JPS62215535A - ウイルス感染の予防および治療用組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背量 本発明は、ウィルス、特に、レトロウィルスに感染して
いる動物、あるいは、ウィルス感染の危険性のある動物
の治療に関するものである。さらに詳しくは１本発明は
、＠乳類の細胞内にウィルス感染に対する耐性状態を誘
導すること、および、レトロウィルスに感染した人間を
治療することに関するものである。

特に、本発明は、免疫不全に至るレトロウィルス感染、
さらに詳しくは、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の
原因と考えられでいる感染症の治療に関するものである
。

ＡＩＤＳは伝播性細胞性免疫欠損症であって。

日和見感染並びに悪性であることを特徴とし、と！ＩＪ
　ｔ）　ケ、ニューモジステイス・カルニ（Ｐｎｅｕｍ
ｏｃｙｓｔｉｓ　ｃａｒｎ自）性肺炎やカポジ肉腫のよ
うなまれな疾患に罹病する他の原因が認められない患者
におけるそれらの発現を特徴としている（１〜３）。Ａ
ＩＤＳは、０ＫＴ４＋ＴＩＪ：／パ球サブセットの欠損
によると思われる深在性リンパ球減少、症、全身性皮膚
アネルギー、並びにマイトジェン、抗原、および同種免
疫細胞に対する増殖性応答の顕著な減少としで現われる
（４）。体液性免疫は比較的影響を受けないので、ＡＩ
ＤＳ患者におけるＢ＋ＩＪンパ腫の高い発現率に起因す
ると考えることができる異常に亢進されたＢ−細胞の増
殖性応答を原因とすることの証明が多数ある（５．６）
。完全に進行した症候群に加えで、関連疾患、即ち全身
性慢性リンパ腺症を特徴とするＡＩＤＳ　　−関連コン
プレックス（ＡＲＣ）の流行がみら、れる。この症候群
は疫学的性質および免疫異常の多くを共有しでおり、Ａ
ＩＤＳの臨床上の所見よりも先に現われることが多い。

最近得られた事実は、リンパ細胞栄養性レトロウィルス
かＡＩＤＳおよびＡＩＤＳ近縁コンプレックスの主な病
因物質であることを示唆しでいた。

リンパ腺症関連ウィルス（ＬＡＶ）は、最初、リンパ腺
症とＡＩＤＳにかかつでいる患者、並びにＡＩＤＳ患者
とその無症状性の子孫であって、いずれもＢ型血友病で
ある患者から単離された（７−９）。ヒトＴ−リンパ細
胞栄養性ウィルスタイプＩＩＩ（ＨＴＬＶ−［）と命名
されでいる同様のウィルスも、ＡＩＤＳおよびＡＲＣ患
者の多数の血液試料中から、それを許容性のＴ細胞系統
Ｈ９と一緒に同時培養することにより単離された（１０
゜１１）。ＬＡＶ、ＨＴＬＶ　−ｆｌ［、並びに最近Ａ
ＩＤＳ患者から単離された近縁のレトロウィルス（１２
，１３）は、幾つかの重要な特徴においで共通している
。インビボおよびインビトロにおいて、ウィルスの複製
は０ＫＴ４＋　Ｔ−リンパ球集団中で行われ、それには
損傷を受けた細胞の増殖を伴ない、細胞変性作用の様相
を呈す（８，１０゜１４）。このウィルスはＭｇ２＋依
存性逆転写酵素を含有しており、Ｄ型レトロウィルスと
同様の密度の高い円筒状の中心核形態を示しく８．１３
゜１５）、事実上、全ｒ（７）　Ａ　Ｉ　ＤＳ患者およ
びＡＲＣ患者の血清中−こ見い出される抗体により認識
される（８，１３．１６−２１　）。今日で（ま、ＨＴ
ＬＶ−世とＬＡＶは同一ウィルスの株であると考えられ
でおり、ヒト免疫不全症ウィルス（ｈｕｍａｎｉｍｍｕ
ｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｖｉｒｕｓ％ＨＩＶ　）　
　と命名されでいる。

ＡＩＤＳまたはＡＲＣに罹患した患者の免疫機能は著し
く損傷を受けでいる。しかしながら、ＨＩＶによって誘
発される異常の正確な性質についでの研究は持続的に行
われている。特に興味深いのは、ＨＩＶ感染が、その様
な患者の免疫細胞によるリンホカインの生産に及ぼす影
響、並びに。

外部から投与されたリンホカインに対するその応含むマ
クロファージ活性化産物分泌能力を試験された１６名の
ＡＩＤＳ患者の内％１４名は活性なリンホカインを生成
することができず％１３〜１４名はｒインターフェロン
を全く分泌し得なかった。

さらに、ＡＩＤＳ患者から得たマクロファージをインビ
トロでｒインターフェロンと一緒にインキュベートする
と抗微生物活性が高められることは。

インビボにおいて、外部から投与されたｒインターフェ
ロンに対しで、その様な細胞が応答しでいる可能性が高
いことを示しでいる（２２．２４）。

また、ＡＩＤＳ患者のリンパ球は、１９２８球の増殖と
分化に関与しでおりｒインターフェロンの生産を刺激す
るリンホカインであるインターロイキン−２の生産能力
も損なわれでいることが報告された（２３）。

最後に、ｒインターフェロンは、水泡性口内炎ウィルス
（ＶＳＶ）感染細胞に対して直接的な抗ウィルス作用を
示すと共に、ＶＳＶ感染細胞に対するサイドキン（ｃｙ
ｔｏｋｉｎｅ　）の作用を強化することが分っていた（
２５）。このサイトキンは、この報告の著者らにより、
本明細書中で腫瘍壊死因子−αと称しでいるポリペプチ
ドであると暫定的に同定された。エイフエルら（Ｅｉｆ
ｅｌ　）の「セル・イム２（Ｃｅ１１．　Ｉｍｍｕｎ、
　）　Ｊ　４７　：　１９７〜２０３（１９７９）をも
参照されたい。従って。

ＡＩＤＳ患者に対する免疫補強療法（ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ　　ｔｈ
ｅｒａｐｙ　）　　は有望な機会を与えるようであり、
患者に対する臨床研究が開始されＣいる。

ＡＩＤＳ患者に対するインビボでのリンホカイン治療は
、その期待にも拘らず、失望させるものであった。イン
ビトロ実験で得られた結果と対照的に、組換えｒインタ
ーフェロンの長期的な静脈内治療は、単球の呼吸性バー
スト機能をむしろ阻害するようであり、また％　ＡＩＤ
Ｓ患者にインターロイキン−２またはｒインターフェロ
ンを種々の用量で静脈内投与することにより、インビボ
におけるリンホカイン療法はＡＩＤＳ患者の治療に有意
な価値を有するものでないという結論が得られた（２７
）。実際１本発明がなされた時までは。

ＡＩＤＳ治療における免疫刺激または免疫再構築の試み
は、リンホカインによる細胞の賦活化がウィルスを拡散
させ、Ｔ４細胞を消耗させることにより、疾病の進行を
早めると考えられることから。

事実上、「危険」であるという学説が許及してぃた（２
８）。１９８６年６月に、ヤマモトら（Ｙａｍａｍｏｔ
ｏ、　）　（２９）は、ヒトαおよびβ（ｒでなく）イ
ンターフェロンがインビトロにおいてＨＩＶ株の複製を
抑制するが、これらのインターフェロンに対する暴露を
止めると、感染細胞におけるウィルス生産が促進される
ことが開示された。この中では、ＡＩＤＳに対する免疫
治療が生産対抗性であることが示唆されている。

最後に、Ｔ細胞の内生リンフォトキシン遺伝子のウィル
ス誘発生トランス活性化（ ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　）によっでＨＩＶ感
染Ｔ細胞がリンフォトキシンを産生じ、これにより自己
毒性量のリンフォトキシンの分泌につながることが示唆
されていた（３５）。

ガロウィルス、アデノウィルス、エボラウィルス、狂犬
病ウィルスおよびＢ型肝炎ウィルス等のウィルスによる
慢性、急性感染症および／または実験的な感染症の予防
および治療に用いられ、様々な効果が得られている。サ
イトメガロウィルスによる慢性感染症に対するインター
フェロン治療は。

ＣＭＶ感染の防止に対して必要である量よりもはるかに
多量を用いても困難であることが分っており、これらの
投与量は好中球減少症や体重増加の抑制等の望ましくな
い副作用をもたらすこともある。従って、かんこな、あ
るいは慢性のウィルス感染症の患者には、副作用がなく
、より有効なインターフェロン製剤を投与することが望
ましいといえる。

