JPS62205794A - モノクロ−ナル抗体 - Google Patents
モノクロ−ナル抗体Info
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- JPS62205794A JPS62205794A JP4421186A JP4421186A JPS62205794A JP S62205794 A JPS62205794 A JP S62205794A JP 4421186 A JP4421186 A JP 4421186A JP 4421186 A JP4421186 A JP 4421186A JP S62205794 A JPS62205794 A JP S62205794A
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- Japan
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- antibodies
- virus
- antibody
- cells
- specific
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- Pending
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、免疫グロブリンのＩｇ０４サブクラスに属す
るヒトモノクローナル抗体でアレルゲンに対して特異的
な反応性を有するものに関する。
るヒトモノクローナル抗体でアレルゲンに対して特異的
な反応性を有するものに関する。
ヒトのアトピー性アレルギー疾患の症状発現においてＩ
ｇＥ抗体が重要な役割を果たしていることは良く知られ
ている。しかし、近年、アレルｒン特異Ｉｇａｇ体、特
にＩｇＧ４抗体の役割が注目されはじめてきた。ＩｇＧ
４抗体は初めはＩｇＧ ｉｈｏｒｔ−Ｈ）ｒｍｓｅｎｓ
ｉｔｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ （ＩｇＧ ５−Ｔ
Ｓ ）としてのａｎａｐｈｙｌａｔｉｃ ＩｇＧ抗体と
の関連が報告されていたが最近では逆に阻止抗体（又は
遮断抗体）（ｂｌｏｃｋｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ）と
しての役割が重視されている。たとえばＩｇＧ４抗体は
ヒト肥満細胞や好塩基球のＩｇＥ抗体を介してのアレル
ｒ：／％異的な脱顆粒を抑制しうる（中耕、「アレルギ
ー」第３０巻、２０６〜２１２頁％１９８１年）。また
、減感作療法を行うことにより、アレルｒン特異的Ｉｇ
Ｇ４抗体の増加が報告され阻止抗体としてのＩｇＧ４抗
体の可能性が示唆されている（高石ら、「アレルギー」
第３２巻、１１０６〜１１１２頁、１９８３年）。
ｇＥ抗体が重要な役割を果たしていることは良く知られ
ている。しかし、近年、アレルｒン特異Ｉｇａｇ体、特
にＩｇＧ４抗体の役割が注目されはじめてきた。ＩｇＧ
４抗体は初めはＩｇＧ ｉｈｏｒｔ−Ｈ）ｒｍｓｅｎｓ
ｉｔｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ （ＩｇＧ ５−Ｔ
Ｓ ）としてのａｎａｐｈｙｌａｔｉｃ ＩｇＧ抗体と
の関連が報告されていたが最近では逆に阻止抗体（又は
遮断抗体）（ｂｌｏｃｋｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ）と
しての役割が重視されている。たとえばＩｇＧ４抗体は
ヒト肥満細胞や好塩基球のＩｇＥ抗体を介してのアレル
ｒ：／％異的な脱顆粒を抑制しうる（中耕、「アレルギ
ー」第３０巻、２０６〜２１２頁％１９８１年）。また
、減感作療法を行うことにより、アレルｒン特異的Ｉｇ
Ｇ４抗体の増加が報告され阻止抗体としてのＩｇＧ４抗
体の可能性が示唆されている（高石ら、「アレルギー」
第３２巻、１１０６〜１１１２頁、１９８３年）。
また、アレルゲンと結合した特異ヒ） ＩｇＧ抗体と選
