JPS6144826A - γ型インタ−フエロン組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、ヒトγ型インターフェロン組成物に関する。

町米−９模−１ ヒトインターフェロンは現在、α型、β型およびγ型の
３種類に分類されている。α型およびβ型インターフェ
ロンは比較的安定で、主として非経１−．１投、ｌｊ剤
の形態で臨床に供せられ、組織的臨床研究ら進んでいる
。一方、γ型インターフェロン（ＩＦＮ−γと略称する
ことがある）は極めて不安定で、水溶液の保存、凍結あ
るいは凍結乾燥の操作中において、容易にその活性を減
し、また凍結乾燥品を再溶解しノこ液に濁りを認める等
の問題点を何し、臨床」１使用するに値する安定な組成
物を得ることを、極めて困難にしている。その為、イン
ターツボロンの中でも昔しく強い抗ウィルス作用や抗腫
鳴作用［ザルヒンら、ツヤ−ナル　オブナノヨナル　ギ
ャノザ　　インスチチ、−ト、第５５巻、　ｌ　２　：
’、　：（頁（１９７５）コを何し、医薬として最も期
待の大きい口”　Ｎ−７の臨床応用への大きなＩＩＪ５
げとなっている。

ところで、製剤に供せられるインターフ１ロンの原体は
通常、粗インターフエ〔１ンから各種のクロマトグラフ
ィー等を駆使した分離・精製工程を経て高純度のものと
して得られろ。本分離・精製工程では、種々の無機、有
機化合物が使用され、例えばｐＨおよびイオン強度の調
整に用いられた無機イオンも精製インターフェロン水溶
液中に存在するが、該無機イオン（無機塩）は製剤化し
た場合にも、安定化剤等として有利に作用すると煮えら
れていた。

たとえば、糖鎖を持たないβ型インターフェロンにおい
ては、無機塩を添加することにより安定化されるとの知
見が開示されている（特開昭５９−２５３６４号公報）
。

発明が解決しようとする問題点 本発明晋らはかかる技術背景下、無機塩の濃度を低下せ
しめたＩＦＮ−γ水溶液を用いて製剤化するとき外にも
、凍結および凍結乾燥の操作において、従来の無機塩含
有ＩＦＮ−γ水溶液の」−記操作におけるよりも、一層
ＩＦＮ−γ活性の低下が少なく、また得られた組成物を
再溶解した液に副りを認めることのない安定なＩＦＮ−
γ組成物か得られることを見い出し、さらに研究を重ね
本発明を完成した。

問題を解決するための手段 木２発明は、実質的に無機塩が存在せず、アミノ酸か共
（７−する条件下に凍結もしくは凍結乾燥したヒトγ型
インターフェロン組成物を提供するものである。

本発明に用いられるＩＦＮ−γは、ヒト山来のらのであ
れば天然の、あるいは遺伝子組み換え技術で得られろい
ずれのＩＦＮ−γでもよい。とりわ（Ｊ遺伝子組み替え
技術で得られるヒトＩ　ＦＮ−γ（ｒｌＦＮ−γ）が有
利に使用される。

より具体的には、上記ｒｌ　ＦＮ−γは、第１図で例示
される１４６個のアミノ酸からなるポリペプチドやその
ポリペプチドの種々のフラグメントを包含する。種々の
フラグメントとしては、例えば」−記ボリベブチドのＮ
末端部分の４個以下のアミノ酸か欠落したＮ末端部欠落
スピーシーズや上記ポリペプチドもしくはＮ末端欠落ス
ピーシーズの第１３１番アミノ酸残基以降の部位で切断
されたＣ末端部欠落スピ−ンーズなどが挙げられる。

さらに上記ｒｌ　ＦＮ−γは上記ポリペプチドのシステ
ィン残基がセリンもしくはスレオニンに置換されたもの
も包含する。

上記様々のフラグメントの中では、第１図で示される１
４６個のアミノ酸からなるポリペプチドのＮ末端部分の
４個以下のアミノ酸が欠落したＮ末端部欠落スビ−ンー
ズまたは当該Ｎ末端部欠落スピーシーズのＣ末端部分が
切断されたものが好ましい。

とりわけ本発明のヒトＩＦＮ−γとしては第１図で示さ
れる１４６個のアミノ酸からなるポリペ１１”Ｎ−γ］
が好ましい。

また遺伝子組み換え技術で得られるヒトＩＦＮ−γを高
濃度に含有する水溶液が有利に使用されろ。

ヒトＩＦＮ−７の非活性は、１ｘ１０５〜ｌ×１０’国
際単位／ｍｇ　ｆ：Ｉ　Ｕ／ｍｇ）であることが好まし
く、■ＦＮ−γ水溶液としては、ｌＸｌ０’〜ｌ　ｘ　
ｌ　Ｏ′Ｉ　Ｕ／ｍｌ、とりわけｌＸｌ０’　〜ｌＸｌ
０”ＩＵ／ｍｌの活性を有するものが好ましい。

１−記ＩＦＮ−γ水溶液として実質的に無機塩を含有し
ないものが用いられるが、ここで無機塩の濃度は０．１
Ｍ以下であればよく、０．０５Ｍ以下、とりわけＩｍＭ
以下であることが好ましい。また無機イオン強度として
は、無機イオンから計算されろイオン強度が０１以下で
あればよく、００５以下、とり４つ＋１０．００１以下
であることが好ましい。さらに凍結乾燥組成物において
は、その全重量に対し、無機塩か３０％以下であればよ
＜１５％以下、とりわけ０３％以下であることが好まし
い。

実質的に無機塩を含まないＩＦＮ−γ水溶液は、たとえ
はＩＦＮ−γの精製工程とりわけその最終−１程のり［
Ｊマドグラフィー操作で用いる緩衝液として無機塩非含
有緩衝液を用いろことにより、あるいは精製されたＩＦ
Ｎ−γ水溶液から無機塩を除去することにより製造する
ことができる。

アミノ酸としては、グリシン、α−アラニン、β−アラ
ニン、ロイノン、グルタミン酸、アスパラギン酸なとモ
ノアミノ脂肪族アミノ酸が好ましく、とりわけグリシン
が好ましい。またこれらの生理学的に許容される塩もし
くは誘導体でもよい。これらアミノ酸は１種または２種
以上使用することができ、使用するアミノ酸は市販のも
のを使用できろが、本組成物を臨床応用する為には、非
経口投与に用いられる程度の品質のらのが好ましい。

