JPS6226256A - 変性骨疾患の予防治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、変性骨疾屯の治療および予防に有用な新規化
合物並びにその製法に関する。とりイつけ、本発明は、
２つの活性部分によって特徴づけられる新規化合物に関
する。第１の分子領域は、「白骨（ｂｏｎｅ−ｓｅｅｋ
ｉｎｇ）Ｊ親和性を有し、第２の部分は炭酸脱水酵素の
特異的阻害剤および／または骨吸収の阻害剤である。本
発明の化合物は、変性骨疾患の治療および予防方法にお
いて、単独で、または薬学的に許容し得る組成物として
、好都合な単位投与僧形で投与し得ろ。

［従来技術］ 骨は、タンパク質マトリックス内の細胞から成る動的な
組織であり、種々のカル７ウム塩の結晶構造がその上に
付加している。骨格が、身体の堅い支持体として働くこ
とは明らかである。更に、骨は、ホルモンに応答する器
官である。上皮小体ホルモン（Ｐ　Ｔ　、（）に対する
応答において、骨細胞は、骨内のカル７ウム塩を溶解し
、体内のあらゆる部分で使用する。これは、骨の通常の
調整機能である。

骨変性過剰疾患、例えば骨のバフエツト病およびオステ
オポローシス（骨粗しよう症）が存在する。

その機構はよくわかっていない。更に、有効な処置は、
通例、内分泌および無機質処置の特別な組み合わせであ
るが、この処置はしばしば不成功である。臨床的なオス
テオポローシスは、閉経後の女子の約２５％に見られ、
準臨床的なオステオポローシス（高齢の女子において、
無数の骨折の原因である。）は、より多く見られる。

骨細胞が骨を損なう機構は、広範に研究されているが、
明確にはわかっていない。考えられる一つの機構は、吸
収は、骨細胞による、酸およびタンパク質分解酵素の分
泌によって起こるということである。これらの酵素が作
用するためには、組織が最初に脱灰する必要があると考
えられろ。すなわち、この機構の開始段階は、脱灰によ
る骨の内部環境の酸性化であると考えられる。このよう
な機構に長年関連してきた酸の一つに、炭酸かある。

炭酸（炭酸脱水酵素によって生成した）が骨吸収に関与
しているならば、炭酸脱水酵素を阻害する薬物の投与に
よって、Ｐ　Ｔ　Ｈに対する応答によりカルシウムが骨
から放出されるのを阻害できる。

このことは、ウェイト（Ｗａｉｔｅ）ら、「インヒビジ
ョン・才ブ・ホーン・レソープソヨン・パイ・アセタゾ
ラミド・イン・ザ・ラット（ｒ　ｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏ
ｆＢｏｎｅ　　Ｒｅ５ｏｒｐＬｉｏｎ　　ｂｙ　　Ａｃ
ｅｔａｚｏｒａｍｉｄｅｉｎ　　ｔｈｅ　　Ｒａｔ）ｊ
、エンドクリノロノー（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ）
、８７：Ｉ　Ｉ　２９（１９７０年）において、ホ乳類
について最初に示された。使用したモデルの一つは、イ
ンデユースト・セカンタリー・ハイパーパラタイロイド
・ラット（誘導続発性上皮小体亢進症ラッド　Ｉ　ｎｄ
ｕｃｅｄ　　Ｓ　ｅｃｏｎｄａｒｙ　　Ｉ−［ｙｐｅｒ
−ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ　　ＲａｔＳＩ　５ＨＲ）で
ある。ｌ５ＨＨの腎動脈を外科的に結さっした。ラット
においては、腎臓は、クエン酸塩の代謝器官である。腎
動脈を結さつすると、クエン酸塩血中濃度が上昇する。

クエン酸塩は、カルシウムをキレート化し、全カルシウ
ム濃度はこの結合に影響されないが、イオン化カルシウ
ム量は減少する。血漿イオン化カルシウム量の低下は、
ＰＴＨの遊離を起こす。

ＰＴＨは、一旦遊離されると、骨の吸収を開始させる。

予想されるように、ｌ５ＨＲにおいて、ＰＴＨの遊離が
高まると、総血漿カルシウム濃度が上昇する。炭酸脱水
酵素阻害剤であるアセタゾラミドをｌ５ＨＲに投与する
と、この応答は完全に阻害される。

