JPS6147519B2 - - Google Patents
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- JPS6147519B2 JPS6147519B2 JP54016534A JP1653479A JPS6147519B2 JP S6147519 B2 JPS6147519 B2 JP S6147519B2 JP 54016534 A JP54016534 A JP 54016534A JP 1653479 A JP1653479 A JP 1653479A JP S6147519 B2 JPS6147519 B2 JP S6147519B2
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- culture
- medium
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は抗腫瘍作用を有する蛋白多糖体類の製
造法に関する。詳しくは、ハラタケ属に属する新
種キノコの菌体を培養し得られた培養培地から抗
腫瘍作用を有する蛋白多糖体を製造する方法に関
するものである。 担子菌類より抗腫瘍性物質を製造する方法は従
来から数多く提案されており、担子菌の子実体を
原料として水系溶媒による抽出によつて抗腫瘍性
物質を製造することは例えば特公昭51−22042号
公報に記載されている。 本発明者等はさきにハラタケ属に属する新品種
キノコ、カワリハラタケ（Agaricus
heterosistes Heinem.et Gooss）の子実体より抗
腫瘍作用を有する蛋白多糖体を製造する方法（特
願昭53−149828）を提案したが、今回本菌を培地
に培養し該培養液に蓄積される蛋白多糖体を採取
しそれらの薬理作用について鋭意研究した結果、
子実体より得た物質よりさらに強い抗腫瘍作用を
有する物質を工業生産上有利に培養培地より製造
し得ることを見出し本発明を完成した。 本発明において用いられる担子菌はブラジルサ
ンパウロ州ピエターデ市効外で採取し、近時我国
で初めて栽培することに成功した未だ菌分類上、
未登録の新品種である。 この担子菌による子実体の栽培法については特
願昭52−54638明細書に記載されている。次に、
本発明で使用する新品種キノコ、カワリハラタケ
の菌学的性質を示す。 (1) 子実体 子実体の形状は、つり鐘状で傘の大きさは５
〜15cmであり、独特の香り有する。傘が開き胞
子が形成されるときにむらがあり、胞子形成が
遅れ黒化するのに時間がかかる。ひだを顕微鏡
で観察すると棍棒体、側糸が微弱である。 同属の公知のキノコに比べ形態的に柄は太く
て長く、胞子の黒変が遅い。また、香気が強
く、柄の肉は美味で甘いことが特徴としてあげ
られる。 (2) 麦芽汁寒天培地及びバレイシヨ・ブドウ糖寒
天培地（PD培地）上によく生育する。PD培地
上では白色の菌糸が発育し、培地を褐色に変化
させる。 (3) 菌糸体最適生育条件 PH＝6.0〜6.5 28℃ (4) 菌糸体の生育の範囲 PH＝4.0〜8.0 10〜33℃ (5) 子実体発生の温度範囲 20〜30℃
適温は24〜28℃ (6) 子実体形成に当り菌糸網を作る。 (7) 子実体形成に当り堆肥上に畝上覆土を行なう
ことにより多量発生する。 以上の菌学的性質を同属の公知のキノコ、例え
ば、はらたけ（Agricus campestris Fr.）と比
較した場合、柄が太く、胞子の黒変が遅い点が異
なり、また香気が強く、柄の肉が美味で甘い点が
他にはみられない特徴的な性質となつている。 これらの菌学的諸性質から、本担子菌はハラタ
ケ属（Agaricus）に属する新菌種であるものと
判定され、カワリハラタケ（Agaricus
heterosistes Heinem.et Gooss）と命名した。な
お、本菌は工業技術院微生物工業技術研究所に受
託番号微工研菌寄第4731号として寄託されてい
る。さらに上記担子菌の人工的あるいは自然的変
異株によつても本蛋白多糖体を製造することがで
きる。 本発明において使用する菌株の培養は、担子菌
の培養に通常用いられる固体培養法または液体培
