JPS615798A - 生菌数測定方法およびその装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は微生物等の生菌数測定方法およびこの方法で使
用される生菌数測定装置に関する。

（従来の技術） 微生物培養槽から取り出された多数の微生物金倉む培養
液中に存在する微生物の数を計数する手段としては、微
生物を含まない数−の等量の培養液を複数の試験管に注
入して意備し、微生物を含む所定量のサンプル液をこの
準備された試験管に注入し、次にこの試験管が上記注入
したサンプル液と同量の培養液をピぜットを用いて取り
出し、別の漁備された試験管に注入し、以下順次新たに
微生物が注入された試験管からピイットを用いて同様に
微生物が注入されていない別の試験管に注入してサンプ
ル液を希釈し、適当なｆ＠率で希釈されたサンプル液を
含す培養液をアｆ７″レートに往動し、この後この培養
液に含まれる微生物を培養して、これによって発生した
コロニーの数を計数し、この計ｔされたコロニーの数に
希釈倍耶を乗算してサングル液中の生菌である微生物の
ａを推定する方法が最も一般的によく使用されている。

（発明が解決しようとする問題点） 上記従来の生菌数測定方法は全く人手によって行なわれ
るものであり、操作が極めて複雑であ”る。

また、ビイットを用いて、液の採取、注入を行なうので
正確な所望の倍率で希釈を行なうことができない。すな
わち１人為的な誤差が容易に介入して来る・さらに、−
変倍養液の、移入操作が行なわれたビイットは完全に洗
浄殺菌を行なった後で々ければ再び使用できず、このた
め通常は洗浄殺菌の行なわれた？ｉｌ数のビ被ットを用
意する必要があった。オた、希釈操作は外部から菌が培
養液中に入いらないようＣで、クリーンルームあるいは
クリーンペンチ内で行なう必要があり、設備投資に多大
な金額を必要とした・さらに、ビにットと試験管を用い
るので、比較的多量のサンプル液および培養液を必要と
するという問題があった。

なお、液保持用の微小な凹部を生端に有する希釈用の小
片（通常ダイリュータと呼ばれている）と、一連の液保
持セルとを用いて自動的に溶液を連続希釈する装置が知
られているが、この装置を用いて生菌を含むサンプル液
を希釈しようとすると、前の希釈操作でダイリュータに
付着した生菌が後の希釈換作で後続の液保持セルに移入
され、サンプル液を単に確率論に従って希釈することが
できず、サンプル液に含まれる生菌数を正確に推定する
ことができなかつ友。

本発明は上記従来の方法あるいは装置が抱えていた問題
を有さない生菌数測定方法およびこの方法に使用される
生菌数測定装＠を提供することにある。即ち、本発明の
目的は、微生物生菌を含むサンプル液の希釈操作を人手
を介すことなく、自動的に行なうことができる装置を提
供することにある６ま几、本発明の別の目的は、正確な
所望の倍率で生菌サンプル液の希釈を行なうことのでき
る装置を提供す”ることにある。さらに、本発明の別の
目的は、サンプル液中の微生物の生菌数を極めて正確に
推定する生菌数測定方法を提供することにある。また、
本発明の別の目的は、同一の部品を常時装置に知人れた
状卯で繰り返し使用することのできる装４を提供するこ
とにある。さらに、本発明の別の目的は、クリーンルー
ムを必要としない生菌数？ｎ１１定装置ｆを提供するこ
とにある。また。

本発明の別の目的は、少量のサンプル液によりこのサン
プル液中に含まれている微生物の生菌数を正確に推妃す
ることを可能とする生菌数測定方法および生菌数測定装
置を提供することにある。

（問題点を解決するための手段） 本発明の生菌数測定方法は、サンプルセルに保持された
生菌全含有するサンプル液に、無菌水を保持するダイリ
ュータを挿入して撹拌し、このダイリュータを、複数の
培養セルが０行ｍ列のマ）ＩＪラックス状一体的に＆［
された培養プレートの第１列目の培蕃セルに保持される
インディケータ−を含有する所定量の培養液中に挿入し
て撹拌して、所定量のサンプル液を前記サンプルセルか
ら前記第１列目の培養セルに移入し、前記ダイリュータ
を洗浄、殺菌し。

このダイリュ〜りに無菌水を保持せしめ、このダイリュ
ータを第１列目の前記培養セルに保持される・培養液中
に挿入して撹拌し；このダイリュータを第２列目の培養
セルに保持されるインディケータを含有する所定量の培
養液中に挿入し゛て梗押して、所定量の培養液を第１列
目の前記培養セルから第２列目の前記培養セルに移入し
、 前記ダイリュータを洗浄、殺菌し、 このダイリュータに無菌水を保持せしめ、以下、第ｍ列
目の各培養セルまで、隣接セル間で同様な操作を行なっ
て、前記サンプル液を希釈し、 この彼所定時間前記培養プレートをインキューイータ内
に放置し、 各列ごとに変色した培養セルの数を計数し、を最大にす
る×を求め、とのＸの値をサンプル液中に含まれる生菌
数とする生菌数測定方法（但し。

