JPS62103021A - 細胞障害作用を有する生理活性物質およびその製造方法 - Google Patents
細胞障害作用を有する生理活性物質およびその製造方法Info
- Publication number
- JPS62103021A JPS62103021A JP60242375A JP24237585A JPS62103021A JP S62103021 A JPS62103021 A JP S62103021A JP 60242375 A JP60242375 A JP 60242375A JP 24237585 A JP24237585 A JP 24237585A JP S62103021 A JPS62103021 A JP S62103021A
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- JP
- Japan
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- cells
- stable
- physiologically active
- treatment
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- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、新規な細胞障害作用を有する生理活性物質お
よびその製造方法に関する。
よびその製造方法に関する。
本発明と関係の深いマウス線維芽細胞由来の細胞障害物
質としては、インターフェロンβ（以下、β−ＩＦＮと
略することもある）およびカルチノブレーカーＸ（以下
、ＣＢＸと略することもある）が知られている。そして
、β−ＩＦＮは分子量が２２．０００〜２３，０００、
等電点６．５〜８．０（安藤、小林、免疫薬理Ｖｏ１．
１−１１１９８３ ｌライフサイエンス出版）、ＣＢＸ
は分子量１２，０００〜１７，０００、等電点４．３〜
７．３の糖蛋白質（特開昭５８−１４８８２６号公ｔｉ
ｌ１）であることがそれぞれ報告されている。
質としては、インターフェロンβ（以下、β−ＩＦＮと
略することもある）およびカルチノブレーカーＸ（以下
、ＣＢＸと略することもある）が知られている。そして
、β−ＩＦＮは分子量が２２．０００〜２３，０００、
等電点６．５〜８．０（安藤、小林、免疫薬理Ｖｏ１．
１−１１１９８３ ｌライフサイエンス出版）、ＣＢＸ
は分子量１２，０００〜１７，０００、等電点４．３〜
７．３の糖蛋白質（特開昭５８−１４８８２６号公ｔｉ
ｌ１）であることがそれぞれ報告されている。
動物線維芽細胞由来の細胞障害物質として、前述のβ−
ＩＦＮおよびＣＢＸは知られているが、これら以外の細
胞障害物質についてほとんど知られておらず、その性状
の判明しているものもないのが現状である。
ＩＦＮおよびＣＢＸは知られているが、これら以外の細
胞障害物質についてほとんど知られておらず、その性状
の判明しているものもないのが現状である。
本発明者らは、これらの実状に鑑み、鋭意研究を重ねた
結果、動物線維芽細胞が新規な細胞障害作用を有する生
理活性物質を産生ずることを見い出し、本発明を完成す
るに至った。
結果、動物線維芽細胞が新規な細胞障害作用を有する生
理活性物質を産生ずることを見い出し、本発明を完成す
るに至った。
即ち、本発明は、動物線維芽細胞から産生され、細胞障
害作用を有し、以下に述べる性質を有する生理活性物質
およびその製造方法に関する。
害作用を有し、以下に述べる性質を有する生理活性物質
およびその製造方法に関する。
（ａｌ 分子量が４０，０００〜６０，０００ （ゲ