養法のいずれでもよいが後者の方法が生産性の点
で好んで用いられる。 培養の培地としては菌の発育に必要な諸栄養が
含まれていればよく通常の培地処方でよい。即
ち、炭素源としては例えばグルコース、シユーク
ロース、マルトース、でんぷんなど資化し得る炭
素源であれば利用できる。窒素源としては例えば
硫安、硝安、硝酸ソーダ、尿素、など；天然の複
合栄養源としては例えばジヤガイモエキス、ニン
ジンエキス、麦芽エキス、ペプトン、Ｖ−８ジユ
ース、麹エキス、酵母エキス、酵母粉、タマネギ
エキス、コーンステイーブリカーなど、無機塩類
としては例えばリン酸、塩類、マグネシウム塩
類、カルシウム塩類、鉄塩類、カリ塩類その他の
無機塩類などが利用できる。この他に生長に必要
な微量元素、ビタミンなどは適宜添加してもよ
い。 培養は通常好気条件下がよく、例えば振とう培
養法あるいは通気撹拌培養法が用いられる。培養
温度は20〜37℃、好しくは30℃前後で培養するの
がよい。培養PHは3.0〜9.0、好しくは4.5〜7.0が
生育が良好である。培養日数は培養条件によつて
異なるが菌体糸の生育があればよく、通常は２〜
30日間、最大の菌糸体の生産される時期がよい。
通気撹拌培養では通気量0.1〜10VVM、撹拌速度
30〜800r.p.m.の範囲で行なうのがよい。 培養終了後培養液を遠心分離あるいは過して
菌糸体を除去し、培養液を得る。得られた培養
液はその中に有効成分を含有しそのままでも、
抗腫瘍性を示すが、そのままか、もしくは適宜濃
縮した後水可溶性有機溶媒あるいは各種の塩類を
加えることにより目的とする蛋白多糖体を沈澱物
として採取することができる。例えばアルコー
ル、アセトンなどの水可溶性有機溶媒あるいは各
種の塩類、例えば硫安、塩化カルシウムなどを加
えることにより日的物を沈澱させ過または遠心
分離した後アセトン、エーテルで洗滌乾燥すると
粉末状として目的物を得ることができる。 培養液から沈澱物を生じさせる前に必要に応
じて透析、限外過、ゲル過などにより低分子
物質を除去したり、活性炭、イオン交換処理など
により脱色、脱イオンを行なうこともできる。ま
た、得られた沈澱物も必要に応じて水などに再溶
解し上記処理を行なつてもよい。次いでアルコー
ルなどの水性溶媒にて再沈澱させる操作を繰り返
し実施することもできる。 このようにして得られた物質は淡褐色ないし灰
白色不定形の粉末であり、その１％水溶液はPH
6.0を示す。この物質について呈色反応を行なつ
たところ、アンスロン−硫酸反応、フエノール−
硫酸反応、キサントプロテイン反応及びフオリン
チオカルト反応がいずれも陽性であり、本発明物
質はこれらの諸反応から蛋白多糖体であると考え
られる。 本発明物質のその他の物理化学的性質の一例は
下記の通りである。 (1) 平均分子量 105〜107、セフアロース4Bを用いたゲル過
法によつて測定した。分子量の標準物質として
デキストランを用いた。 (2) 比旋光度（透析試料について） 〔α〕２０ Ｄ＝＋63゜（2.0重量／容量％水溶液） (3) 元素分析 Ｎ：1.6％、Ｃ：39.3％、Ｈ：6.5％、Ｏ：
52.6％精製の程度によつてＮ含量がやゝ変動す
る。 (4) 構成糖 本物質の１％水溶液に1Nとなるように硫酸
を加え、４時間、封管中100℃にて加水分解を
行ない炭酸バリウムにて中和後その上澄液につ
いてシリカゲルの一次元薄層クロマトグラフイ
ーを行なつた。展開溶媒はｎ−プロピルアルコ
ール：酢酸エチル：水（７：１：２）、検出は
ジフエニルアミン−アニリンによる発色によつ
て行つた。その結果Rf＝0.34（ガラクトー
ス）、0.45（マンノース）の２種のスポツトを
検出した。 さらに先に得られた上澄液を乾固しトリメチ
ルシリル化した後ガスクロマトグラフイーにて
分析した結果、主要成分としてマンノースを、
微量成分としてグルコース、ガラクトース及び
リボースを確認した。 (5) アミノ酸 本物質を再蒸留塩酸に溶解し、ドライアイス
浴上で凍結減圧密封した後、110℃、22時間加
水分解する。これを乾固し、PH＝2.2の緩衝液
に溶かしこれをアミノ酸アナライザーにより分
析した。その結果、アスパラギン酸、スレオニ
