JPS6219528A - 制癌剤 - Google Patents
制癌剤Info
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- JPS6219528A JPS6219528A JP60156517A JP15651785A JPS6219528A JP S6219528 A JPS6219528 A JP S6219528A JP 60156517 A JP60156517 A JP 60156517A JP 15651785 A JP15651785 A JP 15651785A JP S6219528 A JPS6219528 A JP S6219528A
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/405—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from algae
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/12—Unicellular algae; Culture media therefor
- C12N1/125—Unicellular algae isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/89—Algae ; Processes using algae
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の技術分野〕
本発明は、緑色微細藻類クロレラから抽出精製された制
癌剤に関する。
癌剤に関する。
従来の糖蛋白系抗脛＾剤は、全て宿主介在性（免疫賦活
作用）の機能を有している。このため、 ■ｎｖｉｖｏ
では抗Ａｔ１ｌＪｙ性を示すが、ＩＨｖｉ ｔｒ。
作用）の機能を有している。このため、 ■ｎｖｉｖｏ
では抗Ａｔ１ｌＪｙ性を示すが、ＩＨｖｉ ｔｒ。
では直接的殺細胞作用を示さ表い。
本発明は、緑色微細藻類から抽出され、優れ九制竜作用
を有する制電剤を提供しようとするものである。
を有する制電剤を提供しようとするものである。
本出願人は、緑色微細藻類クロレラから抽出・された特
定の分子ｆｆ１（１２１０００）、等電点（ｐＨ８，６
）、糖蛋白比（１：１）、蛋白のへリックス含ｉ￥（１
９％）を有する糖蛋白成分が優れた制蟲作用を発揮する
ことから、この糖蛋白成分を制電剤として既忙出願した
。
定の分子ｆｆ１（１２１０００）、等電点（ｐＨ８，６
）、糖蛋白比（１：１）、蛋白のへリックス含ｉ￥（１
９％）を有する糖蛋白成分が優れた制蟲作用を発揮する
ことから、この糖蛋白成分を制電剤として既忙出願した
。
本発明者らは、上述した糖蛋白成分系統について更に研
究した結果、同糖蛋白成分よシ一層優れ九制豪作用を示
す制電剤を見い出した。
究した結果、同糖蛋白成分よシ一層優れ九制豪作用を示
す制電剤を見い出した。
即ち１本発明は緑色微細藻類クロレラから分離される分
子ｆ１４５０００の糖蛋白質であって蛋白部分はα−へ
リックスとランダムコイルよシ構成され、糖部分はβ−
多糖類より構成され、かつ円二色スペクトルの２７５ｎ
ｍに正の極値を有する制電剤である。
子ｆ１４５０００の糖蛋白質であって蛋白部分はα−へ
リックスとランダムコイルよシ構成され、糖部分はβ−
多糖類より構成され、かつ円二色スペクトルの２７５ｎ
ｍに正の極値を有する制電剤である。
以下、本発明の制徳剤をクロレラから分離する方法の一
実施例を説明する。
実施例を説明する。
まず、炭酸ガス、酢酸、グルコース等を炭素源として培
養されたクロレラ生ケーキ、又はこの生ケーキを噴霧乾
燥もしくは凍結乾燥して得たクロレラ藻体（粉末）を原
料として用意した。
養されたクロレラ生ケーキ、又はこの生ケーキを噴霧乾
燥もしくは凍結乾燥して得たクロレラ藻体（粉末）を原
料として用意した。
次いで、ｐ記りロレラ藻体５００ｉＰ（クロレラ生ケー
キの場合は５りを水５！に分散させ。
