％（背／Ｖ）ｅ、メタノール、エタノールおよびインプロパツールか
ら選ばれたアルカノール７．０〜１５．０Ｘ（Ｖ／Ｖ）および　ｒ、水　　　　　　　残余量。

なお、上記のミョウバンとは、アルミニウムカリウムミ
ョウバンすなわち硫酸アルミニウムカリウム１２水和物
（ＫＡ１２（５０４）２・１２）１２０）を意味する。

上記色素のカラーインデックスは各々、ビクトリアブル
ーＢ（４４０４５）、ナイトブルー（４４０８５）、ゲ
ンチアナ紫（クリスタル紫）（４２５５５）である。こ
れらの色素のうちでは、ビクトリアブルーが最も好まし
い。

上記のアルカノールは単独でまたは混合して用いうるが
、単独で用いるほうが好ましく、特にインプロパツール
を単独で用いると良好な染色像が得られる。水は精製水
を用いるとよい。

本発明の鞭毛染色液のより好ましい組成は下記のもので
ある。

ａ、タンニン酸　　　　　　　８．０−１０．０Ｘ（ｗ
／ｖ）ｂ、ミョウバン　　　　　　　２．０〜３．ＯＸ
（Ｗ／Ｖ）ｃ、フェノール　　　　　　　２０〜３．Ｏ
％（ｗ／ｖ）ｄ８色素　　　　　　　　　０．１〜０．
２５Ｘ（ｗ／ｖ）ｅ、アルカノール　　　　　　８．　
（１〜１２．０％（ｗ／ｖ）ｒ、水　　　　　　　　　
　残余量。

最も好ましい組成は下記のものである。

染色液Ａ。

ａ、タンニン酸　　　　　　　　９．１Ｘ（冒／Ｖ）ｂ
、ミョウバン　　　　　　　　２．３Ｘ（ｗ／ｖ）ｅ、
フェノール　　　　　　　　２．３Ｘ　（Ｖ／Ｖ）ｄ、
ビクトリアブルーＢ　　　　　０．１８Ｘ（ｗ／ｖ）ｃ
、インプロパツール　　　　　９．０Ｘ　（ｖ／ｖ）。

本発明の染色液は常法に従って調製できる。以下に一例
を示す。

（イ）ミョウバン所望量を精製水に溶かし、全量を１０
０　ｄとする。

（ロ）フェノール所望量を精製水に加えて、全量を１０
０　ｎｆｉとする。

（ハ）タンニン酸所望量。

（ニ）ビクトリアブルーＢ所望量をイソプロパノールに
溶解し、全量を１００−とする。

上記（イ）およびく口）の各５　＠Ｑの混合物に（ハ）
を溶かし、次に（ニ）１ｍＱを加えて十分振ｍ混和する
。

本発明の染色液は調製後直ちに用いることができる一方
、室温で三ケ月以上放蓋してもなんら変化が認められず
、そのまへ使用することができる。

この染色液を用いて細菌の鞭毛を染色する操作は、従来
法が必要とする細菌の固定と殺菌のために実施するホル
マリン処理を必要としない点を除いては、常法と同様で
ある。以下に一具体例を示す。

固形培地（例えば、マツクコンキ−（ＭａｃＣｏｎｋｅ
ｙ）培地、トリガルスキー（Ｄｒｉｇａｌｓｋｉ　）改
良培地、ＣＬＥＤ培地、馬血液寒天培地など）で約２０
〜３７°Ｃで１６〜１８時間培養した新鮮培養菌を適量
の精製水に浮遊許せて、菌浮遊液をつくる。または、液
体培地（特にトリプトソイブイヨン培地が、好ましい）
に約２０〜３７℃で１６〜１８時間培養した新鮮培養菌
をそのま〜菌浮遊液として用いる。清浄なスライドグラ
スに菌液を滴下し自然乾燥後染色液を滴下する。前記の
染色液Ａを用いる場合は約０．２５−を加え、３〜６分
間で染色は完了する。染色液Ａの場合、室温保存きれて
いるときは約３分後、冷蔵保存のときは約６分後に鞭毛
の染色が終わる。次いで染色液を水洗除去し、鏡検に付
す。

本発明の発明者は「発明が解決しようとする問題点」で
記載したように、従来法の欠点を有さない鞭毛染色法の
開発を試み、本発明の染色液を完成した。すなわち、本
発明にかかる染色液および同染色液を用いた染色方法は
下記の長所を有する。

■染色液の調製は、前記のように組成物の溶解と混合の
みで、濾過（戸田法）や静置後上清のみを分離し使用す
る（レイフラン法）等の操作を必要としない。

■保存は室温で３ケ月以上安定であり、用時調製（戸田
法）を必須せず、室温では不安定で４°Ｃ以下の冷蔵が
必要という保存条件（レイフラン法）も必要としない。

■上記のように染色液が安定で、鞭毛が簡単に染色きれ
るために熟練技術を必要としない。

■染色時間は染色液を冷蔵していた場合で約６分、室温
保存で約３分を要するのみである。染色像が明瞭である
ため、染色後３０秒毎に数枚のスラ・Ｃドを作り最適標
本を選ぶ（戸田法）という煩雑な操作を必要としない。

■染色液中にフェノールが含まれるため、予め被検菌を
ホルマリンで固定、殺菌しておくという操作（長尾法、
レイフラン法）を必要としない。

最近、セファロスポリン系抗生剤の繁用に伴いそれらに
耐性を示し、日和見感染症の原因菌となっているブドウ
糖非発酵ダラム陰性桿菌が問題に諮れているが、本発明
にかかる染色液はこれらの菌種鑑別に極めて有用であり
、菌種同定検査における省力化、試薬の節約および同定
鑑別の精度向上をもたらすものである。

裏蓋」以下に実施例により本発明の実施態様を示すが、これら
実施例は何ら本発明を限定するものでない。

実施例１〜３下表に示されるミョウバン水溶液とフェノール水溶液の
混合液にタンニン酸を溶解し、次に色素液を加えて十分
振盪混和し工鞭毛染色液を得る。

Ｐ−フェノール、Ｃ−色素Ａ−アルカノール

Claims

【特許請求の範囲】

（１）下記の組成物を含む細菌鞭毛染色液ａ、タンニン酸　４．５〜１４．０％（ｗ／ｖ）ｂ、ミヨウバン　１．５〜４．５％（ｗ／ｖ）ｃ、フェノール　１．２〜３．２％（ｗ／ｖ）ｄ、ビクトリアブルーＢ、ナイトブルーおよびゲンチア
ナ紫から選ばれた色素　０．１〜０．４５％（ｗ／ｖ
）ｅ、メタノール、エタノールおよびイソプロパノールか
ら選ばれたアルカノール　７．０〜１５．０％（ｖ／ｖ
）および　ｆ、水　残余量。
（２）色素がビクトリアブルーＢである特許請求の範囲
（１）記載の細菌鞭毛染色液。３アルカノールがイソプロパノールである特許請求の範
囲（１）記載の細菌鞭毛染色液。