古典的な内分泌腺剥離／置換研究によって、この作用が
、まさしくＰＴＨに対する応答によることが見出された
。ｌ５ＨＲラツトの上皮小体を除去すると、予想された
血漿力ルノウム濃度の上昇は見られない。しかし、同し
動物（上皮小体の無いｌ５ＨＲ）にＰ　Ｔ　Ｈを投与す
ると、この応答が起こるが、アセタゾラミドおよび他の
複素環式スルホンアミド（炭酸脱水酵素阻害剤）は、応
答を断つ。

組織培養による後の研究によって、アセタゾラミドによ
るＰＴＨｍ発吸収の阻害は、骨レベルでの直接の相互作
用によることが見出された（「カルボニック・アンバイ
トラーゼ・アンド・ホーン・リモデリング：スルホンア
ミド・インヒビジョン・オブ・ボーン・リソープンヨン
・イン・オーガン・カルヂャ（Ｃａｒｂｏｎｉｃ　　Ａ
ｎｈｙｄｒａｓｅ　　ａｎｄＢｏｎｅ　　Ｒｅｍｏｄｅ
ｌｉｎｇ：　Ｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｅ　　Ｉｎｈｉｂｉ
ｔｉ。

ｎ　　ｏｆＢｏｎｅ　　Ｒｅ５ｏｒｐｔｉｏｎ　　ｉｎ
　　Ｏｒｇａｎ　　Ｃｕ１ｔｕｒｅ）Ｊ、ミンキン（Ｍ
ｉｎｋｉｎ）およびジエニングス（Ｊｅｎｎｉｎｇｓ）
、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、（１９７０年６月）
）。

これらの研究により、アセタゾラミドが骨吸収阻害剤と
して有用であると考えられる。しかし、アセタゾラミド
または他の複素環式スルホンアミド（正常動物に対する
炭酸脱水酵素阻害剤）を投与しても、血漿カルシウム濃
度の変化は見られない。

これは、アセタゾラミドが、ＰＴＨ応答によるカルシウ
ムの骨からの溶解を阻害する一方、全身のアンド−シス
（無機質の骨から血中への移行が増す）をも起こすため
であることが示されている。

これらの２つの競合作用は、互いに打ち消し合う（［ア
シド−シス・インヒビソツ・ザ・ヒポカルセミツク・イ
フェクト・オブ・アセタゾラミド（Ａｃｉｄｏｓｉｓ　
　Ｉｎｈｉｂｉｔｓ　　ｔｈｅ　　Ｈｙｐｏｃａｌｃｅ
ｍｉｃ　　Ｅｆｆｅｃｔ　　ｏｆ　　Ａｃｅｔａｚｏｌ
ａｍｉｄｅ）Ｊ、ラインベリー（Ｌｉｎｅｂｅｒｒｙ）
およびウェイト（Ｗａｉｔｅ）、ジャーナル・オブ・フ
ァーマコロジー・アンド・エクスペリメンタル・セラビ
ューティクス（Ｐｈａｍａｃｏｌ、　Ｅｘｐ、　Ｔｈｅ
ｒ、　）、２１１：４５２（１９７９年）参照）。

これらの最初の研究以来、骨吸収に関する幾つかの他の
因子が確定された。例えば、以下の事柄が続いて見出さ
れた６炭酸脱水酵素を阻害する複素環式スルホンアミド
（例えばアセタゾラミド）は、骨吸収をも阻害する：こ
れらのスルホンアミドは、両方の作用（炭酸脱水酵素阻
害および骨吸収阻害）を同程度に有する；炭酸脱水酵素
を阻害しない複素環式スルホンアミドは、骨吸収を阻害
しない；スルホンアミドは、大量のビタミンＤの骨吸収
作用をも阻害する；および、骨代謝の他のパラメータは
スルホンアミドに影響されないので、これは、骨細胞に
対して全く毒性が無い。これらの研究は、約１５年間の
期間に為されたものであり、インビボおよびインビトロ
のいずれについても研究された。

これらの過去の研究および最近得られた他の追加の情報
を考慮して、本発明の化合物および方法は、新規阻害剤
に特異性を与えようと意図して完成された。すなわち、
阻害剤が、骨に特異的に局在して、軟組織の炭酸脱水酵
素にほとんど、または全く影響せず、変性骨疾但の既知
の処置方法では現在不十分である部位において有効であ
るように意図された。

