JPS62104801A - ジホスホネ−ト誘導高分子類 - Google Patents
ジホスホネ−ト誘導高分子類Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明はジホスホネート誘導高分子類に関する。
特に、本発明はテクネチウム−ｇｇｍで放射紳標蹄化さ
れて（・てもよ（・ジホスホネート誘導高分子類に関す
る。
れて（・てもよ（・ジホスホネート誘導高分子類に関す
る。
発明の背景
軟部組織の腫瘍の検出および医学的／診断的評価には、
現在、一連の比較的複雑な診断試験を必要とする。一般
に、医師は、癌が疑われる場合に利用可能なすべての適
切な診断試験を実施する。
現在、一連の比較的複雑な診断試験を必要とする。一般
に、医師は、癌が疑われる場合に利用可能なすべての適
切な診断試験を実施する。
これらの試験では、ｋ瘍の存在を検出するために、潜在
的腫瘍細胞および分泌物に関する視覚的内部検査および
研究所試験のためのイメージング装置を利用する。肺癌
が検出され、悪性のように思われる場合は、バイオプシ
ーが行なわれて診断が確定する。バイオプシーのみが悪
性腫瘍の決定的証拠となるのである。
的腫瘍細胞および分泌物に関する視覚的内部検査および
研究所試験のためのイメージング装置を利用する。肺癌
が検出され、悪性のように思われる場合は、バイオプシ
ーが行なわれて診断が確定する。バイオプシーのみが悪
性腫瘍の決定的証拠となるのである。
１ イア−，２ヶ□ヶ□、やあ。５゜１２つ。１
本的タイプに区別することができるニ一つはＸ線または
音波のような外部エネルギー源を利用し、他は放射性同
位元素のような内部エネルギー源を利用する。
本的タイプに区別することができるニ一つはＸ線または
音波のような外部エネルギー源を利用し、他は放射性同
位元素のような内部エネルギー源を利用する。
ＸＰＪ検査は胸部癌の進行期を定める上で最も利用され
る手段である。その方法は大多数の肺癌を検出する場合
にも適用される。譬（・のある部位が確認されたならば
、正確なＸ線写真は、胸部または肪の腫瘍の正確な位置
と範囲に関する貴重な情報を医師に提供することができ
る。しかしながら、残念なことに、腫瘍がＸＰＪによっ
て検出されるまで十分に大きくなったとき（１〜２ ａ
ｍ３） Ｋは、既に患者の予後は比較的悪化しているお
それがある。軟部組織の肺癌に対するＸ線感度が比較的
低１′ いことに加えて、この方法の放
射線照射レペーに伴う危険性に関して重大な懸念が抱か
れ続けて（・る。
る手段である。その方法は大多数の肺癌を検出する場合
にも適用される。譬（・のある部位が確認されたならば
、正確なＸ線写真は、胸部または肪の腫瘍の正確な位置
と範囲に関する貴重な情報を医師に提供することができ
る。しかしながら、残念なことに、腫瘍がＸＰＪによっ
て検出されるまで十分に大きくなったとき（１〜２ ａ
ｍ３） Ｋは、既に患者の予後は比較的悪化しているお
それがある。軟部組織の肺癌に対するＸ線感度が比較的
低１′ いことに加えて、この方法の放
射線照射レペーに伴う危険性に関して重大な懸念が抱か
れ続けて（・る。
胸部癌の場合、腫瘍の適切な位置および大きさは超音波
技術から知ることができる。超音波は、胸部に当たる高
周波音波より生じるエコーパターンから腫瘍両便を与え
る。体の広箭囲部分の超音波検査は解析が困難であり、
したがってさほど価値がな（・ため、この方法は触診可
能な功が検出された後の胸部検査に通常適用される。
技術から知ることができる。超音波は、胸部に当たる高
周波音波より生じるエコーパターンから腫瘍両便を与え
る。体の広箭囲部分の超音波検査は解析が困難であり、
したがってさほど価値がな（・ため、この方法は触診可
能な功が検出された後の胸部検査に通常適用される。
クエン酸ガリウム（ａａ−６７）は、一定の軟部組織腫
瘍の存在および鉛量を検査するための望ましい唯一の放
射性診断薬である。ガリウムは肺および肝緘の肺癌の診
断に利用可能であることが示された。この方法にお（・
て、ガリウムは静注投与され；しかる後、ガリウムは腫
瘍組絣に高濃度で取込まれたガリウムを検出するガンマ
カメラによって液量される。
瘍の存在および鉛量を検査するための望ましい唯一の放
射性診断薬である。ガリウムは肺および肝緘の肺癌の診
断に利用可能であることが示された。この方法にお（・
て、ガリウムは静注投与され；しかる後、ガリウムは腫
瘍組絣に高濃度で取込まれたガリウムを検出するガンマ
カメラによって液量される。
ガリウムスキャニングは（・くつかの重大な欠点をもっ
て−・る。薬剤は肺癌にもａｍについても特異性を有し
ていないのである。ガリウムは様々なタイプの腫瘍（良
性および悪性の両方）にある程度集中するだけではなく
、何らかの局所的感染をも検知してしまうのである。こ
れらの特徴のために、クエン酸ガリウムによるスキャン
の解析は著しく困難である。スキャンは通常コントラス
トが低く、放射性同位元素の集中領域を拡散してしまう
。
て−・る。薬剤は肺癌にもａｍについても特異性を有し
ていないのである。ガリウムは様々なタイプの腫瘍（良
性および悪性の両方）にある程度集中するだけではなく
、何らかの局所的感染をも検知してしまうのである。こ
れらの特徴のために、クエン酸ガリウムによるスキャン
の解析は著しく困難である。スキャンは通常コントラス
トが低く、放射性同位元素の集中領域を拡散してしまう
。
放射性同位元素で標識化されたタンパク質はヒトの場合
に放射線トレーサーまたは放射線スキャナーとして有用
であることが見出された。その例としては、例えば肺塞
栓病の診断用に放射紳標識什された外来または自己の血
漿タンパク質；うっ而のイメージング用のヒト血清アル
ブミン；軟部＆ｆｆｉのイメージング用に放射性標膳化
された腫瘍特異性抗体；代謝性および内分Ｗ性疾患診断
用忙放射紳標識化された酵素タンパク質およびホルモン
タンパク質がある。最も広汎に使用される放射性核種に
は、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１２５、ヨウ素−１３１
、インジウム−１１１、ガリウム−６７およびテクネチ
ウム−９９ｍがある。ハロゲンの１種であるヨウ素の同
位元素は、比較的簡単な置換作用釦よって、タンパク質
分子中に不可逆的に取込まれ得る。ヨウ素同位元素は、
他の理由、特に、これらの同位元滓から放射されるβ狼
とヨウ素−１３１の長（・半減期（８日）との理由から
、重要性が少な（・。
に放射線トレーサーまたは放射線スキャナーとして有用
であることが見出された。その例としては、例えば肺塞
栓病の診断用に放射紳標識什された外来または自己の血
漿タンパク質；うっ而のイメージング用のヒト血清アル
ブミン；軟部＆ｆｆｉのイメージング用に放射性標膳化
された腫瘍特異性抗体；代謝性および内分Ｗ性疾患診断
用忙放射紳標識化された酵素タンパク質およびホルモン
タンパク質がある。最も広汎に使用される放射性核種に
は、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１２５、ヨウ素−１３１
、インジウム−１１１、ガリウム−６７およびテクネチ
ウム−９９ｍがある。ハロゲンの１種であるヨウ素の同
位元素は、比較的簡単な置換作用釦よって、タンパク質
分子中に不可逆的に取込まれ得る。ヨウ素同位元素は、
他の理由、特に、これらの同位元滓から放射されるβ狼
とヨウ素−１３１の長（・半減期（８日）との理由から
、重要性が少な（・。
テクネチウム−９９ｍ、は、放射貌スキャニングおよび
放射線トレーシングのための最も望ましい放射性同位元
素であると一般に認覚されて（・る。タンパク質をテク
ネチウムで標識化する試みとしては、タンパク質分子に
最初から存在するキレート形成基によるテクネチウムの
キレート形成、またはテクネチウムで標識化する前にお
けるキレート形成基によるタンパク質分子の誘導がある
。タンパク質に最初から存在するキレート形成基とテク
ネチウムとによって形成されるキレートは、その性質か
らしてさほど安定ではな〜・ため、テクネチウムが他の
タンパク質リガンドと交換することを防止できな（・。
放射線トレーシングのための最も望ましい放射性同位元
素であると一般に認覚されて（・る。タンパク質をテク
ネチウムで標識化する試みとしては、タンパク質分子に
最初から存在するキレート形成基によるテクネチウムの
キレート形成、またはテクネチウムで標識化する前にお
けるキレート形成基によるタンパク質分子の誘導がある
。タンパク質に最初から存在するキレート形成基とテク
ネチウムとによって形成されるキレートは、その性質か
らしてさほど安定ではな〜・ため、テクネチウムが他の
タンパク質リガンドと交換することを防止できな（・。
このタイプのテクネチウム標識化タンパク質は、したが
って会長な生体特異性を欠く場合が多（・。
って会長な生体特異性を欠く場合が多（・。
キレート化剤誘導タンパク質は通常キレート什剤として
アミン酢酸化合物（例えば、エチレンジアミン四酢酸（
ＢＤＴＡまたはＤＴＰＡ ）を含有している。この種の
タンパク質はインジウム−１１１と強固なキレートを形
成することが見出された。
アミン酢酸化合物（例えば、エチレンジアミン四酢酸（
ＢＤＴＡまたはＤＴＰＡ ）を含有している。この種の
タンパク質はインジウム−１１１と強固なキレートを形
成することが見出された。
ポリホスホネート類、特にジホスホネート類は、テクネ
チウムをキレート化するための非常に望ましく・リガン
ドであると一般に認党されている。本発明以前には、ジ
ホスホネート類で誘導されたタンパク質は利用すること
ができなかった。したがって、テクネチウム−９９ｍを
キレート化するために適切なジホスホネート誘導タンパ
ク質を提供することが本発明の目的である。
チウムをキレート化するための非常に望ましく・リガン
ドであると一般に認党されている。本発明以前には、ジ
ホスホネート類で誘導されたタンパク質は利用すること
ができなかった。したがって、テクネチウム−９９ｍを
キレート化するために適切なジホスホネート誘導タンパ
ク質を提供することが本発明の目的である。
タンパク質を変性させずまたはその生物活性を損失させ
ることなく、テクネチウム−９９ｍを利用してジホスホ
ネート誘導タンパク質を標識化させる方法を提供するこ
とが本発明のもう一つの目的である。
ることなく、テクネチウム−９９ｍを利用してジホスホ
ネート誘導タンパク質を標識化させる方法を提供するこ
とが本発明のもう一つの目的である。
タンパク質ジホスホネートテクネチウムキレートを提供
し、しかも、このようなキレート類を利用してヒトにお
ける軟部ｂｚのイメージングのようなシンチグラフィー
イメージングのための方法を提供することも本発明の更
にもう一つの目的である。
し、しかも、このようなキレート類を利用してヒトにお
ける軟部ｂｚのイメージングのようなシンチグラフィー
イメージングのための方法を提供することも本発明の更
にもう一つの目的である。
背景技術
軟部＠瘍イメージ７グに放射８ＩｉＪ標識化タンパク質
を使用することは周知である。早期の試みでは一般に、
ヨウ素−１２３、ヨウ素−１２５またはヨウ素−１３１
によるタンパク質の誘導が行なわれた。
を使用することは周知である。早期の試みでは一般に、
ヨウ素−１２３、ヨウ素−１２５またはヨウ素−１３１
によるタンパク質の誘導が行なわれた。
しかしながら、簡単に入手できる放射性核種のテクネチ
ウムは診断的イメージングに関し最も優れた核特性を有
して（・ることか十分認識されて（・るγ 〔エラチルマンら、インターナショナル・ジャーナル・
オプ・アプライド・ラジェーション・アンド・アイソト
ープス、第２８巻、１９７７年、第６７−８２頁（Ｒｃ
ｋｅｌｍａｎ ａｔ ａｌ、、 Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏ
ｎａｌ ＪｏｕｒｎａｌＡｐｐｌｉｅｄ Ｒａｄｉａｔ
ｉｏｎ ａｎｄ 工５ｏｔｏｐｅｓ、 ２８ （１９７
７）。
ウムは診断的イメージングに関し最も優れた核特性を有
して（・ることか十分認識されて（・るγ 〔エラチルマンら、インターナショナル・ジャーナル・
オプ・アプライド・ラジェーション・アンド・アイソト
ープス、第２８巻、１９７７年、第６７−８２頁（Ｒｃ
ｋｅｌｍａｎ ａｔ ａｌ、、 Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏ
ｎａｌ ＪｏｕｒｎａｌＡｐｐｌｉｅｄ Ｒａｄｉａｔ
ｉｏｎ ａｎｄ 工５ｏｔｏｐｅｓ、 ２８ （１９７
７）。
ｐｐ、 ６７−８２） ；エッケルマンラ、キャンサー
・リサーチ、第４０巻、１９８０年、第３０３６−３０
４２頁（Ｋｃｋｅｌｆｎａｎ ｅｔ ａユ、、
Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、 ４０（１９８
０）。
・リサーチ、第４０巻、１９８０年、第３０３６−３０
４２頁（Ｋｃｋｅｌｆｎａｎ ｅｔ ａユ、、
Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、 ４０（１９８
０）。
ｐｐ、 ３０３６−３０４２） 〕。
タンパク質をテクネチウムで標識化する試みが（・る［
１９８１年１２月１５日、ロープｙ、 （Ｒｈｏｄｅ
ａ ）から発行された米国特許第４，３０５，９２２号
明細書； １９８２年１月１９日、バーチＡ、 （Ｂｕ
ｒｃｈｉｅｌ ）らから発行された米国特許第４，３１
１，６８８号明細書； １９８２年４月６日、クロッ
クフォード（０ｒｏｃｋｆｏｒａ ）らから発行された
米国特許第４，３２３，５４６号明細書〕。いずれの方
法もタンパク質に固有のキレート形成能に基づいている
。これらの錯体は他のタンパク質存在下では不安定であ
