JPH06501843A

JPH06501843A - アンチセンスオリゴヌクレオチドによるインフルエンザａ型ウイルス，アン・アーバｈ２ｎ２株の阻害

Info

Publication number: JPH06501843A
Application number: JP3515319A
Authority: JP
Inventors: コウサート，レックス・エム; エッカー，デービッド・ジェイ
Original assignee: Isis Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Ionis Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1990-08-14
Filing date: 1991-08-13
Publication date: 1994-03-03
Also published as: KR970005274B1; HUT69956A; NO930514L; FI930628L; AU8536091A; FI930628A0; HU9300364D0; NO930514D0; AU652577B2; KR930701466A; CA2089562A1; BR9106747A; US5580767A; WO1992003454A1; FI930628A7; EP0543938A1; EP0543938A4

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】アンチセンスオリゴヌクレオチドによるインフルエン′ザＡ型つィルス。

アン・アームＨ２Ｎ２株の阻害発明の分野本発明は、インフルエンザライスル感染の診断、検査試薬および治療に関する。

特に、本発明は、インフルエンザウィルスによる細胞の感染に関係したある種のウィルスリボ核酸およびメツセンジャーリボＰａｎとのアンチセンスオリゴヌクレオチド相互作用に関する。インフルエンザウィルスのウィルスＲＮＡ断片に対して、或いは、ＮＰ、Ｍｌ、Ｍ２、ＮＳ１．ＮＳ２または、ＲＮＡポリメラーゼ、赤血球凝集素、核タンパク質若しくはノイラミニダーゼを含むインフルエンザウィルスの他の重要なタンパク質をコードするある種のｍＲＮＡ′ｓに対してハイブリッド形成するオリゴヌクレオチドを提供する。更に、ＲＮＡスプライシングまたはウイルスパッケージンクに重要なある種のウィルスＲＮＡ配列に対してハイブリッド形成するオリゴヌクレオチドを提供する。これらのオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡの活性の変調、すなわち感染の変調、診断、緩和または治療効果をらたらすことか発見された。

発明の背景インフルエンザウィルスは、記録された経歴全体を通してヒトにおける死亡率および罹患率の最大原因であった。流行は規則的な間隔で生じ、程度は大きく異なるが、年長者集団において最ら頻繁に有意の死亡率および罹患率を常に引き起こす、インフルエンザ流行の原因は、最初に、インフルエンザ流行か濾過粘液によって伝播することかあるということを示したＲ、Ｅ、ショーグ（Ｓｈｏｐｅｌによるウィルスに起因すると考えられた。現在、インフルエンザウィルスは３種類、すなわち、内部抗原性タンパク質の相違に基づいたＡ型、Ｂ型およびＣ型に分類される。

インフルエンザ感染は、頭痛、咳、発熱および一般的な倦怠感を含む一連の急性症状を引き起こす、既存の１ｌｉＩまたは心臓血管疾患に関わる苛酷な症状または状況においては入院を必要とする。直接のウィルス感染によるがまたは二次的な細菌若しくはウィルス浸入による肺炎は、最も頻繁に起こる合併症である。インフルエンザウィルス感染の臨床的！Ｓ様の論評に関しては、ダグラス（Ｄｏｕｇｌａｓ）、Ｒ，Ｇ、、Ｎｅｗ　Ｅｎ　１ａｎｄ　Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉ　ｅ、３２２：４４３〜４５０（１９９０）を参照されない。

抗原性変動によって生じた新規のインフルエンザ株は規則的なＷＩ度で、通常は毎年現れ、そして地球上をくまなく回る感染周期を開始する９個々の流行がどのように開始するかについてはほとんど知られていない。重大な新規のインフルエンザ亜種はあまり頻繁には現れないか、結果として重大な汎流行を引き起こすことがある。

苛酷な合併症の危険がある集団に対するインフルエンザウィルスに対処する最も有効な方法は予防である。利用可能なインフルエンザワクチンの使用は集団の死亡率を低下させる有効な方法であるが、しかしながら、ウィルスの絶えず変化する性質に応じて、現在流行しているウィルス株に対して防御する適切な組成物に関するワクチンの開発は複肇で且つ費用がかかる。更に、ワクチンを受ける場合の患者の応諾は通常極めて少ない、したかつて、インフルエンザウィルスによる重大な合併症の危険がある多数の患者は無防備のままである。

インフルエンザウィルスに対して予防的に何等かの活性を有する利用可能な薬剤かいくつか存在している。しかしながら、インフルエンザＢ型に対して有効であるしのはない、更に、概して、それらは治療的に効果か極めて限定され、症状か始まった後のｇｃ患の治療においては広範囲に用いられなかった。したかって、インフルエンザウィルス感染の治療用に改良された治療薬か世界的に必要とされている。

アンチセンスオリゴヌクレオチドを用いてインフルエンザウィルスを阻害する従来の試みか報告された。レイター（Ｌｅｔｔｅｒ）および共同研究者は、インフルエンザＡ型およびインフルエンザＣ型ウィルスに対してホスホジエステルおよびホスホロチオエートオリゴヌクレオチドに的をしぼった。レイター、Ｊ　、アグラワル（Ａｇｒａｗａｌ　）、Ｓ、　、ベイリス（Ｐａｌｅｓｅ）、Ｐ、およびザメクニク（Ｚａｍｅｃｎｔｋｌ　、Ｐ、Ｃ，、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ　１．Ａｃａｄ。

Ｓｅｔ、ＵＳＡ、８７：　３４３０〜３４３４　（１９９０）、これらの研究者はＶＲＡＮ３’領域およびｍＲＮＡ５’領域においてそれぞれポリメラーゼＰＢＩ選伝子およびｍＲＮＡたけに的をしぼった。インフルエンザＡ型の配列特興的阻害は観察されなかったが、インフルエンザＣ型の何等がの特異的阻害が注目された。

池のインフルエンザウィルス断片またはｍＲＮＡ’　ｓは目的とされなかった。

ゼリアル（Ｚｅｒｉａｌ）および共同研究者は、内位添加剤に対して同時的に結合したオリゴヌクレオチドによるインフルエンザＡ型ウィルスの阻害を報告した。ゼリアル、Ａ、　、トウオン（Ｔｈｕｏｎｇ）、Ｎ、Ｔ、およびハリーン（Ｈｅｌｅｎｅ）、Ｃ，、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、、５７　二　９９０９〜９９１９　＜１９８７ン、ゼリアルらは、８種類のｖＲＮＡ断片の３゛末端配列に的をしぼった。それらのオリゴヌクレオチド類似体は、細胞培養物中のウィルスの細胞変性作用を阻害することか報告された。欧州特許第１６９７８７号明細書でハリーンらは、介在する基に共有結合し且つ核酸の複製並びに１種類以上の遺伝子の転写および／または翻訳に関係した核酸配列と相補的なオリゴヌクレオチド化合物：介在する基に共有結合し且つウィルス若しくは細菌または寄生体を複製するまたは発育させる配列と相補的なオリゴヌクレオチド：および介在する基に共有結合し且つインフルエンザ若しくはヘルペスウィルスを複製する若しくは発育させる配列とまたは癌遺伝子と相補的なオリゴヌクレオチドを開示している。

欧州特許出願第８２１１０４９４．０号明細書（フルーグ（Ｋｒｕｇ）ら）は、インフルエンザウイルスエンドヌクレアーゼおよびトランスクリ１ターゼに対するオリゴヌクレオチドの親和性を増大させる５゛メチル化キヤツア構造含有オリゴヌクレオチドを開示している。更に、キャッグ付きオリゴヌクレオチドは、それらが１ライマーとして作用しないように、例えば、長さが１０ヌクレオチド未満であるように修飾され、或いは、３′末端のデオキシモノヌクレオチド若しくは３′末端の３′−〇−メチル化リボヌクレオチドを含むように：または糖および７′または塩基残基中におよび／′またはヌクレオチド結合中に少なくとも１４個の修飾されたヌクレオチドを有するように延長される。

カバノア（Ｋ　ａ　ｂ　ａ　ｎ　ｏ　ｖ　）および共同研究者は、ＲＮＡポリメラーゼ３をコードするＲＮＡのルーズ形成部位に対して相補的なオリゴヌクレオチド分合成した。カバノア、Ａ、Ｖ、　、ヴイノグラドフ＜Ｖｉｎｏｇｒａｄｏｖ）、Ｓ、Ｖ、、オヴチャレンコ（Ｏｖｃｈａｒｅｎｋｏ）、Ａ、Ｖ、、クリヴオノス（Ｋｒｉｖｏｎｏｓ）、Ａ、Ｖ　、メリク・ヌバロフ（Ｍｅｌｉｋ−Ｎｕｂａｒｏｖ）、Ｎ、Ｓ、　、キセレフ（Ｋｉｓｅｌｅｖ）、Ｖ、Ｉ　およびセヴエリン（Ｓｅｖｅｒ　ｉｎ）、Ｅ、Ｓ、、ＦＥＢＳ、２５９　：　３２７〜３３０（１９９０）。それらのオリゴヌクレオチドは、ウンデシル残基に対して５　末端リン酸基のところで結合した。彼等は、それらのオリゴヌクレオチドかＭ　Ｄ　ＣＫ細胞におけるインフルエンザＡ型ウィルス感染を阻害することを発見した。

前述の研究者はそれぞれ、インフルエンザウィルスの何等かの機能を阻害することでのある程度の成功を報告したが、インフルエンザウィルスを標的とする一般的な治療的スキームは発見されなかった。更に、インフルエンザウィルス治療薬の有効性か改良される必要かある。したかって、有効な冶陵的使用が可能であるアンチセンスオリゴヌクレオチド類似体の設計に対する必要性は長い間考えられていたし、そしてなお続いている。この長い間考えられていた必要性は、インフルエンザに対するアンチセンスオリゴヌクレオチド僚法の分野における従来の研究では満足させられなかった。池では、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体か穏当な適用量で治療的に有効である標的部位を確認することができなかった。

発明の目的本発明の主要な目的は、動物、特にヒトにおけるインフルエンザウィルス感染に対する治療法を提供することである。

本発明の更に別の目的は、インフルエンザウィルスのＲＮＡのｍｇを阻害することかて゛きるアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体を提供することである。

本発明の更にもう一つの目的は、インフルエンザウィルス種の詮所用手段を提供することである。

本発明のこれらのおよび他の目的は本明細書の論及により明らかになるしのである。

発明の要約本発明により、インフルエンザウィルスのＲＮＡ′ｓと特異的にハイブリッド形成するオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド類似体を提供する。オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体は、アンチセンス関係にあるインフルエンザＲＮＡに対して直接結合するように設計される。オリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド類似体は、ＲＮＡのａＮ能、すなわち、タンパク雪中への翻訳、細胞質中へのトランスロケーションまたは生物学的機能全体に必要な任意の他の活性のいずれがを阻害することができる。ＲＮＡがその機能の全部または一部分を達成することかできない結果として、ウィルスの正常な生活環を制御しているゲノムの一部分か欠失することになる。

アンチセンス攻撃のなめに特定のウィルスＲＮＡに的？しぼることは好適である。ＮＰ、Ｍｌ、Ｍ２、ＮＳＩおよびＮＳ２をコードする遺伝子はこの方法に特に有用であることか分かった。ＮＰ、Ｍｌ、Ｍ２、ＮＳＩまたはＮＳ２発現の阻害は、インフルエンザウィルス感染の治療に極めて有用であると考えられる。更に、この種の阻害は、診断用方法およびキットに関する根拠を形成することができる。更に、インフルエンザウィルスのＲＮＡポリメラーゼ、赤血球凝集素またはノイラミニダーゼをコードしている遺伝子の阻害も、インフルエンザウィルスＲＮＡのスゲライジング若しくはバ・ｙゲージング機能にまたはウィルス核タンパク質に関する干渉であるように、このような感染の治療に極めて有用であると考えられる。このような阻害または干渉も、診断法の根拠を形成することができる。

ウィルスの核酸とハイブリッド形成しうるオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体を動物に接触させることを含むウィルス感染を変調する方法を提供する。任意のｖＲＮＡ断片からのまたはＮＰ、Ｍｌ、Ｍ２、ＮＳＩ若しくはＮＳ２タンパク質をコードするｍＲＮＡ’　ｓからのＲＮＡとハイブリッド形成しうるオリゴヌクレオチドまたは類似体が好適である。