キの場合は５りを水５！に分散させ。
９５〜１００℃で２０〜３０分間熱水抽出した後、３０
００〜ｉｏｏｏｏｒｐｍで２０〜３０分間遠心分離し、
その上澄をクロレラ熱水抽出物として取出した。この抽
出に用いられる溶媒は、熱水に限定されず、希酸もしく
は希アルカリを含有する水でも何んら支障はない。こう
した操作によシ得られた熱水抽出物は約７５）（粉末換
算）であった。
００〜ｉｏｏｏｏｒｐｍで２０〜３０分間遠心分離し、
その上澄をクロレラ熱水抽出物として取出した。この抽
出に用いられる溶媒は、熱水に限定されず、希酸もしく
は希アルカリを含有する水でも何んら支障はない。こう
した操作によシ得られた熱水抽出物は約７５）（粉末換
算）であった。
次いで、熱水抽出物を５０℃で減圧濃縮し。
全容量に蒸留水を加えて１！とした。これを半透ｅ：に
通し、半透膜を通過しない高分子画分（以下、Ａ画分と
称す）と半透膜を通過した低分子画分（以下、Ｂ画分と
称す）とに分画した。
通し、半透膜を通過しない高分子画分（以下、Ａ画分と
称す）と半透膜を通過した低分子画分（以下、Ｂ画分と
称す）とに分画した。
Ａ、Ｂ画分の収量は、夫々４ＦＭ’、３０ｉＰ（いずれ
も粉末換算）であった、 次いで、Ａ画分４．５？に水３！を加え、ｐＨｓ、５ｒ
ｔｃｍ整し、これにリン酸緩衝液１！に０．２ノのα−
アミラーゼを加えた液を添加して３７℃の恒温槽中で２
４時間加水分解を行なった、この後、８０℃に加熱して
α−アミラーゼを失活させ、全溶液を透析し、更に加水
分解した糖を流去させ、減圧乾固した。このＡ画分酵素
分解物の収量は３０？であった、 次いで、前記Ａ画分酵素分解物をカラム（内径２０ｃ１
ｎ、長さ１．５ ｍ ）に９ ｖＲ）、ｌ Ｂｉ ｏ
−ｇｅ ＩＰ−１００（バイオ・ラッド ラボラトリ−
社製商品名）を充填し水を展開液としてゲル濾過し、光
学密度（ＯＤ）２ｆ３０ ｎｍで、ＯＤｉ高値を示す分
画部分を採取し、水冷下で減圧乾固して目的物である糖
蛋白成分を得た。この収量は！Ｍ’（粉末換算）であシ
、クロレラ藻体（５００ｉＰ）に対して１チの収率であ
った。
も粉末換算）であった、 次いで、Ａ画分４．５？に水３！を加え、ｐＨｓ、５ｒ
ｔｃｍ整し、これにリン酸緩衝液１！に０．２ノのα−
アミラーゼを加えた液を添加して３７℃の恒温槽中で２
４時間加水分解を行なった、この後、８０℃に加熱して
α−アミラーゼを失活させ、全溶液を透析し、更に加水
分解した糖を流去させ、減圧乾固した。このＡ画分酵素
分解物の収量は３０？であった、 次いで、前記Ａ画分酵素分解物をカラム（内径２０ｃ１
ｎ、長さ１．５ ｍ ）に９ ｖＲ）、ｌ Ｂｉ ｏ
−ｇｅ ＩＰ−１００（バイオ・ラッド ラボラトリ−
社製商品名）を充填し水を展開液としてゲル濾過し、光
学密度（ＯＤ）２ｆ３０ ｎｍで、ＯＤｉ高値を示す分
画部分を採取し、水冷下で減圧乾固して目的物である糖
蛋白成分を得た。この収量は！Ｍ’（粉末換算）であシ
、クロレラ藻体（５００ｉＰ）に対して１チの収率であ
った。
次に、上記分離方法で得られた糖蛋白の特性を以下に列
挙する。
挙する。
（ｉ）分子量
■ 電気泳動による分子ｆ； ４５０００■ 分析用超
遠心ｐ！１（日立（株）製：吸収走査記録装置２８２−
００６０型）による分工借：４５０００ 〔ム〕純度 ■ゲル濾過法 ■分析用超遠心機の沈降パターン ■８ＤＳポリアクリルアミドゲルの電気泳動により単品
であることが確認された、 （ｉｉ）赤外線分光分析 赤外線分光分析器（日立（株） ’Ａ：Ｍｏｄ６１Ｂｒ ２６０−１０型）（ＩＲγ ・鋸−１〕Ｋよａｘ シ結晶状態を調べたところ、第、１・２図に示すスペク
トルを得た。
遠心ｐ！１（日立（株）製：吸収走査記録装置２８２−
００６０型）による分工借：４５０００ 〔ム〕純度 ■ゲル濾過法 ■分析用超遠心機の沈降パターン ■８ＤＳポリアクリルアミドゲルの電気泳動により単品
であることが確認された、 （ｉｉ）赤外線分光分析 赤外線分光分析器（日立（株） ’Ａ：Ｍｏｄ６１Ｂｒ ２６０−１０型）（ＩＲγ ・鋸−１〕Ｋよａｘ シ結晶状態を調べたところ、第、１・２図に示すスペク
