JPS6160697A - 新規な誘導体化核酸配列、その製法および核酸ないし核酸配列の検出法 - Google Patents
新規な誘導体化核酸配列、その製法および核酸ないし核酸配列の検出法Info
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- JPS6160697A JPS6160697A JP60187555A JP18755585A JPS6160697A JP S6160697 A JPS6160697 A JP S6160697A JP 60187555 A JP60187555 A JP 60187555A JP 18755585 A JP18755585 A JP 18755585A JP S6160697 A JPS6160697 A JP S6160697A
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、新規な誘導体化ヌクレイン酸配列、その製法
ならびに相補的ヌクレイン酸配列を用いるヌクレイン酸
の検出およびその方法に関する。
ならびに相補的ヌクレイン酸配列を用いるヌクレイン酸
の検出およびその方法に関する。
従来の技術
ヌクレイン酸配タリは通常、検出可能な基で標識された
相補的ヌクレイ７は配列を用いるハイグリッド形成によ
り検出される。これまで、この標識づげを裏放射性同位
元素を有ブーる基の尋人によつ行なわれる。放射性物質
を用いる作業および放射性同筺元素の検出は、着しい欠
点（安全予防措置、装置費用）′？：庄なうので、ハイ
ブリット形成試験のために他の砿戚剤を使用することが
何度か試みられた。
相補的ヌクレイ７は配列を用いるハイグリッド形成によ
り検出される。これまで、この標識づげを裏放射性同位
元素を有ブーる基の尋人によつ行なわれる。放射性物質
を用いる作業および放射性同筺元素の検出は、着しい欠
点（安全予防措置、装置費用）′？：庄なうので、ハイ
ブリット形成試験のために他の砿戚剤を使用することが
何度か試みられた。
西ドイツ国待針出願公開第２９１５０８２号明則誉から
、ヌクレイン酸配列の検出のため、コノヌクンイン酸配
列を、相補的ヌクレイン酸を含存しかつハイグリッド形
成反応のがＪまたは後に酵素に結合することにより化学
的に亥注石れている、指示薬を用いてハイグリッド形成
させる、ヌクレイン直配列の検出法が公知である。
、ヌクレイン酸配列の検出のため、コノヌクンイン酸配
列を、相補的ヌクレイン酸を含存しかつハイグリッド形
成反応のがＪまたは後に酵素に結合することにより化学
的に亥注石れている、指示薬を用いてハイグリッド形成
させる、ヌクレイン直配列の検出法が公知である。
コノ方法は王に、以前から公知のアビシン−ビオチン相
互作用によるものであるりこのためＩＣ）ヌクレイン直
配列の検出の沈めに使用される相補的ヌクレイン直配列
はアビジンないしはビオチンを用いて［、ｌｆＥされる
。欠いで、ハイブリッド形成工僅鏝、標識剤としての酵
素で置戻されているビオチンないしはアビシンと反応さ
せる。
互作用によるものであるりこのためＩＣ）ヌクレイン直
配列の検出の沈めに使用される相補的ヌクレイン直配列
はアビジンないしはビオチンを用いて［、ｌｆＥされる
。欠いで、ハイブリッド形成工僅鏝、標識剤としての酵
素で置戻されているビオチンないしはアビシンと反応さ
せる。
最鏝に、ハイデリツげ形成生成物のｄｌｌ中は、標纏＃
素の酵素活性の測定により行なわれる。この方法は、ビ
オチンがほぼ全ての生物学的材料中に出現するので、こ
れが非常に妨害されｆすいという欠点を有する。
素の酵素活性の測定により行なわれる。この方法は、ビ
オチンがほぼ全ての生物学的材料中に出現するので、こ
れが非常に妨害されｆすいという欠点を有する。
本発明の課題は、ハイグリツー形成試験のために抗原−
４Ａ体反応を利用することであり九〇この丸めのこれま
での努力は、明らかに、ヌクレイン直配列を、確実にか
つ、十分な収率で、適当な抗原ないしは抗体で標識する
ことが可能でなかったために失敗した。
４Ａ体反応を利用することであり九〇この丸めのこれま
での努力は、明らかに、ヌクレイン直配列を、確実にか
つ、十分な収率で、適当な抗原ないしは抗体で標識する
ことが可能でなかったために失敗した。
この課題は、ｙｉ！、役反応のパートナ−で徐、Ｉｉｌ
！されている誘導体化されｔヌクレイン赦配タリを製造
することにより解決される。この兇没″ｉ−的方法は、
必！！！な試殖か非常に安定であり、反応工程が定義さ
れｆｔ一方法で、ム速におよび十分完全に進行し、環境
汚染が公刊の放ＩＲ線方法におけるよりも著しくわずか
でありかつ本発明による試験のための費用が、公知方法
におけるよりも着しく眩いという利点を有する。
！されている誘導体化されｔヌクレイン赦配タリを製造
することにより解決される。この兇没″ｉ−的方法は、
必！！！な試殖か非常に安定であり、反応工程が定義さ
れｆｔ一方法で、ム速におよび十分完全に進行し、環境
汚染が公刊の放ＩＲ線方法におけるよりも著しくわずか
でありかつ本発明による試験のための費用が、公知方法
におけるよりも着しく眩いという利点を有する。
従って、本発明の対象は、一般式Ｉ：
Ｘ−Ａ−Ｍ （Ｉン〔
式中Ｘは基＞Ｎ−または＞Ｎ−Ｒ−ＮＨ−を表わし、そ
の際ＮＪ＆子はヌクレイン塩基のアミン窒素原子であり
、Ｒはへテロ原子により中断されていてよい１屓ま九は
分伏低級アルキレン基を表わし、 Ａは二宮能性架偶員を表わし、 Ｍは免疫反応のパートナ−を表わす」で示される構成要
素１つま友は若干を胃する、誘導体化されたヌクレイン
直配列ならびにその製法である。
式中Ｘは基＞Ｎ−または＞Ｎ−Ｒ−ＮＨ−を表わし、そ
の際ＮＪ＆子はヌクレイン塩基のアミン窒素原子であり
、Ｒはへテロ原子により中断されていてよい１屓ま九は
分伏低級アルキレン基を表わし、 Ａは二宮能性架偶員を表わし、 Ｍは免疫反応のパートナ−を表わす」で示される構成要
素１つま友は若干を胃する、誘導体化されたヌクレイン
直配列ならびにその製法である。
