JPS6152806B2

JPS6152806B2 -

Info

Publication number: JPS6152806B2
Application number: JP55094275A
Authority: JP
Inventors: Yasuhiko Kojima; Yoshuki Konno; Sadao Tamamura; Takashi Hashimoto; Nobuyuki Shibukawa
Original assignee: KITAZATO KENKYUSHO
Current assignee: KITAZATO KENKYUSHO
Priority date: 1980-07-09
Filing date: 1980-07-09
Publication date: 1986-11-14
Also published as: JPS5718622A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明はインターフエロン（以下IFという）
誘起剤に関する。よく知られているように、IF
はヒトまたは動物の細胞または体内において産出
される物質であつて、動物種に関して特異的にか
つウイルス種に関して非特異的にウイルスの増殖
を抑制する作用を有している。IF誘起剤は、こ
れをヒトまたは動物の体内または細胞内に投与す
ると、そこにIFを誘起する作用を有する物質で
ある。従つて、IF誘起剤は、IFと同様に、ヒト
および動物のウイルス感染症の予防および治療に
有用であることが期待されている。しかし従来公知のIF誘起剤は一般に毒性が強
い等の欠点を有しているので、この種の目的に実
用化されたことはなかつた。本発明者は、優れたIF誘起活性と低い毒性と
を有し、簡単に製造できるIF誘起剤の提供を目
的として、キク科ヨモギ属に属しかつIF誘起活
性物質を含有する植物またはその変員の組織から
上記活性物質を抽出し、抽出物からこれを回収す
る工程からなるIF誘起活性物質およびその製法
を発明した（昭和54年特許願第1540号、同昭54−
160089号参照）。この方法に使用される植物の例
は次の通りである。ヨモギ（Artemisia princeps Pamp.）、カワラ
ヨモギ（A.capillaris Thun.）、ニガヨモギ（A.
absinthium L.）、ミブヨモギ（A.maritima L.
）、クラムヨモギ（A.kurramensis Qaz.）、ヤマ
ヨモギ（A.montana Pamp.）、ヒメヨモギ（A.
feddei Ｌｅ′v.et Van.）、オトコヨモギ（A.
japonica Thun.）、イヌヨモギ（A.keiskeana
Miq.）、ヒロハヤマヨモギ（A.stolonifera
Komar.）、ヒトツバヨモギ（A.monophylla
Kitam.）、シロヨモギ（A.stelleriana Bess.）、
A.vulgaris L.、A.abrotanum L.、A.campestris
L.、A.vallesiaca All.、A.molinieri Quｅ′ｚ、A.
dracunculus L.、A.ludoviciana Nutt.、A.
arbuscula Nutt.、A.tridentata Nutt.、A.
filifolia Torr.、A.caudata Michx.、A.
lindleyana Bess.、A.frigida Willd.、A.biennis
Willd.。ここに例示した植物は毒性が低い。ある種のヨ
モギ属植物の葉および種子はたとえば食用、薬
草、等として長年の間用いられている。本活性物質製造原料として、植物のすべての組
織を用いることができるが、実用的には葉と茎と
を用いるのがよく、保存および抽出効率からみ
て、乾燥原料を用いるのがよい。原料の抽出は一
般に水で任意温度（たとえば室温から抽出混合物
の沸騰まで）で、好ましくはアルカリ条件下（た
とえばPH７−10）で任意時間行なう。たとえば室
温では通常１〜５日、45〜80℃で撹拌下30分ない
し６時間である。抽出は連続式でもバツチ式でも
よく、抽出水と原料との比は任意である。またはメタノール、エタノール、プロパノー
ル、ブタノール、ジメチルスルホキシド、アセト
ンのような親水性有機溶剤の適当な濃度（例、20
