JPS6225352B2 - - Google Patents
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- JPS6225352B2 JPS6225352B2 JP54029953A JP2995379A JPS6225352B2 JP S6225352 B2 JPS6225352 B2 JP S6225352B2 JP 54029953 A JP54029953 A JP 54029953A JP 2995379 A JP2995379 A JP 2995379A JP S6225352 B2 JPS6225352 B2 JP S6225352B2
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- JP
- Japan
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- medium
- glutamic acid
- cerulenin
- biotin
- strain
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
本発明は新規なＬ−グルタミン酸生産性微生物
および該微生物を利用するＬ−グルタミン酸の製
造法に関する。 従来、Ｌ−グルタミン酸を工業的に有利に製造
するにあたつては、Ｌ−グルタミン酸生産性菌株
としてコリネフオームの細菌に属するビオチン要
求性菌株を用い、該菌株を廃糖蜜、粗デン粉加水
分解物などの炭素源を含有する培地に培養する方
法が知られている。さらに、この場合、ビオチン
要求性微生物を培地に培養してＬ−グルタミン酸
を工業的に有利に製造するためには、培地中のビ
オチン類の量を微生物の増殖適量以下にすること
が必須条件であることが知られている。このた
め、糖蜜やデン粉加水分解物などビオチンを多量
に含有する原料を炭素源として用いる場合、多量
のビオチン類の存在に起因する悪影響を抑制する
ために、抑制剤を利用する方法特（公昭37−1695
号公報、特公昭40−8798号公報、同40−14559号
公報）が提案されている。 しかしながら、このようにビオチンを過剰に含
有する培地にＬ−グルタミン酸生産菌を培養し、
培養液中に抑制剤を添加する方法は、抑制剤が高
価であると共に、抑制剤の種類によつては菌の生
育阻害が過度となることがあつたり、または逆に
菌の生育阻害が過少となつて菌の過剰生育が起る
ことがあるなどの欠点があり、培養管理が困難で
あつた。 一方、微生物の生育にとつて制限量のビオチン
を含有する培地にＬ−グルタミン酸生産菌を培養
する方法としては、ビオチンを含有しない原料と
してグルコースやシユクロース等を用いる方法な
どがあげられるが、これらの原料は比較的高価で
あるばかりでなく、不足するビオチンを制限量に
まで調整しなければならない。 しかも培地中に含有している使用原料由来の微
量ビオチンが、原料如何によつて変動するので、
不足ビオチン量を制限量に調整するのが非常に面
倒であつた。 そこで本発明者は、種々検討の結果、廃糖蜜や
粗澱粉加水分解物等の原料を用いる場合、培養液
中に抑制剤を添加することなく、使用菌として特
定の性質を有する菌株を用いることによつて培地
中にＬ−グルタミン酸を生成蓄積させ、上記問題
点を解決した。 すなわち、本発明はコリネバクテリウム属に属
し、親株に比べてセルレニンに対して感受性の増
強されたＬ−グルタミン酸生産菌を培地に培養す
ることにより、過剰のビオチンの作用を抑制する
ための抑制剤を培地に添加することなく、培地中
にＬ−グルタミン酸を生成蓄積せしめるものであ
る。 次に、本発明を詳細に説明する。 本発明で使用する親株に比べてセルレニンに対
して感受性の増強された菌株は、従来から知られ
ているＬ−グルタミン酸生産菌を親株とし、これ
に通常の変異誘導操作、例えば紫外線照射あるい
は化学的薬剤（例えばニトロソグアニジン、エチ
ルメタンサルフエート、亜硝酸塩等）処理により
最小培地では生育するが、逆に親株が生育する濃
度のセルレニンを含有する最小培地では生育しな
いコロニーとして得られる。本発明で用いたセル
レニン（Cerulenin）は、1963年、奏らが、
Cephalosporium caerulensの培養液より単離し
た抗生物質であり、次の構造をもつ公知物質であ
る。 本発明で使用する微生物の代表例としては、コ
リネバクテリウム・グルタミカムATCC13032を
親株として変異誘導されたセルレニン感受性のコ
リネバクテリウム・グルタミカムCK−２（微工
研寄託受理番号第4800号）及びコリネバクテリウ
ム・リリウムATCC15990を親株として変異誘導
されたセルレニン感受性のコリネバクテリウム・
リリウムCL−７（微工研菌寄第4801号）等があ
る。 次に、これら菌株の採取法及びセルレニン添加
培地における生育を例示する。 セルレニン感受性菌株の採取 イーストブイヨンスラント（肉エキス0.5
％、酵母エキス0.5％、ペプトン１％、食塩
0.25％、寒天2.5％、PH7.2）で28℃、１夜培養
したコリネバクテリウム・グルタミカム
ATCC13032およびコリネバクテリウム・リリ
ウムATCC15990をそれぞれトリス・マレート
緩衝液（PH6.0）に菌体濃度が107〜108個／ml
となるように懸だくし、同一緩衝液に溶解した
ニトロソグアニジンを最終濃度が200mg／に
なるように懸だく液に添加後、室温で60分間静
置した。その後懸だく液を遠心分離（3000r.p.