ル濾過クロマトグラフィー）である、 （ｂｌ 等電点が５．０±０．５である、ｔｅｌ
ＦＰＬＣ−Ｍｏｎｏ Ｑ陰イオン交換クロマトグラフィ
ーで、０．３４〜０．３５Ｍ食塩濃度にて溶出される、 ＋ｄｌ コンカナバリンＡ結合セファロースに非吸着
性である、 （ｅ）トリプシン、キモトリプシン、プロアーゼに感受
性で、ＲＮａｓｅに非感受性である、（ｆｌ ｐ Ｈ
７，２の緩衝液中、４℃にて安定、５６℃、１時間処理
にて部分失活（６６％失活）、７０℃にてほぼ完全に失
活する、 ｆｇ）ｐＨ７，２０時間処理にて安定であるが、ｐＨ２
では失活、ｐＨ１０では大部分失活（８３％失活）する
、 （ｈｌ マウス上９２９細胞、人肝由来ＨｕＬ−１細
胞に対しｉｎ ｖｉｔｒｏで直接細胞障害作用を有する
。
ル濾過クロマトグラフィー）である、 （ｂｌ 等電点が５．０±０．５である、ｔｅｌ
ＦＰＬＣ−Ｍｏｎｏ Ｑ陰イオン交換クロマトグラフィ
ーで、０．３４〜０．３５Ｍ食塩濃度にて溶出される、 ＋ｄｌ コンカナバリンＡ結合セファロースに非吸着
性である、 （ｅ）トリプシン、キモトリプシン、プロアーゼに感受
性で、ＲＮａｓｅに非感受性である、（ｆｌ ｐ Ｈ
７，２の緩衝液中、４℃にて安定、５６℃、１時間処理
にて部分失活（６６％失活）、７０℃にてほぼ完全に失
活する、 ｆｇ）ｐＨ７，２０時間処理にて安定であるが、ｐＨ２
では失活、ｐＨ１０では大部分失活（８３％失活）する
、 （ｈｌ マウス上９２９細胞、人肝由来ＨｕＬ−１細
胞に対しｉｎ ｖｉｔｒｏで直接細胞障害作用を有する
。
本発明の細胞障害物質の産生細胞としては、マウス、ラ
ット、ウサギ、ヒトなどの線維芽細胞が使用され得るが
、好ましくはマウス線維芽細胞が使用され、これらの細
胞を刺激剤にて刺激するか、あるいは無刺激にて培養す
ることによって産生される。
ット、ウサギ、ヒトなどの線維芽細胞が使用され得るが
、好ましくはマウス線維芽細胞が使用され、これらの細
胞を刺激剤にて刺激するか、あるいは無刺激にて培養す
ることによって産生される。
刺激剤としては、本発明の細胞障害物質を誘導し得るも
のであればいずれでもよいが、たとえばコンカナバリン
へのようなレクチン、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）
、リポポリサッカライド（ＬＰＳ）または各種抗原や
ホルボールエステルテ（たとえば、１２−Ｏ−テトラデ
カノイルホルボール−１３−アセテート： ＰＭＡ）な
どが挙げられ、これらを単独あるいは組み合わせて使用
することができる。
のであればいずれでもよいが、たとえばコンカナバリン
へのようなレクチン、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）
、リポポリサッカライド（ＬＰＳ）または各種抗原や
ホルボールエステルテ（たとえば、１２−Ｏ−テトラデ
カノイルホルボール−１３−アセテート： ＰＭＡ）な
どが挙げられ、これらを単独あるいは組み合わせて使用
することができる。
また、細胞培養の際には、血清含有培地、さらに血清不
含培地を用いることも可能である。
含培地を用いることも可能である。
得られた培養上清からの精製は、一般に蛋白質の分離に
用いられている常法、たとえば塩析、遠心分離、透析、
ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラ
フィー、アフィニティークロマトグラフィー、限外濾過
および凍結乾燥などの方法を組み合わせることによって
実施できる。
用いられている常法、たとえば塩析、遠心分離、透析、
ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラ
フィー、アフィニティークロマトグラフィー、限外濾過
および凍結乾燥などの方法を組み合わせることによって
実施できる。
すなわち、本発明において得られた培養上清を硫安塩析
または限外濾過などで濃縮した後、分子量１０．０００
〜２００，０００の物質の分離に通した担体を用いるゲ
ル濾過を行ない、さらにＦＰＬＣ−Ｍｏｎｏ、Ｑ陰イオ
ン交換クロマトグラフィー、ウルトロデックスを用いた
分取用等電点電気永動を行なうことや、固定化コンカナ
バリンＡを用いるアフィニティークロマトグラフィーに
付すことによって分離、精製をすることができる。この
ようにして得られる本発明の細胞障害物質は、次のよう
な性質を有する蛍白性物質である。
または限外濾過などで濃縮した後、分子量１０．０００
〜２００，０００の物質の分離に通した担体を用いるゲ
ル濾過を行ない、さらにＦＰＬＣ−Ｍｏｎｏ、Ｑ陰イオ
ン交換クロマトグラフィー、ウルトロデックスを用いた
分取用等電点電気永動を行なうことや、固定化コンカナ
バリンＡを用いるアフィニティークロマトグラフィーに
付すことによって分離、精製をすることができる。この
ようにして得られる本発明の細胞障害物質は、次のよう
な性質を有する蛍白性物質である。
（１１分子量： ＦＰＬＣ−スーパーロース１２（ファ
ルマシア社製）カラムを用いたゲル濾過により、分子量
は４０，０００〜６０．０００である（第１図）。
ルマシア社製）カラムを用いたゲル濾過により、分子量
は４０，０００〜６０．０００である（第１図）。
（２）等電点：ウルトロデノクス（ＬＫＢ社製）を用い
た分取用等電点電気永動（ｐ Ｈ３〜９）を行なうこと
によって、等電点は５．０±０．５である。
た分取用等電点電気永動（ｐ Ｈ３〜９）を行なうこと
によって、等電点は５．０±０．５である。
（３） イオン交換クロマトグラフィー： ＦＰＬＣ
−Ｍｏｎ。
−Ｍｏｎ。
Ｑ陰イオン交換クロマトグラフィー（ファルマシア社製
）に吸着し、０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，２）中
、０−０．５ Ｍの食塩直線濃度勾配を行なうことによ
り、０．３４〜０．３５Ｍの食塩濃度で溶出される（第
２図）。
）に吸着し、０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，２）中
、０−０．５ Ｍの食塩直線濃度勾配を行なうことによ
り、０．３４〜０．３５Ｍの食塩濃度で溶出される（第
２図）。
（４）アフィニティークロマトグラフィー：０．３Ｍの
食塩含有の０．０℃Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，２）にて
平衡化したコンカナバリンＡ結合セファロース（ファル
マシア社製）において非吸着性である。
食塩含有の０．０℃Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，２）にて
平衡化したコンカナバリンＡ結合セファロース（ファル
マシア社製）において非吸着性である。
（５） その他の性状
（ｉ）酵素処理：リボヌクレアーゼ処理には非感受性で
あるが、トリプシン、キモトリプシン、プロアーゼ処理
に対しては感受性である。
あるが、トリプシン、キモトリプシン、プロアーゼ処理
に対しては感受性である。
（ｉｉ ）熱安定性：１）Ｈ７，２の緩衝液中、４℃、
１時間処理には安定であるが、５６℃では部分失活（６
６％失活）、７０℃ではほぼ完全に失活する。
１時間処理には安定であるが、５６℃では部分失活（６
６％失活）、７０℃ではほぼ完全に失活する。
（ｉｉｉ）ｐＨ安定性：ｐＨ７，２０時間処理には安定