〜80％）で任意温度（例、20〜80℃）で適当な時
間（例、４時間ないし２日間）抽出してもよい。過、圧搾または遠心分離のような常法で抽出
液から植物の残渣を除いた後、たとえば次の方法
で活性成分を回収する。 (A) 分画分子量10万以上の物質を分画できる適当
な膜を用いた限外過法で上澄液を処理する。
限外過の圧力はたとえば0.1〜５Kg/cm²とす
る。得られた活性部分を集めて凍結乾燥する
と、褐色の粉末が得られる。 (B) 抽出液を所望により減圧下で濃縮し、親水性
有機溶剤（たとえばメタノール、エタノール、
プロパノール、ブタノール、アセトン等）を抽
出液またはその濃縮液に適当な濃度（たとえば
40−70w/v%）になるように加えると、活性成
分を含む沈殿物が生じるので、これを減圧下に
乾燥すると、褐色の粉末が得られる。 (C) 上記の有機溶剤の代わりに、塩化アンモニウ
ム、硫酸アンモニウム、セチルトリメチルアン
モニウムブロミドのようなアンモニウム塩また
は塩化亜鉛、塩化銅のような無機金属塩を適当
な濃度（たとえば20−50w/v%）になるように
加えると、活性成分を含む沈殿物が生じるの
で、沈殿物を脱塩後乾燥すると、褐色の粉末が
得られる。以上のようにして抽出液を処理することによつ
て、原料中の活性成分の大部分（場合により90％
以上）を回収することができる。しかし、得られ
た乾燥粗粉末中の不活性成分の含有量は(A)の方法
が最低である。また(A)の方法は操作が簡単で費用
が安く短時間に行なうことができる。しかも(A)の
方法で得られた粗粉末を動物に多量に経口投与し
ても著しい副作用は認められないことがわかつ
た。次に、この粗粉末を、たとえばゲル過剤また
はイオン交換剤を用いるカラムクロマトグフイー
のような常法によつて精製する。ゲル過剤を用
いた場合は適当な緩衝液で溶出してもよいが、通
常は水で溶出すればよい。イオン交換剤を用いた
場合は適当な緩衝液で溶出する。活性成分は水溶性の酸性物質であるから、この
種の物質の精製に常用される各種のゲル過剤、
イオン交換剤、またはアニオンまたはカチオンイ
オン交換セルロースを用いて精製することができ
る。こうして得られた物は、多少の不純物を含んで
いるが、IF誘起剤として実用することができ
る。所望により、上記の精製工程を組合わせるこ
とによつて、不純物をさらに除去することもでき
る。理化学的特性この方法で得られた最終産物は無定形白色状粉
末の状態において安定で下記の理化学的特性を有
している。 (1) 元素分析Ｈ：7.4±0.4％、Ｃ：45.6±0.4％、Ｎ：13.5±0.4％、Ｐ：2.8±0.3％ (2) 分子量約10万ないし約300万（主として約50万ない
し100万）、〔スピンコ・モデルＥ分析用超遠心機（米国ベ
ツクマン社製）使用の超遠心法、アミコン限外
過機およびXM50、XM100AおよびXM300
過膜（米国アミコン社製）UK10、UK50およ
びUK200過膜（東洋紙製）使用の限外
過法、およびセフアデツクスＧ−200（スエー
デン国、フアーマシア・フアイン・ケミカル
AB製）使用のゲル過法により測定〕 (3) 融点または分解点融点不明確。約220℃で炭化する。 (4) 紫外線吸収スペクトル第１図の通り（0.1N NaOH中で測定した
が、水または1N NaOH中でも変化しなかつ
た） (5) 赤外線吸収スペクトル第２図の通り（KBr法） (6) 各種溶剤中の溶解性水に溶解し、水酸化ナトリウム、水酸化カリ
ウム、水酸化アンモニウム等のアルカリ性水溶
液にとくによく溶解する。メタノール、エタノ
ール、プロパノール、ブタノール、アセトン、
クロロホルム、エーテルに難溶である。 (7) 呈色反応ニンヒドリン反応およびデイツトマー反応に
陽性。フオリン試薬およびエルソン・モーガン
反応に陰性。 (8) 性質酸性 (9) 主な化学組成 (イ) アミノ酸（±0.6％）アスパラギン酸（9.5％）スレオニン（4.9％）セリン（4.7％）グルタミン酸（8.4％）プロリン（3.1％）グリシン（10.2％）アラニン（11.2％）バリン（6.9％）イソロイシン（4.6％）ロイシン（7.8％）チロシン（微量）フエニールアラニン（2.9％）リジン（6.2％）ヒスチジン（1.8％）アルギニン（5.3％）アンモニア（12.1％）（6N塩酸で110℃で48時間減圧下に加水分解
