JPS6144820A - 遺伝子発現の選択的阻害剤 - Google Patents
遺伝子発現の選択的阻害剤Info
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- JPS6144820A JPS6144820A JP60165654A JP16565485A JPS6144820A JP S6144820 A JPS6144820 A JP S6144820A JP 60165654 A JP60165654 A JP 60165654A JP 16565485 A JP16565485 A JP 16565485A JP S6144820 A JPS6144820 A JP S6144820A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
発明の開示
本発明は、遺伝子の発現の選択的ブロッキングの為に、
挿入剤（ａｎ ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｉｎｇ ａｇ
ｅｎｔ ）に結合したオリゴヌクレオチドの適用に関す
る。
挿入剤（ａｎ ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｉｎｇ ａｇ
ｅｎｔ ）に結合したオリゴヌクレオチドの適用に関す
る。
更に詳しくは本発明は、挿入剤に結合したオリゴヌクレ
オチド化合物を核酸配列の選択的プロドツキングへ適用
する方法であって、上記化合物は選択的にブロックされ
るべき核酸配列に相補的な自然の若しくは修飾されたヌ
クレオチド配列を含むオリゴヌクレオチド又はオリゴデ
オキシヌクレオチドからなり、該化合物には挿入基が共
有結合で結合していることを特徴とする方法に関する。
オチド化合物を核酸配列の選択的プロドツキングへ適用
する方法であって、上記化合物は選択的にブロックされ
るべき核酸配列に相補的な自然の若しくは修飾されたヌ
クレオチド配列を含むオリゴヌクレオチド又はオリゴデ
オキシヌクレオチドからなり、該化合物には挿入基が共
有結合で結合していることを特徴とする方法に関する。
本発明の文脈中において、［選択的ブロッキング」とい
う用語は非常に一般的な意味を持つが好ましくは「イン
ビボでのブロッキング」に適用されることを指摘してお
くのが適切である。従って、これは、核酸の複製、一又
はそれ以上の遺伝子の転写及び／又はその翻訳の開始、
伸長又は終結に関与する配列のブロッキングに関連し得
るものである。
う用語は非常に一般的な意味を持つが好ましくは「イン
ビボでのブロッキング」に適用されることを指摘してお
くのが適切である。従って、これは、核酸の複製、一又
はそれ以上の遺伝子の転写及び／又はその翻訳の開始、
伸長又は終結に関与する配列のブロッキングに関連し得
るものである。
しかしながら、それは、例えば「ブロックされた」配列
を酵素又は化学物質に近づけない様にするという保護作
用にも又関連できるものである。
を酵素又は化学物質に近づけない様にするという保護作
用にも又関連できるものである。
本発明で使用し得る化合物の中で、特に下記式の化合物
を挙げねばならない。
を挙げねばならない。
式中、Ｂｍは各々同一又は異なって天然の又は修飾され
た核ｌＳ！ｌ塩基を示し、Ｘ基は各々同一又は異なって
オキソアニオンＯθ、チオアニオンＳｅ１アルキル基、
アルコキシ又はアリルオキシ基、窒素原子含有へテロ環
で置換されたアルコキシ又はアルキル基、アミノアルキ
ル基、アミノアルコキシ基、ヂオーアルキル基又は−ｙ
−ｚｍを示し、Ｒ及びＲ′は各々同一又は異なって水素
原子又は−Ｙ−Ｚ基を示す。ここでＹは直鎖又は分岐鎖
状のアルキレン基−ａｌｋ一又は基−Ｐ−０−ａ、Ｉｋ
−を示し、Ｅ ｉ、！ Ｘに同じか又は基−Ｙ″−０−
Ｙ’を示し、Ｙ ｎ及びＹ′はＹに同じであり、７は挿
入剤に相当する基を示す。Ｊは水素原子又はヒドロキシ
を示し、ｎはＯを含む整数を示す。
た核ｌＳ！ｌ塩基を示し、Ｘ基は各々同一又は異なって
オキソアニオンＯθ、チオアニオンＳｅ１アルキル基、
アルコキシ又はアリルオキシ基、窒素原子含有へテロ環
で置換されたアルコキシ又はアルキル基、アミノアルキ
ル基、アミノアルコキシ基、ヂオーアルキル基又は−ｙ
−ｚｍを示し、Ｒ及びＲ′は各々同一又は異なって水素
原子又は−Ｙ−Ｚ基を示す。ここでＹは直鎖又は分岐鎖
状のアルキレン基−ａｌｋ一又は基−Ｐ−０−ａ、Ｉｋ
−を示し、Ｅ ｉ、！ Ｘに同じか又は基−Ｙ″−０−
Ｙ’を示し、Ｙ ｎ及びＹ′はＹに同じであり、７は挿
入剤に相当する基を示す。Ｊは水素原子又はヒドロキシ
を示し、ｎはＯを含む整数を示す。
式（Ｉ＞は、同一でも又は異なっていても良いヌクレオ
チドの配列を示すものであり、ｎは単に分子中に含まれ
るヌクレオチドの数を示していることを指摘するのが適
切である。ｎは好ましくは１〜５０の数であり、好まし
くは１〜２５の数である。
チドの配列を示すものであり、ｎは単に分子中に含まれ
るヌクレオチドの数を示していることを指摘するのが適
切である。ｎは好ましくは１〜５０の数であり、好まし
くは１〜２５の数である。
挿入剤Ｚは、核酸類に関連する技術において知られてい
る化合物であり、ＤＮＡ又はＲＮＡの構造中に「それ自
体挿入」が可能な化合物である。
る化合物であり、ＤＮＡ又はＲＮＡの構造中に「それ自
体挿入」が可能な化合物である。
これらの挿入剤は、一般的には平滑配置を有するポリ環
状化合物、例えばアクリジン、フロクマリン（ｆｕｒｏ
ｃｏｕｍａｒｉｎ） 、ダウノマイシン（ｄａｕｎｏｍ
ｙｃｉｎ） 、１．１０−フェナンスロリン、フエナン
スリイデイニウム、ポルフィリン類、エリブチシン又は
エリブチジニウム及びこれらの誘導体から成る。
状化合物、例えばアクリジン、フロクマリン（ｆｕｒｏ
ｃｏｕｍａｒｉｎ） 、ダウノマイシン（ｄａｕｎｏｍ
ｙｃｉｎ） 、１．１０−フェナンスロリン、フエナン
スリイデイニウム、ポルフィリン類、エリブチシン又は
エリブチジニウム及びこれらの誘導体から成る。
Ｚの重要なものの内、３種は更に特に使用されるであろ
うニ ー基８−オキシプソラレン（２′） −基２−メトキシー６−クロロー９−アミノアクリジン
（Ｚ″）、及び 一基９−アミノアクリジン（Ｚ ”’ ）。
うニ ー基８−オキシプソラレン（２′） −基２−メトキシー６−クロロー９−アミノアクリジン
（Ｚ″）、及び 一基９−アミノアクリジン（Ｚ ”’ ）。
基Ｂは、好ましくは核酸の天然塩基例えばチミン、アデ
ニン、シトシン、グアニン又はウラシルから成る。しか
しながら、修飾された核酸塩基例えば２−アミノアデニ
ン及びその置換された誘導体、例えばＮｌｌ上がアミノ
アルキレン基又はアジドフェニルアルキレン基で置換さ
れた誘導体；又は例えば０６上が９−（ω−フルキレン
）アクリジン基で置換されたグアニン：又は例えば８−
（ω−アミノアルキル）アミノアデニン及びそのω−Ｎ
Ｈ２上をアクリジン基で置換された誘導体；又はハロゲ
ン化若しくはアジド誘導体例えば５−プロモウラシル又
は８−アジドアデニンを使用することも可能である。
ニン、シトシン、グアニン又はウラシルから成る。しか
しながら、修飾された核酸塩基例えば２−アミノアデニ
ン及びその置換された誘導体、例えばＮｌｌ上がアミノ
アルキレン基又はアジドフェニルアルキレン基で置換さ
れた誘導体；又は例えば０６上が９−（ω−フルキレン
）アクリジン基で置換されたグアニン：又は例えば８−
（ω−アミノアルキル）アミノアデニン及びそのω−Ｎ
Ｈ２上をアクリジン基で置換された誘導体；又はハロゲ
ン化若しくはアジド誘導体例えば５−プロモウラシル又
は８−アジドアデニンを使用することも可能である。
基Ｘは、好ましくはオクソアニオンを示すが、他の基を
示していても良い：Ｘがアルキル基を意味する場合、こ
れは好ましくは０１〜Ｃ７の低級アルキル、例えば、エ
チル、メチル又はプロピル等である；Ｘがアルコキシ基
を意味する場合、これは、好ましくはＣ１〜Ｃ１の低級
アルコキシ、例えばメトキシ又はエトキシ等である：Ｘ
がアミノアルキル又はアミノアルコキシを意味する場合
、これは、−置換又は二置換のアミノアルキル基或いは
四級アンモニウム塩の形態にあるアミノ基であっても良
く、これ等の場合、置換基は上記と同様の低級アルキル
であることが好ましい；アミノ基とリンとを結合するア
ルキル又はアルコキシ鎖に関しては、これは、好ましく
は、炭素数１〜１０の直鎖又は分枝鎖である；アルキル
又はアルコキシ基が窒素含有複素環基で置換されている
場合には、これは、特に、四級塩を形成し得る窒素原子
１個を含む飽和五員環又は六員環である：Ｘがチオアル
キル基である場合には、これは、好ましくは０１〜Ｃ７
の低級チオアルキルである。
示していても良い：Ｘがアルキル基を意味する場合、こ
れは好ましくは０１〜Ｃ７の低級アルキル、例えば、エ
チル、メチル又はプロピル等である；Ｘがアルコキシ基
を意味する場合、これは、好ましくはＣ１〜Ｃ１の低級
アルコキシ、例えばメトキシ又はエトキシ等である：Ｘ
がアミノアルキル又はアミノアルコキシを意味する場合
、これは、−置換又は二置換のアミノアルキル基或いは
四級アンモニウム塩の形態にあるアミノ基であっても良
く、これ等の場合、置換基は上記と同様の低級アルキル
であることが好ましい；アミノ基とリンとを結合するア
ルキル又はアルコキシ鎖に関しては、これは、好ましく
は、炭素数１〜１０の直鎖又は分枝鎖である；アルキル
又はアルコキシ基が窒素含有複素環基で置換されている
場合には、これは、特に、四級塩を形成し得る窒素原子
１個を含む飽和五員環又は六員環である：Ｘがチオアル
キル基である場合には、これは、好ましくは０１〜Ｃ７
の低級チオアルキルである。
Ｒ及びＲ′は、水素を示す以外に、特に下記ａ）〜ｄ）
をも示し得る： ａ） −ａｌｋ −Ｚ ｂ） −Ｐ−０−ａｌｋ −、ｚ ｃ） −ａｌｋ −０−Ｐ−０−ａｌｋ −ｚＩ 上記ａ）〜ｄ）において、−ａｌｋ−基は、好ましくは
、炭素数１〜１０の直鎖又は分枝鎖のアルキレン基であ
る。
をも示し得る： ａ） −ａｌｋ −Ｚ ｂ） −Ｐ−０−ａｌｋ −、ｚ ｃ） −ａｌｋ −０−Ｐ−０−ａｌｋ −ｚＩ 上記ａ）〜ｄ）において、−ａｌｋ−基は、好ましくは
、炭素数１〜１０の直鎖又は分枝鎖のアルキレン基であ
る。
本発明は、更に、塩基又は酸との塩の形態にある上記化
合物、並びにラセミ体及び精製された又は混合状態にあ
るＲ又はＳの光学異性体の使用にも関する。
合物、並びにラセミ体及び精製された又は混合状態にあ
るＲ又はＳの光学異性体の使用にも関する。
本発明の対象は、特に、上記化合物を下記の事項に使用
する点にある： １）予め選択された細胞遺伝子の特異的ブロッキング、 ２）ウィルス、バクテリア又は寄生体 （ｐａｒａｓｉｔｅｓ ）の複製及び／又は発育の選択
的ブロッキング、 この様なブロッキングは、式（Ｉ）の化合物と相補核酸
配列との間での特異的相互作用コンプレックスの形成に
より達成される。
する点にある： １）予め選択された細胞遺伝子の特異的ブロッキング、 ２）ウィルス、バクテリア又は寄生体 （ｐａｒａｓｉｔｅｓ ）の複製及び／又は発育の選択
的ブロッキング、 この様なブロッキングは、式（Ｉ）の化合物と相補核酸
配列との間での特異的相互作用コンプレックスの形成に
より達成される。
本発明によれば、遺伝子の発現は、式（Ｉ＞の化合物を
使用することによりコントロールされる。
使用することによりコントロールされる。
該化合物の配列は、遺伝子又は対応するメツセンジャー
ＲＮＡの特定領域の配列に対し相補的である。ＤＮＡ又
はＲＮＡの複製は、その配列が複製の調節、開始又は伸
長を司る領域に対して相補的である式（Ｉ）の化合物に