択的に結合するモノクローナル抗体の取得およびそれを
用いてＥＬＩＳＡ法（ｅｎｚｙｍｅ ｌ ｌｎｋｅｄｌ
ｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓａａｙ ）によシアレ
ルｒン特異ＩｇＧ抗体を測定しうろことは既に報告され
ている（三河ら、特開昭６０−２２８４２１号公報）。
択的に結合するモノクローナル抗体の取得およびそれを
用いてＥＬＩＳＡ法（ｅｎｚｙｍｅ ｌ ｌｎｋｅｄｌ
ｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓａａｙ ）によシアレ
ルｒン特異ＩｇＧ抗体を測定しうろことは既に報告され
ている（三河ら、特開昭６０−２２８４２１号公報）。
アレルダン自体と特異的に反応するヒ） ＩｇＧ４モノ
クローナル抗体はまだ取得されていない。前述の三河ら
の抗体はアレルゲンと直接反応するものではなくてアレ
ルゲンと結合した特異ヒ）ＩｇＧ抗体と反応するもので
あった。
クローナル抗体はまだ取得されていない。前述の三河ら
の抗体はアレルゲンと直接反応するものではなくてアレ
ルゲンと結合した特異ヒ）ＩｇＧ抗体と反応するもので
あった。
前述の基礎、臨床の両面の結果から考えて、アレルギー
疾患の診断にも血清中のＩｇＥｉだけでなく■ｇＧ４抗
体の量を知ることも重要になっている。
疾患の診断にも血清中のＩｇＥｉだけでなく■ｇＧ４抗
体の量を知ることも重要になっている。
本発明は、アレルギー疾患におけるＩｇＧ４抗体のアレ
ルギー治療薬への応用、およびアレルギー疾患の診断と
しての血清中ＩｇＧ４抗体の測定に利用しうる新規なヒ
トエピＧ４モノクローナル抗体を提供することを目的と
している。
ルギー治療薬への応用、およびアレルギー疾患の診断と
しての血清中ＩｇＧ４抗体の測定に利用しうる新規なヒ
トエピＧ４モノクローナル抗体を提供することを目的と
している。
本発明はこのような目的を達成するべくなされたもので
あり、アトピー性アレルギー患者の８９７２球をＥＢウ
ィルスでトランスフォームシテ株化した細胞を培養する
ことにより、アレルギンに特異反応性を有しＩｇＧ４サ
ブクラスに属するヒトモノクローナル抗体を産生ずるこ
とを見出したことに基いている。
あり、アトピー性アレルギー患者の８９７２球をＥＢウ
ィルスでトランスフォームシテ株化した細胞を培養する
ことにより、アレルギンに特異反応性を有しＩｇＧ４サ
ブクラスに属するヒトモノクローナル抗体を産生ずるこ
とを見出したことに基いている。
実施例で得られた本発明のモノクローナル抗体は次のよ
うな性質を有している。
うな性質を有している。
（１） モノクローナル抗体のサブクラスＥＬＩｓＡ
（ｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｇｏｒｂ
ｅｎｔ ａｓｓａｙ ）法によってヒトＩｇＧ抗体のサ
ブクラスを検定した。
（ｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｇｏｒｂ
ｅｎｔ ａｓｓａｙ ）法によってヒトＩｇＧ抗体のサ
ブクラスを検定した。
ＩｇＧ１．１ｇＧ２、Ｉ ｇＧ３．１ｇＧ４の各サブク
ラスに対する抗体（ＮｏＲＤＩＣ社製）を０．０５Ｍ炭
Ｄ ｆｌ） 両液（ｐｉ−１９，６）にて、ポリ塩化ビ
ニルプレートに固相化した。培養上清と反応させ、洗浄
した後（ルオキシダーゼ標識抗ヒト免疫グロブリンＦ
（ａ ｂ ）６分画（ＣＡＰＰＥＬ社製）と反応させた
。洗浄後基質（過酸化水素）と反応させ吸光度を測定し
た。
ラスに対する抗体（ＮｏＲＤＩＣ社製）を０．０５Ｍ炭
Ｄ ｆｌ） 両液（ｐｉ−１９，６）にて、ポリ塩化ビ
ニルプレートに固相化した。培養上清と反応させ、洗浄
した後（ルオキシダーゼ標識抗ヒト免疫グロブリンＦ
（ａ ｂ ）６分画（ＣＡＰＰＥＬ社製）と反応させた
。洗浄後基質（過酸化水素）と反応させ吸光度を測定し
た。
下表に結果を０Ｄ４ｏ５値で示した。これにより、本発
明のモノクローナル抗体はヒ） ＩｇＧ４サブクラスに
属することがわかる。