ｒｋ、Ｓｋ　　はそれぞれ第に列目の培養セル中変色し
たセルの数と、ｆ色しないセルの数を示し、ｃｋは ”　””　”ｓ’　（Ｉ　　Ｐ、）ｋ　（１ｐ、）を満
足する。ここで各培養セルに注入された生菌を含まない
培養液の体積をＶとし、ダイリュータによって移送され
る培養液の体積をｖｌ　　とし、ダイリュータによって
培養セル内に移入される無菌水を体積をｖｌ　　とする
、と、　　ｐｓ＝□、Ｖ＋ｖ２ ｐｐ＝＝□である。） Ｖ　＋　ｖ　１ 本発明の第１の生菌数測定装置は、内部を外気と隔離す
るケーシング、このケーシング内に、テーブル、このテ
ーブルを左右に移動する駆動装置およびダイリュータを
回転し、かつ上下移行を行なうダイリュータヘッドを備
え、前記チーグル上に、マトリックス状に配された複数
の培養セルを有する培養プレート、洗浄水液だめ、洗浄
水をふきとるワイパー、ダイリュータを乾燥かつ滅菌す
るヒータ、ダイリュータに殺菌水を注入する噴水器が、
この１１−で載置されており％前記ケーシングの培養グ
レートが載着される側の側壁に、エアーフィルタが設け
られた空包口が設けられており、前記噴水器へ無菌水を
輸送するパイプを、弾性変性させることにより、前記噴
水器への無菌水の供給を断続させ、かつ水ｔ−ｆ１ｉｒ
記噴水器から噴出させるぜん動Ｉンプが前記ケーシング
の外部に設けられており、前記駆動装置、前記ダイリュ
ータヘッドおよび前配ぜん動ポンプを制御手段により制
御、　することにより、微生物の生菌を含んだサンプル
液を希釈する。

本発明の第２の生菌数測定装置は、内部を外気と隔離す
るケーシング、このケーシング内に、テーブル、このテ
ーブルを左右に移動する駆動装置およびダイリュータ全
回転し、かつ上下移行を行なうダイリュータヘッドを備
え、前記テーブル上に、マトリックス状に配された複数
の培養セルを有する培養プレート、洗浄水液だめ、洗浄
水をふきとるワイパター、ダイリュータを乾燥かつ滅菌
するヒータ、アルコール液だめ、アルコールをふきとる
ワイパーおよび無菌水液だめが、この順で載置されてか
り、前記ケーシングの培養プレートが載置きれる側の側
壁に、エアーフィルタを有する空気口が設けられており
、前記駆動装置卦よび前記ダイリュータヘッドを制御手
段によυ制御することによシ、微生物の生菌を含んだサ
ンプル液を希釈する。

本発明の第６の生菌数測定装置は、内部を外包と隔離す
るケーシング、このケーシング内に、テーブル、このテ
ーブルを左右に移動する地動装置およびダイリュータを
回転し、かつ上下移行を行なうダイリュータヘッドを備
え、前記テーブル上に、マトリックス状に配された複数
の培養セルを有する培養プレート、洗浄水液だめ、洗浄
水をふｅと、？：、’フィバー、アルコール液だめおよ
び無菌水液だめがこの順でａ！置されており、前記ケー
シングの培養グレートが載置される側の側壁に、二了−
フィルタを有する空気口が設けられており、前記駆動装
置卦よび前記ダイリュータヘッドを制御手段により制御
することにより微生物の生菌を含んだサンプル液を希釈
する。

（発明の効果） 本発明の方法においては、隣接する培養セルへ、所望量
の培養波音ダイリュータを用いて順次移入することによ
りサンプル液全希釈する際に、移入操作が一度終了した
毎に、洗浄殺菌を竹なうようにしたので、前の操作によ
ってダイリュータに付着した微生物の生菌が低濃度側の
培養セルに移入することがない。即ち、生菌の移入が生
じるか、生じないかの臨界的な培養セルにおいても全く
車に確率論的に従って、生菌の移入が達成される。

従って最終的に得られる各培養セルに希釈操作にともな
って微生物の生菌が移入したか移入しなかったかの結果
から、逆に確率論に基づいてサンプル液中に存在した微
生物の生菌数全精度よく推定することができる。また、
隣接する培養セルへ培養液を移入する際に、ダイリュー
タの液保持凹部に無殺水を完全に注入せしめてから培養
液の移入操作を行なうようにしたので、ダイリュータの
液保持四部に勿泡が生じて、所定量の培養液が隣接する
培養セルへ移入されないということは発生せず、常に所
定量の培養液が隣接する培養セルへ移入され、結果とし
てサンプル液中に存在した微生物の生菌数を精度よく推
定することができる。式らに、同一の希釈操作ｌ数平行
しソ畜なうことができるので、これらの複数の結果を用
いることによシ、サンプル液中に存在する生菌数を極め
て精度よく推定することができる。

本発明の装置は生菌を含むサンプル液の希釈を人手を介
すことなく全く自動的に行なうことができる。まｔ１正
確な所望の倍率でサンプル液の希釈を行なうことができ
る。さらに、培養グレート以外の同一の部品を常時装置
に組入れた装置で繰シ返し使用することができる。また
、本発明の装置はケーシングを有しているので、クリー
ンルームあるいはクリーンペンチを必要としない。さら
に、少量のサンプル液からこのサンプル中に含まれる微
生物の生菌数を正確に推定することを可能とする。