よりブロックされ得る。
ＲＮＡの特定領域の配列に対し相補的である。ＤＮＡ又
はＲＮＡの複製は、その配列が複製の調節、開始又は伸
長を司る領域に対して相補的である式（Ｉ）の化合物に
よりブロックされ得る。
若し、所定の遺伝子の発現生成物がウィルス、バクテリ
ア又は寄生体にとって死活に係るものであれば、或いは
ＤＮＡ又はＲＮＡの複製がブロックされれば、式（Ａ）
の化合物は、抗ウィルス剤、抗生物質或いは抗寄生体剤
としての作用を発揮する。
ア又は寄生体にとって死活に係るものであれば、或いは
ＤＮＡ又はＲＮＡの複製がブロックされれば、式（Ａ）
の化合物は、抗ウィルス剤、抗生物質或いは抗寄生体剤
としての作用を発揮する。
又、所定の遺伝子の発現生成物が微生物等にとって死活
に係るものでない場合には、その効果を選択的に調整若
しくは除くことができる。この場合、一般式（１）の化
合物は、例えば当該遺伝子が腫瘍遺伝子又は細胞不死化
（ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚａｔｉｏｎ ）又は形質転換に
関与する遺伝子である場合は抗癌物質として作用し、ま
た、当該遺伝子が抗生物質、抗ウィルス剤又は抗寄生体
剤に対する耐性遺伝子である場合は、これらに対する耐
性を除去する物質として作用する。
に係るものでない場合には、その効果を選択的に調整若
しくは除くことができる。この場合、一般式（１）の化
合物は、例えば当該遺伝子が腫瘍遺伝子又は細胞不死化
（ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚａｔｉｏｎ ）又は形質転換に
関与する遺伝子である場合は抗癌物質として作用し、ま
た、当該遺伝子が抗生物質、抗ウィルス剤又は抗寄生体
剤に対する耐性遺伝子である場合は、これらに対する耐
性を除去する物質として作用する。
従って、例えば、下記化合物を用いてバクテリオファー
ジＴ４の蛋白質３２の合成を阻害することも可能である
（実施例１７参照） Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ａ Ａ （ＣＨ２＞ｓ Ｚ″Ｔ−Ｔ−
Ｔ−Ａ−Ａ−’Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ａ−（ＣＨ２）５Ｚ” Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｔ Ｔ−
Ｔ Ａ Ａ （ＣＨ２）５２″上記化合物の配列
は、メツセンジャーＲＮＡの開始コドンの上流に位置す
る領域と相補的である。
ジＴ４の蛋白質３２の合成を阻害することも可能である
（実施例１７参照） Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ａ Ａ （ＣＨ２＞ｓ Ｚ″Ｔ−Ｔ−
Ｔ−Ａ−Ａ−’Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ａ−（ＣＨ２）５Ｚ” Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ａ−Ｔ Ｔ−
Ｔ Ａ Ａ （ＣＨ２）５２″上記化合物の配列
は、メツセンジャーＲＮＡの開始コドンの上流に位置す
る領域と相補的である。
同様に、実施例１８は、β−ラクタム環を含有する抗生
物質に対する細菌の耐性に関与するβ−ラクタマーゼ遺
伝子が、該遺伝子の転写開始領域に相補的な下記式 ％式％） で表わされる化合物により抑制されることを示す。
物質に対する細菌の耐性に関与するβ−ラクタマーゼ遺
伝子が、該遺伝子の転写開始領域に相補的な下記式 ％式％） で表わされる化合物により抑制されることを示す。
本発明によれば、発癌性又は非発癌性ウィルスの増殖を
、特定のウィルスＤＮＡ又はＲＮＡ領域に相補的な配列
を有する一般式（Ｉ）の化合物を用いることにより、阻
害することができる。
、特定のウィルスＤＮＡ又はＲＮＡ領域に相補的な配列
を有する一般式（Ｉ）の化合物を用いることにより、阻
害することができる。
Ａ型インフルエンザウィルスの８ＲＮＡ断片の３′末端
の配列〔デツセルベルガー・ニー（Ｄｅｓｓｌｂ、ｅｒ
ｇｅｒ ｕ、）、ラカニエロ、ヴイ、アール（Ｒａｃａ
ｎｉｅｌｌｏ Ｖ、 Ｒ，） 、ザグラ・ジエイ・ジ
エイ（Ｚａｏｒａ Ｊ、 Ｊ、 ）及びパレセ・ピー（
Ｐａ１ｅｓｅ Ｐ、 ）（１９８０）ジーン（Ｇｅｎ
ｅ） 、８．３１５−３２８〕と相補的な配列を有する
ヘプタヌクレオチド５’ Ａ’−Ａ−Ａ−Ｇ −、ＣＡ
Ｇ −（ＣＨ２）ｓＺ ｕは、該ウィルスの細胞病
原性（ｃｙｔｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ）作用を完全に抑
制する（実施例２０参照）。
の配列〔デツセルベルガー・ニー（Ｄｅｓｓｌｂ、ｅｒ
ｇｅｒ ｕ、）、ラカニエロ、ヴイ、アール（Ｒａｃａ
ｎｉｅｌｌｏ Ｖ、 Ｒ，） 、ザグラ・ジエイ・ジ
エイ（Ｚａｏｒａ Ｊ、 Ｊ、 ）及びパレセ・ピー（
Ｐａ１ｅｓｅ Ｐ、 ）（１９８０）ジーン（Ｇｅｎ
ｅ） 、８．３１５−３２８〕と相補的な配列を有する
ヘプタヌクレオチド５’ Ａ’−Ａ−Ａ−Ｇ −、ＣＡ
Ｇ −（ＣＨ２）ｓＺ ｕは、該ウィルスの細胞病
原性（ｃｙｔｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ）作用を完全に抑
制する（実施例２０参照）。
下記化合物
５’ Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−（ＣＨ２）６
２″ ５’ Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｅｔ及びＨＯ
（ＣＨ２）６ ２″ の作用を受けた３つのウィルス、即ちＳＶ４０ウィルス
、インフルエンザ Ａ／ＷＳＮウィルス及びヘルペスウ
ィルスのうち、次の配列 ５’ Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ３’ Ａ−Ａ−
Ａ−Ａ−Ａ−Ａ−Ａ−Ａを複製及び初期遺伝子の転写の
起源の近傍に有するＳＶ４０ウィルス〔ソエダ・イー（
Ｓｏｅｄａ Ｅ、）及びミウラ・ケー・アイ（Ｈｉｕｒ
ａ Ｋ、 １． ）（１９７９）ＦＥＢＳ レターズ
１０１゜３５９−３６２）のみが、 （Ｔ ） ｓ （ＣＨ２）６２″に対し感受性を有
する。挿入剤ｚ ｎを有しないオクタチミジレート（Ｔ
−）ａＥ’ｊは、これらウィルスに対し不活性であり、
他方、ＨＯ（ＣＨ２）６２″は細胞毒性作用が強過ぎ、
抗ウィルス活性を発揮できない（実施例２０参照）。
２″ ５’ Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｅｔ及びＨＯ
（ＣＨ２）６ ２″ の作用を受けた３つのウィルス、即ちＳＶ４０ウィルス
、インフルエンザ Ａ／ＷＳＮウィルス及びヘルペスウ
ィルスのうち、次の配列 ５’ Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ３’ Ａ−Ａ−
Ａ−Ａ−Ａ−Ａ−Ａ−Ａを複製及び初期遺伝子の転写の
起源の近傍に有するＳＶ４０ウィルス〔ソエダ・イー（
Ｓｏｅｄａ Ｅ、）及びミウラ・ケー・アイ（Ｈｉｕｒ
ａ Ｋ、 １． ）（１９７９）ＦＥＢＳ レターズ
１０１゜３５９−３６２）のみが、 （Ｔ ） ｓ （ＣＨ２）６２″に対し感受性を有
する。挿入剤ｚ ｎを有しないオクタチミジレート（Ｔ
−）ａＥ’ｊは、これらウィルスに対し不活性であり、
他方、ＨＯ（ＣＨ２）６２″は細胞毒性作用が強過ぎ、
抗ウィルス活性を発揮できない（実施例２０参照）。
従って、本発明化合物は、目標とする核酸配列に対し大
きな選択性及び高い親和性の双方・ン有す１す る。この高い特異的親和性に基き、本発明化合物は、健
常細胞に対し毒性が非常に低い（実施例１９及び２０参
照）。
きな選択性及び高い親和性の双方・ン有す１す る。この高い特異的親和性に基き、本発明化合物は、健
常細胞に対し毒性が非常に低い（実施例１９及び２０参
照）。
これらの結果より、本発明化合物は、遺伝子発現の調節
又は、ウィルス、細菌、寄生体（ｐａｒａｓｉｔｅ）の
増殖抑制に使用できることが判る。一般式（Ｉ）の化合
物は、その相補的核酸配列に対する高い特異的親和性に
基き、該相補的配列に対する親和性の低いオリゴヌクレ
オチド単独に比しても、また、選択性がなく、健常細胞
に対し毒性のある挿入剤単独に比しても、優れている。
又は、ウィルス、細菌、寄生体（ｐａｒａｓｉｔｅ）の
増殖抑制に使用できることが判る。一般式（Ｉ）の化合
物は、その相補的核酸配列に対する高い特異的親和性に
基き、該相補的配列に対する親和性の低いオリゴヌクレ
オチド単独に比しても、また、選択性がなく、健常細胞
に対し毒性のある挿入剤単独に比しても、優れている。
従って、本発明化合物は、ウィルス、細菌、寄生体に由
来する疾病の治療用薬剤として、或いは制癌剤としても
適用できる。また、本発明化合物は、各種抗生物質、抗
ウィルス剤又は抗寄生体剤に対する耐性を有する株を、
その耐性に関与する遺伝子を抑制することにより、上記
抗生物質等に対する感受性を与える用途に適用すること
もできる。
来する疾病の治療用薬剤として、或いは制癌剤としても
適用できる。また、本発明化合物は、各種抗生物質、抗
ウィルス剤又は抗寄生体剤に対する耐性を有する株を、
その耐性に関与する遺伝子を抑制することにより、上記
抗生物質等に対する感受性を与える用途に適用すること
もできる。
これら本発明化合物の投与量及び投与方法は、処置すべ
き症状の性質、本発明化合物に期待される活性の種類等
により異なる。
き症状の性質、本発明化合物に期待される活性の種類等
により異なる。
更に本発明は、薬理的に許容される担体、及び有効成分
として上記薬剤の少なくとも１種を単独で又は抗生物質
、抗寄生体剤、抗ウィルス剤又は制癌剤と共に含有する
薬理組成物をも提供するものである。
として上記薬剤の少なくとも１種を単独で又は抗生物質
、抗寄生体剤、抗ウィルス剤又は制癌剤と共に含有する
薬理組成物をも提供するものである。
本発明によれば、一般式（Ｉ）の化合物の有効性は、例
えば、リン酸エステル基、挿入剤とオリゴヌクレオチド
との接合部、核酸塩基等を修飾することにより改善し得
る。例えば、このような修飾により、相補的核酸配列に
対する親和性を増大させ、ヌクレアーゼに対する安定性
を付与し、細胞膜を透過し易くすることも可能である。
えば、リン酸エステル基、挿入剤とオリゴヌクレオチド
との接合部、核酸塩基等を修飾することにより改善し得
る。例えば、このような修飾により、相補的核酸配列に
対する親和性を増大させ、ヌクレアーゼに対する安定性
を付与し、細胞膜を透過し易くすることも可能である。
相補的核酸配列に対する本発明化合物の親和性の改善は
、アデニン基を２−アミツーアデニン基に置き換えるこ
とにより達成される。即ち、核酸のチミン又はウラシル
の０２との間に水素結合を追加することによる。
、アデニン基を２−アミツーアデニン基に置き換えるこ
とにより達成される。即ち、核酸のチミン又はウラシル
の０２との間に水素結合を追加することによる。
相補的核酸配列に対する本発明化合物の親和性は、リン
酸ジエステル基を部分的に又は全面的にリン酸トリエス
テル基又は中性ホスホネート基又は正電荷を有する基に
置き換えることによっても増大させ得る。第一に、この
修飾は、オリゴヌクレオチドリン酸ジエステル基の負電
荷と相補的核酸配列の負電荷との静電反発を減少又は除
去し、第二に、静電誘引により相補的配列に対する親和
性を増大させるのである。
酸ジエステル基を部分的に又は全面的にリン酸トリエス