［発明の記載］ 本発明は、変性骨疾但の治療および予防にＧＴ用な化合
物であって、向骨剤」３よび炭酸脱水酵素阻害剤の反応
生成物を含４．て成る化合物に関４−る。

更に、未発明は、変性骨疾■の治療および予防にｎｍな
化合物の合成方法であって、向骨剤と炭酸脱水酵素阻害
剤を、Ａｉｒ記反応物質の反応生成物を生成する条件下
に所定の時間反応さけることを含んで成る方法に関する
。

本発明は、特に２つの活性部分によって特徴イ・」（Ｆ
られる新規化合物を提供する。第１の部分「分子領域」
は、１−白骨−１親和性を何し、第２の部分は、炭酸脱
水酵素の特毘的阻害剤および、／−丁たは骨吸収阻害剤
である。要すれば、「架橋（ｂｒｉｄｇｉｎｇ）剤Ｉを
本発明の化合物に組み合わ且″ろ二とによって、２つの
［活性−７′部分を分離し、それぞれの効力を改良干ろ
（すなわら、これらの活性成分の環化を防ぎ、立体障害
による有害な作用を妨げる）ことができろ。本発明の化
合物は、これらの新規化合物（便宜的に「オステオスタ
ト（骨停留物。５ｔｅｏｓｔａｔｓ）−１と称する）の
合成に必要な条件Ｆ、白骨部分成分を阻害剤成分に所定
の時間接触させることによって合成４〜ろことかできる
。

更に、本発明の化合物を、弔独で、または薬学的に許容
し得ろ組成物として、変性骨疾但（例えば、パノエノ）
・病およびオステオポローシス）の治療および予防に十
分な打効量て投与することがてきる。

［図面の説明］ 第１ａ、ｌｂＳ　ｌｃおよび１６図は、それぞれ、アセ
ドアシラミド、テトラサイクリン、「オステオスタト」
中間体および「オステオスタト」（Ｉ）について、３６
０ｎｍにおけろＵ■スペクトル法でモニターして得たヒ
トミキノアバタイｌ−（１−Ｉ　Ａ　）結合（吸着）パ
ーセントを示す図である。図中、ＡはＨＡ非結合フラク
ション、Ｙ３はＩ−（Ａ結合フラクショノ、ＣはＨＡか
らのＯ，１Ｍ燐酸緩衝液溶離フラクション、ＤはＩ−Ｔ
　Ａからの０．２Ｍ燐酸緩衝液溶離フラクノヨンを示す
。

第２ａ、２ｂ、２ｃおよび２ｄ図は、それぞれ、アセド
アシラミド、テトラサイクリン、［オステオスタト、′
１１］間体および［オステオスタ１−Ｊ（１）の存在下
における、炭酸脱水酵素活性アッセイによる非触媒反応
時間（Ｅ）、酵素触媒反応時間（Ｐ）、並びに酸加水分
解面（Ｇ）および後（ト■）の活性を示す図である。っ 炭酸脱水酵素の阻害は次のように測定４゛る。炭酸脱水
素酵素活性のアッセイ［マレン、ツヤ−ナル・オブ・フ
ァーマコロンー・アンド・エクスベリメンタル・セラピ
ュティクス（Ｊ　、　Ｐ　ｈａｒｍａｃｏｌ　。

Ｅ　ＸＩ）、　Ｔ　ｈｅｒ、月３０巻２６頁、１９６０
年］は、既知溶液の酸性化速度の測定を含んでいろ。反
応条件は、酵素不存在下の反応時間（非触媒反応時間と
して示す）が５０−６０秒のオーダーになるように選択
する。適当量の炭酸脱水酵素を加えると、反応時間は約
２０秒に短縮されろ。次に試験液を加え、反応時間の延
長によって阻害剤の存在を示す。各化合物に対して、非
触媒反応時間、酵素触媒反応時間および試験化合物存在
下の酵素触媒反応時間のデータを棒グラフで示す。化合
物は、緩和な加水分解条件での処理の前後に測定し、た
。

試験化合物は等モル使用した。示した値は、５回の平均
値プラス／マイナス標孕偏差である。各試験液について
、反応時間に対する溶媒の効果がないことを確かめるた
め、溶媒ら試験した。何れの場合ら溶媒は効果を示さな
かった。

