JPS62153B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は新規なプソラレン誘導体に関する。更
に詳細には、本発明は、4′位の炭素原子上に有機
官能性置換基を有する４・5′・８−トリメチルプ
ソラレン（一般にトリオキサレンと呼ばれる）の
誘導体に関する。明確には、該新規なプソラレン
誘導体は、一般式 式中、Ｘはたとえばハロゲン化アルキル、アル
コール、エーテル、アミノアルキルなどのような
任意の所望とする置換基であることができる、 を有する。 本明細書において用いる「アルキル」なる語
は、たとえばメチル、エチル、プロピルなどのよ
うな７個までの炭素原子を有する低級アルキル基
を意味することが好ましく、メチル基が特に好適
である。アルコール置換基は１個もしくはそれ以
上の水酸基を有する脂肪族炭化水素、たとえばヒ
ドロキシ−低級アルキルであることが好ましい。
エーテル置換基は低級アルコキシ低級アルキル部
分であることが好ましい。 本発明のプソラレン誘導体の特定的な例は次の
ものである： 4′−クロロメチル−４・5′・８−トリメチル−
プソラレン； 4′−ヒドロキシメチル−４・5′・８−トリメチ
ル−プソラレン； 4′−メトキシメチル−４・5′・８−トリメチル
−プソラレン； 4′−フタルイミドメチル−４・5′−８−トリメ
チル−プソラレン； 4′−アミノメチル−４・5′・８−ナトリメチル
プソラレン塩酸塩。 他の局面において、本発明は、少なくとも１つ
の結合部位において共有結合された４・5′・８−
トリメチルプソラレンの4′−誘導体を有するデオ
キシ−リボ核酸またはリボ核酸に関する。 更に他の局面において、本発明は、核酸を４・
5′・８−トリメチル−プソラレンの4′−誘導体と
接触せしめることから成る。核酸の応答
（replication）の妨害方法に関する。 更に別の局面において、本発明は、ウイルスを
４・5′・８−トリメチルプソラレンの4′−誘導体
と接触せしめそしてそれらを放射エネルギーに暴
露することから成る、ウイルスの不活性化方法に
関する。 プソラレン類はフロクマリン（furocouma−
rin）族の線状異性体であり且つそれらはある種
の果実および種子、たとえばアンミ・マジユス
（Ammi majus）およびプソラレア・コリリホリ
ア（Psoralea corylifolia）中に天然に産する。こ
れらの果実および種子の抽出物は古い時代から、
白斑（vitiligo）の措置における皮膚感作剤
（dermal sensitizing agent）として用いられて
いる。プソラレン抽出物の局所的な塗布およびそ
の後の光による照射は、メラニン生産の刺激をも
たらし、かくして皮膚の「日焼け」効果を与え
る。 近年、プソラレン類は乾癬（psoriasis）の光
化学療法において使用されている。このような措
置においては、プソラレン類を経口的にまたは局
部的に患者に投与する。引続いて、皮膚を紫外線
に暴す。 分子生物学の研究および興味の増大に伴ない、
プソラレン類は、核酸と共有結合を形成するその
能力に関して研究されている。その平面的構造に
よつて、プソラレン類は、核酸の二重らせん状分
子構造中の塩基対の間に挿入する（interca−
late）ことができる。適当な波長の光で照射する
と、プソラレン類は、核酸ストランド（strand）
の一体の構成部分として存在するピリミジンヌク
レオチドと共に共有結合を形成することができ
る。核酸ストランドの二重らせん間において共有
結合したプソラレン架橋の生成は、生体内での核
酸の二次構造の研究において使用するための別の
手段を提供する。加うるに、プソラレン類は、ワ
クチンの製造のために、そしてまた可能性のある
化学療法剤として、ウイルスを不活性化するため
の手段を提供する。共有結合したプソラレン類
は、DNA応答の阻止剤として働らき、かくして
応答工程を遅くし、または停止させる能力を有す
る。共有結合は、第一にプソラレン類を核酸のら
せん中に挿入し、そして第二にそれらの部位を電
磁線照射に暴すことによつて、２段階の工程での
み生ぜしめることができる。このように、共有結
合は時間的および空間的の両方で制御することが
できるということは自明である。 架橋が正しい場所で正しい時間において存在す
るプソラレン分子に対してのみ生ずるというこ
と、すなわち、プソラレン分子が正しい位置に挿
入し且つ正確な時期に放射エネルギーがその部位
に到達しなければならないということもまた明ら
かであろう。適当な位置におけるプソラレン分子
の存在は、水溶液中におけるプソラレンの溶解度
およびプソラレンの核酸への非共有的結合に対す
る解離定数に依存する。すなわち、溶解度が高い
ほど、多数の分子が、取り巻いている液体媒質中
で、結合部位に近付くことができる。同様に、解
離定数が低いほど、多くの数のプソラレンが任意
の時点において可能な結合部位を占有することが
できる。プソラレンの核酸に対する非共有的な結
合に対する解離定数、Ｋ_D、は下式によつて定義
される： Ｋ_D＝（Ｐ）（Ｓ）／（ＰＳ） 上式において、（Ｐ）は遊離プソラレンの濃度
であり、（Ｓ）は核酸上の各塩基対が結合部位で
あると考える場合の非占有結合部位の濃度であ
り、そして（PS）はプソラレン結合部位の濃度
である。 新規なプソラレン誘導体は、公知のプソラレン
類と実質的に同様に、すなわち、たとえば白斑お
よび乾癬の治療における皮膚感作剤として；なら
びにウイルスの不活性化のための手段として使用
することができる。 上記の新規なプソラレン誘導体は、核酸へのモ
ノ−付加に関して、従来から公知のプソラレン類
よりも優れている。この意味における優位とは、
通常の結合部位の初期濃度および全プソラレン濃
度において、試剤の補充なしに、生ずる核酸上に
共有結合したプソラレンの濃度に関するものであ
る。 新規なプソラレン類は二つの利点を有してい
る。すなわち、これらは水中における改善された
溶解度を有し、そして／またはDNAおよび／ま
たはRNAからの低い解離定数を有している。 プソラレン類、4′−クロロメチル−４・5′・８
−トリメチルプソラレンおよび4′−Ｎ−フタルイ
ミド−メチル−４・5′・８−トリメチルプソラレ
ンは、本発明の残りのプソラレン類の製造におけ
る中間物としての用途を見出することができる。
これらのプソラレン類は、その他のプソラレン類
と同じ領域におけるいくつかの用途を有すること
ができるということにはいくつかの証拠がある。
4′−クロロメチルプソラレンの場合においては、
クロロメチル置換基は水溶液中で容易に加水分解
し、それ故、DNAまたはRNA結合に関する特異
的な活性を確かめることは困難である。何れにし
ても、両化合物の役割は以下の説明から明白とな
るであろう。 プソラレン類、4′−ヒドロキシメチル−４・
5′・８−トリメチルプソラレン；4′−メトキシメ
チル−４・5′・８−トリメチルプソラレン；およ
び4′−アミノメチル−４・5′・８−トリメチルプ
ソラレンはすべて、以下に記載するように、
DNAとの優れた反応性を示す。 都合の好いことに、本発明の全プソラレン類
は、４・5′・８−トリメチルプソラレン（トリオ
キサレン）から合成することができるけれども、
その他の公知の合成方法を用いることもできる。 本発明のプソラレン類は、ハロメチル化反応あ
るいはフリーデル−クラフツ反応において、トリ