ることが予測され、したがって軟部腫瘍イメージングに
は適して（・ない。
１９８１年１２月１５日、ロープｙ、 （Ｒｈｏｄｅ
ａ ）から発行された米国特許第４，３０５，９２２号
明細書； １９８２年１月１９日、バーチＡ、 （Ｂｕ
ｒｃｈｉｅｌ ）らから発行された米国特許第４，３１
１，６８８号明細書； １９８２年４月６日、クロッ
クフォード（０ｒｏｃｋｆｏｒａ ）らから発行された
米国特許第４，３２３，５４６号明細書〕。いずれの方
法もタンパク質に固有のキレート形成能に基づいている
。これらの錯体は他のタンパク質存在下では不安定であ
ることが予測され、したがって軟部腫瘍イメージングに
は適して（・ない。
もう一つの試みは、ＲＤＴＡの二官能性類似体を用〜・
るタンパク質の誘導であった〔ローソクら、インターナ
ショナル・ジャーナル・オプ・アプライド・ラジエーシ
ョンおよびアイソトープス、第２９巻、１ｇ７８年、第
６８７−６９２頁（Ｌｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ、 。
るタンパク質の誘導であった〔ローソクら、インターナ
ショナル・ジャーナル・オプ・アプライド・ラジエーシ
ョンおよびアイソトープス、第２９巻、１ｇ７８年、第
６８７−６９２頁（Ｌｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ、 。
Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ａｐｐｌｉｅｄ Ｒａｄｉａｔｉｏｎａｎａ ｌ５ｏｔ
ｏｐｅｓ、 ２ｃ＋（ｔ９７８）、 １１１１）、 ６
８７−６９２） ’−サンドバーグら、ジャーナル・オ
プ・メディカル・ケミストリー、第１７巻、１９７４年
、第１３６４−１３６７頁（８ｕｎｄ’ｂｅｒｇ ｅｔ
ａｌ、、 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＭｅｄｉｃａｌＣ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ、 １７（１９７４）ｌ １＋１）、
１３６４−１３６７） ］。キレート化剤はジアゾフ
ェニル基を介してタンパク質と結合する。その化合物は
インジウム−１１１をキレート化することが明らかにさ
れた。これは、ＫＤＴＡおよび類似のキレート化部がお
そらくテクネチウムとさほど強（・錯体を形成しないと
いう事実に基づ（・て（・るりかもしれな〜・〔トイチ
ェら、ジャーナル・オプ・ヌクレイツク・メディシン、
第２１巻、１９８０年、第８５９−８６６頁（Ｄｅｕｔ
ｓｃｈ ｅｔａユ、、 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｎｕｃｌｅｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、 ２１ （１
９８０）。
Ａｐｐｌｉｅｄ Ｒａｄｉａｔｉｏｎａｎａ ｌ５ｏｔ
ｏｐｅｓ、 ２ｃ＋（ｔ９７８）、 １１１１）、 ６
８７−６９２） ’−サンドバーグら、ジャーナル・オ
プ・メディカル・ケミストリー、第１７巻、１９７４年
、第１３６４−１３６７頁（８ｕｎｄ’ｂｅｒｇ ｅｔ
ａｌ、、 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＭｅｄｉｃａｌＣ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ、 １７（１９７４）ｌ １＋１）、
１３６４−１３６７） ］。キレート化剤はジアゾフ
ェニル基を介してタンパク質と結合する。その化合物は
インジウム−１１１をキレート化することが明らかにさ
れた。これは、ＫＤＴＡおよび類似のキレート化部がお
そらくテクネチウムとさほど強（・錯体を形成しないと
いう事実に基づ（・て（・るりかもしれな〜・〔トイチ
ェら、ジャーナル・オプ・ヌクレイツク・メディシン、
第２１巻、１９８０年、第８５９−８６６頁（Ｄｅｕｔ
ｓｃｈ ｅｔａユ、、 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｎｕｃｌｅｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、 ２１ （１
９８０）。
ｐｐ、 ８５９−８６６） ”ｌ。
ヨコヤ−ｒ （！ｏｌｋｏｙａｎｏａ ）らにより１９
８１年９月１日に発行された米国特許＄ ４，２８７，
３６２号明細書は、タンパク質をテクネチウムで標識化
するために特に開発された二官能性キレート化剤につ（
・て開示している。アルブミン標識化効室はほぼ１００
％であることが報告されており、その化合物は１従来の
テクネチウム−９９ｍ標識化ヒト血清アルブミン１
よりも長期間にわたって一層高（・血液レベ
ル°を与える。
８１年９月１日に発行された米国特許＄ ４，２８７，
３６２号明細書は、タンパク質をテクネチウムで標識化
するために特に開発された二官能性キレート化剤につ（
・て開示している。アルブミン標識化効室はほぼ１００
％であることが報告されており、その化合物は１従来の
テクネチウム−９９ｍ標識化ヒト血清アルブミン１
よりも長期間にわたって一層高（・血液レベ
ル°を与える。
発明の要約
本発明は、次式：
〔上記式中、Ｐは、タンパク質類、ポリペプチド類、多
糖類、ポリ（アクリレート）、ポリ（アクリルアミド）
、ポリ（メタクリレート）、ポリ（メタクリレート）、
ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、ポリ（ビ
ニルアルコール）、ポリ（無水マレイン酸）、ポリ（マ
レアート）、ポリ（アミド）、ポリ（エチレンアミン）
、ポリ（： ”７″“）：ｙ−ｙｖ）・＋） （
７’ｏ ｅｖ：ｙｆ“′。
糖類、ポリ（アクリレート）、ポリ（アクリルアミド）
、ポリ（メタクリレート）、ポリ（メタクリレート）、
ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、ポリ（ビ
ニルアルコール）、ポリ（無水マレイン酸）、ポリ（マ
レアート）、ポリ（アミド）、ポリ（エチレンアミン）
、ポリ（： ”７″“）：ｙ−ｙｖ）・＋） （
７’ｏ ｅｖ：ｙｆ“′。
ニー゛）・１す（″＝″アゝテート団よび“す（：
ビニルベンジルクロリド）からなる群より選
択される高分子であって；しかも−ＮＨ２、−ＣＯＯ１
１、−８Ｒ１−ＣＨＯｌ−８−８，−ＯＨ，フェノール
、グアニジノ、イミダゾールまたはインドール、および
それらの混合基からなる群より選択される１以上の反応
末端基を有しており： Ｌは、 ■ 一＆ＣＨ−、−冊一０Ｈ２−，−０Ｈ２−８−■２−．
−５−ｓ、、−ａ−ｃ−慮−およびからなる群より選択
される結合部分であり：Ｑは、置換アリール、非置換ア
リールまたはＣ１〜０１２のアルキルからなる群より選
択されるスペーサー基であり；ｎは０またはｌであり；
更に、Ｘは、ＨｌＯＨｌＮ）１２、置換もしくは非置換
アミン、ハロゲンまたはＣ１％ Ｃ４のアルキルからな
る群より選択される〕 のジホスホネート誘導高分子類およびこれら誘導高分子
類の薬学上許容される塩類からなる。これらの誘導高分
子類は、生体人工器具およびソフトコンタクトレンズの
生物学的石灰化を阻害する抗石灰化剤としての使用に適
しており、更には、放射線標識化高分子が使用される肺
蓼イメージング、ラジオアッセイ、イムノアッセイ、レ
セプターパインディングアッセイまたは他の（・ずれか
のシンチグラフィ一方法に使用するラジオグラフィー造
影剤としても適して（・る。誘導高分子類は重金属イオ
ン類、特にテクネチウム−９９０１のキレート化に適し
て（・る。誘導タンパク質の例としては、誘導向液タン
パク質、誘導酵素、誘導タンパク質性ホルモン、誘導抗
体および抗体断片、コラーゲンおよびミオシンのような
結合組織および細胞体重のタンパク質がある。
ビニルベンジルクロリド）からなる群より選
択される高分子であって；しかも−ＮＨ２、−ＣＯＯ１
１、−８Ｒ１−ＣＨＯｌ−８−８，−ＯＨ，フェノール
、グアニジノ、イミダゾールまたはインドール、および
それらの混合基からなる群より選択される１以上の反応
末端基を有しており： Ｌは、 ■ 一＆ＣＨ−、−冊一０Ｈ２−，−０Ｈ２−８−■２−．
−５−ｓ、、−ａ−ｃ−慮−およびからなる群より選択
される結合部分であり：Ｑは、置換アリール、非置換ア
リールまたはＣ１〜０１２のアルキルからなる群より選
択されるスペーサー基であり；ｎは０またはｌであり；
更に、Ｘは、ＨｌＯＨｌＮ）１２、置換もしくは非置換
アミン、ハロゲンまたはＣ１％ Ｃ４のアルキルからな
る群より選択される〕 のジホスホネート誘導高分子類およびこれら誘導高分子
類の薬学上許容される塩類からなる。これらの誘導高分
子類は、生体人工器具およびソフトコンタクトレンズの
生物学的石灰化を阻害する抗石灰化剤としての使用に適
しており、更には、放射線標識化高分子が使用される肺
蓼イメージング、ラジオアッセイ、イムノアッセイ、レ
セプターパインディングアッセイまたは他の（・ずれか
のシンチグラフィ一方法に使用するラジオグラフィー造
影剤としても適して（・る。誘導高分子類は重金属イオ
ン類、特にテクネチウム−９９０１のキレート化に適し
て（・る。誘導タンパク質の例としては、誘導向液タン
パク質、誘導酵素、誘導タンパク質性ホルモン、誘導抗
体および抗体断片、コラーゲンおよびミオシンのような
結合組織および細胞体重のタンパク質がある。
より狭義には、本発明はテクネチウム−９９ｍとキレー
ト化された誘導＠温特異性抗体または抗体断片に関する
。本発明は更に、ジホスホネート−タンパク質結合を切
断したりまたは生物活性の著しく・損失に結びつくタン
パク質変性を生じたりすることのな（・、ベル力りネテ
ート溶液の現場還元による誘導タンパク質のテクネチウ
ム標識化方法を提供する。本発明によるテクネニウムー
タンパク質キレート類は面漿タンパク質の存在下で安定
であり；抗体テクネチウムキレート類はそれらの抗原結
合能を保有しており；更に、誘導タンパク質は骨組織に
対して過度の親和性をもっていた（・。
ト化された誘導＠温特異性抗体または抗体断片に関する
。本発明は更に、ジホスホネート−タンパク質結合を切
断したりまたは生物活性の著しく・損失に結びつくタン
パク質変性を生じたりすることのな（・、ベル力りネテ
ート溶液の現場還元による誘導タンパク質のテクネチウ
ム標識化方法を提供する。本発明によるテクネニウムー
タンパク質キレート類は面漿タンパク質の存在下で安定
であり；抗体テクネチウムキレート類はそれらの抗原結
合能を保有しており；更に、誘導タンパク質は骨組織に
対して過度の親和性をもっていた（・。
本発明は更に、テクネチウム−９９ｍでキレート什され
たジホスホネート誘導分子類を使用するシンチグラフィ
ーイメージング法をも提供する。
たジホスホネート誘導分子類を使用するシンチグラフィ
ーイメージング法をも提供する。
発明の詳細な説明
本発明は、一般式：
〔上記式中、Ｐは、タンパク質類、ポリペプチド類、多
糖類、ポリ（アクリレート〕、ポリ（アクリルアミド）
、ポリ（メタクリレート）、ポリ（メタクリレート）、
ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、ポリ（ビ
ニルアルコール）、ポＩ： す（無水マレイン酸）、ポリ（マレアート）、ポリ（ア
ミド）、ポリ（エチレンアミン）、ポリ（エチレンクリ
コール）、ポリ（プロピレングリコール）、ポリ（ビニ
ルアセテート）およびポリ（ビニルベンジルクロリド）
からなる群より選択される高分子、好ましくはタンパク
質類であって；しかも−ＩＪＨ２、−０００Ｈ，−８ｌ
ｉ、−０ＨＯ１−８−８，−ＯＲ。
糖類、ポリ（アクリレート〕、ポリ（アクリルアミド）
、ポリ（メタクリレート）、ポリ（メタクリレート）、
ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、ポリ（ビ
ニルアルコール）、ポＩ： す（無水マレイン酸）、ポリ（マレアート）、ポリ（ア
ミド）、ポリ（エチレンアミン）、ポリ（エチレンクリ
コール）、ポリ（プロピレングリコール）、ポリ（ビニ
ルアセテート）およびポリ（ビニルベンジルクロリド）
からなる群より選択される高分子、好ましくはタンパク
質類であって；しかも−ＩＪＨ２、−０００Ｈ，−８ｌ
ｉ、−０ＨＯ１−８−８，−ＯＲ。
フェノール、グアニジノ、イミダゾールまたはインドー
ル、およびそれらの混合基からなる群より選択されろ１
以上の反応末端基を有しており；Ｌは、 −し四−２−旧一０Ｈ２−，−Ｃ１２−８−ＯＨ２−、
−８−８−、−０−０−慮一 およ鮒 からなる群より選択される結合部分であり；Ｑは、置換
了り−ル、非置換アリールまたは０ｌ−Ｃ１２のアルキ
ルからなる群より選択されるスペース基、好ましくは非
置換アリールであり；ｎは０または１であり；更に、ｘ
は、Ｈ，Ｏ）ｉ、Ｎ１１ｉ２、置換もしくは非置換アミ
ノ、ハロゲンまたはＣ１〜Ｃ４のアルキル、好ましくは
ＨｌＯＨまたはＮ）１２からなる群より選択される〕 のジホスホネート誘導高分子類およびこれら誘導高分子
類の薬学上許容される塩類からなる。
ル、およびそれらの混合基からなる群より選択されろ１
以上の反応末端基を有しており；Ｌは、 −し四−２−旧一０Ｈ２−，−Ｃ１２−８−ＯＨ２−、
−８−８−、−０−０−慮一 およ鮒 からなる群より選択される結合部分であり；Ｑは、置換
了り−ル、非置換アリールまたは０ｌ−Ｃ１２のアルキ
ルからなる群より選択されるスペース基、好ましくは非
置換アリールであり；ｎは０または１であり；更に、ｘ
は、Ｈ，Ｏ）ｉ、Ｎ１１ｉ２、置換もしくは非置換アミ
ノ、ハロゲンまたはＣ１〜Ｃ４のアルキル、好ましくは
ＨｌＯＨまたはＮ）１２からなる群より選択される〕 のジホスホネート誘導高分子類およびこれら誘導高分子