後、米国テクニコン社製、テクニコン・アミ
ノ酸オートアナライザーNC−１型で分析し
た） (ロ) 糖検出されない（0.1N硫酸で80℃で20分間および1N硫酸で
100℃で２時間それぞれ加水分解後、米国テ
クニコン社製、テクニコン糖オートアナライ
ザーＮ−１型で分析した） (10) 比旋光度〔α〕^２６ _Ｄ＝＋73゜〜＋79゜平均＋76゜（濃度0.47％、0.1N NaOH中）上記の特性から、本発明による物質は、アミノ
酸、リン酸を主体とする分子量約10万から約300
万（主として約50万から約100万）の高分子を有
し、リン酸を含有する蛋白質の１種であると思わ
れる。またこの物質によつて動物の体内または試
験管内に誘起されたIFは、トリプシン（0.08％、
37℃、２時間）で失活するばかりでなく、動物種
特異性とウイルス種非特異性とを有しているの
で、本物質は一般に認められているIF誘起剤の
定義に該当する新規物質であることが分つた。さらに本活性物質の実用的な用法を提供する目
的で、後記の通り各種の試験を行ない、その生物
学的特性を調べた結果、本活性物質の用法を発明
した。本活性物質の有効量を、ヒトまたはIF誘起能
を有する動物の体内または細胞内に投与すること
により、IFを誘起することができる。ポリＩ：Ｃやエンドキシン等の公知のIF誘起
剤では、まず毒性が問題にされるのに対して、本
活性物質では、その心配がまつたくなく、しかも
ヒトに対する誘起活性は公知のものよりも優れて
いる。本活性物質は高い抗ウイルス活性を与えるばか
りでなく、抗腫瘍性や生理作用を改良することが
わかつた。従つて本活性物質を、ヒト、哺乳類（牛、馬、
豚等）、鳥類（ニワトリ、アヒル等）、魚類（ニジ
マス、ウナギ、ハマチ等）等の各種脊椎動物のウ
イルス感染症の予防および治療に利用するばかり
でなく、たとえば抗腫瘍剤や生理作用改良、健康
増進剤としても用いることができる。本活性物質を、静脈内注射、腹腔内注射、腸管
内、経口、経皮、スプレー等の方法で投与するこ
とができる。適当な投与量（最終精製物、日量）
は、静脈内投与では0.001〜100mg/Kgであるが、
宿主の種類、年令、体重等の諸条件、とくにIF
誘起に対する応答性や投与目的等によつて適当に
選ばれる。実用的には、動物では静脈内投与0.01
〜10mg/Kg、腹腔内0.1〜10mg/Kg、ヒトでは静脈
内0.01〜1.0mg/Kgでよく、経口投与では約10倍以
上の量がよい。短時間または局所的投与の場合に
は、多量を用いることができる。投与量が過少で
あるとIFを誘起しないが、多過ぎても、毒性が
低いので格別の支障はない。所望により適当量の
IFを投与した後に本活性物質を投与する方法
（プライミング）によると、単独投与の場合より
も、本活性物質の生物学的活性値を約３〜10倍に
高めることができると同時に、宿主の応答性を高
め、IFの有効時間を延長することができる。下記の説明において、試料として製造例１の限
外過による分画物の乾燥粗粉末とその最終精製
品および同例２の最終精製物、ならびに外国産ア
ルテミシア・ヴルガリスを製造例１の方法で処理
して得た最終精製物（以下試料Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄと
いう）を用い、試験動物として、試験例１で用い
たと同種のウサギのほか、マウス（体重25±１
ｇ、ddy系、６週令）、ニワトリ（メス、体重約
230ｇ、白色レグホン、30日令）を用いた。 (A) IF誘起とIF活性の測定 () インビトロ法試験例１の方法に準じて子牛血清（ヒトの
場合は牛胎児血清）10％を含むイーグル
MEM培地（日水製薬製）を用いて、試験動
物の脾臓細胞浮遊液（10⁷個／ml）をつく
り、その各区分（１ml）に活性物質の試料を
加え、所定濃度および温度で培養し、培養後
の液を遠心処理して得た上澄液をIF活性測
定に供した。ただしヒトの場合は、外傷死し
た成人（男）２例の脾臓を用いたほかに、健
康な成人（男）５例の血液を上膊静脈から取
り、これから分離された白血球を用いて別別
に浮遊液をつくつた。第２表記載のIF活性
は第１表の測定用細胞を用いて、試験例１に
準じて測定したものである。