オキサレンをハロゲン化アルキル、アルコール、
エーテルまたはアミノアルキルと反応させること
によつて製造することができる。たとえば、トリ
オキサレンをハロゲン化（好ましくは塩化）メチ
ルアルキルエーテルまたはメチルベンジルエーテ
ルと、室温において、トリオキサレン分子上の
4′−炭素原子に結合したハロメチル官能性置換基
を与えるのに充分な時間反応させ、然るのち、反
応混合物を冷却し、そして4′−置換トリオキサレ
ンを沈殿させることによつて混合物から4′−置換
トリオキサレンを分離する。本発明の方法の好適
な局面においては、ハロメチル化段階の前にまた
はその間に、トリオキサレンを濃酢酸中に溶解す
る。 しかしながら、トリオキサレン分子上の4′−炭
素原子に結合したハロメチル官能性置換基は、
4′−ハロメチルトリオキサレンを水または適当な
アルコールと共に還流することによつて、ハロメ
チル官能基上のハロゲンの代りにヒドロキシまた
はオキシ−アルキル置換基を与えることにより修
飾することができる。 ハロメチル官能基は、4′−ハロメチルトリオキ
サレンを、たとえばジメチルホルムアミドのよう
な有機溶剤の存在下に、フタルイミドのアルカリ
金属塩と共に加熱し、それによつて4′−フタルイ
ミドメチル置換したトリオキサレンを与え、そし
て所望に応じ、4′フタルイミドメチル−トリオキ
サレンを、ヒドラジン水化物およびアルコールと
共に還流し、然るのち還流混合物から4′−アミノ
メチルトリオキサレンを回収することによつても
また修飾することができる。 実施例 4′−クロロメチル−４・5′・８−トリメチルプ
ソラレン トリオキサレン（659mg）を、75mlの氷酢酸中
に、穏やかな加熱によつて溶解させたのち、室温
まで冷却した。５mlのクロロメチル−メチルエー
テルを加えそして混合物を24時間放置したのち、
再び５mlのエーテルを添加した。48時間後に、反
応フラスコを氷上に置き、12時間後に豊富な白色
沈殿を収集した。アセトニトリルからの再結晶
は、435mgの純粋な生成物を与えた。液から第
二の生成物を単離して、全体で499mgの生成物を
得た。生成物の分析は下記の結果を与えた： 融点215〜217℃；NMR（CDCl₃）δ2.6〜2.7
（9H、ｍ） 4.8（2H、ｓ） 6.3（1H、ｓ）、7.6
（1H、ｓ）；質量スペクトルｍ／ｅ（相対強度
（276）m⁺、48）、278（m⁺2、15）。 実施例 ４−ヒドロキシメチル−４・5′・８−トリメチ
ルプソラレン 先の合成からの4′−クロロメチル−４・5′・８
−トリメチルプソラレン（53mg、0.192ミリモ
ル）を、50mlの蒸留水中で７時間還流させたの
ち、氷上で２時間冷却した。生成物を過によつ
て分離および収集したのち、乾燥して、25mgの生
成物を得た。収率は50.5％であつた。生成物の分
析は次の結果を与えた： 融点221〜224℃；NMR（DMSO−d₆）δ2.5〜
2.7（9H、ｍ）、4.5〜4.7（2H、ｍ）、5.0〜5.2
（1H、bs）、6.3（1H、ｓ）、7.8（1H、ｓ）；質量
スペクトルｍ／ｅ（相対強度）258（M⁺、100）、
241（17）。 実施例 4′−メトキシメチル−４・5′・８−トリメチル
プソラレン 4′−クロロメチル−４・5′・８−トリメチルプ
ソラレン（78mg、0.28ミリモル）を、30mgのメタ
ノール中で５時間還流させた。蒸留による溶剤の
除去は、74mgの生成物を与えた。収率は97.2％で
あつた。生成物の分析は次の結果を示した： 融点171〜174℃；NMR（CDCl₃）δ2.4〜2.6
（9H、ｍ）、3.4（3H、ｓ）、4.6（2H、ｓ）6.3
（1H、ｓ）：質量スペクトルｍ／ｅ（相対強度）