ン、セリン、グルタミン酸、プロリン、グリシ
ン、アラニン、シスチン、バリン、メチオニ
ン、イソロイシン、ロイシン、チロシン、フエ
ニルアラニン、γ−アミノ酪酸、ヒスチジン、
オルニチン、リジン、及びアルギニンを検出し
た。 (6) 溶解性 水、1N苛性ソーダ、1Nアンモニア水、1N塩
酸、1N硫酸及び蟻酸に可溶。アルコール、ア
セトン、酢酸エチル、エーテル、ベンゼン、酢
酸、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムア
ミド、アセトニトリル及びジオキサンには不
溶。 (7) 紫外線吸収スペクトル（第１図参照） 本物質の0.05％水溶液について測定した結果
200nｍ及び250nｍ近傍に吸収を有する。 (8) 赤外線吸収スペクトル（第２図参照） 3400（Ｓ）、2930（Ｍ）、1640（Ｓ）、1540
（Ｗ）、1400（Ｗ）、1050（Ｓ）、900（Ｗ）、800
（Ｗ）、570（Ｗ）の特徴的吸収（波数cm-1）を示
す。（KBr法による。） (9) 粘度（透析試料について） 2.0（重量／容量）％水溶液についてBL型粘
度計（東京計器製）を用い20℃で測定した結
果、3.8cpsであつた。 (10) 味およびにおい 本物質及びその水溶液は無味、無臭である。 (11) 分解点 一定の分解点、融点を示さない。強熱により
炭化する。 各種文献によると、例えば、Lentinus
edodes（Berg）Sing.由来の抗腫瘍多糖レンチ
ナンはβ（１→３）を主鎖とし、β（１→
６）、β（１→３）の分岐を有するグルカンで
あり、また、Schizophyllum commue由来の抗
腫瘍多糖SPG（Schizophyllan）もβ（１→
３）結合を基本とするグルカンである。これら
に対し、本蛋白多糖体は、マンナンを主体とし
ており、今まで発表されている抗腫瘍多糖と明
らかに異なり新規のものである。 上記のような物理的化学的特性を有する本発明
の蛋白多糖体は、顕著な抗腫瘍作用を有すると共
に（後記参考例参照）、免疫増強作用、インター
フエロン誘起作用、血管機能改善作用（例えば抗
高脂血症作用）、肝機能改善作用等も認められ、
極めて有用な物質である。 以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明す
る。 実施例 １ グルコース４ｇ、酵母エキス４ｇ、麦芽エキス
10ｇ、及び水１からなるPH5.5の培地を120℃、
20分間滅菌し、寒天培地に培養したカワリハラタ
ケ菌糸体を接種し、30℃で30日間、時々撹拌しな
がら静置培養した。 グルコース20ｇ、エビオス粉５ｇ、消泡剤レオ
コン1705W（ライオン油脂社製商品名）20ppm及
び水１からなるPH5.0の本培養培地2.0を５
坂口フラスコに入れ120℃、20分間滅菌した。こ
れに上記前培養した培地200mlを接種し、培養温
度30℃で往復振とう機にて培養した。30日間培養
後培養を停止し、遠心分離により菌糸体を除去
し、得られた液をロータリーエバポレータで６
分の１まで濃縮し、これに等量のエタノールを加
え４℃で１昼夜放置、沈澱を生じさせた。遠心分
離で沈澱を集めアセトン次いでエーテルで洗滌
し、乾燥後培地１当り淡褐色粉末875mgを得
た。 実施例 ２ グルコース20ｇ、酵母エキス５ｇ及び純水１
からなるPH5.0に調整した培地を三角フラスコに
入れ120℃、20分間滅菌した。これに寒天培地
（スラント）に培養したカワリハラタケ菌糸体を
接種し30℃で３週間静置培養した。 グルコース50ｇ、エビオス粉10ｇ、消泡剤レオ
コン20ppmを１の純水に溶解しPHを5.0に調整
して本培養培地とした。この培地7.0を10容
のジヤーフアーメンターに入れ、120℃、20分間
滅菌した。 これに上記の前培養した培地500mlを接種し、
培養温度30℃通気量0.5vvM、撹拌速度200〜
300rpmの条件にて培養した。10日間の培養後培
養を停止し過にて菌糸体を分離後さらに遠心分
離機にて10000r.p.mで15分間遠心分離して菌糸
体を除去した。得られた液6.0をロータリーエ
バポレーターにて500mlまで濃縮しエタノール500