類の薬学上許容される塩類からなる。
本明細書で用（・られる１薬学上許容される塩類１とは
、それらが誘導される酸型と同様の一般的薬理学的性質
をもち、しかも毒性の面からも許容される、ジホスホネ
ート誘導化合物の塩類を意味する。薬学上許容される塩
類には、アルカリ金属（ナトリウムおよびカリウム）、
アルカリ土類金嬉（カルシウムおよびマグネシウム）、
無宿性重金属（スズおよびインジウム）、アンモニウム
および低分子ｔｔ喚アンモニウム（七ノー、ジーおよび
トリエタノールアミン）の塩類を含む。好ましい化合物
類は、ナトリウム、カリウムおよびアンモニウム塩類で
ある。
、それらが誘導される酸型と同様の一般的薬理学的性質
をもち、しかも毒性の面からも許容される、ジホスホネ
ート誘導化合物の塩類を意味する。薬学上許容される塩
類には、アルカリ金属（ナトリウムおよびカリウム）、
アルカリ土類金嬉（カルシウムおよびマグネシウム）、
無宿性重金属（スズおよびインジウム）、アンモニウム
および低分子ｔｔ喚アンモニウム（七ノー、ジーおよび
トリエタノールアミン）の塩類を含む。好ましい化合物
類は、ナトリウム、カリウムおよびアンモニウム塩類で
ある。
本発明にお（・て同一炭素原子に結合した２つの（ジェ
ムの）ホスホネート部分は、高分子の一部をなす反応基
を介して高分子と結合している。ジホスホネートを高分
子に結合させるために必要な高分子上の反応基は、カル
ボキシル（Ｃ！０ＯＨ） 、チオール（ＳＨ）、アミノ
（ＮＨ２）、フェノール、アルダ１： ）” （ＯＨＯ
）、フル：１７− Ａ、 （０Ｈ２０Ｈ）、クアニジノ
、イミダゾール、インドールおよびジスルフィド（−８
−８）基である。高分子に結合するジホスホネートの数
は、高分子上のこれらの反応基の数に依存する。シンチ
グラフィーイメージングの場合には、高分子当たり少な
くとも１つのジホスホネートを結合させておくことが好
ましく、著しく生物活性を損なうことなく、反応基数と
同数の多くのジホ［ヘホネートを高分子上に結合させて
おくことが更１ Ｋ好、５．。生物学的石灰
イヒ阻止、。場合にゆ、高分子の性質にもよるが、最適
の誘導化率は１％〜９０％の範囲である。自らの固有生
物活性を維持する必擦がある高分子類は、それらの最適
の機能的生物活性を維持する必要性から、より低（・誘
導化率（１％〜５０％）をもつ。
ムの）ホスホネート部分は、高分子の一部をなす反応基
を介して高分子と結合している。ジホスホネートを高分
子に結合させるために必要な高分子上の反応基は、カル
ボキシル（Ｃ！０ＯＨ） 、チオール（ＳＨ）、アミノ
（ＮＨ２）、フェノール、アルダ１： ）” （ＯＨＯ
）、フル：１７− Ａ、 （０Ｈ２０Ｈ）、クアニジノ
、イミダゾール、インドールおよびジスルフィド（−８
−８）基である。高分子に結合するジホスホネートの数
は、高分子上のこれらの反応基の数に依存する。シンチ
グラフィーイメージングの場合には、高分子当たり少な
くとも１つのジホスホネートを結合させておくことが好
ましく、著しく生物活性を損なうことなく、反応基数と
同数の多くのジホ［ヘホネートを高分子上に結合させて
おくことが更１ Ｋ好、５．。生物学的石灰
イヒ阻止、。場合にゆ、高分子の性質にもよるが、最適
の誘導化率は１％〜９０％の範囲である。自らの固有生
物活性を維持する必擦がある高分子類は、それらの最適
の機能的生物活性を維持する必要性から、より低（・誘
導化率（１％〜５０％）をもつ。
本発明で使用される適切な誘導可能な高分子類としては
、抗体、抗体断片、ヒト血清アルブミン、酵素、タンパ
ク質性ホルモンのようなタンパク質類；セルロース、デ
ンプン、デキストランおよび寒天のような水溶性および
非水溶性の多糖類；ポリ（アクリレート）、ポリ（アク
リルアミド）、ポリ（メタクリレート）、ポリ（メタク
リレート）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート
）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（無水マレイン酸
）およびポリ（マレアート）のよう１ｃアクリルホモ−
およびコポリマー類；ポリ（アミド＠）；ポリ（エチレ
ンイミン）；ポリ（エチレングリコール）およびポリ（
プロピレングリコール）；ポリ（ビニルアセテート）；
およびポリ（ビニルベンジルクロリド）が績げられる。
、抗体、抗体断片、ヒト血清アルブミン、酵素、タンパ
ク質性ホルモンのようなタンパク質類；セルロース、デ
ンプン、デキストランおよび寒天のような水溶性および
非水溶性の多糖類；ポリ（アクリレート）、ポリ（アク
リルアミド）、ポリ（メタクリレート）、ポリ（メタク
リレート）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート
）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（無水マレイン酸
）およびポリ（マレアート）のよう１ｃアクリルホモ−
およびコポリマー類；ポリ（アミド＠）；ポリ（エチレ
ンイミン）；ポリ（エチレングリコール）およびポリ（
プロピレングリコール）；ポリ（ビニルアセテート）；
およびポリ（ビニルベンジルクロリド）が績げられる。
本発明にお（・て使用に適した他の高分子類は、ジャコ
ピーおよびウィチェク（編集）、酵素学における方法、
第３４巻、第５：（−７６頁、１９７４年〔Ｊａｋｏｂ
ｙ ａｎｄ Ｗｉｃｈｅｌｃ （ｅｄｓ）、 Ｍｅｔｈ
ｏｄｓ ｉｎ ＪＬｎｚｙｎｏｌｏｇ。
ピーおよびウィチェク（編集）、酵素学における方法、
第３４巻、第５：（−７６頁、１９７４年〔Ｊａｋｏｂ
ｙ ａｎｄ Ｗｉｃｈｅｌｃ （ｅｄｓ）、 Ｍｅｔｈ
ｏｄｓ ｉｎ ＪＬｎｚｙｎｏｌｏｇ。
ＶＯｌ、 ３４ 、１）Ｔ１．５３−７６ （１９７４
） ）およびモスバッハ（Ｍｏｓｂａｃｈ） （編集〕
、酵素学における方法、第４４巻、第１１−１４８頁、
１９７６年に開示されており、（・ずれも参考のために
包含される。
） ）およびモスバッハ（Ｍｏｓｂａｃｈ） （編集〕
、酵素学における方法、第４４巻、第１１−１４８頁、
１９７６年に開示されており、（・ずれも参考のために
包含される。
シンチグラフィーイメージングの場合には、実質上（・
ずれのタンパク質も本発明での使用に適して（・る。し
かしながら、特定のタンパク質類は特異的利用の場合に
特に優れて（・る。例えば、肺塞栓症等の診断用の放射
線標識化タンパク質；うっ血のイメージング用のヒ）Ｊ
ｆ［ｌ清アルブミン；代謝性および内分泌性疾患診断用
の放射線標識化酵素タンパク質およびホルモンタンパク
質：軟部腫瘍イメージング用の放射線標識化抗体または
抗体断片である。
ずれのタンパク質も本発明での使用に適して（・る。し
かしながら、特定のタンパク質類は特異的利用の場合に
特に優れて（・る。例えば、肺塞栓症等の診断用の放射
線標識化タンパク質；うっ血のイメージング用のヒ）Ｊ
ｆ［ｌ清アルブミン；代謝性および内分泌性疾患診断用
の放射線標識化酵素タンパク質およびホルモンタンパク
質：軟部腫瘍イメージング用の放射線標識化抗体または
抗体断片である。
本発明にお（・て使用される標識化抗体および抗体断片
は、各種の肺癌結合抗原またはマーカーに対し特異的で
ある。これらのマーカー類は腫瘍細胞の内、表面または
周辺に蓄積する物質類である。
は、各種の肺癌結合抗原またはマーカーに対し特異的で
ある。これらのマーカー類は腫瘍細胞の内、表面または
周辺に蓄積する物質類である。
それらは細胞内、細胞表面または細胞質のマーカーであ
ってもよ（・。腫瘍特異性マーカー類およびそれらマー
カー類に対する抗体の産生方法は当該技術分野にお（・
て周知である。このような＠温特異性マーカー類は、ハ
ーバ−マン、１癌の免疫診断１、フレイシャー（編集）
１癌の臨床生化学１、第３４７頁（Ａｍ、Ａｓ５ｎ、ク
リニカル・ケミストリー、１９７９年） ［１（ｅｒｂ
ｅｒｍａｎ、 ’工ｍｍｕｎｏ ｄｉａｇｎｏｓｉｓｏ
ｆ Ｃａｎｃｅｒ”、 ｉｎ Ｆｌｅｉｓｈｅｒ （ａ
ｄ、） ”Ｔｈｅ ＣｌｉｍｉｃＣ１１ｍ１ｃａｌＢｉ
ｏｃｈｅ Ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ、 ” ｐ、 ３４７
（Ａｍ５Ａｓｓｎ。
ってもよ（・。腫瘍特異性マーカー類およびそれらマー
カー類に対する抗体の産生方法は当該技術分野にお（・
て周知である。このような＠温特異性マーカー類は、ハ
ーバ−マン、１癌の免疫診断１、フレイシャー（編集）
１癌の臨床生化学１、第３４７頁（Ａｍ、Ａｓ５ｎ、ク
リニカル・ケミストリー、１９７９年） ［１（ｅｒｂ
ｅｒｍａｎ、 ’工ｍｍｕｎｏ ｄｉａｇｎｏｓｉｓｏ
ｆ Ｃａｎｃｅｒ”、 ｉｎ Ｆｌｅｉｓｈｅｒ （ａ
ｄ、） ”Ｔｈｅ ＣｌｉｍｉｃＣ１１ｍ１ｃａｌＢｉ
ｏｃｈｅ Ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ、 ” ｐ、 ３４７
（Ａｍ５Ａｓｓｎ。
Ｃｌ１ｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、 １９７９
） ］、１１９８２５５２２５日発のゴールデンバーグ
（Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ ）による米国特許第４，３３
１．６４７号明細書、および１９８２年１】月３０日発
行のゴールデンバーグによる米国特許第４，３６１，５
４４号明細書に開示されており、これらはすべて参考の
ために包含される。イン・ビトロでの抗体産生方法は、
ネズリン、′抗体の生化学１、第２５５〜２８６頁、１
９７０年［Ｎｅｚｌｉｎ、 ”ＢｉＯ−ｃｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ” ｐｐ、 ２５
５−２８６ （１９７０）〕に開示されており、これは
参考のために包含される。
） ］、１１９８２５５２２５日発のゴールデンバーグ
（Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ ）による米国特許第４，３３
１．６４７号明細書、および１９８２年１】月３０日発
行のゴールデンバーグによる米国特許第４，３６１，５
４４号明細書に開示されており、これらはすべて参考の
ために包含される。イン・ビトロでの抗体産生方法は、
ネズリン、′抗体の生化学１、第２５５〜２８６頁、１
９７０年［Ｎｅｚｌｉｎ、 ”ＢｉＯ−ｃｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ” ｐｐ、 ２５
５−２８６ （１９７０）〕に開示されており、これは
参考のために包含される。
本発明にお（・て結合部分（Ｌ）から離されて用いられ
るジホスホネート部分は、ジホスホネートがタンパク質
に対し化学的親和性をもたな（・ため、上記高分子と共
有結合を形成することができない。
るジホスホネート部分は、ジホスホネートがタンパク質
に対し化学的親和性をもたな（・ため、上記高分子と共
有結合を形成することができない。
Ｌは、スペーサー基をはさんで分離された同一の炭素原
子に結合するジホスホネート部分を、適合するならば高
分子に結合せしめる原子、原子団または化学結合である
。Ｌは、高分子中の特定の反応末端基と反応して高分子
と結合することができろ化学的反応部分からなる。
子に結合するジホスホネート部分を、適合するならば高
分子に結合せしめる原子、原子団または化学結合である
。Ｌは、高分子中の特定の反応末端基と反応して高分子
と結合することができろ化学的反応部分からなる。
結合部分は、したがって、高分子と共有結合を形成する
ジホスホネート上の反応種によって定まることになる。
ジホスホネート上の反応種によって定まることになる。
適切な結合部分の決宇は、高分子上の反応基、即ち、カ
ルボキシル、スルフヒドリル、ジスルフィド、ヒドロキ
シ、グアニジノ、イミダゾール、インドール、アミノ、
フェノール、アルデヒドまたはアルコール基の利用可能
性にかかわっている。タンパク質の場合にもう一つ考え
るべきことは、１以上のこれら反応基による修正がタン
パク質の生物活性に重大な影響を及ぼすか否かと（・う
ことである。重大な損失は、誘導抗体が標的組織にもは
や十分に存在して（・な（・場合に生じる。
ルボキシル、スルフヒドリル、ジスルフィド、ヒドロキ
シ、グアニジノ、イミダゾール、インドール、アミノ、
フェノール、アルデヒドまたはアルコール基の利用可能
性にかかわっている。タンパク質の場合にもう一つ考え
るべきことは、１以上のこれら反応基による修正がタン
パク質の生物活性に重大な影響を及ぼすか否かと（・う
ことである。重大な損失は、誘導抗体が標的組織にもは
や十分に存在して（・な（・場合に生じる。
本発明の範囲内には、高分子がジホスホネートと反応す
るように最初に予め活性化せしめられる方法が含まれる
。これは、本発明において記載されたジホスホネートと
更に反応する置換基をもつ試薬によって高分子を活性化
させておくことにより行なわれる。
るように最初に予め活性化せしめられる方法が含まれる
。これは、本発明において記載されたジホスホネートと
更に反応する置換基をもつ試薬によって高分子を活性化
させておくことにより行なわれる。
使用されるべき最適の結合部分は、したがって、ジホス
ホネート部分が結合せしめられる高分子上の反応末端基
に依存する。
ホネート部分が結合せしめられる高分子上の反応末端基
に依存する。
例えば、反応基がチロシン上のフェノール基（＠−０Ｈ
）である例示のタンパク質を用（・石場合は、適切な結
合部分はジアジ基（−Ｎ、Ｎ−）である。この結合は下
記のようにして容易に形成することができる： 反応末端基がリジンのアミノ末端基またはε−アミノ基