272（M⁺、93）、241（100）。 実施例 4′−Ｎ−フタルイミドメチル−４・5′・８−ト
リメチルプソラレン 実施例において取得した4′−クロロメチル−
４・5′・８−トリメチルプソラレン（200mg、
0.73ミリモル）、カリウムフタルイミド（165mg、
0.89ミリモル、アセトン中で２時間環流すること
により精製）および20mlのＮ・N′−ジメチルホ
ルムアミドを、定常的な撹拌下に、100℃に６時
間加熱した。水浴中で加熱することにより溶剤を
蒸発させたのちに残留した黄色のペースト状物
を、クロロホルム中に溶解して、３回水洗した。 クロロホルム−プソラレンをMgSO₄上で乾燥
し、次いで過したのち、溶剤を蒸発させて、
222mg（79.3％）の生成物を得た。生成物の分析
は次の結果を示した：融点267〜274゜；NMR
（CDCl₃）δ2.5〜2.8（9H、ｍ）、5.0（2H、ｓ）、
6.3（1H、ｓ）、7.7〜7.8（7H、ｄ）、8.0（1H、
ｓ）、質量スペクトルｍ／ｅ（相対強度）387
（m⁺、80）、241（20）、240（75）。 実施例 4′−アミノメチル−４・5′・８−トリメチルプ
ソラレン塩酸塩 4′−Ｎ−フタルイミドメチル−４・5′・８−ト
リメチルプソラレン（、848mg、2.2ミリモ
ル）、ヒドラジン水化物（85％水溶液として0.5
ml）および95％エタノール（100ml）を４時間還
流させたのち、第二の0.5mlのヒドラジン水化物
溶液を添加した。還流を更に２時間行なつたのち
に、薄層クロマトグラフイー（ジエチルエーテ
ル）によつて分析したところ、出発物質は全く残
存していなかつた。エタノールを留去し、残渣を
200mlの0.1N NaOH中に取つたのち、50mlずつの
クロロホルムによつて３回抽出して、193mg（34
％）の精製アミンを得た。塩酸塩を調製するため
に、このアミンを100mlの1.2N HCl中に取り、そ
れを30mlずつのクロロホルムによつて３回抽出し
て、不純物を除いた。酸性の溶液の真空濃縮によ
つて得た粗塩酸塩を、175mlの無水エタノール中
に溶解したのち、等量のジエチルエーテルの添加
によつて沈殿させた。終夜の冷却（７℃）後に、
161mgの純生成物を収集した；融点260〜269℃；
NMR（CDCl₃）アミンとしてδ1.4〜1.6（2H、
ｓ）、2.6〜2.7（9H、ｍ）、4.1（2H、ｓ）、6.3
（1H、ｓ）、7.7（1H、ｓ）；質量スペクトルｍ／
ｅ（相対強度）257（M⁺、36）、240（100） 既に先に詳細に記載したものに関する付加物
は、同一の製造手順を用いて調製することができ
る。しかしながら、本発明の目的に対しては、か
かる付加物の重要な性質は、水溶液中における高
い溶解度、ならびにDNAおよび／またはRNAか
らの低い解離定数である。 溶解度および解離定数について調べるために
は、プソラレン化合物のトリチウム誘導体を調製
することがもつとも便利である。それにより公知
の放射線計数方法を用いて、溶解中または核酸中
のプソラレンの存在を監視することができる。 トリチウムで標識付けしたプソラレン類は、ト
リチウムを含有するトリオキサレンから調製す
る。更に詳細には、トリチウム化した水を通常の
トリオキサレンと共に還流させることによつて、
トリオキサレン上の水素のトリチウムによる交換
を行なわせる。トリチウム化したトリオキサレン
を回収して、前記の実施例に従がう本発明のプソ
ラレン類の調製に使用する。 次の実施例はトリチウム化トリオキサレンの調
製のための一つの特定方法を示す。 実施例 トリチウム化−４・5′・８−トリメチルプソラ
レン ４・5′・８−トリメチルプソラレン（1153
mg）、T₂O（水溶液、４ml中に100キユリー）、ジ