m、10分間）し、菌体を同一緩衝液10mlで洗滌
した後、下記の完全培地に散布し、生育したコ
ロニーを下記の最小培地にレプリカすると共
に、ATCC13032並びにATCC15990が生育する
濃度のセルレニン含有最小培地に同時にレプリ
カし、共に28℃、３〜８日培養した。 その結果、最小培地では生育するが、逆に親
株（ATCC13032並びにATCC15990）が生育す
る濃度のセルレニンを含有した最小培地では親
株なみに生育しないコロニーを、セルレニン感
受性株として取得した。 完全培地； 肉エキス５ｇ／、酵母エキス５ｇ／、ペ
プトン10ｇ／、食塩25ｇ／、寒天25ｇ／
、PH7.2（NaOH） 最小培地； グルコース10ｇ／、NH4NO31ｇ／、
NH4Cl5ｇ／、MgSO4・7H2O0.2ｇ／、
KOH1ｇ／、KH2PO43.4ｇ／、Na2SO42
ｇ／、ビオチン50γ／、シスチン20mg／
、サイアミン塩酸塩５mg／、ニコチン酸
125mg／、パントテン酸カルシウム12.5mg／
、微量金属液１ml／、寒天25ｇ／、PH
7.2（NaOH） ※微量金属液の組成 （NH4）6Mo7O24・4H2O18.5mg／、FeCl3・
6H2O485mg／、ZnSO4・7H2O44mg／、
CuCl2・2H2O135mg／、MnSO4・４〜
6H2O35mg／ コリネバクテリウム・グルタミカムCK−２
及びコリネバクテリウム・リリウムCL−７の
セルレニン含有培地での生育。 の方法で取得した菌株とその親株の
ATCC13032及びATCC15590を、ブイヨンスラ
ントで28℃、24時間培養後、生理食塩水に懸濁
し、第１、２表に記載した濃度のセルレニンを
含む最小培地（但し、寒天は添加しない）に、
菌数107／ml程度接種し、28℃、24時間振盪培
養後の生育を調べた。 その結果を第１、２表に示す。
および該微生物を利用するＬ−グルタミン酸の製
造法に関する。 従来、Ｌ−グルタミン酸を工業的に有利に製造
するにあたつては、Ｌ−グルタミン酸生産性菌株
としてコリネフオームの細菌に属するビオチン要
求性菌株を用い、該菌株を廃糖蜜、粗デン粉加水
分解物などの炭素源を含有する培地に培養する方
法が知られている。さらに、この場合、ビオチン
要求性微生物を培地に培養してＬ−グルタミン酸
を工業的に有利に製造するためには、培地中のビ
オチン類の量を微生物の増殖適量以下にすること
が必須条件であることが知られている。このた
め、糖蜜やデン粉加水分解物などビオチンを多量
に含有する原料を炭素源として用いる場合、多量
のビオチン類の存在に起因する悪影響を抑制する
ために、抑制剤を利用する方法特（公昭37−1695
号公報、特公昭40−8798号公報、同40−14559号
公報）が提案されている。 しかしながら、このようにビオチンを過剰に含
有する培地にＬ−グルタミン酸生産菌を培養し、
培養液中に抑制剤を添加する方法は、抑制剤が高
価であると共に、抑制剤の種類によつては菌の生
育阻害が過度となることがあつたり、または逆に
菌の生育阻害が過少となつて菌の過剰生育が起る
ことがあるなどの欠点があり、培養管理が困難で
あつた。 一方、微生物の生育にとつて制限量のビオチン
を含有する培地にＬ−グルタミン酸生産菌を培養
する方法としては、ビオチンを含有しない原料と
してグルコースやシユクロース等を用いる方法な
どがあげられるが、これらの原料は比較的高価で
あるばかりでなく、不足するビオチンを制限量に
まで調整しなければならない。 しかも培地中に含有している使用原料由来の微
量ビオチンが、原料如何によつて変動するので、
不足ビオチン量を制限量に調整するのが非常に面
倒であつた。 そこで本発明者は、種々検討の結果、廃糖蜜や
粗澱粉加水分解物等の原料を用いる場合、培養液
中に抑制剤を添加することなく、使用菌として特
定の性質を有する菌株を用いることによつて培地
中にＬ−グルタミン酸を生成蓄積させ、上記問題
点を解決した。 すなわち、本発明はコリネバクテリウム属に属
し、親株に比べてセルレニンに対して感受性の増
強されたＬ−グルタミン酸生産菌を培地に培養す
ることにより、過剰のビオチンの作用を抑制する
ための抑制剤を培地に添加することなく、培地中
にＬ−グルタミン酸を生成蓄積せしめるものであ
る。 次に、本発明を詳細に説明する。 本発明で使用する親株に比べてセルレニンに対
して感受性の増強された菌株は、従来から知られ
ているＬ−グルタミン酸生産菌を親株とし、これ
に通常の変異誘導操作、例えば紫外線照射あるい
は化学的薬剤（例えばニトロソグアニジン、エチ
ルメタンサルフエート、亜硝酸塩等）処理により
最小培地では生育するが、逆に親株が生育する濃
度のセルレニンを含有する最小培地では生育しな
いコロニーとして得られる。本発明で用いたセル
レニン（Cerulenin）は、1963年、奏らが、
Cephalosporium caerulensの培養液より単離し
た抗生物質であり、次の構造をもつ公知物質であ
る。 本発明で使用する微生物の代表例としては、コ
リネバクテリウム・グルタミカムATCC13032を
親株として変異誘導されたセルレニン感受性のコ
リネバクテリウム・グルタミカムCK−２（微工
研寄託受理番号第4800号）及びコリネバクテリウ
ム・リリウムATCC15990を親株として変異誘導
されたセルレニン感受性のコリネバクテリウム・
リリウムCL−７（微工研菌寄第4801号）等があ
る。 次に、これら菌株の採取法及びセルレニン添加
培地における生育を例示する。 セルレニン感受性菌株の採取 イーストブイヨンスラント（肉エキス0.5
％、酵母エキス0.5％、ペプトン１％、食塩
0.25％、寒天2.5％、PH7.2）で28℃、１夜培養
したコリネバクテリウム・グルタミカム
ATCC13032およびコリネバクテリウム・リリ
ウムATCC15990をそれぞれトリス・マレート
緩衝液（PH6.0）に菌体濃度が107〜108個／ml
となるように懸だくし、同一緩衝液に溶解した
ニトロソグアニジンを最終濃度が200mg／に
なるように懸だく液に添加後、室温で60分間静
置した。その後懸だく液を遠心分離（3000r.p.
m、10分間）し、菌体を同一緩衝液10mlで洗滌
した後、下記の完全培地に散布し、生育したコ
ロニーを下記の最小培地にレプリカすると共
に、ATCC13032並びにATCC15990が生育する
濃度のセルレニン含有最小培地に同時にレプリ
カし、共に28℃、３〜８日培養した。 その結果、最小培地では生育するが、逆に親
株（ATCC13032並びにATCC15990）が生育す
る濃度のセルレニンを含有した最小培地では親
株なみに生育しないコロニーを、セルレニン感
受性株として取得した。 完全培地； 肉エキス５ｇ／、酵母エキス５ｇ／、ペ
プトン10ｇ／、食塩25ｇ／、寒天25ｇ／
、PH7.2（NaOH） 最小培地； グルコース10ｇ／、NH4NO31ｇ／、
NH4Cl5ｇ／、MgSO4・7H2O0.2ｇ／、
KOH1ｇ／、KH2PO43.4ｇ／、Na2SO42
ｇ／、ビオチン50γ／、シスチン20mg／
、サイアミン塩酸塩５mg／、ニコチン酸
125mg／、パントテン酸カルシウム12.5mg／
、微量金属液１ml／、寒天25ｇ／、PH
7.2（NaOH） ※微量金属液の組成 （NH4）6Mo7O24・4H2O18.5mg／、FeCl3・
6H2O485mg／、ZnSO4・7H2O44mg／、
CuCl2・2H2O135mg／、MnSO4・４〜
6H2O35mg／ コリネバクテリウム・グルタミカムCK−２
及びコリネバクテリウム・リリウムCL−７の
セルレニン含有培地での生育。 の方法で取得した菌株とその親株の
ATCC13032及びATCC15590を、ブイヨンスラ
ントで28℃、24時間培養後、生理食塩水に懸濁
し、第１、２表に記載した濃度のセルレニンを
含む最小培地（但し、寒天は添加しない）に、
菌数107／ml程度接種し、28℃、24時間振盪培
養後の生育を調べた。 その結果を第１、２表に示す。
【表】
【表】
る。
第１、２表から明らかなように、菌株CK−
２及びCL−７は、親株に比べてセルレニンに
対して感受性が増強されていた。 本発明で使用する発酵培地として、通常の発
酵培地に使用する炭素源、窒素源および無機物
その他生育促進物質等が使用できる。 炭素源としては、グルコース、フラクトー
ス、シユクロース、マルトース、澱粉、澱粉加
水分解液、糖蜜、廃糖蜜、その他種々の含水炭
素、酢酸、クエン酸、プロピオン酸のごとき有
機酸、エタノール、グリセリンのごときアルコ
ール類、その他ｎ−パラフイン類が使用可能で
ある。 窒素源としては、通常の無機又は有機の窒素
源、例えばアンモニア、塩化アンモニウム、硫
酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、尿素、
酵母エキス、コーンスチープリカー、ペプトン
等が使用可能である。 無機物としては、リン酸一カリウム、リン酸
二カリウム等のリン酸塩、硫酸マグネシウム塩
等のマグネシウム塩、硫酸第一鉄、硫酸マンガ
ン等の微量金属塩等が使用可能である。 生育促進物質としては、アミノ酸やパントテ
ン酸、ニコチン酸等のビタミン類が使用可能で
ある。 本発明の培養条件としては、培養温度は24〜
40℃、培養日数は２〜４日間、PHは６〜９の範
囲になるように、アルカリ性物質又は酸性物質
で調節するのがよい。 発酵液からのＬ−グルタミン酸の採取は、常
法によつて行えばよく、例えばイオン交換樹脂
法、濃縮法、その他公知の方法の組合せにより
行うことができる。 次に実施例を示す。 実施例 １ 下記の組成からなる培地30mlを500ml容振盪フ
ラスコに入れ、ブイヨンスラント上で28℃、24時
間培養したコリネバクテリウム・グルタミカム
CK−２を接種し、28℃、30時間振盪培養した。
培養中、培養液のPHを6.5〜8.0に保つため、尿素
水溶液を適宜添加した。 培養終了後、培養液中にＬ−グルタミン酸が11
ｇ／生成蓄積していた。 なお、対照としてコリネバクテリウム・グルタ
ミカムATCC13032を上記と同様に培養したとこ
ろ、Ｌ−グルタミン酸の生成蓄積量は、0.8ｇ／
であつた。 CK−２菌株による上記培養液１をダイヤイ
オンSK 1B（Ｈ型）（三菱化成工業株式会社製、
カチオン交換樹脂の商品名）の充てんされたカラ
ムに通塔後、アンモニア水で溶出し、溶出液を等
電点で晶出し、Ｌ−グルタミン酸8.3ｇを得た。 培地組成； 甘蔗廃糖蜜（グルコースとして）60ｇ／、尿
素５ｇ／、（NH4）2SO42ｇ／、KH2PO41ｇ／
、K2HPO41ｇ／、MnSO4・7H2O0.02ｇ／
、PH6.5（NH3） 実施例 ２ コリネバクテリウム・リリウムCL−７及び同
ATCC15590を実施例１と同様に培養したとこ
ろ、次表の結果が得られた。
第１、２表から明らかなように、菌株CK−
２及びCL−７は、親株に比べてセルレニンに
対して感受性が増強されていた。 本発明で使用する発酵培地として、通常の発
酵培地に使用する炭素源、窒素源および無機物
その他生育促進物質等が使用できる。 炭素源としては、グルコース、フラクトー
ス、シユクロース、マルトース、澱粉、澱粉加
水分解液、糖蜜、廃糖蜜、その他種々の含水炭
素、酢酸、クエン酸、プロピオン酸のごとき有
機酸、エタノール、グリセリンのごときアルコ
ール類、その他ｎ−パラフイン類が使用可能で
ある。 窒素源としては、通常の無機又は有機の窒素
源、例えばアンモニア、塩化アンモニウム、硫
酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、尿素、
酵母エキス、コーンスチープリカー、ペプトン
等が使用可能である。 無機物としては、リン酸一カリウム、リン酸
二カリウム等のリン酸塩、硫酸マグネシウム塩
等のマグネシウム塩、硫酸第一鉄、硫酸マンガ
ン等の微量金属塩等が使用可能である。 生育促進物質としては、アミノ酸やパントテ
ン酸、ニコチン酸等のビタミン類が使用可能で
ある。 本発明の培養条件としては、培養温度は24〜
40℃、培養日数は２〜４日間、PHは６〜９の範
囲になるように、アルカリ性物質又は酸性物質
で調節するのがよい。 発酵液からのＬ−グルタミン酸の採取は、常
法によつて行えばよく、例えばイオン交換樹脂
法、濃縮法、その他公知の方法の組合せにより
行うことができる。 次に実施例を示す。 実施例 １ 下記の組成からなる培地30mlを500ml容振盪フ
ラスコに入れ、ブイヨンスラント上で28℃、24時
間培養したコリネバクテリウム・グルタミカム
CK−２を接種し、28℃、30時間振盪培養した。
培養中、培養液のPHを6.5〜8.0に保つため、尿素
水溶液を適宜添加した。 培養終了後、培養液中にＬ−グルタミン酸が11
ｇ／生成蓄積していた。 なお、対照としてコリネバクテリウム・グルタ
ミカムATCC13032を上記と同様に培養したとこ
ろ、Ｌ−グルタミン酸の生成蓄積量は、0.8ｇ／
であつた。 CK−２菌株による上記培養液１をダイヤイ
オンSK 1B（Ｈ型）（三菱化成工業株式会社製、
カチオン交換樹脂の商品名）の充てんされたカラ
ムに通塔後、アンモニア水で溶出し、溶出液を等
電点で晶出し、Ｌ−グルタミン酸8.3ｇを得た。 培地組成； 甘蔗廃糖蜜（グルコースとして）60ｇ／、尿
素５ｇ／、（NH4）2SO42ｇ／、KH2PO41ｇ／
、K2HPO41ｇ／、MnSO4・7H2O0.02ｇ／
、PH6.5（NH3） 実施例 ２ コリネバクテリウム・リリウムCL−７及び同
ATCC15590を実施例１と同様に培養したとこ
ろ、次表の結果が得られた。
Claims (1)
- １ コリネバクテリウム属に属し、親株に比べて
セルレニンに対して感受性の増強されたＬ−グル
タミン酸生産性微生物を培地に培養し、培地中に
Ｌ−グルタミン酸を生成蓄積させ、培地から生成
蓄積したＬ−グルタミン酸を採取することを特徴
とするＬ−グルタミン酸の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2995379A JPS55124492A (en) | 1979-03-16 | 1979-03-16 | Production of l-glutamic acid through fermentation process |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2995379A JPS55124492A (en) | 1979-03-16 | 1979-03-16 | Production of l-glutamic acid through fermentation process |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS55124492A JPS55124492A (en) | 1980-09-25 |
| JPS6225352B2 true JPS6225352B2 (ja) | 1987-06-02 |
Family
ID=12290342
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2995379A Granted JPS55124492A (en) | 1979-03-16 | 1979-03-16 | Production of l-glutamic acid through fermentation process |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS55124492A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BRPI0519410B1 (pt) | 2004-12-28 | 2020-12-22 | Ajinomoto Co., Inc | método para produzir ácido l-glutâmico |
-
1979
- 1979-03-16 JP JP2995379A patent/JPS55124492A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS55124492A (en) | 1980-09-25 |
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