図面の簡単な説明図１は、断片５から合成されたインフルエンザＡ型ウィルス（アン・アーノ＼Ｈ２Ｎ２）の（＋）ＲＮＡ　（ｍＲＮＡ）を示す。

図２は、断片５からのインフルエンザＡ型ウィルス（アン・アームＨ２Ｎ２）の（）　ＲＮ　Ａ　（ｖ　ＲＮ　Ａ　）を示す。

図３は、断片７から合成されたインフルエンザＡ型ウィルス（アン・アーノ＼Ｈ２Ｎ２）の（−ｔ−）ＲＮＡ　（ｍＲＮＡ）を示す。

図４は、断片７からのインフルエンザＡ型ウィルス（アン・アー／（Ｈ２Ｎ２）の（）ＲＮＡ　（ｖＲＮＡ）を示す。

図５は、断片８から合成されたインフルエンザＡ型ウィルス（アン・アーノ＜Ｈ２Ｎ２）の（ｔ）ＲＮＡ　（ｒｎＲＮＡ）を示す。

図６は、断片８から合成されたインフルエンザＡ型ウィルス（アン・アー／＜Ｈ２Ｎ２）の（）ＲＮＡ　（ｖＲＮＡ）を示す。

図７は、実施例２に記載されたように細胞性ＲＮＡプライマーを模擬し且つインフルエンザウィルスを阻害する２′置換オリゴヌクレオチドの結合を示す略図である。

発明の詳細な説明アンチセンスオリゴヌクレオチドは、多数のヒト疾、＠を治療するため冶管薬として大いに期待されていた。オリゴヌクレオチドは、ワトワン・クリック塩基対によって定義されるように、プレーｍＲＮＡかまたは成熟ｍ　ＲＮ　Ａの相補的配列に対して特異的に結合して、ＤＮＡからタンパク質への遺伝情報の流れを阻害する、インフルエンザウィルスの場合、タンパク質をコードする情報はＤＮＡ中にはないかＲＮＡゲノム中にあり、ゲノム物質を標的とするアンチセンスか可能である。多数の最近の研究により、標的タンパク質を研究するための生化学的手段としてのアンチセンスオリゴヌクレオチドの有用性か実証された。ローセンノ＼−ク（Ｒｏｔ、ｈｅｎｂｅｒｇ）ら、Ｊ、Ｎａｔ、１．Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔ、、８１：１５３９〜１５４４　（１９８９）ニシン（Ｚｏｎ）、Ｇ、。

Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｒｅｓ、５：５３９〜５４９＜１９８８）、オリゴヌクレオチド化学、ヌクレアーゼ耐性オリゴヌクレオチドの合成法および、増大した細胞取込みを示すオリゴヌクレオチド類似体についての最近の発達ゆえに、新規の形態の治療薬としてアンチセンスオリゴヌクレオチドの使用を考えることは現在可能である。

インフルエンザウィルスはマイナス９ＲＮＡウイルスである。それらのゲノムは、ｖＲＮＡとも称する個別の（−）ＲＮＡ断片から成る６例えば、インフルエンザＡ型は８個の（−）ＲＮＡ断片から成る。表１は既知の断片のリストの一部分である。

表１インフルエンザ断片断片　コードタンパク質　ピリオン位置Ｉ　ＰＢ２　ＲＮＡポリメラーゼ　ヌクレオキャプシド２　ＰＢＩ　ＲＮＡポリメラーゼ　ヌクレオキャプシド３　ＰＡ　ＲＮＡポリメラーゼ　ヌクレオキャプシド４　ＨＡ　赤血球凝集素　エンベロープ５　ＮＰ　核タンパク質　ヌクレオキャプシド６　ＮＰ　ノイラミニダーゼ　エンベロープ７Ｍ１１！タンパク質　エンベロープＭ２　非構造　存在しない８　ＮＳＩ　非構造　存在しないＮＳ２　非構造　存在しないｖＲＮＡ断片は、ウィルスｍＲＮＡ　＜　（＋）ＲＮＡ）合成のための鋳型として役立つ遺伝情報の宝庫である。したがって、インフルエンザウィルスの場合、ＲＮＡをＤＮＡの代わりに転写鋳型として用いる。

＠胞に感染するインフルエンザウィルスの生活環は要約することができる。ウィルスは細胞表面上の受容体に対してそれ自体が結合し、そして中に取込まれる。

ｖ　ＲＮ　Ａゲノム断片はｍｌ胞核内に存在する。ウィルスはそれによって新たに感染した細胞中に、ＲＮＡ依存ＲＮＡボリメラーをｍ成する３樟類のタンパク質（ＰＢｌ、ＰＢ２、ＰＡ）および新規のＲＮＡ合成においてその３種類のＲＮＡポリメラーゼタンパク質に関与する核タンパク賃（ＮＰ）を含む多数のタンパク質をもたらす、ウィルスはその遺伝子！７発現させて、感染した。４１Ｉｌ胞中においてＲＮＡポリメラーゼおよび核タンパク質の作用によって既存の細胞組織と協同して新規のタンパク質を生成する。ウイルスポリメラーゼは、ｍＲＮＡ合成を開始するかまたはメツ七−シをキヤツプし且つメチル化する活性を含まない、これらは遺伝子発現に通常必要とされる過程て゛ある。その代わりに、ウィルスは細胞性ｍＲＮＡを利用して、約１０〜１ラヌクレオチドのメツセージの５　キヤ・ノブ付き末端をキャップ部位から開裂した後、それをプライマーとして用いてそｒし自体のｍＲ。

Ｎ、Ａ合成を開始する。この特有の機序を本発明において利用して、インフルエンザウィルスの特異的阻害を達成する。

治療に関しては、インフルエンザウィルスに感染していると疑われる動物を、本発明によるオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体を投与することによって治療する。当業者は、最適投薬量、投薬方法論および反復率を容易に決定することかできる。概して、このような治療は、治癒するかまたは疾患状態の軽減か達成されるまで続けられる。

各種インフルエンザウィルス間の種の変化が生じることは理解される。各種領域は種毎に極めて類似しているか、何等かの相違か生じる。これらの変化を説明するオリゴヌクレオチドおよび類似体における変化は、本発明によって具体的に予想される。

本発明は、インフルエンザウィルスＲＮＡの機能のアンチセンス阻害に用いるためのオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド類似体を用いる０本発明の文脈において、：オリゴヌクレオチド」という用語は、本来のホスホジエステル結合によって結合した天然に存在する塩基およびシクロフラノシル基から生成されたポリヌクレオチドを意味する。この用語は、天然に存在する種または、天然に存在するサブユニット若しくはそれらに近い同族体から生成された合成種を効果的に意味する。

「オリゴヌクレオチド類似体Ｊという用語を本発明に間して用いる場合、オリゴヌクレオチドと同様に機能するが、天然に存在しない部分を有する残基を意味する。例えば、オリゴヌクレオチド類似体は、変更された糖残基または棚内結合を有していてよい、これらの内の典型的なものは、当該技術分野で用いるのに知られているホスホロチオエートおよび他の硫黄含有穆である。若干の好ましい実施９様により、オリゴヌクレオチドの少なくとも若干のホスホジエステル結合は、活性が変調されることになっているＲＮＡまたはＤ　Ｎ　Ａが位！している細胞の領域中に侵入する組成物の能力を増大させるように５！能する構造に！換された。このような１換は、ホスホロチオエート結合、メチルホスホネート結合または短鎖アルキル若しくはシクロアルキル構造を含むのが好適である。他の好ましい実施ｌ！Ｘａｔにより、ホスホジエステル結合は、同時に、実質的に非イオン性で且つ非キラルである他の構造に、または池の実施９様においてはキラルであり且つ鏡像異性体によって特異的である構造に１換される。当業者は、本発明の実施において用いるための他の結合を選択することかできる。

オリゴヌクレオチド類似体としては、更に、少なくとも若干の修飾された塩基形態を含む種を挙げることができる０例えば、天然に通常見出されるもの以外の１リンおよびピリミジンをそのように用いることかできる。同機に、ヌクレオチドサブユニットのペントフラノシル部分の修飾も、本発明の本質的な見解に従う限りにおいて存在することができる。

このような類似体は、天然のオリゴヌクレオチド（または天然の系統に沿って合成されたオリゴヌクレオチドンと機能的に交換可能て゛ある場合に！にもよく記載されているか、天然の構造とは１か所またはそれ以上の相違点を有する。このような類似体はいずれも、それらがインフルエンザＲＮＡとハイブリッド形成するように有効にｍ能する限りにおいて、本発明によって包含される６本発明によるオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド類似体は、好ましくは、約８個〜２５個個のサブユニ・ｙトを含む、このようなオリゴヌクレオチドおよび類似体は約８個〜２５個のサブユニ１トを含むのが更に好ましく、約１０個〜２０個のすブユニットを有するのがなお一層好ましい、理解されるように、サブユニットは、ホスホジエステルまたは他の結合によって隣接するサブユニットに適当に結合した塩基−軸組合わせである。

本発明にしたがって用いられたオリゴヌクレオチドおよび類似体は、固相合成の周知の技法によって好都合に且つ日常的に製造することができる。このような合成のための装！は、アプライド・バイオシステムズ（Ａｐρｌ１ｅｄＢｉｏｓｙｓｔ、ｅｍｓ）を含むいくつかの販売元によって販売されている。しかしながら、このような合成のための他の手段のいずれを用いてもよい、オリゴヌクレオチドの実際の合成は、概して、日常的な技術者の能力の鮭囲内である。更に、同様の技法を用いて池のオリゴヌクレオチド類似体、例えば、ホスホロチオエートおよびアルキル化誘導体を製造することも周知である。

本発明により、当業者は、メツセンジャーＲＮＡが、三文字遺伝暗号を用いてタンパク質をコードする情報のみならす、５′非翻訳領域、３′非翻訳領域およびインドロン／′エキワン結合リボヌクレオチドのような当業者に既知の領域を形成する関連リボヌクレオチドら含むことを理解するであろう、したかって、オリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド類似体は本発明によって式化することができ、これらの関連ヌクレオチド並びに情報のりボヌクレオチドに完全にまたは部分的に的かしぼられる。好ましい実施９ｍにおいて、オリゴヌクレオチドまたは類似体は、転写開始部位、翻訳開始部位またはイントロン／エキジン結合部および３′非翻訳領域中の配列と特異的にハイブリッド形成しうる。

本発明により、オリゴヌクレオチドはインフルエンザウィルスの核酸と特異的にハイブリッド形成しうる。好ましい実施態様において、該核酸は、インフルエンザＡ型若しくはインフルエンザＢ型の８種類のゲノムＲＮＡ断片のいずれかまたはインフルエンザＣ型若しくはこれらの遺伝子のいずれか由来の対応する（＋）ＲＮＡ　（ｍＲＮＡ）種からの７種類のゲノムＲＮＡ断片のいずれかを含む。

対応する配列またはそれらの一部分を含むオリゴヌクレオチドまたは類似体は本発明において有用である６図１は、インフルエンザＡ型ウィルスの断片５の（＋）ＲＮＡ（ｍＲＮＡ）配列て゛あつ、図２は、同（）ＲＮＡ　（ｖＲＮＡ）配列である。図３は、インフルエンザウィルスの断片７の（±）ＲＮＡ　（ｍＲＮＡ）　配列であり、図４は、同（−）ＲＮＡ　（ｖＲＮＡ）配列である０図５は、インフルエンザウィルスの断片８の（＋）ＲＮＡ　（ｍＲＮＡ）配列であり、図６は、同（−）ＲＮＡ　（ｖＲＮＡ）配列である。

本発明の実施において有用なオリゴヌクレオチドおよび類似体は、ある程度変更された機序を有するかも知れないか、ＲＮＡの両方の形態に対して相補的であり、そしてＲＮＡ配列の一つまたはそれらの一部分、特に、ＮＰ、Ｍｌ、Ｍ２、ＮＳＩおよびＮＳ２タンパク質に関する断片５．７または８に関する配列の一つに対してアンチセンスであるように設計されている。更に、有用なオリゴヌクレオチドおよび類似体は、ＲＮＡボリメラーセ、ノイラミニダーゼ若しくは赤血球凝集素タンパク質に特に関係する断片１．２．３．４若しくは６に対してまたはＲＮＡスプライシング若しくはウィルスパッケージングにおいて重要なＲＮＡ配列に対して相補的（すなわち、アンチセンス）であるように設計されている。したがって、上記に示したようなこれらのオリゴヌクレオチド若しくはそれらの類似体のいずれかまたは、当業者がインフルエンザウィルス感染の変調に好ましいアンチセンス標的の知識から製造することができる類似のヌクレオチドのいずれかを用いるのが好適である８本発明のいくつかの好ましい実施９機を、下記の非制限実施例によって例示する。変調に好ましい標的ゲノムおよびｍＲＮＡ種としては、インフルエンザウィルスのＮＰ＝　Ｍｌ、Ｍ２、ＮＳＩおよびＮＳ２タンパク質がある。ｅの好ましい標的ＲＮＡ５は、ポリメラーゼ３、ポリメラーゼ１、ポリメラーゼ２、赤血球凝集素若しくはノイラミニダーゼ遺伝子に関する断片１．２．３．４若しくは６またはスプライス結合部若しくはパッケージング配列を含む。当業者は、本発明がそれに制限されないが、しかしながら、一般的に応用できることを理解するであろう、これらのインフルエンザＲＮＡ５の阻害は、疾患の治療において有意の治療上の利点を有すると予想される。

Ｘ旌凹実施例１インフルエンザＡ型ウィルス、アン・アーバＨ２Ｎ２株の阻害：インフルエンザＡ型ウィルス、アン・アーバＨ２Ｎ２株に対して相補的である一連のアンチセンスオリゴヌクレオチド配列を選択しな１選択されたオリゴヌクレオチド配列は、断片５．７．８からのインフルエンザ株ｖＲＮＡおよびそれらの断片由来のｍＲＮＡに対して相補的であり、ＮＰタンパク質（断片５１Ｍ１、Ｍ２タンパク質（断片７）およびＮＳ１．ＮＳ２タンパク質（断片８）をコードする。遇択された配列および正確な標的領域の要約を表２に示す。

