JPS62149621A - ホスホクレアチン含有薬剤及びそれを製造する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ホスホクレアチンはそれ自体で又はそのアルカリ金属塩
の形態で、横紋筋（ｓｔｒｉａｔｅｄ　＋５ｕｓｃｕｌ
ａｔｕｒｅ）の病理学的状態、例えば、筋萎縮症（ｍｕ
ｓｃｕｌａｒａＬｒｏｐｂｙ）及び筋ノストロフイー（
ｍｕｓｃｕｌａｒ　ｄｙｓＬｒ。

ａｌ＋ｙ）、並びに、心筋（ｈｅａｒｔ　ｍｕｓｃｕｌ
ａｔｕｒｅ）の病理学的状態、例えば、心筋硬化症（Ｂ
ｏｃａｒｄ　１ｏｓｃ　Ｉｅｒ。

５ｉｓ）、変性心筋症（ｃｌｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ　
ｍｙｏｅａｒｄｉｏｐａｔｌ＋１ｅｓ）、更に一般的に
は、無酸素症（ａｎｏｘｉｅｓ）、即ち、心筋収縮能（
ｍｉｏｃａｒｄｉａｌ　ｃｏｎＬｒａｃｔｉｌｉｔｙ）
ができる限り速く回復されなければならない容態、にお
いで薬理学的及び治療学的用途が見出だされている。

ホスホクレアチンがそれ自体で又はそのアルカリ金属塩
の形態で、動物、例えば犬において前記の生物学的性質
を示す投与量は、一般に約０．５ｍｇ／ｋｇ乃至約６ｍ
ｇ／ｋｇの範囲内にある。

治療に際しては、約２０ｍｌ１ｇ乃至約４００ｍＨの範
囲の日用量（ｄａｉｌｙ　ｄｏｓＩＩｇｅ）で筋肉内又
は静脈内経路により、それらは前記した病理学的状態に
ある患者に投与される。この製剤は普通に使用される製
薬学的担体との組み合わせにおいて約２００ｍｇの量の
活性成分を含有する。

本発明はホスホクレアチン、化学的にはＮ−（アルファ
−イミ／−アルファーホスホンアミド）−メチル−Ｎ−
メチルグリシン、 を含有する新規な薬剤組成物に関する。特に、本発明は
ホスホクレアチンが容易に投与されるような形態に結晶
化されている、グリシンを含まないホスホクレアチン含
有製剤組成物に関する。本発明は該結晶形態のホスホク
レアチンの製造方法にも関する。

ホスホクレアチンは良く知られた天然物質である。それ
は本来を椎動物のいろいろな組織、特に骨格筋内に分布
している。それは最初カエルの筋肉から単離され［エラ
ブレトン、バイオケミカル。

ジャーナル、　　２１．　１９０．１９２７（Ｅｇｇｌ
ｅｔｏｎ＋Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ、２１１１９０．１９２
７）］及びネコの筋肉から単離された［フイスケ等１．
ジャーナル。

オプ、バイオロノカル、ケミストリー、８１，６２９．
１９２９（Ｆｉｓｋｅ　ｅｔ　ａｔ、ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃ
ｂｅｍ、８１　＋６２９．１９２９）、クレアチンのリ
ン酸化（ｐ　ｂ　ｏ　５ｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ）によ
るその化学的合成は最初、ザイレ等９．ジャーナル、オ
ン、フイノオロノカル。

ケ　ミ　ス　ト　リ　−、　　２　５　６，１　９　３
．１　９　３　８（ＺｅｉｌｅｅＬ　　ａｌ＋、Ｊ、Ｐ
Ｉ＋ｙｓｉｏ１．ＣｈｅＩｌｌ、２　５　６，１　９　
３　．１　９　３８）；エノール等９．バイオケミカル
、ツヤ−ナル、　　４３，１９０．１９４８（Ｅｎｎｏ
ｒ　ｅｔ　ａｌ＋、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ、４３．１９０
，１９４８）：エフール等、５フイノオロジカル、レビ
ュー、３８，６３１．１９３　８（Ｅｎｎｏｒ　　ｅＬ
　　ａｌ＋、Ｐｌ目５ｉｏｌ、Ｒｅｖ、３　８＋６　３
　１　　＋１９３Ｂ）により記載された。もっと最近の
化学的合成はイタリア特許第１，０４４，７６５号に記
載されている。