アミノ酸はそれらの全量として、ＩＦＮ−γ水溶液１ｍ
ｌ当り１ｍｇ以上、好ましくは５−５０ｍｇ配合するこ
とが好ましい。

また本発明の組成物は、Ｉ　ＦＮ−γがノステイン残基
を有する場合還元性硫黄化合物を共存せしめてもよい。

該還元性硫黄化合物として、ゲルタデオン（還元型）、
チオクト酸、チオジグリコール。

チオエタノールアミン、モノチオグリセロール、ジヂオ
スレイトールおよび炭素数１〜７のチオアルカン酸か挙
げられるがとりわけ、グルタチオン（還元型）が好まし
い。還元性硫黄化合物を共存せしめる場合、ＩＦＮ−γ
水溶液１ｍｌ当り還元性硫黄化合物０．１ｍｇ以上、と
りわけ０．５〜ｌｏｍｇが好ましい。

更に他の安定化剤としてヒト血清アルブミン（Ｈ９Ａ）
または（および）糖類を加えることができる。

ＩＩＳΔとしては、いかなるものでもよいが、本組成物
を臨床応用ずろためには、非経口投与に用いる程度の品
質のものが好ましい。例えば、健康人血漿を原料として
Ｃｏｈｎのエタノール分画第６法によって、分画精製し
たもの［ジャーナル　オブアメリカン　ケミカル　ソザ
イエティ、第６８巻、４５Ｌ−４７５頁（＋９４６）コ
が用いられる。また！−Ｉ　Ｓ　Ａは安定剤としてアセ
ヂルトリプトファンナトリウノ・や、カプリル酸ナトリ
ウムを含有するものであ−）でもよい。

ＨＳΔはＩＦＮ−γ水溶液に対し水溶液１１ｎｌ当り１
ｍｇ以−１−１とりわｒ）２ｍｇ−２０ｍｇ含有させる
ことが好ましい。

本発明の組成物がＨ８Ａを含有する場合においては、溶
液状態でｐｌ（４，０〜５０または７５〜８５を示すよ
うに調整することが好ましい。より詳しくは、上記アミ
ノ酸類が中性アミノ酸類である場合は、ｐｉ−１４，０
〜５０に、酸性アミノ酸類である場合はｐＨ７５〜８５
に調整することが好ましい。

糖類としては、例えばデキストラン、ヒドロキシエチル
澱粉のような多糖類、ノヨ糖、マルトースおよび乳糖の
ような三糖類およびブドウ糖、果糖、マンノースおよび
ガラクトースのような単糖類から選ばれた１種または２
種以上の物質が挙げられる。

上記デキストランおよびヒドロキシエチル澱粉に関し、
これらは市販のものを使用できるが、本組成物を臨床応
用するためには、代用血漿として非経口投与に用いられ
る程度の品質のものが好ましい。デキストランは、平均
分子ｆｆ１１万〜１０万、とりわけ４万〜７万のものか
、ヒト〔ノキノエチル澱粉は、平均分子量１万〜２０万
、とりわけ２万〜６万または２０万のらのが有利に使用
される。

上記した糖類を加える場合は、ＴＦＮ−γ水溶液１ｍｌ
当り１ｍｇ以上、好ましくは３　ｍｇ〜５０　ｍｇ含有
さ且ることか好ましい。

本組成物は、更に浸透圧の」］整剤としての前記糖類ま
たは（および）アミノ酸類等を含有していてしよいか、
塩化ナトリウムのような無機塩を添加することは、反っ
て組成物の品質を劣化させるので、好ましくない。」−
記の好ましい浸透圧の調整剤は該組成物に予め加えてお
くか、凍結乾燥品を再溶解する溶媒中に加えてもよい。

本発明の凍結および凍結乾燥したヒトＩ　ＦＮ−γ組成
物は、例えば以下の方法により製造ずろことかできろ。

実質的に無機塩か存在しないヒトＩＦＮ−γ１ｘ１０２
−１×ＩＯ７１Ｕ／ｍｌ含有水溶液に、アミノ酸を１ｍ
ｇ／ｍｌ以」−１好ましくは５−５０ｍｇ／＋ｈｌの濃
度になるように加える。なお該ＩＦＮ−γ含打水溶液に
は、その製造過程において上記アミノ酸を添加すること
かでき、このアミノ酸をら含有するＩＦＮ−γ水溶液を
用いる場合は、そのまま、または必要により上記アミノ
酸の濃度までアミノ酸を追加して以下の工程に付すこと
ができる。

更に上記したＨ　Ｓ　Ａや糖類なとも合せて加えること
かできる。

上記ＪＰＮ−７水溶液にはＯ，１ｍｇ／ｍ１以上、好ま
しくは０５〜１０ｍｇ／ｍｌの還元性硫黄化合物や微量
の界面活性剤を含有していてもよく、また上記安定剤と
同様、これらを新たに加えろこともてきる。

また所望によりｐＨ調整を行う場合は、鉱酸（塩酸、硫
酸なと）または（および）無機塩基（水酸化ナトリウム
、炭酸ナトリウムなど）水溶液を加え所定のｐｔ−ｒに
調整する。

本発明の凍結したヒトＩＦＮ−γ組成物は、例えば上記
水溶液を通常−８０°〜−３０℃で凍結することにより
製造できる。該凍結組成物は一８０°〜−１０°Ｃで保
管ずろことが好ましい。

本発明の凍結乾燥したヒ）　］　Ｆ　Ｎ　　γ組成物は
、例えは上記凍結組成物を常法により減圧乾燥するか上
記水溶液または上記凍結組成物の融解により得られる水
溶液を、所望により小分けし、上記同様凍結した後、常
法により減圧乾燥することにより製造することができる
。

注射用製剤としての本発明の凍結乾燥したヒトＩ　ＦＮ
−−γ組成物を製造する場合は、小分けする前に該組成
物水溶液あるいはその成分をそれぞれ除菌ろ過等により
精製し、無菌操作によりバイアル瓶等に分注小分けした
後上記凍結乾燥処理に付すことが好ましい。

本発明の凍結もしくは凍結乾燥したヒトＩＦＮ−γ組成
物は、その凍結あるいは凍結乾燥操作お、及び保存中の
ＴＦＮ−γ活性や品質の低下が極めて少なくまたその再
溶解時に濁りが生じないため何用である。また凍結乾燥
した組成物は、安定化されたヒ１ｉＦＮ−γの粉末とし
て得られとりわ（」非経Ｌ」投ＬＪ製剤として有利に用
いることができる。この場合さらに）（ＳＡを加えた組
成物は、器壁への付着が少なく有利に用いることができ
る。