表２インフルエンザ金型。アン・アーハＨ２Ｎ２ｔｇ的とするアンチでンスオリゴヌクレオナド配列＃　配列（５′〜３′）　標的Ｆ（ＮＡ饋域１２５０　ＴＴＡ　ＴＣＣＡＣＣＣＴＧ　ＣＴＴ　ＴＴＣＣＴ　断片５　（＝）ＲＮＡ　５’ｉｋ末端１２５１　ＴＣＣＣＡＣＣＣＣ＾ＴＣＡＴＴ　ＴＴＣＡＴ　１ｇＩ片５（−、）ＲＮＡ　翻訳の開始１２５２　ｍ　にＣＡＴ　ＣＣＣＴＴＣ；　（：ＣＡ　ＣＱ；ＣＣＡ　断片５（１）ＲＮＡ　翻訳の開始１２５３　ＣＧ＾τＣＣＴＴＣＣＣＣＧＣに　ＣＴＣにＧ　断片５（〒）ＲＮＡ　２９２位１２５４　＾Ｃ丁　ＡＧＡ　八ＡＣＡＡＧ　ＣＣ；丁　ＡＴＴ　ＴＴ　ぼ斤片５（−）ＲＮＡ３’　最末端１２５５　ＡＭ　ＡＴＡ　ＣＣＣＴＴＧ　ＴＴＴ　ＣＴＡ　ＣＴ　断片５（）ＲＮＡ　５’！末端１２５６　ＴＧＡ　ＣＴＣＡＣＡ　ＴＣＡ　ＡＡＡ　ＴＣＡ　Ｔｃｌ！ＩＩ片５（−）ＲＮＡ　３’末端付近１２５７　ＡＧＣへへＡＡＣＣＡＣＣ丁＾　ＣＡＴ　ＡＡ　断片５　（−）　ＲＮＡ　３’　最末端１２５８　ＡＡＴ　ＡＴＣＴＡＧ　ｃＴｃ　ｃｒｒ　ｒｒｃ　ＣＴ　１ｊｌｉ片７（−）ＲＮＡ５’　最末ｊ偶１２５９　ＴＡに　ＡＡＣＡＣＴ　ＣＡＴ　ＣＴＴ　ＴＣＡ　ＡＴ　断片７　（７）ＲＮＡ　翻訳の開始１２６０　ＧＡＧ；　ＡＧＡ　ＡＣ（：ＴＡＧ　ＣＴＴ　ＴＣＣ；　ＡＣ１ｊＩＴ片７（↑）ＲＮＡ　５’スフ０ライス結合１２６１丁ＣＣＣＣＴ　ＴｒＧ　Ａ（：　ＣＣＣＣＣＴ　ＧＡ　断片７　（−、）ＲＮＡ　７４位１２６２　ＣＴに　ＡＴＡ　ＣＣＣＣＴａ　ＣＡＡ　ＡＴＴ　ｎ　’Ｊｆｔ片７　（〒）ＲＮＡ　３’スプライス結合１２６３＾ＣＴ　ＡＧＡ　ＡＡＣＡＡＧ　にＴＡ　ＧＴＴ　Ｔｒ　断片７（中）ＲＮＡ　３’ 最末端１２６４　ＡＡＡ　ＡＣＴ　ＡＣＣＴＴＣＴｒＴ　ＣＴＡ　ＣＴ　断片７　（−）ＲＮＡ　５’　最末端１２６５　ＴＣＡ　ＣＣＣＣＣＣＣＴＣＡＡＡ　Ｃ；ＣＣＣＡ　ＩＩｉＩｆｆ−）ＲＮＡ　３’末端付近１２６６　ＡにＣＡＡＡ　ＡＧＣＡＧＣＴＡＧ　ＡＴＡ　Ｔｒ　断片７（−）ＲＮＡ３’最末端１２６７　ＴＴＴ　ＣＴＣＡＣＣＣＴＣＣＴＴ　ＴＴＣＣτ断片８（↑）ＲＮＡ　５’危末端１２６８　ＣＴＣＴＴＡ　ＣＣＡ　ＴＣＣＡＴｒ　ＡＴに　ＴＣ断片８　（＋）ＲＮＡ　翻訳の開始１２６９＾ＣＣＡＡＴ　ＣＴＡ　ＣＣＴ　ＣＡＡ　ＡＣＣＴＴ断片８（＋）ＲＮＡ　５゛スプライス結１２７０　ＴＡＧ　ＴＡＴ　Ｃ；ＴＣＣＴＧ　ＱＭ　ＧＡＧ　ＡＡ断片８　（Ｔ　）　ＲＮＡ　３　’　スフライスＭ合１２７１　Ａに’Ｔ　ＡＧＡ　ＡＡＣＡＡ（：　ＣＣ’ｒ　ＧＴｒ　Ｔｒ　Ｉｆｆ、　片８　（，５）　ＲＮ　Ａ　３　′Ｂ末端１２７２　ＡＭ　ＡＣＡ　ＣＣＣＴＴＣＴｒＴ　ＣＴＡ　ＣＴ断片８　（−）ＲＮＡ　５’　ｆｉ末端１２７３　ＧＣＣＴＣＣＧＣＡ　ＣＣＴ　ＧＣＣＴＣＣＣＣ断片８（）ＲＮＡ　３　宋肩付近１２７４　ＡＣＣＡＡＡ　ＡＣＣＡｃｃ　ｃ’ｒｃ　ＡＣＡ　ＡＡ　（ｇ、片８（）　ＲＮＡ３−１１末端インフルエンザウイルスの阻害を、当業者に知られている標準法によって検定する１例えば、ヒト胎芽肺（ＭＲＣ５）またはマデイン・ダービー（Ｍａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙ）イヌ腎（Ｍ　Ｄ　ＣＫ　）系などの細胞は、細胞培養においてインフルエンザウィルスに容易に感染する０次に、細胞を培地中で増殖させ、濯ぎ洗浄し、そして感染多重度（Ｍ、Ｏ，１，１０，００１〜０．Ｏｌでウィルスを用いて処理する。感染させた後、過剰のウィルスを洗浄して除去し、そしてアンチセンスオリゴヌクレオチド類似体を２５〜うＯμＭの濃度およびそれらの稀釈度で１０える。三重のウェルのウィルスを各稀釈用に用いる。５〜７日間の処理時間の最後に、ウィルスに感染した細胞を取出し、均一化し、そしてインフルエンザウィルスの感染率を、抽出物の稀釈液がＭＲＣ５細胞の１＃上に）゛レートされた時に生じたプラークの数を測定することによって滴定する。正の薬効は、薬剤処理の結果と同様にウィルス収率の低下として定義される。未処理対照と比較して少なくとも約１０＠のウィルス収率の低下が予想される。

実施例２ＲＮＡプライマー模ｗｊ：インフルエンザ感染細胞におけるウィルスにコードされたｍＲＮＡの転写に、細胞性ＲＮＡボリメラーセとウィルスＲＮＡポリメラーゼとの協同が必要て゛あることは知られている。この協同は、ウィルスＲＮＡポリメラーゼが、直接的に転写を開始するかまたはｍＲ：’；Ａのヲ゛末ｉｔ適当にキャｌプし且つメチル化する能力を欠いているので必要とされる。ウイルスポリメラーゼ複合体は、細胞性ＲＮＡポリメラーゼによって合成された細胞性ｍＲＮＡを補充し、細胞性ｍ　ＲＮ　、Ａの最初の１０〜１５個のヌクレオチドを開裂し、そしてそれを用いてそれ自体のｍ　ＲＮＡ転写を開始し：＃ｌ胞性ＲＮＡはプライマーを生成する。

ウィルス代謝のこの独特の態様は、３′末端での（−）ＲＮＡ　（ｖＲＮＡ）断片に相補的であり且つ概して図７に示されているようなアンチセンスオリゴヌクレオチドの５′側に更に１０〜１５個のヌクレオチドを延長するアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処理を阻害する機会を与える。

これらの実施９９に好ましいアンチセンスオリゴヌクレオチドは２′１換オリゴヌクレオチドを含み、それらはＲＮＡの構造を模擬し且つウィルスポリメラーゼに対する結合を増大させる。ｌＩして、それは、オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体の少なくとも若干のサブユニット中の結合性糖残基の２′ 位が置換されている本発明の若干の実施態様において用いるのに好適である。したがって、２′！換基、例えば、ＯＨ，ＳＨ，Ｆ、ＯＣＨ３、ＯＣＮ、０　（ＣＨ２）　ｎＣＨ３（式中、ｎは１〜約１０である）および同様の性質を有する池の置換基は、若干の実施態様において有用であることかできる。アンチセンスオリゴヌクレオチドの５′末端は、場合により、典型的な細胞性ｍ　ＲＮ　Ａと同様の様式でまたはキヤ・Ｉブ類似体で情ヤップされる。キャップ付きのオリゴヌクレオチドを製造するためめいくつかの方法は当業者に知られ、でいる。例えば、ある種のキヤ・１７付きオリゴヌクレオチドを製造するｆ：めの指示は、イスラエリ（Ｙｉｓｒａｅｌｉ）およびメルトン（Ｍｅｌｔｏｎ＞、Ｍｅｔｈｏｄｓ　１ｎＥｏ７：！匹旦」工ｊ工、１８０　：　４２ヘ−５０（１９８９）およびそこに引用さｉた参清文献に記載さ７］でいる６場合により、アンチセンスオリゴヌクレオチドゾ）３′末端は３′デオキシヌクレオチドまたは別のヌクレオヂｊζ類似体を含み、そ７１．は、酵素によって用いられてＲＮＡＩを延長する３ ′ヒトｏ−ｉシル基を欠いでいるのて゛ＲＮＡポリメラーゼによ−）で延長することかて′きない。５二のような鎖柊結阻′＃刑を用いることは多くの生化学的処理において一般的である８例えば、饅終結ヌクｌ／オチドは、サンガー（Ｓａｎにｅｒ）の方法によってＤＮＡの配列順序決定に用いへれる６サンガー１Ｆ　、ニクレン（Ｎｉｃｋｌｅｎ）、Ｓ、およびＡ、Ｒクールシン（Ｃｏｕ　ｌ　５ｏｎ）、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ−１，ＡｃａｄＳｃｉ、、７４二５４６３〜５４６７　（１９７７）、この方法論を用いると、下記のオリゴヌクレオチドはアンチセンス治療薬の十分な目的であると考えられており、それらを合成し且つ実施例１に記載の抗ウィルス活性について検定する。

υＣＵＣＣＣＵＣＵＣＡＧＡＧＣにＡＡＡＧＣＡＧＧＴＡＣＴＧＡＴＴυＣＵＣＣＣＵＣＵＣＡＧＣＡＡＡＡＣＣＵＵＣＣＣＧＧＡＡＡＵＧＡυＣＵＣＣＣＵＣＵＣＡＧＡＧＣＭＡＡにＣＡＧＧＧυＡＧＡＵＡＡ実施例３オリゴヌクレオチドおよび類似体の合成および特徴イ　：非修ＤＤＮＡオリゴヌクレオチドを、自動ＤＮＡ合成機（アフ゛ライド・バイオシステムズ３８０Ｂ型）で、ヨウ素による酸化を件う標準的なホスホルアミダイト化学を用いて合成した。β−シアンエチルジイソプロピルホスホルアミダイトはアプライド・バイオシステムズ（フォスター市、ＣＡ）から購入された。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドに対しては、標４ａ化ボトルを、ホスフィノド結合の１９．階的チェージョン（ｔｈｉａｔｉｏｎ）のために３Ｈ−１，２−ベンゾジチオール−３ −オン−１，１−ジオキシドのアセトニトリル中０．２Ｍ１ｉで置き換える。チェーシコンサイクル待ち時間工程分６８秒まで増加させ、そして続いてキャッピング工程を行った。２’−０−メチルホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、２′−〇−メチルーβ−シアノエチルジイソプロビルホスポルアミダイト（ケムジーンズ（Ｃｈビ丁ロｇｅｎｅＳ＋−二一ダム、ＭＡ）を用い。

テトラゾールおよび塩基のパルス送出後の待ち時間工程を３６０秒まて゛増加させたこと以外は非修飾オリゴヌクレオチド用凛準サイクルを用いて合成された０合成を開始するのに用いられた３′塩基は２′−チオキシリボヌクレオチドであった。制御された細孔カラスカラム（アプライド・ハイオシステムズ）からの開裂および濃水酸イヒＴシモニウム中において５シ（”で１８時間め脱ブｔ：＋　、　、Ｑ　＞グ漫にオリゴヌク１／オチドを１，２．５容坂のエタノールを倉む０．５Ｍ　ＮａＣｌがらの２回の沈殿によ−〕で精製１プ：：。分析用ゲル電気泳動を、２００６アクリルアミド、８Ｍ尿素、＝４５ｍＭｌ−リスーホウ酸塩＃ＩＩ衝液、ｐＨ７，０中て゛行った。オリゴヌクレオチ！でおよびそれら、のポスホロチオエートＭ似体は、電気泳動がら判断ｊ、て、８０％を越える完全な長さめ材料であっカー。

この合成によって得られたホスホロチオエートおよびホスホジエステル結合の相対量は、３１Ｐ−ＮＭＲ分光分析法によって周期的に検音さね犬。スペクトルは、酸化シー、ウテリウムまｆＳはジメチルスルホキシド−ｄ−をＪｇとして用いて周囲温度で得られた。ホスホロチオエート試料は、典型的に、ホスホジエステル結合を１％未満含んだ。