テル基又は中性ホスホネート基又は正電荷を有する基に
置き換えることによっても増大させ得る。第一に、この
修飾は、オリゴヌクレオチドリン酸ジエステル基の負電
荷と相補的核酸配列の負電荷との静電反発を減少又は除
去し、第二に、静電誘引により相補的配列に対する親和
性を増大させるのである。
ｎ個のリン酸ジエステル基をｎ個のリン酸トリエステル
基又はホスホネート基で置換すると、ｎ２個の立体異性
体が生じ、その物理化学的性質及び生化学的性質は非常
に異なったものとなり得る。
基又はホスホネート基で置換すると、ｎ２個の立体異性
体が生じ、その物理化学的性質及び生化学的性質は非常
に異なったものとなり得る。
下記表は、ポリ（ｒＡ）とリン酸ジエステル基がメチル
ホスホネート基により置換され若しくは置換されていな
いオリゴチミジレートエとの複合体の半解離（ｈａｌｆ
−ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ）温度を示す。
ホスホネート基により置換され若しくは置換されていな
いオリゴチミジレートエとの複合体の半解離（ｈａｌｆ
−ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ）温度を示す。
メチルホス Ｔ１／２
ホネート基
の配座 （’Ｃ）
上記結果より、化合物（Ｉ）のリン酸ジ］、スプル基を
置換することにより、相補的核酸配列に対する親和性が
増大することが判る。
置換することにより、相補的核酸配列に対する親和性が
増大することが判る。
Ｔ１／２値は、１０−２Ｍカコジル酸ナトリウム及び０
．ＩＭ ＮａＣＱを含有するｐＨ７のｖｌｌｔｉ液中
で挿入剤ｆｆ１ｒ！１５ｘ１０−”Ｍの濃度において１
：１（Ｔ：Ａ）比のものについて測定したものである。
．ＩＭ ＮａＣＱを含有するｐＨ７のｖｌｌｔｉ液中
で挿入剤ｆｆ１ｒ！１５ｘ１０−”Ｍの濃度において１
：１（Ｔ：Ａ）比のものについて測定したものである。
本発明によれば、リン酸ジエステル基をリン酸トリニス
デル基又は中性のもしくは好ましくは正電荷を有するボ
スボネート基で置換づることにより、ヌクレオチドをヌ
クレアーゼに対し著しく安定化する。例えば、下式 〔式中、Ｘは、Ｍｅ又はＯＥｔを示ツ。〕で表わされる
化合物は、エクソヌクレアーゼ、例えば牛婢臓及びヘビ
静脈（ｓｎａｋｅ ｖｅｎｏｍ ）から抽出したエクソ
ヌクレアーゼ等によって分解されることはない（後者が
不活性化するのは、３′−ヒドロキシルのブロッキング
に基く）。
デル基又は中性のもしくは好ましくは正電荷を有するボ
スボネート基で置換づることにより、ヌクレオチドをヌ
クレアーゼに対し著しく安定化する。例えば、下式 〔式中、Ｘは、Ｍｅ又はＯＥｔを示ツ。〕で表わされる
化合物は、エクソヌクレアーゼ、例えば牛婢臓及びヘビ
静脈（ｓｎａｋｅ ｖｅｎｏｍ ）から抽出したエクソ
ヌクレアーゼ等によって分解されることはない（後者が
不活性化するのは、３′−ヒドロキシルのブロッキング
に基く）。
次の化合物
で表わされる化合物は、上記エクソヌクレアーゼ及びペ
ニシリウム・シトリラム（Ｐｃｎｉｃｉｌｌｉｕｍｃｉ
ｔｒｉｕｎ＋ ）から抽出されたエンドヌクレアーゼＰ
１に対して、ジヌクレオチドＴｐＴがこれら酵素により
完全に分解される条件下でも、安定である。
ニシリウム・シトリラム（Ｐｃｎｉｃｉｌｌｉｕｍｃｉ
ｔｒｉｕｎ＋ ）から抽出されたエンドヌクレアーゼＰ
１に対して、ジヌクレオチドＴｐＴがこれら酵素により
完全に分解される条件下でも、安定である。
本発明の新規化合物の合成は、１９８３（１１１２７日
のフランス特許第８３１０１２２３号に記載の方法と同
様な方法で行なうことができる。
のフランス特許第８３１０１２２３号に記載の方法と同
様な方法で行なうことができる。
これら化合物のうち、例えば下式で表わされる化合物が
好ましい。
好ましい。
ｄ ［Ｔ（；−Ａ−（Ｃ）＋２）ｎＺコｄ［Ｃ−Ｃ−Ｃ
−Ｔ−Ｇ−Ａ−（ＣＨ２）ｎＺコｄ ［Ｔ−Ａ−Ａ−Ｃ
−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ａ−ｇｃｎ２）ｎｚコａ［Ａ−Ａ−
Ａ−ｃ−ｃ−Ａ−ｃ−＜ｃＨ２）ｎｚ］ａ １７−ｃ−
ｃ−ａ−ｘ−Ａ−Ａ−ｃ−ｃ−ｘ−ａ＝ （ＣＨ２）ｎ
Ｚｌａ ［Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−
Ｃ−（ＣＨ２）ｎＺｌｄ［：Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−
Ｔ−Ｔ−Ｃ−ｃ−Ｃ−（ＣＨ２）、ＺコｄｊニーＴ−Ｃ
−Ｇ−Ｔ−Ｃ−ｃ−（ｃＨ２）ｎＺコｄ［ｃ−ｃ−ｃ−
Ａ−ｒ−ｃ−＜；−ｒ−ｃ−ｃ−（ｃｕ２）ｎＺ］衷−
ｍｍ 本発明の特徴とするところをより一層明らかにする為に
、以下に実施例を示す。尚、本発明は、何らこれ等の実
施例により限定的に解釈されるものではない。
−Ｔ−Ｇ−Ａ−（ＣＨ２）ｎＺコｄ ［Ｔ−Ａ−Ａ−Ｃ
−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ａ−ｇｃｎ２）ｎｚコａ［Ａ−Ａ−
Ａ−ｃ−ｃ−Ａ−ｃ−＜ｃＨ２）ｎｚ］ａ １７−ｃ−
ｃ−ａ−ｘ−Ａ−Ａ−ｃ−ｃ−ｘ−ａ＝ （ＣＨ２）ｎ
Ｚｌａ ［Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−
Ｃ−（ＣＨ２）ｎＺｌｄ［：Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−
Ｔ−Ｔ−Ｃ−ｃ−Ｃ−（ＣＨ２）、ＺコｄｊニーＴ−Ｃ
−Ｇ−Ｔ−Ｃ−ｃ−（ｃＨ２）ｎＺコｄ［ｃ−ｃ−ｃ−
Ａ−ｒ−ｃ−＜；−ｒ−ｃ−ｃ−（ｃｕ２）ｎＺ］衷−
ｍｍ 本発明の特徴とするところをより一層明らかにする為に
、以下に実施例を示す。尚、本発明は、何らこれ等の実
施例により限定的に解釈されるものではない。
実施例１
Ｔ−Ｔ Ｔ Ｔ （ＣＨ２）５ Ｚ”１） （
ＤＭＴＩＴ＋Ｔ手Ｔ＋Ｔ＋（ＣＨ２）ｓ ＩＩＩ ＤＭＴｒＴ＋Ｔ＋Ｔ＋Ｔ−Ａｒ （フランス特許第８３
１０１２２３号の方法により製造したもの）１当量、９
−（ω−とドロキシペンチルアミノ）アクリジン１．５
当量及びＭＳＴ２当量からなる混合物を無水ピリジン中
空部で１時間反応させた。
ＤＭＴＩＴ＋Ｔ手Ｔ＋Ｔ＋（ＣＨ２）ｓ ＩＩＩ ＤＭＴｒＴ＋Ｔ＋Ｔ＋Ｔ−Ａｒ （フランス特許第８３
１０１２２３号の方法により製造したもの）１当量、９
−（ω−とドロキシペンチルアミノ）アクリジン１．５
当量及びＭＳＴ２当量からなる混合物を無水ピリジン中
空部で１時間反応させた。
氷水を加えて過剰のカプリング剤を分解した後、生成物
をクロロホルムで抽出し、更に ＣＨ２ＣＱ ２ ：ＭｅＯＨ混合物（体積比９９：１〜
９０ ： １０）を使用してシリカゲル上で精製した。
をクロロホルムで抽出し、更に ＣＨ２ＣＱ ２ ：ＭｅＯＨ混合物（体積比９９：１〜
９０ ： １０）を使用してシリカゲル上で精製した。
２）上記で得たテトラヌクレオチドを撹拌下−夜室温で
ピリジン中にベンゾヒドロキサム酸及び１゜８−ジアザ
ピシクａ （５，４，０）ウンデク−７−エン（ＤＢｕ
という）を夫々１モル含む溶液と反応させた。溶液の使
用量は、脱保護さるべきアリール化リン酸エステル１当
量当りベンゾヒドロキサム酸−ＤＢＬ１１０当量となる
量であった。反応液媒をダウエックス５０ （ＤＯＷＥ
Ｘ５０）（ピリジニウム型）により中和し、レジンを水
−メタノール混合物（体積比１：１）で洗浄し、次いで
溶剤を減圧上除去した。得られた残分を８０％酢酸によ
り室温で１〜２時間処理した。酢酸は、メタノールを使
用して減圧上数個にわたり共沸蒸発させた。次いで、残
分を水に加え、水相をエーテルで洗浄した。生成物を高
速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用して、最
初はイオン交換により、次いで逆相により精製した。精
製物の保持時間を第１表及び第２表に示１゜ 実施例２ 下記の立体異性体の混合物の形態を有する、メチルホス
ホン酸から得られたオクタチミジレーＩ・フランス特許
第８３１０１２２３月の方法で得られた下記のジヌクレ
オチド Ａｒ ０．２ミリモルを室温で２時間にわたりピリジン／トリ
エチルアミン（体積比２：１）混合物４ｍｆ２で処理し
た。減圧上溶媒を除去した後、得られた固形分をエーテ
ルで洗浄した。
ピリジン中にベンゾヒドロキサム酸及び１゜８−ジアザ
ピシクａ （５，４，０）ウンデク−７−エン（ＤＢｕ
という）を夫々１モル含む溶液と反応させた。溶液の使
用量は、脱保護さるべきアリール化リン酸エステル１当
量当りベンゾヒドロキサム酸−ＤＢＬ１１０当量となる
量であった。反応液媒をダウエックス５０ （ＤＯＷＥ
Ｘ５０）（ピリジニウム型）により中和し、レジンを水
−メタノール混合物（体積比１：１）で洗浄し、次いで
溶剤を減圧上除去した。得られた残分を８０％酢酸によ
り室温で１〜２時間処理した。酢酸は、メタノールを使
用して減圧上数個にわたり共沸蒸発させた。次いで、残
分を水に加え、水相をエーテルで洗浄した。生成物を高
速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用して、最
初はイオン交換により、次いで逆相により精製した。精
製物の保持時間を第１表及び第２表に示１゜ 実施例２ 下記の立体異性体の混合物の形態を有する、メチルホス
ホン酸から得られたオクタチミジレーＩ・フランス特許
第８３１０１２２３月の方法で得られた下記のジヌクレ
オチド Ａｒ ０．２ミリモルを室温で２時間にわたりピリジン／トリ
エチルアミン（体積比２：１）混合物４ｍｆ２で処理し
た。減圧上溶媒を除去した後、得られた固形分をエーテ
ルで洗浄した。
Ａｒ
下記のジヌクレオチド
０．１モルをベンゼンスルホン１１．５ｍＱ（クロロホ
ルム／メタノール−７：３（体積比）を溶媒とする２％
溶液〕により０℃で１５分聞処理した。
ルム／メタノール−７：３（体積比）を溶媒とする２％
溶液〕により０℃で１５分聞処理した。
混合物をりＯＯホルム２０ｍＱに加え、５％Ｎ ａ Ｈ
ＣＯ３水溶液で洗浄し、Ｎａ２５Ｏｔｌ：ｒ乾燥した後
、減圧上乾燥した。乾燥残分に対し、上記１）で得たジ
エステル０．１２モルを加え、該混合物をピリジンとの
共沸蒸留により乾燥した後、無水ピリジン１．５１１１
１１１とＭＳＴｏ、３ミリモルとを残分に加えた。反応
混合物を撹拌上室温で２時間保持することにより、実施
例１−１）と同様にして生成物を得た。収率は６５％で
あった。
ＣＯ３水溶液で洗浄し、Ｎａ２５Ｏｔｌ：ｒ乾燥した後
、減圧上乾燥した。乾燥残分に対し、上記１）で得たジ
エステル０．１２モルを加え、該混合物をピリジンとの
共沸蒸留により乾燥した後、無水ピリジン１．５１１１
１１１とＭＳＴｏ、３ミリモルとを残分に加えた。反応
混合物を撹拌上室温で２時間保持することにより、実施
例１−１）と同様にして生成物を得た。収率は６５％で
あった。
ｒ
化合物
に代えて化合物
を使用する以外は、実施例２−１）及び実施例２−２）
と同様の手法により、オクタチミジレ−１−を１９だ後
、これをＣＨ２Ｃ２０／水／アセトン（体積比で４３／
２１５５）からなる溶媒系の存在下にシリカ上で精製し
た。
と同様の手法により、オクタチミジレ−１−を１９だ後
、これをＣＨ２Ｃ２０／水／アセトン（体積比で４３／
２１５５）からなる溶媒系の存在下にシリカ上で精製し
た。
ｒ
下記のジエステル（実施例２−１）に従って実施例２−
３）のトリエステルにトリエチルアミンを作用させて得
たもの〕 ｒ １当量を２−メトキシ−６−クロロ−９−（ω−ヒドロ