mlを加え１昼夜４℃に放置して沈澱を生じさせ
た。 次いで固液分離し得られた沈澱物をアセトン、
エーテルで洗滌した後乾燥して7.5ｇの淡褐色粉
末を得た。これを純水に溶解し透析チユーブ（ユ
ニオンカーバイド社製ビスキングチユーブ）にて
純水に対して透析し、生じた沈澱物を遠心分離に
て除去後上澄液を凍結乾燥し6.0ｇの白色粉末を
得た。 参考例 １ ザルコーマ180腫瘍に対する効果 腫瘍接種24時間後から実施例２で得られた淡褐
色の蛋白多糖体（未透析物）を生理食塩水に溶解
させて１群11匹のマウス（Swiss albino mice）
の腹腔内に毎日１回10日間、所定量を投与した。
接種後14日、21日、28日及び35日に夫々肉腫の大
きさを測定し、その結果から抑制率を算出した。 それらの結果を第１表に示す。 【表】
造法に関する。詳しくは、ハラタケ属に属する新
種キノコの菌体を培養し得られた培養培地から抗
腫瘍作用を有する蛋白多糖体を製造する方法に関
するものである。 担子菌類より抗腫瘍性物質を製造する方法は従
来から数多く提案されており、担子菌の子実体を
原料として水系溶媒による抽出によつて抗腫瘍性
物質を製造することは例えば特公昭51−22042号
公報に記載されている。 本発明者等はさきにハラタケ属に属する新品種
キノコ、カワリハラタケ（Agaricus
heterosistes Heinem.et Gooss）の子実体より抗
腫瘍作用を有する蛋白多糖体を製造する方法（特
願昭53−149828）を提案したが、今回本菌を培地
に培養し該培養液に蓄積される蛋白多糖体を採取
しそれらの薬理作用について鋭意研究した結果、
子実体より得た物質よりさらに強い抗腫瘍作用を
有する物質を工業生産上有利に培養培地より製造
し得ることを見出し本発明を完成した。 本発明において用いられる担子菌はブラジルサ
ンパウロ州ピエターデ市効外で採取し、近時我国
で初めて栽培することに成功した未だ菌分類上、
未登録の新品種である。 この担子菌による子実体の栽培法については特
願昭52−54638明細書に記載されている。次に、
本発明で使用する新品種キノコ、カワリハラタケ
の菌学的性質を示す。 (1) 子実体 子実体の形状は、つり鐘状で傘の大きさは５
〜15cmであり、独特の香り有する。傘が開き胞
子が形成されるときにむらがあり、胞子形成が
遅れ黒化するのに時間がかかる。ひだを顕微鏡
で観察すると棍棒体、側糸が微弱である。 同属の公知のキノコに比べ形態的に柄は太く
て長く、胞子の黒変が遅い。また、香気が強
く、柄の肉は美味で甘いことが特徴としてあげ
られる。 (2) 麦芽汁寒天培地及びバレイシヨ・ブドウ糖寒
天培地（PD培地）上によく生育する。PD培地
上では白色の菌糸が発育し、培地を褐色に変化
させる。 (3) 菌糸体最適生育条件 PH＝6.0〜6.5 28℃ (4) 菌糸体の生育の範囲 PH＝4.0〜8.0 10〜33℃ (5) 子実体発生の温度範囲 20〜30℃
適温は24〜28℃ (6) 子実体形成に当り菌糸網を作る。 (7) 子実体形成に当り堆肥上に畝上覆土を行なう
ことにより多量発生する。 以上の菌学的性質を同属の公知のキノコ、例え
ば、はらたけ（Agricus campestris Fr.）と比
較した場合、柄が太く、胞子の黒変が遅い点が異
なり、また香気が強く、柄の肉が美味で甘い点が
他にはみられない特徴的な性質となつている。 これらの菌学的諸性質から、本担子菌はハラタ
ケ属（Agaricus）に属する新菌種であるものと
判定され、カワリハラタケ（Agaricus
heterosistes Heinem.et Gooss）と命名した。な
お、本菌は工業技術院微生物工業技術研究所に受
託番号微工研菌寄第4731号として寄託されてい
る。さらに上記担子菌の人工的あるいは自然的変
異株によつても本蛋白多糖体を製造することがで
きる。 本発明において使用する菌株の培養は、担子菌
の培養に通常用いられる固体培養法または液体培
養法のいずれでもよいが後者の方法が生産性の点
で好んで用いられる。 培養の培地としては菌の発育に必要な諸栄養が
含まれていればよく通常の培地処方でよい。即
ち、炭素源としては例えばグルコース、シユーク