オキサン（67.5ml）および発煙H₂SO₄（30％
SO₃、7.5ml）を定常的な撹拌と共に２時間還流
させたのち、室温まで冷却した。125mlの氷水を
加え、そして混合物を氷上で１時間冷却した。
過によつて沈殿を集め、風乾して、900mg（78
％）の粗生成物を得た。質量スペクトル分析は
ｍ／ｅ（相対強度）228（m⁺、100）を示した。
少量の物質（30mg）を75mlの100％エタノール中
に溶解し且つ２ｇの活性炭を加えた。混合物を10
分間還流したのち、直ちに細いガラスフイルター
を通して過（熱時）して、活性炭を除いた。
液を蒸発させて、残渣をメタノール／水（約90：
10）から再結晶した。生成物の薄層クロマトグラ
フイー分析（CHCl₃／CH₃OH 98：２）は、トリ
メチルプソラレン中の計数の95％よりも多くを認
めた。この化合物の比活性を、トルエン−全粉
（omniflour）中で既知の濃度の無水エタノール溶
液の部分試料の計数によつて測定した。比活性は
6.7×10⁵cpmであることが認められた。 多くの本発明のプソラレン類の実施例〜に
おけると同様にして製造して、トリチウム化生成
物を得た。 次いでトリチウム化したプソラレン類を用い
て、それらの核酸との結合効率を調べた。これら
の研究は、溶解度およびDNAとRNAの両者から
の解離定数についてのデータを確かめることを目
的とした。その上、DNAおよびRNAと共有結合
するプソラレン類の能力をも調べた。 これらの研究およびその結果は次の如くであつ
た： DNAおよびRNAからの解離定数を確立するた
めに、非共有結合を確かめた。非共有結合は核酸
のらせん内でのプソラレンの存在を決定する。そ
の存在は、すべての放射エネルギーの不在下に測
定される。前記のように、放射エネルギーは、核
酸塩基対とのプソラレンの共有結合反応を活性化
するために必要である。 非共有結合を定量するために、子牛の胸腺
DNA〔シグマ・タイプ（Sigma Type）を
0.01Mトリス−0.001MEDTA PH8.5緩衝液中
に、25μｇ／mlの濃度で溶解した。所定量のこの
DNA溶液を、透析袋（NaHCO₃中で煮沸するこ
とにより前処理した）中に入れ、各種のトリチウ
ム化誘導体を、半分の場合に対しては袋の内側に
入れ、他の半分の場合には袋の外側に加えた。プ
ソラレン分子の塩基対に対するモル比は１：25と
した。袋を18mlの緩衝液を満した小瓶中に入れ
て、48〜60時間振盪機にかけた。その後に、袋の
内側および外側の両方で放射能を測定した。この
情報および各誘導体の比活性から、DNAに非共
有的に結合した薬品の量を定量した。キイロシヨ
ウジヨウバエ（Drososhila melanogaster）のリ
ボソーム（riboso−mal）RNAに対するこれらの
誘導体の結合を、同様にして、正確に測定した。 平衡透析測定の結果を次の第表に示す。解離
定数の単位はモル／リツトルである。溶解度およ
びモル吸光率（ε）は純水中で、平衡定数は
0.01Mトリス中で求めた。

【表】 第表中の２〜７欄中の８−メトキシプソラレ
ンに対するデータは、文献中にある結果から計算
した。その他の全データは本発明者によつて求め
られたものである。 ８−メトキシプソラレンおよび４・5′・８−ト
リメチルプソラレンは、本発明のプソラレン類と
の比較として第表中に含めた。 プソラレン類のDNAおよびRNAに対する共有
結合性を調べた。共有結合を達成するためには、
結合部位に放射エネルギー（光）を供給すること
が必要である。これらの研究は次のようにして行
なつた： 共有結合の研究において用いたDNAおよび
RNAは、先に記載したものである。各核酸の試
料を、0.01Mトリス−0.001M EDTA緩衝液中
で、25μｇ／mlの濃度で調製した。放射性プソラ
レン誘導体を、３塩基対ごとに対して１のプソラ
レンの比率で加えた。照射は下記の２つの装置の
中の一つを用いて行なつた。 低強度の照射は、400ワツトのジエネラル・エ
レクトリツク（General Electric）水銀灯
（H400A33−１／T16）を備えた改変スライド映
写器を用いて行なつた。アークの像を硝酸第一コ
バルト溶液を囲んだ同一セル上に焦点を結ばせ
た。硝酸第一コバルト溶液は高純度照射において
も使用した。この装置中で試料に与えられる光の
強度は４〜６ｍｗ／cm²であつた。高強度照射は、
4.0cmの中心間の距離で二重壁試料室の両側に取
付けた同一の２本の400ワツトジエネラル・エレ
クトリツク水銀灯を有する装置中で行なつた。試
料室は、硝酸第一コバルトの温度制御した溶液
（40％重量／重量）の連続的な循環によつて10℃
に冷却した。コバルト溶液は、365nｍの光の最
大透過率を許す紫外線フイルターおよび約340〜
380nｍの窓として働らく。内部試料室の表面に
おける光の強度は約100ｍｗ／cm²であつた。核酸
−プソラレン混合物を内室中に入れ、そこで照虫
の間中、混合物を連続的に撹拌した。各溶液の部
分試料（誘導体プラス核酸）を、20、40および60
分に採取した。次いで、各部分試料をクロロホル
ム／イソ−アミルアルコール（24：１）によつて
２回抽出して未反応のプソラレンを除いたのち、
0.01Mトリス、0.01M EDTA緩衝液に対する徹底
的な透析を行なつた。クロロホルム−イソアミル
アルコールによる未結合プソラレンの効果的な抽
出は、水相が少なくとも0.15MのNaClを含有する
ことを必要とした。最後に、核酸−プソラレン混
合物の光学密度を求め且つ放射能を測定すること
によつて、DNAまたはRNAに共有結合した誘導
体の量を求めた。時間を置いて試料を採取するこ
とによつて、共有結合の速度論の評価もまた可能
であつた。 下記第表はDNAに関するこれらの研究の結
果を示す。

【表】 第表に示したデータから、4′−アミノメチル
トリオキサレンはトリオキサレンよりも遥かに速
くDNAと反応すること、また一方、トリオキサ
レンは4′−ヒドロキシメチルトリオキサレンより
も大きな光化学結合の初期速度を有していること
が明らかである。90分の照射時間において、塩基
対１モル当りに結合したプソラレンのモル数は、
アミノメチル化合物に対しては0.18であるのに対
して、トリオキサレンおよびヒドロキシメチル化
合物に対しては、それぞれ、0.09および0.06であ
る。また第表は90分の照射後に、溶液中の4′−
アミノメチルトリオキサレンの分子の半分以上が
DNAに共有するのに対して、4′−ヒドロキシメ
チルトリオキサレンの場合は80％よりも多くが溶
液中に遊離のまま残留することをも示している。
これらの相違は、異なるプソラレン類の分子構造
が、それらの溶解度、光化学的反応性、およびそ
れらの化合物自体の光分解に対して与える影響に
よつて生ずるものと考えることがもつとも妥当で
あろう。 下記の第表はDNAへのプソラレンの共有結
合に対する高強度照射の結果を示す：

【表】

【表】 第表はプソラレンとRNAとの共有結合の達
成における高強度照射の結果を示す：

【表】 第、、および表中に示したデータか
ら、次の結論を引き出すことができる： DNAへの平衡結合に対する解離定数を表わす
第表は、4′−アミノメチル−４・5′・８−トリ
メチルプソラレンがトリオキサレンよりも約８倍
も強くDNAに結合することを示している。トリ
オキサレンの結合は4′−ヒドロキシメチルプソラ
