JPS62187251A - アミノ糖系物質分析用高速液体クロマトグラフ装置 - Google Patents
アミノ糖系物質分析用高速液体クロマトグラフ装置Info
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- JPS62187251A JPS62187251A JP2996986A JP2996986A JPS62187251A JP S62187251 A JPS62187251 A JP S62187251A JP 2996986 A JP2996986 A JP 2996986A JP 2996986 A JP2996986 A JP 2996986A JP S62187251 A JPS62187251 A JP S62187251A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
イ、産業上の利用分野
本発明は、アミノ塘を含む物質を高速液体クロマトグラ
ブにより分析するための試料の前処埋枝′＆１こｎｆる
− 口、従来技術 例えば、アストロマイシンやトブラマイシン等のアミン
塘糸抗生物質の分析は、通常逆相分離カラムを備えた高
速クロマトグラフ装置を用いて目的成分を分離後、○−
フクルアルデヒド試薬と反応させて発蛍光を検出するこ
とにより行なわれでいる。
ブにより分析するための試料の前処埋枝′＆１こｎｆる
− 口、従来技術 例えば、アストロマイシンやトブラマイシン等のアミン
塘糸抗生物質の分析は、通常逆相分離カラムを備えた高
速クロマトグラフ装置を用いて目的成分を分離後、○−
フクルアルデヒド試薬と反応させて発蛍光を検出するこ
とにより行なわれでいる。
ところで、このような抗生物質の分析においては、通常
、血液や飼料等のアミノＭを含むものを分析対象とする
ため、サンプル中のアミノ酸までもが０−フタルアルデ
ヒド試薬と発蛍光反応を生じて分析に妨害を与える。こ
のため、吸着剤を充填したミニカラムを使用して目的成
分だけを抽出した俊、これを高速液体クロマトグラフ装
置に注入するという手法が採用されでいた。
、血液や飼料等のアミノＭを含むものを分析対象とする
ため、サンプル中のアミノ酸までもが０−フタルアルデ
ヒド試薬と発蛍光反応を生じて分析に妨害を与える。こ
のため、吸着剤を充填したミニカラムを使用して目的成
分だけを抽出した俊、これを高速液体クロマトグラフ装
置に注入するという手法が採用されでいた。
しかしながら、この前処理に使用するミニカラムは、通
常再生不可能な使い捨てのものであるため、分析管路系
から独立させた、いわゆるオフラインで操作する必要が
ある。このため、分析作業が煩雑となるばかりでなく、
目的成分の回収率にバラつきか主じて分析結果に大きな
誤差を含むという問題かあった。
常再生不可能な使い捨てのものであるため、分析管路系
から独立させた、いわゆるオフラインで操作する必要が
ある。このため、分析作業が煩雑となるばかりでなく、
目的成分の回収率にバラつきか主じて分析結果に大きな
誤差を含むという問題かあった。
ハ、目的
本発明はこのような問題に鑑みてなされたものであって
、その目的とするところは、サンプルの注入から目的成
分の分離までの工程を連続的に実行させて、高い分析精
度を得ることができる新規な高速液体クロマトグラフ装
Ｍを提供することにある。
、その目的とするところは、サンプルの注入から目的成
分の分離までの工程を連続的に実行させて、高い分析精
度を得ることができる新規な高速液体クロマトグラフ装
Ｍを提供することにある。
二９発明の概要
すなわち、本発明が特徴とするところは、カルボキシル
基を化学結合させた弱陽イオン交換樹脂を充填したたカ
ラムを前処理カラムに使用し、これを流路切換手段を介
して分析カラムに接続するとともに、酢酸ナトリウムを
主成分とする溶液により溶出、洗浄するようにした点に
ある。
基を化学結合させた弱陽イオン交換樹脂を充填したたカ
ラムを前処理カラムに使用し、これを流路切換手段を介
して分析カラムに接続するとともに、酢酸ナトリウムを
主成分とする溶液により溶出、洗浄するようにした点に
ある。
ホ、契施例