トルを得た。
■ 第１図より ３３００〜３４００ｃｍ−’に糖蛋白
の特徴である水酸基のγＯ−Ｈとペブタイド結合のｒ
Ｎ−Ｈが混った吸収を示す。
の特徴である水酸基のγＯ−Ｈとペブタイド結合のｒ
Ｎ−Ｈが混った吸収を示す。
■ １６７０ ｃｍ−”及び１５６０ｃｒｒ１−”にα
−ヘリックスを示すアミドエバンド、アミドＩバンドの
吸収を示す。
−ヘリックスを示すアミドエバンド、アミドＩバンドの
吸収を示す。
■ １６４５ｃｍ””及び１５４０ｃＷＬ−’にランダ
ムコイルを表わすアミドエバンド、アミド■バンドを示
す。
ムコイルを表わすアミドエバンド、アミド■バンドを示
す。
■ α−ヘリックスとランダムコイルを表わす各バンド
の吸収強度が夫々相等しいことがら、これらの含有ｔは
ほぼ等しく１：１である。
の吸収強度が夫々相等しいことがら、これらの含有ｔは
ほぼ等しく１：１である。
■ １３００ｍ−”に本来弱い強度の両者のアミド■バ
ンドが認められる。
ンドが認められる。
■ １２３０ ｃｍ−”及び１１００〜１００１００Ｏ
’（指紋領域）は、多糖類の炭素−水酸基の伸縮振動で
特に１０５１０５Ｏ’付近の強度が最大である。
’（指紋領域）は、多糖類の炭素−水酸基の伸縮振動で
特に１０５１０５Ｏ’付近の強度が最大である。
■ ９３０〜９０５ｃｆｎ−’に表われる吸収によって
、多糖類はβ−結合であることがわかる。
、多糖類はβ−結合であることがわかる。
特に９３０ｍ−’はβ−糖のビラノーゼ環の炭素−酸素
−炭素の非対称伸縮振動を示している。
−炭素の非対称伸縮振動を示している。
■ ８４０ｃ１ｒＬ−’付近に吸収のないことは、α糖
の存在がないことを示す。
の存在がないことを示す。
以上、■〜■の解析から本物質は糖蛋白質であって、蛋
白部分はβ−ヘリックスとランダムコイルより構成され
ておシ、糖部分はβ−多糖類より構成されていることが
確認できる。
白部分はβ−ヘリックスとランダムコイルより構成され
ておシ、糖部分はβ−多糖類より構成されていることが
確認できる。
（■）円二色スペクトル（ＣＤカーブ）旋光分散分光器
（日立（株）製：ＵＶ−５型）（ＣＤ水溶液１） Ｈ７
，Ｏ〕によシ本物質ｘ ｏｍｇを蒸留水２０ｍ！で溶解
した試料の円二色スペクトルを測定したところ、第２図
に示すスペクトル図を得た。
（日立（株）製：ＵＶ−５型）（ＣＤ水溶液１） Ｈ７
，Ｏ〕によシ本物質ｘ ｏｍｇを蒸留水２０ｍ！で溶解
した試料の円二色スペクトルを測定したところ、第２図
に示すスペクトル図を得た。
第２図より本物質はλ＝ ２７５ ｎ ｍに正の極値（
２，２Ｘ １０−’ ）をもつＣＤスペクトルを示す。
２，２Ｘ １０−’ ）をもつＣＤスペクトルを示す。
この正のＣＩ）帯はチロシン、トリプトファ二及びＳ−
８結合に帰属される。
８結合に帰属される。
このようにして得られた物質の制ル作用は以下に示す実
験によシ確認された。
験によシ確認された。
実験例１〔軟寒元培養法による癌細胞殺作用の測定〕
常法（５ｏｆｔ ａｇｕｒ ｃｌｏｎｉｎｇ分析法）に
従ってマクスのリンパ性白血病培養確立株（Ｌ−１２１
０／Ｖ／Ｃ）の接種細胞数を５Ｘ１０’ｃｅｌｌ／ｆｎ
ｐになるように本物質を加えた培地に植え込んだ。
従ってマクスのリンパ性白血病培養確立株（Ｌ−１２１
０／Ｖ／Ｃ）の接種細胞数を５Ｘ１０’ｃｅｌｌ／ｆｎ
ｐになるように本物質を加えた培地に植え込んだ。
５０チ増殖阻止濃度（ＩＣ５０）ｔｉ、Ｉ Ａｇ／ｆｎ
Ｚであった。
Ｚであった。
実験例２（Ｐ−３８８による試験〕
１０ ケのマウスリンパ球白血病（Ｐ−３８８）を１群
１０匹とした５週令のＣＤＦ、マウスの腹臨内に移植し
、移植２４時間後から毎日１回。
１０匹とした５週令のＣＤＦ、マウスの腹臨内に移植し
、移植２４時間後から毎日１回。
連続５日間に亘って本物質をマウスの腹腔内にｆ３ ｍ
ｇ／Ｋｙ投与し、常法に従ってマウスの生存日数比（本
物質を投与し々いマウスとの比）を調べた。その結果、
延命率（Ｔ／Ｃ）は１５０％であった。
ｇ／Ｋｙ投与し、常法に従ってマウスの生存日数比（本
物質を投与し々いマウスとの比）を調べた。その結果、