免疫反応のパートナ−Ｍとしては、全ての可能な抗原お
よびハプテンならびく相当する抗体が使用できる。表現
“抗体”は、完全な抗体も、その断片も表わす。抗体は
多クローン形でも、単クローン形でも使用できる。特別
な＊箱形では、ヌクレイン直配列を抗原ないしはハプテ
ンと結合させ、その際ハプテンは殊にジゴキシン、Ｔ３
およびＴ、が特に有利である。ハプテンとしては、これ
が固相と非持異注結合をする順回が鴎かであるので、侍
に親水性ハプテン、友とえはゾゴー＃７ンが使用される
。
よびハプテンならびく相当する抗体が使用できる。表現
“抗体”は、完全な抗体も、その断片も表わす。抗体は
多クローン形でも、単クローン形でも使用できる。特別
な＊箱形では、ヌクレイン直配列を抗原ないしはハプテ
ンと結合させ、その際ハプテンは殊にジゴキシン、Ｔ３
およびＴ、が特に有利である。ハプテンとしては、これ
が固相と非持異注結合をする順回が鴎かであるので、侍
に親水性ハプテン、友とえはゾゴー＃７ンが使用される
。
架償員Ａとしては、免疫反応のパートナ−とヌクレイン
直配列とを、パートナ−の免疫活性に影響を与えないよ
うに結合するのに適している、全ての化学的原子団が適
している。この櫨の架偶員は疎水性であってはならず、
むしろ親水性゛特性を仔するべきである。本発明によれ
は、特にヅアルデと１、たとえはグルタルゾアルデヒＶ
１ クカルボン酸ならびにその誘纒体、たとえはゾアミ
ｐ１ ジエステルおよび二根水秘のよ５な二官能性基ま
之はこのような基の２つまたはそれより多くの岨甘せが
適している。ざらに架傭貞は、完全なペプチド、ペプチ
ド断片からま几はペグチド結合を何する原子団から構成
されているペデチー鎖から成っていてもよい。オリゴテ
ツカリドも架＋ｆＪ員として好適である。ＩＣとえはジ
ゴキシンを免疫反応のパートナ−として使用する場合に
は、鴎にジゴキシンのトリサラカリげｌＡ基が適当な架
慌を表わす。
直配列とを、パートナ−の免疫活性に影響を与えないよ
うに結合するのに適している、全ての化学的原子団が適
している。この櫨の架偶員は疎水性であってはならず、
むしろ親水性゛特性を仔するべきである。本発明によれ
は、特にヅアルデと１、たとえはグルタルゾアルデヒＶ
１ クカルボン酸ならびにその誘纒体、たとえはゾアミ
ｐ１ ジエステルおよび二根水秘のよ５な二官能性基ま
之はこのような基の２つまたはそれより多くの岨甘せが
適している。ざらに架傭貞は、完全なペプチド、ペプチ
ド断片からま几はペグチド結合を何する原子団から構成
されているペデチー鎖から成っていてもよい。オリゴテ
ツカリドも架＋ｆＪ員として好適である。ＩＣとえはジ
ゴキシンを免疫反応のパートナ−として使用する場合に
は、鴎にジゴキシンのトリサラカリげｌＡ基が適当な架
慌を表わす。
置換基Ｒの疋義における、１蹟または分板の低級アルキ
レン基は、特に１〜１０、持に有利に６〜５の炭素原子
を仔する＠プロピレン唄か１とくに有利である。アルキ
レン％ Ｒ？：中萌しうるヘテロ原子は、たとえば献本
原子、炭素原子および装置原子である。
レン基は、特に１〜１０、持に有利に６〜５の炭素原子
を仔する＠プロピレン唄か１とくに有利である。アルキ
レン％ Ｒ？：中萌しうるヘテロ原子は、たとえば献本
原子、炭素原子および装置原子である。
免疫反応のパートナ−Ｍは、架構ｊｊＡを介して、ヌク
レイン塩基のアミノ基と結酋していゐ。
レイン塩基のアミノ基と結酋していゐ。
シト７ンおよびグアノ７ノは、たとえは容易に本発明に
よる方法で１ＩｆＳできる、アミノ基を有するヌクレイ
ン塩基である。
よる方法で１ＩｆＳできる、アミノ基を有するヌクレイ
ン塩基である。
一般式■の水元＃４によるヌクレイン鍍配列の製法は、
１つまたは若干の原子団Ｘ−Ｔ（を有するヌクレイン酸
を詮臀するヌクレイン酸配列を、一般式Ｂ； Ｙ−Ａ−Ｍ （ＩＩ） 〔式中Ｙは反応性の、アミノ基と反応する基を表わし、 Ａは二官罷性架偶員を表わし、 Ｍは免疫反応のパートナ−を表わす〕の化合物と、ＨＹ
の説編下（反応させることを％微とするＯ Ｘが基＞Ｎ −Ｒ−ＮＨを表わす、一般式Ｉの化合物は
爵に、アミノ基を有する１つまたは若干のヌクレイン塩
基をｉｆするヌクレイン酸配列を、最初に一般式１１１
： ％式％（１［［） 〔式中Ｒは上述のものを衣わす」のポリアミンと、取亜
＋ｐｌｅ ｔｔ塩隙イオンの存在で反応させ、得られる
一般式ｌｖ： ＝Ｎ−Ｒ−Ｎ［（２（ｆｆ） ｃ式中Ｒは上述のものを表わす〕の１つまたは若干の構
成要素を何するヌクレイン酸を一般式： 〔式中Ｙは反応性の、アミノ基と反応する基を衆わし、 Ａは二ぎ能性架（に賞を表わし、 Ｍは免役反応のパートナ−を表わ丁〕の化合１吻と反応
させることを特徴とする方法により装道される。
１つまたは若干の原子団Ｘ−Ｔ（を有するヌクレイン酸
を詮臀するヌクレイン酸配列を、一般式Ｂ； Ｙ−Ａ−Ｍ （ＩＩ） 〔式中Ｙは反応性の、アミノ基と反応する基を表わし、 Ａは二官罷性架偶員を表わし、 Ｍは免疫反応のパートナ−を表わす〕の化合物と、ＨＹ
の説編下（反応させることを％微とするＯ Ｘが基＞Ｎ −Ｒ−ＮＨを表わす、一般式Ｉの化合物は
爵に、アミノ基を有する１つまたは若干のヌクレイン塩
基をｉｆするヌクレイン酸配列を、最初に一般式１１１
： ％式％（１［［） 〔式中Ｒは上述のものを衣わす」のポリアミンと、取亜
＋ｐｌｅ ｔｔ塩隙イオンの存在で反応させ、得られる
一般式ｌｖ： ＝Ｎ−Ｒ−Ｎ［（２（ｆｆ） ｃ式中Ｒは上述のものを表わす〕の１つまたは若干の構
成要素を何するヌクレイン酸を一般式： 〔式中Ｙは反応性の、アミノ基と反応する基を衆わし、 Ａは二ぎ能性架（に賞を表わし、 Ｍは免役反応のパートナ−を表わ丁〕の化合１吻と反応
させることを特徴とする方法により装道される。
反応性基Ｙとして菅工、侍に一収的に、アミン晶と、共
臀結合の形成下に反応し５るダニ６性基が適している。
臀結合の形成下に反応し５るダニ６性基が適している。
０−スフフンイミド基が特に適している。
ポリマーのヌクレイン酸の紡４本化を達成するためには
、ヌクレイン塩基、特にシトクンおよびグアノクツのア