そこで、以下に本発明の詳細を図示した実施例に基づい
て説明する。
て説明する。
第１図は、本発明の一実施例を示すものであっで、図中
符号］は、前処理用カラムで、カルボキシル基を化学結
合してなる弱陽イオン交換樹脂１ａを容器に充填して構
成され、両端が高圧流路切換バルブ２に接続されて試料
注入口３、分析用カラム４、排出口５、及び後述する分
析用溶出液槽に選択的に接続可能とされている。６は、
前処理用溶出液槽で、酢酸ナトリウムの水溶液か収容さ
れ、また７は洗浄液槽で酢酸ナトリウムと水酸化ナトリ
ウムの水溶液が収容されており、これらは切換弁８を介
して送液ポンプ９に選択的に接続されて試料注入口３の
他端に接続している。１０は、前述の分析用溶出液槽で
、リン酸−ナトリウム（ＮａＨ２ＰＯ４）と過塩素酸ナ
トリウム（ＮａＣβ０４）の水溶液を収容して、送液ポ
ンプ１１を経由して高圧流路切換バルブ２に接続しいて
る。１２は、０−フタルアルデヒドを収容した反応液槽
で、分析用カラム４の排出口に接続した反応管］３の流
入側に送液ポンプ１４を介しで接続している。なお、図
中符号１５は、反応管１３の排出口側に接続した蛍光検
出器を示す。
符号］は、前処理用カラムで、カルボキシル基を化学結
合してなる弱陽イオン交換樹脂１ａを容器に充填して構
成され、両端が高圧流路切換バルブ２に接続されて試料
注入口３、分析用カラム４、排出口５、及び後述する分
析用溶出液槽に選択的に接続可能とされている。６は、
前処理用溶出液槽で、酢酸ナトリウムの水溶液か収容さ
れ、また７は洗浄液槽で酢酸ナトリウムと水酸化ナトリ
ウムの水溶液が収容されており、これらは切換弁８を介
して送液ポンプ９に選択的に接続されて試料注入口３の
他端に接続している。１０は、前述の分析用溶出液槽で
、リン酸−ナトリウム（ＮａＨ２ＰＯ４）と過塩素酸ナ
トリウム（ＮａＣβ０４）の水溶液を収容して、送液ポ
ンプ１１を経由して高圧流路切換バルブ２に接続しいて
る。１２は、０−フタルアルデヒドを収容した反応液槽
で、分析用カラム４の排出口に接続した反応管］３の流
入側に送液ポンプ１４を介しで接続している。なお、図
中符号１５は、反応管１３の排出口側に接続した蛍光検
出器を示す。
この実施例（こおいて、各切換バルブ２．８を図中点線
（こより示した流路、つまり前処理用溶出液槽６→試料
注入ロ３→前処理カラム１→排出口５に至る流路を形成
して、前処理カラム１に前処理用溶出液６を流した状態
で試料注入口３にサンプルを注入すると、目的成分を構
成しているアミノ糖だけが前処理カラム１内のイオン交
換樹脂１ａに選択的に吸着され、他方妨害成分となるア
ミノ酸やタンパク等は溶出液とともに排出される。この
ようにして目的成分だけを保持した時点で、高圧流路切
換バルブ２を切り換えて図中実線により示した分析用溶
出液槽１１→前処理力ラム１→分析用カラム１に至る流
路を形成すると、分析用溶出液１０は、前処理カラム１
に保持されている目的成分だけを溶出させて分析用カラ
ム４に搬送する。目的成分は、分析用カラム４の充填剤
と分析用溶出液の作用により成分毎に単離され、反応液
により発蛍光して検出器１５により検出される。
（こより示した流路、つまり前処理用溶出液槽６→試料
注入ロ３→前処理カラム１→排出口５に至る流路を形成
して、前処理カラム１に前処理用溶出液６を流した状態
で試料注入口３にサンプルを注入すると、目的成分を構
成しているアミノ糖だけが前処理カラム１内のイオン交
換樹脂１ａに選択的に吸着され、他方妨害成分となるア
ミノ酸やタンパク等は溶出液とともに排出される。この
ようにして目的成分だけを保持した時点で、高圧流路切
換バルブ２を切り換えて図中実線により示した分析用溶
出液槽１１→前処理力ラム１→分析用カラム１に至る流
路を形成すると、分析用溶出液１０は、前処理カラム１
に保持されている目的成分だけを溶出させて分析用カラ
ム４に搬送する。目的成分は、分析用カラム４の充填剤
と分析用溶出液の作用により成分毎に単離され、反応液
により発蛍光して検出器１５により検出される。
１つのサンプルについての分析が終了した時点、もしく
は前処理カラム１から目的成分の溶出か終了した時点で
、流路切換バルブ２を図中実線、バルブ８を点線で示す