【表】

【表】 () インビボ法 (1) ウサギ試験例１で得られたウサギのIF活性は
第３表の通りである。

【表】試料Ｂの投与量を４mg/Kgから0.004mg/
Kgの範囲で変えて、同様な方法でしらべた
ところ、血清中のIF活性の最大値は投与
後２時間目に認められた。また経口投与で
は最大値の出現は約10〜13時間後であつ
た。 (2) マウス１群10匹のマウスを用い、 (a) 第４表の濃度になる量の試料Ｂを生理
的食塩水（各0.1ml）に加え、各マウス
の尾静脈に注射し、１、２、３、５時間
後、または (b) 同様の試料Ｂの量を生理的食塩水（各
0.2ml）に加え、各マウスの腹腔内に投
与し、２、３、４、６時間後、または (c) 第４表記載の濃度になる量の試料Ｂを
水（各0.2ml）に加え、各マウスに経口
投与し、2.5、５、7.5、10、13時間後にそれぞれマウスの心臓から全採血して血
清をつくり、上記の方法に準じてIF活性
を測定した。(a)(b)(c)の場合、IF活性の最
大値は、それぞれ約２、約３〜４、約7.5
〜10時間後に認められた。第４表は、最大IF活性値（平均値）を
示す。試料Ａを用いたときも、同じ傾向を
示した。

【表】 (3) ヒト健康な成人（男）５例に試料Ｂ各200mg
を経口投与し、13時間後に採血し、上記の
方法に準じて、IF活性をしらべたとこ
ろ、血清中に平均14単位の活性が認められ
た。 (4) ニワトリ１群10羽のニワトリの翼下静脈に試料Ｂ
各４mg/Kgを含む生理的食塩水（0.2ml）を
注射し、２時間後に心臓から全採血し、上
記方法に準じて血清中のIF活性をしらべ
たところ、約26単位であつた。 (B) ウイルス感染防禦試験 (1) マウス（ワクシニア・ウイルス）マウス（メス、１群20匹）に、第５表に示
した量の活性物質を含む生理的食塩水（各
0.2ml）をそれぞれ静脈内、腹腔内または経
口投与し、24時間後に30PFD₅₀（マウスの尾
部に50％発痘をする量の30倍のウイルス量を
いう）のワクシニアウイルスを含む生理的食
塩水0.1mlを尾静脈内に注射し、その後９日
間に現われた尾部の発痘数を無処置群のそれ
と比較して、発痘の阻止率を計算した（第５
表）。50％以上の阻止率をもつて有効と判定
した。

【表】 (2) マウス（単純性ヘルペス）ワクシニアウイルスの代わりに単純性ヘル
ペスウイルスを用いた。静脈内経口または腹
腔内に試料を上記試験(B)(1)と同様の方法で投
与後、本ウイルスを腹腔内に接種し試験し
た。感染後30日間観察して、マウスの平均生
存日数をしらべ、無処置群とくらべた結果、
延命効果を認めた。 (3) ウサギ（ワクシニア・ウイルス） (a) ウサギ（１群５羽）の背部に試料Ａを含
む生理的食塩水（各0.1ml）を皮内注射
し、24時間後に同じ局所にワクシニアウイ
ルス10ID₅₀（ウサギの皮内に６×６mm以上
の大きさの発痘数が50％出現するときのウ
イルスの接種量を1ID₅₀という）を含む生
理的食塩水0.1mlを注射し、７日後に局所
の発痘を調べた。試料は10倍階段希釈で
0.02から200μｇの範囲で用いた。投与量
が２μｇ以上の場合、発痘阻止率100％で
あつた。 (b) ウサギ（１群５羽）を用い、各ウサギに
第１、３、４、６、８日（計５回）に試料
A100mg／日をそれぞれ経口投与し、ワク
シニアウイルスは10ID₅₀と100ID₅₀とを第
５日に背部皮内に接種した。第12日まで
に、10ID₅₀接種したウサギに発痘を認め
ず、100ID₅₀接種されたウサギにわずかな
発痘を認めたが感染後約２週間までに完全
に消失した。 (C) 抗腫瘍作用（マウス） (1) エールリツヒ腹水がん１群15匹のマウスを用い、がん細胞2.5×
10⁶個を含む滅菌水（0.2ml）を各マウスに腹
腔内に移植し、24時間後に、試料Ｂを含む滅
菌水（0.2ml）を各マウスに14日間連続投与
（１日１回）した。投与量は、腹腔内では
0.2、1.0または５mg／Kg／日で、経口投与で
は１匹あたり40、200または1000mg／Kg／日
であつた。腹腔内投与1.0または５mg／Kg／日の場
合、マウスの中間延命日数は33日であつた。
1/3は移植後50日目以後にも生存し、しかも
完全治癒したが、無処置群は移植後29日まで
に全例死亡した。また、３日おきに各1.0mg/Kg５回腹腔内投
与した場合も同様の効果があつた。経口投与（1000mg／Kg／日）の結果は、腹
腔内投与と同様であつた。 (2) Ｓ−180固形腫瘍腫瘍細胞１×10⁵個を含む滅菌水（0.2ml）
を各マウス（１群15匹）の腋窩皮下に移植
し、上記と同様な方法で試料Ｂを投与した。腹腔内投与（５mg／Kg／日）では中間延命
日数は40日で５匹は移植後40日までに腫瘍が
約1/2に縮少した。経口投与（400または1000
mg／Kg／日）の結果は腹腔内投与よりも劣つ
た。対照群は35日までに全部死亡した。 (D) 本活性物質とIFとの組合せ使用（プライミ
ング） (1) ウサギのリンホイド細胞（10⁷個／ml）を
含む細胞浮遊液を試験例１の方法に準じてつ
くり、これに30単位／mlのウサギIFを加
え、37℃、６時間処理した。液を遠心して
IFを除き、細胞にイーグルMEM培地（１
ml）と試料Ｂとを加えて試験例１の方法に準
じてIFを誘起し、その活性を測定した。試
料Ｂの量を10^-3から10^-7mg/mlの範囲で用い
た。誘起されたIFの活性値が約３〜10倍高
くなり、細胞の応答性も良くなつた。 (2) 前述の(D)（）の方法に準じてヒトの脾臓
細胞浮遊液をつくり、ヒトIFは100単位を加
えて処理した。誘起されたIFの活性値が約
３〜６倍高まり、細胞の応答性も良くなつ
た。 (3) ウサギ（１群５羽）に100万単位のウサギ
IFを静脈注射し６時間後に(A)（）(1)の方
法に準じて試料Ｂを投与した。血清中のIF
活性値が約３〜10倍増加し、しかもIF誘起
時間が延長されることがわかつた。 (4) 次に、ウサギ（１群５羽）に100万単位の
IFを静脈内注射し、翌日前記(B)(3)(b)の感染
防禦試験を行なつた。ウイルスを10ID₅₀接種
した局所は完全に発痘が阻止された。しかし
100ID₅₀接種した局所は接種数の1/3に僅かの
発痘をみたが、感染後２週間までにすべて消
失した。 (E) 毒性 (1) 急性毒性試料Ｂを含む生理的食塩水をマウス（オ
ス、メス、１群20匹）とラツト（オス、メ
ス、体重約95ｇ、SPF−SD系、６週令、１
群20匹）にそれぞれ投与して測定したID₅₀は
次表の通りで、オスとメスとの間に著差はな
かつた。