ホスホクレアチンはクレアチンのリン酸化ｌこより筋肉
組識内で形成される。それはエネルギー使用により調ｆ
！？ｉされた有効な筋肉収縮、物理化学的現象を保持す
る際の基本的役割を持っている。筋肉収縮は、アゾ７シ
ンニリン酸（八〇Ｐ）に転化される７デノシン三リン酸
（＾゛［Ｐ）によるホスフェート基の放出により引き起
こされることが知られている。アゾ／シンニリン酸は＾
ＴＰを再生するために更にリン酸を必要とし、それ故へ
′１°Ｐは有効な筋肉収縮能力を保持するのに必要なエ
ネルギーの貯蔵を表す。

静止状態下では、基礎的活動（ｂａｓａｌ　ａｃｔｉｖ
ｉｔｙ）に消費される＾ＴＰの再生は、高エネルギー含
有率を有するリン酸基を供給することができるこれらの
生理学的プロセスを費やして行なわれる。これらの基は
筋肉に含まれたグリコーゲンの代謝分解から誘導される
。

活動状態下では、必要なエネルギー要求は実質的に増加
し、そして不十分になる。これらの情況においては、高
いエネルギーレベルを南するリン酸基の迅速な供給は筋
肉中に存在するホスホクレアチンによって与えらｈる。

ホスホクレアチンはＡ　Ｔ　＋３の合成に導く同じ代謝
機構によって合成される（形成されｊこ乳酸の各モル当
たり２モルのホスホクレアチンの形成を伴う糖質（ｇｌ
ｕｃｉｄｓ）の開裂（ｃｌｅａｖａｇｅ）。

ヘキソノエニックホスホクレアチン供給（ｈｅｘｏｇｅ
ｎｉｃ　ｐｌ＋ｏｓｐｌ＋ｏｃｒｅａｔｉｎｅ　５ｕｐ
ｐｌｙ）は、前記した如く、ＡＴＰ及びホスホクレアチ
ンの両者への高いポテンシャルレベルを有するリン酸基
の供給を確保するのに必要な糖質分解の代謝作用のすべ
て又は大部分を節約することを可能とすることは明らか
である。

ホスホクレアチンはそれ自体で又はそのアルカリ金属塩
の形態で、横紋筋（ｓｔｒｉａｔｅｄ　ｗｕｓｃｕｌａ
Ｌｕｒｅ）の病理学的状態、［例えば、筋萎縮症（ｍｕ
ｓｃｕｌａｒ　ａｔｒｏｐ！＋ｙ）及び筋ジストロフィ
ー（ｍｕｓｃｕｉａｒ　ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）］　、並
びに、心筋（ｈｅａｒｔ　ｍｕｓｃｕｌａｔｕｒｅ）の
病理学的状？！！：心筋硬化症（ｍｙｏｃａｒｄｉｏｓ
ｃｌｅｒｏｓｉｓ）、変性心筋症（ｄｅｇｅｎｅｒａｔ
ｉｖｅ　ｍｙｏｃａｒｄｉｏｐａｔｈｉｅｓ）、更に一
般的には、無酸素症（ａｎｏｘｉｅｓ）、即ち、心筋収
縮能（ｍｉｏｃａｒｄｉａｌ　ｃｏｎＬｒａｃｔｉｌｉ
ｔｙ）ができる限り速く回復されなければならない容態
、において薬理学的及び治療学的用途が見出ださた。

ホスホクレアチンがそれ自体で又は対応するアルカリ金
属塩の形態で、動物、例りば犬においてこれらの生物学
的性質を及ぼす投与量は、一般に約０．５ｍｇ／ｋｇ乃
至約６ｍｇ／ｋｇの範囲内にある。

治療に際しては、約２００ｍビ乃至約４００ｍｇの範囲
の日用量（ｄａｉｌｙ　ｄｏｓａｇｅ）で筋肉内又は静
脈内経路により、それらは前記した４ｇ理学的状態にあ
る患者に投与される。