ロース、マルトース、でんぷんなど資化し得る炭
素源であれば利用できる。窒素源としては例えば
硫安、硝安、硝酸ソーダ、尿素、など；天然の複
合栄養源としては例えばジヤガイモエキス、ニン
ジンエキス、麦芽エキス、ペプトン、Ｖ−８ジユ
ース、麹エキス、酵母エキス、酵母粉、タマネギ
エキス、コーンステイーブリカーなど、無機塩類
としては例えばリン酸、塩類、マグネシウム塩
類、カルシウム塩類、鉄塩類、カリ塩類その他の
無機塩類などが利用できる。この他に生長に必要
な微量元素、ビタミンなどは適宜添加してもよ
い。 培養は通常好気条件下がよく、例えば振とう培
養法あるいは通気撹拌培養法が用いられる。培養
温度は20〜37℃、好しくは30℃前後で培養するの
がよい。培養PHは3.0〜9.0、好しくは4.5〜7.0が
生育が良好である。培養日数は培養条件によつて
異なるが菌体糸の生育があればよく、通常は２〜
30日間、最大の菌糸体の生産される時期がよい。
通気撹拌培養では通気量0.1〜10VVM、撹拌速度
30〜800r.p.m.の範囲で行なうのがよい。 培養終了後培養液を遠心分離あるいは過して
菌糸体を除去し、培養液を得る。得られた培養
液はその中に有効成分を含有しそのままでも、
抗腫瘍性を示すが、そのままか、もしくは適宜濃
縮した後水可溶性有機溶媒あるいは各種の塩類を
加えることにより目的とする蛋白多糖体を沈澱物
として採取することができる。例えばアルコー
ル、アセトンなどの水可溶性有機溶媒あるいは各
種の塩類、例えば硫安、塩化カルシウムなどを加
えることにより日的物を沈澱させ過または遠心
分離した後アセトン、エーテルで洗滌乾燥すると
粉末状として目的物を得ることができる。 培養液から沈澱物を生じさせる前に必要に応
じて透析、限外過、ゲル過などにより低分子
物質を除去したり、活性炭、イオン交換処理など
により脱色、脱イオンを行なうこともできる。ま
た、得られた沈澱物も必要に応じて水などに再溶
解し上記処理を行なつてもよい。次いでアルコー
ルなどの水性溶媒にて再沈澱させる操作を繰り返
し実施することもできる。 このようにして得られた物質は淡褐色ないし灰
白色不定形の粉末であり、その１％水溶液はPH
6.0を示す。この物質について呈色反応を行なつ
たところ、アンスロン−硫酸反応、フエノール−
硫酸反応、キサントプロテイン反応及びフオリン
チオカルト反応がいずれも陽性であり、本発明物
質はこれらの諸反応から蛋白多糖体であると考え
られる。 本発明物質のその他の物理化学的性質の一例は
下記の通りである。 (1) 平均分子量 105〜107、セフアロース4Bを用いたゲル過
法によつて測定した。分子量の標準物質として
デキストランを用いた。 (2) 比旋光度（透析試料について） 〔α〕２０ Ｄ＝＋63゜（2.0重量／容量％水溶液） (3) 元素分析 Ｎ：1.6％、Ｃ：39.3％、Ｈ：6.5％、Ｏ：
52.6％精製の程度によつてＮ含量がやゝ変動す
る。 (4) 構成糖 本物質の１％水溶液に1Nとなるように硫酸
を加え、４時間、封管中100℃にて加水分解を
行ない炭酸バリウムにて中和後その上澄液につ
いてシリカゲルの一次元薄層クロマトグラフイ
ーを行なつた。展開溶媒はｎ−プロピルアルコ
ール：酢酸エチル：水（７：１：２）、検出は
ジフエニルアミン−アニリンによる発色によつ
て行つた。その結果Rf＝0.34（ガラクトー
ス）、0.45（マンノース）の２種のスポツトを
検出した。 さらに先に得られた上澄液を乾固しトリメチ
ルシリル化した後ガスクロマトグラフイーにて
分析した結果、主要成分としてマンノースを、
微量成分としてグルコース、ガラクトース及び
リボースを確認した。 (5) アミノ酸 本物質を再蒸留塩酸に溶解し、ドライアイス
浴上で凍結減圧密封した後、110℃、22時間加
水分解する。これを乾固し、PH＝2.2の緩衝液
に溶かしこれをアミノ酸アナライザーにより分
析した。その結果、アスパラギン酸、スレオニ
ン、セリン、グルタミン酸、プロリン、グリシ
ン、アラニン、シスチン、バリン、メチオニ
ン、イソロイシン、ロイシン、チロシン、フエ
ニルアラニン、γ−アミノ酪酸、ヒスチジン、
オルニチン、リジン、及びアルギニンを検出し
た。 (6) 溶解性 水、1N苛性ソーダ、1Nアンモニア水、1N塩
酸、1N硫酸及び蟻酸に可溶。アルコール、ア
セトン、酢酸エチル、エーテル、ベンゼン、酢
酸、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムア
ミド、アセトニトリル及びジオキサンには不
溶。 (7) 紫外線吸収スペクトル（第１図参照） 本物質の0.05％水溶液について測定した結果
200nｍ及び250nｍ近傍に吸収を有する。 (8) 赤外線吸収スペクトル（第２図参照） 3400（Ｓ）、2930（Ｍ）、1640（Ｓ）、1540
（Ｗ）、1400（Ｗ）、1050（Ｓ）、900（Ｗ）、800
（Ｗ）、570（Ｗ）の特徴的吸収（波数cm-1）を示
す。（KBr法による。） (9) 粘度（透析試料について） 2.0（重量／容量）％水溶液についてBL型粘
度計（東京計器製）を用い20℃で測定した結
果、3.8cpsであつた。 (10) 味およびにおい 本物質及びその水溶液は無味、無臭である。 (11) 分解点 一定の分解点、融点を示さない。強熱により
炭化する。 各種文献によると、例えば、Lentinus
edodes（Berg）Sing.由来の抗腫瘍多糖レンチ
ナンはβ（１→３）を主鎖とし、β（１→
６）、β（１→３）の分岐を有するグルカンで
あり、また、Schizophyllum commue由来の抗
腫瘍多糖SPG（Schizophyllan）もβ（１→
３）結合を基本とするグルカンである。これら
に対し、本蛋白多糖体は、マンナンを主体とし
ており、今まで発表されている抗腫瘍多糖と明
らかに異なり新規のものである。 上記のような物理的化学的特性を有する本発明
の蛋白多糖体は、顕著な抗腫瘍作用を有すると共
に（後記参考例参照）、免疫増強作用、インター
フエロン誘起作用、血管機能改善作用（例えば抗
高脂血症作用）、肝機能改善作用等も認められ、
極めて有用な物質である。 以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明す
る。 実施例 １ グルコース４ｇ、酵母エキス４ｇ、麦芽エキス
10ｇ、及び水１からなるPH5.5の培地を120℃、
20分間滅菌し、寒天培地に培養したカワリハラタ
ケ菌糸体を接種し、30℃で30日間、時々撹拌しな
がら静置培養した。 グルコース20ｇ、エビオス粉５ｇ、消泡剤レオ
コン1705W（ライオン油脂社製商品名）20ppm及
び水１からなるPH5.0の本培養培地2.0を５
坂口フラスコに入れ120℃、20分間滅菌した。こ
れに上記前培養した培地200mlを接種し、培養温
度30℃で往復振とう機にて培養した。30日間培養
後培養を停止し、遠心分離により菌糸体を除去
し、得られた液をロータリーエバポレータで６
分の１まで濃縮し、これに等量のエタノールを加
え４℃で１昼夜放置、沈澱を生じさせた。遠心分
離で沈澱を集めアセトン次いでエーテルで洗滌
し、乾燥後培地１当り淡褐色粉末875mgを得
た。 実施例 ２ グルコース20ｇ、酵母エキス５ｇ及び純水１
からなるPH5.0に調整した培地を三角フラスコに
入れ120℃、20分間滅菌した。これに寒天培地
（スラント）に培養したカワリハラタケ菌糸体を
接種し30℃で３週間静置培養した。 グルコース50ｇ、エビオス粉10ｇ、消泡剤レオ
コン20ppmを１の純水に溶解しPHを5.0に調整
して本培養培地とした。この培地7.0を10容
のジヤーフアーメンターに入れ、120℃、20分間
滅菌した。 これに上記の前培養した培地500mlを接種し、
培養温度30℃通気量0.5vvM、撹拌速度200〜
300rpmの条件にて培養した。10日間の培養後培
養を停止し過にて菌糸体を分離後さらに遠心分
離機にて10000r.p.mで15分間遠心分離して菌糸
体を除去した。得られた液6.0をロータリーエ
バポレーターにて500mlまで濃縮しエタノール500
mlを加え１昼夜４℃に放置して沈澱を生じさせ
た。 次いで固液分離し得られた沈澱物をアセトン、
エーテルで洗滌した後乾燥して7.5ｇの淡褐色粉
末を得た。これを純水に溶解し透析チユーブ（ユ