明のモノクローナル抗体はヒ） ＩｇＧ４サブクラスに
属することがわかる。
（２） アレルギンに対する特異反応性■ ＥＬＩＳ
Ａ法 アレルギ／を０．０５ Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ９，６）に
て、ポリ塩化ビニルグレートに固相化した。培養上清と
反応させた後洗浄し、マウス抗ヒ） ＩｇＧ４モノクロ
ーナル抗体（ＭＩＩＪＳ社製）と反応させた。
Ａ法 アレルギ／を０．０５ Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ９，６）に
て、ポリ塩化ビニルグレートに固相化した。培養上清と
反応させた後洗浄し、マウス抗ヒ） ＩｇＧ４モノクロ
ーナル抗体（ＭＩＩＪＳ社製）と反応させた。
反応後再び洗浄し、ヒト免疫グロブリンと交差結合性を
もたないペルオキシダーゼ標識抗マウス免疫グロブリン
抗体（ＤＡＫＯ社製）と反応させた。
もたないペルオキシダーゼ標識抗マウス免疫グロブリン
抗体（ＤＡＫＯ社製）と反応させた。
洗浄後、基質（過酸化水素）と反応させ、吸光度を測定
した。この結果、本抗体はいずれもアレルギン特異的に
反応することがわかった。なお、この方法によりアレル
ｒン特異ＩｇＧ４抗体の検出も行ったＯ ■ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法 ５Ｄ−８−ポリアクリルアミドダル電気泳動法（ＳＤＳ
−ＰＡＧＥ ）によッテ、１３チスラプｒルにアレル
ゲンを電気泳動した。ニトロセルロース膜にタン／４り
を転写し、培養上清と反応させた。その後、マウス抗ヒ
ｌ−ＩｇＧ４モノクローナル抗体を反応させ洗浄した。
した。この結果、本抗体はいずれもアレルギン特異的に
反応することがわかった。なお、この方法によりアレル
ｒン特異ＩｇＧ４抗体の検出も行ったＯ ■ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法 ５Ｄ−８−ポリアクリルアミドダル電気泳動法（ＳＤＳ
−ＰＡＧＥ ）によッテ、１３チスラプｒルにアレル
ゲンを電気泳動した。ニトロセルロース膜にタン／４り
を転写し、培養上清と反応させた。その後、マウス抗ヒ
ｌ−ＩｇＧ４モノクローナル抗体を反応させ洗浄した。
次に、ペルオキシダーゼ標識抗マウス免疫グロブリン抗
体、ペルオキシダーゼ標識抗ペルオキシダーゼ抗体の順
に反応させた。洗浄後、基質（過酸化水素）と反応させ
て発色させた。
体、ペルオキシダーゼ標識抗ペルオキシダーゼ抗体の順
に反応させた。洗浄後、基質（過酸化水素）と反応させ
て発色させた。
その結果、第１図に示すようにＦ’Ｅ−１０抗体は、卵
白アルブミンの５００００〜３００００ダルトンのタン
パク質と反応し、 ＦＭ−１抗体は、ダニの約９６００
０ダルトンのタンＡｌり質と特異的に反応することがわ
かった。
白アルブミンの５００００〜３００００ダルトンのタン
パク質と反応し、 ＦＭ−１抗体は、ダニの約９６００
０ダルトンのタンＡｌり質と特異的に反応することがわ
かった。
本発明の抗体はこれらに限定されるものではなく、Ｂリ
ン・９球の由来するアトピー性アレルギー疾患を選択す
ることによシ各アレルｒンに特異的に反応するモノクロ
ーナル抗体を個別に調製することができる。アレルゲン
の種類は問うところではないが、例えば牛乳、卵白アル
ブミン等の食物に含まれているアレルギ／、ダニ、猫や
犬、ウサギ、モルモットの毛などの動物由来のアレルゲ
ン。
ン・９球の由来するアトピー性アレルギー疾患を選択す
ることによシ各アレルｒンに特異的に反応するモノクロ
ーナル抗体を個別に調製することができる。アレルゲン
の種類は問うところではないが、例えば牛乳、卵白アル
ブミン等の食物に含まれているアレルギ／、ダニ、猫や
犬、ウサギ、モルモットの毛などの動物由来のアレルゲ
ン。
杉やブタフサ等の花粉などの植物由来のアレルゲン、（
ニジリン等の薬物由来のアレルギン、そのほかハウスダ
スト、カビ等のアレルゲンに対する抗体を広く取得する
ことが可能である。