本発明の凍結乾燥したヒトＩＦＮ−γ組成物を注射用製
剤として用いる場合は、通常用時、凍結乾燥組成物をバ
イアル当り１〜１００ｍ１の注射用蒸留水またはブドウ
糖注射液等に溶解し、溶液の浸透圧が生理的に許容され
る範囲内て使用する。

また適当な担体、賦形剤、希釈剤を用いて眼、耳、鼻内
投与用の剤形ど°して用いることができる。

本発明の凍結したもしくは凍結乾燥したヒトＩＦＮ−γ
組成物は、低毒性で、公知のヒトＩＦＮ−γと同様の目
的に同様の用法により使用することができる。

本願萌細書中、ＩＦＮ−γの活性（抗ウィルス活性）と
して国際単位（ＩＵ）は以下により求めた。

単位（ユニット）の確定した国際標準ｒＦＮ−γと目的
とする資料をヒト羊膜由来Ｆ■７細胞株に対するシンド
ビス　ウィルス（Ｓ　１ｎｄｂｉｓ　　Ｖ　１ｒｕｓ）
の細胞変性効果阻止試験を用いて測定し、その比率から
力価を算出して求めた。

なお溶液中の蛋白量は、Ｅ：２８０ｎｍ＝１．Ｏを１ｍ
ｇとして計算して求めた。

作用および実施例 以下に実施例および参考例により本発明を具体的に説明
するが、本発明はこれらに限定されるものてはない。

実施例で用いたＩＦＮ−γは、特に注意しない場合は、
参考例１に記載した方法で製造した実質的に無機塩を含
まない高濃度ヒトｒｌＦＮ−γ水溶液を使用した。なお
該ヒトｒｌＦＮ−γは第１図に示すアミノ酸配列を有す
る。

実施例１〜８に記載の組成物の製造においては、積極的
な叶１調整を行なっていないが、これら注射用蒸留水に
よる再溶解時のｐＨはｐＨ５，５〜７の範囲である。

実施例１ 除菌ろ過して得たグルタチオン（還元型）３ｍｇを含む
２．４Ｘ　ｌ　Ｏ°１０／ｍｌのヒトＩＦＮ−ｙ水溶液
１ｍｌにクリシン１５ｍｇを含有する除菌ろ過した水溶
液０５ｍ１を加え、バイアル瓶中で凍結乾燥を行った。

凍結乾燥品は注射用蒸留水１ｍｌで再溶解して、溶液の
溶状の肉眼観察とｒＦＮ−γの力価測定を行−）た。そ
の結果は第１表に示す。

実施例２ 実施例１において、グリシン１５ｍｇと共にヒドロキシ
エチル澱粉（平均分子量２０万）３７．５ｍｇを配合し
た以外は実施例１と同様に行った。その結果は第１表に
示す。

実施例３ 実施例ｉにおいて、グリシンを３０ｍｇに増量し、更に
グルタミン酸ナトリウム７　、５ｍｇを配合した以外は
実施例１七同様に行った。その結果は第１表に示す。

実施例４ 除菌ろ過して得たグルタチオン（還元型）３ｍｇを含む
３．７ｘ　ｌ　Ｏ”ｌ　Ｕ／ｍｌのヒトＩＦＮ−７水溶
液１ｍｌにグリシン３０ｍｇを含有する除菌ろ過した水
溶液０．５ｍｌを加え、バイアル瓶中で凍結乾燥を行っ
た。凍結乾燥品は注射用蒸留水１ｍｌで再溶解して、溶
液の溶状の肉眼観察とＩＦＮ−γの力価測定を行った。

対象としてグリシンを配合せずに、除菌ろ過してゲルタ
デオン（還元型）３ＩＩ１ｇを含むヒトｌ　ＦＮ−γ水
溶液１ｍｌをバイアル瓶中で凍結乾燥を行い、同様にＩ
ＦＮ−γの力価を測定した。その結果は第１表に示す。

第　　１　　表 ８凍結乾燥前の溶液に対する凍結乾燥品の力価残存率 実施例５ 除菌ろ過して得たグルタチオン（還元型）３ｍｇを含む
４．６ｘ　］　Ｏ°ＴＵ／ｍｌのヒトＴＦＮ−７水溶液
１ｍｌにグリシン３０ｍｇを含有する除菌ろ過した水溶
液０５ｍ１を加え、−３０℃に１週間凍結保存しノコ後
、ＩＦＮ−γの力価を測定した。該凍結品は凍結前の溶
液に対して９７％の力価を示した。

実施例６ 参考例２で得たｒｌＦＮ−γ食合溶液を除菌ろ過して得
たグルタチオン（還元型）３ｍｇ／ｍｌおよび塩化ナト
リウム２．５ｍｇ／ｍｌを含む４．６Ｘ１０”ｌＵ／ｍ
ｌのヒトＩＦＮ−γ水溶液０．２５ｍ１にグリシン１５
ｍｇを含有する除菌ろ過した水溶液０．７５ｍ１を加え
、バイアル瓶中で凍結乾燥を行った。凍結乾燥品は注射
用蒸留水１ｍｌで再溶解すると少量の微細不溶物が生し
、そのままこれのＩＦＮ−γの力価測定を行った。

その結果、凍結乾燥府のヒｌ−Ｉ　Ｆ　Ｎ−γ溶液の力
価に対して９８％であった３、 実施例７ 除菌ろ過して得たゲルタデオン（還元型）３ｍｇ／ｍｌ
を含む２．６ｘ　Ｉ　Ｏ６１Ｕ／ｍｌのヒトＩＦ′Ｎ−
γ水溶液０．５ｍｌにグリシンｌ０ｍｇおよびヒドロキ
ノエチル澱粉（平均分子量４万）１５ｍｇを含有する除
菌ろ過した水溶液０．２５ｍ１を加えバイアル瓶中で凍
結乾燥を行った。凍結乾燥品は注射用蒸留水０．５ｍｌ
で再溶解して溶液か澄明であることを確認し、Ｉ　ＦＮ
−一γの力価測定を行った。