普通の製薬学的組成物は普通に使用される製薬学的担体
との組み合わせにおいて約２００ｍｇの量の活性成分を
含有する。

驚くべきことに、ホスホクレアチンは、それ自体で又は
対応するアルカリ金属塩の形態で、それが横紋筋に対し
てその作用を示す投与量より実質的に高い投与量で投与
されるとき、心筋細胞の筋ａ細膜（ｓａｒｃｏｌｅｍｍ
ａｔｉｃ　ｍｅｍｂｒａｎｅ）に対して安定化作用を及
ぼし、従って急性心筋虚血症（ｍｙｏｃａｒｄ　ｉ　ａ
ｌ　ｉｓｃｈｅｍｉａ）における心臓麻痺溶液（ｃａｒ
ｄｉｏｐｌｅｇｉｃｓｏｌｕＬｉｏｎｓ）に使用される
とき該筋繊維膜を保護することが見出だされた。

近年性なわれた研究期間中、通常使用される投与量より
高い投与量では、ホスホクレアチンはローマンの反応（
Ｌｏｈｍａｎｎ’　ｒｅａｃｔｉｏｎ）における仮定さ
れた介在（ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ）の範囲を越えた
他の機構を引き起こすことが明らかになった。

動物及び人間の両方においてトレーサーとしてコロイド
状ランタンを使用する電子顕微鏡による研究は虚血心筋
細胞（ｉｓｃｈｅｍｉｃ　ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅ
ｓ）の顕著な安定化を示した。

早期の筋ｍ、維模膜損傷超微細構造マーカーである、コ
ロイド状ランタンは正常な心、臓細胞には侵入せず、そ
して細胞外空間内に蓄積する。反対に、虚血状態におい
ては、心筋細胞の筋繊維膜はコロイド状ランタンを透過
ｒるようになり、これはミトコンドリア膜（ｍｉｊｏｃ
ｈｏｎｄｒｉａｌ　ｍｅＩＱｂｒａｎｅｓ）に関連した
Ｍ徽細構遺検査により証明することができる。

１、０　ｍ　Ｍの濃度のホスホクレアチンの存在下に、
心筋細胞の筋繊維膜は実験的なひどい虚血の状態Ｆでも
コロイド状ランタンを透過させない。これは虚血性心筋
細胞の細胞膜の統合性（ｉｎＬｅ）（ｒｉｔｙ）に対す
るホスホクレアチンの保護有効性を示す。

この効果は、ラビット及びラットにおける冠結紮（ｃｏ
ｒｏ＋＋ａｒｙ　ｌ　ｉｇａＬｕｒｅ）に従う実験的硬
泰形成（ｉｎｆａｒｃＬｉｏｎ）、ミニビッグ生体外心
臓の乳頭筋（ｐａｐｉｌｌａｒ　ｍｕｓｃｌｅ）のスラ
イスの全体的虚血（ｔｏｔａｌ　１ｓｃ１＋ｅｍｉａ）
、人聞における手術の如き種／Ｊの実験的状態丁に行な
われた試験において同時に観察された。

超微細構造の形態学的検査及び酵素による７ノセイ（Ｃ
ＰＬ放出）の如き細胞膜の統合性の＋（ｆ接及び間接の
インデックスを検査することによって同様な結論に達し
た。

この発見の重要性は、筋繊維膜が最も感受性の心臓細胞
構造でありそして虚血状態ドに変化を受ける第１のそれ
であることを４゛えるど明きらかになる。

故に、虚血性４Ｊｔ傷から筋繊維膜を保護ｒることは、
心筋代謝、その形態゛を的統合性、収、縮へ能匹、電気
生理学に対する都合の悪い効果を伴って１：１１ｆ逆的
細胞損傷に導く多くの出来’ＩＬを防止ｒる、：とを意
味する。

前記の考察は、より良好な形態゛学的、生物化学的、磯
ｆｔＥ的（収縮能）及び電気的（ｆ整脈のより低い発生
率）回復から成る、動物及び人間における生体外及び生
体内心筋保護の種々の実験におけ乙ホスホクレアチンの
効果の解釈を可能とする。