実施例４ウィルスによ−）て誘導されＵ性効果（ＣＰＥｊを虫害するｃ力に関するオリゴヌクレオ千ド！Ｊｉ似体のスクリーニング：アンチセンス化合物の抗ウィルス活性は、インフルエンザウィルスによって誘導さｔ’Ｌｆ、−細胞変性効果のＩＩｌ害を監視することによって速やかに決定することかできる。こめ検定は単一層の謬微曵検斎を必要とするので、それは微量滴定ウェル中で行うことかでき、したかって、最初のスクリーンに必要とされるオリゴヌクレオチドの量を減少させることができる０本発明者は、この検定システムを抗ウィルス活性のための迅速な主要スクリーンとして用いた。

インフルエンザウィルスＡ、／ＰＲ／′８／３４型を、イーグル（Ｅａｇｌｅｓ ’　）ＭＥＭ−２９６ウシ胎児血清中の予め増殖したＭＤＣＫ細胞単一層培ｇｅ物中を通過させ且つ検定した。抗ウイルス性研究に関しては、ウィルスを培地中で稀釈して、３２ＣＣＩＤう０（４１胞培養感染用量、５０％）１０．１ｍｌ／培養ウェルを得た。

総数３２種類のオリゴス２レオチドホスホロチオエート＃以体を実施例３でのように製造し且つ一２０℃で貯蔵した。それぞれの使用直前に化合物を解凍し且つ培地中において、２０．６，４．２．０．０．６．０，２および０．０６μＭの連続の０．５１０ｇ１ｏａ度で稀釈した。

既知の活性化合物であるリバビリン（Ｒｉｂａｖｉｒｉｎ）は、正の対照として没立つようにオリゴヌクレオチドと一緒に評価された。

ＭＤＣＫ細胞を、コスタ−（ＣＯ３ＴＡＲ）９６ウ工ル組織培養プレー］・のつｌル中において適当な培地を用いて単一層と乙て予め増殖させた。抗ウイルス性検定は、６種類の濃度の各化合物を試験ウィルスに対して三重に評価するように設計された。培地のみを含む細胞対照、培地でのみ処理されたウィルス感染細胞対照および非感染薬剤細胞毒性対照（ｌＩＩＢ胞および薬剤）が各試験グレート中に含まれた。

宿主細胞培養は、各薬剤ａ慶をウェル当９０．２ｍｌ用いて２％ｃｏ２を含む給温雰囲気中において３７°Ｃで１８時間前処理された（試験ウェルおよび薬剤細胞毒性対照）、ウィルス対照およびＭｉ胞対照になる細胞培養ウェルを、実験用培地（ＭＥＭ４２％ウシ胎児血清）で１８時間模擬前処理しな。

１８時間の前処理の後、液体をプレートウェルから除去し、そして細胞単一層を培地で濯ぎ洗浄しな０次に、各試験およびウィルス対照培養ウェルをウィルス懸濁液０．１．ｍｌに対して３７℃で１時間暴露した。薬剤毒性および細胞対照培養物を培地０．１ｍｌ／’ウェルで模擬感染させた。

ウィルス吸着時間に続いて、液体をグレートウェルがら吸引し、そして細胞単一層を培地で１き°洗浄して非吸着ウィルスを全て除去した。三重のウィルス感染培養物に対しておよび２種類の細胞毒性対照培養物に対して、各薬剤濃度のアリコート０．２ｍｌを分配した。未処理ウィルス対照および細胞対照培養物に実験培地０．２ｍｌを供給した。グレートをＣＯ２インキュベーター中において３７ ℃で、最大ＣＰＥ　（４［１１胞変性効果）がウィルス対照培養物中で観察されるまで（３日間）インキュベートした。

細胞培養ウェルを、ＣＰＥおよび薬剤細胞毒性に間して顕Ｒ鏡によって検査した。抗ウィルス活性は、薬剤処理したウィルス感染細胞培養物においてウィルスに誘導されたＣＰＥの阻害の程度をウィルス等級（ＶＲ）によって計算することにより決定された。ＶＲは、ＣＰＥ阻害および薬剤細胞毒性の程度双方を考慮した抗ウィルス活性の標準的で重要な測定値であり、下記に記載のエーリソヒ（Ｅｈｒｌｉｃｈ）ら（Ａｎｎ、Ｎ、Ｙ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ｔ３０：５〜１６゜１９６５）の方法の変法によって決定される。ＣＰＥは、下記の尺度によって各微量滴定プレートウェル中の個々の培養物それぞれについて等吸付けられた。

４〜１００％の細胞がウィルスによって影響された；３〜７５％の細胞がウィルスによって影響された１２２５０％の細胞がウィルスによって影響された：１＝１２５％の細胞かウィルスによって影響された：０＝ＣＰＥなし：正常な細胞の単一層Ｕ−不十分な試験（混入／ｌ＃ｌれ）し＝薬剤は細胞に対して毒性である；ＣＰＥは識別できないＰ＝薬剤は細胞に対して部分的に毒性である；＃１ｍ単一層は完全であるので、ＣＰＥは識別しうろことかある。

ＶＲは、各試験ウェルの記録されたＣＰＥ等級と、培養プレート中の対応するウィルス対照の等級との数値差の合計の０．１として計算された１部分的に細胞毒性（Ｐ）であった薬剤濃度を含む試験ウェルの評点と、それらの対応するウィルス対照との数値差を二分した。

本発明者の過去の実験において、本発明者は、１．０またはそれ以上のＶＲか、確証的なインヒドロの試験において高度の再現性を有する有意の抗ウィルス活性を示すものであることを発見した。したがって、本発明者は、ＶＲが１．０またはそれ以上の化合物はいずれも活性（十）と考える。ＶＲか０．５〜０．９の化合物はいずれも、可能なすなわち限界の活性（±）を有すると考えられ、そしてＶＲが０．５未満の化合物はいずれら、本試験システムにおいて不活性（−）であると考えられる。

ＣＰＥを５０％まで低下させた最低阻害薬剤濃度（Ｍ■Ｃ５ｏまたはＩＤ５゜）は、適当な片対数曲線に関する回帰分析１０グラムを用いて計算された。感受性ウィルスそれぞれに対する各活性化合物の治療指数（ＴＩ）は、試験化合物の最低細胞毒性濃度をＭＩＣ５ｏで割ることによって決定された。

最初に、８種類のインフルエンザＲＮＡ標的部位に対して向けられたボスボロチオエートオリゴヌクレオチド類似体を２種類のナンセンス対照と一緒に試験した。これらのオリゴヌクレオチド類似体の配列および標的を表３に示す。

表３抗ウィルス活性に関して試験されたオリゴヌクレオチド類似体（いずれもホスホロチオエートである）配列社　ｌ５ＩＳ＃　配列　［１２７９２ＡＧＣＡＡＡ　ＡＧＣＡＧＧ　ＧＴＧ　ＡＣＡ　ＡＡｖ　ＲＮ　Ａ　。

断片８の転写阻害２　２７９３　ＡＧＣＧＡＡ　ＡＧＣＡＧＧ　ＴＡＧ　ＡＴＡ　Ｔｒ　Ｖ　ＲＮ　Ａ　。

断片７の転写阻害３　２７９４　ＧＴＧ　ｍ　ＧＧＡ　ＴＣＣＡＴｒ　ＡＴＧ　ＴＣｍ　ＲＮ　Ａ　、非構遣タンパク質のＡＵＧ、断片８４　２７９５　ＴＡＧ　ＡＡＧ　ＡＣＴ　ＣＡＴ　ＣＴＴ　ＴＣＡ　ＡＴ　ｍ　ＲＮ　Ａ　、マトリｌラスタンパク質のＡＵＧ、断片７５　２７９６　ＧＣＡ　ＡＴＣＴＡＣＣＴＣｉ　ＡＡＡ　ＱＣコ′丁に　ｍＲＮＡ、ＮＳ　２のスフ。

ライス結合部、断片８６　２７９７　ＡＧＡＧＡＡＣＣＴＡＣＧＴｒＴＣｒＡＣＣｍＲＮＡ、　Ｍ　２のスプライス結合部、断片７７　２７９８　ＡＡＡＡＣＡＣＣＣＴｒＧＴｒＴＣＴＡＣＴ　ｖＲＮＡ、５’末ｉハアケ一ジング配列、断片８８　２７９９　ＡＡＡ　ＡＣＴ　ＡＣＣＴＴＧ　ＴＴ’ｒ　Ｌ７Ａ　ＣＴ　Ｖ　ＲＮ　Ａ　、　５　’末端パッケージング配列、断片７９　２ｆｌ　ＧＧＧ〜いＣいＡＣＣＧＡＡ＾ＴＡ＾Ｇ　ナンセンス対照オリゴ１０　Ｚ＆ＯＩ　ＣＡＡ　ＣＣＡ　ＡＡＡ　ＡＧＡ　ＴＡＡ　ＴＣＴ　ＣＡ　ナンセンス対照オリゴこれらのオリゴヌクレオチドに関するＣＰＥ阻害検定結果の要約を表４に示す。

ＭＤＣＫＡＥＩ胞培賛におけるインフルエンザウィルスＡ／ＰＲ，／８／３４型に対する抗ウィルス活性についてＣＰＥ阻害検定法を用いるｌ５ＴＳ化合物の評価結果の要約ｒｓＩｓ：　ＶＲ■シｓｏ＜μＭ）　Ｍ７Ｃ３＜μＭ）　Ｔｒ４２７９２　１．０　１り、９２　＞２０　＞１．４３２７９〕Ｏ＞２０２７９４　１．１　１２．５８　＞２０　＞１．５９２７９５　０．５　＞２０２７９６　０．５　＞２０２７９７　０．７　１６．９９　＞２０　＞１．１１３２７９Ｂ　０．７　１９．９Ｂ　、＞２０　＞１．０２８００　１５　１．１１　＞２０　１７．９５２８０１　０．４　＞２０リハヒリン３．６　５．６５　μｑ／＋ｒ＋ｌ　１００　ｕｇ／ｍ１　１７．６９（Ｔ′Ｎ照）ＩＶＲ＝ウィルス等級：エーリンヒら、Ａｎｎ、Ｎ、Ｙ、Ａｃａａ、Ｓｃ　１１３０：５〜１６（１９６５）の方法の変法によって決定された、ウィルスに誘導された細胞変性効果（ＣＰＥ　）の１ｑ１害程度および試験化合物によって生じた細胞毒性の程度を考慮する選択的抗ウィルス活性の測定値０本発明者の実験において、１０またはそれ以上のＶＲは明確な抗ウィルス活性（Ｔ）を示し、０．５〜０９のＶＲは中程度までの限界の抗ウィルス活性（＝）を示し、そして０．５未満のＶＲは、通常、有意の抗ウィルス活性なしく−）を示す。

２ＩＤ　（ＭＩＣ５ｏ）＝適当な片対数曲線に関する回帰分析プログラムを用いて計１された、ＣＰＥを５０９６まて′阻害した最医薬剤濃度。

された）、ＭＴＴ検定によって決定される薬剤細胞毒性を表７に示す。

４ＴＩ＝最低細胞毒性薬剤１度をＩＤ５ｏで割ることによって計算された治療指数。

３種類の化合物、ｌ５Ｉ３２７９２　（配列番号：　１）、ｒｓ１３２７９４　（配列番号＝３）およびＴ　Ｓ　Ｉ　５２８００　（配列番号：９）のウィルス等級は１．０またはそれ以上であったが；しかしながら、最も高い等級の化合物（ＩＳＩＳ２８００、配列番号＝９）はナンセンス対照であった。