また、インターフェロンは、かぜ（−次的なライノウィ
ルス感染症）の予防または治療能力についＣも広範囲に
試験されでいる。大多数の研究においＣ，１日当り、用
ｆｌｏ、８　ｘｌＯ〜４２．８　ｘｌＯ６単位の経鼻投
与が採用されている〔フィンターら（Ｆｉｎｔｅｒ　）
　、　　１９８５　、［インターフェロンＪＶｏ１．４
、ｐｐ、１８６〜１８７〕。しかしながら。

初期の研究者によって報告された特異活性と今日用いら
れている国際標準との関係は不明瞭であることを理解し
ておくべきであり、用いられた投与量は、国際単位で表
わすと、それより多かったり。

少なかったりするかもしれない。経鼻投与においては一
般にエアーゾルが用いられるが、浸漬した外科用綿散糸
を用いて与えるとより有効であると報告されでいる。一
般に、−日の用量を分割し。

１日当り１〜３回投与される。組換えインターフェロン
を用いで、約Ｉ　Ｘ　１０’　　単位／用ｆｆｔ（０，
１ｍＱ／鼻腔）投与すると予防し得るが、この用量の１
／１０または１／１００では、効果が認められないこと
が経験的に示されている（フィンターら、前掲、ｐ、１
８８）。しかしながら、投与量的Ｉ×１０６　単位では
、インターフェロン投与に煩わしい軽度の鼻腔刺激を伴
ない、さらに多くの用量では、著しい刺激があった〔フ
ィンターら、同上〕。

インターフェロンはまた、単純庖疹ウィルス性結膜炎の
治療に点眼薬の形で投与され１種々のウィルス感染の治
療のために、注射剤または注入剤としで、静脈内または
腹腔内投与される。通常。

点眼剤はインターフェロンを１×１０６単位／ｍＱ以上
含有する〔含有ｉ６０．０００単位／　ｍＱの製剤では
なんら臨床上の利益が得られなかったとの報告がある：
サンドマツシャーら（Ｓａｎｄｍａｃｈｅｒ）、１９７
６ｒジエイ・インフエクト・ディス（Ｊ−Ｉｎｆｅｃｔ
、　Ｄｉｓ、　）　　Ｊ　１３３　：　Ａ　１６０〜Ａ
１６４〕。静注投与量も一般に患者当りｌＸｌ０　　＄
（ｆ１以上であるが、初期の研究者達は当時入手可能で
あったインターフェロン粗製剤を用いざるを得なかった
ので、必然的に低投与量であった。これらの研究の成果
から、インターフェロンは、それらがウィルス感染症の
予防における程、確立されたウィルス感染症の治療に有
効ではないと、一般的に考えられている。インターフェ
ロンを低側面で用いることができる様、能動的な感染に
対する活性が増強されていることが示されていると共に
。

高い予防効果を示すインターフェロン製剤が必要とされ
でいる。

腫瘍壊死因子〔ペニカら（Ｐｅｎｎ１ｃａ　）　、　２
０／２７　Ｄｅｃ、　１９８４　、　ｒネイチャー（Ｎ
ａｔｕｒｅ　）　Ｊ３１２　：　　７２４）およびりン
ホトキシン〔グレイら（Ｇｒａｙ　）、　２０／２７　
Ｄｅｃ、　１９８４　　ｒネイチャ−Ｊ　３１２　：　
７２１　］　は、活性化されたマクロファージおよびリ
ンパ細胞によって産生されるタンパク質であり、本明細
書に於いては、それぞれ「ＴＮＦＪ（またはｒＴＮＦ−
α」）およびｒＬＴＪ（またはｒＴＮＦ−β」）と呼ぶ
。これらはいずれもインビトロおよびインビボにおいて
腫瘍細胞に対して直接的に細胞毒性があり、また、この
点に関してインターフェロンと相乗作用を示す〔リーら
（Ｌｅｅ）１９８４ｒジエイ・イム：／（Ｊ。

Ｉｍｍｕｎ、）Ｊ　１３３　：　１０８３　）ｏ　しか
しながら。

ＴＮＦおよびＬＴは、いずれも、そのままでは直接的な
抗ウィルス性防御活性を持つＣいないことがわかってい
る。ＴＮＦ−αは重篤な感染症のかん患者におけるを痩
および悪液質に関与しでいることが示唆され（３４）、
’ＴＮＦ−αに対する受動免疫はエンドトキシンの致死
的な影響からマウスを保護することが報告されている（
３０）。ＴＮＦ−αの抗ＩＩ！瘍作用はインターフェロ
ン類によって相剰的に増強され、ＴＮＦ−βの抗腫瘍作
用は、インターフェロンガンマによって同様に増強され
ることが知られている。しかしながら、Ｔ’ＮＦ−αと
ＴＮＦ−βの混合物の抗腫瘍作用は、インターフェロン
アルファとインターフェロンベーターの抗ウィルス作用
と同様に、相加的なものであるにすぎない。

本発明は、インターフェロンの副作用を増加させること
す＜、インターフェロンの抗ウィルス作用を増強するこ
とを目的とするものである。

また１本発明は、インターフェロンの抗ウィルス特異性
を高めることを目的とするものである。

また、本発明は、ＤＮＡウィルスによる感染をも含めて
１個人のウィルス感染の予防にインターフェロンを用い
ることを目的とするものである。

本発明は、レトロウィルス、とりわけ、ＨＩＶの如きリ
ンパ細胞栄養性ウィルスに感染した人々を首尾良く治療
するために免疫療法を採用することを目的とするもので
ある。

さらにまた本発明は、活性なレトロウィルス感染の危険
にさらされている人々、例えば、潜伏期のレトロウィル
スを保有しでいる人々を治療することを目的とするもの
である。

また、本発明は、レトロウィルス感染に対する免疫治療
的予防法を提供することを目的とするものである。

これらの、またはその他の本発明の目的は、明細書全体
を考察することにより明らかとなるであろう。

要約 本発明の目的は、既にウィルスに感染している。

あるいは感染のおそれのある哺乳類に、抗ウィルス有効
量のＴＮＦまたはＬＴ、あるいは（ａ）インターフェロ
ンおよび（ｂ）　Ｔ　Ｎ　ＦまたはＬＴを投与すること
により達成された。ＴＮＦまたはＬＴ単独投与による抗
ウィルス性保護活性が知られでいないにもかかわらず、
ＴＮＦまたはＬＴは、インターフェロンの抗ウィルス活
性を相乗的に増大させる。一般に、そして予想外にも、
インターフェロン組成物中にＴＮＦまたはＬＴを含ませ
ることにより、インターフェロンの活性が約２〜１００
倍以上も増大する。最も大きい効果は、ｒインターフェ
ロンの場合に認められる。

本発明は、抗ウィルスまたは抗腫瘍のいずれの用途にお
いても治療上の使用には不十分であると考えられていた
量のインターフェロンを含有する。

インターフェロン組成物を提供するものである。

これらのインターフェロンの用量は約ｓｏｏ、ｏｏ。

国際単位以下、一般に２５，０００　単位以下である。

このインターフェロンの投与量はＬＴまたはＴＮＦを、
それらがＬＴまたはＴＮＦ毒性を表わすには不十分であ
るが、インターフェロンの抗ウィルス活性を増強するに
は十分な量１組成物中に含有させることにより有効なも
のとなる。

意外なことに１本発明者は、ｍｇ壊死因子のみ、あるい
は、好ましくは、インターフェロンと一緒に、その治療
有効量を投与すると、レトロウィルス感染のおそれのあ
る患者を保護し、レトロウィルスに感染した細胞を死滅
させることを見出した。

ｒ−インターフェロン単独ではレトロウィルス感染に対
する防御作用を殆んど、または全く示さず。

＊た。ｒ−インターフェロンはレトロウィルス感柔細胞
に対する著しい細胞毒ではなく、また。

ＴＮＦ単独では、高濃度においでわずかに活性であるに
すぎないが、これらの２種類の物質を組み合わせると劇
的に強力となる。この現象は、レトロウィルス感染患者
の免疫系は異常をきたしているにもかかわらず、インビ
ボにおいて認められる。

この成果は、その様す患者におけるＴＮＦ欠損は知られ
Ｃいなかったことから、特に驚異的な事柄であった。

図面の簡単な記述 第１図および第２図は、インターフェロン−ｒをＬＴま
たはＴＮＦと併用した場合にインターフェロン−ｒの抗
ウィルス活性が劇的に増加することを示している。

第３図は１種々の濃度のＴＮＦおよびインターフェロン
−ｒによる細胞培養のウィルス感染からの保護を示しで
いる。

′Ｓ４ａ図および第４ｂ図はＴＮＦまたはＬＴによるイ
ンターフェロン−α、βまたはｒの抗ウィルス活性の増
強状態を示しでいる。

第５８〜５ｄ図は、インターフェロン−ｒのウィルス複
製阻害がＴＮＦまたはＬＴによって増強されることを示
しでいる。

第６図は、ＴＮＦ−αおよびＩ　ＦＮ−ｒにより前処理
されたＨＩＶ−感染ＨｕＴ　２８細胞ｊこおけるＨＩＶ
ｍＲＮＡが、＠処理されていない対照細胞でのＨＩＶｍ
ＲＮＡと比較しで、劇的に減少しでいることを示すノー
ザン・ゲルを示すものである。