のような一級アミノ基を有する場合は、適切な結合基は
例えばアミド（−Ｎｈ−凸−）である。
）である例示のタンパク質を用（・石場合は、適切な結
合部分はジアジ基（−Ｎ、Ｎ−）である。この結合は下
記のようにして容易に形成することができる： 反応末端基がリジンのアミノ末端基またはε−アミノ基
のような一級アミノ基を有する場合は、適切な結合基は
例えばアミド（−Ｎｈ−凸−）である。
この結合は下記のようＫして容易に形成することができ
ろ： ｌ−１ 反応測知が一級アミンを有する場合に適切な他の結合部
分としては、フェニルイソチオシアネートジホスホネー
ト： 五 から形成されろチオ尿素（−ＮＨ−Ｃ−ｋＪＨ−）が羊
げられ、これはタンパク質と反応して、 ホニルハライド含有ジホスホネート： Ｃユ の反応によって生じ、これはタンパク質と反応して、 を形成し： Ｎ−無水カルボン酸含有ｇｅｍ−ジホスホネート：はア
ミン含有タンパク質と反応して、アミド結合（−ＮＨ−
ｔ！、−） ： を形成し； イミデート含有ｇｅｍ−ジホスホネート：＋ Ｈ はタンパク質と反応して、アミジン結合（−ＭＨＩ−）
：を形成し； キノンジホスホネートは下記のように二置換ヒドロキノ
ン結合を形成することができ： タンパク質−Ｎｕ２−）− ア ルデヒドジホスホネート： を介するシッフ塩基化学では、これはタンパク質と反応
して、イミン結合（ −１４．、ＣＨ− ）を形成する
。
ろ： ｌ−１ 反応測知が一級アミンを有する場合に適切な他の結合部
分としては、フェニルイソチオシアネートジホスホネー
ト： 五 から形成されろチオ尿素（−ＮＨ−Ｃ−ｋＪＨ−）が羊
げられ、これはタンパク質と反応して、 ホニルハライド含有ジホスホネート： Ｃユ の反応によって生じ、これはタンパク質と反応して、 を形成し： Ｎ−無水カルボン酸含有ｇｅｍ−ジホスホネート：はア
ミン含有タンパク質と反応して、アミド結合（−ＮＨ−
ｔ！、−） ： を形成し； イミデート含有ｇｅｍ−ジホスホネート：＋ Ｈ はタンパク質と反応して、アミジン結合（−ＭＨＩ−）
：を形成し； キノンジホスホネートは下記のように二置換ヒドロキノ
ン結合を形成することができ： タンパク質−Ｎｕ２−）− ア ルデヒドジホスホネート： を介するシッフ塩基化学では、これはタンパク質と反応
して、イミン結合（ −１４．、ＣＨ− ）を形成する
。
イミン結合の最尤により、アルキルアミン結合を有する
タンパク質−ＮＨＣＨ２（ＯＨ２）ｎ−（！−（ＰＯ，
Ｈ２）２Ｂ を生じる。
Ｈ２）２Ｂ を生じる。
タンパク質の反応側鎖が、アスパラギン酸またはグルタ
ミン酸の残基、即ち１０ｇ末端のようなカルボン酸を有
する場合は、適切なジホスホネートは、タンパク質と反
応してアミドを形成するアミン基を有して（・る。この
結合は、タンパク質のカルボキシ基を水溶性カルボジイ
ミドで予め活性化し、しかる後反応中間体を、 ｍ のようなーーアミノアルキルジホスホネートと結合させ
ることにより形成することができ、これはタンパク質と
反応した場合にアミド結合（−Ｎｕ−Ｌ）： を形成する。
ミン酸の残基、即ち１０ｇ末端のようなカルボン酸を有
する場合は、適切なジホスホネートは、タンパク質と反
応してアミドを形成するアミン基を有して（・る。この
結合は、タンパク質のカルボキシ基を水溶性カルボジイ
ミドで予め活性化し、しかる後反応中間体を、 ｍ のようなーーアミノアルキルジホスホネートと結合させ
ることにより形成することができ、これはタンパク質と
反応した場合にアミド結合（−Ｎｕ−Ｌ）： を形成する。
タンパク買上の反応基がシスティンにおけるようなチオ
ール（ ＳＵ）である場合は、適切なジホスホネートは
例えばアルキルハライド： （上記式中、Ｘ．ｍＢｒまたは工） を有して（・る。このジホスホネートはタンパク買上の
チオールと反応して、チオエーテル結合（−ＯＨ２−Ｓ
−Ｃ）ｉ２−） ： を形成し； Ｈ のようなヨードアセチルジホスホネートはタンノ（り買
上のチオール基と反応して、チオエーテル結合（−０Ｈ
２−８−０）ｉ２−） ： を形成し； のようなマレイミドジホスホネートはスルフヒドリル含
有タンパク實と反応して、チオエーテル結合： Ｎ’（ｂ を形成する。
ール（ ＳＵ）である場合は、適切なジホスホネートは
例えばアルキルハライド： （上記式中、Ｘ．ｍＢｒまたは工） を有して（・る。このジホスホネートはタンパク買上の
チオールと反応して、チオエーテル結合（−ＯＨ２−Ｓ
−Ｃ）ｉ２−） ： を形成し； Ｈ のようなヨードアセチルジホスホネートはタンノ（り買
上のチオール基と反応して、チオエーテル結合（−０Ｈ
２−８−０）ｉ２−） ： を形成し； のようなマレイミドジホスホネートはスルフヒドリル含
有タンパク實と反応して、チオエーテル結合： Ｎ’（ｂ を形成する。
ジスルフィド結合基は、２−ピリジンジスルフィドアガ
ロースゲルをスルホヒドリル含有ジホスホネート反応さ
せること九より形成することができ、下記のようなジス
ルフィド結合（−５−Ｓ−）を形成する： カルバメート結合基は、例えば、セファロース（Ｅｌｅ
ｐｈａｒｏｓｅＲ）または７４ ：ｆｆ −＃ （Ｆｉ
ｃｏユＲ）［７アルマシア社（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｃ
ｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ） ］を臭化シアンと反応させて
、反応性イミドカーボネート中間体を典造するなどのよ
うにして、多糖類から形成することができる。末端アミ
ン含有ジホスホネートは、イミドカーボネート中間体と
反応して、下記のような置換カルバメート生成物を形成
するニスペーサ−Ｑは、必要な場合に、ジホスホネート
をより放射性標識化させ易くするために、タンパク質と
ジホスホネートとの間にスペースを形成するためのもの
である。適切なスペーサー基は、参考のために本明細書
に包含される、酵素学の方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ
Ｋｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）、＠３４巻、第２Ｆ＋ −２７
頁に開示されている。このスペーサーはアリールでも自
〜０１２のアルキルであってもよい。アリールは、非置
換でも、１以上の置換基で置換されて−・てもよ（・。
ロースゲルをスルホヒドリル含有ジホスホネート反応さ
せること九より形成することができ、下記のようなジス
ルフィド結合（−５−Ｓ−）を形成する： カルバメート結合基は、例えば、セファロース（Ｅｌｅ
ｐｈａｒｏｓｅＲ）または７４ ：ｆｆ −＃ （Ｆｉ
ｃｏユＲ）［７アルマシア社（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｃ
ｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ） ］を臭化シアンと反応させて
、反応性イミドカーボネート中間体を典造するなどのよ
うにして、多糖類から形成することができる。末端アミ
ン含有ジホスホネートは、イミドカーボネート中間体と
反応して、下記のような置換カルバメート生成物を形成
するニスペーサ−Ｑは、必要な場合に、ジホスホネート
をより放射性標識化させ易くするために、タンパク質と
ジホスホネートとの間にスペースを形成するためのもの
である。適切なスペーサー基は、参考のために本明細書
に包含される、酵素学の方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ
Ｋｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）、＠３４巻、第２Ｆ＋ −２７
頁に開示されている。このスペーサーはアリールでも自
〜０１２のアルキルであってもよい。アリールは、非置
換でも、１以上の置換基で置換されて−・てもよ（・。
好ましくは非置換アリールである。
本発明にお（・て使用されるジホスホネート部分（以下
、ジホスホネート類と（・う）は、次式：％式％ 〔上記式中、ｘは、Ｈ，Ｏ）Ｌ、 ＮＨ２、置換アミノ
、ハロゲンまたはＯｌ、０４のアルキル、好ましくはＨ
ｌＯＨまたは置換もしくは非置換アミンである〕で示さ
れる。
、ジホスホネート類と（・う）は、次式：％式％ 〔上記式中、ｘは、Ｈ，Ｏ）Ｌ、 ＮＨ２、置換アミノ
、ハロゲンまたはＯｌ、０４のアルキル、好ましくはＨ
ｌＯＨまたは置換もしくは非置換アミンである〕で示さ
れる。
これらのジホスホネート類は、生体人工器具およびソフ
トコンタクトレンズ用の抗石灰化剤として使用される。
トコンタクトレンズ用の抗石灰化剤として使用される。
生体人工器具は生物学的石灰化を受けることが知られて
おり、一般にこの鋒機成分はリン酸カルシウムからなる
。このカルシウムが蓄積した場合は、器具の機能が損わ
れる。本発明のジホスホネート誘導高分子類は、このよ
うな器具と結合した場合、石灰化を阻害する。
おり、一般にこの鋒機成分はリン酸カルシウムからなる
。このカルシウムが蓄積した場合は、器具の機能が損わ
れる。本発明のジホスホネート誘導高分子類は、このよ
うな器具と結合した場合、石灰化を阻害する。
ジホスホネート類は、心臓弁および商管の移穐体にお（
・て、コラーゲンのようなタンパク質と結合することが
できる。例えば、水溶性カルボジイミドは活性化のため
にコラーゲン中に加えられ、この活性中間体： は次いでコラーゲンと反応して、生物学的石灰什を阻止
するジホスホネート誘導不治性タンパク質：ｈ を形成する。
・て、コラーゲンのようなタンパク質と結合することが
できる。例えば、水溶性カルボジイミドは活性化のため
にコラーゲン中に加えられ、この活性中間体： は次いでコラーゲンと反応して、生物学的石灰什を阻止
するジホスホネート誘導不治性タンパク質：ｈ を形成する。
耐摩耗性増加ソフトコンタクトレンズにジホスホネート
類を共有結合させたものは、自らの石灰化を阻止するよ
うになる。これらのソフトレンズはポリ（アクリルアミ
ド類）、ポリオール類またはポリカルボキシレート類か
らなる場合が多（・。
類を共有結合させたものは、自らの石灰化を阻止するよ
うになる。これらのソフトレンズはポリ（アクリルアミ
ド類）、ポリオール類またはポリカルボキシレート類か
らなる場合が多（・。
レンズポリマーは、例えば：
ホリマー−００ＱＨ＋Ｒ−ＮｍＯｍＮ−Ｒ’のように水
浴性カルボジイミドと反応して、反応中間体： を形成することができる。
浴性カルボジイミドと反応して、反応中間体： を形成することができる。
この中間体は次（・でジホスホネート類と反応して、ジ
ホスホネート誘導ポリマー： Ｒ を形成することができる。
ホスホネート誘導ポリマー： Ｒ を形成することができる。
ジホスホネート誘導高分子類は、テクネチウム−９９ｍ
とキレート化した場合に、シンチグラフィー造影剤とし
て使用される、ホスホネート部分をＴｃ−ｇｇｍで標識
する方法は、参考のため本明細書に包含される、カスド
ロノボら、′ホスホネート部分：各種生物学的化合物類
に合成的に結合させた後における９９ ｍ −Ｔｃ （
８ｎ）での積降１、Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ、 （国際Ｖ
７ボジウム〕、第７章、第６３−７０頁、１９７５年（
Ｃａ５ｔｒｏｎｏｖｏ ｅｔ ａｌ、、 ” ＴｈｅＰ
ｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ Ｔｈｏｉｅｔｙ ： Ｌａｂｅ
ｌｉｎｇ ｗｉｔｈ ９９ ｍ −Ｔｃ（ａｎ） Ａｆ
ｔｅｒ ５ｙｎｔｈｅｔｉｃ Ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ
ｔｏ ＤｉｖｅｒｓｅＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｏｏｍｐ
ｏｕｎｃｌｇ ” 、 Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ。
とキレート化した場合に、シンチグラフィー造影剤とし
て使用される、ホスホネート部分をＴｃ−ｇｇｍで標識
する方法は、参考のため本明細書に包含される、カスド
ロノボら、′ホスホネート部分：各種生物学的化合物類
に合成的に結合させた後における９９ ｍ −Ｔｃ （
８ｎ）での積降１、Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ、 （国際Ｖ
７ボジウム〕、第７章、第６３−７０頁、１９７５年（
Ｃａ５ｔｒｏｎｏｖｏ ｅｔ ａｌ、、 ” ＴｈｅＰ
ｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ Ｔｈｏｉｅｔｙ ： Ｌａｂｅ
ｌｉｎｇ ｗｉｔｈ ９９ ｍ −Ｔｃ（ａｎ） Ａｆ
ｔｅｒ ５ｙｎｔｈｅｔｉｃ Ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ
ｔｏ ＤｉｖｅｒｓｅＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｏｏｍｐ
ｏｕｎｃｌｇ ” 、 Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ。
（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ８ｙｍｐｏｓｉｚ ］
、 （１！ｈａｐｔｅｒ ７． ｐｐ。
、 （１！ｈａｐｔｅｒ ７． ｐｐ。
６３−７０ （１９７５） 〕Ｋ開示されて（・る。
一般に、ジホスホネート誘導高分子類はスズイオン含有
溶液で処理される。この混合物に、ペルテクネテートと