ように操作して洗浄液槽７→前処理用力ラム１→排出口
５１こ至る流路を形成する。これにより、前処理用カラ
ム１は、洗浄液の供給を受けて弱陽イオン交換樹脂１ａ
に残留している成分を排出して再び使用可能な状態に再
生される。
は前処理カラム１から目的成分の溶出か終了した時点で
、流路切換バルブ２を図中実線、バルブ８を点線で示す
ように操作して洗浄液槽７→前処理用力ラム１→排出口
５１こ至る流路を形成する。これにより、前処理用カラ
ム１は、洗浄液の供給を受けて弱陽イオン交換樹脂１ａ
に残留している成分を排出して再び使用可能な状態に再
生される。
［実施例］
前処理用溶出液として１０ミリモルの酢酸ナトリウム溶
液を用いて飼料を分析したところ、第２図（イ）に示し
たように飼料に含まれているハイグロマイシンを何等か
の妨害を受けることなく単離させて分析することができ
、また同図（ロ）に示した標準試料の分析結果と何ら異
るところがなかった０分析終了後、４００ミリモルの酢
酸ナトリウム溶液と１０ミリモルの水酸化ナトリウムの
混合液を洗浄液に使用して前処理カラムを洗浄、再生し
た。
液を用いて飼料を分析したところ、第２図（イ）に示し
たように飼料に含まれているハイグロマイシンを何等か
の妨害を受けることなく単離させて分析することができ
、また同図（ロ）に示した標準試料の分析結果と何ら異
るところがなかった０分析終了後、４００ミリモルの酢
酸ナトリウム溶液と１０ミリモルの水酸化ナトリウムの
混合液を洗浄液に使用して前処理カラムを洗浄、再生し
た。
次に、この再生した前処理カラムを用いて血清をサンプ
ルにして前述と同一の条件により分析したところ、第３
図（イ）に示したように標準のトブラマイシンの分析結
果（同図口）と何ら遜色なく検出することができた。ま
た、トブラマイシンの濃度を変化させた血清をサンプル
にして検出ピークの高さを調べたところ、第４図に示し
たようにトブラマイシンの濃度とピークの高さが極めて
高い直線性でもっで相関することが解った。
ルにして前述と同一の条件により分析したところ、第３
図（イ）に示したように標準のトブラマイシンの分析結
果（同図口）と何ら遜色なく検出することができた。ま
た、トブラマイシンの濃度を変化させた血清をサンプル
にして検出ピークの高さを調べたところ、第４図に示し
たようにトブラマイシンの濃度とピークの高さが極めて
高い直線性でもっで相関することが解った。
ざらに、前処理用溶出液の酢酸ナトリウムを１ミリモル
から１００ミリモルの範囲で変化させ、また洗浄液の酢
酸ナトリウムを５０ミリモルから１モルの範囲で、水酸
化ナトリウムを１ミリモルから１００ミリモルの範囲で
変化させたところ、不都合を生じることなく分析するこ
とができた。
から１００ミリモルの範囲で変化させ、また洗浄液の酢
酸ナトリウムを５０ミリモルから１モルの範囲で、水酸
化ナトリウムを１ミリモルから１００ミリモルの範囲で
変化させたところ、不都合を生じることなく分析するこ
とができた。
なお、この実施例においては、トブラマイシン、ハイグ
ロマイシンを検出対象としで説明したが、アストロマイ
シン等の他のアミノ糖系抗生物質やこれに類似するアミ
ノ糖やアミンの分析にも適用することができる。
ロマイシンを検出対象としで説明したが、アストロマイ
シン等の他のアミノ糖系抗生物質やこれに類似するアミ
ノ糖やアミンの分析にも適用することができる。
へ、効果
以上、説明したように本発明によれば、カルボキシル基
を化学結合した弱陽イオン交換樹上を充填してなる前処
理カラムの一端に試料注入口を介して酢酸ナトリウムを
主成分とする溶出液と洗浄液を選択的に供給する送液機
構を、また他端に分析用カラム％ ｆｆｉ続したので、
前処理カラムの再生を可能ならしめ、その結果、サンプ
ルを注入するたけて妨害成分の除去から目的成分の分離
までを連続的に処理することができて、前処理工程での
目的成分の収率を安定化させて分析精度の向上を図るこ
とができる。
を化学結合した弱陽イオン交換樹上を充填してなる前処
理カラムの一端に試料注入口を介して酢酸ナトリウムを
主成分とする溶出液と洗浄液を選択的に供給する送液機
構を、また他端に分析用カラム％ ｆｆｉ続したので、