ニジリン等の薬物由来のアレルギン、そのほかハウスダ
スト、カビ等のアレルゲンに対する抗体を広く取得する
ことが可能である。
このような抗体を産生ずる細胞株は、次のような方法で
得ることができる。
得ることができる。
すなわち、種々のアトピー性アレルギー患者の８９７７
９球を、Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウィルス（ＦＢウィ
ルス）でトランス７オームすることによシ、アレルｒン
特異的ＩｇＧ４抗体陽性の培養細胞を得、ついでこれを
クローン化して目的とする抗体を産生する細胞株を得る
ことができる。
９球を、Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウィルス（ＦＢウィ
ルス）でトランス７オームすることによシ、アレルｒン
特異的ＩｇＧ４抗体陽性の培養細胞を得、ついでこれを
クローン化して目的とする抗体を産生する細胞株を得る
ことができる。
たとえば、アトピー性アレルギー患者の末梢血をヘパリ
ン加採血し、ＦＩｃｏｌ−Ｃｏｎｒａｙ比重遠心法、そ
の他の公知の方法でＢリンノ譬球を分離する。
ン加採血し、ＦＩｃｏｌ−Ｃｏｎｒａｙ比重遠心法、そ
の他の公知の方法でＢリンノ譬球を分離する。
一方、ＦＢウィルスを産生放出している細胞（たとえば
、Ｂ９５−８ ）を一般の細胞培養用の培地中で培養し
、その培養上清を分取することによシウイルス源（ＥＢ
ウィルス液）を得る。
、Ｂ９５−８ ）を一般の細胞培養用の培地中で培養し
、その培養上清を分取することによシウイルス源（ＥＢ
ウィルス液）を得る。
ついで、このＥＢウィルス液と上記９１Ｊンパ球を接触
させた後、種々の培養密度で一般の組織培養用マイクロ
タイタープレートに接種して培養する。
させた後、種々の培養密度で一般の組織培養用マイクロ
タイタープレートに接種して培養する。
このトランスフォーメーション法は、適宜常法を選ぶこ
とができるが少ない１１′（′ＩＩ胞密度で接目するオ
リがクローン法が好適に使用されろ、細胞の増殖がみら
れる時期に、培養上清を集め抗体活性のスクリーニング
を行ない、抗体活性陽性のものについて、クローニング
を行なう。
とができるが少ない１１′（′ＩＩ胞密度で接目するオ
リがクローン法が好適に使用されろ、細胞の増殖がみら
れる時期に、培養上清を集め抗体活性のスクリーニング
を行ない、抗体活性陽性のものについて、クローニング
を行なう。
クローニングに際しては軟寒天（ｓｏｆｔ ａｇａｒ）
法、限界希釈（ｌｉｍｉｔｉｎｇ ｄｉｌｕｔｉｏｎ）
法、又はシングルセルマニピユレーション（ｓｉｎｇｌ
ｅ ｃｅｌｌ ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ）法の常法を
用いることができるが、軟寒天法が好ましく用いられる
。
法、限界希釈（ｌｉｍｉｔｉｎｇ ｄｉｌｕｔｉｏｎ）
法、又はシングルセルマニピユレーション（ｓｉｎｇｌ
ｅ ｃｅｌｌ ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ）法の常法を
用いることができるが、軟寒天法が好ましく用いられる
。
軟寒天法の場合、たとえば細胞をある密度で支持寒天層
上の接種寒天層に植え込み、増殖してきたコロニーを分
離し、再び浮遊培養に移し抗体陽性のクローン法を取得
する。
上の接種寒天層に植え込み、増殖してきたコロニーを分
離し、再び浮遊培養に移し抗体陽性のクローン法を取得
する。
このクローン化された細胞株が産生ずる抗体は常法によ
り培養上清として取得でき、この抗体はアレルダンに特
異的に反応する。
り培養上清として取得でき、この抗体はアレルダンに特
異的に反応する。
培養上清から必要により更に精製することもできる。精
製方法としては抗体を精製する一般的方法によればよく
、例えばアフィニティークロマトグラフィー、ｒルクロ
マトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、硫安