（実施例） 以下、本発明を実施例に基づいて詳細に説明する。

（第１実施例） 第１図は本発明の第１の生菌数測定装置の実施例を示す
概略図全体図である。

本発明の生菌数測定装置は、ケーシング１を有しており
、ケーシングｌ内が外部と隔離されている。このケーシ
ングｌ内には、液保持用の微小々凹部を有し、後述する
培養セルの行数に等しい複数のダイリュータ２の上下移
行並びに回転を行なうダイリュータヘッド３と、駆動装
置４によって図中左右に移動されるテーブル５が配置さ
れている。ダイリュータ２としては第２Ａ図および第２
Ｂ図に示されるような先端に液保持凹部２ａを先端に有
するものを使用できる。このテーブル５には図中右方か
ら、複数の培養セルがマトリックス状に一体的に配され
た培養デレートロ、ダイリュータ２を洗浄するための洗
浄水を保持する液だめ７、ダイリュータ２に付着する洗
浄水をふきとるワイパー８、ダイリュータ２の乾燥、殺
菌を行なうヒータ９、ダイリュータ２の液保持四部へ液
体を注入する噴水器１０がこの順に設けられている。

ケーシングｌのグレート４が設けられた側の側壁にはエ
アーフィルタ１１が設けられた空入口１２が設けられて
おり、ケーシングｌ内部に無菌空気が流入されるように
なっている。ケーシング１上部にはエアーアイター１３
′ｆ、備えた貯水タンク１４が載置されている。この貯
水タンク１４からは、シリコンチューブ１５が延長され
ている。このシリコンチューブ１．５は途中層から２つ
のシリコンチューブ１５’、１５’　に分かれており、
一方のシリコンチューブ１５’が液だめ７へ水を供給し
うるように延びており、他方のシリコンチューブ１５〃
は噴水器ｌＯへの水の供給を行なう０ケーシング１の外
部にシリコンチューｆ１５’。

１５’の一部が位置しており、ケーシングｌの側壁には
シリコンチューブ１５′を挾んで液の流通全制御するパ
ルｆ１６と、シリコンチューブ１５１を圧迫して弾性変
形することにより、噴水６１　’０から水の噴出を行な
うためのせん動ポング１７が設けられている。

本発明で使用される培養グレート６は第５Ａ図に示され
るように、微生物の生菌を含まない培養液が注入される
０行ｍ列（図中では６行９列）の培養セル６ａと微生物
の生菌を含むサンプル液が注入される１列のサンプルセ
ル６ｂとからなっている。サンプルセル６ｂは各行毎に
分割する必要はなく、第５Ｂ図に示されるように、細長
い溝であって本よいし、さらにはこのサンプルセル６ｂ
を培養プレート６と分離してテーブル５上に載置しても
よい。

次に１以上の様に構成された生菌数測定装置を用いての
希釈操作と、サンプル液中に含まれる生菌数の推定方法
’ｆ−第１図と模式図第４図を用いて説明する。

まず、培養プレート６の最も左側のサンダルセル６ｂに
微生物の生菌を含むサンプル液を注入し、このサンプル
セル６ｂの右側に位置する各培養セル６　ｅ’　　ｅ　
６　Ｂ’・・・・・・に微生物の生菌を含まず。

微生物が増殖することによって代謝物質が培養液に放出
きれ液中のｐＨが変化した場合このｐＨの変化を色の変
化によって示すインディケータを含有する培養液を所定
量均等に注入する。このようにして″サンプル液と培％
液とが注入された培養プレート６をサンプル液が注入さ
れたサンプル七ｋｌｚＥ　図中左方に位置するように液
だめ７の右側のテーブル５上に載置する。このようにグ
レート６をテーブル５上に載置すると、ケーシングｌの
突入口１２に関して、培養セル６ａがサンプルセル６ｂ
に対して上流側に位置することＫなり、上流側に近くな
るにつれて、培養セル中の培養液の微生物の生菌濃度が
低くなるように％希釈操作を行なえば、空入口１２から
の空気流によって、高濃度側の培養セルから低濃度度側
の培養セルに微生物の生菌が飛ばされることがないので
、確率論的扱いをさまたげることはない。また、微生物
の生菌を含有する培養液を保持するダイリュータが、培
養液の移入操作が行なわれていない培養セル上を移行し
ないので、ダイリュータによる希釈操作の際に不用意に
微生物の生菌が培養セルに入いらないので、このことも
確率論的扱い上極めて有利である・なお、微生物の生菌
を含まない培養液が注入点れた一列の培養セルを左側か
ら駆１列目の培養セル、第２行目の培養セル、・・・・
・・、第０行培養セルとする。

装置内あるいけ、外部に設置されたマイクロコンピュー
タ等の制御手段によって駆動手段４を駆動することによ
りテーブル５ｖｉｌ−図中右方に移動してダイリュータ
２を噴水器７の直上に位置し、ぜん動ポング１７を駆動
して、ダイリュータ２の液保持凹部に無菌水を注入する
。次に、テーブル５を移動してサンプル液が注入された
サンプルセル６ｂが／イリュータ２の直下に位置するよ
うにし。