次に、第二組の２２種類のオリゴヌクレオチド類似体を製造し且つ試験した。

これらのオリゴヌクレオチドの配列および標的を表５に示す。

表５抗ウィルス活性に関して試験されたオリゴヌクレオチド類似体（いずれもホスホロチオエートである）配列番号　ｌ５ＩＳ＃　配列　標的１１　３３０２　ＧＧＧＡＡＡＣＣ八ＡＣＧ　ＧＡへ　ＡＴＡ　Ａにナンセンス対照１２　ココｏ３　ｃｍ　ＴＣＣＡＴＡ　ＴＴＧ　ＡＡＴ　ＡＴＡ　ＡＴ　Ａｔ：ａ　ｌ！ｌｉ片ｌポリメラーゼ３１）　コ３０４　ＡＣＡ　ＴＣＣＡＴＴ　ＣＡＡ　ＡＴＧ　ＧＴＴ　ＴＧ　ＡＵＧ　断片２１４　３］０５　ＴＣＴ　’Ｉ’ＣＣＡＴｒ　ＴＴＧ　ＧＡＴ　ＣＡＧ　ＴＡ　、ＡＵＧ　断片３ポリメラーゼ２１５　ココｏ６　ＧＣＣ’ｒｒＣＡＴＴ　ｒｒｃｃｒｒｃＴＴ　ｒｒＡＵＧ　断片４赤血球凝集素１６　コ３０１　ＧＡＣＧＣＣＡＴＧ　ＡＴｒ　ＴＴＧ　ＡＴＧ　ＴＣＡＬＪＧ　断片５核タンパク質１７　：＋３ｏａ　ＧＧＡ　ＴＴＣＡＴＴ　ＴＴＡ　ＡＡＣＣＣＣＴＧ　ＡＵＧ　ｌ！ｌｉ片６メイラミニダーゼ１１３　３３０９　ＡＧＡ　ＣＴＣＡＴＣ７７１’　ＣＡＡ　ＴＡＴ　ＣＴ　、へＵＧ　断片７マトリツクスタンパク質１９　３：ｌｌＯＧＡＴ　ＡＧＡ　ＧＡＧ　ＭＣＧＴＡ　ＣＧＴ　Ｔｒ　左スプライス結合断片７２０　コ３１１　ＴＣＴ　（１；ＡＴ　ＡＧＧ　ＣＣＴ　ＧＣＡ　ＡＡＴ　ＴＴ ’　右スプライス結合田Ｏ’＋’　７２１　コニｌ１２　ＧＧＡ　ＴＣＣＡＴｒ　ＡＴＧ　ＴＣＴ　ＴｒＣＴＣＡ　Ｉ：　Ｑ　断片８非楕遣タンパク質２２　３コ１コ　ＣＡＴ　ＧＴＣＧＧＴ　ＴＡＧ　ＧＴＡ　ＡＣＧ　ＣＣスプライス分枝断片８２３３３１４　ＧＣＡ　ＡＴＣＴＡＣＣＴＧ　ＡＡＡ　ＧＣＴ　ＴＧ　右スプライス結合断片８２４　３コ１５　ＡＧＣＡＧＴ　ＡＴＣＴＣＣＴＧＧ　ＡＡＧ　ＡＧ　左スプライス結合断片８２５　１４１６　ＡＡＡ　ＡＣＧ　ＡＣＣＴＴＧ　ＴＴＴ　ＣＴＡ　ＣＴ　パンケージング配列断片１２６　３ｍ１１７　ＡＡＡ　ＡＡＴ　ＧＣＣＴＴＧ　ＴｒＣＣＴＡ　ＣＴ　バＩケーシング配列断片２２７　３：１ＩＥＩ　ＡＡＡ　ＡにＴ　ＡＣＣＴＴＧ　ＴＴＴ　ＣＴＡ　ＣＴ　バソゲージング配列断片３２８　：１３１９　ＡＡＡ　ＡＣＡ　ＣＣＣＴＴＧ　ＴＴＴ　ＣＴＡ　ＣＴ　パフケーシング配列断片４２９　３’３２０　ＡＡＡ　ＡＴＡ　ＣＣＣＴｒＧ　ＴＴｒ　ＣＴＡ　ＣＴ　パ・ｌゲージング配列断片５３０　ｍｌ：１２：Ｌ　ＡＡＡ　ＭＣＴＣＣＴＴＧ　ＴＴＴＣＴＡ　ＣＴ　バソケーシング配列断片６］１３コ２２　ＡＡＡ　ＡＣＴ　ＡＣＣＴＴＧ　ＴＴＴ　ＣＴＡ　ＣＴ　バソヶーンツク配列断片７：１２　３３２３　ＡＡＡ　ＡＣＡ　ＣＣＣＴｒＧ　ＴＴＴ　ＣＴＡ　ＣＴ　パンゲージフグ配列断片８ＣＰＥ阻害検定結果の要約を表６に示す。

表６ＭＤＣＫ細胞培養におけるインフルエンザウィルスＡ／ＰＲ／８／３４型に対する抗ウィルス活性についてＣＰＥ阻害検定法を用いるｌ５ＩＳ化合物の評価結果の要約 −−５０（μＭ）　ＭＴＣ’（Ｍ）　Ｔ１４ＩＳＩＳ＃　ＶＲ’　ＴＤ２３コ０２　ユ、１　１２．７　＞２０　）１．６ココ０コ　０．８　１４．７　＞２０　＞１．４３３０４　０．８　１７．４　＞２０　＞１．２３３０５　２．０　’３．９　＞２０　＞５．２３３０６　２．６　２．０　＞２０　＞９．８３コ０７　コ、２　１．８　＞２０　＞１１．４３３０Ｂ　２．６　３．１　＞２０　＞６．６３３０９　２．１　４．５　＞２０　＞１．６３３１０　１．１　１２．７　＞２０　＞１．６ココ１ユ　２．８　１．０　＞２０　＞１９．８３コ１２　１．６　１０　＞２０　＞２．８３コ１〕　２．コ　コ、７　．２０　＞５．５ココ１４　１．２　１２Ｊ　＞２０　＞１．６３３１５　２．６　２．１　＞２０　＞９．６３３１６　１．３　８．１　＞２０　＞２．５３３１７　１．３　１２．４　＞２０　＞１．６３３１８　１．２　１２．７　＞２０　＞１．６３３１９　：］、６　０．９　＞２０　＞２３．５３３２０　１．１　１１．：ｌ　＞２０　＞１．８３３２１　２．７　２．４　＞２０　＞８．３３コ２２　２．１　２．９　＞２０　＞１．４コ３２コ　１．０　１４．２　＞２０　＞１．４リバビリ７　４．１　２．３μｑ／ｍ１　３２　μｇ／ｍｌ　Ｄ、９（一対照）リハヒｌ）／３，９　２．６　μ７ｍ１３２　μｇ／ｍ１１２．２’ＶＲ−ウィル、ス等級：エーリ・ｌヒら１．八ｎｎ、、”＜、Ｙ　λ（：１向　Ｓニュー１３０　：ｉ〜１６　（１９６５）の方法の変法によって決定されｔ二、ウィルスに誘導された細胞変性効果（ＣＰＥ）のｔｉｌｌ　’ｉ！ｉｉおよび試験化合物によって生じた細胞Ｓ性の程度を考慮する選択的抗ウィルス活性の測定値。本発明者の実験において５１０またはそれ以上めＶＲは明確な抗ウィルス活性（Ｔ）を示し、０．５−〇、９のＶＲは中程度まて′の限界の抗ウィルス活性（±）を示し、ぞして０５未満のＶＲは、通常、有意の抗ウィルス活性なしく−）を示す。

つ “−ＩＤ　（Ｍｌｃ５ｏ）＝適当な片対数曲線に関する回帰分析フーロクラノ、を用いて計算された、ＣＰＥを”’Ｊ　ＯＯＧ＋よで阻害しｔ：最低薬剤濃度。

３ＭＴＣ−何等かの細胞ｉｉ性と引き起こす最低面剤１４度（題黴錘によって観察された）、ＭＴ′Ｖ検定によって決定される薬剤細胞毒性を表８に不ず。

”　Ｔ　Ｉ　＝最低細胞毒性薬剤髭ご１Ｄ−ｊｏで割ることによって計算された治療指数。

全部の化合物かインフルエシサＡ型ウィルスに対して活性であった　２４ｉ！類の化合物、ｌ５ＩＳ３３０３　（配列番号：１２）およびＴＳＩＳ３３０４　（配列番号＝１３）のウィルス等級たけが１０未満であった。最も活性の化合物はｌ５ＩＳ３３０７　（配列番号：　１６　；ＶＲ３，２）およびＴＳＩＳ３３１９　（配列番号：　２８　：　ＶＲ３、６）　で−ｈツｆ；、　最大力価オヨび選択性はｌ５ＩＳ３３１１（配列番号：　２０　；　ＶＲ２，８，Ｉ　Ｄ　５０１　、　ＯμＭオヨヒｉ’　Ｉ　＞　Ｉ　Ｑ、　８　）　ｉｉよびＴＳＩ３３３１９　（配列番号：２８：　１ｒ）５００．９ノＩＭおよびＴｌ＞２３．５）によって示された。ＩＤう。′ＳおよびＴＩ’　ｓｔ計算し、最も近い０．１まで四捨五入した。正の対照薬剤はであるリバビリンは、ＶＲによって試験化合物よりも活性であると考えられたか、化合物＋５１Ｓ３３１１　（配列番号。

２０）およびｌ５ＩＳ３３１９　（配列番号、２Ｓ）は、正の対！！ｉｌ！藁剤よりら高い治療指数によって示されたように、試験ウィルスに対して一層有効であった。

実施例４オリゴヌクしオチド４１１１毒性のＭＴＴ検　：全体の形態学的変化に関して蓼黴鐘によって薬剤細胞毒性細胞対照培養物を検査することに加えて、薬剤細胞毒性を、ＭＴＴを利用する方法によって定量的に決定した。この方法は細胞生存率を測定し、そしてテトラゾリウム塩である３−（４，ラージメチル−チアゾルー２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム臭化物（ＭＴＴ）を生存しうる宿主細胞のミトコンドリア酵素によってＭＴＴホルマザンに還元することに基づいている、Ｔ　モスマン（Ｍｏｓｓｍａｎ）１、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏ　１．Ｍｅｔｈｏｄｓ、、６５　：　５５，１，９８３．薬剤細胞毒性対照および細胞対照をＭＴＴに続いてＳＤＳで処理して、ＭＴＴホルマザンの結晶を溶解させる。ＭＴＴホルマザンの青色を自動プレート読取り機上において５７０ｎｍで分光光度測定した。薬剤細胞毒性（生存率）は、各薬剤細胞毒性対照の吸光度（光学濃度、０．Ｄ、）を＠胞対照培養物の平均０．Ｄ、と比較することによって決定され、そして対照％として表わされた。

３２１１Ｉ類の化合物の内、謬Ｒ鏡的評価により（表４および表６）またはＭＴＴ検定により（表７および表８）、評価された最も高い用量２０μＭで毒性であるものはなかった。

ＭＴＴ検定によって決定される薬剤処理したＭＤＣＫ４８１胞対照培貢物の生存：＄１２７９４　＞１００　＞１００　＞１００　＞１００　９６　９３２８０１　９８　＞１００　１００　９１３　９２　９コ１ツバと１ノン　５６　５８　６３　．７８　８６　９４（薬ｌＦＩＩＭＢ胞毒性）。

表８ＭＴＴ検定によって決定される薬剤処理したＭＤＣＫ細胞対照培養物の生存率１コ３０２　１００　１００　１００　９９　９１　９４コ３０３　１００　１００　１００　９６　９３　８９３’３０４　１００　１００　１００　１００　９５　９１３コ０６　１００　１００　１００　１００　９８　９フココ０７　９５　１００　１００　１００　１００　ユ００ココＯＢ　ｇＢ　９７　９５　９６　９コ　９３コ３０９　９６　９３　９７　９４　９３　９６３コ１０　９６　９５　９２　９３　Ｂ８　９１３３１１　９０　Ｂ８　８９　９２　９２　９３３３１２　９５　９コ　９〕　９コ　９０　９４コ３１コ　９６　９７　９６　９６　９４　９２３コ１４　Ｂ９　９５　９８　９７　９４　９コ３３ユ５　８９　９５　９５　９６　９７　９３ココ１６　９０　９５　９３　９２　９１　８９ココ１７　９４　９２　９３　９１　９１　Ｂ９ココ１８　９コ　９７　９３　９コ　９０　９１ココ１９　９４　９９　９７　９９　９７　９７コ３２ユ　９Ｂ　９８　９９　９７　９９　９２ココ２２　９Ｅｌ　９９　１００　９９　９６　９１）３２］　１００　１００　１００　１００　９９　１００ム旦凹ムｎ１ｌＱＱ四ピ１シｌ四力一−シ四ムｕＬ１匹力ｕ−」胆ム壮（薬剤細胞毒性）。

したかって、これらの活性物質の３択性は、これらの検定によって実証されたよつら大きいことかある。

実施例５おいて、ウィルスは、完全な（Ｓ染）ピリオン中にパッケージングするための８種類の特有のウィルスＲＮ、Ａ（ｖＲＮＡ）断片それぞれから一つを選択する必要かある。ウィルスタンパク質によるｖ　Ｒ，Ｎ　Ａ断片の認識は、この過程の不１１大の成分である。ｖＲＮＡ断片の５′末端は、ウィルスの１棟類または複数棟類のタンパク質のための１個または複数個の結合部位として識別された。ｖＲＮＡ断片の５′末端でのりポヌクレオチド配列は一表９に示したように、８種類の断片全体と通して保存されている。

表９（示された配列はインフルエンザＡ／ＰＲ／８／３４型由来でｂつ。

最初の３０個のヌクレオチドご示す）ＳＥＧＩ　ＡＧＣにＡＡＡＧＣＡＧＧＴＣＡＡＴＴＡＴＡＴ’ｒＣＡＡＴＡＴＧＳＥＧ２　ＡＧＣＧｋＡ）、ＧＣＡＧＧＣｋｋＡＣＣＡＴＴＴＧｋＡＴＧＧＡＴＳＥＧ３　ＡＧＣＧＡＡＡＧＣＡＧＧＴＡＣＴＧＡＴＣＣＡＡＡＡＴＧＧＡＡＳＥＧ４　ＡＧＣＡＡＡＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＡＡＴＡＡＡＡＡＣＡＡＣＣＡＳＥＧ５　ＡＧＣＡＡＡＡＧＣＡＧＧＧＴＡＧＡＴＡＡＴＣＡＣＴＣＡＣＴＧＳＥＧ６　ｋＧＣＧｋＡＡＧＣＡＧＧＧＧＴＴＴＡＡＡＡＴＧｋＡＴＣＣｋＡＳＥＧ７　ＡＧＣＧＡＡＡＧＣＡＧＧＴｋＧＡＴＡＴＴＧＡＡＡＧＡＴＧＡＧＳＥＧ８　ＡＧＣＡＡＡＡＧＣＡＧＧＧＴＧＡＣＡＭＧＡＣＡＴＡＡＴＧＧ更に、これらの配列は、インフルエンザウィルスの種々の株の中で高度に保存されている。

これらの配列から分かるように、最初の１２塩基は８個の断片のそれぞれにおいて高度に保存されている。したかって、この保存された領域を標的とするオリゴヌクレオチド（…１えば、配列番号：３３）は有効であるべきである。