レンよりも５倍強く、また4′−メトキシトリオキ
サレンよりも２倍も強い。しかしながら、これら
の両新規誘導体は、なお、メトキサレンおよびそ
の他の一般的に市販品を入手することができるプ
ソラレンよりも10倍も強くDNAに対して結合す
る。 更に、その後の研究は、プソラレン類の相対的
な溶解度が、4′−アミノメチルトリオキサレン、
4′−ヒドロキシメチルトリオキサレン、4′−メト
キシメチルトリオキサレン、メトキサレン、およ
びトリオキサレンの順序で約10000：68：17：
80：１であることを示している。モル溶解度を解
離定数で除すことによつて、それぞれのプソラレ
ンで飽和した溶液中での平衡において、DNA結
合部位を、トリオキサレンまたはメトキサレンの
何れによつて飽和させることも不可能であるとい
うことがわかる。最良の場合も、20の塩基対当り
約１のプソラレンである。第１表の第５欄は、適
当なプソラレンで飽和させたDNA溶液中の結合
部位の遊離部位に対する比を示している。4′−ヒ
ドロキシメチルトリオキサレンおよび4′−メトキ
シメチルトリオキサレンは３塩基対当りに１つの
プソラレンが結合する〔〔（PS）／（Ｓ）＝0.5〕
ことにより、DNA部位の飽和がほとんど達成さ
れることを予測できるのに対して、4′−、アミノ
エチルトリオキサレンは、この部位飽和の状態の
到達において10⁴倍も有効であるものと計算する
ことができる（4′−アミノエチルトリオキサレン
は4′−ヒドロキシメチルトリオキサレンよりも
150倍も多く溶解し且つ約100倍も強く結合す
る）。 本発明のプソラレン類は、RNAウイルスの不
活性化においても有用である。この点において、
本発明のプソラレン類は、他の公知のプソラレン
類の何れよりも、著るしく高い活性を有してい
る。高い投与率、たとえば30μｇ／ml、におい
て、4′−ヒドロキシメチル−４・5′・８−トリメ
チルプソラレン、4′−メトキシメチル−４・5′・
８−トリメチルプソラレン、および4′−アミノメ
チル−４・5′・８−トリメチルプソラレンは何れ
も、RNA動物ウイルス、小水疱性口内炎ウイル
ス（vesicular stomatitis virus）の不活性化に
際し、一搬に市販品を入手することができる４・
5′・８−トリメチルプソラレンよりも、ほとんど
1000倍も効果的である。 この卓越した有効性を第１図に示すが、この図
中で、曲線は小水疱性口炎ウイルスの斑形成
（plaque forming）単位の生存率を、各記載プソ
ラレン類の存在下における長波長紫外線照射時間
の関数として示している。指示した投与率（約20
〜30μｇ／ml）において、本発明のプソラレン類
のトリオキサレンに対する著るしい優越性は明白
である。本発明の３種のプソラレン類は何れも、
このような高投与量においては本質的に同等であ
る。これらの高投与量におけるそれらの同等性
は、前記の第１表中に示した、それらの解離定数
Ｋ_Dにより、且つ既に言及したそれらの高い水溶
性（4′−メトキシメチルトリオキサレンの場合に
おいては、溶液は過飽和である）により、本質的
に予想できることである。指示した投与率におい
て、RNAは非共有的に結合した挿入プソラレン
類によつてほとんど飽和している。かくして、３
種のプソラレン類はすべて、活性において同等で
あると思われる。しかしながら、トリオキサレン
は0.6μｇ／mlの程度まで溶解するのみであり、
それ故、その濃度を10μｇ／ml（０点）から30μ
ｇ／ml（各点）まで増大させても、ウイルスを不
活性化させるべきその能力に対して何の効果もな
い。 第２図は、第１図のものと同様な曲線を示して
いるが、但しこの場合は、遥かに低いプソラレン