ダイリュータベット３ｆ、稼動してダイリュータ２を下
方に下げ、ダイリュータ２の液保持凹部が設けられた先
端゛をす／デル液中に挿入しかつ回転して無菌水を混合
し、ダイリュータ２の液保持四部にサンダル液を移入し
、この後ダイリュータ２を上方へ移行し、テーブル５を
図中右方へ移動して。

第１列図の各培養セルが、グイリュータ２の直下に位置
するようにする。この状態で、ダイリュータ２を垂下し
て、ダイリュータ２の先端を第１列の各培養セルに挿入
し、かつ培養液中で回転して、ダイリュータ２の液保持
凹部に保持されているサンプル液″’ｉＪｆ！１列の各
培養セルの培養液中に撹拌混合する。この撹拌混合した
ダイリュータ２を上方へ移行して１次にテーブル５を右
図右方へ移行して、このダイリュータ２を液だめ７中の
無殺菌水で洗浄して、次に、ワイノ４−８でダイリュー
タ２に付着した水をふき取シ、さらにグイリュータ２全
ヒータ９で殺菌乾燥したのち、ダイリュータ２の液保持
凹部に噴水器ｌＯにより無菌、水を注入するとともに、
ヒータ９により加熱されたダイリュータ２が冷却される
。このようにして、洗浄。

殺菌されかつ液保持凹部に無菌水が注入されたダイリュ
ータは、再び第１列目の培養セル中に進入され、ダイリ
ュータの保持していた無菌液が第１列目の培養セルの培
養液と混合されたのち、この第１列目の培養セルから所
定量の培養液が第２列目の培養セルの培養液中へ移入混
合させる。この操作が終了したのちは、上述と同様にし
てダイリュータ２の洗浄、殺菌、無菌水の注入が行なわ
れ、第２列目の培養セル６８′から第５列目の培養セル
６ａ’への培養液の移入操作が行なわれ。

以下第ｎ列目の培養セルまで全く上述と同様にして培養
液の移入操作が行なわれる。なお、上記した希釈操作に
おいては、生菌を含まない所定量の培養液は一度に各培
養セル６ａ’　　、６ａ’　　＋・・・・・・に注入さ
れたが、希釈操作にともなってｌｌ１１次隣接する培養
セルに、生菌を含まずインディケータを含有する培養液
を注入するようにしてもよく、このようにすると希釈操
作に用する時間を短縮することができる。このことを達
成するためには、培養液を各培養セルに滴下する滴下手
段を装置内に設けることが望ましｂ・ ワイノ＋−Ｂとしては、第５図に示されるようにセラミ
ックヒータ８ａにグラフウール８ｂを巻いたものが、繰
り返えし使用可能であるので好ましい。またヒーター９
としてもダイリュータ２の液保持凹部のみを加熱するの
ではなく、第６図に図示したように少なくとも３つのヒ
ーター９　ａ　＋９ｂ、９ｃｅ設置し、ダイリュータ２
の側部をも加熱乾燥されるようにされているのが好まし
い。

また培養液史にダイリュータを侵入させる場合も、ヒー
タ　９によって殺菌される部分以外の箇所が、培養液中
に侵入しないように、ダイリュータ−ヘッドの移動範囲
を規定することも確率論的処理を阻害しない上で重要で
あるＯ さらに、培養液中に微生物の生菌の増殖に無害な表面活
性剤（例えばＴｙｅｅｎ　２０　）　′ｆ：混合すると
、ダイリュータの液保持凹部に培養液あるいは無菌水が
、液保持凹部忙気泡を作ることなく、スムースに侵入す
るので、正確な所望の量の培養液あるいは無菌水の取シ
出し、移入操作を行なうこと力Ｉできる・ このようにして各培養セルに隣接する培養セルから所定
量の培養液を移入した後は、培養グレート６の各培養セ
ル内に注入された培養液をインキューベータ内で放置し
く例えば、３７℃１日）。

培養液中の微生物の増殖を行なう。微生物の増殖が行な
われると、微生物が放出する有機酸によってｐＨが下が
り、これによって培養液中のインディケータの色が変化
する。（計数される微牛部の生菌がＢ目ｉｄｏ　ｂａｃ
ｔｅｒｉａであり−、インディケータとしてＢｒｏｍｃ
ｒｅｓｏｌ　−ｇｒｅｅｎ　　２！ｌ（使用されると、
微生物の生菌が存在する培養セルは緑色に変色する。）
このように変色し九培養セルの数を各列毎に計数して、
サンプル液中に存在する微生物Φ生菌数を推定するのだ
が、以下このサンプル液中に存在する微生物の生菌数の
推定方法を説明する。

Ｘ個の微生物の生菌とこの微生物と同一の太きさのＶ−
Ｘ個の仮想的な水粒子力）ら培養液力；構成されている
と仮定し、この培養液から１個の粒子を取り出した場合
、この取り出した１個の粒子中に２個の微生物の生菌が
含まれる確率は超幾何確率によって。