してのＴｃ −ｇｇ ｒＢの溶液が加えられる。Ｔｃ
−９９ｍはスズイオンで還元され、ジホスホネートと配
位共有結合を形成する。
溶液で処理される。この混合物に、ペルテクネテートと
してのＴｃ −ｇｇ ｒＢの溶液が加えられる。Ｔｃ
−９９ｍはスズイオンで還元され、ジホスホネートと配
位共有結合を形成する。
本明細書にお（・て用（・られる１ペルテクネテ一ト還
元剤１と（・う語は、七個テクネチウム（ＴａＯ２−）
を三価、四価および／または三価のテクネチウムに還元
することができる還元性イオンをもつ化合物、錯体また
はその他を含む。スズのような遊離金属類は、ペルテク
ネテート還元剤としての用途も知られて（・るが、不爵
性金属は患者に注射される前にスキャニング溶液から除
去されなければならない。適切なペルテクネテート還元
剤としては、ヒドロ亜硫酸す） ＩＪウム、並びに塩化
スズのような硫酸および塩酸の金属塩類が挙げられる。
元剤１と（・う語は、七個テクネチウム（ＴａＯ２−）
を三価、四価および／または三価のテクネチウムに還元
することができる還元性イオンをもつ化合物、錯体また
はその他を含む。スズのような遊離金属類は、ペルテク
ネテート還元剤としての用途も知られて（・るが、不爵
性金属は患者に注射される前にスキャニング溶液から除
去されなければならない。適切なペルテクネテート還元
剤としては、ヒドロ亜硫酸す） ＩＪウム、並びに塩化
スズのような硫酸および塩酸の金属塩類が挙げられる。
本発明の組成物は、場合により、しかも好ましくは、貯
蔵中におけるペルテクネテート還元剤の酸化（例えば、
ＳＤ ２ＷからＳｎ杆への酸化）を防止もしくは阻止す
るために、および／または、還元されたテクネチウム−
９９ｍの再酸化を阻止もしくは減少させるためＫ、およ
び／または、組成物の使用中に生じる可能性があるテク
ネチウム標識化不紳物の形成を減少させるために、安定
化量の安定剤物質を含有して（・る。
蔵中におけるペルテクネテート還元剤の酸化（例えば、
ＳＤ ２ＷからＳｎ杆への酸化）を防止もしくは阻止す
るために、および／または、還元されたテクネチウム−
９９ｍの再酸化を阻止もしくは減少させるためＫ、およ
び／または、組成物の使用中に生じる可能性があるテク
ネチウム標識化不紳物の形成を減少させるために、安定
化量の安定剤物質を含有して（・る。
本発明において使用される安定剤は、使用条件下におけ
るそれらの毒性学的許容性、適度の貯蔵期間中および／
または使用条件下において生成物を安定化させるそれら
の能力、並びに、テクネチウム放射性核種の例えば軟部
＠倶への移行に関するそれらの実質的非妨害性に特徴を
有する。
るそれらの毒性学的許容性、適度の貯蔵期間中および／
または使用条件下において生成物を安定化させるそれら
の能力、並びに、テクネチウム放射性核種の例えば軟部
＠倶への移行に関するそれらの実質的非妨害性に特徴を
有する。
上記要請に合致し、しかも静注に適した安定剤には、ゲ
ンチシン酸およびその水浴性塩類、エステル類、アスコ
ルビン酸およびその水溶性塩類、エステル類、並びに、
エリソルビン酸およびその水浴性塩類、エステル類があ
る。ゲンチシン酸、アスコルビン酸およびニリンルピン
酸はすべて公知の市販物質である。これら酸類のす）
ＩＪウム塩類もすべて市販されており、易水溶性であっ
て、しかも本発明における使用には好ましく・。
ンチシン酸およびその水浴性塩類、エステル類、アスコ
ルビン酸およびその水溶性塩類、エステル類、並びに、
エリソルビン酸およびその水浴性塩類、エステル類があ
る。ゲンチシン酸、アスコルビン酸およびニリンルピン
酸はすべて公知の市販物質である。これら酸類のす）
ＩＪウム塩類もすべて市販されており、易水溶性であっ
て、しかも本発明における使用には好ましく・。
文献から公知のように、アスコルビン酸のような安定剤
物質はテクネチウムとキレートまたは錯体を形成して、
非石灰化軟部組織にそれを沈積させる可能性がある。本
発明の実施者は軟部組織におけるすべての不要な沈積の
回避を望んで（・るため、本発明の組成物において場合
により使用される安定剤物質の量は、誘導高分子の向腫
瘍効果を減少させてイメージングを妨害するほど多量で
あってはならな（・。
物質はテクネチウムとキレートまたは錯体を形成して、
非石灰化軟部組織にそれを沈積させる可能性がある。本
発明の実施者は軟部組織におけるすべての不要な沈積の
回避を望んで（・るため、本発明の組成物において場合
により使用される安定剤物質の量は、誘導高分子の向腫
瘍効果を減少させてイメージングを妨害するほど多量で
あってはならな（・。
本発明のシンチグラフィー造影剤は、ヒトまたはヒトよ
り下等の動物に全身または経口投与される。したがって
、適切な久造法および操作条件が無菌組成物を適切罠提
供するために適用される。
り下等の動物に全身または経口投与される。したがって
、適切な久造法および操作条件が無菌組成物を適切罠提
供するために適用される。
胃腸のイメージングの場合は、経？投与が適切な投与方
法である。軟部組織腫瘍のイメージングの場合に適切な
投与経路は、経血管または経リンパ管である。うっ血の
イメージングの場合は、静脈投与が適切な方法である。
法である。軟部組織腫瘍のイメージングの場合に適切な
投与経路は、経血管または経リンパ管である。うっ血の
イメージングの場合は、静脈投与が適切な方法である。
本発明の組成物は、テクネチウム還元剤および誘導高分
子を単に乾燥混合するだけで製造することができろ。場
合により、安定剤は、更に塩什ナトリウムのような非妨
害剤と同様に、このような混合物に乾燥混合させること
もできる。
子を単に乾燥混合するだけで製造することができろ。場
合により、安定剤は、更に塩什ナトリウムのような非妨
害剤と同様に、このような混合物に乾燥混合させること
もできる。
別の方法では、本発明の組成物は凍結乾燥品として製造
することができる。このような組成物は、場合により（
・ずれかの望ましい安定剤と一緒に、水溶液中にジホス
ホネート誘導高分子およびテクネチウム還元剤を共に溶
解させ、標準的装置を用（・て組成物を凍結乾燥させる
ことにより製造される。好ましくは、無菌脱酸素水が操
作に用（・られ、生成物は窒素下で貯蔵される。乾燥混
合生成物よりも製造がやや複雑ではあるが、凍結乾燥生
成物は、原料中に存在している可能性がある水不溶性粒
子が凍結乾燥工程前にｒ去することができる、と（・う
利点をもつ。
することができる。このような組成物は、場合により（
・ずれかの望ましい安定剤と一緒に、水溶液中にジホス
ホネート誘導高分子およびテクネチウム還元剤を共に溶
解させ、標準的装置を用（・て組成物を凍結乾燥させる
ことにより製造される。好ましくは、無菌脱酸素水が操
作に用（・られ、生成物は窒素下で貯蔵される。乾燥混
合生成物よりも製造がやや複雑ではあるが、凍結乾燥生
成物は、原料中に存在している可能性がある水不溶性粒
子が凍結乾燥工程前にｒ去することができる、と（・う
利点をもつ。
もう一つの方法では、本発明の組成物は薬学上許容され
る液状担体中の水溶液として揚供することができる。こ
れらの担体は、例えば、食塩水でも発熱物質のない無菌
水であってもより・。好ましくは、水は悦酸素化され、
組成物は窒素下で貯蔵されるが、これによって貯蔵時に
おけるペルテクネテート追元剤の望ましくな（・酸化を
最小限に抑制する。還元剤は乾燥粉末および凍結乾燥組
成物としてよりも溶液の場合により酸化され易（・ため
、水性組成物は安定剤を含有していることが好ましく・
。
る液状担体中の水溶液として揚供することができる。こ
れらの担体は、例えば、食塩水でも発熱物質のない無菌
水であってもより・。好ましくは、水は悦酸素化され、
組成物は窒素下で貯蔵されるが、これによって貯蔵時に
おけるペルテクネテート追元剤の望ましくな（・酸化を
最小限に抑制する。還元剤は乾燥粉末および凍結乾燥組
成物としてよりも溶液の場合により酸化され易（・ため
、水性組成物は安定剤を含有していることが好ましく・
。
本発明の組成物は、誘導高分子：テクネチウム還元剤の
比率が約２：１〜約１００，０００ ： １、好ましく
は約２：１〜約１０，０００ ： １ となるように
製造される。
比率が約２：１〜約１００，０００ ： １、好ましく
は約２：１〜約１０，０００ ： １ となるように
製造される。
安定化された組成物は、一般に、誘導高分子：安定剤の
重９比が約１：ｌ〜約１０，０００ ： １ 、好まし
くは約１：１〜約１，０００ ： １となるように処方
される。
重９比が約１：ｌ〜約１０，０００ ： １ 、好まし
くは約１：１〜約１，０００ ： １となるように処方
される。
単位用量形の好ましい安定化された組成物は、スズ系還
元剤約ｏ、ｏｓ ｍｇ〜約３ ｍｇ ； ゲ／チセー
トまたはアスコルベート安定剤約０．２５ ｍｇ〜約１
．０ｍｇ；ジホスホネート誘導高分子約０．０１〜約５
０１１１ｇを含有する。
元剤約ｏ、ｏｓ ｍｇ〜約３ ｍｇ ； ゲ／チセー
トまたはアスコルベート安定剤約０．２５ ｍｇ〜約１
．０ｍｇ；ジホスホネート誘導高分子約０．０１〜約５
０１１１ｇを含有する。
上記タイプの組成物は、生理学上許容される使用溶液の
ｐＨが約３．５〜約８．５の範囲、好ましくは約４．５
〜約７．４の褌節、囲にある、と−・う特徴をもつ。
ｐＨが約３．５〜約８．５の範囲、好ましくは約４．５
〜約７．４の褌節、囲にある、と−・う特徴をもつ。
タンパク質の場合、シンチグラフィーイメージングに適
した液体の薬学的組成物は、ジホスホネート誘導タンパ
ク質的０．０１４〜約２０ ％、並びに、残部のペルテ
クネテート費元剤、安定剤および薬学上許容される担体
からなる。他の高分子類の場合は、総組酸物の約１壬〜
約２０％がジホスホネート誘導高分子からなる。
した液体の薬学的組成物は、ジホスホネート誘導タンパ
ク質的０．０１４〜約２０ ％、並びに、残部のペルテ
クネテート費元剤、安定剤および薬学上許容される担体
からなる。他の高分子類の場合は、総組酸物の約１壬〜
約２０％がジホスホネート誘導高分子からなる。
タンパク質の場合、凍結乾燥された薬学的組成物は、ジ
ホスホネートｐ導タンパク質的１％〜約５０％からなる
。他の高分子類の場合は、組成物の約５壬〜約９９ ｑ
ｂがジホスホネート誘導高分子からなる。
ホスホネートｐ導タンパク質的１％〜約５０％からなる
。他の高分子類の場合は、組成物の約５壬〜約９９ ｑ
ｂがジホスホネート誘導高分子からなる。
使用に際しては、組成物は布板テクネチウム供給源から
のベルテクネチウム−ｇｇｍ等張液と混合され、全身ま
たは経口投与に適したＴｃ −９９ｍ標識化ジホスホネ
ート誘導高分子として得られる。
のベルテクネチウム−ｇｇｍ等張液と混合され、全身ま
たは経口投与に適したＴｃ −９９ｍ標識化ジホスホネ
ート誘導高分子として得られる。
このようなスキャニング剤の安定性は、通常の病院的条
件下で十分である。投与は、ペルテクネテート溶液添加
後約８時間以内に行なわれることが好ましく・。静脈投
与の場合は試薬およびテクネチウム放射性核種の濃度は
、溶液約１ｍｌが体重約５０〜１００ｋｇの成人に投与
されるようなものであれば十分である。溶液１ ｍｌは
、約３０秒間かけて静注することが好ましく・。経口投
与の場合、試薬およびテクネチウム放射性核種の濃度は
、溶液または懸ｆｆｉ液約１０ ｍｌ 〜約１５０ｍ１
が体重約５０〜１００ｋｇの成人に投与されるようなも
のであれば十分である。
件下で十分である。投与は、ペルテクネテート溶液添加
後約８時間以内に行なわれることが好ましく・。静脈投
与の場合は試薬およびテクネチウム放射性核種の濃度は
、溶液約１ｍｌが体重約５０〜１００ｋｇの成人に投与
されるようなものであれば十分である。溶液１ ｍｌは
、約３０秒間かけて静注することが好ましく・。経口投
与の場合、試薬およびテクネチウム放射性核種の濃度は
、溶液または懸ｆｆｉ液約１０ ｍｌ 〜約１５０ｍ１
が体重約５０〜１００ｋｇの成人に投与されるようなも
のであれば十分である。
追跡スキャンは同様の投与レベルで実施される。
９９ ｍ Ｔｃ ／ジホスホネート誘導高分子還元剤混
合物により形成され、体内に導入される反応生成物の実
際の構造は、確実には知られて（・な（・。
合物により形成され、体内に導入される反応生成物の実
際の構造は、確実には知られて（・な（・。
これらのジホスホネート誘導高分子類は、放射１ｅ標職
化タンパク質が用いられる（・ずれかの生物学的分析法
に使用される。このような応用例としては、肺癌イメー
ジング、ラジオイムノアッセイ、心筋梗塞症分析、血栓
症イメージング、レセプターパインディングアッセイ、
うっ血イメージングおよび胃腸イメージングがある。
化タンパク質が用いられる（・ずれかの生物学的分析法
に使用される。このような応用例としては、肺癌イメー
ジング、ラジオイムノアッセイ、心筋梗塞症分析、血栓
症イメージング、レセプターパインディングアッセイ、
うっ血イメージングおよび胃腸イメージングがある。
一般Ｋ、安全有効量の放射線標齢化高分子が、本発明の
シンチグラフィーイメージング操作のために全身的Ｋま
たは経口で投与される。
シンチグラフィーイメージング操作のために全身的Ｋま
たは経口で投与される。
本明細書で用（・られる１安全有効ｔ′とは、臨床的に
有用なシンチグラフィー両便を与えるためには十分高い
が、賞牌な副作用を回避するためには十分に低（・（妥
当な利益／危険比にある）正常な医学的判断の範囲内で
の組成物量を意味する。
有用なシンチグラフィー両便を与えるためには十分高い
が、賞牌な副作用を回避するためには十分に低（・（妥
当な利益／危険比にある）正常な医学的判断の範囲内で
の組成物量を意味する。
組成物の安全有効量は、具体的なシンチグラフィー法お
よび評価すべき具体的臨床条件、治療される患者の年令