インフルエンザｖ　ＲＮ　Ａの５′末端の可能なＲＮ八へ次構造の分析は、タンパク質認識において重要な役割を果たすことかできる各断片の末端に強力な二次構造か存在することを示唆している。それぞれ本発明の譲受人に譲渡され且つ本明細書中に参考文献として包含されている１９９０年３月２１日出願の米国特許出願第４９７，０９０号明細書および１９９１年３月１９日出願のＰＣＴ特許第ＰＣＴ／ＵＳ９１１０１８２２号明細書に開示されたように、ある種のＲＮＡ５とタンパク質との相互作用は、ＲＮＡの少なくとも一部分を模擬しているオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体を用いることによって阻害することかできる。これは、前記のＲＮＡかＲＮＡ模擬によって利用することかできる強力な二次構造を有する場合に特に有効であると考えられる。遺伝子発現および疾患状態の持続は、このようなＲＮＡ−タンパク質相互作用を伴う干渉によって妨げることかできる０本発明を実施するために実際のＲＮＡ楕遣を知る必要はなく、特定のＲＮＡ配列がＲＮＡ結合性タンパク質によって認識されることおよびこの相互作用は重要な生物学的結果を有することを知る必要かあるたけである。

表１０に示したＲＮＡ模擬オリゴヌクレオチドは、実施例３に記載したように、均一の２′−〇−メチルまたは２′−Ｏ−メチルホスホロチオエート類似体として合成され且つ実施例４に記載したように抗ウィルス活性に関してスクリーンされる。

表１Ｏ配烈豊豆上３４　ＡＧＣＧＡＡＡＧＣＡＧＧＴＣＭ’ｒ’ｒＡＴＡＴｒＣＭＴＡＴＧコ５　ＡＧＣＧＡＡＡＧＣＡＧＧＣＡＡＡＣＣＡＴＴｒＧＡＡＴＧＧＡＴ４０　ＡＧＣにＡＡＡＧＣＡＧＧＴＡＧＡＴＡＴｒＧＡＡＡＧＡＴＧＡに４１　ＡＧＣＡＡＡＡＧＣＡＧＧＧＴＧＡＣＡＡＡＧＡＣＡＴＡＡＴＧＧ配列表〈１）一般情報：（ｉ）出願人：カラサート・レクス（Ｃｏｗｓｅｒｔ、Ｌｅｘ）　Ｍエラカー・デービｙド（Ｅｃｋｅｒ、Ｄａｖｉｄ）　Ｊ（ｉｔ）発明の名称：インフルエンザウィルスの阻害（ｆ　ｉ　ｉ）配列の数：４１（ｉｖ）宛先：（Ａ）住所：ウッドコック・ウオシュバーン・カーラ・マキーヴイツツ・アンド・ノリス（Ｗｏｏｄｃｏｃｋ　Ｗａｓｈｂｕｒｎ　ＫｕｒｔｚＭａｃｋｉｅｗｉｃｚ　＆　Ｎｏｒｒｉｓ）（Ｂ）地区：ワン・リバテイ・ブレイス（Ｏｎｅ　ＬｉｂｅｒｔｙＰｌａｃｅ）−４６１１２（Ｃ）本名：フィラデルフィア（Ｄ）州名：ペンシルバニア（Ｅ）国名：米国（Ｆ）郵便番号＋１９１０３（Ｖ）コンピューター読取り形式：（Ａ）中型：小型ディスク、３．５インチ、記憶装置１．４４Ｍｂ（Ｂ）コンピューター：ＩＢＭ　ＰＳ／２（Ｃ）操作システム：　ＰＣ−ＤＯ３（Ｄ）ソフトウェア：ワードパーフェクト（ＷＯＲＤＰＥＲＦＥＣＴ＞５．０（ｖｉ）現行出願資料：（Ａ）出願番号：ｎ／ａ（Ｂ）出願日二本明細書と共に（Ｃ）分類：（ｖｉｉｉ）弁理士／代理人情報：（Ａ）氏名：リカタ・ジエーン・マシー（Ｌｉｃａｔａ、ＪａｎｅＭａｓｓｅｙ）＜Ｂ）登録番号：　３２．２５７（Ｃ）照会／事件整理番号：ｌ５ＩＳ−０３５９（ｉｘ）通信悄＠：（Ａｌ電話：　（２１５）５６８−３１００（Ｂ）ノアクシ３１月２１５）５６８−３４３９］（２）配列番号用の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ、２０塩基対（８１種類：核酸（Ｃ）鎖：１本（Ｄ）トポロジー、線状（ｉ　ｉ）分子種類：ｆｌｉ！の核酸（ｉ　ｉ　Ｎ仮説：なしくｉｖ）アンチセンス：正（ｘｉ）配列種類：配列番号：１（２）配列番号、２の情報：＜ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ：２０塩基対（Ｂ）種類：核酸（Ｃｕｌｌ：１本（Ｄ）トポロジー二線状（ｉ　ｉ）分子種類＝ｆｌ！１の核酸（ｉｉｉ）仮説、なしくｉｖ）アンチセンス、正（ｘｉ）配列種類：配列番号：２（２）配列番号：３の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ：２０塩基対（Ｂ）種類：核酸（Ｃ）望：１本（Ｄ）トポロジー：線状（ｉ　ｉ）分子種類：池の核酸（ｉｉｉ）仮説：なしくｉｖ）アンチセンス：正＜ｘｉ）配列種類：配列番号＝３ＧＴＧＴＴＴＧＧＡＴ　ＣＣＡＴＴＡＴＧＴＣ２０（２）配列番号＝４の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａｌ長さ＝２０塩基対（Ｂ）種類：核酸（Ｃ）ｉｌｌ：１本（Ｄ）トポロジー：線状（ｉｆ）分子種類：他の核酸（ｉｆｆ）仮説：なしくｉｖ）アンチセンス：正（ｘｉ）配列種類：配列番号：４ＴＡＧＡＡＧＡＣＴＣＡＴＣＴＴＴＣＡＡＴ　２０（２ン配列番号＝５の情報：（ｉ）配列の特徴。

（Ａ）長さ：２０塩基対（Ｂ）種類：核酸（Ｃ）鎖：１本（Ｄ）トポロジー、線状（ｉｔ）分子種類：他の核酸（ｉｉＮ仮説：なしくｉｖ）アンチセンス：正（ｘｉ）配列種類：配列番号：５ＧＣＡＡＴＣＴＡＣＣＴＧＡＡＡＧＣＴＴＧ　２０（２）配列番号：６の情報：Ｎ）配列の特徴：（Ａ）長さ：２０塩基対（Ｂ）種類：核酸＜Ｃ＞鎖：１本（Ｄ）トポロジー：線状（目）分子種類：他の核酸（ｉｉｉ＞仮説；なしくｉｖ）アンチセンス；正（ｘｉ）配列種類：配列番号＝６ＡＧＡＧＡＡＣＧＴＡ　ＣＧＴＴＴＣＴＡＣＣ２０（２）配列番号、７の情報。

（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ、２０塩基対（Ｂ）種類：核酸（Ｃ）鎖：１本（Ｄ）トポロジー、線状（百）分子種？Ｊ：他の核酸（ｉｉｉ）仮説：なしくｉｖ）アンチセンス：正（ｘｌ）配列種＃：配列番号ニアＡＡＡＡＣＡＣＣＣＴ　ＴＧＴＴＴＣＴＡＣＴ　２０（２）配列番号、８の情報。

（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ：２ｏ塩基対（Ｂ）種ｗｉ：核酸（Ｃ）ｆＩ４：１本（Ｄ）トポロジー二線状（ｉｉ）分子種類：ｆ！！！の核酸（ｆｉｔ）仮説：なしくｉｖ）アンチセンス：正＜ｘｉ）配列種類：配列番号：８ＡＡＡＡＣＴＡＣＣＴ　ＴＧＴＴＴＣＴＡＣＴ　２０（２）配列番号：９の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ：２０塩基対（Ｂ）種類：核酸（Ｃ）鎖：１本（Ｄ）トポロジー二線状（ｉｆ）分子種類：ａの核酸（ｉｉｉ）仮説：なしくｉｖ）アンチセンス：正（ｘｉ）配列種類：配列番号：９ＧＧＧＡＡＡＣＣＡＡ　ＣＧＧＡＡＡＴＡＡＧ　２０（２）配列番号：１０の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ＝２０塩基対（Ｂ）種類：核酸（Ｃ）ｔ１本（Ｄ）トポロジー二線状（ｉｉ）分子穆頚：池の核酸（ｉ　ｉ　ｉ）仮説：な（２（ｉｖ）アンチセンス：正（ｘｉ）配列種類６配列番号、１０ＣＡ、ＡＣＣＡＡＡＡＡ　ＧＡＴＡＡＴＣＴＣＡ　２０（２）配列番号：１１の情報。

（ｉ）配列の特徴２（Ａ）長さ＝２０塩基対（Ｂ）種類：核酸（Ｃ）ｊｌｊ：１本（Ｄ）トポロジー　線状（目）分子種類：他の核酸（ｉ　ｉ　ｉ）仮説：なし７（ｉｖ）アンチセンス：正（ｘｉ）配列種類：配列番号：１１ＧＧＧＡＡＡＣＣＡＡ　ＣＧＧＡＡＡＴＡＡＧ　２゜（２）配列番号：１２の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ：２０塩基対（Ｂ）種類：核酸（Ｃ）鎖：１本（Ｄ）トポロジー、線状（ｉｔ）分子種類：ｆｌ！！の核酸（ｉ　ｉ　ｉ）仮説：なしくｉｖ）アンチセンス：正（ｘｉ）配列種類：配列番号：１２ＣＴＴＴＣＣＡＴＡＴ　ＴＧＡＡＴＡＴＡＡＴ　２０（２）配列番号：１３の情報＝（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ＝２０塩基対（Ｂ）種類：核酸（Ｃ）ｉｌｌ：１本（Ｄ）トポロジー：線状（ｉｉ）分子種類：池の核酸（ｔｉｔ）仮説ニな！７（ｉｖ）アンチセンス、正（ｘｉ）配列種類６配列番号：１３ＡＣＡＴＣＣＡＴＴＣＡＡＡＴＧＧＴＴＴＧ　２０（２）配列番号＝１４の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ＝２０＠基対（Ｂ）種類、核酸（Ｃ）鎖＝１本（Ｄ）トポロジー二線状＜ｉ　ｉ）分子種類：他の核酸（ｉｉｉ）仮説：なしくｉｖ）アンチセンス：正（ｘｉ）配列種類：配列番号：１４ＴＣＴＴＣＣＡＴＴＴ　ＴＧＧＡＴＣＡＧＴＡ　２０（２）配列番号：１５の情報：（ｉ）配列の特徴二（Ａ）長さ：２０塩基対（Ｂ）種類：核酸（Ｃ）鎖＝１本（Ｄ）トポロジー二線状（ｉｔ）分子種類：池の核酸（ｉｉｉ）仮説：なし（ｉｖ）アンチセンス：正＜ｘｆ）配列種類、配列番号：１５ＧＣＣＴＴＣＡＴＴＴ　ＴＧＧＴＴＧＴＴＴＴ　２０（２）配列番号＝１６の情報：（１）配列の特徴：（Ａ＞長さ＝２０塩基対（Ｂ）種類二様酸（Ｃ）饋：　１本（Ｄ）トポロジー二線状（ｉｉ）分子種Ｕ：ａの核酸（ｉｉｔ）仮説：なしくｉｖ）アンチセンス：正（ｘｉ）配列種類：配列番号：１６ＧＡＣＧＣＣＡＴＧＡ　ＴＴＴＴＧＡＴＧＴＣ２０（２）配列番号＝１７の悄ｖｉｉ：（ｉ）配列の特徴゛（Ａ）長さ＝２０塩基対（Ｂ）穐＃：Ｉ酸（Ｃ）鎖：１本（Ｄ）トポロジー、４Ｉ状（ｉｔ）分子種類＋ｆｌ！！の核酸（ｔｉｔ）仮説：なしくｉｖ）アンチセンス：正（ｘｉ）配列種類：配列番号：１７ＧＧＡＴＴＣＡＴＴＴ　ＴＡＡＡＣＣＣＣＴＧ　２０（２ン配列番号：１８の情報二（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ：２０塩基対（Ｂ）種類：核酸（Ｃ）鎖：１本（Ｄ）トポロジー：線状（ｉｆ）分子種類：他の核酸（ｆｉｔ）仮説：なしくｉｖ）アンチセンス：正＜ｘｉ）配列種類：配列番号＝１８ＡＧＡＣＴＣＡＴＣＴ　ＴＴＣＡＡＴＡＴＣＴ　２０〈２）配列番号：１９の情報：（１）配列の特徴：（Ａ）長さ：２０塩基対（Ｂ）種類：核酸（Ｃ）鎖：１本（Ｄ）トポロジー：線状（１１）分子種類：＠の核酸（ｉｆｆ）仮説：なしくｉｖ）アンチセンス：正（ｘｉ）配列種類：配列番号：１９ＧＡＴＡＧＡＧＡＧＡ　ＡＣＧＴＡＣＧＴＴＴ　２０（２）配列番号＝２０の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ：２０塩基対（Ｂ）種類：核酸（Ｃ）鎖：１本（Ｄ）トポロジー：＠状（ｉｆｆｆｆ分子種能の核酸（ｉ　ｉ　Ｎ仮説：なしくｉｖ）アンチセンス：正（ｘｉ）配列種類：配列番号：２゜ＴＣＴＧＡＴＡＧＧＣＣＴＧＣＡＡＡＴＴＴ　２０（２）配列番号：２１の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ：２０塩基対（Ｂ）種類二様酸（Ｃ）ａ：１本（Ｄ）トポロジー、＊状（ｉ　ｉ）分子種類：ｆＩ！１の核酸（ｆｉｔ）仮説：なしくｆｖ＞アンチセンス；正（ｘｉ）配列種類：配列番号：２１ＧＧＡＴＣＣＡＴＴＡ　ＴＧＴＣＴＴＴＧＴＣ２０（２）配列番号：２２の情報。

（ｉ）配列の特徴：＜Ａ）長さ：２０ｔ！ｉ基対（Ｂ）種間；核酸（Ｃ１ｇ：１本（Ｄ）トポロジー二線状（ｉｔ）分子種類：＠の核酸（ｉｆｆ）仮説：なしくｉｖ）アンチセンス：正（ｘｉ）配列種類：配列番号、２２ＣＡＴＧＴＣＧＧＴＴ　ＡＧＧＴＡＡＣＧＣＧ　２０（２）配列番号＝２３の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ＝２０塩基対＜８）種類：核酸（Ｃ）ｇ：１本（Ｄ）トポロジー二線状（ｉｉ）分子種類：池の核酸（ｉｉｉ）仮説：なしくｉｖ）アンチセンス：正（ｘｉ＞配列種類：配列番号、２３ＧＣＡＡＴＣＴＡＣＣＴＧＡＡＡＧＣＴＴＧ　２０〈２）配列番号、２４の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ：２０ｔ！Ａ基対（Ｂ）種類：核酸（Ｃ）鎖：１本（Ｄ）トポロジー、線状（ｉ　ｆ）分子種類：＠の核酸（ｉｉｉ）仮説、なしくｉｖ）アンチセンス、正（ｘｉ）配列種類：配列番号：２４ＡＧＣＡＧＴＡＴＧＴ　ＣＣＴＧＧＡＡＧＡＧ　２０（２）配列番号：２５の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ＝２０塩基対（Ｂ）［！類：核酸（Ｃ）鵬：１本（Ｄ）トポロジー：線状（ｉｉ）分子種類：ｆＩ！！の核酸（ｉｉｉ）仮説：なしくｉｖ）アンチセンス、正（ｘｉ）配列種禁、配列番号：２５ＡＡＡＡＣＧＡＣＣＴ　ＴＧＴＴＴＣＴＡＣＴ　２０（２）配列番号：２６の情報：＜ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ：２０塩基対（Ｂ）種類：核酸（Ｃ）鎖：１本（Ｄ）トポロジー二線状（ｉｆ＞分子種類：ｆｌ！！の核酸＜ｉ　ｉ　ｔ）仮説：なしくｉｖ）アンチセンス、正＜ｘｉ）配列稚ツ、配列番号：２６ＡＡＡＡＡＴＧＣＣＴ　ＴＧＴＴＣＣＴＡＣＴ　２０（２）配列番号＝２７の情報：（ｉ）配列の特徴。

（Ａ）長さ＝２０塩基対ｔＢ）ｓ類：核酸＜Ｃ＞饋：１本（Ｄ）トポロジー：線状（１１）分子種類：他の核酸（ｉｉｉ）仮説二なしくｉｖ）アンチ七ンスニ正（ｘｉ）配列種類：配列番号：２７、八、ＡＡＡＧＴＡＣＣＴ　’丁Ｇ　ＴＴＴＣＴＡＣＴ　２０（２）配列番号、２８の情報。

（ｉ）配列の特徴６（Ａン　長さ：２ｆ）塩基対（Ｂ）Ｉ類、核酸（Ｃ）鎖、１本（Ｄ）トポロジー二線状（ｌｉ）分子種頷：池の核酸（ｉｉｉ）仮説：なしくｉｖ）アンチセンス：正（ｘｉ）配列種類：配列番号＝２８ＡＡＡＡＣＡＣＣＣＴ　ＴＧＴＴＴＣＴＡＣＴ　２０（２）配列番号＝２９の情報：＜ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ：２０塩基対（Ｂ）種類：核酸（Ｃ）鎖、１本（Ｄ）トポロジー二線状（１口分子種類：ｆｔ！Ｈの核酸（ｉｉｉ）仮説：なしくｉｖ）アンチセンス：正（ｘｉ）配列種類：配列番号、２９ＡＡＡＡＴＡＣＣＣＴ　ＴＧＴＴＴＣＴＡＣＴ　２０（２）配列番号＝３０の情報：＜ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ＝２０塩基対（Ｂ）種類二核酸（Ｃ）預：１本（Ｄ）ｌヘボロジー：線状（ｉｔ）分子欅類：曲の核酸（ｉｆｉ）仮説：なしｆｉｖ）アンチセンス：正（ｘｉ）配列種類：配列ｉｆ号：３０ＡＡＡＡＡｃＴＣＣＴ　ＴＧＴＴＴＣＴＡＣＴ　２０（２）配！１１番号、３１の情報。

（ｉ）配列の特徴、（、八）長さ、；２０塩基材ｆＢ）種類、核酸（Ｃ）鎖：１本（Ｄ）１−ボロジー、線状（ｉｔ）分子種類、他の核酸（ｉｉｉ）仮説：なしくｉｖ）アンチセンス：正（ｘｉ）配列種類、配列番号二３１ＡＡＡ　ＡＣＴＡＣＣＴ　ＴＧＴＴＴＣＴ　ＡＣＴ　２０（２）配列番号：３２の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ＋長さ＝２０塩基対（Ｂ）種類：核酸（Ｃ）鎖：１本（Ｄ）トポロジー二線状（ｉｉ）分子！ｌｊ！；他の核酸（ｉｉｉ）仮説：なしくｉｖ）アンチセンスユニ（ｘｉ）配列種類二配列番号：３２ＡＡＡＡＣＡＣＣＣＴ　ＴＧＴＴＴＣＴＡＣＴ　２０（２ン配列番号：３３の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ＝１２塩基対（Ｂ）種讐：核酸（Ｃ）ＩＦ：１本（Ｄ）トポロジー、線状（ｉ　ｉ）分子種類；池の核酸（ｉｊｉ）仮説：なしくｉｖ）アンチセンス：否（ｘｉ）配列種類：配列番号、３３ＡＧＣＲＡＡＡＧＣＡ　ＧＧ　１．２（２）配列番号：３４の情報。

（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ：３０塩基対（Ｂ）種類：核酸（Ｃ）ｆｆｌ：１本（Ｄ）トポロジー、線状（ｉｆ）分子Ｎ類二他の核酸（ｉｉｉ）仮説：なしくｉｖ）アンチセンス：否（ｘｉ）配列種類：配列番号＝３４ＡＧＣＧＡＡＡＧＣＡ　ＧＧＴＣＡＡＴＴＡＴ　ＡＴＴＣＡＡＴＡＴＧ　３０（２）配列番号＝３５の情報。

（ｉ）配列の特徴：（Ａ＞長さ、３Ｑ塩基対ＣＢ１種類：核酸（Ｃ）鎖：１本（Ｄ）トポロジー：線状（ｉｔ）分子種類：＠の核酸（ｉｉｉ）仮説：なしく１ｖ）アンチセンス：否（ｘｉ＞配列種類；配列番号；３５ＡＧＣＧＡＡＡＧＣＡ　ＧＧＣＡＡＡＣＣＡＴ　ＴＴＧＡＡＴＧＧＡＴ　３０（２）配列番号：３６の情報：（ｉ）配列の特徴：＜ｋＩ長さ：３ＯＮ基対（Ｂ）種類：核酸（Ｃ）ＩＩ：１本（Ｄ）トポロジー：線状（ｉｆ）分子種類：他の核酸（ｉｉｉ）仮説：なしくｉｖ）アンチセンス：否（ｘｉ）配列種類：配列番号：３６ＡＧＣＧＡＡＡＧＣＡ　ＧＧＴＡＣＴＧＡＴＣＣＡＡＡＡＴＧＧＡＡ　３０（２）配列番号＝３７の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ：３０塩基対（Ｂ）種類、核酸（Ｃ＞！ＩＩ：１本（Ｄ）トポロジー二線状（ｉｆ）分子種類：ｆｌ！！の核酸（ｉ　ｉ　ｉ）仮説：なしくｉｖ）アンチセンス：否（ｘｉ）配列種類：配列番号＝３７ＡＧＣＡＡＡＡＧＣＡ　ＧＧＧＧＡＡＡＡＴＡ　ＡＡＡＡＣＡＡＣＣＡ　３０（２）配列番号：３８の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ：３０塩基対（Ｂ）種ｗＩ：核酸（Ｃ）ｆｉｔ：１本（Ｄ）トポロジー：線状（ｊ　ｉ）分子種類：他の核酸（ｔｉｔ）仮説、なしくｉｖ）アンチセンス：否（ｘｉ）配列種類：配列番号＝３８ＡＧＣＡＡＡＡＧＣＡ　ＧＧＧＴＡＧＡＴＡＡ　ＴＣＡＣＴＣＡＣＴＧ　３０（２）配列番号：３９の情報：（１）配列の特徴：（Ａ）長さ：３０塩基対（Ｂ）種類：核酸（Ｃ）鎖：１本（Ｄ）トポロジー：線状（ｉｆ）分子種類：他の核酸（ｉｉｉ）仮説：なしくｉｖ）アンチセンス：否（ｘｉ）配列種類：配列番号二３９ＡＧＣＧＡＡＡＧＣＡ　ＧＧＧＧＴＴＴＡＡＡ　ＡＴＧＡＡＴＣＣＡＡ　３０（２）配列番号：４０の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ：３０塩基対（Ｂ）種類：核酸（Ｃ）鎖：１本（Ｄ）トポロジー二線状（ｉｆ）分子種類：他の核酸（ｉｆｆ）仮説：なしくｉＶ）アンチセンス：否（ｘｉ）配列種類：配列番号＝４０ＡＧＣＧＡＡＡＧＣＡ　ＧＧＴＡＧＡＴＡＴＴ　ＧＡＡＡＧＡＴＧＡＧ　３０（２）配列番号＝４１の情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ＝３０塩基対（Ｂ）種顕、核酸（Ｃ）ｆｆ：１本（Ｄ）トポロジー二線状（ｉｆ）分子種類：他の核酸（ｉｉｊ）仮説：なしくｉｖ）アンチセンス：否（ｘｉ）配列種類：配列番号：４１ＡＧＣＡＡＡＡＧＣＡ　ＧＧＧＴＧＡＣＡＡＡ　ＧＡＣＡＴＡＡＴＧＧ　３０浄書（内容に変更なし）５１　ＧＴＪＣＣＯＪｋＧＣ，ＣＡＣＣ入入＾ＣＧＧＵ　ＣＵＩＪＡＬＩＧ入ＡＣＡＧ入υＧＧＡＡＡＣＬＪ　Ｇ入ＵにＧＧＧ入入Ｃ１０１ＧＣＣＡＧ入入υＧＣＡＡＣ１ｌＧ入入ＡυＣＡＧＡＧＣＡυＣＣＧ　ｔＪＣＧＧＧ入λＧ入ｔｊＧ＾υυＧ＾υＧＧＡ１５１　＾ＵｔＪＧＧＡＣＧ入ＵＵＣυ＾ＣＪＬυＣＣ入入入ｔｌＧｔｌＧｃ入ＣＣＧ入入Ｃυυ入入入ＣυＣ入ＧυＣ入υυ八２０１　υ ＧへＣ；ＧＧＧＣＧＧ　ＣＩＪＧＡＩＪＣＣＡＧＡ　ＡＣＡＧＣｔＪ′ｌＪ入ＡＣＡＡＬＩＡＧＡＧＡＧＡ　ＡＵＧＧＵＧＣｔＪbｔＪ２５１　ＱＩＧＱＴＵｔＪｔｌＧＡ　ＣにＡＧＡＧＧＡＧＣＡＡｔｌ入入ＡｔＪＡＵＣＵＧＧ入ＡＧＡＡＣＡ　ｔｌｃｃｃＡＧｃＧｃｃ３０１　ＧにＧＧＡＧにＡＵＣＣ’Ｕ入ＡＣＡＡＡＡＣＬＩＧＧＡＧＧＡＣＣＣＡＵＡＵＡＣＡＡＧＡ　ＧＡＧＩＪＡＣ八υＧＧ３５へ　人Ａ＾ＧＩＪＧＧＡＬＩＧ　ｋＧＧＧ入入ＣＬＪＣＧ　ＩＪＣＣσυυ入ｔｌＧＡ　ＣＡＡＡＧＡＡＧ入ＡＡＩＪ入ＡＧＧＣＧ入Ａ４０１　ＵＣｌＪＧＧＣにＣＣＡ　ＡＧＣＬＩ入Ａ［Ｊ入ＡＵ　ＧＧＵＧＡＬＩＧＡＩＪＧ　ＣＡＡＣＡＧＣ’ＵＧＧ　ＬＩＣ１ｌＧＡＣＩiＣＡＣ４５１ＡＬＩＣ入υＧＡＬＩＣ１ｌ　にＧＣＡＬｎＪＣＣ八Ａ　ＵｔＪＵＧへＡＵＧ入ＵＡＣ八ＡＣＡへ八ＣＣ入へ八ＧにへＣ入ＡＧＳｏｌ　＾ＧＣｔＪＣｔＴ υＧＬｒＵ　ＣＧｃＡＣｃＣｃＡＡＬＩＣＣＡＵＣＣＣＡＧ　ＣＡｔＪＧυｃｃ ’ｕｃｕ　υυＧＡＵＧＣＡＧＧ５５１　ＧＬｒｌＪＣＧＡＱＩＣｔｌ　ＣＣＣ ’１ＪＡＧＧＡＧＧ　ＵＣＵＣ；Ｃ＾ＧＣＣＧ　ＣＡＧＧＣＧＣＵＧＣ＾ＧｔＪＣ入ＡＡＧＣO ６０１　ＧＵＵＧＧＧＡＣ入入υＧＧＵＧＡＬＩＧＧＡ　Ｇｔ１１ＪＧλυ入ＡＧＧ　ＡｔＪＧ入υＯ入入ＡＣＧｔｌＧＣＧＡＵＣ入入６５１　υＧＡＵＣＧＧ入ＡＣＵＩＪＣυＧＧＡＧ入Ｇ　ＧＵＧＡＩ：ｉ入ＡＵＧＧ　ＧＣＧＧ入入入ＡＣ八ＡＧへ入ＡＵＧσＵυ７０１　ＡＬＩＧＡＧＡ（、ＡＡｔＪ　ＧＬＩＣＣ入ＡＣＡｔｊｔｌ　ＣＴＪＣ入入ＡＧＧ入Ａ　入ＡＩｊＵＩＪＣＡＡＡＣＡＧＣυ ＧＣＡbＡＡ７５１　λＧＡＧＣＡＡＩＪＧＡ　ＵＧＧＡＬＩＣＡＡＧＬＩ　ＧＡＧＡＧＡＡＡＧＣＣＧＧＡＡＣＣＣＡＧ　ＧＡ）ＩＡｔｌＧＣｔｌＧＡ８０１　ＧＡＵＣＧＡＡＧＡＵ　ＣＩＪＣＡＬＩＣＵＵｔＪＣｔＪＧＧｃＡｃＧＧＵｃ　ＵＧＣＡＣＵＣＡＵＡ　ｔＪＵＧＡＧＡＧＧＧＵ８５１　ＣＡＧＵＬＩＧＣ′ＩＪＣＡ　Ｃ入入ＡυＣυυＧＯＣＵＧＣＣＬＩＧＣＣ’Ｕ　ＧＵＧｔｌにυ入υＧＧ　ＡＣＣ１ｌＧＣＣＧＵ` 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υ＾ＣＬｊ　ＧＵｔＪυｃｖｕｃｖｕ　υ入υυＣＣＧＣＵhＪ４０１　ＡＧＡＣＣＧＣＧＧＩＪ　ＬＩＣＧＡＩＪＵＡＩＪＩＪＡ　ＣＣＡＣ１ｌＡＣυ入ＣＧυυＧυＣＧＡＣＣλＧＡＣυＧ入ＧυＧ４５１　ｕＡｃｔｌＡｃＩＪＡＧＡ　ＣＣＧＵＡＡＧＧＵυ入入ＡＣＬｒＵＡＣｔｌＡ　ＵＧＬＪＩＪＧＵＡυＧＧ　ｔｉｃυＣＣ１１Ｇυ■b ５０１ｔｌｃＧＡＧ入入ＣＡＡ　ＧＣにυｃｃｃｃｖυ入ＣＣＩＪＡＧＧＧＵＣＣ１ＪＡＣＡＣＧＡＧ＾入入Ｃ１ＪＡＣＧυＣＣ５５１ＣＡＡＧＣｖＧＡＧＡ　ＧＧＧＡＬＩＣＣ’ＵＣＣＡＧＡＣＣｌＪＣＧＧＣＧＬＩＣＣＧＣＧＡＣＧ　ＵＣＡＧＩＪＵＬＪＣＣυ６０１　ＣＡＡＣＣｃＩＪＧυυ入ＣＣＡＣｔＪＡＣＣＵ　Ｃ入ＡＣＬＩＡＵυＣＣυ入（？１ＪＡＣ，ＵυυＧＣ入ＣＣＣυＡＧυυ ６５１　ＡＱＩＡＧＣｃＵｖＧ　ＡＡＧＡＣＣυＣ１ＪＣＣＡＣｌｌＣｌＪＬＩＡＣＣＣＧＣＣｌＪｔＪＩＪＩＪＧＬＪ　ＬＩＣＣ１ＪＬ＋`ＣＧ入入７０１　ＵＡＣ’ＬＩＣＩＪσＵυ八ＣＡＣＧＬＪｔｌＧＵへＡ　ＧＡＧＬｒＬＴＩＪＣＣＩＪυＵυ入入入ＧＵυＵＧ　ＵＣＧＡＣＧＵＧ■■ ７５１　ＵＣＵＣＧＬＩ’ＵＡＣＬｊ　ＡＣＣｔｌＡＣＩＪＬＩＣＡ　ＣＩＪＣｌｌＣＵｔｊＵＣＧ　ＧＣＣＬＪＩＪＧＧＧＵＣＣＵｔｒＵ`ＣＧＡＣυ ８０１　ＣＬＩＡＧＣｌｌｔＪＣｌｌＡ　ＧへＧυＡＧＡＡＡＧ　ＡＣＣＧＩＪＧＣＣＡＧ　ＡＣＧｔｊＧＡＧＵＡＩＪ　ＡＡＣ１ｊＣｔＪbＣＣＡ８５１　ＧＵＣＡＡＣＧＡＧｔＪ　ＧυυυＡＧ入ＡＣＡ　ＧＡＣＧＧＡＣＧにＡ　ＣＡＣＡＣＡｔＪＡＣＣＬＩＧＧＡＣＣＧＣＡυ１０ｏ１　υＡＣυＱＪ’ ＵＡＧＧ　ｔＪｃＧｔＪＧＩｊＧＬｌＩＪｃ　ｔｉｃ入ＧυＣＧ入ＣＣ入Ｃ入ＣＣ１ｊ＾ＣＣＧ　υ入ＣＣυＵ入■fＡ１２５１　人ＣＧυＣＣＡにＵυυ＾ＧＬＩＣＡＣ入ｔＪＧ　ｔＪ［ｊＧＧＡｔＪＧｃ入λ入入ＧＡＣ入ＣＧυυｔＪｃＵυＵＧＧ入ＧＧ１３０１　ＧｔｌＡＡＡＣｌｌＧＬＩｔｌ　ｔｊＧＧＵｔＪＧＧυ八Ｇ　ＵＡＣＣＧＵへＧυ入ＡＧｔＪＧ＾ＣＣＣ１７υ＾ＣＧＬＩＣυＣbＣυ 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Claims