第７図はＴＮＦ−αおよび／またはＩ　ＦＮ−ｒ合 と併用したｋ１７．（Ｄカタラーゼの抗ウィルス性防御
作用を示しでいる。

詳しい記述 本発明の方法および組成物は、アデノウィルス。

庖疹ウィルス、パポーバウィルス（シミアンウィルス４
０．乳頭腫ウィルスおよびポリオーマウィルスヲ含む）
、小ポックスウィルスやワクシニアウィルス等のポック
スウィルス、アルボウィルス。

アデノウィルス、コロナウィルス、ミクンウィルス（二
ニー・キャッスル病ウィルス、おタフ＜カぜウィルス、
はしかウィルス、呼吸性シンクティアル（５ｙｎｃｔｉ
ａｌ　）ウィルス）、ライノウィルス、パラミクンウィ
ルス（例えばインフルエンザウィルスＡ、ＢｔたはＣ）
、　パルボウィルス、ピコルナウィルス、トガウィルス
（ｔｏｇａｖｉｒｕｓ　）　　、　レトロウィルス（Ｈ
ＴＬＶ−Ｉ、ＩＩおよび■を含む）、レオウィルスおよ
びロータウィルス等を含む全ゆるＤＮＡウィルス、−重
鎖ＲＮＡウィルスまたは二本鎖ＲＮＡウィルスによる活
動性感染あるいは潜伏感染の予防または治療に有用であ
る。その他の具体的なウィルスには、ルベラウィルス。

単純庖疹ウィルス、水痘−帯状庖疹ウィルス、ニワトリ
のポックスウィルス、サイトメガロウィルス、アデノウ
ィルス、狂犬病ウィルスおよびＢ型肝炎ウィルス等が挙
げられる。

レトロウィルスは一本鎖または二本鎖ＲＮＡを含有する
ウィルスと定義されでいる。これらのウィルスは、許容
宿主の細胞代謝を利用しで複製し。

この１クイルスのＲＮＡ遺伝物質を逆転写する。その様
にして生産された大量のＤＮＡｃｉＨＩＶタンパク質や
ＲＮＡに翻訳され、子孫ピリオンが形成される。その様
なウィルスには例えば「スロー（遅発性）」または遅延
型ウィルスと呼称されるウィルスやＨＴＬＶ−ＩやＨＴ
ＬＶ−ＩＩ等のＴ−細胞白血症ウィルスが含まれるが、
最も好ましい例は、ＡＩＤＳに関連したＨＩＶ株（以前
はＨＴＬＶ…「として知られていた）である。

インターフェロンはよく知られている。それらは、天然
ではβインターフェロンおよびｒインターフェロン、並
びに約２０の様々なインターフェロン−αサブタイプか
らなる。本発明の目的と最も関連性の深いそれらの性質
は、それらがインビトロおよびインビボで、細胞をウィ
ルス感染から保護し得るという点である。本発明の方法
また組成物に用いられるインターフェロンは、一般に。

インターフェロン−α、βまたはｒであり、その内、イ
ンターフェロン−ｒが好ましい。組換え細胞培養により
生産されたインターフェロン、天然から単離されたイン
ターフェロン、あるいは、安定な非形質転換セルライン
により生産されたインターフエロンは、インターフェロ
ンのアミノ酸配列変異体またはグリコジル化変異体（非
グリコジル比形のものを含む）と同様、それらが抗ウィ
ルス活性を示す限り１本発明に用いる上で満足すべきも
のである。インターフェロン−ｒは種特異的であること
が分っているので、インターフェロン−ｒは治療を意図
しでいる動物と同じ動物種のものである必要がある。好
ましいインターフェロンはヒトのインターフェロン−ｒ
である。インターフェロンは実質上均質であり、約１×
１０　国際単位／　ｍＱ以上の比活性を有しでいること
が望ましいであろう。

ＴＮＦおよびＬＴには１組換え細胞培養または非形質転
換細胞培養の生産物が包含され、それらには、アミノ酸
配列変異体や（ＬＴの場合）グリコジル化変異体（非グ
リコジル化変異体ＬＴを含む）も含まれる。ＴＮＦまた
はＬＴのいずれかのみ、またはそれらの混合物も適する
。ＴＮＦおよびＬＴは、そのインターフェロンとの用剰
能力においては種特異的でないので、ある１つの種由来
のＴＮＦまたはＬＴは、他の種の治療に有用である。本
発明では、ヒトの成熟ＴＮＦまたはヒトの非グリコジル
化成熟ＬＴを用いるのが好ましい。

ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−βは、単独でまたは最も効果
的な臨床上の応答が表われることが経験上決定された相
互の割合の混合物として用いられる。ＴＮＦは種特異的
でないので、本発明においては、ブタまたはウシ等の他
の動物種に由来するＴＮＦも用い得る。好ましいＴＮＦ
は組換え微生物細胞培養から得られた成熟ヒ）ＴＮＦ−
αである。通常、ＴＮＦは、感受性Ｌ−９２９ネズミ細
胞に対して約Ｉ×１０６　単位７〜以上で細胞溶解作用
を示す（ここに、１単位とは、＠記の特許出願に記載の
如く定義されているものである。この様な記載は本明細
書の一部を構成する）。

本明細書中に示す組成物は、従来からインターフェロン
、ＴＮＦまたはＬＴの治療用の投与に用いられていた薬
学上許容し得るビヒクル（担体）類１例えば生理食塩水
または５％デキストロースを１通常の安定剤および／ま
たはヒト血清アルブミンまたはマンニトール等の賦形剤
と一緒に含有しＣいる。これら組成物は、凍結乾燥され
で、あるいは、滅菌水溶液としで提供される。

通常の技術者ならば、治療用組成物中のインターフェロ
ンα、βまたはｒとＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−βの割合
、インターフェロンとＴＮＦとの正味の割合、およびイ
ンターフェロン（！：ＴＮＦの濃度、並びににｇ当りの
投与量を決定するにあたり、各種の変動因子を考慮する
であろう。治療上の変動因子には、処置すべき動物種、
投与経路。

および患者の臨床状態（治療開始時期に於けるレトロウ
ィルス感染の段階および程度および／または付随的な微
生物感染の状態および程度を含む）などが含まれる。イ
ンターフェロンの初期用量レベルとしでは、約１〜５０
μｇ／ｍ２　が適当である。耐薬量は約２５μｇ／ｍ２
を越えることはないであろう。

ウィルス感染に対する抵抗性を与え、ウィルス感染細胞
を殺すのに有用１１．ＴＮＦまたはＬＴと併用しで投与
されるインターフェロンの川面は。

これまで最小有効量と考えられできた計の約５０％〜０
．１％の範囲が適当である。これらの川面は約５００，
０００国際単位／　７０　ＫＳＩ　（患者の体重）にま
で増加することができるが、通常、約ｉｏｏ、ｏｏｏ単
位／７０Ｋｐよりは少ない。インターフェロンとＴＮＦ
またはＬＴとの相対的す爪量比は、通常、約１０００　
：　１〜１：１であり、約１００　：　１であることが
好ましい。治療用組成物は一般に、インターフェロン約
１×１０３〜ｌＸ１０５　ＩＵ／ｍＱとＴＮＦまたはＬ
Ｔ１ｎｇ〜５μｇ／　ｍＱとを含有する水溶液である。

これらを、制卸または治療すべきウィルス感染に応じて
、経鼻的。

腹腔内、または静脈内投与する。経鼻投与量は一般に約
２５，０００国際単位（容ｆｆｔ　０．１　ｍＱ中）以
下であり、静脈内投与量は約ｓｏｏ、ｏｏｏ　　単位以
下。

通常、１００．０００　　単位以下である。

インターフェロンを、ＴＮＦまたはＬＴと併用した場合
の相剰的な抗ウィルス防御作用はあらゆる咄乳類に広範
囲に適用できる。以下の表１に示したセルラインを２４
ウ工ル組織培養プレートに蒔き、ＴＮＦまたはＬＴとイ
ンターフェロンとを加えてブレインキュベートした。全
てのセルライン力、ＥＭＣ，ＶＳＶおよびＨ３Ｖ−２に
対スル感染（多重感染度はそれぞれ、１．１および１０
０）から、少なくともある程度保護された（細胞変性効
果により決定）。

表　　　　１ 従って、本発明の方法は、人間、牛、豚、鳥類および馬
を含む哺乳類をウィルス感染から保護するのに有用であ
る。患者は１重傷または悪性物を有していることがわか
っているものであってもよく、そうでなくてもよい。

本発明方法は、動物密度の高い農業用動物の間で起こり
得る伝染力の高いウィルス感染、主として、鶏における
ニューキャッスル病や牛におけるシツヒング熱を予防す
る上で、特に有用である。

ワクチンとは異なり、本発明の組成物は、ワクチンを無
効ならしめるような、ウィルス集団中に起こり得る突然
変異に拘らず、あらゆるウィルスに対して有効であり、
流行の開始の最初の徴候の時点で投与して迅速な防御効
果を得、そのことにより動物の全集団にワクチン接種す
る必要がなくなる。

本発明方法はまた、気道感染の予防にも有用である。例
えば、家族の一員がかぜを引いている様な、危険にさら
されている人々を感染から保護するために、インターフ
ェロンと、ＴＮＦまたはＬＴが投与されるであろう。動
物または人間におけるウィルス感染に対して最や好都合
な投与経路は、鼻腔内に噴霧または外科用綿撒糸（ガー
ゼ）で投与する経気道投与である。この治療には、従来
用いられていたインターフェロンの一部のみを用いるこ
とと、治療用処方中にＴＮＦまたはＬＴを含有せしめる
ことを除き、既知の組成物と既知の方法が用いられる。

所望により経鼻製剤には胆汁酸塩または非イオン性のポ
リオキシエチレン・エーテル類等の透過促進剤を加える
。この様な製剤は、指示量のインターフェロン、および
ＴＮＦまたはＬＴ、マンニトール等の安定化剤、あるい
は賦形剤、並びにｐＨ７，４のりん酸バッファー中１重
量％の促進剤を含有することになるであろう。その他の
鼻腔的投与に基づく適当な製剤は、米国特許４．４７６
，１１６　、欧州特許１２７，５３５　Ａ、欧州特許１
２２，０３６Ａ、欧州特許１１１，８４１　Ａおよび欧
州特許１２８，８３１　Ａに記載されている。

所定量のＴＮＦおよびインターフェロンは、それらを−
緒に、あるいは別々に投与する。後者の場合、まずイン
ターフェロンを投与し、２４時間以内にＴＮＦを投与す
る必要がある。患者の臨床応答に応じてＴＮＦとインタ
ーフェロンとを複数サイクルで投与することも本発明の
範囲に含まれる。この治療の方法は、Ｔ細胞の活性化を
導く外来感染または外部から投与されたＴ細胞マイトジ
ェンのいずれかにより、潜伏感染細胞が感染の活動期に
移るのを、攻撃する上で有用といえる。

ＴＮＦとインターフェロンとによる治療は、ウィルス感
染細胞を溶解し、結果的に感染性のウィルスを放出させ
るかもしれないので、治療期間中、以後のウィルス感染
性を中和し得る物質を投与することが好都合である。こ
のことは幾通りかの方法で行うことができる。治療期間
中、好ましくはＴＮＦの投与と同時に、モノクローナル
またはポリクローナル抗レトロウィルス抗体の如き抗体
を投与すると良い。別法として、免疫能力のある患者に
レトロウィルスのワクチン接種を行い、中和抗体を能動
的に導くこともできる。この目的に用いられる適当なワ
クチンには、ＨＩＶｇｐ１２０エンベロープポリペプチ
ドが含まれる。このワクチンがＨＩＶ中和抗体を誘導し
、次いで、この中和抗体を上記の受動免疫法に用い得る
ことが開示されている。放出されたウィルスの潜在的な
感染力を抑制する他の物′貢、例えば、通常、問題のレ
トロウィルスによって認識される細胞表面レセプター（
ＨＩＶの場合、ヘルパーＴ細胞上に存在している０ＫＴ
４＋細胞表面マーカー）と結合し、標的細胞表面へのウ
ィルスの付着を競合的に阻害するｇｐ１２０ｅｎｖある
いはそのフラグメントをＴＮＦと一緒に投与してもよい
。

’Ｔ　Ｎ　Ｆ　ｇよび／またはインターフェロンの相剰
的な抗ウィルスおよび抗腫瘍活性は、治療処決および／
または組成物中に、治療有効量の酸素の遊離ラジカル捕
捉剤（酸素保護酵素やペルオキシダーゼ様活性物質（ｐ
ｅｒｏｘｉｄａｔｔｖｅｌｙ　ａｃｔｉｖｅ　５ｕ−ｂ
ｓ　ｔａｎｃｅ）を含む）を含有させることによりさら
に強化される。その様な物質にはカタラーゼ、超酸化物
デムターゼ、ペルオキシダーゼ、またはクロルペルオキ
シダーゼが含まれるが、それらはＴＮＦおよびインター
フェロンの活性を著しく高める。現在、その様な酵素類
がどの様な機構で本発明のＴＮＦおよびインターフェロ
ンを増強するのかは不明であるが、これらはそれぞれ、
Ｈ２Ｏ２を水と酸素に分触する反応、即ち式： ％式％ で示される反応を触媒することが分っている。カタラー
ゼは市販品から広範囲に入手可能であり、赤血球細胞の
如きヒトの組織から得られる。ペルオキシダーゼは通常
、西洋ワサビから得られる。

ペルオキシダーゼ様活性物質のＴＮＦおよびインターフ
ェロンに対する割合は約１０００　：　１　：　０．１
〜１００：５０：２５とすることができるが、用爪およ
び割合は、当業者既知の種々の変動要因の内、患者の臨
床所見および投与経路に応じて調節する必要がある。

ＴＮＦおよびインターフェロンは静脈内、鼻腔内、筋肉
内投与等の、同一の投与経路で、あるいは別々の投与経
路で投与することができる。いずれか一方の、または両
方の成分を、欧州特許第１７．２００　？　Ａ号に記載
の如きポリラクチドまたはポリヒドロキシブチレート植
え込み剤、あるいはリポソーム等を用いた持続的放出組
成物を介して投与するか、連続注入法で投与することも
できる。今日では、ＴＮＦとインターフェロン占を、上
記の用量で静脈内注入することが好ましい。

大量投与を行った場合の併用治療に基づく副作用を回避
するために、ＴＮＦおよびインターフェロンを、これま
で養子免疫療法と称されていた体外治療法に用いてもよ
い。これらの治療法では、患者の末梢血液中の単核細胞
またはリンパ細胞を、体外血漿搬出法サイクル中で血液
から分離し、インターロイキン−２またはインターフェ
ロンで処理した後、患者の体内に再注入する。この方法
によれば、悪性物に対する患者の免疫応答は極めて刺激
される。レトロウィルス感染の治療のためには、末梢性
単核および／またはリンパ細胞をＴＮＦまたはＴＮＦと
インターフェロンの存在下でインキュベートする外は同
じ一般手法を用いる。

ＴＮＦまたはこの混合治療剤を用いてウィルス感染細胞
を殺す。体外細胞は、リンパ細胞マイトジェン（例えば
フィトヘマグルチニン）おヨヒ／マたはインターロイキ
ン−２の如きキラー細胞活性化剤と一緒にインキュベー
トしてもよい。次いで、細胞を洗浄し、最初に細胞が得
られた患者に再注入するために注入溶媒に再懸濁する。

再注入の後、既に記述した如く、ＴＮＦおよびインター
フェロンを投与することができる。ＴＮＦまたはＴＮＦ
とインターフェロンの至適用量、および患者のリンパ細
胞の体外治療におし１て好適な条件は、常法により患者
のウィルス力価を測定すること、並びに患者の臨床所見
の改善度を評価することによって定められる。

本発明の治療に適した人々は、レトロウィルス感染にさ
らされるおそれのある人、または、その様な感染に事実
上さらされたことを示す徴候を有する人である。危険性
を有する人々には、同性愛者、静注薬物の使用者、およ
びＨＩＶ抗体に関するスクリーニングをなされていない
血液を用いた輸血、あるいは該血液から調製された他の
生産物を投与された人々等の危険性の高い人々も含まれ
る。レトロウィルスにさらされたことの徴候には。

血清の抗ＨＩＶ抗体への変換、ＨＩＶに関する血清アッ
セイの陽性反応、ＡＩＤＳ関連コンプレックス（ＡＲＣ
）または明らかなＡＩＤＳ症状等が含まれる。ＡＩＤＳ
患者はカポジ肉腫等の悪性腫瘍、ニューモジステイス・
カルニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓｃａｒｉｎｉｉ）感
染や口腔カンジダ症の如き外来性微生物感染、神経損傷
、あるいは悪液質（＃ＩＦ痩）に基づいて診断されるこ
ともあり、されないこともある。

本発明は、以下の実施例を参照することにより一層完壁
に理解されるであろう。インターフェロンは組換え細菌
細胞培養の生産物であって、比活性約１０８単位／ＩＮ
１まで精製されたものであった。

ＴＮＦとＬＴもまた組換え物であって、その比活性は約
５Ｘ１０７単位／■であった。

実施例Ｉ　　ＬＴまたはＴＮＦによるヒトインターフェ
ロン−ｒの抗ウィルス活性の増強４時間前に、Ａ３４９
細胞を９６ウエルの底の平らなトレイ〔ファルコン・プ
ラスチックス（Ｆａｌｃｏｎ　Ｐｌａｓｔｉｃｓ））に
２×１０４／ウエルとなるように蒔いた。第１図に示し
た濃度のインターフェロン希釈物を試料とした。その他
の点では、この試料中には、熱で不活化した牛胎児血清
（Ｆｅ２）を５％補充したダルベツコ（Ｄｕｌｂｅｃｃ
ｏ）の改良イーグル（Ｅａｇｌｅ）培地（ＤＭＥ）中に
入れた０、１μｇ／＃ＩｌのＴＮＦまたはＬＴ、グルタ
ミン（２ｍＭ）、ペニシリン（１００Ｕ／ｆｆｉ／）お
よびストレプトマイシン（１００μｇ／ｌｕｇ　）を含
有させた。

対照試料は、ａ）インターフェロン、ＴＮＦまたはＬＴ
を含まない、ｂ）ＴＮＦのみを含む、あるいはｃ）ＬＴ
のみを含むものである。３７℃で１８時間インキュベー
トした後、感染の多重度（ｍｕＨｉｐ−１ｉｃｉｔｙ　
ｏｆ　１ｎｆｅｃｔｉｏｎｒ　ＭＯＩ　Ｊ、感染ワイル
ス／細胞比）１として、培養上清を、２チ牛脂児置き換
えた。生存細胞をクリスタル・ノくイオレットで染色し
、マイクロエリザ・オートリーダー〔ＭＲ５８０、ダイ
ナチク（Ｄｙｎａｔｅｃｈ）：ｌを用いて力価を定量す
ると共に肉眼で確認することにより細胞毒性作用（ＣＰ
Ｅ）を求めた。ＣＰＥ抗ウィルス力価は細胞毒性の５０
％阻害を認めた希釈率の逆数で表わし、ヒトインターフ
ェロン−γの国際基準試料（五〇ｇ２３−９０１−５３
０　）に対して標定したものである。

第１図から明らかな如く、これらのインターフェロン−
ｒ濃度におけるインターフェロン−ｒの抗ウィルス活性
はＬＴおよびＴＮＦの存在によって相剰的に高められて
いる。インターフェロン−ｒの抗ウィルス力価は、濃度
１　ｎｇ／ａｅ以上において大きく増加した（データー
は示さず）。しかしながら、ＬＴまたはＴＮＦは、イン
ターフェロン−γが低濃度であり、殆んど効果のない濃
度で存在している場合に標的細胞を保護する上で非常に
打用であった。

ＴＮＦおよびＬＴの濃度が０．１μＶ泗でな（１μｇ／
ａｌでアリ、インターフェロンがウシ由来であり、標的
細胞がウシＭＤＢＫであって、ウィルスがｖＳｖである
ことを除いて実施例１の方法を繰り返して行った。ＣＰ
Ｅアッセイの結果を第２図に示す。この場合にも、ＴＮ
ＦまたはＬＴの存在により保護が激増された。このデー
ターはまた、保護作用において、ＴＮＦまたはＬＴの供
給源の種は重要でなく、それらは、ヒト以外の他の哺乳
類にも適用し得ることをも示している。

実施例３　　Ａ３４９細胞のＶＳＶ感染からの保護 被検ウィルスがｖＳＶであり、ヒト組換えインターフェ
ロン−γとＴＮＦとをそれぞれ連続１００倍希釈よび２
倍希釈すること、並びにＴＮＦ１μν欝およびインター
フェロン−ｒ１０μｍｍｌ！から出発することを除き、
実施例１の方法を繰り返して行った。結果を、クリスタ
ル・バイオレットで染色した細胞培養平板で示す（第３
図）。インターフェロン−ｒは濃度域０．０００１〜１
１０１ｔにおいて細胞毒性作用効果を示さず、これは、
ＴＮＦ濃度が１ａｇ／ｌｌ！から１　ｎｇ／／ｌｅに減
少する場合も同様であった。ウィルス感染およびウィル
ス非感染対照は図示した如く、予想通りの結果を与えた
。しかしながら、ＴＮＦとインターフェロン−とを組合
わせると、各々約１　ｐｇ／ｒｕｇ　−１ｎｇ／ｍｅお
よび１０１１ｇ／ａｔ　−０，１ｎｇ／Ｍｅ濃度範囲に
おいても細胞はＶＳＶ感染から保護された。

ＶＳＶ／Ａ３４９と同様、ＥＭＣ／Ａ３４９を用いて実
施例１の方法を行った。インターフェロンの濃度は、イ
ンターフェロン−αに関して１０ｎｇ／ｌａｇ　、イン
ターフェロン−βに関して１０ｎνＵであった。第４ａ
図に示す如く、インターフェロン−ａ、および程度は低
し）がインターフェロン−βは、ヒ１−ＴＮＦまたはＬ
Ｔと相別的な抗ウィルス作用を示した。同様の結果が、
ＭＤ　ＢＫ／Ｖ　Ｓ　Ｖおよびウシインターフェロン−
αおよびｒを用いて得られた（第４ｂ図）。

実施例５　ウィルス複製の相別的阻害作用Ａ３４９細胞
を２４ウエルの組織培養プレート〔コスタ−（Ｃｏｓｔ
ａｒ）］　に蒔いて２４時間おいた後、種々の濃度のヒ
１−ＬＴ、ＴＮＦまたはインターフェロン−γで１８時
間処理し、培地を除去しテカら、ＥＭＣ，ＶＳＶ、アデ
ノウィルス−２（Ａｄ−２）および単純庖疹−２（ＨＳ
Ｖ−２）ウィルスでチャレンジした。ＥＭＣ，ＶＳＶ％
Ａｄ−２およびＨＳＶ−２の感染の多重度はそれぞれ１
．１．１００および１００であった。ＴＮＦ。

ＬＴおよびインターフェロン−γの濃度域は０，１ａｇ
／！ｌ〜１０μν欝であった。２時間の吸着期間の後、
上清を吸引除去して未吸着ウィルスを除き、３７℃の５
％ＦＣ５含有培地中で細胞をインキュベートした。２４
時間後、培養物（培地と一緒になった細胞）を２回、凍
結−解凍することにより細胞を溶解し、次いで、４００
）ｇで１０分間遠心し、ラゲルージスマンら（Ｒａｇｅ
ｒ−Ｚｉｓｍａｎ）　ｒプロシーデインダス・オブ・ザ
・ソサエティ・フォー・エクスペリメンタル・メデイン
ン（Ｐｒｏｃ　、Ｓｏｃ。

Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、）　Ｊ　１４２：１１７４−１１７９
（１９７３）の記載したプラークアッセイによりウィル
スの収量を求めた。リゼイトの連続着駅液を、全面生長
したＡ３４９細胞に加え、３７℃で２時間インキュベー
トした。上清を吸引して除去した後、５％ＦＣ８と０．
７％アガロースとを含んだ培地を細胞に重層した。２４
〜４８時間後、プラークをホルムアルデヒドで固定し、
クリスタル・バイオレットで染色して観察した。プラー
ク形成単位／　ｍｅ　（ＰＦＩＪ／ｍｅ）で表わされる
ウィルスの収率を求め、結果を第５ａ〜５ｄ図に示した
。これらの図は、抗ウィルス活性の相別的増強作用、特
にインターフェロン−γ濃度の低い場合における同作用
を示すものである。

ＭＯＩＩＯにおいてｖＳｖを用い、インターフェロン、
ＴＮＦまたはＬＴと一緒にブレインキュベーションする
ことな〈実施例１の方法を行った。

ＶＳＶを細胞と一緒に３７℃で４時間インキュベートし
た後、感染細胞からウィルスを流し去った。

次いで、ＶＳｖに感染した、あるいは感染していない細
胞を、０．１ａｇ／！ｅのインターフェロン単独で、あ
るいは表２に示すような組み合わせによって処理した。

３７℃において１２および１８時間処理した後、トリパ
ン・ブルーまたはヨウ化プロピジウムで染色して細胞の
生存力を調べた。結果を下記の表２に示す。

対照　　　１００　９２７０ ＬＴ　　　　　　　　１００　　　　４１２９ＴＮＦ　
　　　　　　１００　　　　３８３１インターフェロン
−ｒ　　　１００　　　　　　９１　　　６６ＬＴ＋イ
ンターフエロトγ　１００　　　　　　１４　　　　０
ＴＮＦ＋インターフェロン−γ　１００　　　　　　　
１２　　　　　０表２から、ウィルス感染細胞は、イン
ターフェロン−ｒと、ＴＮＦまたはＬＴを併用すると相
別効果的に死滅することが分る。前の実施例で得られた
結果と考え合わせて、これは、ＴＮＦまたはＬＴと、イ
ンターフェロンとの混合物が、■非感染細胞を保護し、
■ウィルス感染細胞を殺すという２つの機構によりウィ
ルス感染に対抗する作用を有することを示唆している。

実施例７　　ＨＩＶ感染の予防 ＯＫ　Ｔ　、十陽性のヒトＴ−細胞白血病セルラインＨ
９、ＨｕＴ　７８およびＵ９３７をＲＰＭＩ−１６４０
培地中に懸濁し、３７℃で培養した。培養物を遠心して
培地から細胞を分け、得られた細胞を別（７）ＲＰＭＩ
　　１６４０中ニＩ　Ｘ　１０６／　ｗｅ（１）密度に
なるよう再懸濁した。この再懸濁培養物に充分量のＴＮ
Ｆ−αおよびγインターフェロンを加え、０、１　ｔｔ
ｇ／ｌｌ　Ｔ　Ｎ　Ｆ−α　および０．１　ｆｉｇ／ａ
ｌ　ｒインターフェロントシた。ＴＮＦ−αとγインタ
ーフェロンとの併用は非感染）！ｕＴ７８　およびＨ９
細胞には無毒であった。次いで、培養物を３７℃で２４
時間インキュベートした後、ＨＩＶＩＸＩＯ〜ｍ単位／
　ｍｅを加えた。このｃｐｍ単位は逆転写酵素活性に基
づいて決定された（３１　）　：　１単位が１個のピリ
オンの逆転写酵素活性を表わすように調整された。さら
に３日間、３７℃でインキュベートシタ後、　ＨＩ　Ｖ
のｐ２４（コア）タンパク質に対するネズミのモノクロ
ーナル抗体と、標識したヤギの抗−マウスイムノグロブ
リン（３２）を用い、間接的な免疫螢光法によってウィ
ルス抗原に関して細胞をスクリーニングした。繰り返し
て行った実験の結果をＨＩＶコアタンパク質を含有する
細胞の割き（％）として、以下に示す。

表３ 試　薬　　　　　　　感染した細胞の割合（％）ＨｕＴ
７８　　　　　Ｈ９０９３７ 対照　５４６８　４８３６　１１１４ ＴＮＦ司　　　２７　３４　　３２１Ｂ　　　　７　　
８γインターフエロン６３　　５１　　　　　４２　　
４１　　　　　１２　　１１これらの結果は、ＴＮＦと
インターフェロンとの併用治療が、さもなくば感染し易
いＴ細胞をＨ■Ｖ感染から防御する上で極めて有用であ
ることを示している。

実施例８　　ＨＩＶ感染細胞の処理 ＲＰＭＩ−１６４０１地中、Ｉ　Ｘ　１０５／ｍｅ　（
Ｄ　Ｈ９およびＲＰＭＩ−１７１３８１Ｊンパ芽球細胞
を１μ２／　ｍｅのポリブレンの存在下、ＨＩ　Ｖ　Ｉ
Ｘ　１１０３ｃｐ／　ｍｅに暴露し、ＨＩＶ感染細胞の
割合を高めた。

これらの細胞を約３０日間培養し、その間、３〜５日ご
とに培地をｍ１ｌｌ、細胞を１週間に４１回継代培養し
た。ｌＸ１０６／１ｎｌの細胞を含む培養物に充分量の
ＴＮＦ−αとγ−インターフェロンとを実質上、同時番
こ加え、Ｊ２を下の表４に示す濃度にした。これらの一
度においては、ＴＮＦ−αとγインターフェロンの混合
物が非感染のＨ９およびＲＰＭＩ−１７８８細胞に対し
て細胞毒性を表わスコトハない。培徨物を３７℃で３日
間インキュベートした後、トリパン・ブルー染色によっ
て生年細胞の割合（％）を測定した。繰り返して行った
実験の結果を表４Ｉこ示す（ＮＤ＝測定せず）。

表４ 対照　　　−８９７６９５８６ フエロン　　　　　０．１μｇ／ｍｌ　　ｓｓ　　７４
　８０　８２ＴＮＦ−αおよび　　１．０ｎｇ／ｍｌ　
　ＮＤ　　ＮＤ　　６８　７２γインターフエロン　　
　０．１μｇ／ｍｌ　　　５０　　４２　　３４　　５
３これらの結果から、ＴＮＦとインターフェロンとの併
用がａｌｔ依存性の相劇的なウィルス感染細胞死滅化作
用を示し、より低い程度であるがＴＮＦ−α単独でも死
滅化を示すことが分る。これと。

ＴＮＦまたは混合物の非感染網１泡に対する防御作用を
一緒にすれば、ＴＮＦ療法または併用療法のレトロウィ
ルス感染症の治療における価値が示されることになる。

実施例７に記載の如（、ＨｕＴ７８細胞を０．１μｙ／
　ｍｅづつのＴＮＦ−αおよびγインターフェロンで処
理した後、ＨＩＶに感染させた。３７℃で２日間インキ
ュベートした後、以ドの如くにしてＨ■Ｖ感染細胞から
唸ＲＮＡを抽出した。得られた細胞をＰＢＳで洗浄し、
０．５％ＮＰ−４０とＶＲＣ（ＢＲＬ）　１７ｔｔｌと
を含んだ１８Ｍバッファー（１０ｍＭトリスｐＨ７，５
，０，１５Ｍ　ＮａＣｌ、２ｍＭＭ１ｃｅ２）０．３５
−に、０℃で再懸濁した。３−５汁段、溶解した細ｉ泡
から咳を遠心分層した。ｍＲＮＡを含有している上清を
１％５ＤＳｅ有ＴＳＥバツフアー（１０ｍＭ）リスｐＨ
７，５，０，１５Ｍ　ＮａＣｌ。

５　ｍＭ　ＥＤＴＡ　）　０．３５　ｍｅに加え、フェ
ノール：クロロホルム：イソアミルアルコール（２４：
２４：１）０．７ｍｅで３回抽出した。フェノールヲ、
水と０．１％８−０Ｈ−キノリンで平衡化した。ＥｔＯ
Ｈと酢酸ナトリウムによって水層からＲＮＡを析出させ
た。オリゴ（ｄＴ）セルロース電気泳動によりポＩＪ（
Ａ）ＲＮＡを調製した（３６）。文献記載の方法に従い
、ＲＮＡＩμｙ／レーンを用いてノーザンハイブリダイ
ゼーションを行った（３７）。

結果を第６図に示す。この図から、ＴＮＦ−αで前処理
することにより宿主細胞内でのＨＩＶＲＮＡの出現が抑
制されるが、ＴＮＦとインターフェロンとを一諸に用い
ると、出現するＲＮＡは、はるかに少なくなることが分
る。これらの結果は、第３図に示した感染に関するデー
ターと一致するものである。ＴＮＦおよびインターフェ
ロンによる処理の有無に関係なく、アクチン（構造タン
パク質）のｍＲＮＡには変化が認められず、このことは
、ＴＮＦ−αおよびインターフェロンの作用が一般的な
細胞の増殖でなく、ウィルスを標的としていることを示
すものである。

実施例１０　　ＡＩＤＳおよびＡＲＣ患者の治療方法（
プロトコール） ＨＩＶ抗体に関して血清学的２こ陽性の男性であって、
その血液がインビトロにおいて、証明可能なＨＩＶ力価
に関して細１泡培滲陽性である患者を用いた。これらの
患者は一般に、症状的にＡＩＤＳまたはＡＲＣと一致し
ており、ＨＩＶ抗体について血清転換を来している。

治療対象群を、以下の処置因子に基づいてさらに群分け
した。

１、同時的または連続的なＴＮＦおよびインターフェロ
ン治療。

２、静脈内または筋肉内注入法。静脈内注入の場合は、
−回投与（ポーラス）あるいは連続注入法（１，２，５
，１０日間）。

３、数時間番こわたる投与計画であって、ＴＮＦ１μ’
Ｊ／ｒｔｆ　、およびインターフェロン１μ９７ｒｄ　
から出発し、各試薬を、耐薬性に応じて５，１０．２５
．５０・・・μｙ／−と増加する。

４、ＴＮＦとインターフェロンの割合をｔ：１００〜１
００　：　１とする。

５、治療を繰り返す周期を１〜５とし、１．２．５また
は１０日間の中間的な治療中止を行う。

６、　インターフェロンのタイプの選択と割合を、αと
β、１：１０−１０：１、βとγ、１：１０−１０：１
、γ、αまたはβのみ、１：１：１〜１０：１：１〜１
：５：５の如くにする。

適当な開始計画は、ＡＲＣ患者をＴＮＦ−α、γインタ
ーフェロンおよびαインターフェロンで併用治療するこ
とからなるであろう。この組合わせの本のを、静脈内注
入ポンプであって、ＴＮＦ−αを１〜１０　ｔｔ９／ｌ
ｒｚ／２４時間、γインターフェロンを１−１０１１ｙ
／ｄ／２４時間、そしてαインターフェロンを１−１０
μｙ／ｌｒｉ／２４時間の投与量で与える様調整された
ポンプを用い、連続注入して投与した。患者の耐薬！ｔ
Ｇこ従って投与量を増加させてもよい。この注入は一週
間続行された。

患者は、次の１週間を休み、再び繰り返し注入を受けた
。発熱、悪寒等の副作用は１通常の方法もしくは投与量
を減することで処置された。上記のものと併用する抗ウ
ィルス剤として抗ＨＩＶ抗体またはｙｐ　１２０　ｅｎ
ｖを用いる場合、これらの抗体またはｅｎｖ　　ポリペ
プチドは、この併用治療で放出されたピリオンを封鎖さ
せ得る様な計算■で存在させる。これは、抗体のピリオ
ンに対する親相性、その中和力価、並びに患者のウィル
ス力価に依存するであろう。適当用量の決定は、日常の
取扱い者の技術範囲のことであろう。

治療期間中および治療柊ｒ後の患者の臨床所見およびウ
ィルス感染力価を嫁視する。治療の結果、実施例７−９
におけるインビトロ研究の結果と一致して、統計的に有
意差のある割合の患者のウィルス力価および免疫能が改
善された。

ンターフエロンーγおよび／またはＴＮＦ−αの抗ウィ
ルス活性 被検試料と一緒にインキュベートする２４時間前に、９
６−ウェルの底の平らなトレー（ファルコン・プラスチ
ックス）に、Ａ３４１１１抱を２Ｘ１０４／ウエルの割
合で蒔いた。被検試料は第７図に示した通りである（ｒ
ｃＡＴＪはカタラーゼを意味する）。その他の点では、
この試料中には、５％熱不活化牛脂児血／＃（Ｆｅ２）
、グルタミン（２ｍＭ）、ペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ
＞、およびストレプトマイシン（１００μｙ、、ｉｍｅ
）を補充したダルベツコの改良イーグル（ＤＭＥ）培地
か含まれている。３７℃で１８時間インキュベーション
した後、インターフェロン、ＴＮＦおよびカタラーゼを
含まず、２％の牛胎児血清と感染の多重度（ｒＭＯＩＪ
、感染性ウィルス／細胞比）１のＥＭＣウィルスを含ん
だ調製したばかりのＤＭＥ培地によって、培養上清を１
１喚した。生存可能な細ｌａをクリスタル・バイオレッ
トで染色することにより細胞毒性作用（ＣＰＥ）を決定
し、マイクロエリザ・オートリーダー（ＭＲ５８０、ダ
イナチク）を用いて力価を定量的に監視し、さらに肉眼
によって崎認した。ＣＰＥ抗ウィルス力価は、細、ｌｉ
！毒性を５０％阻δすることが認められた希釈率の逆数
で表わされ、これをヒトインターフェロン−γの国際仄
準試料（五〇ｐ２３−９０１−５３０）を用いて検定し
た。

第７図に示す様に、カタラーゼはインターフェロン−γ
８よびＴＮＦ−αの抗−ウィルス作用を劇的かつ相別的
に増強した。この効果はＥＭＣウィルスに特異的なもの
ではない。この効果は様々な許容細胞やウィルスにおい
て認められた。

以下に本明細書で引用した文献を列挙する。

１、　ゴツトリーブ（ＧｏｔｔｌｉｅＢ　、　Ｍ　、）
ら、ニューイングランド・ジャーナル・オブ・メデイシ
ン（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌ、　Ｊ、Ｍｅｄ、　）、３０５　
：１４２５−１４３１（１９８１）。

２、マスシー（Ｍａｓｕｒ、　Ｈ，）ら、ニューイング
ランド・ジャーナル・オブ・メデイシン、３０５：１４
３１−１４３８（１９８１）。

３、　シーが７１７　（Ｓｉｅｇａｌ、　Ｆ、　）ら、
ニューイングランド・ジャーナル・オブ・メデイシン、
３０５：　１４３９−１４４４（１９８１）。

４、セリーグマン（Ｓｅｌｉｇｍａｎ、　Ｍ、　）ら、
ニューイングランド・ジャーナル・オブ・メデイシン。

３１１：１２８６−１２９２（１９８４）。

５、　レイン（Ｌａｎｅ、Ｈ，）　、マスラー、エドガ
ー（Ｅｄｇａｒ　、　Ｇ、　）、ホーレン（Ｗｈａ　ｔ
ｅｎ　、　Ｇ、　）およびファーシイ（Ｆａｕｃｉ　、
　Ａ、　）　、ニューイングランド・ジャーナル・オブ
・メデイシン、３０９：４５３−４５８（１９８３）。

６、チーグラー（Ｚｉｅｇｌｅｒ、　Ｊ、　）　　ら、
ニューイングランド・ジャーナル・オブ・メデイシン。

３１１　：５６５−５７０（１９８４）。

７、　バールーシノッシイ（Ｂａｒｒｅ−５ｉｎｏｕｓ
ｓｉ　。

Ｆ、）　　ら、サイエンス（５ｃｉｅｎｃｅ）　、　２
２０　：　８６８（１９８３）。

８、　モンタグナー（Ｍｏｎｔａｇｎｉｅｒ　、　Ｌ　
、　）ら、ヒトＴ細胞白血病ウィルス（Ｈｕｍａｎ　Ｔ
−ＣｅｌｌＬｅｕｋｅｍｉａ　Ｖｉｒｕｓｅｓ　）、３
６３−３７６（：ｌ−ルド・スプリング・ハーバ−・ラ
ボラトリイ（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｙ　）、ニューヨーク（Ｎｅｗ　Ｙｏ
ｒｋ　）　、　１９８４　）。

９、　ビル？　−（Ｖｉｌｍｅｒ　、　Ｅ、）ら、ラン
セット（Ｌａｎｃｅｔ　）、Ｉ：　７５３−７５７（１
９８４）。

１０、　　ポポビック（ＰｏＰｏｖｉｃ　、　Ｍ　）、
サンガーバラン（Ｓａｒｎｇａｄｈａｒａｎ　、　Ｍ　
、　）　、リード（Ｒｅａｄ。

Ｅ、）　　およびガｏ　（Ｇａ１ｌｏ　、　Ｒ，）、サ
イエンス。

２２４　：４９７−５００　（１９８４）。

１１６　ガロら、サイエンス、２２４：５００−５０３
（１９８４）。

１２、　７エオリノ（Ｆｅｏｒｉｎｏ　、　Ｐ、　）　
　ら、サイ１３．　　レビイ（Ｌｅｖｙ、　Ｊ、　）ら
、サイエンス。

２２５：８４０−８４２（１９８４）。

１４、　　クラララマン（Ｋｌａｔｚｍａｎ　、　Ｄ、
　）ら、サイエンス、２２５：５９−６３（１９８４）
。

１５、゛ジャツブバック（５ｃｈｕｐｂａｃｈ　、　Ｊ
、　）ら。

サイエンス、２２４：５０３−５０５（１９８４）。

１６、サンガーバラン、ボポビツク、ブルツフ（Ｂｒｕ
ｃｈ　、　Ｌ、　）、ジャツブバックおよびガロ、サイ
エンス、２２４：５０５−５０８（１９８４）。　　　
。

１７、　　サーフアイ（５ａｆａｉ　、Ｂ、　）ら、ラ
ンセット、Ｉ　　：　１４３８−１４４０（１９８４）
。

１８、ブルンーベツイネット（Ｂｒｕｎ−Ｖｅｚｉｎｅ
ｔ、Ｆ、）ら、ランセット、Ｉ　：　１２５３−１２５
６（１９８４）。

１９、　　ブルンーベツイネットら、サイエンス、２２
６　：４５３−４５６　（１９８４）。

２０、　　グーデート（Ｇｏｅｄｅｒｔ　、　Ｊ　、　
）　　ら、ランセット、ＩＩ：　７１１−７１５（１９
８４）。

２１、ローレンス（Ｌａｗｒｅｎｃｅ　、　Ｊ　、　）
ら、ニューイングランド・ジャーナル・オブ・メディシ
ン。

３１１　：１２６９−１２７３（１９８４）。

２２、マレ−（Ｍｕｒｒａｙ　、　Ｈ，）ら、ニューイ
ングランド・ジャーナル・オブ・メディシン％３１０：
８８３−８８９（１９８４）。

２３、　　ファーシイら、アナルズ・オブ・インターナ
ル・メデイシン（Ａｎｎ　、　Ｉｎｔ　、Ｍｅｄ　、　
）、１００：９２−１０６（１９８４）。

２４、　　ネーサン（Ｎａｔｈａｎ　、　Ｃ，）ら、ジ
ャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メディシン（Ｊ
。

Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、）、１５８：６７０−６８９（１９８
３）。

２５、エダーカ（Ａｄｅｒｋａ）ら、セル・イムノロシ
イ−（Ｃｅ１ｌ　　Ｉｍｍｕｎ、）、９２　：　２１８
−２２５（１９８５）。

２６、ペニングトン（Ｐｅｎｎｉｎｇｔｏｎ　、　Ｊ　
、）ら、ジャーナル・オブ・イン７エクシオス・デスイ
ーズ（Ｊ　、　Ｉｎｆｅｃｔ、Ｄｉｓ、）、１５３：６
０９−６１２（１９８６￥−１５月）。

２７、　　レインら、クリニカル・リサーチ（Ｃ１ｉｎ
ｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　）　、　３２　：　３５
１Ａ（１９８４）。

２８、クラララマンら、ネーチャー（Ｎａｔｕｒｅ）３
１９　：１０−１１　（ｘｃ＋ｓ６＃、を月）。

２９、ヤマモト（Ｙａｍａｍｏｔｏ　、　Ｊ　、　）ら
、ジャーナル・オブ・インターフェロン・リサーチ（Ｊ
。

Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　、　Ｒｅｓ　、　）、６：１４
３−１５２（１９８６年６月）。

３０、　　ベトシー（Ｂｅｕｔｌｅｒ　、　Ｂ、　）ら
、サイエンス、２２９：８６９（１９８５年８月３０日
）。

３１、ホフマン（Ｈｏｆｆｍａｎ　、　Ａ、）ら、　ピ
ロロシイ（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ　）、１４７：３２６−３
３５（１９８５）。

３２゜　カミンスキイ（Ｋａｍｉｎｓｋｙ　、　Ｌ　、
）ら、プシ ハーデイングス・オブ・ナショナル・アカデミイ・オブ
・サイエンスイズ・ニー・ニス・ニー（Ｐｒｏｃ　、　
Ｎａｔ　、　Ａｃａｄ　、　Ｓｃｉ　、　ＵＳＡ）、８
２　：　５５３５−５５３９（１９８５）。

３３、　　ミュシング（Ｍｅｕｓｓｉｎｇ　、　Ｍ　、
　）ら、ネーチャー、３１３　：４５０−４５８　（１
９８５）。

３４、　　’ｔｉｌｔ名、サイエンス、２２９：８１１
（１９８５手８月３０日）。

３５、　　ラド／ｌ／　（Ｒｕｄｄｌｅ　、　Ｎ　、　
）ら、イムノロシイ・ツデイ（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　
Ｔｏｄａｙ　）　、　１　：　８−９（１９８６）。

３６、アビブ（Ａｖｉｖ、Ｈ，）ら、プロシーディンゲ
ス・オプ・ナショナル・アカデミイ・オブ・サイエンス
イズ・ニー・ニス・ニー、６９：１４０８−１４１２（
１９７２）。

３７、　　トーツス（Ｔｈｏｍａｓ　、　Ｐ、）　、プ
ロシーディンゲス・オブ・ナショナル・アカデミイ・オ
ブ・サイエンスイズ・ニー・ニス・ニー、７７：５２０
１−５２０５（１９８０）。

【図面の簡単な説明】

？５１図および第２図は、インターフェロン−γの抗ウ
ィルス作用に対するＬＴまたはＴ　Ｎ　Ｆの相別作用を
表わすグラフである。第３図は１種々の濃度のＴＮＦお
よびインターフェロン番こよる細胞層４のウィルス感染
からの保護作用を示す細１泡陪徨プレートの写真の嘆写
菌である。第４ａおよび第４ｂ図はインターフェロン−
α、βまたはγの抗ウィルス作用に及ぼすＴＮＦまたは
ＬＴの増強効果を示すグラフである。第５　ａ−５ｄ図
はインターフェロン−Ｔのウィルス複製阻ざ作用蔭こ及
ぼすＴＮＦまたはＬＴの増強効果を示すグラフである。 第６図は、ＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−γで前処理したＨ
ｕＴ７Ｂ　　細胞と対照細胞とをＨＩＶ感染させた場合
の、　ＨｕＴ７８　ｉｔ胞ｔこ８けるＨＩＶｍＲＮＡの
著しい減少を示すノーザンゲルの写真の模写図である。 畢７図はＴＮＦ−αおよび／またはＩＦＮ−γとカタラ
ーゼとを併用した場合の、抗ウィルス防御効果を示すグ
ラフである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、抗ウィルス治療有効量である約１００，０００国際
   単位以下のインターフェロンとＬＴまたはＴＮＦとを含
   有してなる組成物。 ２、エアーゾルである第１項記載の組成物。 ３、ＬＴまたはＴＮＦの量がインターフェロンの１０重
   量％以下である第１項記載の組成物。 ４、インターフェロンがインターフェロン−γである第
   １項記載の組成物。 ５、ＬＴとＴＮＦとの混合物を含んでいる第１項記載の
   組成物。 ６、ウィルス感染した、あるいはウィルス感染のおそれ
   のある哺乳類に、抗ウィルス有効量の（ａ）インターフ
   ェロンと、（ｂ）ＴＮＦまたはＬＴを投与することから
   なる方法。 ７、ウィルス感染が気道感染である第６項記載の方法。 ８、インターフェロンと、ＴＮＦまたはＬＴとを同時投
   与する、第６項記載の方法。 ９、インターフェロンと、ＴＮＦまたはＬＴとを鼻腔内
   投与する第７項記載の方法。 １０、ＴＮＦまたはＬＴを約５μｇ／Ｋｇ以下の抗ウィ
   ルス有効量投与する第６項記載の方法。 １１、ウィルス感染の治療または予防法であつて、感染
   動物またはその様な感染のおそれのある動物に治療有効
   量の腫瘍壊死因子または腫瘍壊死因子とインターフェロ
   ンとを投与することからなる方法。 １２、腫瘍壊死因子が腫瘍壊死因子−αである第１１項
   記載の方法。 １３、インターフェロンがインターフェロンα、βまた
   はγである第１１項記載の方法。 １４、インターフェロンがインターフェロンγである第
   １１項記載の方法。 １５、感染がＨＩＶ感染である第１１項記載の方法。 １６、動物が検出可能な悪性腫瘍を有しない第１１項記
   載の方法。 １７、腫瘍壊死因子または腫瘍壊死因子とインターフェ
   ロンとを養子免疫療法により、エクス・ビボ投与する第
   １１項記載の方法。 １８、腫瘍壊死因子よりも先にインターフェロンを投与
   する第１１項記載の方法。 １９、インターフェロンが、γインターフェロンと、α
   またはβインターフェロンとの混合物である第１１項記
   載の方法。 ２０、腫瘍壊死因子とインターフェロンの投与量が、そ
   れぞれ、連続的な静脈内注入において、１〜２５μｇ／
   ｍ＾２／２４時間である第１１項記載の方法。 ２１、ウィルスの感染性を中和し得る抗体をさらに投与
   することを含む第１１項記載の方法。 ２２、腫瘍壊死因子とインターフェロンの投与を１〜５
   サイクル繰り返す第１５項記載の方法。 ２３、腫瘍壊死因子または腫瘍壊死因子とインターフェ
   ロンとを投与する前に動物をＨＩＶに対して免疫するこ
   とをも含む第１５項記載の方法。 ２４、抗ウィルス治療量の、生理学的に許容し得る酸素
   遊離−ラジカル捕捉性物質を動物に投与することをも含
   む第１１項記載の方法。 ２５、該物質がカタラーゼである第２４項記載の方法。 ２６、該物質がヒト赤血球カタラーゼである第２５項記
   載の方法。 ２７、腫瘍壊死因子、インターフェロンおよび酸素−遊
   離ラジカル捕捉性物質を含む組成物。 ２８、物質がペルオキシダーゼ様活性を有する酵素であ
   る第２７項記載の組成物。 ２９、酵素がヒト赤血球カタラーゼである第２７項記載
   の組成物。 ３０、さらに（ａ）レトロウィルスの複製または（ｂ）
   細胞表面受容体へのレトロウィルスの結合を阻害し得る
   物質をも含んでいる第２７項記載の組成物。 ３１、腫瘍壊死因子、インターフェロン、および（ａ）
   レトロウィルスの複製または（ｂ）細胞表面受容体への
   レトロウィルスの結合を阻害し得る物質を含んでいる組
   成物。 ３２、細胞表面受容体へのレトロウィルスの結合を阻害
   し得る物質がレトロウィルスの表面膜ポリペプチドに対
   する抗体である第２４項記載の方法。