その結果、凍結乾燥前のヒトＩＦＮ−γ溶液の力価に対
して９４％であった。また４０°ＣＩカ月保存後の保存
開始時の力価に対する残存率は１００％と安定であった
。

実施例８ 除菌ろ過して得たグルタチオン（還元型）　３ｍｇ／ｍ
１を含む２．６Ｘ　Ｉ　０６１　Ｕ　／ｍｌのヒト［Ｆ
Ｎｍ−水溶液０．５ｍｌにクルタミン酸ナトリウム１５
ｍｇおよびヒｌ−’　ｃｒギノＪ−、デル澱粉（平均分
子量４万）１５ｍｇを含（ｊ′ずろ除菌ろ過した水溶液
０．２５ｍ１を加えバイアル）ｌＬ中て凍１−３乾燥を
行った。凍結乾燥品は注射用７Ａ留水０５ｍ１で再溶解
して溶液が澄明であることを確認し、ＩＦＮ−γの力価
測定を行った。

その結果、凍結乾燥前のヒトＩＦＮ−γ溶液の力佃ｊに
対して１０２％であった。また４０’Ｃｌ力月保存後の
保存開始時のツ２価に対する残存率は１０６％と安定で
あった。

実施例９ ゲルタデオン（還元型）３ｍｇ／ｍｌを含む３８×１０
ＪＵ／ｍｌのヒｌ−１１−”　Ｎ−７水溶液０．１６ｍ
１　＋−ＩＳＡ５ｍｇ／ｍｌおよびグリシン２３ｍｇ／
ｍｌを含有し、Ｑ、ｌＮ　ＭＣＩでｐＨ４，５に調製し
た除菌ろ過した水溶液の各１ｍｌをバイアル瓶に分注し
、凍結乾燥を行った。凍結乾燥品は注射用蒸留水１ｍｌ
で再溶解して溶液の溶状の肉眼観察、ｐ　Ｉ−１の測定
およびＩＦＮ−γの力価測定を行った。その結果は第２
表に示す。

実施例１０ 実施例９において、Ｉ−Ｉ　ＳＡをｌ０ｍｇ／ｍｌに増
量した以外は実施例９と同様に行った。その結果は第２
表に示す。

実施例１１ 実施例１０において、ＨＳ　Ａを２０ｍｇ／ｍｌに増量
した以外は実施例９と同様に行−）た。その結果は第２
表に示す。

実施例１２ 実施例９において、更にヒドロキノエチル澱粉（平均分
子量４万）を５ｍｇ／ｍｌになるように加えた以外（Ｊ
実施例９と同様に行った。その結果は第２表に示す。

実施例１３ 実施例１０においてグリシンのかわりにグルタミン酸ナ
トリウムを　２７ｍｇ／ｍｌになるように加えＯ，ｌＮ
　ＮａＯＨ水溶液でｐＨ７，８に調整した以外は実施例
１０と同様に行った。その結果は第２表に示す。

第　　２　　表 ８　凍結乾燥前の溶液に対する凍結乾燥品の力価残存率 参考例３〜５で得た実質的に無機塩を含まない高濃度ｒ
ｌＦＮ−γ水溶液を用いても上記実施例とドｉ］様の結
果が得られる。

実施例１４ 参考例６に記載の方法で得た２、５Ｘ　Ｉ　０１ｌｌ　
Ｕｌｏ、２５ｍＬ　ＨＳ　Ａ　５　ｍｇ／　ｍｌおよび
グリシン２３ｍｇ／ｍｌを含有し、Ｏ，ｌＮ　　ＨＣＩ
でｐｌ−１４，５に調整した除菌ろ過した水溶液の各１
ｍｌをバイアル瓶に分注し、凍結乾燥を行った。凍結乾
燥品は注射用蒸留水１ｍ、１で再溶解した。溶液の溶状
は澄明で、ｐＨ４５であった。また凍結乾燥する前の水
溶液の力価に対する残存率は９６％であった。

実施例１５ 参考例６に記載の方法で得た２、５ｘ　ｌ　Ｏ’［Ｕｌ
ｏ、２５ｍ１、ヒドロキンエヂル澱粉（平均分子量４万
）を１５ｍｇ／ｍｌおよびグリシン２３ｍｇ／ｍｌを含
有するように調整された除菌ろ過した水溶液の各ｌ−を
バイアル瓶に分注し、凍結乾燥を行った、実施例１４と
同様に再溶解したときの溶液の溶状は澄明でｐｌ−１６
，５であった。また凍結乾燥する前の水溶液の力価に対
する残存率は１０１％であっノこ。

参考例Ｉ　実質的に無機塩を含まない高濃度ｒｌＦＮ−
γ水溶液の製造 ■ （１）ＥＰＣ００Ｂ９　６７９号公開公報実施例８の記
載に準じ発現用ヒトＩＦＮ−γ遺伝子を有する菌株ＲＲ
Ｉ（ｐＲＫ２４８ｃｌｔｓ、　　ｐＲＣ２３１／ＩＰ＋
−９００）を培養してえた凍結菌体１０００ｇに７Ｍ塩
酸グアニジンおよび２ｍＭフェニルメヂメチルポニルフ
ルオライドを含むｌｏｏｍＭ　ｌ−リス塩酸緩衝液（ｐ
ｌ−１７，０）を３０００ｍｌ加え、４°Ｃで１ｌＩＪ
ｉ間攪拌したのち遠心分離機（１７，０００ｒｐｍ／３
０分）に付し、澄明な上清液をえた。この上清液を１３
７ｍＭ塩化ナトリウム、２７ｍＭ塩化カリウム、８ｍＭ
リン酸二ナトリウムおよび１４７ｍＭリン酸カリウムか
ら成る緩衝液（以下ＰＢＳと略す）で７０倍に希釈し、
生じてくる沈澱物をシャープレス遠心分離機（Ｉ　Ｏ，
００Ｏｒｐｍ）に付して除去した。次いてえられた上清
液２２０ρをペリコン（ミリポア社製９分画分子量　１
０，０００）で１５ｇにまで濃縮した。ごの濃縮液を４
℃で一夜放置し、牛しノー沈澱物をさらにンヤープレス
遠心分離機にかけて除去した。この上清液を予め充填し
た５Ｘ３０ｃｍの抗体カラム［Ａｂ（Ｍｏ・７２−１１
．１）；ＥＰＣＯ１０３８９８号公開公報実施例１２参
照］に流速１．０００ｍｌ／時間で負荷したのち、ＰＢ
Ｓの２，５００ｍ１，１Ｍ塩化ナトリウムおよび０．１
％ツイーン２０を含んだ１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐｔ−
ｒ７．ｏ）の５，０００ｍ１．Ｐｔ３Ｓの２，５００ｍ
１および０．５Ｍ塩酸グアニジンを含んた２０ｍＭリン
酸緩衝液（１）Ｈ７，０）の２．５００ｍ１の各洗浄液
を遂次抗体カラムを通過させたのち、２Ｍ塩酸グアニジ
ンを含む２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＬＩ７．０）で溶出
し、抗ウィルス活性を有ずろ溶出画分５００ｍ１を集め
た。

（ＩＩ）　　参考例１　（１）の方法で得た溶出画分４
２０ｍ１に還元型グルタチオンを１０ｍＭ、！添加した
。

このヒトＩＦＮ−γ水溶液の４２０ｍ１を予め１ｍＭエ
チレンジアミン四酢酸塩、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、
１０ｍＭ還元型グルタチオンおよび２Ｍ塩酸グアニジン
を含んだ２５１Ｍ酢酸緩衝液（ｐｉ−１６０）で平衡化
したセファクリールＳ−２００（ファルマンア社Ｉ！り
のカラム（９ｘ　ｌ　ＯＯｃｍ）に負荷し、同一緩衝液
で溶出し、モノマー溶出画分４５０ｍ１を集めた。本操
作により比活性３．４Ｘ　１０’Ｉ　ＴＪ７ｍｇタン白
のＩ　Ｆ　Ｎ　−７（０，４１０ｍｇ／ｍｌ）を得た。

（［１１）　　参考例１（■）でえたヒトＩＦＮ−γ（
モノマー）溶出画分４５０ｍ１に１０ｍＭ還元型グルタ
チオン、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、０．５Ｍ塩塩酸グ
アノノンよび０．０１％ツイーン２０を含む２５ｍＭ酢
酸緩衝液（ｐｌ（６，０）の希釈液３，２４０ｍ１を添
加、混合し、タン白含量０．０５ｍｇ／ｍｌの低濃度溶
液を調整した。この溶液を予め、ｌ０ｍＭ還元型ゲルタ
デオン、１５０ｍＭ塩化ナトリウムおよび０．０１％ツ
イーン２０を含む２５ｍＭ酢酸緩衝液（ｐｌ−ｒ６．０
）で≦＋１衡化したセファデックスＧ−２５のカラム（
１４Ｘ１００ｃｍ）に負荷し、同一緩衝液でケルろ過を
行い、塩酸グアニジノを除去したヒトＩ　ＦＮ−γの溶
出画分３　、　Ｉ　８０　ｍｌ（１５５，８ｍｇ）をえ
た。ごの溶液のタン白含量はＯ，０Ｌ９ｎ＋ｇ／ｍｌで
あった。タン白回収率は８４４％であった。その比活性
は３５×１０°ＩＵ／ｍｇタン白であった。この溶液を
４℃て　４８時間熟成さｌｏたのち、ダイアワｌニア−
ＰＭ−Ｉ０．４３ｍｍφ（アミコン社製限外ろ過膜）を
用い、限外ろ過により１５９ｍ１まで濃縮した。この濃
縮液は澄明て、そのタン白金債は０．９２ｍｇ／ｍｌで
あった。タン白回収率は９３．９％（１４６，３ｍｇ）
であった。なお、ヒトＩＦＮ−γの比活性は６．８Ｘｌ
−０６ＩＵ／ｍｇタン白であった。

（ＩＶ）　　上記（ｌＩｌ）の方法で得たヒｌ−Ｉ　Ｆ
　Ｎ−γを高濃度に含有する水溶液（タン白金Ｔ−Ｔｆ
ｔｔ；０．９５２ｍｇ／ｍｌ）の３８ｍ１を予めｌ０ｍ
Ｍ還元型ゲルタデオンを含んだ２５ｍＭ酢酸緩衝液（ｐ
Ｔ−１６，０）で平衡化したセファデックスＧ−２５の
カラム（５，Ｏｘ　５０．Ｏｃｍ）に負荷し、同一緩衝
液で展開し、タン白含量０５８９ｍｇ／ｍｌの実質的に
無機塩を含まない（１０ｐｐｍ未満）澄明なＩＦＮ−γ
溶液５７ｍ１をえた。

このＩＦＮ−７の比活性は３．７ｘ　ｌ　０６１　Ｕ／
ｍｇ・タン白てあった。

参考例２　高濃度ｒｌ　ＦＮ−γ水溶液の製造参考例１
（ＩＩＩ）の方法で得たヒトＩＦＮ−γを高濃度に含有
する水溶液（タン白金＜Ｔ　ｂｔ　：０．９５２ｍｇ／
　ｍｌ）（１１）　３８　ｍ１４：予めｌ０ｍＭ還元型
グルタチオンおよび４０ｍＭ塩化すトリウムを含んた２
５ｍＭ酢酸緩衝液（ｐｌ（６，０）で平衡化したセファ
デックスＧ−２５＝ｈうＪ、（５，Ｏｘ　５０．　Ｏｃ
＋＋＋）に負荷し、同一緩衝液て展開し、タン白金ｆｆ
１０．６５８ｍｇ／ｍｌの塩化ナトリウムを０．０４Ｍ
含む澄明なＩＩｌ’Ｎ−γｉ’８液５２ｍ１をえノご１
１ ごのＩＦＮ−７の比活性は４．６Ｘ　Ｉ　Ｏ’　Ｉ　Ｕ
／ｍｇ・タン白であった。

参考例３　実質的にイｌｌ（機塩を含まない高濃度ｒＴ
１７Ｎ　　γ水溶液の製造 （１）特開昭５９−８０６４６号公報参考例２に記載の
形質転換体」、ノ上すヒア　コリ（Ｅｓｃｌ＋ｅｒｉｃ
ｈｉａ　　ｃｏｌ　１）２９４／ｐ＋−［ＩＴｔｒｐ　
　２１０１の培養、凍結菌体１ｋｇに７Ｍ塩塩酸グアニ
シン含む０．０５Ｍホウ酸緩衝ＩｔＪＬ（１１７，２）
を３．０００ｍ１加え、４°Ｃて１時間攪拌したのし、
遠心分離（１７，００Ｏｒｐｍ／　３０分）にか＋Ｊ澄
明な抽出液２．７０Ｆ１ｍｌをえた。この抽出液を０．
１３７Ｍ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、８
ｍＭリン酸２ナトリウムおよび１．４７ｍＭリン酸ｌカ
リウムから成る緩衝液（以１ζＰ、ＢＳと略す）で１０
倍に希釈した。次いてこの希釈液にノリカゲル（セパレ
イジョン・インダストリーズ社製）０．４ｋｇを加え、
４℃で４５分間攪拌、１５分間静置したのち、傾斜法で
１−６液を棄てノこ。このンリカケルを１Ｍ塩化ナトリ
ウムを含む００５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，２）で十分
洗浄１またのら、カラム（ｌ　ｌ　ｘ　ｌ　Ｉｃｍ）に
充填した。次いで０．５Ｍ塩塩化テトラメルルアンモニ
ウム含むＯ，ＯＩＭホウ酸緩衝液（＋）８８．０）で溶
出し、溶出液２０Ｑを５ｘ８ｃｍの抗体カラム［Ａｂ（
Ｍｏ・７２ｉ１．ｌ）：前Ｌｌｔ］に負荷、７５０ｍ１
のＰ、Ｂ、Ｓて洗浄したのら、２Ｍ塩塩酸グアノノン含
む００２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７０）で溶出し、抗ウィ
ルス（以下ＡＶと略す）活性を有する両分１８３ｍ１を
採集した。この溶出液に還元型ゲルタデオンを　Ｏ，０
１Ｍ量（５６２ｍｇ）を添加して比活性２．ｌＸ　Ｉ　
Ｏ６１ｔＪ／ｍｇ・タン白の　ｒｌＦＮ−７１７２ｍｇ
を含む水溶液をえた。

（１１）参考例３（Ｉ）でえ八ｒ　Ｉ　Ｆ　Ｎ　−７含
存水溶液の１８３ｍ１を予め　Ｉａ＋Ｍエチレンジアミ
ン四酢酸塩、Ｏ，１５Ｍ塩化ナトリウム、０．０１膜還
元型ゲルタデオンおよび２Ｍ塩酸グアニジンを含む２５
ｍＭ酢酸緩衝液（ｐｉ−１６，０）で平衡化したセファ
クリールＳ−２００（ファルマシア社製）のカラム（９
Ｘ　７９　ｃｍ）に負荷し、同一緩衝液で展開し、モノ
マー溶出画分４３３ｍ１を採集した。このようにしてえ
られた画分はドデシル硫酸ナトリウムのスラブ電気泳動
（以下５ＤＳ−ＰＡＧＥと略す）でモノマーに収斂した
。このゲルろ過処理により比活性３、Ｏｘ　ｌ　Ｏ”　
Ｉ　Ｌｌ／ｍｇ　・タン白のｒｌＦＮ−７を１４２ｍｇ
含む水溶液をえた。

（Ｉｌｌ　）　」−記（［＋）でえたｒｌＦＮ−７含有
水溶液の３６゜６ｍ１（１２，０ｍｇ）に０．ＯＩＭ還
元型グルタチオンおよび０゜５Ｍ塩酸グアニジンを含む
２５ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ６０）の１６３．４ｍｌを添
加し、０．０６ｍｇ／＋ｎｌ１度溶液を２００ｍ１調製
した。この溶液を予め０．ＯＩＭ還元型ゲルタデオンを
含む２５ｍＭ酢酸緩衝液（ｐｌ−１６，０）で平衡化し
たセファデックスＧ−２５（ファルマンア社製）カラム
（５ｘ　６０ｃｍ）に負荷し、同一緩衝液で展開溶出し
、ｒｌＦＮ−７画分２２０ｍ１をえた。この溶液のｒｌ
ＦＮ−７濃度は０．０４７ｍｇ／ｍｌであった。次いで
この溶液を４℃で２日間熟成したのち、グイアフロ−Ｐ
Ｍ−１０膜（アミコン社製限外ろ過膜）の限外ろ過法で
１４ｍ１にまで濃縮し、タン０含ｇＱ、７１１ｎ＋ｇ／
　ｍｌで実質的に無機塩を含まない（ＩＯｐｐｍ未満）
澄明なｒ　Ｉ　Ｆ　Ｎ−γ溶液をえた。このようにして
えられた高濃度ｒｌ　ＦＮ−γは５ＤＳ−ＰＡＧＥでモ
ノマーに収斂した。このｒＩＦＮ−７の比活性は３．６
ｘ　１０Ｊ　０７ｍｇ・タン白であった。

参考例４　実質的に無機塩を含まない高濃度ｒｌＦＮ−
γ水溶液の製造 ■ 参考例１（■）でえたｒｌＦＮ−γ水溶液の３５ｍ１（
１１，４８ｍｇ）に００１膜還元型グルタチオンおよび
０．５Ｍ塩酸グアニジンを含む２５ｍＭ酢酸緩衝液（ｐ
ｌ−１６，０）の１６５ｍ１を添加して調製した０、０
５７ｍｇ／ｍｌ濃度溶液２００ｍ１を予め００１膜還元
型グルタチオン溶液（ｐＨ６，０）で平衡化したセファ
デックスＧ−２５カラム（５Ｘ６０ｃｍ）に負荷し、０
０１膜還元型タルタヂオノ溶液（ｒ）Ｈ６，０）で展開
し、ｒｌ　ＦＮ−γの溶出画分２３５ｍ１をえた。この
溶液のｒｌＦＮ−γ濃度は０．０４６ｍｇ／ｍｌであっ
た。次いでこの溶液を４℃で１日間熟成したのち、グイ
アフロ−１）Ｍ−１０膜の限外ろ過法にて　ｌ０ｍ１に
まで濃縮し、タン白濃度１．０８ｍｇ／ｍｌで実質的に
無機塩（１０ｐｐｍ未満）および酢酸緩衝液を含まない
澄明なｒＩＦＮ−γ水溶液をえた。このようにしてえら
れたｒ　Ｉ　Ｆ　Ｎ　−７は５ＤＳ−ＰＡＧＥでモノマ
ーに収斂した。このｒｌＦＮ−γの比活性は３．６Ｘ　
１０６１Ｕ／ｍｇ・タン白であった。

参考例５　実質的に無機塩を含まない高濃度ｒ１１”Ｎ
−γ水溶液の製造 ■ 参η例１（Ｉ＋）でえたｒｌＦＮ−７の３５　ｍｌ（１
１，４８ｍｇ）にＯ，ＯＩＭ還元型グルタチオンおよび
０．５Ｍ塩酸グアニジンを含む２５ｍＭ酢酸緩衝液（ｐ
Ｈ６，０）のｌＧ５ｍ１を添加して、０．０５７ｍｇ／
ｉｔ濃度の溶液を２００　ｍｌ？Ａ製した。この溶液を
予め０．２６７Ｍグリシンと０．０１膜還元型ゲルタデ
オンを含む溶液（ｐｌ−１６，０）で平衡化したセファ
デックスＧ−２５カラム（５ｘ６０ｃｍ）に負荷し、同
一−溶液で展開し、ｒｌＦＮ−γの溶出画分２２０ｍ１
をえた。この溶液のｒｌＦＮ−７濃度は０．０４６ｍｇ
／ｍｌであった。次いてこの溶液を４℃で２日間熟成し
たのち、グイアフロ−ＰＭ−１０膜の限外ろ過法で９４
ｍ１まで濃縮し、タン白含量１　、０７ｍｇ／　ｍ　ｌ
で実質的に無機塩（ｌＱｐｐｍ未満）および酢酸緩衝液
を含まない澄明なｒｌ　ＦＮ−γ溶液をえた。このｒｌ
ＦＮ−γは５ＤＳ−ＰＡＧＥでモノマーに収斂し、その
比活性は３．６２Ｘ　１０６１０７ｍｇ・タン白であっ
た。

該可倒６ 実質的に無機塩を含まない高濃度デス（Ｃｙｓ−（ｉ）
　　形質転換体の製造 ＩＦＮ−γ発現プラスミドｐＲ０２３／ＩＦＩ−９００
［Ｅｌ）Ｃ公開第００８９６７６号公報実施例７参照］
を制限酵素Ｎｄｅ１．Ｎｃｏｌで消化し、ＩＦＮ−７遺
伝子部分を含むＮｄｅＴ　−Ｎｃｏｌ　　７１０ｂｐｌ
）ＮＡ断片　（Ａ）を分取した。一方、プラスミドｐＲ
０２３を制限酵素Ｂｇｌ　ＩＩ　、ＥｃｏＲＩで消化し
、λＰＬプロモーターを含む２６５ｂｐのＤＮＡ断片（
Ｂ）を分取した。（Ａ）、（Ｂ）と化学合成して得た蛋
白合成開始コドンを含むオリゴヌクレオヂトアダプター Ａ　Ａ　Ｔ　Ｔ　ＣＡ　Ｔ　Ｇ　ＣＡ　Ｇ　Ｇ　Ａ　’
ｌ’　ＯＣＡＧＴＡＣＧＴＣＣＴＡＧＧＴＡＴ をＴ　４　Ｄ　Ｎ　Ａリガーゼを用いてＮｄｅｌとＥｃ
ｏＲＩののりしろ部分に結合させた。得られたＤＮＡ断
片をＮｃｏＩとＢｇｌＩｌで処理して得たプラスミドｐ
Ｒｃ２３／ＩＦＩ−９００に結合させ、Ｃｙｓ−トオろ
発現プラスミドｐＬＣ２を構築した（第２図す。このプ
ラスミＦ’ｐＬＣ２を用いてＣｏｈｅｎらの方法１プ〔
１）−ジンゲス　オブ　ナノヨナルアカデミ−オブ　ザ
イエンス、６９．２＋１０（１９７２）］に従って大腸
菌ＲＲＩ（ｐＲＫ２４８　　ｃＩｔＳ）を形質転換し、
形質転換体エンエリヒア　コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉ
ａ　　ｃｏｌｉ　＝Ｅ、　ｃｏｌｉ）ＲＲＩ（ｐＬＣ２
，ｐＲＫ２４８　　ｃｌｔｓ）を得た。

（１１）形質転換体の培養 」１記（１）で構築したプラスミドを含む菌株Ｅｃｏｌ
ｉ　　、ＲＲＩ（ｐＬＣ２，ｐＲＫ２４８　　ｃａｔｓ
）を１％バクトドリプトン ７μｇ／ｍｌテトラサイクリンを含む液体培地５０ｍｌ
中で、３５℃１１２時間振とう培４ｉを行った。培養液
を０５％カザミノ酸．０５％クルコース、７μｇ／ｍｌ
のテトラザイクリンを含むＭ９培地２５０に移し、３５
°Ｃ４時間、ついで４２℃で３時間培養した。遠心分離
して菌体を集め、　−８０°Ｃで保存した。

（畜ｉｉ）精製 上記（１１）と同様の方法で得た凍結菌体７．１ｇを７
Ｍ塩酸グアニジンおよび２ｍＭフＪニルメヂメチルフォ
ニルフルオライトを含む０．１Ｍ＋ーリス塩酸緩衝液（
ｐｌ−［　７．０）　２　２　ｍｌに懸濁し、４℃で１
時間攪拌したのち１０．（１（ｊｏｘｇで３０分間遠心
分離にかけて＋ｔｒ）２４ｍｌを得た。この−１−清に
１３７ｍＭ塩化すｌ・リウム，２．７ｍＭ塩化カリウム
、８．１ｍＭリン酸二すトリウムおよび１．５ｍＭリン
酸−カリウムから成る緩衝液（ｐＨ　７．４）　３　０
　０　ｍｌを加えて希釈し、抗体カラム（Ｍｏ　７　２
−１１．１．カラム容ｆｉ１５ｍｌ）に流速１ｍ１／分
でか（Ｊた。そののち、０．５Ｍ塩酸グアーノンを含む
２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ　７．０）　６
　０　ｍｌてカラムを洗浄し、ついて、２Ｍ塩酸グアニ
ジンを含む２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐｔ１７
．０）　４．　５　ｍｌで溶出し、抗ウィルス活性を＜
ｉする両分２５ｍｌを得た。この両分２５ｍｌをあらか
じめ１ｍＭエヂレンンアミン四酢酸，０．１５Ｍ塩化す
トリウム、ＩＯｍＭシスティンおよび２Ｍ塩塩酸グアノ
ノン含む２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐ１１６．
０）で平衡化したセファクリールＳ　−、−　２　０　
０（ファルマンア社製）のカラム（２，６ｘ　−９　４
　ｃｍ）、カラノ、容！？１５００ｍｌにかけ、同一緩
衝液で溶出して抗ウィルス活性を何する両分４．０ｍｌ
を得た。

ごごて得られたＣｙｓ−’ＦｙｒーＣｙｓ欠落ＩＦＮー
７のボリペプヂＩ・「デス（Ｃｙｓ−Ｔｙｒ　　Ｃｙｓ
）ＩＦＮ−γ］は、７．０ｍｇであり、比活性は２．７
ｘ　ｌ　ＯＪ　ＬＪ／ｍｇてあった。

（１ｖ）高濃度水溶液の製造 γを含む溶出画分　　２．２ｍｌ（タンパク濃度０．１
８ｍｇ／ｍｌ）を０．５Ｍ塩酸グアニジンを含む２５ｍ
Ｍ酢酸アンモニウム緩衝液（１）Ｈ　６．０）１７６ｍ
ｌで希釈した。

この溶液をあらかしめ２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液
（ｐ＋４６．ｏ）で平衡化したセファデックスＣ−２５
カラム（２．６ｘ　Ｉ　５　ｃｍ）に負４ｉｊ　して、
同一緩衝液で溶出し、塙酸りアニノノを除去したデス（
タンパク濃度０．０１６ｍｇ／ｍｌ）を得た。

本溶出画分を４℃で２４時間熟成したのち、ダイアフａ
−ＹＭ−　１　０（２　５ｍｍφ，アミコン社）を用い
て限外ろ過により濃縮し、フィルター（０．２μｍ）で
ろ過し０．６８ｍｌの澄明な溶液を得た。タンパク濃度
は０．４１ｍｇ／ｍｌであった。

発明の効果 本発明の実質的に無機塩が存在せず、アミノ酸が共存す
る条件下に凍結もしくは凍結乾燥したヒトＩＦＮ−γ組
成物は、その凍結あるいは凍結乾燥操作および保存中に
おいてＩＦＮ−γ活性の低下が極めて少なくまたその再
溶解時に濁りが生じないため医薬品等として有利に使用
することができろ。

【図面の簡単な説明】

Claims (26)

【特許請求の範囲】
1. （１）実質的に無機塩が存在せず、アミノ酸が共存する
   条件下に凍結もしくは凍結乾燥したヒトγ型インターフ
   ェロン組成物。
2. （２）アミノ酸がモノアミノ脂肪族アミノ酸である特許
   請求の範囲第１項記載の組成物。
3. （３）ヒトγ型インターフェロンが遺伝子組み換え技術
   で得られるヒトγ型インターフェロンである特許請求の
   範囲第１項記載の組成物。
4. （４）遺伝子組み換え技術で得られるヒトγ型インター
   フェロンの高濃度含有水溶液由来のヒトγ型インターフ
   ェロンである特許請求の範囲第３記載の組成物。
5. （５）ヒトγ型インターフェロンの比活性が１×１０＾
   ５〜１×１０＾７ＩＵ／ｍｇである特許請求の範囲第１
   項記載の組成物。
6. （６）ヒトγ型インターフェロンが水溶液として１×１
   ０＾２〜１×１０＾７ＩＵ／ｍｌの濃度である特許請求
   の範囲第１項記載の組成物。
7. （７）ヒトγ型インターフェロンが第１図で示される１
   ４６個のアミノ酸配列からなるポリペプチドである特許
   請求の範囲第１項記載の組成物。
8. （８）ヒトγ型インターフェロンがデス（Ｃｙｓ＾１−
   Ｔｙｒ＾２−Ｃｙｓ＾３）ＩＦＮ−γである特許請求の
   範囲第１項記載の組成物。
9. （９）アミノ酸が水溶液として５〜５０ｍｇ／ｍｌの濃
   度である特許請求の範囲第１記載の組成物。
10. （１０）モノアミノ脂肪族アミノ酸に加えヒト血清アル
    ブミンを含有する特許請求の範囲第２項記載の組成物。
11. （１１）ヒト血清アルブミンが水溶液として２〜２０ｍ
    ｇ／ｍｌの濃度である特許請求の範囲第１０項記載の組
    成物。
12. （１２）モノアミノ脂肪族アミノ酸が中性モノアミノ脂
    肪族アミノ酸である特許請求の範囲第１０項記載の組成
    物。
13. （１３）中性モノアミノ脂肪族アミノ酸がグリシンであ
    る特許請求の範囲第１２項記載の組成物。
14. （１４）水溶液としてｐＨ４．０〜５０を示すように調
    整された特許請求の範囲第１２項記載の組成物。
15. （１５）モノアミノ脂肪族アミノ酸が酸性モノアミノ脂
    肪族アミノ酸である特許請求の範囲第１０項記載の組成
    物。
16. （１６）水溶液としてｐＨ７５〜８５を示すように調整
    された特許請求の範囲第１５項記載の組成物。
17. （１７）さらに糖類を含有せしめた特許請求の範囲第２
    項または第１０項記載の組成物。
18. （１８）糖類が多糖類である特許請求の範囲第１７項記
    載の組成物。
19. （１９）糖類が水溶液として３〜５０ｍｇ／ｍｌ濃度で
    ある特許請求の範囲第１７項記載の組成物。
20. （２０）無機塩の濃度が水溶液として０．１Ｍ以下であ
    る特許請求の範囲第１項記載の組成物。
21. （２１）無機塩の濃度が水溶液として０．０５Ｍ以下で
    ある特許請求の範囲第１項記載の組成物。
22. （２２）無機塩の濃度が水溶液として１ｍＭ以下である
    特許請求の範囲第１項記載の組成物。
23. （２３）凍結品である特許請求の範囲第１項記載の組成
    物。
24. （２４）凍結乾燥品である特許請求の範囲第１項記載の
    組成物。
25. （２５）ヒトγ型インターフェロンを含有する実質的に
    無機塩が存在しない水溶液にアミノ酸を添加して凍結し
    、所望により得られる凍結組成物を減圧下乾燥すること
    を特徴とする実質的に無機塩が存在せず、アミノ酸が共
    存する条件下に凍結もしくは凍結乾燥したヒトγ型イン
    ターフェロン組成物の製造法。
26. （２６）ヒトγ型インターフェロンを含有する実質的に
    無機塩が存在しない水溶液にアミノ酸を添加して凍結し
    、所望により得られる凍結組成物を減圧下乾燥すること
    を特徴とするヒトγ型インターフェロンの安定化法。