この膜安定効果の生化学的な解釈は、冠結紮を有トる大
の心筋細胞に月ｒる膜リン脂質代謝の研究におい゛Ｃ示
唆された。これらの研究から導かれｊこ結論は、ホスホ
クレアチンの吸安定化効果は、少なくとも−・部は、？
を通はリンホスファチド（Ｉｙｓｏｐｈｏｓｐｈａ　Ｌ
　１ｄｅｓ　）に分解される心筋細胞の細胞膜のリン脂
質分解に討ｒる抑制作用に婦されうるということであっ
た。

＋ｉｉ＋記した如く、急性虚血症期間中の人間心臓麻痺
及び心筋保護の分野における最近の臨床研究は、心臓麻
痺ｍ液中の２−３，７日の筋肉内投与量、２８ｇ／ＥＪ
の静脈内投与量でホスホクレアチンの顕著な正の効果を
示す。

これらの投４　；ｉｔはこれまでに使用された投与量よ
りはるかに高い投”ＰＭである。これは筋肉内及び／又
は静脈内投荏に有用なより高いホスホクレアチン用量（
０，５−ＩＩ？及びそれ以上）を４ｒる新規な処方を製
造する問題を生じる。

、診療所でこれまで使用さた処りの製造方法は凍結乾燥
工程における支持体として必要な多量のグリシンの存在
を伴う。

２００ａ＋ｇの投与量の活性成分を有する凍結乾燥され
たホスホクレアチンアンプルにおい′Ｃ、グリシンは２
５０ｍｇの量で存在する。比例して高いグリシン量が高
いホスホクレアチン投与量を有するアンプルに存在して
調１１！されるであろう。

グリシンの存在は局所的許容性の問題を伴う注射溶液の
浸透性の顕著な増加を引き起こす。

本発明の方法により製造されたホスホクレアチンを使用
することの他の利、弘は、ホスホクレアチンが、ホスホ
クレアチン１分子当たり結晶水約６モルに相当する、約
３０％の結晶水を有する結晶性粉末の形態にあるという
ことである。これはこの物質に低い程度の吸湿性及び良
好な安定性及び長い貯蔵か命を与える。

０．５ｇ及びそれより多くの用量を有する非経口的ホス
ホクレアチン処方の臨床的要求は、対応してグリシン量
の平行な増加を伴う。最終的な結果は、望ましくない程
高い容量及び局所的に許容でトない且つ筋肉内投与に不
適当な浸透性を持った溶液である。更に、非常に高いグ
リシン投与量の静脈内投与はこのアミノ酸に起因する薬
理学的干渉及び薬力学的効果を引き起こすことがある。

従って、最近の臨床研究の結果と一致した心臓保護活性
を有ｒるホスホクレアチン投与量を投与［るためには、
最終溶液の浸透性及び容量の両方をｊ威少させるととも
に、成分、特にグリシンを排除した、新しい製造方法が
必要とさＦＸ、ｒこ。これは、０．５−１ｇ及びそれよ
り多くの活性物質を含有しそし′ζ筋内内投−１）−に
適合性の浸透性及び容量を白゛しぞし一〇外科的心臓ｆ
在」す１開中心臓注入（ｈ　ｅ　ｕ己ｉ　ｎ　ｒ　ＬＩ
　Ｓ　ｉ　ｏ　ｎ　）のｊこめの依然として高いＩ□ｊ
）脈内投与敬又はｌｆＦ液を投！；　ｔ′るとき、グリ
シンによる起こりうる薬理学的工費歩を防止ｒる、処方
を調製Ｖる唯一の方法であった。

高用量の且つグリシンを含まない処方の非経口的投与に
有用な形態のホスホクレアチンの製造方法は、１−２重
量部の水にホスホクレアチンナトリウム１重量部を溶解
し、このようにして得られた溶液を約Ｏ′Ｃ乃至約１０
℃の温度に冷却し、そして１−３時間、好ましくは約２
時間の期間に、ホスホクレアチンナトリウムを溶解する
水の容量の２−３倍に相当する容量のエタ／−ルを徐々
に加えることがら成る。このナトリウム塩は結晶の形態
で沈でんする。それはほとんど吸湿性ではなく、迅速に
且つ完全に水に可溶性であり、それ故心臓手術期開中静
脈内投与又は心臓注入のための注射５ｆ能な溶液のその
場での調製に適している。