沈澱法などを利用できる。精製品は必要により凍結乾燥
することもできる。
製方法としては抗体を精製する一般的方法によればよく
、例えばアフィニティークロマトグラフィー、ｒルクロ
マトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、硫安
沈澱法などを利用できる。精製品は必要により凍結乾燥
することもできる。
保存は低温たとえば４℃以下で行なうのがよく、また、
凍結乾燥品を再溶解するのには通常水または生理食塩水
が用いられる。
凍結乾燥品を再溶解するのには通常水または生理食塩水
が用いられる。
本発明の抗体は１又は２以上の特定のアレルｒンと特異
的に反応する。
的に反応する。
（１） アトピー性アレルギー患者の末梢血Ｂリンパ
球のトランスフォーメーション １）培地 ＲＰＭ１１６４０培地にカナマイシン５０μｇ７１ｔｌ
、グルタミン２ ｍＭ 、炭酸水素ナトリウム１．６ｇ
μを加え、ｐ！−１７，０−７，４とし、牛胎児血清（
Ｆｅｔａｌ ＣａｌｆＳｅｒｕｍ ： Ｆｅ２ ）を２
０チとなるように加えて使用する。
球のトランスフォーメーション １）培地 ＲＰＭ１１６４０培地にカナマイシン５０μｇ７１ｔｌ
、グルタミン２ ｍＭ 、炭酸水素ナトリウム１．６ｇ
μを加え、ｐ！−１７，０−７，４とし、牛胎児血清（
Ｆｅｔａｌ ＣａｌｆＳｅｒｕｍ ： Ｆｅ２ ）を２
０チとなるように加えて使用する。
２）ＥＢウィルス液の作製
ＥＢウィルスを産生ずるＢ９５−８細胞（Ｐｒｏｃｅｅ
ｄｉｎｇｓｏｆ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ
ｏｆ ５ｉｅｎｃｅ、 ７０（１） 、 １９０−１９
４（１９７３） ）を１０７Ｍの細胞密度でＲＰＭ１１
６４０ ＋２０ ％ ＦＣ８培地を用いて７日間培養し
、０．４５μｍのミリポアフィルタ−で濾過した培養上
清をウィルス液として用いる。ウィルスの力価判定には
１情帯血のトランスフォーメーションを利用したＴｏ５
ｏ７ｆｔｔｌを用いる。ウィルスは、その力価が１０５
ＴＤ５ｏ／ｆｎ１以上のものを用いる。
ｄｉｎｇｓｏｆ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ
ｏｆ ５ｉｅｎｃｅ、 ７０（１） 、 １９０−１９
４（１９７３） ）を１０７Ｍの細胞密度でＲＰＭ１１
６４０ ＋２０ ％ ＦＣ８培地を用いて７日間培養し
、０．４５μｍのミリポアフィルタ−で濾過した培養上
清をウィルス液として用いる。ウィルスの力価判定には
１情帯血のトランスフォーメーションを利用したＴｏ５
ｏ７ｆｔｔｌを用いる。ウィルスは、その力価が１０５
ＴＤ５ｏ／ｆｎ１以上のものを用いる。
３）リン・２球の分離
へ・臂すン加採血したアトピー性アレルギー患者の静脈
血から、Ｆｉｃｏｌ Ｃｏｎｒａｙ比重遠心法（Ｆｉｃ
ｏｌ−Ｃｏｎｒａ７の比重１．０７７）で単核球を分取
し、末梢血１１１７７ノや球として用いる。上記の方法
で末梢血ｌ ｒｕｇ当り約１０６個の末梢血Ｂリン・ぐ
球が分離される。
血から、Ｆｉｃｏｌ Ｃｏｎｒａｙ比重遠心法（Ｆｉｃ
ｏｌ−Ｃｏｎｒａ７の比重１．０７７）で単核球を分取
し、末梢血１１１７７ノや球として用いる。上記の方法
で末梢血ｌ ｒｕｇ当り約１０６個の末梢血Ｂリン・ぐ
球が分離される。
４）ＥＢウィルスの吸着及び培養
遠心により沈査とした末梢血３ リン・４球１０６個当
り１ｄのＫ［ｌウィルス液を加え、３７℃で１時間装置
する。
り１ｄのＫ［ｌウィルス液を加え、３７℃で１時間装置
する。
その後、ＲＰＭ１１６４０ ＋ ２０チＦＣ８培地を加
え、細胞密度を調整して平底マイクロタイタープレート
に０．１ ｒＬｌずつ細胞を植えこむ。４日後に培養液
を０、１ ｍノ加え以後４日１度培地の半量交換を行う
。
え、細胞密度を調整して平底マイクロタイタープレート
に０．１ ｒＬｌずつ細胞を植えこむ。４日後に培養液
を０、１ ｍノ加え以後４日１度培地の半量交換を行う
。
植えこむ細胞数によって異なるが平底マイクロタイター