（ビ） と表わさられる。

ＶとＶは極めて大きいのでスターリング公式が適用でき
、（１）式は と近似しつる。

本発明の培養液の希釈操作は、５つの基本操作の組み合
せ覧よって構成されており、これら５つの基本操作にお
ける生菌の取り出し確率を以下に示す。

（ａ）　　第７ａ図に示されるよう、微生物の生菌８個
を含んだ体積Ｖの培養液Ｋ、体積ｖ２　　の無菌水を注
入して混合し、この後体積ｖ２　　の培養液を取り出し
た際に、この培養液にｂ個の微生物の生菌が取り出され
る確率は。

Ｐ１＝（：）Ｐｓｂ（１−Ｐｓ）ａ−ｂ（３）で得られ
る。

（但し、ｐ５＝□である。） Ｖ＋Ｖ２ （ｂ）　　第７ｂ図に示されるように、微生物の生菌を
含まない体ｆ＃ｖの培養に％に個の微生物の生菌を含む
体積ｖ１　　の培養液を移入して混合し、この後、ｉ個
の微生物の生菌を含む体積ｖ１　　の培養液金塩り出し
、次に体積ｖ２　　の無菌水を移入混合したｉ、に−ｉ
個の微生物の生菌を含む体積ｖ１　　の培養液を取り出
す確率は、と表わすことができる。

（但し％　Ｐｐ−百） 第（４）式は二項公式を使うことによりｐ２　：　［Ｐ
２＋Ｐｓ　（１−Ｐｐ　）　］　ｋ”’と簡略化するこ
とができる。

（Ｃ）　　第７Ｃ図に示されるように、微生物の生菌を
含まない体積Ｖの培養に、に個の微生物の生菌を含む体
積ｖ１　　の培養液を移入して混合し、この後、ｉ個の
微生物の生菌を含む体積ｖ１　　の培養液を取シ出し１
次に体積ｖ２　の無菌水を移入混合した後、ｍ個の微生
物の生菌を含む体積ｖ２の培養液を取り出す確率は。

と表わすことができ、この第（５）式は二項公式を使う
ことにより、 と簡略化することができる。

なお、培養液と無菌水をダイリュータに保持せしめる方
法あるいは液体を保持するセルの大きさ、さらには培養
液と無菌水の粘度に相界があるとダイリュータによって
運輸される液体の量に差異ができ、一般にはｖｉｔｈｉ
−ｖ２である。

上記、第（３）式、第（４）式、第（５）式から第に列
目の培養セルに微生物が移入された確率は、ＣＩ（＝　
１−Ｐｓ”（１−’ρ’ｐ＞’　（１−Ｐｓ　）　　　
　　（６１と表わすことができる。

従って％第に列目の培養セル群に微生物の生菌が存在す
るセルの数を「ｋ　とし、微生物の生菌が存在しないセ
ルの数をＳｋ　　とすると。

全確率Ｐ７は、 と表わすことができる。

Ｐ７　　を最大とするＸの値をもとめると、サンプル液
中の微生物の生菌数を推定することができる。

このＰ７　を最大とするａの値の導出は、第（７）式を
微分し、この微分式を満足するＸの値を求めればよいの
であるが、解析的に解くことは不可能であるので、実際
にはニュートンラプソン法等の数値解決によってＸ値を
決定する。第（７）式かられかるように、培養セルの行
の数を増大すると、得られるＸの値の確らしさが向上す
ることは言うまでもない。

（第２実施例） 第８図は本発明の第２の生菌数測定装置の実施例忙おい
て、テーブル上に載置される各要素を模式的に表わした
図である。

本実施例を第７実施例と比較すると、無菌水をダイリュ
ータに噴入する噴水器１’ｌの代わりに、単にアルコー
ルを保持する液だめ２１が配置され。

この液だめ２１の左方にワイノ４−２２と、無菌水を保
持する液だめ２３が配置されている点が異なっている。

図に示されるように、隣接する培養セルへ培養液を移入
する操作を終了したダイリュータ２は第１実施例と同様
に、洗浄液だめ７において洗浄され、ワイパー８で水が
ふき取られ、ヒーター９で乾燥、殺菌されたのち、アル
コール液だめ２１で、ダイリュータ２の先端にアルコー
ルが付着されたのち、このアルコールがワイノ４−２２
でふき取られ、こののち液だめ２３においてダイリュー
タの液保持凹部に殺菌水がディピツングによって注入さ
れる。このダイリュータ２への殺菌水の注入が終了した
のちは、次の隣接する培養セルへの培養液への移入が行
われる。このように、−坦アルコールがダイリュータに
付着されるト、タイリュータの液保持凹部の内壁の親水
性が櫃めて効止し。

ディピングによってもダイリュータの液保持凹部に殺菌
水が、所定量注入される・なお、アルコール液だめとし
ては、第９Ａ図および第９Ｂ図に示されるように、アル
コール注入口２１ａを介してアルコールを液だめ２１の
底部から噴出させ、これによって、ダイリュータ２の液
保持四部の全内壁にアルコールが付着させるようにする
と、より確実に所定量の培養液の移入操作を達成するこ
とができる。液だめ２１からあふれたアルコールはト°
レイ７２１ｂｆｔ介して外部に排出される。

（第３実施例） 第１０図は本発明の第５の生菌数測定装置の実施例にお
いて、テーブル上に載置される各要素を模式的に表わし
た図である。

本実施例においてに、第一実施例と比較すると。

順でワイノｆ　−８Ｋ隣接して設けられているー。

これに従って、装置の動作を制御する制御装着のシーフ
ェンスも変えられており、 図に示されるように、隣接する培養セルへ培養液を移入
する操作を終了したダイリュータは第１実施態様と同様
に、洗浄液だめ７において洗浄され、ワイパー８で水が
ふきとられる。次に第９Ａ図および第９Ｂ図に示された
ようなアルコール液だめ２１で、ダイリュータの先端が
アルコールによって殺Ｍされたのち、無菌水液だめ２３
において、ダイリュータの液だめ凹部に無菌水が注入さ
れる。このダイリュータへの無菌水の注入が行なわれた
のちは、上記各実施態様と同様に、次の隣゛接する培養
セルへの培養液の移入が行なわれる。

本実施例においては、ダイリュータの殺菌がヒーターを
用いることなく、アルコールの殺菌力によって殺菌する
ようにしたので、ダイリュータの液保持四部に高分子材
料のコーティングを行なうことができ、例えばシリコン
をコートすることにより、ダイリュータの液保持凹部に
所定量の無菌水をスムーズに移入することができる。

（第４実施例） 次に、サンダル中の生菌数を上述の装置を使用して上述
の方法に従って求める一連のシステムを説明する。

第１１図はこのシステムの一例を表わす概略全体図であ
る。

マトリック状に一体的に配された培養セルを有する培養
グレート６は、まず自動液滴装置３０に進入し、ここで
培養セルにインディケータを含んだ培養液が注入される
。次に、この培養グレート６は自動希釈装置３１に進し
、ここで、多量の微生物を含んだサンプル液が培養グレ
ートのサングルセルあるいは希釈装置３１内に設置され
た試料液だめに注入され、この後上述した希釈操作が行
なわれる。この希釈操作が終了したのちは、グレート６
はインキューベータ３２へ移送され、ここで５７℃で２
４４時間放置され、培養液中の微生物の増殖が行なわれ
る。微生物の増殖が行なわれると微生物の放出する有機
酸によって培養液のｐＨが下がり、培養液中のインディ
ケータがこのｐＨの低下に反応して培養液の色が変化す
る。このようにして微生物の生菌が存在するか否によっ
て培養セルの色が具なる培養プレートは、自動読取機３
３へ送られ、ここで各列毎に、変色した培養セルの数が
光学的読み取られ、計数される。この各列毎の変色した
培養セルの数、即ち各列毎において微生物が移入された
培養セルと移入されなかった培養セルの数が求められる
と、このデー・夕は計算機３４へ送られ、上述した計算
手法によってサンプル液中に含まれる微生物数が求めら
れる。この得られた微生物数はそのま咬、あるいは単位
体積当りの微生物数、即ち密度の形で出力装置３５から
出力表示される。この出力装置としては、液晶、ＬＥＤ
のブイスジレイあるいけプリンタを使用することができ
る。なお、読取りが終了した培養プレートは固定化され
て保存されるか、あるいは洗浄、殺菌された後再び生菌
数の測定にｆＦ用される。

（第５実施例） 第１２図は、試料中の微生物数を上述の装置および方法
に従って求める循環システムの概略図である。

複数の培養シートがシートスタッカー４０に積層されて
おり、このシートスタッカー４０から培養プレート６が
一枚づつ自動試料培養液滴下及び希釈装置４１に移入さ
れる。この自動試料培養液滴下及び希釈装置４１におい
ては、培養液と微生物を含んだ試料とが培養プレート６
の所定の培養セルに注入され、かつ上述と同様にして培
養液の希釈操作が行なわれる。希釈操作が終了した培養
プレート６けインキューベータ４２へ送られ、所定の条
件で所定時間放置される。微生物の増殖が行なわれ、変
色したセルの数が自動計数計算装置４３において各列毎
に計数され、この自動計数計軍装ｆＩｔ、４３において
上述の方法に基づいて試料中の微生物生菌数が決定され
る。このようにして得られた微生物の生菌数は自動計数
計算装置４３からプリンタ等の出力装置に出力される。

このようにして微生物の生菌数の計数が終了したグレー
ト６は、プレート洗浄器４４へ送られ、培養プレート６
の洗浄、殺菌が行なわれた後、再びスタッカ４０に積層
され、循環使用される。

（第６実施例） 第１３図ｒｆｉ、第１２図に示された循環型システムを
さらに集積したシステムの概略図である。

本実施例においては、自動希釈装置４５が変色培養セル
の各列毎の数を計数する自動読取装置４６上に配置され
ており、各装置４５．４６にグレートを移入するグレー
トフィーダ４７とこれら装置４５．４６から排出された
プレートを受け。

ｊ［するプレートストッカー４８が、各装置４５゜４６
に対して共用されており、自動希釈装置４５゜自動読取
装Ｗｔ４６、グレートフィーダー４７、グレートストッ
カー４８が一体化されている。グレートフィーダー４７
に堆積されている培葦プレートはまず、自動希釈装置４
５へ送られ、ここで、上述した試料の希釈操作が行なわ
れる。この希釈操作を終了した後は、プレートストッカ
ー４８に一旦堆積された後、インキュベータ４９へ送う
レ、インキュベーションが行なわれ、再びグレートフィ
ーダー４７に搬送される。インキュベーションが行なわ
れた後のグレートは今度は自動読取装置４６へ送られ、
変色した培養セルの数が計数された後、再びプレートス
トッカー４８に移入される。

一連の生菌数の測定のためのンークエンスを終了した培
養プレートは、グレートストッカー４８から洗浄器５０
へ送られ、プレートの洗浄および殺菌が行なわれた後、
再びグレートフィーダー４７へ送られ、次のサンプルの
生菌数の測定に用いられる。なお、本実施例においては
、自動読取装置４６によって得られた各行毎の培養セル
の数から試料中の微生物の生菌数を推定するためコンビ
ュ−タを内蔵せしめることができ、さらにまたこのコン
ピュータを希釈装置の制御手段と共用することもでき、
ンステム全体を極めてコン・ゼクトにすることができる
。