下記実施例により本発明を説明するが、その・沌囲を定
めることを、ぼ図するものではない。

週１」ＬＬ 結晶性ホスホクレアチンナトリウムのＨａ温度計と滴Ｆ
′Ｑ斗を備えた適当な容器におい・〔、ホスホクレアチ
ン５００ｇと水Ｇ　５０　Ｈを完全な溶液が得られるま
で攪拌する。０．２：ｌクロンのミリポアフィルタによ
りこの溶液をろ過する。

ろ過した溶液を古び反応容器に仕込み、０−２゛Ｃに冷
却し、次いで、ｎｔ以てミリポアによりろ過した９５％
エタノール１５００ｎ＋１　を攪拌しながら泉９２時＋
１ｆｌでゆっくりと加える。

沈でんが徐々に形成されそしてすべてのエタノールが加
えられると結晶化は実質的に完了する。

更に１１時間攪拌を続け、次いで固体を真空中でフィル
タープレート上に集める。

集められた生成物を真空中で４０℃で乾燥する。

結晶性ホスホクレアチンナトリウムの１１１４７０ｇ。

前記のすべての工程は無菌条件下に行なわれ、従って非
経口的投与に適した無菌生成物が得られる。

叉ｌζ 非経口的に使用する処方を結晶性ホスホクレアチンナト
リウム５００ａ＋ｇを含有する１つのビン；無菌蒸留水
４ｍｌ　を含有する１つのアンプルからＩ８製する。

アンプルの内容物を使用時１こ抜き出しそしてホスホク
レアチンナトリウムを含有するビンに導入して活性成分
１２．５％の溶液を得る。

実施例３ 結晶性ホスホクレアチンナトリウム１ｇを有するビン及
び無菌蒸留水４ｍｌ　を４４ｒるアンプルを調製する。

使用する用意の整った最終溶液は２５％の）良度の活性
物質を有する。

に１」」− 結晶性ホスホクレアチンナトリウム１ｇを含有するビン
の内容物と無菌蒸留水１００ｍ１　を含有するアンプル
の内容物を混合すること１こよりホスホクレアチンナト
リウムの１％溶液を調製ｒる。

この溶液は静脈注射による投与に適している。

尺１匠Σ 実施例４と同じ方法によって静脈注射用の５％溶液を調
製する。

支１杜り 実施例４と同じ方法によって静脈注射用の１０％溶液を
調製する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、結晶形態のホスホクレアチンナトリウムを使用して
   製造された非経口用の組成物。 ２、結晶性ホスホクレアチンナトリウムを使用して製造
   されたものであることを特徴とする、注射可能な溶媒に
   溶解したホスホクレアチンナトリウム１−２５重量％を
   含有する非経口用の組成物。 ３、該溶媒が無菌の蒸留水であることを特徴とする特許
   請求の範囲第２項記載の組成物。 ４、ａ）結晶性ホスホクレアチンナトリウム０．５−１
   ｇを含有するビンと、 ｂ）無菌の蒸留水４ｍｌを含有するアンプルとから成り
   、該アンプルの内容物を使用時に該ビンの内容物に加え
   て非経口投与に適した無菌のホスホクレアチンナトリウ
   ム溶液を得ることを特徴とする非経口用の薬剤。 ５、ａ）結晶性ホスホクレアチンナトリウム０．５−１
   ０ｇを含有するビンと、 ｂ）無菌の蒸留水１００ｍｌを含有するアンプルとから
   成り、該アンプルの内容物を使用時に該ビンの内容物に
   加えて静脈注射に適した無菌のホスホクレアチンナトリ
   ウム溶液を得ることを特徴とする非経口用の薬剤。 ６、無菌の工程及び物質を使用して非経口投与に適した
   溶液を得ることを特徴とする特許請求の範囲第１乃至５
   項のいずれかに記載の薬剤。 ７、水１−２重量部にホスホクレアチンナトリウム１重
   量部を溶解し、得られた溶液を０℃乃至１０℃の温度に
   冷却し、該溶液１容量部あたり２−３容量部のエタノー
   ルを１−３時間の期間に該溶液に加え、そして沈でんし
   た結晶性ホスホクレアチンナトリウムを集めることを特
   徴とする、グリシンを含まない高用量の非経口用溶液の
   製造に適した結晶性ホスホクレアチンナトリウムを製造
   する方法。