プレートのウェル当り２．５Ｘ１０’個では、１５〜２
０日で細胞が細胞集塊を形成し活発に増殖してくる。通
常、ＥＢウィルスを吸着させた末梢血リンパ球を平底ク
ロマトタイタープレートのウェル当シー０４〜５ Ｘ
１０’個の細胞密度で植えこむ。
プレートのウェル当り２．５Ｘ１０’個では、１５〜２
０日で細胞が細胞集塊を形成し活発に増殖してくる。通
常、ＥＢウィルスを吸着させた末梢血リンパ球を平底ク
ロマトタイタープレートのウェル当シー０４〜５ Ｘ
１０’個の細胞密度で植えこむ。
５）培養上清中のアレルダン特異的ＩｇＧ４抗体の検出
細胞が増殖してきたら、培養上清を集め抗体価を測定す
る。その時期は、植えこむ細胞数によって異なるが３週
目から４週目にかけて抗体活性陽性のウェルが認められ
る。抗体陽性のウェルは、２４穴マルチウエルプレー）
、２５ｄの培養用フラスコ、２５（ＩＪの培養用フラス
コと培譬量を拡大シ、トランス７オーム６週目位からク
ローニングを行う。
る。その時期は、植えこむ細胞数によって異なるが３週
目から４週目にかけて抗体活性陽性のウェルが認められ
る。抗体陽性のウェルは、２４穴マルチウエルプレー）
、２５ｄの培養用フラスコ、２５（ＩＪの培養用フラス
コと培譬量を拡大シ、トランス７オーム６週目位からク
ローニングを行う。
（２） クローニング
軟寒天法によシ行う。６０ｍのシャーレに０．５チアガ
ロース（全酒造（株）製、ハイプレードアがロース）を
含むＲＰＭ１１６４０ ＋ ２０多ＦＣ８培地（支持層
）を４ ｍｌ、その上に１０３〜１０４個の細胞を接種
した０、 ３１アガロース（上記と同じ）を含むＲＰＭ
１１６４０ ＋ ２０ ％ ＦＣ８培地（接Ｓ層）３ｍ
を重層し、５％ＣＯ２を通気しているインキュベータ内
で３７℃で培養する。２週間から４週間後、顕微鏡下で
コロニーを釣シ上げ、平底マイクロタイタープレートで
ＲＰＭ１１６４０ ＋ ２０ ％ Ｆｅ２０．１ ｄ
／ウェルで培養する。通常二度クローニングを行い、そ
の結果クローン株を取る。
ロース（全酒造（株）製、ハイプレードアがロース）を
含むＲＰＭ１１６４０ ＋ ２０多ＦＣ８培地（支持層
）を４ ｍｌ、その上に１０３〜１０４個の細胞を接種
した０、 ３１アガロース（上記と同じ）を含むＲＰＭ
１１６４０ ＋ ２０ ％ ＦＣ８培地（接Ｓ層）３ｍ
を重層し、５％ＣＯ２を通気しているインキュベータ内
で３７℃で培養する。２週間から４週間後、顕微鏡下で
コロニーを釣シ上げ、平底マイクロタイタープレートで
ＲＰＭ１１６４０ ＋ ２０ ％ Ｆｅ２０．１ ｄ
／ウェルで培養する。通常二度クローニングを行い、そ
の結果クローン株を取る。
このクローン株には、ヒトＩｇＧ４抗体だけを産生ずる
細胞株も含まれている。
細胞株も含まれている。
アトピー性アレルギー患者のうち、卵白およびダニアレ
ルギー患者末梢血９７７４球をトランスフオームした結
果を表１，２に示す。尚、アレルｒン特異的ＩｇＧ４は
前述の培養上清中の抗体検出法によって求めたものであ
る。
ルギー患者末梢血９７７４球をトランスフオームした結
果を表１，２に示す。尚、アレルｒン特異的ＩｇＧ４は
前述の培養上清中の抗体検出法によって求めたものであ
る。
第１表 卵白アレルギー患者由来細胞株の出現第２表
ダニアレルギー患者由来細胞株の出現（３） 培養上
清中のＩｇＧ４抗体の力価５ｎ希釈した培養上清を用い
て前述のＥＬＩＳＡ法を行い、力価を調べた。尚、陽性
対照として患者血清を５ｎ希釈して同様に行った。結果
を第３表に示す。
ダニアレルギー患者由来細胞株の出現（３） 培養上
清中のＩｇＧ４抗体の力価５ｎ希釈した培養上清を用い
て前述のＥＬＩＳＡ法を行い、力価を調べた。尚、陽性
対照として患者血清を５ｎ希釈して同様に行った。結果
を第３表に示す。
第３表
〔発明の効果〕
本発明に係るモノクローナル抗体はアトピー性アレルギ
ー疾患に重要な役割をもつＩｇＧ４サブクラスに属し、
アレルゲンに特異的であシ、アレルギー疾患の診断に有
用である。さらに本抗体はヒト型である特徴を有するの
で、アレルギー疾患の治療にも有効であると期待される