はノ基の求俵試栗が使用される。反ｆ５は、この稙の不
核置換反応に常用の条件下に行なわれるｎ ｊＲ喚は、
統計的に、便用されるヌクレイン酸の７トシンーおよび
グアノジノ基で行なわれる。
、ヌクレイン塩基、特にシトクンおよびグアノクツのア
はノ基の求俵試栗が使用される。反ｆ５は、この稙の不
核置換反応に常用の条件下に行なわれるｎ ｊＲ喚は、
統計的に、便用されるヌクレイン酸の７トシンーおよび
グアノジノ基で行なわれる。
この反応の際、７トシン環（おける末端位アミノ基は部
分的芳香族基よりも閤い収率で反応する。この反応は、
文献に多収記載されている、七ノーヌクレオチドのａ当
する反応と比較し５る。反応条件も、記載された反応と
同様に選択される。
分的芳香族基よりも閤い収率で反応する。この反応は、
文献に多収記載されている、七ノーヌクレオチドのａ当
する反応と比較し５る。反応条件も、記載された反応と
同様に選択される。
アミノ基を宵する１つまたは若干のヌクレイン塩基を含
有するヌクレイン酸配列、ならびに１つまたは若干の一
般式１ｖの構成替素を何する変性ヌクレイン酸は、免疫
反応の化学的に：活性化されたパートナ−と反応させる
。このためには、免疫反応のパートナ−を架儲員Ａと結
合し、ｉＹを導入することにより化学的に活性化する・
このよ’ｌ［製造されたヌクレイン酸酵導体は、相補ヌ
クレインば配列を何するヌクレイン酸の検出のためＫ特
に好適である。この偵の試験は、フィルスおよび細菌の
検出のために、または遺伝素質の研究の際にも１愛であ
る。このために、検出スヘキ、相補ヌクレインｔｆｌな
いしヌクレインは配列をｔ何する試料を、本発明による
４１Ｊ応するヌクレイン酸酵導体と接触させ、七の原生
じるハイグリッド形成生成物を先滝反応の、標識された
パートナ−と反応させ、標識を自体公知の方法で測定す
る。
有するヌクレイン酸配列、ならびに１つまたは若干の一
般式１ｖの構成替素を何する変性ヌクレイン酸は、免疫
反応の化学的に：活性化されたパートナ−と反応させる
。このためには、免疫反応のパートナ−を架儲員Ａと結
合し、ｉＹを導入することにより化学的に活性化する・
このよ’ｌ［製造されたヌクレイン酸酵導体は、相補ヌ
クレインば配列を何するヌクレイン酸の検出のためＫ特
に好適である。この偵の試験は、フィルスおよび細菌の
検出のために、または遺伝素質の研究の際にも１愛であ
る。このために、検出スヘキ、相補ヌクレインｔｆｌな
いしヌクレインは配列をｔ何する試料を、本発明による
４１Ｊ応するヌクレイン酸酵導体と接触させ、七の原生
じるハイグリッド形成生成物を先滝反応の、標識された
パートナ−と反応させ、標識を自体公知の方法で測定す
る。
従って、相補的ヌクレイン戚配列を何するヌクレイン酸
を検出するために、本発明による誘導体化されたヌクレ
イ／ば配列を使用し、検出すべきヌクレイン１設ないし
Ｉエヌクンイン酸目己タリを胃するｍ液を、本発明によ
る訪４体化された相補的ヌクレイン峡ｄ導体を言何する
層成と接触させ、非ハイブリッド形成成分をスフレイン
敏ハイグリッドから分離し、免疫ダニ６の他の標識され
たパートナ−の免疫反応を実施し為得られるハイグリツ
「形成生成物中に存在する樟ぺを６１す定することも本
シラ明の軛囲内である。
を検出するために、本発明による誘導体化されたヌクレ
イ／ば配列を使用し、検出すべきヌクレイン１設ないし
Ｉエヌクンイン酸目己タリを胃するｍ液を、本発明によ
る訪４体化された相補的ヌクレイン峡ｄ導体を言何する
層成と接触させ、非ハイブリッド形成成分をスフレイン
敏ハイグリッドから分離し、免疫ダニ６の他の標識され
たパートナ−の免疫反応を実施し為得られるハイグリツ
「形成生成物中に存在する樟ぺを６１す定することも本
シラ明の軛囲内である。
試料中での本発明により妨碍本化され７℃λりレイン醒
配列および相補的ヌクレイン酸の間の本来のハイブリッ
ド形成工程は公知方法により行なわれる。固相ノ・イブ
リッド形成が特に有利である。このために、演出すべき
ヌクレイン酸を、ｔ！Ｌｌ相に固着させる。場合により
二重項として存在するヌクレイン酸は、自体公刊の方法
で、１固々の蹟に分別しなげればならない。固相として
は、原則的に全【のヌクレイン瞭結合材料が通している
。通ざニトロセルロース頃が１史用される。
配列および相補的ヌクレイン酸の間の本来のハイブリッ
ド形成工程は公知方法により行なわれる。固相ノ・イブ
リッド形成が特に有利である。このために、演出すべき
ヌクレイン酸を、ｔ！Ｌｌ相に固着させる。場合により
二重項として存在するヌクレイン酸は、自体公刊の方法
で、１固々の蹟に分別しなげればならない。固相として
は、原則的に全【のヌクレイン瞭結合材料が通している
。通ざニトロセルロース頃が１史用される。
固唐工鴎のために、公知方法が便用される。
固相の特別な選択、非吃侵血清および精ａされた画分に
よる凝果阻止、清浄剤を用いる洗浄工程および類似のそ
れ自体常用の工程を特別に選択することにより、固相に
対する免疫反応の他の標−されたパートナ−の非特異結
合を阻止するか、ないしは十分に割繊することが試みら
れる。
よる凝果阻止、清浄剤を用いる洗浄工程および類似のそ
れ自体常用の工程を特別に選択することにより、固相に
対する免疫反応の他の標−されたパートナ−の非特異結
合を阻止するか、ないしは十分に割繊することが試みら
れる。
抗原および抗体の複合体形成も、自体公知の方法により
行なわれる。原則的に、このために１全【の可能な公知
方法を適用することが可能である。
行なわれる。原則的に、このために１全【の可能な公知
方法を適用することが可能である。
標識剤として、原則的に全ての常用の襟−削、たとえは
放射性同位元素、発元注Ｉｆｓならびに酵素を使用する
ことができる。襟−として、酵素の便用が’ｌ？ Ｉｃ
Ｗ利である。このような指示酵素は、弐に兇没学的測
足方法から公知であ／ｂ、、ベルオキ７ダーゼ、アルカ
リ性ホスファターゼおよびβ−ガラクトシダーゼが特に
胃利である。
放射性同位元素、発元注Ｉｆｓならびに酵素を使用する
ことができる。襟−として、酵素の便用が’ｌ？ Ｉｃ
Ｗ利である。このような指示酵素は、弐に兇没学的測
足方法から公知であ／ｂ、、ベルオキ７ダーゼ、アルカ
リ性ホスファターゼおよびβ−ガラクトシダーゼが特に
胃利である。
襟關の測定は、ハイグリッド形成を行なった後に実施す
ることができる。標識剤の選択に応じて、当業者ＶＣは
多数の方法が利用でき／８つ酵素を指示薬として使用す
る場合には、その検出のために、常用の基質が使用さレ
ル。
ることができる。標識剤の選択に応じて、当業者ＶＣは
多数の方法が利用でき／８つ酵素を指示薬として使用す
る場合には、その検出のために、常用の基質が使用さレ
ル。
本発明により酵４体化されたヌクレイン酸配列を便用し
非常に鋭敏な方法でヌクレイン酸を検出することができ
る。検出反応を公知の斑点ハイグリツげ形成（Ｔｆｆｉ
ｐｆｅｌ−Ｈｙｂｒｉｄｉｓｅｉｒｕｎｇ ）の形で実
施する場合、検出限界はＤＮＡ Ｋ対しほぼ５ＰＩ／斑
点（Ｆｌｅｃｋ ）なりしはＲＮＡに対しほぼ２００Ｐ
ν／斑点である。これは、たとえは感染されたトマト葉
を試験する場合、細胞あ九りバイロイド分子２０個の敏
感性に相当する。
非常に鋭敏な方法でヌクレイン酸を検出することができ
る。検出反応を公知の斑点ハイグリツげ形成（Ｔｆｆｉ
ｐｆｅｌ−Ｈｙｂｒｉｄｉｓｅｉｒｕｎｇ ）の形で実
施する場合、検出限界はＤＮＡ Ｋ対しほぼ５ＰＩ／斑
点（Ｆｌｅｃｋ ）なりしはＲＮＡに対しほぼ２００Ｐ
ν／斑点である。これは、たとえは感染されたトマト葉
を試験する場合、細胞あ九りバイロイド分子２０個の敏
感性に相当する。
本発明を矢の実施１ｆｌＩＩｃより詳述する。
実施列
列 １
単−蹟ＤＮＡと活性化エステルとの直接反応＊ｍすべ＠
ＤＮＡ、 タト１！ｆうｘ ミｌ、’Ｉ）ＮＡｓ号を
、側限＃素を用いて切断することにより、線形化し、９
５”ＯＫｌ、１０分間加熱し、引貌きエタノール／ｌ″
ライアイス中で急冷することにより変性する。ＤＮＡを
、エタノールで沈殿させ、久りで０．１Ｍ炭酸水素ナト
リウムに採収する。
ＤＮＡ、 タト１！ｆうｘ ミｌ、’Ｉ）ＮＡｓ号を
、側限＃素を用いて切断することにより、線形化し、９
５”ＯＫｌ、１０分間加熱し、引貌きエタノール／ｌ″
ライアイス中で急冷することにより変性する。ＤＮＡを
、エタノールで沈殿させ、久りで０．１Ｍ炭酸水素ナト
リウムに採収する。
そのｄｄ度はＩＦ７１ ＩＶ／Ｉｔであるべきである。
このようなりＮＡ ｍ孜５０μ！に、ジメチルホルムア
ミド７４μ１１ ゾゴキ７ンーグルタリルー〇−スクシ
ンイミド−エステル１０μ！（ゾメチルホルムアミダ中
μ！あたり２０μｇ）を加える。この反応混合物を、４
′Ｃで２時間、時２０チ酢酸カリウム溶液１９ｒ：麻加
し、エタノールで沈殿させる。未反応のスクシンイミげ
エステルヲ、第二のエタノール沈殿により分離する。
ミド７４μ１１ ゾゴキ７ンーグルタリルー〇−スクシ
ンイミド−エステル１０μ！（ゾメチルホルムアミダ中
μ！あたり２０μｇ）を加える。この反応混合物を、４
′Ｃで２時間、時２０チ酢酸カリウム溶液１９ｒ：麻加
し、エタノールで沈殿させる。未反応のスクシンイミげ
エステルヲ、第二のエタノール沈殿により分離する。
標識されたＤＮＡを緩衝ｍ液（トリス１０ｙＬモル、ｍ
’ｒＡｉ ｍモル、ｐｉ（８，０）にとり、２ｔｔｉ／
ｌｉｅの喚度にする。軽く混濁したａＨ４液が生じる。
’ｒＡｉ ｍモル、ｐｉ（８，０）にとり、２ｔｔｉ／
ｌｉｅの喚度にする。軽く混濁したａＨ４液が生じる。
収率は、便用されたＤＮＡに対し、約８５％である。
列 ２
′Ｒ性ＤＮＡと活性化エステルとの反応ＤＮＡ ＩＣよ
り大きな標＃ｋｇｉを得るために、７トン／のアミノ基
を、７ヤビロ（５ｈａｐｉｒｏ ）およびバイスグラス
（Ｗｅｉａｇｒａｓ ）の方法〔゛バイオケミカル ア
ンド バイオフイクカル リテーナ コミュニケ・−シ
ョンズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ、 ａｎｄ阻ｏｐｈｙｓ、 Ｒ
ｅ５ｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕｎ、 ）、”４４０巻、（
１９７０年）、第８５９〜８４３に−７）により、嵐亜
滅戚塩触媒反応下に脂彷妖アミノ基に変換する。
り大きな標＃ｋｇｉを得るために、７トン／のアミノ基
を、７ヤビロ（５ｈａｐｉｒｏ ）およびバイスグラス
（Ｗｅｉａｇｒａｓ ）の方法〔゛バイオケミカル ア
ンド バイオフイクカル リテーナ コミュニケ・−シ
ョンズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ、 ａｎｄ阻ｏｐｈｙｓ、 Ｒ
ｅ５ｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕｎ、 ）、”４４０巻、（
１９７０年）、第８５９〜８４３に−７）により、嵐亜
滅戚塩触媒反応下に脂彷妖アミノ基に変換する。
巌状にされたグラスミド−ＤＮＡ ５ Ｉ１９を、９５
’Ｃに１０分間加熱し、エタノール／ドライアイス中で
急冷することにより変注し、直ちに、新たにＪＡａされ
た亜酸酸塩反応ｍ液に対し、室温で２Ｘ３時間透析する
（４−モルホリン−エタンスルホンば（ｕｇｓ）１９，
５Ｌ、５７％亜硫醒水素ナトリウムｄ液２１４．６ｄ、
シアミノプロパン２４９．９ｄを発燻堰戚で−６，２に
調節し、１ノにし；引ｄきヒトａキノン０．５５ Ｆ
′１に：添卯する）。透析物ｆｔ６０℃で９０時間保１
する。引続キ、トリス１０ミリモルに対し、ｐＪ（８，
０で回ＴＡ ／ミリモルを透析し、ＤＭＡな浴液からエ
タノールにより沈殿させる。
’Ｃに１０分間加熱し、エタノール／ドライアイス中で
急冷することにより変注し、直ちに、新たにＪＡａされ
た亜酸酸塩反応ｍ液に対し、室温で２Ｘ３時間透析する
（４−モルホリン−エタンスルホンば（ｕｇｓ）１９，
５Ｌ、５７％亜硫醒水素ナトリウムｄ液２１４．６ｄ、
シアミノプロパン２４９．９ｄを発燻堰戚で−６，２に
調節し、１ノにし；引ｄきヒトａキノン０．５５ Ｆ
′１に：添卯する）。透析物ｆｔ６０℃で９０時間保１
する。引続キ、トリス１０ミリモルに対し、ｐＪ（８，
０で回ＴＡ ／ミリモルを透析し、ＤＭＡな浴液からエ
タノールにより沈殿させる。
このようにして変性されたＤＮＡを、列１に記載された
ように、活性化され九ゾゴキシンーグルタリルー〇−ス
クシンイミド−ニステルト反応させる。ｆｉ終生成吻は
、軽度に混濁した憑濁敵である。収率は、便用され九Ｄ
ＮＡに対し、約８０−である。
ように、活性化され九ゾゴキシンーグルタリルー〇−ス
クシンイミド−ニステルト反応させる。ｆｉ終生成吻は
、軽度に混濁した憑濁敵である。収率は、便用され九Ｄ
ＮＡに対し、約８０−である。
例 ６
ＩｆｆｌＪ限酵素を用いるプラスミド切断後の断片混合
物中のプラスミドＤＮＡの検出 方法ａ： デラスミｌ−” ｐＢＲ５２２の、種々の大きい割合を
宵する、櫨々のプラスミドの制限折片を、＋［気泳動に
より分離し、ニトロセルロースフィルター上に公知方法
〔“シャーナル オグ モンキュラー バイオロジー（
Ｊ、 Ｍｏ１． Ｂｉｏｌンご第９４巻（１９７５年）
第５１〜６９ベーゾ］でＭｊＪｋする。このようにして
得られ九調製切を、ガ２によりジゴキシンで＋Ｓ威され
ていゐｐＢＲ３２２ＤＮＡでハイデリツげ形成する。１
０％−標準ヒツジ血清を加え、引続きペルオキ７ダーゼ
Ｉ Ｑ ｍＵ ／ｍｌと複合された抗ゾゴキ７ンー抗体
’ｔｔｉ温する。ｉｔ陵に、ペルオキシダーゼ曲性は、
テトラメチルベンチシンでＯＴ視化する。
物中のプラスミドＤＮＡの検出 方法ａ： デラスミｌ−” ｐＢＲ５２２の、種々の大きい割合を
宵する、櫨々のプラスミドの制限折片を、＋［気泳動に
より分離し、ニトロセルロースフィルター上に公知方法
〔“シャーナル オグ モンキュラー バイオロジー（
Ｊ、 Ｍｏ１． Ｂｉｏｌンご第９４巻（１９７５年）
第５１〜６９ベーゾ］でＭｊＪｋする。このようにして
得られ九調製切を、ガ２によりジゴキシンで＋Ｓ威され
ていゐｐＢＲ３２２ＤＮＡでハイデリツげ形成する。１
０％−標準ヒツジ血清を加え、引続きペルオキ７ダーゼ
Ｉ Ｑ ｍＵ ／ｍｌと複合された抗ゾゴキ７ンー抗体
’ｔｔｉ温する。ｉｔ陵に、ペルオキシダーゼ曲性は、
テトラメチルベンチシンでＯＴ視化する。
ｐＢＲ５２２と相補的配列を胃する、ような訊」限断片
だ）プが浦に反応する。５００〜４０００塩基対の範囲
内の断片を演出することができた。
だ）プが浦に反応する。５００〜４０００塩基対の範囲
内の断片を演出することができた。
方法ｂ：
方法ａにより得られたＩｔｌｌＪ限所片？、断片ピルで
（Ｔ、 Ｍ、 ７３ツタ（８ｈｉｎｎｉｃｋ ）その他
、１ヌクレイツク アクツげ リテーナ（Ｎｕｃｌｅｌ
ｃＡｃｉｄ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ ） ’、纂２巻（１’
９７５年）ｗｃ１９１１ペーゾ〕、ＩＰＵ２によりジゴ
キシンで標識されているｐＳＲ３２２ＤＮＡでノーイデ
リツげ形成する。１０チ標準−ヒツジ血清の添加後、１
００ｍＵ／−ペルオキシダーゼ複合抗ソヒキシンに体ヲ
１ｆｆ１級する。ベルオキクダーゼ活性を、テトラメチ
ルベンチジ／で可視化する。
（Ｔ、 Ｍ、 ７３ツタ（８ｈｉｎｎｉｃｋ ）その他
、１ヌクレイツク アクツげ リテーナ（Ｎｕｃｌｅｌ
ｃＡｃｉｄ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ ） ’、纂２巻（１’
９７５年）ｗｃ１９１１ペーゾ〕、ＩＰＵ２によりジゴ
キシンで標識されているｐＳＲ３２２ＤＮＡでノーイデ
リツげ形成する。１０チ標準−ヒツジ血清の添加後、１
００ｍＵ／−ペルオキシダーゼ複合抗ソヒキシンに体ヲ
１ｆｆ１級する。ベルオキクダーゼ活性を、テトラメチ
ルベンチジ／で可視化する。
こうして、同時に、特異的にｐＢＲ５２２に対し相補的
帝を確認することができ九。検出感度は、約２００ＰＩ
ｉ／帝である。検出は、塩基対１００〜８０００の範囲
内で可能であった。
帝を確認することができ九。検出感度は、約２００ＰＩ
ｉ／帝である。検出は、塩基対１００〜８０００の範囲
内で可能であった。
結果の記録は、乾譲されたピルを、ペルオキシダーゼ検
出系のゼラチン層上に保存することにより達成すること
ができる。
出系のゼラチン層上に保存することにより達成すること
ができる。
列 ４
細菌コロニー中の特異的ＤＮＡの検出
櫨々のエシェリキアコリ（ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａＣｏ
ｌｉ ） ８株をタウグ（Ｔａｕｂ ）およびトンプソ
ン（Ｔｈｏｍｐａｏｎ ）の方法〔“アナリテイカルｔ
４イ＃ケｉ Ｘ トリー （Ａｎａｌｙｔ、 Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ ）’ 第１２６巻（１９８２年）、第２２２
〜２３０ペーゾコにより濾紙上に準備し、例２Ｖこより
ジゴキシンで標識されている、ＰＢＲ３２２ＤＮＡでノ
・イブリッド形成する。ノ・イブリッド形成条件および
洗浄工種は、抗体検出にｉｔ適であった。抗ゾゴキ７ン
ー抗体−ペルオ中７ダーゼー複合体（１０ＦｊｌＵ／Ｒ
１）を９１１１！ＬＬ、およびテトラメテルベ／チゾン
ゼラチン上に可視化し九（ｉｔ、ｐＳＲ６２２を含傅す
る＃ｌ菌は、°を着色により１、デラスミ「を含有しな
いものと区別することができた。ここでも、結果は、着
色された＋ｌぼ紙の写真撮影ないしは保存により記録す
ることができる。
ｌｉ ） ８株をタウグ（Ｔａｕｂ ）およびトンプソ
ン（Ｔｈｏｍｐａｏｎ ）の方法〔“アナリテイカルｔ
４イ＃ケｉ Ｘ トリー （Ａｎａｌｙｔ、 Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ ）’ 第１２６巻（１９８２年）、第２２２
〜２３０ペーゾコにより濾紙上に準備し、例２Ｖこより
ジゴキシンで標識されている、ＰＢＲ３２２ＤＮＡでノ
・イブリッド形成する。ノ・イブリッド形成条件および
洗浄工種は、抗体検出にｉｔ適であった。抗ゾゴキ７ン
ー抗体−ペルオ中７ダーゼー複合体（１０ＦｊｌＵ／Ｒ
１）を９１１１！ＬＬ、およびテトラメテルベ／チゾン
ゼラチン上に可視化し九（ｉｔ、ｐＳＲ６２２を含傅す
る＃ｌ菌は、°を着色により１、デラスミ「を含有しな
いものと区別することができた。ここでも、結果は、着
色された＋ｌぼ紙の写真撮影ないしは保存により記録す
ることができる。
列 ５
トマト／じゃがいもにおけるＰＳ’ｒＶ （ポテト−ス
ピン−ルーチューバーーバイクイド）−感染の検出 トマト−ないしはじゃがいも葉またはじゃがいも根瘤な
いしは一反を緩＃液中で均質化する（ウルトラテユラツ
クス（Ｕｌｔｒａｔｕｒｒａｘ ） 、塩化ナトリウム
６モル、クエン酸六トリウム６００ミリモル、クエチル
ゾチオカルバ〆−ト３０ミ＋Ｊモｋ、０．１ ％ ）
’ｙイ） ：ｙ ； 纜［０，１１／Ｍ）、、。
ピン−ルーチューバーーバイクイド）−感染の検出 トマト−ないしはじゃがいも葉またはじゃがいも根瘤な
いしは一反を緩＃液中で均質化する（ウルトラテユラツ
クス（Ｕｌｔｒａｔｕｒｒａｘ ） 、塩化ナトリウム
６モル、クエン酸六トリウム６００ミリモル、クエチル
ゾチオカルバ〆−ト３０ミ＋Ｊモｋ、０．１ ％ ）
’ｙイ） ：ｙ ； 纜［０，１１／Ｍ）、、。
遠心分離および濾過後、デオΦ７リボヌクレアーゼおよ
び引続基ｆａティ六−ゼにと共に保温し、希釈後、エタ
ノールで沈殿させる。エタノール沈殿物を、２Ｍ塩化リ
チウムで採取し、倉たにエタノールで沈殿させる。この
ペレットヲ、ジエチルチオカルバメートおよびトライ゛
トンなしの抽出＊＃液ＩＣ採取し、ａＱｉ過によりニト
ロセルロース上に設ける。このよ５にして得られた調製
物を、ＰＳＴＶの完全な配列を含何し、列２によりジゴ
キシンで凛ＲされているプラスミドＤＮＡ ｐＡＶ ４
０１でハイブリット形成する０ １０％０％標準ヒツジ
Ｎを添加し、引続き抗ゾコ９キ７ンー抗渾−β−ガラク
トシダーゼ復合体と共に保温する。ＰＳＴＶ感染試料の
可視化は、β−ガラクトシダーゼ基！＆ｔ（クロルフェ
ノールロートーガラク）／）７）と共Ｋ１ｍ温により行
なう。結果は、カラー写真を用いて記録することができ
る。
び引続基ｆａティ六−ゼにと共に保温し、希釈後、エタ
ノールで沈殿させる。エタノール沈殿物を、２Ｍ塩化リ
チウムで採取し、倉たにエタノールで沈殿させる。この
ペレットヲ、ジエチルチオカルバメートおよびトライ゛
トンなしの抽出＊＃液ＩＣ採取し、ａＱｉ過によりニト
ロセルロース上に設ける。このよ５にして得られた調製
物を、ＰＳＴＶの完全な配列を含何し、列２によりジゴ
キシンで凛ＲされているプラスミドＤＮＡ ｐＡＶ ４
０１でハイブリット形成する０ １０％０％標準ヒツジ
Ｎを添加し、引続き抗ゾコ９キ７ンー抗渾−β−ガラク
トシダーゼ復合体と共に保温する。ＰＳＴＶ感染試料の
可視化は、β−ガラクトシダーゼ基！＆ｔ（クロルフェ
ノールロートーガラク）／）７）と共Ｋ１ｍ温により行
なう。結果は、カラー写真を用いて記録することができ
る。
記載された方法で、トマトおよびじゃがいもにおけるＰ
ＳＴＶ感染を、６２Ｐ凛ｄＲざｔｔ、りｒラスミげ−Ｄ
ＮＡ ４！：用いるオウエンス（ＱＷ１３ｎ３ンの方法
〔ティｘｙス（５ｃｉｅｎｃｅ ） ２１３ （１９８
１年Ｌｇ６７０〜６７２ベーク〕に相当する感度で検出
することができる。
ＳＴＶ感染を、６２Ｐ凛ｄＲざｔｔ、りｒラスミげ−Ｄ
ＮＡ ４！：用いるオウエンス（ＱＷ１３ｎ３ンの方法
〔ティｘｙス（５ｃｉｅｎｃｅ ） ２１３ （１９８
１年Ｌｇ６７０〜６７２ベーク〕に相当する感度で検出
することができる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、一般式 I ：Ｘ−Ａ−Ｍ 〔式中Ｘは基＞Ｎ−または＞Ｎ−Ｒ−■Ｈを表わし、そ
の際Ｎ原子はヌクレイン塩基のアミン窒素原子を表わし
、Ｒはヘテロ原子により中断されていてよい直鎖または
分枝低級アルキレン基を表わし、 Ａは二官能性架橋員を表わし、 Ｍは免疫反応のパートナーを表わす〕で示される構成要
素１つまたは若干を有することを特徴とする、誘導体化
されたヌクレイン酸配列。 ２、免疫反応のパートナーとして、抗原、ハプテンまた
は抗体を使用する、特許請求の範囲第１項記載のヌクレ
イン酸配列。 ３、ハプテンとして、ジゴキシン、Ｔ＿３またはＴ＿４
を使用する、特許請求の範囲第２項記載のヌクレイン酸
配列。 ４、架橋員Ａとして、グルタリル基を使用する、特許請
求の範囲第１項から第３項までのいずれか１項記載のヌ
クレイン酸配列。 ５、一般式 I ：Ｘ−Ａ−Ｍ 〔式中Ｘは基＞Ｎ−または＞Ｎ−Ｒ−■Ｈを表わし、そ
の際Ｎ原子はヌクレイン塩基のアミン窒素原子を表わし
、Ｒはヘテロ原子により中断されていてよい、直鎖また
は分枝低級アルキレン基を表わし、 Ａは二官能性架橋員を表わし、 Ｍは免疫反応のパートナーを表わす〕で示される構成成
分１つまたは若干を有するヌクレイン酸配列の製法にお
いて、基Ｘ−Ｈを何する１つまたは若干ヌクレイン塩基
を有するヌクレイン酸配列を、一般式II： 〔式中Ｙは反応性の、アミノ基と反応する基を表わし、 Ａは二官能性架橋員を表わし、 Ｍは免疫反応のパートナーを表わす〕 の化合物と、ＨＹの脱離下に反応させることを特徴とす
る、ヌクレイン酸配列の製法。 ６、一般式 I ：Ｘ−Ａ−Ｍ 〔式中Ｘは基＞Ｎ−または＞Ｎ−Ｒ−ＮＨを表わし、そ
の際Ｎ原子はヌクレイン塩基のアミン窒素原子を表わし
、Ｒはヘテロ原子により中断されていてよい直鎖または
分枝低級アルキレン基を表わし、 Ａは二官能性架橋員を表わし、 Ｍは免疫反応のパートナーを表わす〕で示される構成成
分１つまたは若干を有するヌクレイン酸配列の製法にお
いて、アミノ基を有する１つまたは若干のヌクレイン塩
基を含有するヌクレイン酸配列を、最初に一般式III： Ｈ＿２Ｎ−Ｒ−■Ｈ＿２（III） 〔式中Ｒは上述のものを表わす〕のポリアミンと、裏亜
硫酸塩陰イオンの存在で反応させ、得られる一般式IV： ＞Ｎ−Ｒ−■Ｈ＿２（IV） 〔式中Ｒは上述のものを表わす〕の１つまたは若干の構
成成分を有するヌクレイン酸を、一般式II： Ｙ−Ａ−Ｍ（II） 〔式中Ｙは反応性の、アミノ基と反応する基を表わし、 Ａは二官能性架橋員を表わし、 Ｍは免疫反応のパートナーを表わす〕の化合物と反応さ
せることを特徴とする、ヌクレイン酸配列の製法。 ７、標識を有する、探究される配列に対し相補的ヌクレ
イン酸配列を用いるハイブリット形成によるヌクレイン
酸ないしヌクレイン酸配列の測定および標識の検出法に
おいて、探される配列に対し相補的ヌクレイン酸配列と
して、一般式 I ： 〔式中Ｘは基＞Ｎ−または＞Ｎ−Ｒ−■Ｈを表わし、そ
の際Ｎ原子はヌクレイン塩基のアミン窒素原子を表わし
、Ｒはヘテロ原子により中断されていてよい直鎖または
分枝低級アルキレン基を表わし、 Ａは二官能性架橋員を表わし、 Ｍは免疫反応のパートナーを表わす〕で示される構成要
素１つまたは若干を有する、免疫反応のパートナーで誘
導体化されたヌクレイン酸配列を使用し、ハイブリット
形成生成物を、検出可能な標識を有する免疫反応の他の
パートナーと反応させることを特徴とする、ヌクレイン
酸ないしはヌクレイン酸配列の検出法。 ８、検出可能な標識が酵素標識である、特許請求の範囲
第７項記載の方法。 ９、標識酵素としてペルオキシダーゼ、アルカリ性ホス
ファターゼまたはβ−ガラクトシダーゼを使用する、特
許請求の範囲第９項記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19843431536 DE3431536A1 (de) | 1984-08-28 | 1984-08-28 | Derivatisierte nucleinsaeure-sequenz, verfahren zu deren herstellung sowie deren verwendung zum nachweis von nucleinsaeuren |
| DE3431536.5 | 1984-08-28 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6160697A true JPS6160697A (ja) | 1986-03-28 |
| JPH0578320B2 JPH0578320B2 (ja) | 1993-10-28 |
Family
ID=6244044
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60187555A Granted JPS6160697A (ja) | 1984-08-28 | 1985-08-28 | 新規な誘導体化核酸配列、その製法および核酸ないし核酸配列の検出法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0173251B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6160697A (ja) |
| AT (1) | ATE48141T1 (ja) |
| AU (1) | AU582380B2 (ja) |
| CA (1) | CA1242657A (ja) |
| DE (2) | DE3431536A1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01215300A (ja) * | 1988-01-12 | 1989-08-29 | Boehringer Mannheim Gmbh | ハイブリツド形成による定義された配列の核酸の検出方法 |
| JPH0731194B2 (ja) * | 1988-01-12 | 1995-04-10 | ベーリンガー マンハイム ゲゼルシヤフト ミツト ベシユレンクテル ハフツング | 核酸の検出法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FI894132A7 (fi) * | 1987-06-26 | 1989-09-01 | Du Pont | Kontaminoivien sekvenssien affiniteettipoisto kloonatusta yhdistelmänu kleiinihaposta kaappaushelmiä käyttämällä |
| US5525465A (en) * | 1987-10-28 | 1996-06-11 | Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine | Oligonucleotide-polyamide conjugates and methods of production and applications of the same |
| EP0972779A3 (en) * | 1987-10-28 | 2004-10-20 | Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine | Oligonucleotide-polyamide conjugates |
| US5354657A (en) * | 1988-01-12 | 1994-10-11 | Boehringer Mannheim Gmbh | Process for the highly specific detection of nucleic acids in solid |
| FR2627590A1 (fr) * | 1988-02-24 | 1989-08-25 | Ire Celltarg Sa | Sonde d'acides nucleiques comportant un nucleotide terminal modifie chimiquement en 5(prime) (oh) en vue de son marquage non radioactif et procedes de preparation |
| FR2634211B1 (fr) * | 1988-07-13 | 1992-06-26 | Lebacq Philippe | Procede de marquage d'une sonde nucleique et trousse de reactifs pour la mise en oeuvre de ce procede |
| FR2644163B2 (fr) * | 1988-07-13 | 1994-09-30 | Bioprobe Systems Sa | Procede de marquage d'une sonde nucleique et trousse de reactifs pour la mise en oeuvre de ce procede |
| DE3836656A1 (de) * | 1988-10-27 | 1990-05-03 | Boehringer Mannheim Gmbh | Neue digoxigenin-derivate und ihre verwendung |
| US5356773A (en) * | 1989-05-16 | 1994-10-18 | Kinetic Investments Limited | Generation of unidirectional deletion mutants |
| DE3916595A1 (de) * | 1989-05-22 | 1990-11-29 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur nichtradioaktiven messung der nucleinsaeuresynthese in eukaryontischen zellen |
| DE3916871A1 (de) * | 1989-05-24 | 1990-11-29 | Boehringer Mannheim Gmbh | Modifiziertes phosphoramidit-verfahren zur herstellung von modifizierten nukleinsaeuren |
| DE69033546T2 (de) * | 1989-10-13 | 2000-09-21 | Zeneca Ltd., London | Sonden |
| US5677440A (en) * | 1990-07-16 | 1997-10-14 | Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine | Oligonucleotide-polyamide conjugates |
| EP0752474A1 (en) | 1995-07-07 | 1997-01-08 | Boehringer Mannheim Gmbh | Nucleic acid coding for CMP-N-acetyl-neuraminic acid hydroxylase and its use for the production of modified glycoproteins |
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| EP1006184A1 (en) | 1998-12-03 | 2000-06-07 | F. Hoffmann-La Roche Ag | IGF-1 receptor interacting proteins (IIPs) genes coding therefor and uses thereof |
| US20020146728A1 (en) | 1998-12-03 | 2002-10-10 | Tanja Ligensa | IGF-1 receptor interacting proteins |
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| FR2519005B1 (fr) * | 1981-12-29 | 1985-10-25 | Pasteur Institut | Fragments d'adn marques a l'une au moins de leurs extremites par des ribonucleotides modifies reconnaissables par des molecules affines et procede pour realiser une analyse de tels fragments d'adn |
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| EP0135587B2 (en) * | 1983-02-22 | 2002-12-18 | Syngene, Inc. | Defined sequence single strand oligonucleotides incorporating reporter groups, process for the chemical synthesis thereof, and nucleosides useful in such synthesis |
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| FR2558172B1 (fr) * | 1984-01-16 | 1986-06-13 | Inst Nat Sante Rech Med | Sonde contenant un acide nucleique modifie et reconnaissance par des anticorps specifiques et utilisation de cette sonde et de ces anticorps specifiques pour detecter et caracteriser une sequence d'adn homologue |
-
1984
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