であるが、ｐＨ２では失活、ｐＨ１０では大部分失活（
８３％失活）する。
であるが、ｐＨ２では失活、ｐＨ１０では大部分失活（
８３％失活）する。
（６）細胞障害作用：少なくとも、マウスＬ９２９細胞
、ヒト培養細胞（ヒト肝ＨｕＬ−１）に対して細胞障害
作用を有する。但し、本物質の活性はり、 Ａ。
、ヒト培養細胞（ヒト肝ＨｕＬ−１）に対して細胞障害
作用を有する。但し、本物質の活性はり、 Ａ。
Ｆｌｉｃｋ ら−Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｍｅｔｈｏｄｓ ＋ ６８ ＋１６７−１７５ （１
９８４）に記載の方法に従って行ない、活性の単位は５
０％の細胞障害作用を与える量を１単位（Ｕ）として表
わされる。
Ｍｅｔｈｏｄｓ ＋ ６８ ＋１６７−１７５ （１
９８４）に記載の方法に従って行ない、活性の単位は５
０％の細胞障害作用を与える量を１単位（Ｕ）として表
わされる。
また、本物質の生産手段としては、動物線維芽細胞を培
養する方法のほか、遺伝子工学的手段により大腸菌など
の微生物によって生産することも可能である。
養する方法のほか、遺伝子工学的手段により大腸菌など
の微生物によって生産することも可能である。
本発明の細胞障害物質は、癌および腫瘍などの治療剤と
して、また医学、薬学の分野での試薬として使用するこ
とが可能である。
して、また医学、薬学の分野での試薬として使用するこ
とが可能である。
本発明の細胞障害物質を医薬として用いる場合には、通
常の製剤技術に従って製剤化することができ、たとえば
本物質を担体、賦形剤、希釈剤などと混合して、散剤、
錠剤、カプセル剤、注射剤などの形で提供され得る。
常の製剤技術に従って製剤化することができ、たとえば
本物質を担体、賦形剤、希釈剤などと混合して、散剤、
錠剤、カプセル剤、注射剤などの形で提供され得る。
以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発
明はこれらの実施例によって何ら限定されるものではな
い。
明はこれらの実施例によって何ら限定されるものではな
い。
実施例１
マウス線維芽細胞Ｌ５細胞（マウス線維芽細胞Ｌ９２９
の亜株；寺島ら、Ｊ、 Ｒａｄ、 Ｒｅｓ、 １２ （
２）。
の亜株；寺島ら、Ｊ、 Ｒａｄ、 Ｒｅｓ、 １２ （
２）。
６１−７２． （１９７２）） ３．３ Ｘ Ｉ Ｏ’
個／ｍｌを１０％血清存在下、あるいは血清非存在下に
て３７℃、７２時間培養し、培養上清中への細胞障害物
質の産生を測定すると、血清存在下では２． ３００
Ｕ／ｍｌ、血清非存在下では２０００／ｍｌの活性が認
められた。
個／ｍｌを１０％血清存在下、あるいは血清非存在下に
て３７℃、７２時間培養し、培養上清中への細胞障害物
質の産生を測定すると、血清存在下では２． ３００
Ｕ／ｍｌ、血清非存在下では２０００／ｍｌの活性が認
められた。
実施例２
マウス線維芽細胞Ｌ５細胞を無血清のハムＦ１２培地に
懸濁した後、２４ウエルマイクロテストプレートに３．
３Ｘ１０’−個／ ｍ ｌで植え、各種刺激剤にて７２
時間刺激、培養し、培養上清中への細胞障害物質の産生
を測定した。刺激剤としては、１０ｎｇ ／ｍｌの１２
−０−テトラデカノイルホルボール−１３−アセテート
（ＰＭＡ）と２０ ｐｇ ／ｍ！のりボボリサンカライ
ド（ＬＰＳ） 、１０μｇ／ｍｌのフィトヘマグルチニ
ンＰ （ＰＨＡ−Ｐ） 、または５μｇ／ｍｌのコンカ
ナバリンＡ（ｃｏｎＡ）をそれぞれ併用させて用いた。
懸濁した後、２４ウエルマイクロテストプレートに３．
３Ｘ１０’−個／ ｍ ｌで植え、各種刺激剤にて７２
時間刺激、培養し、培養上清中への細胞障害物質の産生
を測定した。刺激剤としては、１０ｎｇ ／ｍｌの１２