【特許請求の範囲】

１．インフルエンザウイルスリボ核酸（ＶＲＮＡ）断片１、２、３、４、５、６、７若しくは８または対応する（＋）リボ核酸の少なくとも一部分と特異的にハイブリッド形成しうるオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。
２．（−）ＲＮＡと特異的にハイブリッド形成しうる請求項１に記載のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。
３．（＋）ＲＮＡと特異的にハイブリッド形成しうる請求項１に記載のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。
４．ＲＮＡ二重らせんと特異的にハイブリッド形成することができ、三本鎖構造を形成する請求項１に記載のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。
５．転写開始部位、翻訳開始部位、５′非翻訳配列、３′非翻訳配列または前記断片のイントロン／エキソン結合部の少なくとも一部分と特異的にハイブリッド形成しうる請求項１に記載のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。
６．プライマー開始部位の少なくとも一部分と特異的にハイブリッド形成しうる請求項１に記載のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。
７．約３個〜約５０個のサブユニットを含む請求項１に記載のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。
８．約８個〜約２５個のサブユニットを含む請求項１に記載のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。
９．約１０個〜約２０個のサブユニットを含む請求項１に記載のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。
１０．薬学的に許容しうる担体中の請求項１に記載のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。
１１．オリゴヌクレオチドのヌクレオチド単位間の少なくとも若干の結合性基が硫黄含有種を含む請求項１に記載のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。
１２．オリゴヌクレオチドのヌクレオチド単位間の少なくとも若干の結合性基がホスホロチオエート残基を含む請求項１１に記載のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。
１３．配列、【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；または【配列があります】．の内の一つの少なくとも一部分を含むオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。
１４．配列、５′　　　　　　３′ 【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；の内の一つの少なくとも一部分を含むオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。
１５．薬学的に許容しうる担体中の請求項１３に記載のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。
１６．薬学的に許容しうる担体中の請求項１４に記載のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。
１７．オリゴヌクレオチドのヌクレオチド単位間の少なくとも若干の結合性基か硫黄含有種を含む請求項１３に記載のオリコヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。
１８．オリゴヌクレオチドのヌクレオチド単位間の少なくとも若干の結合性基がホスホロチオエート残基を含む請求項１７に記載のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。
１９．オリゴヌクレオチドのヌクレオチド単位間の少なくとも若干の結合性基が硫黄含有種を含む請求項１４に記載のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。
２０．オリゴヌクレオチドのヌクレオチド単位間の少なくとも若干の結合性基がホスホロチオエート残基を含む請求項１９に記載のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。
２１．インフルエンザウイルスに感染していると疑われる動物を治療する方法であって、インフルエンザウイルスリボ核酸（ＶＲＮＡ）断片１、２、３、４、５、６、７若しくは８または対応する（−）リボ核酸の少なくとも一部分と特異的にハイブリッド形成しうるオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体の治療的有効量を該動物に投与することを含む上記の方法。
２２．前記のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体が（−）ＲＮＡと特異的にハイブリッド形成しうる請求項２１に記載の方法。
２３．前記のオリゴヌクレオチドまたはオリコヌクレオチド類似体が（＋）ＲＮＡと特異的にハイブリッド形成しうる請求項２１に記載の方法。
２４．前記のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体がＲＮＡ二重らせんと特異的にハイブリッド形成することができ、三本鎖構造を形成する請求項２１に記載の方法。
２５．前記のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体が、転写開始部位、翻訳開始部位、５′非翻訳配列、３′非翻訳配列または前記断片のイントロン／エキソン結合部の少なくとも一部分と特異的にハイブリッド形成しうる請求項２１に記載の方法。
２６．前記のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体がプライマー開始部位の少なくとも一部分と特異的にハイブリッド形成しうる請求項２１に記載の方法。
２７．前記のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体が約３個〜約５０個のサブユニットを含む請求項２１に記載の方法。
２８．前記のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体が約８個〜約２５個のサブユニットを含む請求項２１に記載の方法。
２９．前記のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体が約１０個〜約２０個のサブユニットを含む請求項２１に記載の方法。
３０．前記のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体が薬学的に許容しうる担体中にある請求項２１に記載の方法。
３１．オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体のヌクレオチド単位間の少なくとも若干の結合性基か硫黄含有種を含む請求項２１に記載の方法。
３２．オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体のヌクレオチド単位間の少なくとも若干の結合性基がホスホロチオエート残基を含む請求項２１に記載の方法。
３３．インフルエンザウイルスに感染していると疑われる動物を治療する方法であって、配列、【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；または【配列があります】．の内の一つの少なくとも一部分を含むオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体の有効量を該動物に投与することを含む上記の方法。
３４．インフルエンザウイハスに感染していると疑われる動物を治療する方法であって、配列、３′　　　　　　５′ 【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；【配列があります】；または【配列があります】．の内の一つの少なくとも一部分を含むオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体の有効量を該動物に投与することを含む上記の方法。
３５．前記のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体が薬学的に許容しうる担体中にある請求項３３に記載の方法。
３６．前記のオリゴヌクレオチドまたはオリコヌクレオチド類似体か薬学的に許容しうる担体中にある請求項３４に記載の方法。
３７．オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体のヌクレオチド単位間の少なくとも若干の結合性基が硫黄含有種を含む請求項３３に記載の方法。
３８．オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体のヌクレオチド単位間の少なくとも若干の結合性基がホスホロチオエート残基を含む請求項３７に記載の方法。
３９．オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体のヌクレオチド単位間の少なくとも若干の結合性基が硫黄含有種を含む請求項３４に記載の方法。
４０．オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体のヌクレオチド単位間の少なくとも若干の結合性基がホスホロチオエート残基を含む請求項３９に記載の方法。
４１．表３、表５または表１０に定義した配列の内の一つの少なくとも一部分を含むオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。
４２．配列番号：３３の少なくとも一部分を含むオリコヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。
４３．薬学的に許容しうる但体中の請求項４１または４２に記載のオリゴヌクレオチド。
４４．オリゴヌクレオチドめヌクレオチド単位間の少なくとも若干の結合性基が硫黄含有種を含む請求項４１または４２に記載のオリゴヌクレオチド。
４５．オリゴヌクレオチドのヌクレオチド単位間の少なくとも若干の結合性基がホスホロチオエート残基を含む請求項４１または４２に記載のオリゴヌクレオチド。
４６．インフルエンザウイルスに感染していると疑われる動物を治療する方法であって、表３、表５または表１０に定義した配列の内の一つの少なくとも一部分を含むオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体の治療的有効量を該動物に投与することを含む上記の方法。
４７．インフルエンザウイルスに感染していると疑われる動物を治療する方法であって、配列番号：３３の少なくとも一部分を含むオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体の治療的有効量を該動物に投与することを含む上記の方法。
４８．前記のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体が薬学的に許容しうる担体中にある請求項４６または４７に記載の方法。
４９．オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体のヌクレオチド単位間の少なくとも若干の結合性基が硫黄含有種を含む請求項４６または４７に記載の方法。
５０．オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体のヌクレオチド単位間の少なくとも若干の結合性基がホスホロチオエート残基を含む請求項４６または４７に記載の方法。