【表】 (2) 亜急性毒性 (a) ラツト（体重約95ｇ、SPF−SD系、６
週令、１群20匹）を用いた。試料Ａを
0.35、0.7、1.4、2.8ｇ/Kg（ラツト）に区
分し滅菌水0.25〜0.5mlに加え、各群に毎
日一定量を３ケ月間連続的にゾンデで強制
経口投与した結果、試験中、対照群とくら
べて、一般的な健康状態が良くなり、体重
増加率が高かつた。３ケ月後に解剖し、病
理学的に調べたところ、異常が認められな
かつた。従つて正確な亜急性毒性値を確認
することができなかつた。 (b) 健康な成人（男）５例に、試料Ａ毎日
200mgを10日間連続的に経口投与したとこ
ろ、有意義な副作用は出現せず、一般的な
健康状態が改善され、気分壮快であつた。一方では、本活性物質であるヨモギ属植物は一
般に毒性が低く、ある種のものは、日本、中国等
で古くから食用として栽培され、また薬草、香料
製造原料として広く用いられている。他方では、
上記試験によつて、本活性物質の毒性が極めて低
いことが確認された。従つて、本活性物質をヒト
および動物に経口投与する場合には、実用的に、
限外過後の粗成品を多量に連続投与しても、毒
性による有意義な副作用がないと認められる。本活性物質をヒトまたは動物に投与するため
に、本活性物質を有効成分とし、薬学的に許容し
得る担体または賦形剤を含有する薬学的組成物が
提供される。この組成物は経口、直腸内、腸管
外、経皮、または粘膜内投与に適した形態であり
得る。たとえば経口投与用は固体でも液体でもよ
く、散剤、カプセル剤、顆粒、錠剤、コートされ
た錠剤、シロツプ、乳剤、懸濁液、またはドロツ
プの形でもよい。この種の組成物は製薬に常用さ
れる担体または賦形剤を含んでいる。適当な錠剤
用賦形剤の例はラクトース、バレイシヨ澱粉また
は可溶性澱粉、およびステアリン酸マグネシウム
で、腸管外投与用担体の例は、滅菌された水、生
理的食塩水、またはアーモンド油であつて、アン
プルに入れてもよいし、または使用直前に活性物
質を加えてもよい。これらの組成物は所望により、製薬に常用され
る結合剤、安定化剤、乳化剤、懸濁化剤、分散
剤、潤滑剤、防腐剤、増量剤等を含んでもよい。実用的な剤形の他の例は、粘膜用としては、バ
ツカル、トローチ、点眼剤、坐剤等、注射用とし
ては、水溶剤、油溶剤、懸濁剤等、吸入用として
は、吸入剤、噴霧剤等、外用としては、軟膏、硬
膏、塗布剤、浴剤、噴霧剤等である。これらの組成物を活性物質の一定量を供給でき
るように成形された用量単位として調製すると有
利である。その適当な例は、錠剤、コートされた
錠剤、アンプル、カプセル、坐剤である。用量単
位に含有される活性物質の実用的な量は、静脈注
射剤の単位含有量を１とした場合、たとえば経口
投与剤では約４〜10倍、皮下注射剤では約２〜３
倍、筋肉注射剤では約1.5〜３倍、バツカル、ト
ローチでは約２〜４倍、坐剤では約５〜10倍がよ
い。製剤例 (1) 注射剤生理的食塩水 1.0 ml 試料Ｂ 0.01ｇ無菌的に２mlアンプルに封入する。 (2) トローチ白糖１ｇ試料Ｂ 0.05ｇ澱粉 0.05ｇ (3) 坐剤ポリエチレングリコール400 0.8ｇ液体ポリエチレングリコール1500 0.2ｇ試料Ａ 0.2ｇ (4) シロツプ CMC−Na 0.2 ｇ単シロツプ 20 ｇシクラミン酸Na 0.1 ｇエチルパラベン 0.04ｇ試料Ｂ 0.1 ｇ (5) 軟膏精製ラノリン５ｇ蜜ろう５ｇ白色ワゼリン 87ｇ試料Ｂ３ｇ (6) 塗布剤水酸化カリウム 0.3ｇグリセリン 20 ml エタノール 25 ml 試料Ｂ 2.5ｇ水を加えて 100mlにする製法の例は次の通りである。製造例１乾燥したヨモギの葉（１Kg）を水洗した後、水
（20）中に常温で３日間放置することにより抽
出し、これを遠心処理（6000r.p.m.、20分間）し
て、抽出液と残渣に分け、残渣を水（各５）で
２回洗浄し、洗液を抽出液に合わせた。こうして
得られた抽出液をUD−６型限外過器（バイオ
エンジニアリングKK、東京）で、UK200限外
過膜（分画分子量20万、東洋紙社製）を用いて
限外過した（圧力３Kg/cm²）。残留物を集めて凍
結乾燥し、褐色粉末（19.676ｇ）を得た。この粉
末（1.5ｇ）を水（５ml）に溶解し、その水溶液
をセフアデツクスＧ−200（フアーマシア・フア
イン・ケミカルAB、スエーデン国）を充填した
カラム（4.5×70cm）に溶解し、その水溶液をセ
フアデツクスＧ−200（フアーマシア・フアイ
ン・ケミカルAB、スエーデン国）を充填したカ
ラム（4.5×70cm）に添加し、水（600ml）で溶出
し、溶出液を各３mlの区分に分け、27番から60番
までの区分に合わせて凍結乾燥し、白色状粉末
（220mg）を得た。さらに精製するために、この粉
末（100mg）を0.01Mトリス−塩酸緩衝液（PH
7.0、＝0.01）（５ml）に溶解し、DEAEセフア
デツクスＡ−50（フアーマシア・フアイン・ケミ
カルAB、スエーデン国）を充填したカラム（2.5
×70cm）に添加し、0.1Mトリス−塩酸緩衝液
（PH9.0、0.5M食塩を含む、300ml）で溶出し、溶
出液を各３mlの区分に分け、15番から30番までの
区分を合わせた。この溶液を脱塩後、凍結乾燥
し、不定形な白色状粉末（62.7mg）を得た。この
ものの理化学的および生物学的特性は前記の通り
である。これを第１の白色状粉末と比べると、
IF誘起活性はおよそ同じであるが、不純物の量
が減少した。高純度であることが超遠心法および
電気泳動によつて確認された。比較のために各工程で得られた物質のIF誘起
活性を後記試験例１記載のイン・ビトロ法で測定
した結果は次表の通りであつた。