【図面の簡単な説明】

第１図は生菌数測定方法に用いられる本発明の第１の装
置の実施例を示す概略図全体図。 第２Ａ図および第２Ｂ図はそれぞれ本発明で使用される
ダイリュータの側面菌および断面図。 第３Ａ図お、よび第５Ｂ図はそれぞれ培養グレートの例
を示す概略図。 第４図は、本発明の第１の装置におｈで、テーブル上に
載置される部品および希釈操作ｔ−ｍ略的に示す模式図
、 第５図は本発明で使用されるワイパーの一例を示す概略
図、 第６図は本発明で使用されるヒーターの一例を示す概略
図、 第７ａ図、第７ｂ図および第７ｃ図はそれぞれ本発明の
生菌数測定方法を説明する図、第８図は、本発明の第２
の装置において、テーブル上に載置される部品および希
釈操作を概略的に示す模式図。 第９八図および第９Ｂ図はそれぞれ本発明の装置で使用
されるアルコール液だめの例を示す平面図および側面図
。 第１ａ図は、本発明の第５の装置において、テーブル１
罠載置される部品および希釈操作を概略的に示す模式図
。 第１１図、第１２図および第１３図はそれぞれ本発明の
装置と方法を使用してサンプル中の生菌数を求める一連
のンステムを示す概略図である。 １・−・ケーシング、２・・・ダイリュータ、３・・・
ダイリュータヘッド、４・・・駆動装置、５・・・テー
ブル、６−・・培養グレーＦｓ６ｍ・・・培養液セル、
６ｂ・・・サンプルセル、７・・・洗浄水液だめ、８・
・・ライ／クー、９・・・ヒータ、１０・・・噴水器、
１１・・・エアーフィルタ、１２・・・空入口、１４・
・・貯水タンク、１５・・・７ＩＪ　コンチューブ、１
６・・・パルプ、１７・・・ぜん動４ンデ、２１・・・
アルコール液だめ、２２・・・ワイ／４−１２°３・・
・無菌水液だめ、３０・・・自動液滴装置、３１．４５
・・・自動液滴装置、３２．４２．４９・・・インキニ
ーベータ、３３．４６・・・自動読取機、３４・・・計
′算機、３５・・・出力装置、４０・・・スタンカー、
４１・・・自動試料培養液滴下及び希釈装置、４３・・
・自動計数計算装置、４４，５０・・・プレート洗浄器
。 ４７・・・プレートフィーダ、４８・・・プレートスト
ラ　゛カー ：　　　　　４ 第２Ａ図 第３Ａ図 第３８図 第４図 第５図　　　　第６図 ＭＶａ図 す 第８図 １９ＡＷｉ 第９８図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）サンプルセルに保持された生菌を含有するサンプ
   ル液に、無菌水を保持するダイリュータを挿入して撹拌
   し、 この、ダイリュータを、複数の培養セルガｎ行ｍ列のマ
   トリックス状に一体的に配置された培養プレートの第１
   列目の培養セルに保持されるインディケーターを含有す
   る所定量の培養液中に挿入して撹拌して、所定量のサン
   プル液を前記サンプルセルから前記第１列目の培養セル
   に移入し、 前記ダイリュータを洗浄、殺菌し、 このダイリュータに無菌水を保持せしめ、 このダイリュータを第１列目の前記培養セルに保持され
   る培養液中に挿入して撹拌し、 このダイリュータを第２列目の培養セルに保持されるイ
   ンディケータを含有する所定量の培養液中に挿入して撹
   拌して、所定量の培養液を第１列目の前記培養セルから
   第２列目の前記培養セルに移入し、 前記ダイリュータを洗浄、殺菌し、 このダイリュータに無菌水を保持せしめ、 以下、第ｍ列目の各培養セルまで、隣接セル間で同様な
   操作を行なって、前記サンプル液を希釈し、 この後所定時間前記培養プレートをインキューベータ内
   に放置し、 各列ごとに変色した培養セルの数を計数し、Ｐ＝（ｒ＿
   ２＋Ｓ＿１）！／［（ｒ＿１）！（Ｓ＿２）！］（Ｃ＿
   １＾ｘ）＾ｒ２・（１−Ｃ＿１＾ｘ）＾Ｓ１ｘ（ｒ＿２
   ＋Ｓ＿２）！［（ｒ＿２）！（Ｓ＿２）！］（Ｃ＿２＾
   ｘ）＾ｒ２・（１−Ｃ＿２＾ｘ）＾Ｓ２…ｘ（ｒ＿ｋ＋
   Ｓｋ）！／［（ｒ＿ｋ）！（Ｓ＿ｋ）！］（Ｃ＿ｋ＾ｘ
   ）＾ｒｋ・（１−Ｃ＿ｋ＾ｘ）＾Ｓｋ…ｘ（ｒ＿ｍ＋Ｓ
   ＿ｍ）！／［（ｒ＿ｍ）！（Ｓ＿ｍ）！］（Ｃ＿ｍ＾ｘ
   ）＾ｒｍ・（１−Ｃ＿ｍ＾ｘ）＾Ｓｍを最大にするｘを
   求め、このｘの値をサンプル液中に含まれる生菌数とす
   る生菌数測定方法（但し、ｒ＿ｋ、Ｓ＿ｋはそれぞれ第
   ｋ列目の培養セル中変色したセルの数と、変色しないセ
   ルの数を示し、Ｃ＿ｋは Ｃｋ＝１−Ｐ＿Ｓ＾ｋ（１−Ｐ＿ｐ）＾ｋ（１−Ｐ＿Ｓ
   ）を満足する。ここで各培養セルに注入された生菌を含
   まない培養液の体積をＶとし、ダイリュータによって移
   送される培養液の体積をｖ＿１とし、ダイリュータによ
   って培養セル内に移入される無菌水を体積をｖ＿２とす
   ると、Ｐ＿Ｓ＝（ｖ＿１）／（Ｖ＋ｖ＿２）Ｐｐ＝（Ｖ
   ＿１）／（Ｖ＋ｖ＿１）である。）（２）内部を外気と
   隔離するケーシング、このケーシング内に、テーブル、
   このテーブルを左右に移動する駆動装置およびダイリュ
   ータを回転し、かつ上下移行を行なうダイリュータヘッ
   ドを備え、前記テーブル上に、マトリックス状に配され
   た複数の培養セルを有する培養プレート、洗浄水液だめ
   、洗浄水をふきとるワイパー、ダイリュータを乾燥かつ
   滅菌するヒータ、ダイリュータに無菌水を注入する噴水
   器が、この順で載置されており、前記ケーシングの培養
   プレートが載置される側の側壁に、エアーフィルタが設
   けられた空気口が設けられており、前記噴水器へ無菌水
   を輸送するパイプを、弾性変性させることにより、前記
   噴水器への無菌水の供給を断続させ、かつ水を前記噴水
   器から噴出させるぜん動ポンプが前記ケーシングの外部
   に設けられており、前記駆動装置、前記ダイリュータヘ
   ッドおよび前記ぜん動ポンプを制御手段により制御する
   ことにより、生菌を含んだサンプル液を希釈する生菌数
   測定装置。 （３）内部を外気と隔離するケーシング、このケーシン
   グ内に、テーブル、このテーブルを左右に移動する駆動
   装置およびダイリュータを回転し、かつ上下移行を行な
   うダイリュータヘッドを備え、前記テーブル上に、マト
   リックス状に配された複数の培養セルを有する培養プレ
   ート、洗浄水液だめ、洗浄水をふきとるワイパー、ダイ
   リュータを乾燥かつ滅菌するヒータ、アルコール液だめ
   、アルコールをふきとるワイパーおよび無菌水液だめが
   、この順で載置されており、前記ケーシングの培養プレ
   ートが載置される側の側壁に、エアーフィルタを有する
   空気口が設けられており、前記駆動装置および前記ダイ
   リュータヘッドを制御手段により制御することにより、
   生菌を含んだサンプル液を希釈する生菌数測定装置。 （４）内部を外気と隔離するケーシング、このケーシン
   グ内に、テーブル、このテーブルを左右に移動する駆動
   装置およびダイリュータを回転し、かつ上下移行を行な
   うダイリュータヘッドを備え、前記テーブル上に、マト
   リックス状に配された複数の培養セルを有する培養プレ
   ート、洗浄水液だめ、洗浄水をふきとるワイパー、アル
   コール液だめおよび無菌水液だめがこの順で載置されて
   おり、前記ケーシングの培養プレートが載置される側の
   側壁に、エアーフィルタを有する空気口が設けられてお
   り、前記駆動装置および前記ダイリュータヘッドを制御
   手段により制御することにより生菌を含んだサンプル液
   を希釈する生菌数測定装看。 （５）生菌を含んだサンプル液の希釈操作を行なう生菌
   数測定装置の所定箇所に、サンプル液の希釈操作を行な
   うために使用する、マトリック状に配された複数の培養
   セルを有する培養プレートを前記測定装置のシークエン
   スに従って自動的に送り込むプレートフィーダを備える
   生菌数測定装置。