延命率（Ｔ／Ｃ）は１５０％であった。
以上詳述した如く１本発明によれば緑色微細藻類から抽
出され、優れ九制瘉作用を有する制愈剤を提供できる。
出され、優れ九制瘉作用を有する制愈剤を提供できる。
第１図は本物質を赤外線分光分析することＫより得られ
たスペクトル図、第２図は本物質を旋光分散分光器で分
析するととくよシ得られた円二色スペクトル図である。 出願人代理人 弁理士 鈴 江 武 彦第２ｒ
ｊ！Ｊ 昭和 年 月 日 特許庁長官 宇 賀 道 部 殿 １、事件の表示 特願昭６０−１５６５１７号 ２、発明の名称 制癌剤 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 クロレラ工業株式会社 ４、代理人 ５、自発補正 ６、補正の対象 ７、補正の内容 明細書中第３頁、１９行目の「これを」以下筒４頁２行
目のｒ分画した。」までの文を下記の如く訂正する。 記 これを限外口過膜に通し、限外口過膜を通過しない高分
子画分（以下、Ａ画分と称す）と限外口過膜を通過した
低分子画分（以下、Ｂ画分と称す）とに分画した。
たスペクトル図、第２図は本物質を旋光分散分光器で分
析するととくよシ得られた円二色スペクトル図である。 出願人代理人 弁理士 鈴 江 武 彦第２ｒ
ｊ！Ｊ 昭和 年 月 日 特許庁長官 宇 賀 道 部 殿 １、事件の表示 特願昭６０−１５６５１７号 ２、発明の名称 制癌剤 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 クロレラ工業株式会社 ４、代理人 ５、自発補正 ６、補正の対象 ７、補正の内容 明細書中第３頁、１９行目の「これを」以下筒４頁２行
目のｒ分画した。」までの文を下記の如く訂正する。 記 これを限外口過膜に通し、限外口過膜を通過しない高分
子画分（以下、Ａ画分と称す）と限外口過膜を通過した
低分子画分（以下、Ｂ画分と称す）とに分画した。
Claims (1)
- 緑色微細藻類クロレラから分離される分子量４５０００
の糖蛋白質であって、蛋白部分はα−ヘリックスとラン
ダムコイルより構成され、糖部分はβ−多糖類より構成
され、かつ円二色スペクトルの２７５ｎｍに正の極値を
有する制癌剤。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60156517A JPS6219528A (ja) | 1985-07-16 | 1985-07-16 | 制癌剤 |
| US06/882,301 US4822612A (en) | 1985-07-16 | 1986-07-07 | Anticancer agent |
| CA000513353A CA1262016A (en) | 1985-07-16 | 1986-07-08 | Anticancer agent |
| EP86109391A EP0209078A3 (en) | 1985-07-16 | 1986-07-09 | Anticancer agent |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60156517A JPS6219528A (ja) | 1985-07-16 | 1985-07-16 | 制癌剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6219528A true JPS6219528A (ja) | 1987-01-28 |
Family
ID=15629510
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60156517A Pending JPS6219528A (ja) | 1985-07-16 | 1985-07-16 | 制癌剤 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4822612A (ja) |
| EP (1) | EP0209078A3 (ja) |