−０−テトラデカノイルホルボール−１３−アセテート
（ＰＭＡ）と２０ ｐｇ ／ｍ！のりボボリサンカライ
ド（ＬＰＳ） 、１０μｇ／ｍｌのフィトヘマグルチニ
ンＰ （ＰＨＡ−Ｐ） 、または５μｇ／ｍｌのコンカ
ナバリンＡ（ｃｏｎＡ）をそれぞれ併用させて用いた。
その結果を第１表に示す。
一以下余白一
第１表から明らかなように、無刺激でもかなりの活性が
認められるが、ＣｏｎＡ＋ＰＭＡによる刺激によって、
若干の活性産生の増強が認められる。
認められるが、ＣｏｎＡ＋ＰＭＡによる刺激によって、
若干の活性産生の増強が認められる。
実施例３
Ｌ５細胞をハムＦ１２培地（血清不合）を用い、３７℃
にて２〜３日回転培養した。この培養上清１．４ＪをＹ
ＭＩＯメンブランフィルタ−（アミコン社製）にて５０
０倍に限外濾過濃縮した。次にＦＰＬＣ−スーパーロー
ス１２（ファルマシアファインケミカルズ）にてゲル濾
過を行なったところ、第１図に示したように活性ピーク
はオプアルプミン（ＯＶＡ）と牛血清アルブミン（ＢＳ
Ａ）の間に溶出され、分子量は４０，０００〜６０，０
００であった。
にて２〜３日回転培養した。この培養上清１．４ＪをＹ
ＭＩＯメンブランフィルタ−（アミコン社製）にて５０
０倍に限外濾過濃縮した。次にＦＰＬＣ−スーパーロー
ス１２（ファルマシアファインケミカルズ）にてゲル濾
過を行なったところ、第１図に示したように活性ピーク
はオプアルプミン（ＯＶＡ）と牛血清アルブミン（ＢＳ
Ａ）の間に溶出され、分子量は４０，０００〜６０，０
００であった。
活性画分をさらにＦＰＬＣ−Ｍｏｎｏ Ｑ陰イオン交
換クロマトグラフィー （ファルマシア社製）により分
画を行なった。Ｍｏｎｏ Ｑカラムは、０．０１Ｍリン
酸緩衝液（ｐＨ７，２）で平衡化しておき、試料添加後
、洗浄ののち、０〜０．５Ｍ食塩による直線濃度勾配に
より溶出した。活性ピークは、第２図に示したように０
．３４〜０．３５ Ｍの食塩濃度にて溶出された。この
段階での活性回収率は、限外濾過濃縮時に比し６．４％
、比活性は７Ｘ１０’Ｕ／■蛋白質であった。
換クロマトグラフィー （ファルマシア社製）により分
画を行なった。Ｍｏｎｏ Ｑカラムは、０．０１Ｍリン
酸緩衝液（ｐＨ７，２）で平衡化しておき、試料添加後
、洗浄ののち、０〜０．５Ｍ食塩による直線濃度勾配に
より溶出した。活性ピークは、第２図に示したように０
．３４〜０．３５ Ｍの食塩濃度にて溶出された。この
段階での活性回収率は、限外濾過濃縮時に比し６．４％
、比活性は７Ｘ１０’Ｕ／■蛋白質であった。
実施例４
本発明物質におけるマウス上９２９細胞とヒト肝ＨｕＬ
−１細胞に対する細胞障害作用について比較検討を行な
った。
−１細胞に対する細胞障害作用について比較検討を行な
った。
第３図に示すように、本物質における細胞障害作用は、
マウスＬ９２９に対するよりも若干弱いが、ヒト肝Ｈｕ
Ｌ−１細胞に対しても細胞障害性を示した。
マウスＬ９２９に対するよりも若干弱いが、ヒト肝Ｈｕ
Ｌ−１細胞に対しても細胞障害性を示した。
実施例５
本発明物質におけるその他の性状について検討した。
まず酵素処理においては、リボヌクレアーゼ１００ ｐ
ｇ ／ｍｌ トリプシンＩＱＯｕｇ／１１、キモトリ
プシンｌＯＯμｇ／ｍｌ、プロアーゼ１００μｓ／ｍｌ
をそれぞれ本発明物質に添加し、３７℃で２時間処理し
た後、活性評価を行なった。
ｇ ／ｍｌ トリプシンＩＱＯｕｇ／１１、キモトリ
プシンｌＯＯμｇ／ｍｌ、プロアーゼ１００μｓ／ｍｌ
をそれぞれ本発明物質に添加し、３７℃で２時間処理し
た後、活性評価を行なった。
熱安定性においては、約４００ Ｕ／ｍｌの試料を０．