前処理カラムの再生を可能ならしめ、その結果、サンプ
ルを注入するたけて妨害成分の除去から目的成分の分離
までを連続的に処理することができて、前処理工程での
目的成分の収率を安定化させて分析精度の向上を図るこ
とができる。
第１図は本発明の一実施例を示す装置の構成図、第２．
３図はそれぞれ同上装置による分析結果の一例を示すも
のであって、各図の（イ）はサンプルの、（ロ）は標準
サンプルのクロマトグラム図、及び第４図は同上装置に
よる検量線図を示すものである。 １・・・・前処理用カラム １ａ・・・・弱陽イオン交換樹脂 ３・・・・試料注入口 ４・・・・分析用カラム６
・・・・前処理用溶出液槽 ７・・・・洗浄液槽 １１・・・・分析用溶出液槽
３図はそれぞれ同上装置による分析結果の一例を示すも
のであって、各図の（イ）はサンプルの、（ロ）は標準
サンプルのクロマトグラム図、及び第４図は同上装置に
よる検量線図を示すものである。 １・・・・前処理用カラム １ａ・・・・弱陽イオン交換樹脂 ３・・・・試料注入口 ４・・・・分析用カラム６
・・・・前処理用溶出液槽 ７・・・・洗浄液槽 １１・・・・分析用溶出液槽
Claims (1)
- カルボキシル基を化学結合した弱陽イオン交換樹脂を充
填してなる前処理用カラムと、これの一端から試料注入
口を介して溶出液となる酢酸ナトリウム溶液、及び洗浄
液となる水酸化ナトリウムと酢酸ナトリウムの混合溶液
を選択的に供給する送液機構と、前記カラムの一端に接
続されて直接、分析用溶出液を供給する送液機構と、前
記カラムの他端と排出口に選択的に接続する逆相分離カ
ラムを偏えてなるアミノ糖系物質分析用高速液体クロマ
トグラフ装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2996986A JP2671289B2 (ja) | 1986-02-13 | 1986-02-13 | アミノ糖系物質分析用高速液体クロマトグラフ装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2996986A JP2671289B2 (ja) | 1986-02-13 | 1986-02-13 | アミノ糖系物質分析用高速液体クロマトグラフ装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62187251A true JPS62187251A (ja) | 1987-08-15 |
| JP2671289B2 JP2671289B2 (ja) | 1997-10-29 |
Family
ID=12290792
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2996986A Expired - Fee Related JP2671289B2 (ja) | 1986-02-13 | 1986-02-13 | アミノ糖系物質分析用高速液体クロマトグラフ装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2671289B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108318613A (zh) * | 2018-01-11 | 2018-07-24 | 四川国测检测技术有限公司 | 一种环境样品中抗生素的检测方法 |
-
1986
- 1986-02-13 JP JP2996986A patent/JP2671289B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108318613A (zh) * | 2018-01-11 | 2018-07-24 | 四川国测检测技术有限公司 | 一种环境样品中抗生素的检测方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2671289B2 (ja) | 1997-10-29 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |