JPS62238465A - 腺癌抗原の定量法 - Google Patents
腺癌抗原の定量法Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は臨床診断の分野に係り、本願はヒト腺癌の臨床
診断に適用できる腺癌抗原の定量法を提供する。
診断に適用できる腺癌抗原の定量法を提供する。
従来の技術
抗ヒト肺腺癌モノクローナル抗体ＡＬＣ−１８６（以下
ＡＬＣ−１８６という）は本発明者が作成したモノクロ
ーナル抗体で、これを用いる血清診断系における肺腺癌
の陽性率は４８％である（特願昭６０−２２５３２７＞
。抗ヒト胃腺癌モノクローナル抗体ＡＭＣ−３８２（以
下ＡＭＣ−３８２という）は本発明者が作成したモノク
ローナル抗体で、これを用いる血清診断系における胃癌
の陽性率は６１．５％である（特願昭６ｌ−４８８００
）。
ＡＬＣ−１８６という）は本発明者が作成したモノクロ
ーナル抗体で、これを用いる血清診断系における肺腺癌
の陽性率は４８％である（特願昭６０−２２５３２７＞
。抗ヒト胃腺癌モノクローナル抗体ＡＭＣ−３８２（以
下ＡＭＣ−３８２という）は本発明者が作成したモノク
ローナル抗体で、これを用いる血清診断系における胃癌
の陽性率は６１．５％である（特願昭６ｌ−４８８００
）。
発明が解決しようとする問題点
上記、ＡＬＣ−１８６を用いる肺腺癌の血清診断系およ
びＡＭＣ−３８２を用いる胃腺癌の血清診断系は、現状
において臨床的価値は大きいが、血清を用いる癌の検診
に右いては、さらに高い陽性率が得られる検診方法が要
望されている。
びＡＭＣ−３８２を用いる胃腺癌の血清診断系は、現状
において臨床的価値は大きいが、血清を用いる癌の検診
に右いては、さらに高い陽性率が得られる検診方法が要
望されている。
問題を解決するための手段
本発明者は、抗ヒト肺腺癌モノクローナル抗体ＡＬＣ−
１８６と抗ヒト胃腺癌モノクローナル抗体ＡＭＣ−３８
２との混合物を第一抗体とし、酵素標識したＡＬＣ−１
８６およびＡＭＣ−３８２の混合物を第二抗体とするサ
ンドイッチ方式の酵素免疫測定法によれば、腺癌の血清
診断において、それぞれのモノクローナル抗体単独で用
いる系に比べ顕著に高い陽性率が得られることを見い出
し本発明を完成するに至った。
１８６と抗ヒト胃腺癌モノクローナル抗体ＡＭＣ−３８
２との混合物を第一抗体とし、酵素標識したＡＬＣ−１
８６およびＡＭＣ−３８２の混合物を第二抗体とするサ
ンドイッチ方式の酵素免疫測定法によれば、腺癌の血清
診断において、それぞれのモノクローナル抗体単独で用
いる系に比べ顕著に高い陽性率が得られることを見い出
し本発明を完成するに至った。
以下本発明について詳細に説明する。
本発明によれば、抗ヒト肺腺癌モノクローナル抗体ＡＬ
Ｃ−１８６と抗ヒト胃腺癌モノクローナル抗体ＡＭＣ−
３８２との混合物を第一抗体とし、これを固相化し、こ
れにヒト血清検体を反応させて腺癌抗原を結合させ、つ
いで酵素で標識したＡＬＣ−１８６およびＡＭＣ−３８
２の混合物を第二抗体として、前記第一抗体に結合した
腺癌抗原に結合させ、結合した第二抗体の量を標識した
酵素の活性を測定することにより、血清検体中の腺癌抗
原を定量することができる。
Ｃ−１８６と抗ヒト胃腺癌モノクローナル抗体ＡＭＣ−
３８２との混合物を第一抗体とし、これを固相化し、こ
れにヒト血清検体を反応させて腺癌抗原を結合させ、つ
いで酵素で標識したＡＬＣ−１８６およびＡＭＣ−３８
２の混合物を第二抗体として、前記第一抗体に結合した
腺癌抗原に結合させ、結合した第二抗体の量を標識した
酵素の活性を測定することにより、血清検体中の腺癌抗
原を定量することができる。
ＡＬＣ−１８６およびＡＭＣ−３８２は、本発明者が先
に特願昭６０−２２５３２７ 、特願昭６１−４８８０
０で開示したモノクローナル抗体であり、該モノクロー
ナル抗体産生能を有するハイプリドーマ株ＡＬＣ−１８
６（以下ＡＬＣ−１８６株という）、ＡＭＣ−３８２（
以下ＡＭＣ−３８２株という）を用いて次のとおり製造
できる。雨林は、英国Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏ１１ｅ
ｃｔｉｏｎ ｏｆ 八ｎｉｍａｌ Ｃｅ１ｌ
Ｃｕ１ｔｕｒｅにＮＣＡＣＣ８５０８２９０３およびε
ＣＡＣＣ８６０２２７０１としてそれぞれ寄託しである
。
に特願昭６０−２２５３２７ 、特願昭６１−４８８０
０で開示したモノクローナル抗体であり、該モノクロー
ナル抗体産生能を有するハイプリドーマ株ＡＬＣ−１８
６（以下ＡＬＣ−１８６株という）、ＡＭＣ−３８２（
以下ＡＭＣ−３８２株という）を用いて次のとおり製造
できる。雨林は、英国Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏ１１ｅ
ｃｔｉｏｎ ｏｆ 八ｎｉｍａｌ Ｃｅ１ｌ
Ｃｕ１ｔｕｒｅにＮＣＡＣＣ８５０８２９０３およびε
ＣＡＣＣ８６０２２７０１としてそれぞれ寄託しである
。
プリスタン処理［２，６，１０，１４−テトラメチルペ
ンタデカン（Ｐｒｉｓｔａｎｅ） ０．５ｍｌを腹腔内
投与し、１〜２週間飼育する〕した８〜１０週令のＢＡ
ＬＢ／ｃあるいはヌードマウス（雌）に、ΔＬＣ−１８
６株またはＡＭＣ−３８２株の細胞２〜４ Ｘ １０５
〜１細胞／匹を腹腔内注射する。１０〜２１日でハイブ
リドーマは腹水癌化する。このマウスから腹水を採取し
、５％硫酸アンモニウムにて塩析し、リン酸二ナトリウ
ム１．８３ｇ＃、リン酸−カリウム０．２１ｇ／ｆｆお
よび食塩７．６５ｇ＃からなる液（ｐＨ７，２＞（以下
ＰＢＳと略す）に食塩０．５Ｍを加えた液で透析後、セ
ルロファインＧＣＬ−２０００（生化学工業社製）（ベ
ット・ボリューム７５０ｍ１）のカラムに流速１５ｍ１
／ｈｒで通塔し、ＩｇＭ画分を集め精製モノクローナル
抗体とする。
ンタデカン（Ｐｒｉｓｔａｎｅ） ０．５ｍｌを腹腔内
投与し、１〜２週間飼育する〕した８〜１０週令のＢＡ
ＬＢ／ｃあるいはヌードマウス（雌）に、ΔＬＣ−１８
６株またはＡＭＣ−３８２株の細胞２〜４ Ｘ １０５
〜１細胞／匹を腹腔内注射する。１０〜２１日でハイブ
リドーマは腹水癌化する。このマウスから腹水を採取し
、５％硫酸アンモニウムにて塩析し、リン酸二ナトリウ
ム１．８３ｇ＃、リン酸−カリウム０．２１ｇ／ｆｆお
よび食塩７．６５ｇ＃からなる液（ｐＨ７，２＞（以下
ＰＢＳと略す）に食塩０．５Ｍを加えた液で透析後、セ
ルロファインＧＣＬ−２０００（生化学工業社製）（ベ
ット・ボリューム７５０ｍ１）のカラムに流速１５ｍ１
／ｈｒで通塔し、ＩｇＭ画分を集め精製モノクローナル
抗体とする。
蛋白量の定量は、フォーリン法および２８０ｎｍでの吸
光度［１，０（ＯＤｚ＊ｏ ） ′＝、イムノグロブリ
ンＭ ｌａＩｇ／ｍｌｌより算出する。
光度［１，０（ＯＤｚ＊ｏ ） ′＝、イムノグロブリ
ンＭ ｌａＩｇ／ｍｌｌより算出する。
得られたモノクローナル抗体の特異性の決定は複数の検
体から得られたヒトの各種の臓器由来の正常あるいは、
腫瘍組織あるいはその膜成分との反応性、各種のヒト正
常あるいは腫瘍細胞培養株またはヒト胎児細胞培養株も
しくはそれらの膜成分との反応性、従来から知られてい
る癌胎児抗原（例えばＣＥＡ）との反応性、正常、各種
患者血清との反応性などを、酵素免疫測定法、螢光抗体
法、免疫組織学的判定法（ＰＡＰ法）などを測定するこ
とにより行う。
体から得られたヒトの各種の臓器由来の正常あるいは、
腫瘍組織あるいはその膜成分との反応性、各種のヒト正
常あるいは腫瘍細胞培養株またはヒト胎児細胞培養株も
しくはそれらの膜成分との反応性、従来から知られてい
る癌胎児抗原（例えばＣＥＡ）との反応性、正常、各種
患者血清との反応性などを、酵素免疫測定法、螢光抗体
法、免疫組織学的判定法（ＰＡＰ法）などを測定するこ
とにより行う。
モノクローナル抗体ＡＬＣ−１８６、ＡＭＣ−３８２の
酵素ｓ識は、酵素としてペルオキシダーゼ、ウレアーゼ
、アルカリフォスファターゼ、β−ガラクトシダーゼな
どを用い、過ヨーソ酸架橋法〔ジャーナル・オブ・ヒス
トケミストリイ・アンド・サイトケミストリイ（Ｊ、Ｈ
ｉｓｔｏｃｈｅｍ、 Ｃｙｔｏ−ｃｈｅｍ、）、 ２２
、１０８４〜１（１９１，（１９７１））に従って行
う。
酵素ｓ識は、酵素としてペルオキシダーゼ、ウレアーゼ
、アルカリフォスファターゼ、β−ガラクトシダーゼな
どを用い、過ヨーソ酸架橋法〔ジャーナル・オブ・ヒス
トケミストリイ・アンド・サイトケミストリイ（Ｊ、Ｈ
ｉｓｔｏｃｈｅｍ、 Ｃｙｔｏ−ｃｈｅｍ、）、 ２２
、１０８４〜１（１９１，（１９７１））に従って行
う。
ペルオキシダーゼを用いる過ヨーン酸架橋法は、たとえ
ば次のとおり行う。
ば次のとおり行う。
ペルオキシダーゼを０．３Ｍ重炭酸ソーダ緩衝液（ｐＨ
８，１）１ｍｌに溶かし、フルオロ−２，４−ジニトロ
ベンゼン（ＤＮＰ）エタノール１％溶液０．１ｍｌを加
え、これに０．０６ Ｍ過ヨウ素酸１ｍｌを加え、室温
で３０分間反応させる。これをｐ Ｈ９，５の０、 Ｏ
Ｉ Ｍ炭酸バッファーで透析してＤＮＰ化したアルデヒ
ド基がついたペルオキシダーゼを含む透析液を得る。こ
の透析後の溶液に５ｍｇの抗体を加え、室温で２時間反
応させ、ｐ Ｈ７，２の０．０１Ｍリン酸バッファーで
透析し、透析後の溶液を５ｅｐｈａｄＧ１００カラムク
ロマトグラフイーにかけゲル濾過する。活性画分を酵素
標識抗体として使う。
８，１）１ｍｌに溶かし、フルオロ−２，４−ジニトロ
ベンゼン（ＤＮＰ）エタノール１％溶液０．１ｍｌを加
え、これに０．０６ Ｍ過ヨウ素酸１ｍｌを加え、室温
で３０分間反応させる。これをｐ Ｈ９，５の０、 Ｏ
Ｉ Ｍ炭酸バッファーで透析してＤＮＰ化したアルデヒ
ド基がついたペルオキシダーゼを含む透析液を得る。こ
の透析後の溶液に５ｍｇの抗体を加え、室温で２時間反
応させ、ｐ Ｈ７，２の０．０１Ｍリン酸バッファーで
透析し、透析後の溶液を５ｅｐｈａｄＧ１００カラムク
ロマトグラフイーにかけゲル濾過する。活性画分を酵素
標識抗体として使う。
酵素としてペルオキシダーゼを用いる場合はΔＢＴＳ基
質液（２，２’−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾ
リン−６−スルホン酸）ニアンモウム５５０ｍｇを０，
１Ｍクエン酸緩衝液（ｐ Ｈ４，２）ｉｌに溶かした溶
液に、使用直前に過酸化水素１４／ｌＴ１１を加えた溶
液〕を用い、発色をＱ Ｄ ａ ｌｓｎ”の吸光度で測
定する。ウレアーゼの基質としては８ｍｇブロムクレゾ
ールパープル、１００ｍｇ尿素および０．２ｍＭ Ｅ
ＤＴＡを１０ Ｑｍｌ中に含むｐＨ４，８の溶液を使い
、測定はジャーナル・オブ・イムノロジカル−メソッヅ
（Ｊ、Ｉｍｒｎｕｎｏｌ、 Ｍｅｔｈｏｄｓ） 。
質液（２，２’−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾ
リン−６−スルホン酸）ニアンモウム５５０ｍｇを０，
１Ｍクエン酸緩衝液（ｐ Ｈ４，２）ｉｌに溶かした溶
液に、使用直前に過酸化水素１４／ｌＴ１１を加えた溶
液〕を用い、発色をＱ Ｄ ａ ｌｓｎ”の吸光度で測
定する。ウレアーゼの基質としては８ｍｇブロムクレゾ
ールパープル、１００ｍｇ尿素および０．２ｍＭ Ｅ
ＤＴＡを１０ Ｑｍｌ中に含むｐＨ４，８の溶液を使い
、測定はジャーナル・オブ・イムノロジカル−メソッヅ
（Ｊ、Ｉｍｒｎｕｎｏｌ、 Ｍｅｔｈｏｄｓ） 。
５３．１８７〜１９４ （１９ｇ２）に記載の方法に従
って行う。
って行う。
アルカリフォスファターゼの基質としては１ｍｇ／ｍ１
ｐ−二トロフェニルリン酸を０．１Ｍジェタノールアミ
ン緩衝液に溶かしたものを使う。
ｐ−二トロフェニルリン酸を０．１Ｍジェタノールアミ
ン緩衝液に溶かしたものを使う。
酵素標識はビオチン−アビジンの結合を介して行うこと
もできる。ビオチン標識は、ジャーナル・オブ・ヒスト
ケミストリイ・アンド・サイトケミストリイ（Ｊ、）ｌ
ｉｓｔｏｃｈｅ＋ｎ、Ｃｙｔｏｃｈｅｍ、）、 ２７
。
もできる。ビオチン標識は、ジャーナル・オブ・ヒスト
ケミストリイ・アンド・サイトケミストリイ（Ｊ、）ｌ
ｉｓｔｏｃｈｅ＋ｎ、Ｃｙｔｏｃｈｅｍ、）、 ２７
。
１１３１〜１１３９（１９７９）に記載の方法で行うこ
とができる。
とができる。
ｅＸ 血清診断は次の通り行う。
９６穴用ＥＩＡ用プレートに、第一抗体として、ＡＬＣ
−１８６１０〜ｌｏｎｇ／ｍｌとＡＭＣ−３８２１０〜
１００■／ｍ＋の等予混合物を５０〜２００ｇ／穴づつ
分注し、４℃〜室温で２時間〜２晩放置する。ＰＢＳで
洗浄後、１％牛血清アルブミン（ＢＳＡ） −ＰＢｓ
２００ｔｔｔｘ／穴を加え、さらに４℃〜室温で２時
間〜１晩放置する。
−１８６１０〜ｌｏｎｇ／ｍｌとＡＭＣ−３８２１０〜
１００■／ｍ＋の等予混合物を５０〜２００ｇ／穴づつ
分注し、４℃〜室温で２時間〜２晩放置する。ＰＢＳで
洗浄後、１％牛血清アルブミン（ＢＳＡ） −ＰＢｓ
２００ｔｔｔｘ／穴を加え、さらに４℃〜室温で２時
間〜１晩放置する。
このプレートをＰＢＳでよく洗浄後、各穴に、血清検体
を１〜１００倍希釈で、５０〜１００ｄ加える。４℃〜
室温で２時間〜１晩放置後、ＰＢＳでよく洗浄する。次
にビオチン化したＡＬＣ−１８６（Ｌ Ｏ〜ｌ ＯＯｘ
／ｍｌ）とビオチン化したＡＭＣ−２３８２（１０〜１
００ｇ／ｍｌ）の等置部合物を第二抗体として、５０〜
１００ｍ／穴加え、さらに４℃〜室温で２時間〜１晩放
置する。プレートをＰＢＳでよく洗浄後、アビジン−ビ
オチン−ペルオキシダーゼ〔ベクトール（Ｖｅｃｔｏｒ
）社製〕（Ｌｏｇ／ｍｌ）を５０〜１００ｇ／穴加え、
室温で１０〜３０分間放置し、５％ＳＤＳ溶液５０〜１
００ｍ／穴加え反応を停止する。各穴のＯＤ ４１ Ｓ
値を測定し、その発色度より、血清検体中の抗原量を算
出する。このようにして得られた健常人血清中の抗原量
と癌患者血清中の抗原量を比較することにより、正常値
を決定し、その正常値を超えるものを腺癌陽性とする。
を１〜１００倍希釈で、５０〜１００ｄ加える。４℃〜
室温で２時間〜１晩放置後、ＰＢＳでよく洗浄する。次
にビオチン化したＡＬＣ−１８６（Ｌ Ｏ〜ｌ ＯＯｘ
／ｍｌ）とビオチン化したＡＭＣ−２３８２（１０〜１
００ｇ／ｍｌ）の等置部合物を第二抗体として、５０〜
１００ｍ／穴加え、さらに４℃〜室温で２時間〜１晩放
置する。プレートをＰＢＳでよく洗浄後、アビジン−ビ
オチン−ペルオキシダーゼ〔ベクトール（Ｖｅｃｔｏｒ
）社製〕（Ｌｏｇ／ｍｌ）を５０〜１００ｇ／穴加え、
室温で１０〜３０分間放置し、５％ＳＤＳ溶液５０〜１
００ｍ／穴加え反応を停止する。各穴のＯＤ ４１ Ｓ
値を測定し、その発色度より、血清検体中の抗原量を算
出する。このようにして得られた健常人血清中の抗原量
と癌患者血清中の抗原量を比較することにより、正常値
を決定し、その正常値を超えるものを腺癌陽性とする。
以下に本発明の実施例を示す。
実施例１
９６穴ＥＩＡ用プレート〔フロー・ラボラトリーズ（Ｆ
ｌｏｗ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）社製〕に、ＡＬＣ
−１８６１０μｇ／ｍｌとＡＭＣ−３８２１０ｕ／ｍｌ
の等量混合物１００μ＋２／穴を第一抗体として加え、
４℃で１晩放置後、ＰＢＳで洗浄し、１％ＢＳＡ−ＰＢ
Ｓ ２００ｍ／穴加え４℃で１晩放置し、ＰＢＳでよ
く洗浄したプレートに、健常人血清く２０検体）および
肺癌患者血清（２３検体）、胃癌患者血清く２０検体）
、乳癌患者血清（１検体）、悪性リンパ腫患者血清（１
検体）の１０倍希釈液を５０頭／穴加え、４℃で１晩放
置後、ＰＢＳでよく洗浄した。ビオチン化ＡＬＣ−１８
６（１０ｕ／ｍｌ）とビオチン化ＡＭＣ−３８２（１０
ｘｒ／ｍｌ）の等置部合物１００Ｉｉ！！／穴を第二抗
体として加え、４℃で１晩放置し、ＰＢＳでよく洗浄し
た後、アビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼ（１０Ｊ
１ｇ／ｍ＋）を１００．ｄ／穴加え、室温温で１時間放
置した後、ＰＢＳでよく洗浄した。
ｌｏｗ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）社製〕に、ＡＬＣ
−１８６１０μｇ／ｍｌとＡＭＣ−３８２１０ｕ／ｍｌ
の等量混合物１００μ＋２／穴を第一抗体として加え、
４℃で１晩放置後、ＰＢＳで洗浄し、１％ＢＳＡ−ＰＢ
Ｓ ２００ｍ／穴加え４℃で１晩放置し、ＰＢＳでよ
く洗浄したプレートに、健常人血清く２０検体）および
肺癌患者血清（２３検体）、胃癌患者血清く２０検体）
、乳癌患者血清（１検体）、悪性リンパ腫患者血清（１
検体）の１０倍希釈液を５０頭／穴加え、４℃で１晩放
置後、ＰＢＳでよく洗浄した。ビオチン化ＡＬＣ−１８
６（１０ｕ／ｍｌ）とビオチン化ＡＭＣ−３８２（１０
ｘｒ／ｍｌ）の等置部合物１００Ｉｉ！！／穴を第二抗
体として加え、４℃で１晩放置し、ＰＢＳでよく洗浄し
た後、アビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼ（１０Ｊ
１ｇ／ｍ＋）を１００．ｄ／穴加え、室温温で１時間放
置した後、ＰＢＳでよく洗浄した。
次にＡＢＴＳ基質液１００ｔＩＩｌ／穴を加え、室温で
３０分間反応させ、５％ＳＤＳ溶液１００ｍ／穴を加え
反応を停止した。各穴の発色を吸光度計（ＯＤ＝１ｓ）
で測定した。その結果を第１表に示した。また、同一血
清検体について、ＡＬＣ−１８６またはＡＭＣ−３８２
をそれぞれ単独で第一抗体として用い、ビオチン化ＡＬ
Ｃ−１８６、ビオチン化へＭＣ３８２をそれぞれ単独で
第二抗体として用いるほかは、全く同様の方法で実施し
た結果を対照群として第１表に示した。カットオフ値は
、それぞれの測定系での健常人２０検体のＯＤ ４＋
ｓ値の平均値＋２ＳＤ（標準偏差）とした。
３０分間反応させ、５％ＳＤＳ溶液１００ｍ／穴を加え
反応を停止した。各穴の発色を吸光度計（ＯＤ＝１ｓ）
で測定した。その結果を第１表に示した。また、同一血
清検体について、ＡＬＣ−１８６またはＡＭＣ−３８２
をそれぞれ単独で第一抗体として用い、ビオチン化ＡＬ
Ｃ−１８６、ビオチン化へＭＣ３８２をそれぞれ単独で
第二抗体として用いるほかは、全く同様の方法で実施し
た結果を対照群として第１表に示した。カットオフ値は
、それぞれの測定系での健常人２０検体のＯＤ ４＋
ｓ値の平均値＋２ＳＤ（標準偏差）とした。
第１表より明らかなように、ＡＬＣ−１８６およびＡＭ
Ｃ−３８２を第一抗体、第二抗体（ビオチン化したもの
）として単独に使用する系に比べ、ΔＬＣ−１８６、Ａ
ＭＣ−３８２の等置部合物を使用する系では、癌患者で
の陽性率、特に、肺腺癌、胃腺癌、乳癌などの腺癌患者
での陽性率が、著しく向上した。
Ｃ−３８２を第一抗体、第二抗体（ビオチン化したもの
）として単独に使用する系に比べ、ΔＬＣ−１８６、Ａ
ＭＣ−３８２の等置部合物を使用する系では、癌患者で
の陽性率、特に、肺腺癌、胃腺癌、乳癌などの腺癌患者
での陽性率が、著しく向上した。
参考例１ モノクローン性抗体ＡＬＣ−１８６の？ｉ１
１に プリスタン処理した８週令ＢＡＬＢ／Ｃ雌マウスにハイ
プリドーマ株ＡＬＣ−１８６を４ Ｘ １０’細胞／匹
腹腔内注射した。
１に プリスタン処理した８週令ＢＡＬＢ／Ｃ雌マウスにハイ
プリドーマ株ＡＬＣ−１８６を４ Ｘ １０’細胞／匹
腹腔内注射した。
１０〜２１日後に、ハイブリドーマは腹水癌化する。腹
水のたまったマウスから、腹水を採取（５〜１０ｍ１／
匹）し、遠心分離（３，００Ｏｒｐｍ。
水のたまったマウスから、腹水を採取（５〜１０ｍ１／
匹）し、遠心分離（３，００Ｏｒｐｍ。
５分）して固形分を除去した。５０％硫酸アンモニウム
にて塩析し、ＰＢＳにＮａＣｊ！ ０．５Ｍを加えた
液で透析し、セルロファインＧ Ｃ，Ｌ −２０００（
生化学工業社製）（ベット・ボリューム７５０ｍ１）の
カラムに流速１５ｍ１／ｈｒで通塔しＩｇＭ画分を集め
精製モノクローナル抗体として用いた。
にて塩析し、ＰＢＳにＮａＣｊ！ ０．５Ｍを加えた
液で透析し、セルロファインＧ Ｃ，Ｌ −２０００（
生化学工業社製）（ベット・ボリューム７５０ｍ１）の
カラムに流速１５ｍ１／ｈｒで通塔しＩｇＭ画分を集め
精製モノクローナル抗体として用いた。
参考例２ モノクローン性抗体ＡＭＣ−３８２の精製
プリスタン処理した８退会Ｃ５７ＢＬ／６雌マウスにハ
イプリドーマ株ＡＭＣ−３８２を４×１０６細胞／匹腹
腔内注射した。
イプリドーマ株ＡＭＣ−３８２を４×１０６細胞／匹腹
腔内注射した。
１０〜２１日後に、ハイブリドーマは腹水癌化する。腹
水のたまったマウスから、腹水を採取（５〜１０ｍ１／
匹）し、遠心分離（３，００Ｏｒｐｍ。
水のたまったマウスから、腹水を採取（５〜１０ｍ１／
匹）し、遠心分離（３，００Ｏｒｐｍ。
５分）して固形分を除去した。５０％硫酸アンモニウム
にて塩析し、ＰＢＳにＮａＣｊ！ ０．５Ｍを加えた
液で透析し、セルロファインＧ ＣＬ −２０００（生
化学工業社製）（ベット・ボリューム７５０ｍ１）のカ
ラムに流速１５ｍｌ／ｈｒで通塔しＩｇＭ画分を集め精
製抗体として用いた。
にて塩析し、ＰＢＳにＮａＣｊ！ ０．５Ｍを加えた
液で透析し、セルロファインＧ ＣＬ −２０００（生
化学工業社製）（ベット・ボリューム７５０ｍ１）のカ
ラムに流速１５ｍｌ／ｈｒで通塔しＩｇＭ画分を集め精
製抗体として用いた。
発明の効果
本発明によれば、ヒト腺癌の血清診断を簡便に効率よく
行うことができる。
行うことができる。
Claims (1)
- 抗ヒト肺腺癌モノクローナル抗体ＡＬＣ−１８６と抗ヒ
ト胃腺癌モノクローナル抗体ＡＭＣ−３８２との混合物
を第一抗体とし、これを固相化し、これにヒト血清検体
を反応させて腺癌抗原を結合させ、ついで酵素で標識し
た抗ヒト肺腺癌モノクローナル抗体ＡＬＣ−１８６およ
び抗ヒト胃腺癌モノクローナル抗体ＡＭＣ−３８２の混
合物を第二抗体として前記腺癌抗原に結合させ、結合し
た第二抗体の量を標識した酵素の活性測定により定量す
ることを特徴とする血清検体中の腺癌抗原の定量法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61081806A JPS62238465A (ja) | 1986-04-09 | 1986-04-09 | 腺癌抗原の定量法 |
| CA000533473A CA1286606C (en) | 1986-04-09 | 1987-03-31 | Method of assaying adenocarcinoma antigens |
| DE8787105297T DE3780501T2 (de) | 1986-04-09 | 1987-04-09 | Verfahren zur bestimmung von adenocarcinoma-antigenen. |
| EP87105297A EP0242727B1 (en) | 1986-04-09 | 1987-04-09 | Method of assaying adenocarcinoma antigens |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61081806A JPS62238465A (ja) | 1986-04-09 | 1986-04-09 | 腺癌抗原の定量法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62238465A true JPS62238465A (ja) | 1987-10-19 |
Family
ID=13756730
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61081806A Pending JPS62238465A (ja) | 1986-04-09 | 1986-04-09 | 腺癌抗原の定量法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0242727B1 (ja) |
| JP (1) | JPS62238465A (ja) |
| CA (1) | CA1286606C (ja) |
| DE (1) | DE3780501T2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01276068A (ja) * | 1988-04-28 | 1989-11-06 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | ヒト癌抗原の定量法 |
| US5081032A (en) * | 1988-06-30 | 1992-01-14 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Anti-human pulmonary adenocarcinoma monoclonal antibody |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2142428A (en) * | 1983-06-23 | 1985-01-16 | Erba Farmitalia | Adenocarcinoma related antigenic determinants and antibodies specific thereto |
-
1986
- 1986-04-09 JP JP61081806A patent/JPS62238465A/ja active Pending
-
1987
- 1987-03-31 CA CA000533473A patent/CA1286606C/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-04-09 DE DE8787105297T patent/DE3780501T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1987-04-09 EP EP87105297A patent/EP0242727B1/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3780501T2 (de) | 1993-03-18 |
| EP0242727A2 (en) | 1987-10-28 |
| DE3780501D1 (de) | 1992-08-27 |
| CA1286606C (en) | 1991-07-23 |
| EP0242727B1 (en) | 1992-07-22 |
| EP0242727A3 (en) | 1988-08-24 |
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