１４Ｍ食塩含有の０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，２
）中で、４℃、５６℃、７０℃にてそれぞれ１時間処理
した後、残存する活性を測定した。
１４Ｍ食塩含有の０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，２
）中で、４℃、５６℃、７０℃にてそれぞれ１時間処理
した後、残存する活性を測定した。
またｐＨ安定性においては、約２５００／ｍｌの試料を
ｐＨ２（Ｑ、０２Ｍグリシン緩衝液）、ｐＨ７（０，１
４Ｍ食塩含有のＯ，０１Ｍリン酸緩衝液）およびｐＨ１
０（０，０２Ｍグリシン緩衝液）中にてそれぞれ２０時
間処理した後、０．１４Ｍ食塩含有の０．０１Ｍリン酸
緩衝液（ｐＨ７，２）にて透析し、残存活性を測定した
。
ｐＨ２（Ｑ、０２Ｍグリシン緩衝液）、ｐＨ７（０，１
４Ｍ食塩含有のＯ，０１Ｍリン酸緩衝液）およびｐＨ１
０（０，０２Ｍグリシン緩衝液）中にてそれぞれ２０時
間処理した後、０．１４Ｍ食塩含有の０．０１Ｍリン酸
緩衝液（ｐＨ７，２）にて透析し、残存活性を測定した
。
その結果、本発明の細胞障害物質は、酵素処理において
、リボヌクレアーゼには非感受性、トリプシン、キモト
リプシン、プロアーゼに感受性であり、熱安定性におい
て、４℃では安定であるが、５６℃では部分失活（６６
％失活）、７０℃ではほぼ完全に失活し、ｐＨ安定性に
おいては、１）Ｈ７では安定であるが、ｐＨ２では失活
、１）ＨＩＯでは大部分失活（８３％失活）することが
判った。
、リボヌクレアーゼには非感受性、トリプシン、キモト
リプシン、プロアーゼに感受性であり、熱安定性におい
て、４℃では安定であるが、５６℃では部分失活（６６
％失活）、７０℃ではほぼ完全に失活し、ｐＨ安定性に
おいては、１）Ｈ７では安定であるが、ｐＨ２では失活
、１）ＨＩＯでは大部分失活（８３％失活）することが
判った。
なお、本発明の細胞障害物質は、分子量およびｐＨ安定
性の点で従来のβ−ＩＦＮやＣＢＸとは異なる。
性の点で従来のβ−ＩＦＮやＣＢＸとは異なる。
第１図はＦＰＬＣ−スーパーロース１２カラムを用いた
ゲル濾過による溶出パターンを、第２図はＦＰＬＣ−Ｍ
ｏｎｏ Ｑカラムを用いた食塩（０〜０．５Ｍ）の直線
的濃度勾配による溶出パターンを、そして第３図はマウ
ス上９２９細胞とヒト肝ＨｕＬ〜１細胞に対する細胞障
害作用についてそれぞれ示す。 また、第１〜２図中、←→は細胞障害活性（％）を、−
・−は吸光度２８０ ｎ ｍ （０，Ｄ、ｚｓｏ）を、
−ｍ−は食塩による直線的濃度勾配をそれぞれ表わす。
ゲル濾過による溶出パターンを、第２図はＦＰＬＣ−Ｍ
ｏｎｏ Ｑカラムを用いた食塩（０〜０．５Ｍ）の直線
的濃度勾配による溶出パターンを、そして第３図はマウ
ス上９２９細胞とヒト肝ＨｕＬ〜１細胞に対する細胞障
害作用についてそれぞれ示す。 また、第１〜２図中、←→は細胞障害活性（％）を、−
・−は吸光度２８０ ｎ ｍ （０，Ｄ、ｚｓｏ）を、
−ｍ−は食塩による直線的濃度勾配をそれぞれ表わす。
Claims (2)
- （１）動物線維芽細胞から産生され、細胞障害作用を有
し、以下に述べる性質を有する生理活性物質。 （ａ）分子量が４０，０００〜６０，０００（ゲル濾過
クロマトグラフィー）である、 （ｂ）等電点が５．０±０．５である、 （ｃ）ＦＰＬＣ−ＭｏｎｏＱ陰イオン交換クロマトグラ
フィーで、０．３４〜０．３５Ｍ食塩濃度にて溶出され
る、 （ｄ）コンカナバリンＡ結合セファロースに非吸着性で
ある、 （ｅ）トリプシン、キモトリプシン、プロアーゼに感受
性で、ＲＮａｓｅに非感受性である、（ｆ）ｐＨ７．２
の緩衝液中、４℃にて安定、５６℃、１時間処理にて部