および身体条件、病状の重篤度、治療期間、併用療法の
種類並びに使用される具体的ジホスホネート誘導高分子
によって変動する。
よび評価すべき具体的臨床条件、治療される患者の年令
および身体条件、病状の重篤度、治療期間、併用療法の
種類並びに使用される具体的ジホスホネート誘導高分子
によって変動する。
全身的投与は、腫瘍イメージング、心筋梗塞症分析、血
栓症イメージング、レセプタバインディングアッセイお
よびうっ血イメージングの場合に適して−・る。
栓症イメージング、レセプタバインディングアッセイお
よびうっ血イメージングの場合に適して−・る。
下記非制限的例は、本発明の化合物、キレート、組成物
、方法および用途につ−・て説明するものである。
、方法および用途につ−・て説明するものである。
例１
本ｆＦｌｌｔ−１、（２−（４−アミノフェニル）エタ
ン−１，１−ジホスホネート］ナトリウムのタンパク實
誘導化について説明するものである。
ン−１，１−ジホスホネート］ナトリウムのタンパク實
誘導化について説明するものである。
［２−（４−アミノフェニル）エタン−１，１−ジホス
ホネート〕ナトリウムは、下記方法により合成された： 具体的には、５℃に冷却された乾燥トルエン２００ｍ１
中の水素化カリウム１０．０ ｇ （０，２５ｍｏｌ
）のスラリーに、テトラエチルメタンジホスホネート７
２．５ ｇ （０，２５ｍｏｌ ）を滴下した。この反
応は、発生した水素ガスを除去しながら、窒素雰囲気下
で行なわれた。ジホスホネート陽イオン溶液を、すべて
のエステルが加えられた後、室温に戻した。
ホネート〕ナトリウムは、下記方法により合成された： 具体的には、５℃に冷却された乾燥トルエン２００ｍ１
中の水素化カリウム１０．０ ｇ （０，２５ｍｏｌ
）のスラリーに、テトラエチルメタンジホスホネート７
２．５ ｇ （０，２５ｍｏｌ ）を滴下した。この反
応は、発生した水素ガスを除去しながら、窒素雰囲気下
で行なわれた。ジホスホネート陽イオン溶液を、すべて
のエステルが加えられた後、室温に戻した。
ｐ−ニトロベンジルプロミド５４ ｇ （０，２５ｍｏ
ｌ ）を加温乾燥トルエン２００ ｍｌに溶解した。こ
のハライドのトルエン溶液をジホスホネート陽イオン溶
液に急速に加えた。反応はやや発熱的であり、温度を８
５℃に上昇させた。混合物を室温で２時間攪拌した。生
成したＫＢｒをＰ去し、トルエンをロータリーエバポレ
ーターで蒸発させた。次いで、水２５０ｍ１を残留油状
物に加え、混合物をジエチルエーテル２５０ ｍｌで２
回抽出した。エーテル相を無水硫酸マグネシウムで乾燥
し、ｒ過し、蒸発させた。
ｌ ）を加温乾燥トルエン２００ ｍｌに溶解した。こ
のハライドのトルエン溶液をジホスホネート陽イオン溶
液に急速に加えた。反応はやや発熱的であり、温度を８
５℃に上昇させた。混合物を室温で２時間攪拌した。生
成したＫＢｒをＰ去し、トルエンをロータリーエバポレ
ーターで蒸発させた。次いで、水２５０ｍ１を残留油状
物に加え、混合物をジエチルエーテル２５０ ｍｌで２
回抽出した。エーテル相を無水硫酸マグネシウムで乾燥
し、ｒ過し、蒸発させた。
得られた油状物をエーテル２５０ ｍｌに溶解し、溶液
を水１００ｍ１で２回抽出して、易水溶性の未反応テト
ラエチルメタンジホスホネートを除去した。工−チル層
を硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させテ、粗エステル
；テトラエチル・２−（Ｐ−ニトロフェニル）エタン−
１，１−ジホスホネート７６ｇを得た。
を水１００ｍ１で２回抽出して、易水溶性の未反応テト
ラエチルメタンジホスホネートを除去した。工−チル層
を硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させテ、粗エステル
；テトラエチル・２−（Ｐ−ニトロフェニル）エタン−
１，１−ジホスホネート７６ｇを得た。
この粗エステル２２ｇを５００ ｍｌのパール（ｐａｒ
ｒ）ｋｇ／ａｍ” ）の水素雰囲気下、必要な再加圧を
しながら振盪した。４．５時間後、反応は終了した。固
体をＰ去し、エタノールを蒸発させた。６Ｎ ＨＣＩ
２５０ｍ１を、モノ−およびジアルキル化メタンジホス
ホネート混合物を含有するこの粗生成物に加えた。混合
物を一夜環流させた。反応混合物を冷却し、ロータリー
エバポレーターで乾燥蒸発させた。蒸留水２００ｍ１を
残渣に加えた。混合物を１時間約６０℃に加温し、しか
る後室温まで冷却した。相当量の不溶性沈殿物が残留し
た。これは所望の生成物である。
ｒ）ｋｇ／ａｍ” ）の水素雰囲気下、必要な再加圧を
しながら振盪した。４．５時間後、反応は終了した。固
体をＰ去し、エタノールを蒸発させた。６Ｎ ＨＣＩ
２５０ｍ１を、モノ−およびジアルキル化メタンジホス
ホネート混合物を含有するこの粗生成物に加えた。混合
物を一夜環流させた。反応混合物を冷却し、ロータリー
エバポレーターで乾燥蒸発させた。蒸留水２００ｍ１を
残渣に加えた。混合物を１時間約６０℃に加温し、しか
る後室温まで冷却した。相当量の不溶性沈殿物が残留し
た。これは所望の生成物である。
それをＰ取し、水１５０ ｍｌでスラリー化させた。ｐ
Ｈを５０％水酸化す） ＩＪウム溶液で４．２に調整し
た。
Ｈを５０％水酸化す） ＩＪウム溶液で４．２に調整し
た。
溶液を沸騰加熱し、熱濾過させた。エタノール２００ｍ
１を加温溶液に徐々に加えて沈殿を生じさせた、この溶
液を冷蔵庫で一夜冷却した。沈殿物、即ち所望の生成物
のナトリウム塩をｒ取し、メタノールで洗浄し、風乾さ
せた。収量は［２−（４−アミノフェニル）エタン−１
，】−ジホスホネートタナトリウム６．２ｇであった。
１を加温溶液に徐々に加えて沈殿を生じさせた、この溶
液を冷蔵庫で一夜冷却した。沈殿物、即ち所望の生成物
のナトリウム塩をｒ取し、メタノールで洗浄し、風乾さ
せた。収量は［２−（４−アミノフェニル）エタン−１
，】−ジホスホネートタナトリウム６．２ｇであった。
（２−（４−アミノフェニル）エタン−１，】−ジホス
ホネートタナトリウム（０，３ｍｇ、 ０ｊｒｒｒｎ
ｏｌ ）をＨ２Ｏ０，５ｍｌに溶解し、水浴で冷却し、
しかる後濃ＨＣＩ ０．５ｍｌで酸性化させた。この透
明な溶液に冷却された０ 、 ５Ｍ Ｎ ａＮｏ ２溶
液０−２５ ｍｌ （０，１２５ｍｍｏｌ）を滴下した
。淡黄色溶液を０℃で１．５時間攪拌し１次いで尿素３
ｍｇで処理して過剰の硝酸塩を分解した。反応混合物を
次いで１０ｍ１に希釈した。所望量のジアゾニウム塩試
薬をこの貯蔵液から取出し、固体ＮＨＨＣＯｓで中和し
、ｐＨ８の０．０５ Ｍリン酸緩衝液３ｍｌ中のウサ４
ｒｇＧ［シグマ・ケミカル社（ＳｉｇＴｒｌａ Ｃｈｅ
ｍｉｃａ１社）から入手３０℃溶液に滴下した。反応混
合物を４℃で一夜攪拌し、次いで４℃で０．１ Ｍ Ｎ
ＨＣ１溶液に対し完全に透析させた。透導タンパク質溶
液を冷蔵庫で貯蔵した。
ホネートタナトリウム（０，３ｍｇ、 ０ｊｒｒｒｎ
ｏｌ ）をＨ２Ｏ０，５ｍｌに溶解し、水浴で冷却し、
しかる後濃ＨＣＩ ０．５ｍｌで酸性化させた。この透
明な溶液に冷却された０ 、 ５Ｍ Ｎ ａＮｏ ２溶
液０−２５ ｍｌ （０，１２５ｍｍｏｌ）を滴下した
。淡黄色溶液を０℃で１．５時間攪拌し１次いで尿素３
ｍｇで処理して過剰の硝酸塩を分解した。反応混合物を
次いで１０ｍ１に希釈した。所望量のジアゾニウム塩試
薬をこの貯蔵液から取出し、固体ＮＨＨＣＯｓで中和し
、ｐＨ８の０．０５ Ｍリン酸緩衝液３ｍｌ中のウサ４
ｒｇＧ［シグマ・ケミカル社（ＳｉｇＴｒｌａ Ｃｈｅ
ｍｉｃａ１社）から入手３０℃溶液に滴下した。反応混
合物を４℃で一夜攪拌し、次いで４℃で０．１ Ｍ Ｎ
ＨＣ１溶液に対し完全に透析させた。透導タンパク質溶
液を冷蔵庫で貯蔵した。
得られた誘導タンパク質溶液を、ミズーリ州セントルイ
スのシグマケミカル社のプルチン（Ｂｕ１合ｔｉｎ）
６９０号において指示されているように、タンパク質濃
度測定のための標準的ビウレット（ｎｔｙ−ｒｅｔ）分
析法に従い分析した。
スのシグマケミカル社のプルチン（Ｂｕ１合ｔｉｎ）
６９０号において指示されているように、タンパク質濃
度測定のための標準的ビウレット（ｎｔｙ−ｒｅｔ）分
析法に従い分析した。
誘導タンパク質溶液中のアゾ基の平均数に関与する誘導
化率は、３５０ ｎｍにおける溶液の吸光度（Ｅ ＝
２０，０００ ）から計算される。タンパク質濃度は、
２８０ ｎｍにおけるその特徴的吸光度から決定される
。２８０ ｎｍにおいてアゾフェニル基の若干の吸収（
Ｅ＝ １９，８００ ）があるため、タンパク質濃度の
わずかな補正が必要であった。アゾ濃度：補正タンパク
質濃度の比率は、したがって、タンパク質分子当たりの
平均アゾ結合数を示すことになる。
化率は、３５０ ｎｍにおける溶液の吸光度（Ｅ ＝
２０，０００ ）から計算される。タンパク質濃度は、
２８０ ｎｍにおけるその特徴的吸光度から決定される
。２８０ ｎｍにおいてアゾフェニル基の若干の吸収（
Ｅ＝ １９，８００ ）があるため、タンパク質濃度の
わずかな補正が必要であった。アゾ濃度：補正タンパク
質濃度の比率は、したがって、タンパク質分子当たりの
平均アゾ結合数を示すことになる。
タンパク質分子当たりのアゾ基数は下記のようにして計
算されるニ ジアゾニウム塩：タンパク質のモル比２５：１でウサギ
ｒｇＧを誘導した場合は、下記式を適用して、各タンパ
ク質分子に結合した平均ジホスホネート基数を決定した
。
算されるニ ジアゾニウム塩：タンパク質のモル比２５：１でウサギ
ｒｇＧを誘導した場合は、下記式を適用して、各タンパ
ク質分子に結合した平均ジホスホネート基数を決定した
。
測定吸光度： Ａ３５ｏ： ０．２６２、Ａ２８ｏ：
Ｌ５４６アゾ濃度の計算：（アゾ基のＥｙｎ ＝ ２２
、０００ ）３５０ ｎｍ ： Ａ ＝ ０．２６２
＝ ２２，０００ Ｘ Ｃ７ソＣアゾ＝１，１９Ｘ１
（ｌ Ｍ ２８０ ｎｍのアゾフェニル吸光度の計算：（アゾフェ
ニル基の脂＝１９，８００ ）Ａ＝１９，８００Ｘ１，
１９Ｘ］ＯＭ＝０．２３６タンパク質濃度の計算（ウサ
ギＩｇＧのＡ２Ｂｏ＝２１９，０００ ） ：こ Ａ ＝ １．５４６−０．２３６ ＝ １．３］ ＝
２１９，０００ ｘ嗜夕、バク質Ｃタッパク質＝ ５．
９８ＸＩＯＭ タンパク質分子当たりのアゾ基の計算 １．１９ Ｘ Ｎｏ−５ タンパク質分子当たりのアゾ基数＝ ’５．９８ Ｘ
＞ｏ”＝１．９９ 例２ 下記例は、テクネチウム−９９ｍとジホスホネート誘導
１ｇＧ及びＰ（ａｂ’）２断片との結合性について説明
するものである。
Ｌ５４６アゾ濃度の計算：（アゾ基のＥｙｎ ＝ ２２
、０００ ）３５０ ｎｍ ： Ａ ＝ ０．２６２
＝ ２２，０００ Ｘ Ｃ７ソＣアゾ＝１，１９Ｘ１
（ｌ Ｍ ２８０ ｎｍのアゾフェニル吸光度の計算：（アゾフェ
ニル基の脂＝１９，８００ ）Ａ＝１９，８００Ｘ１，
１９Ｘ］ＯＭ＝０．２３６タンパク質濃度の計算（ウサ
ギＩｇＧのＡ２Ｂｏ＝２１９，０００ ） ：こ Ａ ＝ １．５４６−０．２３６ ＝ １．３］ ＝
２１９，０００ ｘ嗜夕、バク質Ｃタッパク質＝ ５．
９８ＸＩＯＭ タンパク質分子当たりのアゾ基の計算 １．１９ Ｘ Ｎｏ−５ タンパク質分子当たりのアゾ基数＝ ’５．９８ Ｘ
＞ｏ”＝１．９９ 例２ 下記例は、テクネチウム−９９ｍとジホスホネート誘導
１ｇＧ及びＰ（ａｂ’）２断片との結合性について説明
するものである。
ウサギｘｇａ（シグマ社から入手）は、ゲンチシン酸を
使用しなかったこと以外は、例３に記載されているよう
にして誘導され、かつ９９ ｍ −Ｔｅで標識化された
。ＩｇＧまたは誘導ｆｇＧ２〜３ ｍｇ を９９ ｍ
−Ｔｃ ５００μｃｉで標識化した。反応混合物をバイ
オゲル（ＢｉｏＧｅｌ） Ｐ６ ［バイオ・ラッド社（
Ｂｉｏ Ｒａｄ ） ）のカラムでゲル濾過し、ピーク
タンパク質分画１．０ｍｇ を以下の血漿交換実験用に
取出した。
使用しなかったこと以外は、例３に記載されているよう
にして誘導され、かつ９９ ｍ −Ｔｅで標識化された
。ＩｇＧまたは誘導ｆｇＧ２〜３ ｍｇ を９９ ｍ
−Ｔｃ ５００μｃｉで標識化した。反応混合物をバイ
オゲル（ＢｉｏＧｅｌ） Ｐ６ ［バイオ・ラッド社（
Ｂｉｏ Ｒａｄ ） ）のカラムでゲル濾過し、ピーク
タンパク質分画１．０ｍｇ を以下の血漿交換実験用に
取出した。
９９ ｍ −Ｔｃ標識化ｐｐ（ジホスホネート）誘導１
ｇＧの一部を、調製したばかりのヘパリン添加ヒト血漿
］、Ｏｍｌに加えた。未誘導の９９ ｍ −Ｔｃ標識化
ＩｇＧを同様に処理し、コントロールとして用いた。
ｇＧの一部を、調製したばかりのヘパリン添加ヒト血漿
］、Ｏｍｌに加えた。未誘導の９９ ｍ −Ｔｃ標識化
ＩｇＧを同様に処理し、コントロールとして用いた。
混合されたＩｇＧ−血漿を攪拌しながら３７℃で加熱し
た。３０分後、過剰のヤギ抗つサギｒ−グロブリン（Ｇ
ＡＲＧＧ ） を加えて、ウサギＩｇＧを沈殿させた
。
た。３０分後、過剰のヤギ抗つサギｒ−グロブリン（Ｇ
ＡＲＧＧ ） を加えて、ウサギＩｇＧを沈殿させた
。
遠心分離後、ウサギＩｇＧ沈殿物および血漿上澄をｒ計
数に付した。ウサギＩｇＧと結合し続けている９９ ｍ
−Ｔｃは沈殿物中に見出された。結果は下記表に要約
されている： ０ １．１３ Ｘ １０５３７チ０．３
３．４７ Ｘ １０５ｇ４ ％１．９ ３，８
２ Ｘ １０’ ８７ ％８．０
４，８１ Ｘ １０’ ９］％本発明のジ
ホスホネート誘導方法では、これらの競合結合試験たよ
り評価されるように、抗体の活性を著しく変化させるこ
とがない。ジホスホネートの添加は、９９ ｍ −’ｒ
、ｃと結合する抗体の親和性を増加させた。
数に付した。ウサギＩｇＧと結合し続けている９９ ｍ
−Ｔｃは沈殿物中に見出された。結果は下記表に要約
されている： ０ １．１３ Ｘ １０５３７チ０．３
３．４７ Ｘ １０５ｇ４ ％１．９ ３，８
２ Ｘ １０’ ８７ ％８．０
４，８１ Ｘ １０’ ９］％本発明のジ
ホスホネート誘導方法では、これらの競合結合試験たよ
り評価されるように、抗体の活性を著しく変化させるこ
とがない。ジホスホネートの添加は、９９ ｍ −’ｒ
、ｃと結合する抗体の親和性を増加させた。
これらのデータは、ＤＰ−ＩｇＧは未誘導１ｇＧよりも
多くの９９ ｍ −Ｔｃと結合するだけではなく、高率
の９９ ｍ −ＴｃがＤＰ−ｘ ｇａから解離せずにい
ることから判断されるように、９９ ｍ −ＴｃはＤＰ
−ＩｇＧとより強固に結合していることを証明している
。実質的に同様の結果は、ＩｇＧ断片よりもむしろＦ（
ａｂ）２断片が特徴を有していた場合に得られた。
多くの９９ ｍ −Ｔｃと結合するだけではなく、高率
の９９ ｍ −ＴｃがＤＰ−ｘ ｇａから解離せずにい
ることから判断されるように、９９ ｍ −ＴｃはＤＰ
−ＩｇＧとより強固に結合していることを証明している
。実質的に同様の結果は、ＩｇＧ断片よりもむしろＦ（
ａｂ）２断片が特徴を有していた場合に得られた。
例３
本例は、ＤＰ−ＩｇＧおよびＤＰ−Ｆ（ａｂ’ ）２を
用いる軟部組織腫瘍のイン・ビボイメージングについて
説明するものである。
用いる軟部組織腫瘍のイン・ビボイメージングについて
説明するものである。
ＩｇＧおよびＦ’（ａｂ’）２断片は、ヒトβ２Ｍおよ
びヒトＣＩＡに対する市販のウサギ抗血清から調製され
た。ＣＥＡの場合は、供給者により調製されたＩｇＧ分
画を使用したが、ウサギ抗β２Ｍは固定化ヒトβ２Ｍア
フィニティーカラムを用いて更に精製された。
びヒトＣＩＡに対する市販のウサギ抗血清から調製され
た。ＣＥＡの場合は、供給者により調製されたＩｇＧ分
画を使用したが、ウサギ抗β２Ｍは固定化ヒトβ２Ｍア
フィニティーカラムを用いて更に精製された。
ＩｇＧおよびＦ（ａｂ’）２断片を例１で前記したよう
にして誘導した。反応剤、即ちジホスホネート：タンパ
ク質の化学量論比は１０：１であった。ｐＨ７，４のリ
ン酸緩衝液に対して完全に透析した後、ｒｇＧおよびＦ
（ａｂ’）２断片各１ ｍｇを凍結乾燥させた。
にして誘導した。反応剤、即ちジホスホネート：タンパ
ク質の化学量論比は１０：１であった。ｐＨ７，４のリ
ン酸緩衝液に対して完全に透析した後、ｒｇＧおよびＦ
（ａｂ’）２断片各１ ｍｇを凍結乾燥させた。
９９ ｍ −Ｔｃで標識化しかつ注射用に製造するのに
際して、凍結乾燥タンパク質を無菌水７００μｌに溶解
した。ゲンチシン酸１２５ｍｇ％Ｔ ｅＯ４−としての
Ｔｃ−９９ｍ ４ｍＣ１および５ｎＣ１２２５０／’ｇ
を次いで各々バイアルに加えた。２２０〜２５０μｌの
注射を、ＣＩＡ発現発現ヒト結腸原種腫瘍はβ２Ｍ発現
ヒト前立腺癌種腫瘍をもつ無胸腺マウスの尾静脈で行な
った。シンチグラムを、ビンホールカラムネータ−（ｃ
ｏｌｕｍｎａｔｏｒ）を用い、注射後】、４および２４
４時間目テクニケア・シグマ（’ｒ’ｅｃｈｎｉｃａｒ
ｅ Ｓｉｇｍｍ）４００ガンマカメラから得た。投与後
２４４時間目、抗β２Ｍ ＩｇＧおよびＦ（ａｂつ２断
片が投与された動物を殺し、腫瘍を摘出し、各腫瘍の半
分を１０％中性ホルマリン緩衝液で固定した。各腫瘍の
残り半分を包埋し、間接免疫蛍光法用のために凍結した
。
際して、凍結乾燥タンパク質を無菌水７００μｌに溶解
した。ゲンチシン酸１２５ｍｇ％Ｔ ｅＯ４−としての
Ｔｃ−９９ｍ ４ｍＣ１および５ｎＣ１２２５０／’ｇ
を次いで各々バイアルに加えた。２２０〜２５０μｌの
注射を、ＣＩＡ発現発現ヒト結腸原種腫瘍はβ２Ｍ発現
ヒト前立腺癌種腫瘍をもつ無胸腺マウスの尾静脈で行な
った。シンチグラムを、ビンホールカラムネータ−（ｃ
ｏｌｕｍｎａｔｏｒ）を用い、注射後】、４および２４
４時間目テクニケア・シグマ（’ｒ’ｅｃｈｎｉｃａｒ
ｅ Ｓｉｇｍｍ）４００ガンマカメラから得た。投与後
２４４時間目、抗β２Ｍ ＩｇＧおよびＦ（ａｂつ２断
片が投与された動物を殺し、腫瘍を摘出し、各腫瘍の半
分を１０％中性ホルマリン緩衝液で固定した。各腫瘍の
残り半分を包埋し、間接免疫蛍光法用のために凍結した
。
注射後４時間目において、抗βｙｔｘｇａおよびそのＦ
（ａｂ’）２断片は良好な腫瘍局在化を示していた。
（ａｂ’）２断片は良好な腫瘍局在化を示していた。
ＩｇＧまたはＦ（ａｂつ２断片注射後２４時間目に摘出
された腫瘍の免疫組織化学的評価から、ＩｇＧおよびＦ
（ａｂ’）２断片が腫瘍に到達していたことを証明した
。
された腫瘍の免疫組織化学的評価から、ＩｇＧおよびＦ
（ａｂ’）２断片が腫瘍に到達していたことを証明した
。
例４
本例は、胃腸造影剤として使用されるジホスホネート誘
導不溶性高分子の用途について説明するものである。
導不溶性高分子の用途について説明するものである。
セファロース（ＲｅｐｈａｒｏｓｅＲ） ＣＬ−４Ｂ
［）７ ル？シア社（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｃｏｒｐｏ
ｒａｔｔｏｎ）から入手した多糖類〕１０ｇを蒸留水１
０ｍ１に加えた。試料を、アセトニトリルに溶解された
臭化シアン（２ｇＯＮＢｒ／ｍｌ ０Ｈ３（Ｎ）を用い
、２Ｍ ＮＨ２Ｃｉ０３溶液中で活性化させた。セファ
ロースを室温で２分間激しく撹拌した。樹脂を汗取し、
ｐＨ９，５の０．１ Ｎ ＮＨＨＣＯ，続（・てＨ２Ｏ
で洗浄した。活性化ゲルを、２−（４−アミノフェニル
）エタン−１，１−ジホスホン酸１．５ｇが加えられて
いるｐＨ９，７の０，２ Ｍ ＮＨＨＯＯ３３０ｍｌに
加えた。この濱合物を冷蔵庫（４℃〕で一夜反応させた
。ゲルを汗取した。２Ｍグリシンを（未反応部位を消失
させるためｉ／ｌ： ）ｐＨ９，５でゲルに加えた。誘
導ゲルを次（・で過剰の水で洗浄した。スラリーのｐｇ
を塩酸で５．０に調整した。
［）７ ル？シア社（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｃｏｒｐｏ
ｒａｔｔｏｎ）から入手した多糖類〕１０ｇを蒸留水１
０ｍ１に加えた。試料を、アセトニトリルに溶解された
臭化シアン（２ｇＯＮＢｒ／ｍｌ ０Ｈ３（Ｎ）を用い
、２Ｍ ＮＨ２Ｃｉ０３溶液中で活性化させた。セファ
ロースを室温で２分間激しく撹拌した。樹脂を汗取し、
ｐＨ９，５の０．１ Ｎ ＮＨＨＣＯ，続（・てＨ２Ｏ
で洗浄した。活性化ゲルを、２−（４−アミノフェニル
）エタン−１，１−ジホスホン酸１．５ｇが加えられて
いるｐＨ９，７の０，２ Ｍ ＮＨＨＯＯ３３０ｍｌに
加えた。この濱合物を冷蔵庫（４℃〕で一夜反応させた
。ゲルを汗取した。２Ｍグリシンを（未反応部位を消失
させるためｉ／ｌ： ）ｐＨ９，５でゲルに加えた。誘
導ゲルを次（・で過剰の水で洗浄した。スラリーのｐｇ
を塩酸で５．０に調整した。
ゲルに対するＴｃ−９９ｍ結合性を試験するために、下
記の実験を実施した。
記の実験を実施した。
誘導ＯＬ −４Ｂ ０．５ ｇを、蒸留水３ ｍｌと、
０．ＩＮ ＭＯｌ ５ ｍｌ中に溶解された８ＮＯ１，
、・２Ｈ２０１２０ｍｇの貯蔵液５０μｍとに混合した
。このスラリーに食塩水中の２４０ Ｃ！ｉのＴｃ −
９９ｍ Ｔｃ０４−溶液を加えた。
０．ＩＮ ＭＯｌ ５ ｍｌ中に溶解された８ＮＯ１，
、・２Ｈ２０１２０ｍｇの貯蔵液５０μｍとに混合した
。このスラリーに食塩水中の２４０ Ｃ！ｉのＴｃ −
９９ｍ Ｔｃ０４−溶液を加えた。
バイアルを２〜３分間振盪し、しかる後０．４５ シ
リンジフィルターに通してｒ過した。
リンジフィルターに通してｒ過した。
シリンジ、フィルターおよびｒ液中の活性を測定した。
テクネチウムの９７．５％はゲルと結合して（・た。未
誘導セファロースＯＬ −４Ｂを用いたコントロール実
験を上記のようＶＣ操作したが、テクネチウムの２１．
６％だけがゲルと結合していた。
誘導セファロースＯＬ −４Ｂを用いたコントロール実
験を上記のようＶＣ操作したが、テクネチウムの２１．
６％だけがゲルと結合していた。
例５
本例は、ジスルフィド結合基を有するジホスホネート誘
導多糖類ゲルの製造について説明するものである。
導多糖類ゲルの製造について説明するものである。
（グルタチオン−２−ピリジルジスルフィド〕アガロー
ス複合体を、酵素学における方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉ
ｎ Ｅ、ｎｇｙｍｏｌｏｇｙ） 、第詞巻、第５３６−
５３８頁に記載されているようにして製造する。このゲ
ル〔アガロース−〇ＥＩ −２ピリジル〕をｐＨ８のリ
ン酸緩衝液中の過剰の４−メルカプトブタン−１゜１−
ジホスホネートと反応させる。反応後、ゲルを、等侵食
塩水を用いてガラスフィルターにて完全に洗浄する。
ス複合体を、酵素学における方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉ
ｎ Ｅ、ｎｇｙｍｏｌｏｇｙ） 、第詞巻、第５３６−
５３８頁に記載されているようにして製造する。このゲ
ル〔アガロース−〇ＥＩ −２ピリジル〕をｐＨ８のリ
ン酸緩衝液中の過剰の４−メルカプトブタン−１゜１−
ジホスホネートと反応させる。反応後、ゲルを、等侵食
塩水を用いてガラスフィルターにて完全に洗浄する。
形成される生成物は次式を有する。
例６
本例は、肺イメージング処方剤としての使用に適した、
チオ尿素結合を有するジホスホネート誘導アルブミンの
製造について説明する。
チオ尿素結合を有するジホスホネート誘導アルブミンの
製造について説明する。
例１で記載された２−（４−アミノフェニル）エタン−
１，１−ジホスホネートを、０．４Ｍ石ｃＯ３緩薗水＃
液中の１０倍モル過剰のチオホスゲンと室温で処理する
ことにより、２−（４−イソチオシアナトフェニル）エ
タン−１，１−ジホスホネートに変換する。反応浴液を
ジクロロメタンで抽出し、未反応チオホスゲンを除去す
る。このインチオシアネートジホスホネート含有溶液を
、ｐｉｉｓ、ｓの０．４Ｍ ＮＨＨＯ０３緩衝液２５ｍ
１中のアルブミン１５ｍｇの凝集アルブミン粒子（直径
１０μ〜１００μ）の懸濁液と３７℃で６０分間反応さ
せる。反応後、ジホスホネート誘導アルブミン凝集物を
集め、遠心分離により洗浄して、未反応ジホスホネート
を除去する。
１，１−ジホスホネートを、０．４Ｍ石ｃＯ３緩薗水＃
液中の１０倍モル過剰のチオホスゲンと室温で処理する
ことにより、２−（４−イソチオシアナトフェニル）エ
タン−１，１−ジホスホネートに変換する。反応浴液を
ジクロロメタンで抽出し、未反応チオホスゲンを除去す
る。このインチオシアネートジホスホネート含有溶液を
、ｐｉｉｓ、ｓの０．４Ｍ ＮＨＨＯ０３緩衝液２５ｍ
１中のアルブミン１５ｍｇの凝集アルブミン粒子（直径
１０μ〜１００μ）の懸濁液と３７℃で６０分間反応さ
せる。反応後、ジホスホネート誘導アルブミン凝集物を
集め、遠心分離により洗浄して、未反応ジホスホネート
を除去する。
形成された生成物は次式を有する：
例７
本例は、抗体断片とのジホスホネートの光誘導結合につ
いて説明するものである。
いて説明するものである。
例１に記載されたジアゾフェニルエタン−１゜１−ジホ
スホネートを、ナトリウムアジド水溶液とｐＨ９、４℃
で処理することにより、２−（４−アゾフェニル）エタ
ン−１，１−ジホスホネートに変換する。生成物をエタ
ノールで反応浴液から沈殿させることにより回収する。
スホネートを、ナトリウムアジド水溶液とｐＨ９、４℃
で処理することにより、２−（４−アゾフェニル）エタ
ン−１，１−ジホスホネートに変換する。生成物をエタ
ノールで反応浴液から沈殿させることにより回収する。
例１で記載された抗β２ＭマクログロブリンＦ（ａｂす
２断片１１１１ｇを、リン酸緩衝液５ｍｌに溶解された
上記アジドフェニルジホスホネートｔｏ ｍｇと４℃で
混合する。光照射を、ライオネット・ミニリアクター（
ｂａｙｏｎｅｔＭｉｎｉｒｅａｃｔｏｒ ）を用イ２４
０〜３５０ ｎｍで行なう。光分解により形成されるニ
トレン中間体がタンパク質分子と結合する。反応後、過
剰のジホスホネートを、セファデックス（Ｅｉｅｐｈａ
ｄｅｘ） Ｇ −２５カラムでのゲル透過クロマトグラ
フィーによって除去する。
２断片１１１１ｇを、リン酸緩衝液５ｍｌに溶解された
上記アジドフェニルジホスホネートｔｏ ｍｇと４℃で
混合する。光照射を、ライオネット・ミニリアクター（
ｂａｙｏｎｅｔＭｉｎｉｒｅａｃｔｏｒ ）を用イ２４
０〜３５０ ｎｍで行なう。光分解により形成されるニ
トレン中間体がタンパク質分子と結合する。反応後、過
剰のジホスホネートを、セファデックス（Ｅｉｅｐｈａ
ｄｅｘ） Ｇ −２５カラムでのゲル透過クロマトグラ
フィーによって除去する。
例８
Ｑ、５Ｍ ＮＨＯＨおよび水で予め洗浄されたアミノエ
チルセルロースをｐＨ７の０．０５ Ｍリン酸緩衝液に
￥濁する（ ２５０ ｍｌ中乾燥重量１０ｇ）。グルタ
ルアルデヒド２ジ ２時間撹拌後、セルロース誘導体を沢取し、水洗する。
チルセルロースをｐＨ７の０．０５ Ｍリン酸緩衝液に
￥濁する（ ２５０ ｍｌ中乾燥重量１０ｇ）。グルタ
ルアルデヒド２ジ ２時間撹拌後、セルロース誘導体を沢取し、水洗する。
生成物を同一の緩衝液に再懸濁し、５−アミノペンタン
−１−ヒドロキシ−１，１−ジホスホネー） ２．０
ｇで処理する。室温で３時間撹拌後、セルロースをＰ取
し、水で完全に洗浄して、未反応ジホスホネートを除去
する。
−１−ヒドロキシ−１，１−ジホスホネー） ２．０
ｇで処理する。室温で３時間撹拌後、セルロースをＰ取
し、水で完全に洗浄して、未反応ジホスホネートを除去
する。
形成される生成物は次式を有する２
０ｍ。
例９
例８によるジホスホネート誘導アミノエチルセルロース
をｐＨ９．５の水素化ホウ素ナトリウム水溶液で処理す
る。この化学還元プロセスは例８で形成されたイミン結
合を安定化させ、更に安定なジアルキルアミン結合を形
成する。
をｐＨ９．５の水素化ホウ素ナトリウム水溶液で処理す
る。この化学還元プロセスは例８で形成されたイミン結
合を安定化させ、更に安定なジアルキルアミン結合を形
成する。
形成される生成物は次式を有する：
Ｈ
例１０
ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）含有の透明
なヒドロゲルコポリマーフィルムを、ｐＨ１１の臭化シ
アン緩衝液中１０％ｗ／ｖのホウ酸！９！衝液に懸濁す
る。ｐＨを４ＮＮＨＯＨ溶液でｐＨ１ｌに維持する。臭
化シアンで活性化後、ポリマーフィルムをＱ．５Ｍ Ｎ
ＨＨＯＯ３緩衝液中ｐＨ ９の６−アミノ−ｌ−ヒドロ
キシヘキサン−１．１−ジホスホネート５９ｍｍ０１溶
液で一夜処理する。誘導ポリマーフィルムを蒸留水で完
全に洗浄し、未反応ジホスホネートを除去する。
なヒドロゲルコポリマーフィルムを、ｐＨ１１の臭化シ
アン緩衝液中１０％ｗ／ｖのホウ酸！９！衝液に懸濁す
る。ｐＨを４ＮＮＨＯＨ溶液でｐＨ１ｌに維持する。臭
化シアンで活性化後、ポリマーフィルムをＱ．５Ｍ Ｎ
ＨＨＯＯ３緩衝液中ｐＨ ９の６−アミノ−ｌ−ヒドロ
キシヘキサン−１．１−ジホスホネート５９ｍｍ０１溶
液で一夜処理する。誘導ポリマーフィルムを蒸留水で完
全に洗浄し、未反応ジホスホネートを除去する。
形成される生成物は次式を有する：
ＯＨ・
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、次式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔上記式中、Ｐは、タンパク質類、ポリペプチド類、多
糖類、ポリ（アクリレート）、ポリ（アクリルアミド）
、ポリ（メタクリレート）、ポリ（エタクリレート）、
ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、ポリ（ビ
ニルアルコール）、ポリ（無水マレイン酸）、ポリ（マ
レエート）、ポリ（アミド）、ポリ（エチレンアミン）
、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（プロピレングリ
コール）、ポリ（ビニルアセテート）およびポリ（ビニ
ルペンジルクロリド）からなる群より選択される高分子
であって；しかも−ＮＨ＿２、−ＣＯＯＨ、−ＳＨ、−
ＣＨＯ、−Ｓ−Ｓ、ＯＨ、フェノール、グアニジノ、イ
ミダゾールまたはインドール、およびそれらの混合基か
らなる群より選択される１以上の反応末端基を有してお
り； Ｌは、 ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼お よび▲数式、化学式、表等があります▼ からなる群より選択される結合部分であり；Ｑは、置換
アリール、非置換アリールまたはＣ＿１〜Ｃ＿１＿２の
アルキルからなる群より選択されるスペーサー基であり
；ｎは０または１であり；更に、Ｘは、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ
＿２、置換もしくは非置換アミノ、ハロゲンまたはＣ＿
１〜Ｃ＿４のアルキルからなる群より選択される〕 のジホスホネート誘導高分子類およびこれら誘導高分子
類の薬学上許容される塩類。 ２、Ｐがタンパク質である、特許請求の範囲第１項記載
のジホスホネート誘導高分子類。 ３、タンパク質が抗体または抗体断片である、特許請求
の範囲第２項記載のジホスホネート誘導高分子類。 ４、結合部分が −Ｎ＝Ｎ−、▲数式、化学式、表等があります▼または
▲数式、化学式、表等があります▼ からなる群より選択される、特許請求の範囲第２項記載
のジホスホネート誘導高分子類。 ５、スペーサー基が非置換アリールである、特許請求の
範囲第４項記載のジホスホネート誘導高分子類。 ６、ＸがＨ、ＯＨまたはＮＨ＿２からなる群より選択さ
れる、特許請求の範囲第５項記載のジホスホネート誘導
高分子類。 ７、 タンパク質▲数式、化学式、表等があります▼ タンパク質▲数式、化学式、表等があります▼ タンパク質▲数式、化学式、表等があります▼ タンパク質▲数式、化学式、表等があります▼ タンパク質▲数式、化学式、表等があります▼ タンパク質▲数式、化学式、表等があります▼ タンパク質▲数式、化学式、表等があります▼ タンパク質▲数式、化学式、表等があります▼ タンパク質▲数式、化学式、表等があります▼ タンパク質▲数式、化学式、表等があります▼ タンパク質▲数式、化学式、表等があります▼ タンパク質▲数式、化学式、表等があります▼ ポリマー▲数式、化学式、表等があります▼ 多糖類▲数式、化学式、表等があります▼ コラーゲン▲数式、化学式、表等があります▼ ポリマー▲数式、化学式、表等があります▼ 〔上記式中、ｎは０〜約１２の整数であり；更にＸは、
Ｈ、ＯＨおよびＮＨ＿２からなる群より選択される〕 からなる群より選択される、特許請求の範囲第１項記載
のジホスホネート誘導高分子類。 ８、特許請求の範囲第１項記載のジホスホネート誘導高
分子がテクネチウム−９９ｍで錯体化されている放射線
標識化キレート。 ９、特許請求の範囲第６項記載のジホスホネート誘導高
分子がテクネチウム−９９ｍで錯体化されている放射線
標識化キレート。 １０、特許請求の範囲第７項記載のジホスホネート誘導
高分子がテクネチウム−９９ｍで錯体化されている放射
線標識化キレート。 １１、（ａ）次式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔上記式中、Ｐは、タンパク質類、ポリペプチド類、多
糖類、ポリ（アクリレート）、ポリ（アクリルアミド）
、ポリ（メタクリレート）、ポリ（エタクリレート）、
ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、ポリ（ビ
ニルアルコール）、ポリ（無水マレイン酸）、ポリ（マ
レエート）、ポリ（アミド）、ポリ（エチレンアミン）
、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（プロピレングリ
コール）、ポリ（ビニルアセテート）およびポリ（ビニ
ルペンジルクロリド）からなる群より選択される高分子
であって；Ｌかも−ＮＨ＿２、−ＣＯＯＨ、−ＳＨ、−
ＣＨＯ、−Ｓ−Ｓ、−ＯＨ、フェノール、グアニジノ、
イミダゾールまたはインドール、およびそれらの混合基
からなる群より選択される１以上の反応末端基を有して
おり； Ｌは、 ▲数式、化学式、表等があります▼、−Ｎ＝Ｎ−、▲数
式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、表等
があります▼、▲数式、化学式、表等があります▼−Ｎ
＝ＣＨ−、−ＮＨ−ＣＨ＿２−、−ＣＨ＿２−Ｓ−ＣＨ
＿２−、−Ｓ−Ｓ−、▲数式、化学式、表等があります
▼および▲数式、化学式、表等があります▼； からなる群より選択される結合部分であり；Ｑは、置換
アリール、非置換アリールまたはＣ＿１〜Ｃ＿１＿２の
アルキルからなる群より選択されるスペーサー基であり
；ｎは０または１であり；更に、Ｘは、Ｈ、ＯＨ、、Ｎ
Ｈ＿２、置換もしくは非置換アミノ、ハロゲンまたはＣ
＿１〜Ｃ＿４のアルキルからなる群より選択される〕 のジホスホネート誘導高分子類およびこれら誘導高分子
類の薬学上許容される塩類の安全有効量； （ｂ）ペルテクネテート還元剤； （ｃ）安定剤化合物； （ｄ）薬学上許容される担体； からなる、ヒトまたは動物におけるシンチグラフィーイ
メージング用薬学的組成物。 １２、ジホスホネート誘導高分子約１％〜約２０％、ペ
ルテクネテート還元剤０．０００１％〜約１０％、安定
剤約０．００１％〜約２０％および薬学上許容される担
体約５０％〜約９８％からなる、液体形態の特許請求の
範囲第１１項記載の薬学的組成物。 １３、Ｐがタンパク質である、特許請求の範囲第１１項
記載の薬学的組成物。 １４、ジホスホネート誘導タンパク質約０．０１％〜約
２０％、ペルテクネテート還元剤約１×１０＾−＾６％
〜約１０％、安定剤化合物約１×１０＾−＾５％〜約２
０％および薬学上許容される担体約５０％〜約９９．９
％からなる、液体形態の特許請求の範囲第１３項記載の
薬学的組成物。 １５、凍結乾燥形態の特許請求の範囲第１１項記載の薬
学的組成物。 １６、ジホスホネート誘導高分子約５％〜約９９％、ペ
ルテクネテート還元剤約０．０００５％〜約１０％、安
定剤約０．００５％〜約２０％および薬学上許容される
担体約０．０１％〜約６０％からなる、特許請求の範囲
第１５項記載の凍結乾燥された薬学的組成物。 １７、Ｐがタンパク質である、特許請求の範囲第１５項
記載の凍結乾燥された薬学的組成物。 １８、ジホスホネート誘導タンパク質１％〜約５０％、
ペルテクネテート還元剤約０．０００１％〜約１０％、
安定剤約０．００１％〜約２０％および薬学上許容され
る担体約２０％〜約９８％からなる、特許請求の範囲第
１７項記載の凍結乾燥された薬学的組成物。 １９、ヒトまたは動物における組織のシンチグラフィー
イメージング方法であって、 特許請求の範囲第１２項記載の薬学的組成物をペルテク
ネテート−９９ｍ溶液と混合し、該混合液約１ｍｌ〜約
１５０ｍｌを上記ヒトまたは動物に投与し、次いで該混
合前から放射される放射線を検出することができるシン
チグラフィー装置により上記ヒトまたは動物をイメージ
ングすることからなる方法。 ２０、ヒトまたは動物における組織のシンチグラフィー
イメージング方法であって、 特許請求の範囲第１３項記載の薬学的組成物をペルテク
ネテート−９９ｍ溶液と混合し、該混合液約１ｍｌ〜約
１５０ｍｌを上記ヒトまたは動物に投与し、次いで該混
合液から放射される放射線を検出することができるシン
チグラフィー装置により上記ヒトまたは動物をイメージ
ングすることからなる方法。 ２１、ヒト又は動物における組織のシンチグラフィーイ
メージング方法であって特許請求の範囲第１８項記載の
薬学的組成物をペルテクネテート−９９ｍ溶液と混合し
、該混合液約１ｍｌ〜約１５０ｍｌを上記ヒトまたは動
物に投与し、次いで該混合液から放射される放射線を検
出することができるシンチグラフィー装置により上記ヒ
トまたは動物をイメージングすることからなる方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US750103 | 1985-06-28 | ||
| US06/750,103 US4830847A (en) | 1985-06-28 | 1985-06-28 | Diphosphonate-derivatized macromolecules |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8005568A Division JP2857095B2 (ja) | 1985-06-28 | 1996-01-17 | ジホスホネート誘導高分子類 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62104801A true JPS62104801A (ja) | 1987-05-15 |
| JP2752355B2 JP2752355B2 (ja) | 1998-05-18 |
Family
ID=25016514
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61151357A Expired - Lifetime JP2752355B2 (ja) | 1985-06-28 | 1986-06-27 | 放射線標識化キレート |
| JP8005568A Expired - Lifetime JP2857095B2 (ja) | 1985-06-28 | 1996-01-17 | ジホスホネート誘導高分子類 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8005568A Expired - Lifetime JP2857095B2 (ja) | 1985-06-28 | 1996-01-17 | ジホスホネート誘導高分子類 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4830847A (ja) |
| EP (1) | EP0207557B1 (ja) |
| JP (2) | JP2752355B2 (ja) |
| CA (1) | CA1336739C (ja) |
| DE (1) | DE3650172T2 (ja) |
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| US5202109A (en) * | 1988-06-10 | 1993-04-13 | Neorx Corporation | Conjugates for bone imaging and bone cancer therapy |
| US4839467A (en) * | 1988-06-15 | 1989-06-13 | University Of Cincinnati | Radioactive rhenium complexed to 2-hydroxy isobutyric acid |
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| JPH07500315A (ja) | 1991-05-10 | 1995-01-12 | セルトリックス ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド | 骨成長因子の標的送達 |
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