| JP (1) | JPS6219528A (ja) |
| CA (1) | CA1262016A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| KR100426076B1 (ko) * | 2001-09-04 | 2004-04-06 | 대상 주식회사 | 클로렐라를 유효성분으로 함유하는 골다공증 억제용 제제 |
| CN1302013C (zh) * | 2005-02-21 | 2007-02-28 | 南京农业大学 | 一种活性小球藻多糖的制备方法 |
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| FR2747922B1 (fr) * | 1996-04-26 | 1999-02-12 | Codif International Sa | Utilisation d'extraits naturels d'algues pour elaborer un produit destine a prevenir et a soigner des maladies de la peau |
| US6630168B1 (en) | 1997-02-20 | 2003-10-07 | Biomedicines, Inc. | Gel delivery vehicles for anticellular proliferative agents |
| US6440448B1 (en) | 1998-03-16 | 2002-08-27 | Joseph Intelisano | Food supplement/herbal composition for health enhancement |
| CA2412600C (en) | 2000-07-10 | 2011-09-27 | The University Of Mississippi | Potent immunostimulatory polysaccharides extracted from microalgae |
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| JPS5732224A (en) * | 1980-08-06 | 1982-02-20 | Kurorera Kogyo Kk | Carcinostatic agent |
| DE3171242D1 (en) * | 1980-10-06 | 1985-08-08 | Chlorella Industry Co | Cell culture method |
| JPS58128322A (ja) * | 1982-01-27 | 1983-07-30 | Kurorera Kogyo Kk | 制癌剤 |
| JPH06169728A (ja) * | 1992-12-08 | 1994-06-21 | Hayashikane Sangyo Kk | ちくわの形状を有する食品の製造方法 |
-
1985
- 1985-07-16 JP JP60156517A patent/JPS6219528A/ja active Pending
-
1986
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6627201B2 (en) | 2001-04-03 | 2003-09-30 | Kabushiki Kaisha Sun Chlorella | Composition for drinking/eating and beverage/food |
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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| EP0209078A3 (en) | 1988-04-27 |
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