分失活（６６％失活）、７０℃にてほぼ完全に失活する
、 （ｇ）ｐＨ７、２０時間処理にて安定であるが、ｐＨ２
では失活、ｐＨ１０では大部分失活（８３％失活）する
、 （ｈ）マウスＬ９２９細胞、人肝由来ＨｕＬ−１細胞に
対しｉｎ ｖｉｔｒｏで直接細胞障害作用を有する。 - （２）動物線維芽細胞を、血清含有および血清不含の培
地にて培養し、以下の性質を有する生理活性物質を産生
させ、その培養上清より採取することを特徴とする細胞
障害作用を有する生理活性物質の製造方法。 （ａ）分子量が４０，０００〜６０，０００（ゲル濾過
クロマトグラフィー）である、 （ｂ）等電点が５．０±０．５である、 （ｃ）ＦＰＬＣ−ＭｏｎｏＱ陰イオン交換クロマトグラ
フィーで、０．３４〜０．３５Ｍ食塩濃度にて溶出され
る、 （ｄ）コンカナバリンＡ結合セファロースに非吸着性で
ある、 （ｅ）トリプシン、キモトリプシン、プロアーゼに感受
性で、ＲＮａｓｅに非感受性である、（ｆ）ｐＨ７．２
の緩衝液中、４℃にて安定、５６℃、１時間処理にて部
分失活（６６％失活）、７０℃にてほぼ完全に失活する
、 （ｇ）ｐＨ７、２０時間処理にて安定であるが、ｐＨ２
では失活、ｐＨ１０では大部分失活（８３％失活）する
、 （ｈ）マウスＬ９２９細胞、人肝由来ＨｕＬ−１細胞に
対しｉｎ ｖｉｔｒｏで直接細胞障害作用を有する。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60242375A JPS62103021A (ja) | 1985-10-28 | 1985-10-28 | 細胞障害作用を有する生理活性物質およびその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60242375A JPS62103021A (ja) | 1985-10-28 | 1985-10-28 | 細胞障害作用を有する生理活性物質およびその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62103021A true JPS62103021A (ja) | 1987-05-13 |
Family
ID=17088232
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60242375A Pending JPS62103021A (ja) | 1985-10-28 | 1985-10-28 | 細胞障害作用を有する生理活性物質およびその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS62103021A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0821969A2 (en) | 1992-07-16 | 1998-02-04 | Snow Brand Milk Products Co., Ltd. | Medicinal Composition comprising TCF-II |
-
1985
- 1985-10-28 JP JP60242375A patent/JPS62103021A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0821969A2 (en) | 1992-07-16 | 1998-02-04 | Snow Brand Milk Products Co., Ltd. | Medicinal Composition comprising TCF-II |
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