ニオンカーバイド社製ビスキングチユーブ）にて
純水に対して透析し、生じた沈澱物を遠心分離に
て除去後上澄液を凍結乾燥し6.0ｇの白色粉末を
得た。 参考例 １ ザルコーマ180腫瘍に対する効果 腫瘍接種24時間後から実施例２で得られた淡褐
色の蛋白多糖体（未透析物）を生理食塩水に溶解
させて１群11匹のマウス（Swiss albino mice）
の腹腔内に毎日１回10日間、所定量を投与した。
接種後14日、21日、28日及び35日に夫々肉腫の大
きさを測定し、その結果から抑制率を算出した。 それらの結果を第１表に示す。 【表】
第１図は本発明により得られた蛋白多糖体の紫
外線吸収スペクトルであり、第２図はその赤外線
吸収スペクトルである。
外線吸収スペクトルであり、第２図はその赤外線
吸収スペクトルである。
Claims (1)
- １ ハラタケ属に属するカワリハラタケを培養
し、得られる培養液から蛋白多糖体を採取する
ことを特徴とする蛋白多糖体の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1653479A JPS55108293A (en) | 1979-02-15 | 1979-02-15 | Production of proteopolysaccharide with antitumorigenic activity |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1653479A JPS55108293A (en) | 1979-02-15 | 1979-02-15 | Production of proteopolysaccharide with antitumorigenic activity |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS55108293A JPS55108293A (en) | 1980-08-20 |
| JPS6147519B2 true JPS6147519B2 (ja) | 1986-10-20 |
Family
ID=11918924
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1653479A Granted JPS55108293A (en) | 1979-02-15 | 1979-02-15 | Production of proteopolysaccharide with antitumorigenic activity |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS55108293A (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2512675B1 (fr) * | 1981-09-17 | 1987-07-17 | Viaud Henri | Hydrolat d'agaricus biosporus et campester |
| JPS6466127A (en) * | 1987-09-07 | 1989-03-13 | Nichirei Kk | Antitumor agent |
| JPH0278630A (ja) * | 1988-09-14 | 1990-03-19 | Nichirei Corp | 抗腫瘍剤 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5841483B2 (ja) * | 1975-10-06 | 1983-09-12 | ミノルタ株式会社 | マクロサツエイキコウツキズ−ムレンズキヨウドウ |
-
1979
- 1979-02-15 JP JP1653479A patent/JPS55108293A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS55108293A (en) | 1980-08-20 |
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