類の濃度、すなわち、１〜３μｇ／mlにより得た
結果に基づいている。第２図もまた、本発明のも
のおよび市販のプソラレン、トリオキサレンを含
めたその他すべてのプソラレン類に対する4′−ア
ミノメチル−４・5′・８−トリメチルプソラレン
の疑いの余地のない優越性を示している。4′−ア
ミノメチル誘導体のこの優越性は、同じく第表
中に示した解離定数、Ｋ_D、を参照すれば明らか
なように、核酸に対するそのより強い結合性に基
づいている。 第１および第２の両図に示したデータは、以下
の手順に用いて得たものである： ５×10⁴のウイルス斑形成単位を含有する500μ
の隣酸塩緩衝塩水を、直径3.5cmのペトリ皿中
に入れて、プソラレンの存在または不在下におい
て、ピー・ダブリユー・アレンカンパニー、ロン
ドン（P.W.Allen Co.、London）のA405型長波
長紫外線灯を用いて照射した。 いくつかの時間間隔において、50μの部分試
料を皿から採取して、ウイルス斑形成単位の量を
適定した。部分試料の希釈物は調節可能なピペツ
トを用いて調製し、それをプラスチツク盆中で生
長させた鶏の原発性線維芽細胞（primary
chicken fibroblast）の単一層上にのせた。ウイ
ルスの吸着後に、倍養物を20％の子牛の血清およ
び３％のメチルセルロースを含有する培養基でお
おつた。35℃において２〜４日間培養したのち、
ニユトラル・レツドを加えた。ウイルスは小水疱
性口内炎インジアナ菌株（Vesicular stomatitis
vurus Indiana strain）であつた。

【図面の簡単な説明】

第１図は小水疱性口内炎ウイルスの比較的高濃
度の各種プソラレン類の存在における長波長紫外
線の照射後の生存率を、照射時間の関数として表
わした曲線を示す。この図中で、黒丸（●）＝光
のみ；白丸（〇）＝30μｇ／mlのトリオキサレ
ン；黒四角（■）＝30μｇ／mlの4′−ヒドロキシ
メチルトルオキサレン；白三角（△）＝30μｇ／
mlの4′−トリオキサレン；黒三角（▲）＝20μ
ｇ／mlの4′−アミノメチルトリオキサレン。第２
図は著るしく低い濃度のプソラレン類の存在下に
おける第１図と同様な曲線を示す。この図中で、
黒丸（●）＝光のみ；白丸（〇）＝10μｇ／mlのト
リオキサレン；黒四角（■）＝１μｇ／mlの4′−
ヒドロキシメチルトリオキサレン；白三角（△）
＝３μｇ／mlの4′−メトキシメチルトリオキサレ
ン、黒三角（▲）＝２μｇ／mlの4′−アミノメチ
ルトリオキサレン。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ １・4′−炭素原子上に、ハロゲン化アルキ
   ル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、
   アミノアルキル及びフタルイミドアルキルから選
   ばれる置換基を有することを特徴とする４・5′・
   ８−トリメチルプソラレンのプソラレン誘導体。 ２ 化合物4′−クロロメチル−４・5′・８−トリ
   メチルプソラレンである特許請求の範囲第１項記
   載の化合物。 ３ 化合物4′−ヒドロキシメチル−４・5′・８−
   トリメチルプソラレンである特許請求の範囲第１
   項記載の化合物。 ４ 化合物4′−メトキシメチル−４・5′・８−ト
   リメチルプソラレンである特許請求の範囲第１項
   記載の化合物。 ５ 化合物4′−Ｎ−フタルイミドメチル−４・
   5′・８−トリメチルプソラレンである特許請求の
   範囲第１項記載の化合物。 ６ 化合物4′−アミノメチル−４・5′・８−トリ
   メチルプソラレンである特許請求の範囲第１項記
   載の化合物。