。
ー疾患に重要な役割をもつＩｇＧ４サブクラスに属し、
アレルゲンに特異的であシ、アレルギー疾患の診断に有
用である。さらに本抗体はヒト型である特徴を有するの
で、アレルギー疾患の治療にも有効であると期待される
。
本発明の抗体は量産が可能であり、これらの診断等ある
いは治療薬を市場に送り出す途をひらくものである。
いは治療薬を市場に送り出す途をひらくものである。
第１図は本発明の抗体等のアレルｒノに対する特異反応
性を表わすウェスタンプロット法の結果を示すものであ
る。 特許出願人 富士レビオ株式会社“ 代理人弁理士 １）中 政 浩 ほか１名第１図
性を表わすウェスタンプロット法の結果を示すものであ
る。 特許出願人 富士レビオ株式会社“ 代理人弁理士 １）中 政 浩 ほか１名第１図
Claims (1)
- アトピー性アレルギー患者のＢリンパ球をＥＢウィルス
でトランスフォームして株化した細胞より産生され、ア
レルゲンに特異反応性を有する、ＩｇＧ＿４サブクラス
に属することを特徴とするヒトモノクローナル抗体
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4421186A JPS62205794A (ja) | 1986-03-03 | 1986-03-03 | モノクロ−ナル抗体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4421186A JPS62205794A (ja) | 1986-03-03 | 1986-03-03 | モノクロ−ナル抗体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62205794A true JPS62205794A (ja) | 1987-09-10 |
Family
ID=12685217
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4421186A Pending JPS62205794A (ja) | 1986-03-03 | 1986-03-03 | モノクロ−ナル抗体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS62205794A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994024164A3 (en) * | 1993-04-09 | 1995-01-05 | Schering Corp | Human monoclonal antibodies and processes and materials for making such antibodies |
| US8540999B2 (en) | 1991-07-12 | 2013-09-24 | Merck Patent Gmbh | Allergenic proteins and peptides from Japanese cedar pollen |
-
1986
- 1986-03-03 JP JP4421186A patent/JPS62205794A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8540999B2 (en) | 1991-07-12 | 2013-09-24 | Merck Patent Gmbh | Allergenic proteins and peptides from Japanese cedar pollen |
| WO1994024164A3 (en) * | 1993-04-09 | 1995-01-05 | Schering Corp | Human monoclonal antibodies and processes and materials for making such antibodies |
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