キシへキシルアミノ）アクリジン２当ＷとＭＳＴ３モル
の存在下に無水ピリジン中でカプリングさせる。氷水を
加えて過剰のカプリング剤を分解した後、生成物をクロ
ロホルムで抽出し、次いで、ＣＨ２ＣＱ２／Ｈ２Ｃ上１
〜ン（体積比２０：５ ： ７５）からなる溶媒系の存
在下にシリカゲル上で精製した。
３）のトリエステルにトリエチルアミンを作用させて得
たもの〕 ｒ １当量を２−メトキシ−６−クロロ−９−（ω−ヒドロ
キシへキシルアミノ）アクリジン２当ＷとＭＳＴ３モル
の存在下に無水ピリジン中でカプリングさせる。氷水を
加えて過剰のカプリング剤を分解した後、生成物をクロ
ロホルムで抽出し、次いで、ＣＨ２ＣＱ２／Ｈ２Ｃ上１
〜ン（体積比２０：５ ： ７５）からなる溶媒系の存
在下にシリカゲル上で精製した。
５）上記２−４）で１ｇられた化合物の脱保護を実施例
１−２）と同様にして行なった。但し、脱アリール化は
約２４ｖｉ間を要した。生成物を次いで高速液体クロマ
トグラフィー（ＨＰＬＣ）により精製した。第１表及び
第２表に生成物の保持時間を示す。
１−２）と同様にして行なった。但し、脱アリール化は
約２４ｖｉ間を要した。生成物を次いで高速液体クロマ
トグラフィー（ＨＰＬＣ）により精製した。第１表及び
第２表に生成物の保持時間を示す。
実施例３及び４
Ｓ異性体（実施例３）及びＲ異性体（実施例４）の形態
にある、メチルホスホン酸から得られたオクタチミジレ
ート 下式で示されるジヌクレオチドのＳ（又はα）異性体及
びＲ（又はβ）異性体の夫々（フランス特許第８３１０
１２２３号の方法で得られたもの）を使用するとともに
、２−メ１−キシ−６−クロロ＝９−（ω−ヒドロキシ
へキシルアミノ）アクリジンに代えて２−メトキシ−６
−クロロ−９−（ω−ヒドロキシペンチルアミノ）アク
リジンを使用する以外は実施例２と同様にして、 メチ
ルホスホネート基がＳ型（実施例３）又はＲ型（実施例
４）であるオクタチミジレ−１〜を得た。
にある、メチルホスホン酸から得られたオクタチミジレ
ート 下式で示されるジヌクレオチドのＳ（又はα）異性体及
びＲ（又はβ）異性体の夫々（フランス特許第８３１０
１２２３号の方法で得られたもの）を使用するとともに
、２−メ１−キシ−６−クロロ＝９−（ω−ヒドロキシ
へキシルアミノ）アクリジンに代えて２−メトキシ−６
−クロロ−９−（ω−ヒドロキシペンチルアミノ）アク
リジンを使用する以外は実施例２と同様にして、 メチ
ルホスホネート基がＳ型（実施例３）又はＲ型（実施例
４）であるオクタチミジレ−１〜を得た。
精製物の保持時間を第１表及び第２表に示す。
実施例５
インターヌクレオチドがＳ型のメタルホスホネートグル
ープを有する場合 フランス特許第８３１０１２２３号の方法で得られた５
’−０（ジメトキシトリデル）チミジン−３′−メチル
−ホスホネート１当ｍを撹拌上室温で２時間にわたりＭ
ＳＴ３当最の存在下に２−メトキシ−６−クロロ−９−
（ω−ヒドロキシペンチルアミノ）アクリジン２当のに
より処理した。
ープを有する場合 フランス特許第８３１０１２２３号の方法で得られた５
’−０（ジメトキシトリデル）チミジン−３′−メチル
−ホスホネート１当ｍを撹拌上室温で２時間にわたりＭ
ＳＴ３当最の存在下に２−メトキシ−６−クロロ−９−
（ω−ヒドロキシペンチルアミノ）アクリジン２当のに
より処理した。
氷水を加えて過剰のＭＳＴを分解した後、生成物をクロ
ロホルムで抽出し、次いでシリカゲル上でクロマトグラ
フィーにより精製した。生成物をベンゼンスルボン酸（
クロロホルム／メタノール−７容量部／３容聞部の混合
液中２％溶液）により０℃で１５分間処理して、脱トリ
チル化した。次いで混合物をクロロホルム中にとり、５
％ＮａＨＣＯａ水溶液で洗浄し、Ｎａ２５Ｏｔ上で乾燥
し、減圧上濃縮した。生成物は、クロマトグラフィーに
よりシリカゲル上で゛精製した。
ロホルムで抽出し、次いでシリカゲル上でクロマトグラ
フィーにより精製した。生成物をベンゼンスルボン酸（
クロロホルム／メタノール−７容量部／３容聞部の混合
液中２％溶液）により０℃で１５分間処理して、脱トリ
チル化した。次いで混合物をクロロホルム中にとり、５
％ＮａＨＣＯａ水溶液で洗浄し、Ｎａ２５Ｏｔ上で乾燥
し、減圧上濃縮した。生成物は、クロマトグラフィーに
よりシリカゲル上で゛精製した。
２） 実施例１と同様にしてテトラヌクレオデートのＳ
異性体 Ａｒ １当ｍと化合物 １．２当量とをＭＳ７３当量の存在下にカプリングする
ことにより、ペンタチミジレートを得た。
異性体 Ａｒ １当ｍと化合物 １．２当量とをＭＳ７３当量の存在下にカプリングする
ことにより、ペンタチミジレートを得た。
）ＩＰＬｃにおける保持時間を第２表に示す。
実施例６
ｄＴ Ｇ−Ａ （ＣＨ２）ｓ Ｚ″１） ｄｂｚ
Ａ手（ＣＨ２）５２″ フランス特許第８３１０１２２３号による化合物（ＤＭ
Ｔｒ）ｄｂＺＡ＋ （ＣＨ２）５ Ｚ” １ミリモルを
０℃で１５分間にわたりクロロホルム／メタノール（体
積比７：３）中ベンゼンスルホン酸を２％含む溶液１０
−により処理した。溶液をクロロホルムに加え、５％Ｎ
ａＨＣＯ３溶液により洗浄し、次いでＮａ２ｓＯｔ上で
乾燥し、減圧下に濃縮した。
Ａ手（ＣＨ２）５２″ フランス特許第８３１０１２２３号による化合物（ＤＭ
Ｔｒ）ｄｂＺＡ＋ （ＣＨ２）５ Ｚ” １ミリモルを
０℃で１５分間にわたりクロロホルム／メタノール（体
積比７：３）中ベンゼンスルホン酸を２％含む溶液１０
−により処理した。溶液をクロロホルムに加え、５％Ｎ
ａＨＣＯ３溶液により洗浄し、次いでＮａ２ｓＯｔ上で
乾燥し、減圧下に濃縮した。
２） （ＤＭＴｒ）ｄＴ手ｉ ｂＧ−Ａｒフランス特
許第８３１０１２２３号の方法により得たジヌクレオチ
ド（ＤＭＴｒ）ｄＴ４ ｉ ｂＧ＋ＣＮＥｔ１．２ミリ
モルを室温で２時間にわたりピリジン／トリエチルアミ
ン混合物（体積比２１）３−によ冑処理した。溶媒を減
圧上除去し、得られた固形分をエーテルで洗浄した。
許第８３１０１２２３号の方法により得たジヌクレオチ
ド（ＤＭＴｒ）ｄＴ４ ｉ ｂＧ＋ＣＮＥｔ１．２ミリ
モルを室温で２時間にわたりピリジン／トリエチルアミ
ン混合物（体積比２１）３−によ冑処理した。溶媒を減
圧上除去し、得られた固形分をエーテルで洗浄した。
３） （ＤＭＴｒ）ｄＴ＋ ｉ ｂＧ￥ｂｚＡｉ（Ｃ
Ｈ２）５ Ｚ” 化合物ｄｂｚＡ手（ＣＨ２）５ Ｚ“と（ＤＭＴｒ）ｄ
Ｔ￥１ｂＱ−Ａｒを混合した後、無水ピリジンで数回共
沸蒸留により乾燥した。得られた残分にピリジン１〇−
及びＭＳＴ３ミリ［ルを加え、混合物を撹拌下に１〜２
時間室温に保持した。氷水を添加して過剰のカプリング
剤を分解し、生成物をクロロホルムにより抽出し、次い
でクロロホルム溶液をＮａ２５Ｏｔ上で乾燥した。
Ｈ２）５ Ｚ” 化合物ｄｂｚＡ手（ＣＨ２）５ Ｚ“と（ＤＭＴｒ）ｄ
Ｔ￥１ｂＱ−Ａｒを混合した後、無水ピリジンで数回共
沸蒸留により乾燥した。得られた残分にピリジン１〇−
及びＭＳＴ３ミリ［ルを加え、混合物を撹拌下に１〜２
時間室温に保持した。氷水を添加して過剰のカプリング
剤を分解し、生成物をクロロホルムにより抽出し、次い
でクロロホルム溶液をＮａ２５Ｏｔ上で乾燥した。
減圧下に溶媒を追出した後、生成物をシリカゲル上でＣ
Ｈ２ＣＱ２／水／アセトン水体アセトン６：２：５２）
及びＣＨ２ＣＱ２／水／アｌ？ｌ−ン（体積比で４０：
２：５８）の両溶媒系で順次精製した。
Ｈ２ＣＱ２／水／アセトン水体アセトン６：２：５２）
及びＣＨ２ＣＱ２／水／アｌ？ｌ−ン（体積比で４０：
２：５８）の両溶媒系で順次精製した。
４）上記３）で得たトリヌクレオチドをピリジン中にＣ
６Ｈ５ＣＮＨＯＨ−ＤＢＵ１モルを含む溶液により室温
で一夜処理した（０１２保護きるべきアリールホスホエ
ステル基１当量につきＣ６Ｈ５ＣＮＨＯＨＤＢＵ １０
当ｆｆｌ’ｉ：使用した）。該溶液に対し、Ｍ ｅ ０
１］／ Ｈ２０（休梢比で２／１）を溶媒とするＮａ０
８１モル溶液を加え、室温で撹拌を２日間継続した。反
応混合物をアニオン交換樹脂（ピリジニウム型）により
中和した後、溶媒を減圧上除去し、得られた残分を８０
％酢酸により室温で１〜２時間処理した。続いて、実施
例１と同様にして操作を終えた。
６Ｈ５ＣＮＨＯＨ−ＤＢＵ１モルを含む溶液により室温
で一夜処理した（０１２保護きるべきアリールホスホエ
ステル基１当量につきＣ６Ｈ５ＣＮＨＯＨＤＢＵ １０
当ｆｆｌ’ｉ：使用した）。該溶液に対し、Ｍ ｅ ０
１］／ Ｈ２０（休梢比で２／１）を溶媒とするＮａ０
８１モル溶液を加え、室温で撹拌を２日間継続した。反
応混合物をアニオン交換樹脂（ピリジニウム型）により
中和した後、溶媒を減圧上除去し、得られた残分を８０
％酢酸により室温で１〜２時間処理した。続いて、実施
例１と同様にして操作を終えた。
精製物の保持時間を第２表に示す。
実施例７〜１６
フランス特許第８３１０１２２３号に示された方法に従
って得られたオリゴヌクレオチド中間体を使用するとと
もに、実施例６と同様にして脱トリチル化、脱シアノエ
チル化及びカブリング工程を行なうことにより、下記に
示すスキームに従って保護されたオリゴヌクレオチド類
が得られた。
って得られたオリゴヌクレオチド中間体を使用するとと
もに、実施例６と同様にして脱トリチル化、脱シアノエ
チル化及びカブリング工程を行なうことにより、下記に
示すスキームに従って保護されたオリゴヌクレオチド類
が得られた。
次いで保護基は、実施例６と同様にして除かれた。
尚、より長いシーフェンスにはより長い脱保護時間を要
した（例えば、ベンゾヒドロキサム酸−ＤＢＵ系を使用
して脱アリール化を２日間行なつた）。脱保護されたオ
リゴヌクレオチド類７〜１６は、次いで、イオン交換に
より更に続いてＣ１０上での逆相により精製された。第
１表及び第２表に、得られた化合物の保持時間を示す。
した（例えば、ベンゾヒドロキサム酸−ＤＢＵ系を使用
して脱アリール化を２日間行なつた）。脱保護されたオ
リゴヌクレオチド類７〜１６は、次いで、イオン交換に
より更に続いてＣ１０上での逆相により精製された。第
１表及び第２表に、得られた化合物の保持時間を示す。
実施例７
（ＤＨＴｒ）ｄｉｎｃ：ａｎｃ＄ｃＮＥｔＨＯ
ＤＭＴｒｄａｎＣ−Ａｒ ｄａｎＣ；ａｎｃ＋ｃ
ＮＥｅｄ［Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ７Ａ−（Ｃ）＋２）ｓＺ
”］実施例８ ！ ｉ 。
ＮＥｅｄ［Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ７Ａ−（Ｃ）＋２）ｓＺ
”］実施例８ ！ ｉ 。
ご 請
実施例９
（ＤＨＴｒ）ｄｂｚＡ＄１ｂｃ−Ａｒｄｕｎ（ＪｂｚＡ
″＄ＣＮＥｔ（Ｄ）ｌＴｒ）ｄｂｘ６ｉｂｌｊａｕ＋ｃ
；ｂｚＡ＋ｃＮＥｔ↓ρ （ＤＭＴｒ）ｄｂｚＡ＋ｂｚＡ＋ｂｚＡｉｉＭ；＋ａｎ
ＣＴｂｚＡ＋Ｃ）ｌＥｔ↓Ｎｕｔ３ （ＤＨＴｒ）ｄｂｚ６ｂｚＡ：ｂｚ６ｉｂＧ；ａｎＣ：
ｂｚＡ−＾ｒ ｄ ＞ｂ’” （Ｃ１１２）ｓＺ”
（ＤＭＴｒ）ｄｂ ｚ６ｂｚＡ苓ｂｚ６ｉｂＧｉａｎ（
ｊｂｚＡ＋ｉｂｃ＄ （ＣＮ２）５Ｚ”ｄ［Ａ−Ａ−Ａ
−Ｇ−Ｃ−＾−Ｇ−（ＯＨ２）、Ｚ”］実施例１０ を 巴 γ Ｌ 実施例１１ ！ １や − Ｃ、″ ・−ｒ １ 。
″＄ＣＮＥｔ（Ｄ）ｌＴｒ）ｄｂｘ６ｉｂｌｊａｕ＋ｃ
；ｂｚＡ＋ｃＮＥｔ↓ρ （ＤＭＴｒ）ｄｂｚＡ＋ｂｚＡ＋ｂｚＡｉｉＭ；＋ａｎ
ＣＴｂｚＡ＋Ｃ）ｌＥｔ↓Ｎｕｔ３ （ＤＨＴｒ）ｄｂｚ６ｂｚＡ：ｂｚ６ｉｂＧ；ａｎＣ：
ｂｚＡ−＾ｒ ｄ ＞ｂ’” （Ｃ１１２）ｓＺ”
（ＤＭＴｒ）ｄｂ ｚ６ｂｚＡ苓ｂｚ６ｉｂＧｉａｎ（
ｊｂｚＡ＋ｉｂｃ＄ （ＣＮ２）５Ｚ”ｄ［Ａ−Ａ−Ａ
−Ｇ−Ｃ−＾−Ｇ−（ＯＨ２）、Ｚ”］実施例１０ を 巴 γ Ｌ 実施例１１ ！ １や − Ｃ、″ ・−ｒ １ 。
ε
実施例１２
（ＤＨＴｒ）ｌｔｂｃ；ａｎｃ−八ｒ Ｔ
；６ＣＮＥｔ（ＤＨＴｒ）ｄｉｂＣ：ａｒ＋ｃＷ丁τ丁
＝ｃＮｔｔ（ＤＭＴｒ）ｄａｎＣ；丁−＾ｒ
ｄｉｂＧ；ａｎＣ：Ｔ＄τ；ＣＮＥｔ（ＤＭＴｒ
）ｄａｎｃ＋τ７ｉｂＧ４ａｎＣ：τ１τＩｃＩｌＥｔ
（ＤＭＴｔ）ｄｉｎｃｉτ＋ｉｂに；ｍｎｃ＄丁’＋Ｔ
−１ｔ 丁＝（（ｕ２）５２”（ＤＭＴ
ｒ）ｄａｎＣ：τ＋ｉｂＧ；ａｎｃ＋Ｔ＋τ＋６（ＣＩ
４２）５’Ｚ”ａ ［ｃ−Ｔ−ｃ−ｃ−ｒ−丁−ｖ−
（ｃＩＩ２）５Ｚ］実施例１３ （ＤＨＴｒ）ｄａｎｃ＄Ｔ；ｉｂｃ＄ａｎｃ；Ｔ＄Ｔｔ
ＣＮＥｔ（ＤＨＴｒ） ｄａｎＣ−Ａｔ ｄａｎｃ
’１６１Ｍ；；ａｎｃ；６Ｔ；ＣＮＥｔ（ＤＮＴｒ）ｄ
ＩＩｎＣＪａｎＣ；τ’＋１ｂＣ５ａｎｃＮＴ’＋１：
ＣＮＥｔ（ＤＨＴｒ）ｄａｎＣ；ａｎＣ−＋Ｔ＋″１ｂ
（ｊａｎｃ：Ｔ＋Ｔ −Ａｒ ｄＴ”
ｒ”ｉＭ；＋ａｎＣ”（ＣＨ２）ｓＺ’（ＤＭＴｒ）ｄ
ａｎＣ＋ａｎＣ″＄Ｔ：ｉＭ；；ａｎｃ＋τ１丁”Ｔ＋
Ｔ”１ｂＧＴａｎＣ”（Ｃ）＋２）ｓ ｚｌ＋ｄ ［
Ｃ−Ｃ７Ｔ−Ｃ−Ｃ−丁一丁一丁−Ｔ−Ｇ−Ｃ−（Ｃ１
＋２）５Ｚ”］実施例１４ （ＤＨＴｒ）ｄａｎｃＴａｎｃ＄τｊｉＭ：？ａｎＣ７
Ｔ＄ＴｉｆａｎＣ７ｉＭ；ｆａｎ（ｊ（Ｃ１１２）５Ｚ
”ｄ ［Ｃ−Ｃ−丁−Ｇ−Ｃ−Ｔ−丁−Ｔ−Ｃ−Ｇ−
Ｃ−（Ｃ）１２）５２”コ実施例１５ （１）ＭＴｒ）ｄＴ：ｏ＋＋ｃ１ｉｂｌｊｃＮＥｔ（Ｄ
）ＩＴｒ）ｄ丁？ａｎＣ＄１ｂＣ−Ａｒ
ｄＴ；ａｎｃ＄ｉｂｃｆｃＮＥｔ（ＤＭＴｒ）ｄ
Ｔ：ａｎＣ；ｉｂ（：；τ；ａｎＣ：ｉｂＧ；ＣＮＥｅ
（ＤＭＴｒンｄＴ′＋ａｎＣ町ｂｃｉＴ；ａｎＣ和ｂ（
ｊ（Ｃ）＋２）５２”ｄ ［Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−
（ＣＮ２）５Ｚ”］実施例１６ ！ 実施例１７ ファージＴ４の遺伝子３２の発現に対する化合物（Ｉ）
の作用 第３表に、ファージＴ４の遺伝子３２のメツセンジャー
ＲＮＡ翻訳開始部位の近傍における配列を示す。上部（
コード）ストランドが、このメツセンジャーＲＮＡの配
列に対応する（ＴｅＵで置き換える）。メツセンジャー
ＲＮＡの翻訳は、遺伝子３２の産物（蛋白質３２又はｏ
ｐ３２ ）により調節される。フランス国特許第８３１
０１２２３号において合成され、記載された一般式（Ｉ
＞のオリゴヌクレオチドを下部に示ず。これらは、リポ
ソームの結合に関与する「シャイン−ダルガノ」配列の
上流に位置する繰返し配列（ｒｅｐｅａｔｓｅｑｕｅｎ
ｃｅｓ ）と相補的である。合成された化合物（Ｉ）は
、５個、１０個又は１５個のヌクレオチドを含有し、そ
の３′−リン酸基により（ＣＨ２）５ Ａｃｒとして示
されている２−メトキシ−６−クロ０−９−（ω−ペン
チルアミノ）アクリジン基に結合している。
；６ＣＮＥｔ（ＤＨＴｒ）ｄｉｂＣ：ａｒ＋ｃＷ丁τ丁
＝ｃＮｔｔ（ＤＭＴｒ）ｄａｎＣ；丁−＾ｒ
ｄｉｂＧ；ａｎＣ：Ｔ＄τ；ＣＮＥｔ（ＤＭＴｒ
）ｄａｎｃ＋τ７ｉｂＧ４ａｎＣ：τ１τＩｃＩｌＥｔ
（ＤＭＴｔ）ｄｉｎｃｉτ＋ｉｂに；ｍｎｃ＄丁’＋Ｔ
−１ｔ 丁＝（（ｕ２）５２”（ＤＭＴ
ｒ）ｄａｎＣ：τ＋ｉｂＧ；ａｎｃ＋Ｔ＋τ＋６（ＣＩ
４２）５’Ｚ”ａ ［ｃ−Ｔ−ｃ−ｃ−ｒ−丁−ｖ−
（ｃＩＩ２）５Ｚ］実施例１３ （ＤＨＴｒ）ｄａｎｃ＄Ｔ；ｉｂｃ＄ａｎｃ；Ｔ＄Ｔｔ
ＣＮＥｔ（ＤＨＴｒ） ｄａｎＣ−Ａｔ ｄａｎｃ
’１６１Ｍ；；ａｎｃ；６Ｔ；ＣＮＥｔ（ＤＮＴｒ）ｄ
ＩＩｎＣＪａｎＣ；τ’＋１ｂＣ５ａｎｃＮＴ’＋１：
ＣＮＥｔ（ＤＨＴｒ）ｄａｎＣ；ａｎＣ−＋Ｔ＋″１ｂ
（ｊａｎｃ：Ｔ＋Ｔ −Ａｒ ｄＴ”
ｒ”ｉＭ；＋ａｎＣ”（ＣＨ２）ｓＺ’（ＤＭＴｒ）ｄ
ａｎＣ＋ａｎＣ″＄Ｔ：ｉＭ；；ａｎｃ＋τ１丁”Ｔ＋
Ｔ”１ｂＧＴａｎＣ”（Ｃ）＋２）ｓ ｚｌ＋ｄ ［
Ｃ−Ｃ７Ｔ−Ｃ−Ｃ−丁一丁一丁−Ｔ−Ｇ−Ｃ−（Ｃ１
＋２）５Ｚ”］実施例１４ （ＤＨＴｒ）ｄａｎｃＴａｎｃ＄τｊｉＭ：？ａｎＣ７
Ｔ＄ＴｉｆａｎＣ７ｉＭ；ｆａｎ（ｊ（Ｃ１１２）５Ｚ
”ｄ ［Ｃ−Ｃ−丁−Ｇ−Ｃ−Ｔ−丁−Ｔ−Ｃ−Ｇ−
Ｃ−（Ｃ）１２）５２”コ実施例１５ （１）ＭＴｒ）ｄＴ：ｏ＋＋ｃ１ｉｂｌｊｃＮＥｔ（Ｄ
）ＩＴｒ）ｄ丁？ａｎＣ＄１ｂＣ−Ａｒ
ｄＴ；ａｎｃ＄ｉｂｃｆｃＮＥｔ（ＤＭＴｒ）ｄ
Ｔ：ａｎＣ；ｉｂ（：；τ；ａｎＣ：ｉｂＧ；ＣＮＥｅ
（ＤＭＴｒンｄＴ′＋ａｎＣ町ｂｃｉＴ；ａｎＣ和ｂ（
ｊ（Ｃ）＋２）５２”ｄ ［Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−
（ＣＮ２）５Ｚ”］実施例１６ ！ 実施例１７ ファージＴ４の遺伝子３２の発現に対する化合物（Ｉ）
の作用 第３表に、ファージＴ４の遺伝子３２のメツセンジャー
ＲＮＡ翻訳開始部位の近傍における配列を示す。上部（
コード）ストランドが、このメツセンジャーＲＮＡの配
列に対応する（ＴｅＵで置き換える）。メツセンジャー
ＲＮＡの翻訳は、遺伝子３２の産物（蛋白質３２又はｏ
ｐ３２ ）により調節される。フランス国特許第８３１
０１２２３号において合成され、記載された一般式（Ｉ
＞のオリゴヌクレオチドを下部に示ず。これらは、リポ
ソームの結合に関与する「シャイン−ダルガノ」配列の
上流に位置する繰返し配列（ｒｅｐｅａｔｓｅｑｕｅｎ
ｃｅｓ ）と相補的である。合成された化合物（Ｉ）は
、５個、１０個又は１５個のヌクレオチドを含有し、そ
の３′−リン酸基により（ＣＨ２）５ Ａｃｒとして示
されている２−メトキシ−６−クロ０−９−（ω−ペン
チルアミノ）アクリジン基に結合している。
蛋白質ｏｐ３２の合成に対するこれらオリゴヌクレオチ
ドの作用を、５−３０として知られる、イー、コリー（
Ｅ、ｃｏｌｉ）株Ｄ１０から製造されたイン・ビトロ転
写−翻訳システム中で試験した。このシステムは、上記
巨大分子と、転写及び翻訳の調節部位を有する外部ＤＮ
Ａの転写及び翻訳に必要なオルガネラを包含する。使用
したＤＮＡは、エイチ・エム・クリシュ（Ｈ，Ｈ，Ｋｒ
１ｓｃｈ）及びビー・アレット（Ｂ、Ａｌ１ｅｔ ）に
より、プロシーデイングズ・オブ・ザ・ナショナル・ア
カデミイ・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔ、
Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ） ７９ 。
ドの作用を、５−３０として知られる、イー、コリー（
Ｅ、ｃｏｌｉ）株Ｄ１０から製造されたイン・ビトロ転
写−翻訳システム中で試験した。このシステムは、上記
巨大分子と、転写及び翻訳の調節部位を有する外部ＤＮ
Ａの転写及び翻訳に必要なオルガネラを包含する。使用
したＤＮＡは、エイチ・エム・クリシュ（Ｈ，Ｈ，Ｋｒ
１ｓｃｈ）及びビー・アレット（Ｂ、Ａｌ１ｅｔ ）に
より、プロシーデイングズ・オブ・ザ・ナショナル・ア
カデミイ・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔ、
Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ） ７９ 。
４９３７−４−９３１ （１９８２）に記載されたプラ
スミドｐＫＨ１３である。このプラスミドは、１）ＢＲ
３２２から製造され、蛋白質類の１１６位にアンバー突
然変位を有する遺伝子３２を含有する、Ｔ４ゲノム由来
の２０００個のヌクレオチド挿入を含むものである。該
遺伝子は、正常な蛋白質３２に比し短い蛋白質（（１１
）’３２）の合成を指令する。この短い蛋白質は、完全
な蛋白質３２とは対象的に、それ自身の合成を調節しな
い。上記５−３０システムにおいて、ｐＫＨ１３により
支配される蛋白質合成は、３５３−メチオニンの存在下
で行なわれ、その分析は、オートラジオグラフイーニヨ
リ明視化された（ｖｉｓｕａｌｉｚｅｄ） １５％ポリ
アクリルアミドゲル上で行なう。挿入剤を担持しない配
列（デカマー）のオリゴヌクレオチドは、ＣＩ＋）’３
２合成に対し何らの作用も有しない。
スミドｐＫＨ１３である。このプラスミドは、１）ＢＲ
３２２から製造され、蛋白質類の１１６位にアンバー突
然変位を有する遺伝子３２を含有する、Ｔ４ゲノム由来
の２０００個のヌクレオチド挿入を含むものである。該
遺伝子は、正常な蛋白質３２に比し短い蛋白質（（１１
）’３２）の合成を指令する。この短い蛋白質は、完全
な蛋白質３２とは対象的に、それ自身の合成を調節しな
い。上記５−３０システムにおいて、ｐＫＨ１３により
支配される蛋白質合成は、３５３−メチオニンの存在下
で行なわれ、その分析は、オートラジオグラフイーニヨ
リ明視化された（ｖｉｓｕａｌｉｚｅｄ） １５％ポリ
アクリルアミドゲル上で行なう。挿入剤を担持しない配
列（デカマー）のオリゴヌクレオチドは、ＣＩ＋）’３
２合成に対し何らの作用も有しない。
配列が遺伝子３２の配列と相補的ではないオクタ？
（Ｔ ）８ （ＣＨ２）６ ＡＣｒは、ｇｐ’３２
合成に何らの作用も有しない。アクリジンに結合したペ
ンタデカマー（１５−ｍａｒ）も、蛋白質ｇｐ’３２合
成を阻害する。挿入剤を有しない同オリゴヌクレオチド
は、何らの作用も有しない。以上の結果から判るように
、オリゴヌクレオド配列が、メツセンジャーＲＮＡの有
する配列と相補的である場合、挿入剤に結合したオリゴ
ヌクレオチドを用いて翻訳を阻害することにより、特定
の遺伝子の発現を抑制することが可能である。
（Ｔ ）８ （ＣＨ２）６ ＡＣｒは、ｇｐ’３２
合成に何らの作用も有しない。アクリジンに結合したペ
ンタデカマー（１５−ｍａｒ）も、蛋白質ｇｐ’３２合
成を阻害する。挿入剤を有しない同オリゴヌクレオチド
は、何らの作用も有しない。以上の結果から判るように
、オリゴヌクレオド配列が、メツセンジャーＲＮＡの有
する配列と相補的である場合、挿入剤に結合したオリゴ
ヌクレオチドを用いて翻訳を阻害することにより、特定
の遺伝子の発現を抑制することが可能である。
Ｕψ・７
実施例１８
β−ラクタマーゼ遺伝子の転写に対り−る化合物Ｖｌ、
■！及び■の作用 第４表に、プラスミドｐＢＲ３２２及びトランスポゾン
Ｔｎ３により担持されるβ−ラクタマーゼのｂｌａ遺伝
子の配列を示す。該遺伝子は、β−ラクタム系抗生物質
（ペニシリン、アンピシリン等）に対する最近の耐性に
関与する。プラスミドｐＢＲ３２２により担持されるｂ
ｌａ ｉｌｌ仏子は、サルモネラ・バラティフィーＢ
（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｐａｒａｔｙｐｈｉ Ｂ、
）型の最近に由来するものである。
■！及び■の作用 第４表に、プラスミドｐＢＲ３２２及びトランスポゾン
Ｔｎ３により担持されるβ−ラクタマーゼのｂｌａ遺伝
子の配列を示す。該遺伝子は、β−ラクタム系抗生物質
（ペニシリン、アンピシリン等）に対する最近の耐性に
関与する。プラスミドｐＢＲ３２２により担持されるｂ
ｌａ ｉｌｌ仏子は、サルモネラ・バラティフィーＢ
（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｐａｒａｔｙｐｈｉ Ｂ、
）型の最近に由来するものである。
第４表には、ｂｌａ遺伝子の転写開始部位（配列中の＋
１位）を示す。その下には、ＲＮＡポリメラーゼが該ｂ
ｌａ ３１伝子のプロモーターに結合した場合に該ＲＮ
Ａポリメラーゼにより開かれると考えられる領域を示す
。又、第４表の下端部には、挿入剤Ｚ″ （（ＣＨ２）
５ ＡＣｒとして示す）に結合した３つのオリゴヌクレ
チドを示す。
１位）を示す。その下には、ＲＮＡポリメラーゼが該ｂ
ｌａ ３１伝子のプロモーターに結合した場合に該ＲＮ
Ａポリメラーゼにより開かれると考えられる領域を示す
。又、第４表の下端部には、挿入剤Ｚ″ （（ＣＨ２）
５ ＡＣｒとして示す）に結合した３つのオリゴヌクレ
チドを示す。
イー、コリー（Ｅ、ｃｏｌｉ） ＲＮ Ａポリメラーゼ
（ベーリンガー（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ）製）によるｂ
ｌａ遺伝子の転写を、プラスミドｐＢＲ３２２上及びプ
ロモーター及びｂｌａ遺伝子の実質的な部分を含有する
７５０塩基対のフラグメント上にて行なった。
（ベーリンガー（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ）製）によるｂ
ｌａ遺伝子の転写を、プラスミドｐＢＲ３２２上及びプ
ロモーター及びｂｌａ遺伝子の実質的な部分を含有する
７５０塩基対のフラグメント上にて行なった。
該フラグメントは、制限酵素Ｐｓｔ Ｉ及びＥＣＯＲ工
を作用させて得られたものである。α−位に３２ｐでラ
ベルしたＵＴＰに対し、過剰（１００倍）の３種のヌク
レオチド三リン酸（ＡＴＰｌＧＴＰ及びＣＴＰ）を用い
る事により、短い、放射性標識された転写物（ｔｒａｎ
ｓｃｒｉｐｔｓ ）を得る。これら転写物を、７Ｍ尿素
の存在下オートラジオグラフィーにより明視化されたポ
リアク、リルアミドゲル上で分離する。特異的な転写開
始を確実にすべく、ジヌクレオチド モノフォスフェー
トＵｐＧを転写システムに添加することもできる。
を作用させて得られたものである。α−位に３２ｐでラ
ベルしたＵＴＰに対し、過剰（１００倍）の３種のヌク
レオチド三リン酸（ＡＴＰｌＧＴＰ及びＣＴＰ）を用い
る事により、短い、放射性標識された転写物（ｔｒａｎ
ｓｃｒｉｐｔｓ ）を得る。これら転写物を、７Ｍ尿素
の存在下オートラジオグラフィーにより明視化されたポ
リアク、リルアミドゲル上で分離する。特異的な転写開
始を確実にすべく、ジヌクレオチド モノフォスフェー
トＵｐＧを転写システムに添加することもできる。
ｂｌａ遺伝子の転写に対する実施例７及び８の化合物の
作用を試験した結果、これら２つの化合物は上記遺伝子
の３７℃での転写を阻止することが判明した。この作用
は特異的であり、数種の遺伝子を担持するプラスミドｐ
ＢＲ３２２について試験を行なうと、実施例７及び８の
化合物により影響を受ける転写物は一部のみであり、即
ち、ｂｌａ−遺伝子のプロモーターにて開始されるもの
のみである。上記作用が発揮されるには、挿入剤の存在
が必須であり、化合物■及び■と同一の配列を有するオ
リゴヌクレチドは、ｂｌａ遺伝子の転写開始に何の作用
も有しない。また、オリゴヌクレチドの長さには下限が
あり、化合物Ｖｌ（３個のヌクレオチド）は作用を有し
ない。
作用を試験した結果、これら２つの化合物は上記遺伝子
の３７℃での転写を阻止することが判明した。この作用
は特異的であり、数種の遺伝子を担持するプラスミドｐ
ＢＲ３２２について試験を行なうと、実施例７及び８の
化合物により影響を受ける転写物は一部のみであり、即
ち、ｂｌａ−遺伝子のプロモーターにて開始されるもの
のみである。上記作用が発揮されるには、挿入剤の存在
が必須であり、化合物■及び■と同一の配列を有するオ
リゴヌクレチドは、ｂｌａ遺伝子の転写開始に何の作用
も有しない。また、オリゴヌクレチドの長さには下限が
あり、化合物Ｖｌ（３個のヌクレオチド）は作用を有し
ない。
以上の結果から判るように、抗生物質耐性遺伝子の発現
は、該遺伝子の転写開始を阻害することにより、選択的
に阻止することができる。この特異性は、転写開始部位
の近傍（上流）のＤＮＡの非コード（ｎｏｎ−ｃｏｄｉ
ｎｇ）ストランドに相補的なオリゴヌクレチド配列を合
成することにより達成される。
は、該遺伝子の転写開始を阻害することにより、選択的
に阻止することができる。この特異性は、転写開始部位
の近傍（上流）のＤＮＡの非コード（ｎｏｎ−ｃｏｄｉ
ｎｇ）ストランドに相補的なオリゴヌクレチド配列を合
成することにより達成される。
実施例１９
ＳＶ４０ウィルスの増殖に対する抑制作用ＳＶ４０ウィ
ルスは、二重鎖の円形ＤＮＡゲノムを有することを特徴
とするものである。該ＤＮＡの複製は、約１００個のヌ
クレオチドからなり、゛複製起源（ｏｒｉｇｉｎ ｏｆ
ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ ） ”と呼ばれる該ゲノム
中の特定の部位から開始する。１７Ａ／Ｔ塩基対の配列
、より詳しくは、ｐｏｌｙ （ｄ Ａ ）／Ｉ）ＯＩｙ
（ｄ Ｔ ）二重鎖が、複製起源中に存在する。
ルスは、二重鎖の円形ＤＮＡゲノムを有することを特徴
とするものである。該ＤＮＡの複製は、約１００個のヌ
クレオチドからなり、゛複製起源（ｏｒｉｇｉｎ ｏｆ
ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ ） ”と呼ばれる該ゲノム
中の特定の部位から開始する。１７Ａ／Ｔ塩基対の配列
、より詳しくは、ｐｏｌｙ （ｄ Ａ ）／Ｉ）ＯＩｙ
（ｄ Ｔ ）二重鎖が、複製起源中に存在する。
このｐｏｌｙ（ｄＡ）／ｐｏｌｙ（ｄＴ）配列が存在す
るために、挿入剤に結合したオリゴチミジレートにより
ウィルスの複製開始が阻止されたことを観察し得る。
るために、挿入剤に結合したオリゴチミジレートにより
ウィルスの複製開始が阻止されたことを観察し得る。
猿腎臓細胞（ＣＶ１細胞）の培養物中でＳＶ４０ウィル
スの増殖に対する各種化合物の作用を試験した。
スの増殖に対する各種化合物の作用を試験した。
ＨＯ（ＣＨ２）５ Ａｃｒ。
Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｅｔ。
Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−（ＣＨ２）５ ＡＣｒ。
Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｅ ｔ。
Ｔ Ｔ Ｔ Ｔ−Ｔ Ｔ Ｔ−Ｔ（ＣＨ２）
６ｃｒ 尚、化合物（Ｔ−）ｔ （ＣＨ２）５ ＡＣｒ及び（
Ｔ ）ａ （ＣＨ２）ｓ’ＡＣｒは、フランス特許
第８３１０１２２３号に従い得た。
６ｃｒ 尚、化合物（Ｔ−）ｔ （ＣＨ２）５ ＡＣｒ及び（
Ｔ ）ａ （ＣＨ２）ｓ’ＡＣｒは、フランス特許
第８３１０１２２３号に従い得た。
９ ｃｍ２ｍ２ベ６にて、３７℃、１０％ＣＯ２の条件
下培養して得たＣＶ１細胞の単層から、培地（７％胎児
子牛血清、２ｍＭグルタミン、０．２２％重炭酸ナトリ
ウム、４０μＱ／−のペニシリン及び４０μＱ／Ｋｌの
ストレプトマイシンを含有するドルベツコ（Ｄｕｌｂｅ
ｃｃｏ）修飾イーグル（Ｅａｇｌｅ ’ ｓ ）培地）
を除去し、ＳＶ４０懸濁液０．２鵬で接種する。等張リ
ン酸塩緩衝液中にウィルスを希釈し、対照培養において
、３日間のインキュベーシュン後に約７５％の細胞破壊
（７５％細胞病原性作用）が生じるようにその希釈度を
選択する。
下培養して得たＣＶ１細胞の単層から、培地（７％胎児
子牛血清、２ｍＭグルタミン、０．２２％重炭酸ナトリ
ウム、４０μＱ／−のペニシリン及び４０μＱ／Ｋｌの
ストレプトマイシンを含有するドルベツコ（Ｄｕｌｂｅ
ｃｃｏ）修飾イーグル（Ｅａｇｌｅ ’ ｓ ）培地）
を除去し、ＳＶ４０懸濁液０．２鵬で接種する。等張リ
ン酸塩緩衝液中にウィルスを希釈し、対照培養において
、３日間のインキュベーシュン後に約７５％の細胞破壊
（７５％細胞病原性作用）が生じるようにその希釈度を
選択する。
３７℃にて１時間接触させ、接種物を除去し、試験すべ
き化合物を含有し又は含有しない同一の培地２鵬を添加
する。００２１０％を含有する大気中３７℃にて３日間
インキュベートした後、倒立顕微鏡（２５ｘ１０）を用
いて細胞層を観察する。
き化合物を含有し又は含有しない同一の培地２鵬を添加
する。００２１０％を含有する大気中３７℃にて３日間
インキュベートした後、倒立顕微鏡（２５ｘ１０）を用
いて細胞層を観察する。
ウィルスにより感染されておらず、化合物により処置さ
れた細胞培養物も、細胞毒性作用を確認すべく試験した
。感染された培養物中での細胞破壊率（細胞病原性作用
）及び感染されていない培養物中での細胞破壊率（化合
物の細胞毒性作用）を、第５表に示す。
れた細胞培養物も、細胞毒性作用を確認すべく試験した
。感染された培養物中での細胞破壊率（細胞病原性作用
）及び感染されていない培養物中での細胞破壊率（化合
物の細胞毒性作用）を、第５表に示す。
アクリジンを結合していないオリゴチミジレートに関し
、ウィルス増殖の弱い抑制作用（細胞病原性作用により
判断）が観察された。（Ｔ）ＡＥ、を及び（Ｔ ）ｓ
Ｅｊは、無処理培養物の７５％に対し、夫々、６４％及
び５０％の細胞病原性作用を示す。これと対照的に、ア
クリジン基を含有する２つのオリゴチミジレート （Ｔ−）４ （ＣＨ２）５ Ａｃｒ及び（Ｔ−）ｓ（
ＣＨ２）ａ Ａｃｒは、４０μ／１ｌｌｉｌｉ（７）濃
ｙｔｃｍ胞病源性作用を減少させ（（Ｔ ）４ （
ＣＨ２）５Ａｃｒ）又は完全に防止した （ （Ｔ ） ８ （ＣＨ２）６ Ａｃｒ）、８０μ
（１／−の濃度では、この抑制作用は、非感染培養物に
おいてアクリジンを結合していないオリゴヌクレチドの
場合に観察された細胞毒性作用を認めることなく、保持
され又は増加した。挿入剤Ａｃｒ（Ｃｆ（２）ｓＯＨは
、０．２５μＱ／Ｋｌ及び０．５μ（］／ＩＩＩＱの濃
度において、ウィルス増殖を有意に抑制する作用を有し
なかった。該挿入剤は、１μＱ／Ｗｌ及び２μ０／−の
濃度において、非感染細胞に対し毒性を有する。
、ウィルス増殖の弱い抑制作用（細胞病原性作用により
判断）が観察された。（Ｔ）ＡＥ、を及び（Ｔ ）ｓ
Ｅｊは、無処理培養物の７５％に対し、夫々、６４％及
び５０％の細胞病原性作用を示す。これと対照的に、ア
クリジン基を含有する２つのオリゴチミジレート （Ｔ−）４ （ＣＨ２）５ Ａｃｒ及び（Ｔ−）ｓ（
ＣＨ２）ａ Ａｃｒは、４０μ／１ｌｌｉｌｉ（７）濃
ｙｔｃｍ胞病源性作用を減少させ（（Ｔ ）４ （
ＣＨ２）５Ａｃｒ）又は完全に防止した （ （Ｔ ） ８ （ＣＨ２）６ Ａｃｒ）、８０μ
（１／−の濃度では、この抑制作用は、非感染培養物に
おいてアクリジンを結合していないオリゴヌクレチドの
場合に観察された細胞毒性作用を認めることなく、保持
され又は増加した。挿入剤Ａｃｒ（Ｃｆ（２）ｓＯＨは
、０．２５μＱ／Ｋｌ及び０．５μ（］／ＩＩＩＱの濃
度において、ウィルス増殖を有意に抑制する作用を有し
なかった。該挿入剤は、１μＱ／Ｗｌ及び２μ０／−の
濃度において、非感染細胞に対し毒性を有する。
族ＳＶ４０作用の選択性を検討するため、（Ｔ−）ａ
（ＣＨ２）５ ＡＣｒを、インフルエンザＡ／ビクト
リア（Ｈ３’Ｎ２）ウィルスの（ＭＤＣＫ腎細胞培養物
における）増殖及びタイプ１ヘルペスウイルス及びリノ
ウィルスの（ＭＲＣｓ胎内（ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ）細
胞培養物における）増殖に関しても試験した。細胞病原
性作用の抑制は認められなかった。（Ｔ −）ａ （
ＣＨ２）ｓ ＡＣｒについても、インフルエンザウィル
スの増殖に対する抑制作用を試験した結果、不活性であ
ることが分った。以上の結果から、アクリジンに結合し
たオリゴチミジレートは、複製起源に対応する相互的な
配列を有するウィルス（ＳＶ４０）の複製に対し、選択
的な抑制作用を及ぼすことが判る。
（ＣＨ２）５ ＡＣｒを、インフルエンザＡ／ビクト
リア（Ｈ３’Ｎ２）ウィルスの（ＭＤＣＫ腎細胞培養物
における）増殖及びタイプ１ヘルペスウイルス及びリノ
ウィルスの（ＭＲＣｓ胎内（ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ）細
胞培養物における）増殖に関しても試験した。細胞病原
性作用の抑制は認められなかった。（Ｔ −）ａ （
ＣＨ２）ｓ ＡＣｒについても、インフルエンザウィル
スの増殖に対する抑制作用を試験した結果、不活性であ
ることが分った。以上の結果から、アクリジンに結合し
たオリゴチミジレートは、複製起源に対応する相互的な
配列を有するウィルス（ＳＶ４０）の複製に対し、選択
的な抑制作用を及ぼすことが判る。
実施例２０
インフルエンザウィルスの増殖に対する抑制作用
インフルエンザウィルスのゲノムは、８つのフラグメン
トに分かれた一重鎖ＲＮＡからなる。ノイラミニダーゼ
をコードするＲＮＡ （ビス−ジストロニック）の場合
を除き、他のＲＮＡフラグメントは夫々１つのウィルス
遺伝子をコードする。
トに分かれた一重鎖ＲＮＡからなる。ノイラミニダーゼ
をコードするＲＮＡ （ビス−ジストロニック）の場合
を除き、他のＲＮＡフラグメントは夫々１つのウィルス
遺伝子をコードする。
これらＲＮＡフラグメントの３′位における一次構造は
、これら各７ラグメント中、及び試験された同一タイプ
（ＡＳＢ、Ｃ）のインフルエンザウィルスの異なる抗原
型変換体（ａｎｔｉｇｅｎｔｃＭａｒｉａｎｔＳ）中に
保存されている。この配列は、最初の１２個のヌクレオ
チドについては、す、この配列と相補的であって挿入剤
（アクリジン）に結合しているオリゴヌクレオチドによ
って、数種のインフルエンザウィルスの増殖を妨害し得
る可能性が生じる。
、これら各７ラグメント中、及び試験された同一タイプ
（ＡＳＢ、Ｃ）のインフルエンザウィルスの異なる抗原
型変換体（ａｎｔｉｇｅｎｔｃＭａｒｉａｎｔＳ）中に
保存されている。この配列は、最初の１２個のヌクレオ
チドについては、す、この配列と相補的であって挿入剤
（アクリジン）に結合しているオリゴヌクレオチドによ
って、数種のインフルエンザウィルスの増殖を妨害し得
る可能性が生じる。
ＭＤＣＫ細胞培養物中における２つのインフルエンザウ
ィルス Ａ／ビクトリア及びＡ／フィリピンズ（共に８
３ Ｎ２ ）の増殖に対する実施例９．１０及び１１の
化合物の作用を試験した。細胞単層を含有するプレート
（２４ウエル、２Ｃ１１２）から培地（１０％胎児子牛
血清、０．２２％の重炭酸ナトリウム、４０μＱ／ｗｌ
Ｊのペニシリン及び４０μＱ／ｗｔＪのストレプトマイ
シンを含有するイーグル塩含有ＭＥＭ培地）を除去し、
供試化合物０．１−ウィルス懸濁液（３日間培養後完全
な細胞破壊−細胞病原性作用が得られるように希釈度を
選択する）及び５μＱ／−のトリプシン、０．２２％の
重炭酸ナトリウム、４０μｇ／−のペニシリン及び４０
μｑ／ｌ１１２のストレプトマイシンを含有するＭＥＭ
培地（イーグル塩）０．８ｍｆ２で接種した。
ィルス Ａ／ビクトリア及びＡ／フィリピンズ（共に８
３ Ｎ２ ）の増殖に対する実施例９．１０及び１１の
化合物の作用を試験した。細胞単層を含有するプレート
（２４ウエル、２Ｃ１１２）から培地（１０％胎児子牛
血清、０．２２％の重炭酸ナトリウム、４０μＱ／ｗｌ
Ｊのペニシリン及び４０μＱ／ｗｔＪのストレプトマイ
シンを含有するイーグル塩含有ＭＥＭ培地）を除去し、
供試化合物０．１−ウィルス懸濁液（３日間培養後完全
な細胞破壊−細胞病原性作用が得られるように希釈度を
選択する）及び５μＱ／−のトリプシン、０．２２％の
重炭酸ナトリウム、４０μｇ／−のペニシリン及び４０
μｑ／ｌ１１２のストレプトマイシンを含有するＭＥＭ
培地（イーグル塩）０．８ｍｆ２で接種した。
ウィルスにより感染されていない培養物を、これら化合
物の細胞毒性の有無を検討するために用いた。上記プレ
ートは、１０％ＣＯ２を含有する大気下３７℃にてイン
キュベートした。３日間インキュベート後、各ウェル毎
に５％強度のゲルタールアルデヒドを添加し、２０分後
に、ウェルを排出し、固定細胞層を０．１％強度のクリ
スタル・バイオレットのエタノール（１４％）溶液で２
０分間染色する。細胞を水洗後、該層の破壊につき、顕
微鏡観察し、百分率を求めた（０％二層に変化なし、１
００％二層の完全破壊）。
物の細胞毒性の有無を検討するために用いた。上記プレ
ートは、１０％ＣＯ２を含有する大気下３７℃にてイン
キュベートした。３日間インキュベート後、各ウェル毎
に５％強度のゲルタールアルデヒドを添加し、２０分後
に、ウェルを排出し、固定細胞層を０．１％強度のクリ
スタル・バイオレットのエタノール（１４％）溶液で２
０分間染色する。細胞を水洗後、該層の破壊につき、顕
微鏡観察し、百分率を求めた（０％二層に変化なし、１
００％二層の完全破壊）。
感染培養物中での細胞破壊率（細胞病原性作用）及び非
感染培養物中での細胞破壊率（細胞毒性作用）を第６表
に示す。
感染培養物中での細胞破壊率（細胞毒性作用）を第６表
に示す。
上記結果から、化合物■は、非感染培養物への細胞毒性
を生ずることなく、１５０μＱ／−及び３００μＱ／ｍ
Ｈの濃度において、２種のウィルスの増殖に対し抑制作
用を有することが判る。化合物Ｘ及びＸＩは、殆んど完
全に不活性である（但し、化合物Ｘについては、３００
μＱ／ｄの濃度においてウィルス Ａ／フィリピンズに
対し弱い抑制作用が認められる）。第６表に示すように
、化合物Ａ Ｃｒ （ＣＨ２） ｓ ＯＨは、不活性で
ある。
を生ずることなく、１５０μＱ／−及び３００μＱ／ｍ
Ｈの濃度において、２種のウィルスの増殖に対し抑制作
用を有することが判る。化合物Ｘ及びＸＩは、殆んど完
全に不活性である（但し、化合物Ｘについては、３００
μＱ／ｄの濃度においてウィルス Ａ／フィリピンズに
対し弱い抑制作用が認められる）。第６表に示すように
、化合物Ａ Ｃｒ （ＣＨ２） ｓ ＯＨは、不活性で
ある。
以上の結果から、挿入剤を結合したオリゴヌクレオチド
、例えば化合物ＩＸはインフルエンザウィルスの増殖抑
制に使用できることが判る。
、例えば化合物ＩＸはインフルエンザウィルスの増殖抑
制に使用できることが判る。
Ｕ細胞中への侵入
培養細胞をアクリジン誘導体挿入剤に共有結合したオリ
ゴヌクレオチドの存在下でインキュベートした。該侵入
は、挿入剤の蛍光を、定性的に（蛍光顕微鏡による観察
及び写真撮影）又は定量的に（顕微分光蛍光測定 （ｎ＋ｉｃｒｏｓｐｅｃｔｒｏｆｌｕｏｒｉｍｅｔｒｙ
） ）測定することによりｍｌした。（Ｔ ）ａ
（ＣＨ２）６ ＡＣｒの緑色蛍光は、ルイス（ＬＥＷ
ＩＳ ）細胞（人肺筋）、マウスＥＬ２細胞又は猿腎Ｃ
Ｖ１細胞中で明確に目視できる。侵入は、短時間内に起
きる。１５分後、細胞内蛍光がその最大値に達する。単
離細胞について顕微分光蛍光測定により記録された蛍光
スペクトルは、オリゴヌクレオチドに結合したアクリジ
ン誘導体について予想されたものと一致するものである
。
ゴヌクレオチドの存在下でインキュベートした。該侵入
は、挿入剤の蛍光を、定性的に（蛍光顕微鏡による観察
及び写真撮影）又は定量的に（顕微分光蛍光測定 （ｎ＋ｉｃｒｏｓｐｅｃｔｒｏｆｌｕｏｒｉｍｅｔｒｙ
） ）測定することによりｍｌした。（Ｔ ）ａ
（ＣＨ２）６ ＡＣｒの緑色蛍光は、ルイス（ＬＥＷ
ＩＳ ）細胞（人肺筋）、マウスＥＬ２細胞又は猿腎Ｃ
Ｖ１細胞中で明確に目視できる。侵入は、短時間内に起
きる。１５分後、細胞内蛍光がその最大値に達する。単
離細胞について顕微分光蛍光測定により記録された蛍光
スペクトルは、オリゴヌクレオチドに結合したアクリジ
ン誘導体について予想されたものと一致するものである
。
省 略
本記載においては、以下のヌクレオチドの簡潔な表示を
用いた。
用いた。
これは構造式
（５’ ） ＯＣ８２Ｂ
Ｏ−（３’ ）
（ここで３′及び５′末端が述べられている。）に相当
する。
する。
本記載においては、以下の省略を用いた。
Ａ ２’ −デオキシアデノシンＣ２’ −デ
オキシシチジン Ｇ ２’ −デオキグアノシンｂｚＡＮ−ベン
ゾイル−２′−デオキシアデノシン ａｎＣＮ−アニソイル−２′−デオキシシチジン ｉｂＱ Ｎ−イソブチリル−２１−デオキシグア
ノシン ＯＤＮ オリゴデオキシリボヌクレオチドＡ「
バラ−クロロフェニル ＣＮＥｔ β−シアノエチル Ｍｅ メチル Ｅｔ エヂル ＤＭＴｒ ジメトキシトリチル ＭＳＴ メシチレンスルホニルテトラゾリドＤＭＴ
１．５−ジメチルテトラゾールＴ チミジ
ン ２′ ＩＩＩ ＴＥＡ トリエチルアミン ＴＬＣ薄層クロマトグラフィ一 式（ＤＭＴｒ ） ｄｂｚ ＡｉａｎＣ￥ｉｂＧ ＋
Ｔ −Ａ ｒにおいて、ホスホジエステルの結合は、線
で示し、ホスホトリエステルの結合は（￥）で示し、各
ホスフェートは、パラ−クロロフェニル（Ａｒ ）基に
より保護されている。
オキシシチジン Ｇ ２’ −デオキグアノシンｂｚＡＮ−ベン
ゾイル−２′−デオキシアデノシン ａｎＣＮ−アニソイル−２′−デオキシシチジン ｉｂＱ Ｎ−イソブチリル−２１−デオキシグア
ノシン ＯＤＮ オリゴデオキシリボヌクレオチドＡ「
バラ−クロロフェニル ＣＮＥｔ β−シアノエチル Ｍｅ メチル Ｅｔ エヂル ＤＭＴｒ ジメトキシトリチル ＭＳＴ メシチレンスルホニルテトラゾリドＤＭＴ
１．５−ジメチルテトラゾールＴ チミジ
ン ２′ ＩＩＩ ＴＥＡ トリエチルアミン ＴＬＣ薄層クロマトグラフィ一 式（ＤＭＴｒ ） ｄｂｚ ＡｉａｎＣ￥ｉｂＧ ＋
Ｔ −Ａ ｒにおいて、ホスホジエステルの結合は、線
で示し、ホスホトリエステルの結合は（￥）で示し、各
ホスフェートは、パラ−クロロフェニル（Ａｒ ）基に
より保護されている。
（以 上）
Claims (19)
- （１）挿入剤に結合したオリゴヌクレオチド化合物を核
酸配列の選択的ブロッキングへ適用する方法であつて、
上記化合物は選択的にブロックされるべき核酸配列に相
補的な自然の若しくは修飾されたヌクレオチド配列を含
むオリゴヌクレオチド又はオリゴデオキシヌクレオチド
からなり、該化合物には挿入基が共有結合で結合してい
ることを特徴とする適用。 - （２）核酸配列が、核酸複製、一又はそれ以上の遺伝子
の転写及び／又はその翻訳の開始、伸長又は終結に関与
する配列の全て又は一部をなす特許請求の範囲第１項に
記載の適用。 - （３）化合物が式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中、Ｂ基は各々同一又は異なつて天然の又は修飾さ
れた核酸塩基を示し、Ｘ基は各々同一又は異なつてオキ
ソアニオンＯ＾■、チオアニオンＳ＾■、アルキル基、
アルコキシ又はアリルオキシ基、窒素原子含有ヘテロ環
で置換されたアルコキシ又はアルキル基、アミノアルキ
ル基、アミノアルコキシ基、チオアルキル基又は−Ｙ−
Ｚ基を示し、Ｒ及びＲ′は各々同一又は異なつて水素原
子又は−Ｙ−Ｚ基を示す。ここでＹは直鎖又は分岐鎖状
のアルキレン基−ａｌｋ−又は基▲数式、化学式、表等
があります▼を 示し、ＥはＺに同じか又は基 −Ｙ″−Ｏ−Ｙ′を示し、Ｙ″及びＹ′はＹに同じであ
り、Ｚは挿入剤に相当する基を示し、Ｊは水素原子又は
ヒドロキシを示す、ｎはＯを含む整数を示す。〕 で表わされるものである特許請求の範囲第１項又は第２
項に記載の適用。 - （４）挿入剤Ｚが平坦な配置を有するポリ環状化合物か
ら選択される特許請求の範囲第３項に記載の適用。 - （５）Ｚがアクリジン、フロクマリン又はエリプチシン
から選択される特許請求の範囲第４項に記載の適用。 - （６）基Ｂがチミジン、アデニン、２−アミノアデニン
及びその例えばＮ＾６上をアミノアルキレン基又はアジ
ドフェニルアルキレン基で置換された誘導体、シトシン
、グアニン又はその例えばＯ＾６を上９−（ω−アルキ
レン）アクリジン基で置換された誘導体、８−（ω−ア
ミノアルキル）アミノアデニン及びそのω−ＮＨ＿２上
をアクリジン基で置換された誘導体、ウラシル、５−ブ
ロモウラシル、８−アジドアデニン又は之等塩基の光活
性化され得る誘導体である特許請求の範囲第１〜５項の
いずれかに記載の適用。 - （７）Ｚ基が Ｚ′▲数式、化学式、表等があります▼ Ｚ″▲数式、化学式、表等があります▼ Ｚ″′▲数式、化学式、表等があります▼ から選択される特許請求の範囲第１〜６項のいずれかに
記載の適用。 - （８）ＢがＴ、Ｇ、Ａ、Ｃ及びＵから選択され、ＸがＯ
＾■、メチル、エチル、プロピル、メトキシ、エトキシ
、プロポキシから選択され且つＪがＨである特許請求の
範囲第１〜７項のいずれかに記載の適用。 - （９）化合物が、 （Ｔ−）＿ｎ（ＣＨ＿２）＿ｎＺ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ｄ［Ｔ−Ｇ−Ａ−（ＣＨ＿２）＿ｎＺ］ ｄ［Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ａ−（ＣＨ＿２）＿ｎＺ］ｄ
［Ｔ−Ａ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ａ−（ＣＨ＿２）
＿ｎＺ］ｄ［Ａ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｇ−（ＣＨ＿２
）＿ｎＺ］ｄ［Ａ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｃ−
Ａ−Ｇ−（ＣＨ＿２）＿ｎＺ］ｄ［Ａ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ａ
−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｇ−（ＣＨ＿２）＿ｎＺ］ｄ［
Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−（ＣＨ＿２）＿ｎＺ］ｄ
［Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−（Ｃ
Ｈ＿２）＿ｎＺ］ｄ［Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ
−Ｔ−Ｇ−Ｃ−（ＣＨ＿２）＿ｎＺ］ｄ［Ｃ−Ｃ−Ｔ−
Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｃ−（ＣＨ＿２）＿ｎＺ
］ｄ［Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−（ＣＨ＿２）＿ｎＺ］
ｄ［−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−（ＣＨ＿
２）＿ｎＺ］〔式中Ｚは挿入剤を示す。〕から選択され
る特許請求の範囲第１項に記載の適用。 - （１０）ウィルス、細菌又は寄生体の複製又は増殖がブ
ロックされる特許請求の範囲第１〜９項のいずれかに記
載の適用。 - （１１）オリゴヌクレオチド又はオリゴデオキシヌクレ
オチド配列が複製の調節、開始又は伸長のための領域に
相補的なものである特許請求の範囲第１０項に記載の適
用。 - （１２）抗生物質、抗ウィルス剤又は抗寄生体剤の耐性
因子をコードする遺伝子の発現がブロックされる特許請
求の範囲第１〜９項のいずれかに記載の適用。 - （１３）ウィルスがインフルエンザウィルス又はヘルペ
スウィルスである特許請求の範囲第１０項又は第１１項
に記載の適用。 - （１４）オリゴヌクレオチド又はオリゴデオキシヌクレ
オチド配列が腫瘍遺伝子の発現に必須の部分に相補的な
ものである特許請求の範囲第１〜９項のいずれかに記載
の適用。 - （１５）選択的にブロックされるべき核酸配列に相補的
な天然の若しくは修飾されたヌクレオチド配列を含むオ
リゴヌクレオチド又はオリゴデオキシヌクレオチドから
なり、挿入基が共有結合で結合している化合物を含有す
る医薬。 - （１６）式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中、Ｂ基は各々同一又は異なつて天然の又は修飾さ
れた核酸塩基を示し、Ｘ基は各々同一又は異なつてオキ
ソアニオンＯ＾■、チオアニオンＳ＾■、アルキル基、
アルコキシ又はアリルオキシ基、窒素原子含有ヘテロ環
で置換されたアルコキシ又はアルキル基、アミノアルキ
ル基、アミノアルコキシ基、チオアルキル基又は−Ｙ−
Ｚ基を示す、Ｒ及びＲ′は各々同一又は異なつて水素原
子又は−Ｙ−Ｚ基を示し、ここでＹは直鎖又は分岐鎖状
のアルキレン基−ａｌｋ−又は基▲数式、化学式、表等
があります▼を 示し、ＥはＺに同じか又は基 −Ｙ″−Ｏ−Ｙ′を示し、Ｙ″及びＹ′はＹに同じであ
り、Ｚは挿入剤に相当する基を示し、Ｊは水素原子又は
ヒドロキシを示し、ｎは０を含む整数を示す。〕 で表わされる化合物である特許請求の範囲第１５項に記
載の医薬。 - （１７）化合物が （Ｔ−）＿ｎ（ＣＨ＿２）＿ｎＺ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ｄ［Ｔ−Ｇ−Ａ−（ＣＨ＿２）＿ｎＺ］ ｄ［Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ａ−（ＣＨ＿２）＿ｎＺ］ｄ
［Ｔ−Ａ−Ａ−Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ａ−（ＣＨ＿２）
＿ｎＺ］ｄ［Ａ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｇ−（ＣＨ＿２
）＿ｎＺ］ｄ［Ａ−Ｇ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｃ−
Ａ−Ｇ−（ＣＨ＿２）＿ｎＺ］ｄ［Ａ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ａ
−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｇ−（ＣＨ＿２）＿ｎＺ］ｄ［
Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−（ＣＨ＿２）＿ｎＺ］ｄ
［Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−（Ｃ
Ｈ＿２）＿ｎＺ］ｄ［Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ
−Ｔ−Ｇ−Ｃ−（ＣＨ＿２）＿ｎＺ］ｄ［Ｃ−Ｃ−Ｔ−
Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｃ−（ＣＨ＿２）＿ｎＺ
］ｄ［Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−（ＣＨ＿２）＿ｎＺ］
ｄ［Ｃ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−（ＣＨ
＿２）＿ｎＺ］（Ｚは挿入剤を示す。） から選択される特許請求の範囲第１６項に記載の医薬。 - （１８）有効成分として特許請求の範囲第１５〜１７項
のいずれかに記載の医薬の少なくとも一種を、薬理的に
許容される担体と共に含有する薬理組成物。 - （１９）更に抗生物質、抗寄生体剤、抗ウィルス剤又は
制癌剤を含有する特許請求の範囲第１８項に記載の組成
物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8411795 | 1984-07-25 | ||
| FR8411795A FR2568254B1 (fr) | 1984-07-25 | 1984-07-25 | Application d'oligonucleotides lies a un agent intercalant, notamment a titre de medicament |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6144820A true JPS6144820A (ja) | 1986-03-04 |
| JP2521426B2 JP2521426B2 (ja) | 1996-08-07 |
Family
ID=9306479
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60165654A Expired - Lifetime JP2521426B2 (ja) | 1984-07-25 | 1985-07-25 | 遺伝子発現の選択的阻害剤 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0169787B1 (ja) |
| JP (1) | JP2521426B2 (ja) |
| AT (1) | ATE46170T1 (ja) |
| CA (1) | CA1321363C (ja) |
| DE (1) | DE3572825D1 (ja) |
| FR (1) | FR2568254B1 (ja) |
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| US4734363A (en) * | 1984-11-27 | 1988-03-29 | Molecular Diagnostics, Inc. | Large scale production of DNA probes |
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| EP0406309A4 (en) * | 1988-03-25 | 1992-08-19 | The University Of Virginia Alumni Patents Foundation | Oligonucleotide n-alkylphosphoramidates |
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| JPS59213388A (ja) * | 1983-05-20 | 1984-12-03 | Akira Kaji | 癌細胞増殖阻害方法 |
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- 1985-07-25 JP JP60165654A patent/JP2521426B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (3)
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
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| FR2568254B1 (fr) | 1988-04-29 |
| CA1321363C (en) | 1993-08-17 |
| ATE46170T1 (de) | 1989-09-15 |
| FR2568254A1 (fr) | 1986-01-31 |
| DE3572825D1 (en) | 1989-10-12 |
| EP0169787B1 (fr) | 1989-09-06 |
| JP2521426B2 (ja) | 1996-08-07 |
| EP0169787A1 (fr) | 1986-01-29 |
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