【表】製造例２乾燥したカワラヨモギの葉（１Kg）を水洗した
後、これに水20を加え室温に２時間放置後、
1N水酸化ナトリウムを加えてPHを8.5に調整し
た。次にこれを65℃で２時間加温抽出した。その
後、製造例１の方法に準じて精製した。この精製物（60.2mg）の理化学的および生物学
的特性は、実施例１によつて得られたものの特性
と大差はなかつた。製造例３−26 第８表に示した乾燥した植物の葉、茎および種
子を製造例１記載の方法に準じて別々に処理し、
すべての製造例の第２工程で得られた産物を後記
試験例１記載の方法（イン・ビトロ法）によつ
て、IF誘起活性を測定した。結果を第８表に示
す。

【表】

【表】試験例１ IF誘起法およびIF活性測定法（参考文献：Y.
Kojima、Kitasato Arch.、Exp.、Med.、43：
35、1970） (a) イン・ビトロ法によるIFの誘起方法ウサギ（体重約１Kg、ニユージーランドホワ
イト種、SPF）を全採血して殺し、脾臓、骨髄
およびリンパ節細胞を採取し、子牛血清10％を
含むイーグルMEM培地（日水製薬製）を用い
て混合細胞10⁷／mlを含む細胞浮遊液をつく
り、各浮遊液区分（１ml）に、本発明の製造例
１記載の方法で得られIF誘起剤10、１、0.1、
0.01μｇ/mlをそれぞれ加え、25℃で24時間培
養後、各培養液を遠心処理してその上澄液をと
り、IF活性測定用に供した。 (b) イン・ビボ法によるIFの誘起方法製造例１記載の方法で得られたIF誘起剤の
水溶液（500μｇ/ml）２mlをウサギ（体重約１
Kg、ニユージーランドホワイト種、SPF）の耳
静脈に注射し、１、２、４、６時間後に採血
（２ml）し、その血清をIF活性測定用に供し
た。 (c) IF活性の測定上記(a)(b)法ともに、産生されたIF活性の測
定は、ウサギ腎株化細胞（RK−13）を用いた
50％プラツク半減法で行なわれる。まず予めシ
ヤーレに準備しておいた上記細胞の単層培養上
に、上記(a)(b)法で得られた適当に稀釈したIF
試料溶液を加え37℃で１夜培養後、水疱性口内
炎ウイルス（Vesicular stomatitis virus）を
攻撃用ウイルスとし、そのプラツクの減少率を
指標としてIF活性を測定した。なお、IF活性
の単位はIF無処置細胞におけるプラツク数の
50％を示す稀釈の逆数として表現される。試験例２ IF誘起剤であることの証明方法上記(a)、(b)の方法で産生さたIF試料は、同動
物種のウサギRK−13細胞上で水疱性口内炎ウイ
ルスの増殖を抑制する他、ワクシニアウイルス
（Vaccinia virus）の増殖も抑制するが、動物種
の異なるマウスのＬ細胞では水疱性口内炎ウイル
スの増殖を抑制しない。また0.08％トリプシンを
37℃で２時間作用させるとそのIF活性は失活す
る。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の活性物質の紫外線吸収スペク
トル、第２図は赤外線吸収スペクトルを示す。

Claims

【特許請求の範囲】

１キク科ヨモギ属に属しインターフエロン誘起
活性物質を含有する植物またはその変員の組織の
抽出物から回収された上記活性物質を有効成分と
し、これを薬学的に許容し得る担体または賦形剤
と共存させてなるインターフエロン誘起用組成
物。