第３図は、媒質対照、テトラザイクリノ、［−オステオ
スタト」中間体および［オステオスタｌソ：のインヒド
ロにおける相対的付結合度を示す図である。

インビボにおける骨への薬剤送達は次のように測定する
。予備処理したにわとりの骨を前記のようにとり、骨を
Ｏ，ＩＮ−ＩＣ（２中に、１８時時間−た。この加水分
解物を、つぎに、波長３６０ｎｍで紫外線吸収スペクト
ル測定に付した。この波長は、テトラサイクリンおよび
オステオスタトの特性波長である。結果は平均値プラス
／マイナス標準偏差を示す。

第４図は、Ｄ　Ｍ　Ｓ　Ｏ（対照）、テトラサイクリン
および「オステオスタト」で処理した雌ラットにおける
血漿カルノウム濃度を示す図である。

骨への吸収の阻害は次のように測定する。実験には、ス
ブラーク・ダウリー系由来雌ラットを用いた。処理前の
血漿カルシウム濃度は１、１±０．３ｍｇ１ｄＱ、であ
った。血液試料は、腎動脈の結さつ２時間後に採取した
。普通通り、対照群（薬剤媒質ジメチルスルホキッドを
投与）は顕著な血漿カルシウム濃度増加を示した。テト
ラサイクリン処理動物でも同様な増加か見られた。オス
テオスタト５０　ｍ９／に９を手術２４時間前に投与し
た動物は、血漿カルシウムの上昇を示さなかった。テト
ラサイクリンの用量はオステオスタトの用量と等モルで
ある。

本発明によると、「オステオスタトＪと称する新規化合
物が提供されており、その化合物は、変性骨疾患の治療
および予防に有用である。これらの化合物は、特に２つ
の活性部分によって特徴付けられている。第１は、「白
骨」親和性を示す化合物である。ここで、「白骨」親和
性とは、骨に凝集する傾向を有するカルシウムに結合し
、その結晶格子に入る能力を有することを意味する。本
発明の化合物の第２の必要な成分は、炭酸脱水酵素（二
酸化炭素から炭酸への可逆的水化を触媒する）の阻害剤
（および／または骨吸収の阻害剤）である。

この反応は、首記のように、骨吸収プロセス（骨からの
カルシウムのネット・フラックス（正味の流れｎｅｔ　
　ｆｌｕＸ）と定義されている）に明らかに関係してい
る。

すなわち、本発明の化合物は、白骨化合物、炭酸脱水酵
素阻害剤（および／または骨吸収阻害剤）および要すれ
ば架橋剤の反応生成物である。

白骨親和性を示し、本発明化合物のこの部分の例となる
化合物は、テトラサイクリン化合物、例えば塩酸クロル
テトラサイクリン、塩酸デメクロサイクリン、ドキシサ
イクリン、テトラサイクリン、メタサイクリン、オキシ
テトラサイクリンなどである。本発明化合物の範囲に含
まれる他の白骨部分は、ジホスホネート、例えばエタン
−１−ヒドロキシ−１，１−ジホスホン酸（ＥＨＤＰ）
、ジクロロメタンジホスホン酸（ＣＱ２ＭＤＰ）、３−
アミノ−１−ヒドロキシプロパン−１，１−ジホスホン
酸（ＡＨＰＤＰ）などである。テトラサイクリンが好ま
しい。

本発明化合物類の炭酸脱水酵素阻害剤の例には、イミダ
ゾール化合物、イミダゾール誘導体およびスルホンアミ
ド、とくにアセタゾラミド、メタゾラミド、エトキシゾ
ラミド、ベンシラミドなどがあり、アセタゾラミドが好
ましい。

ミトラマイシンは、本発明に使用し得る化合物であり、
骨吸収阻害作用を有するが、そのままでは炭酸脱水酵素
阻害剤にはなり得ない。それにもかかわらず、その効力
は、本発明化合物の範囲に含まれる。

要すれば（好ましくは）、本発明化合物の２つの「活性
」部分の間に第３の成分を組み入れてよい。

このような架橋剤は、インビボで化合物が加水分解され
る前に化合物が環化せず、さらに立体障害の有害な作用
を避けることを保証することによって、活性部分の効果
を保証するに過ぎない。

本発明において架橋剤として有用な化合物は、特殊な群
に限定されず、例えば芳香族炭素の求電子置換を行い得
る官能端１個を有する種々のＣ４Ｃ２０アルキレン鎖（
二官能性）であってよい。そのような群の例には、ハロ
ゲン化アルキル、アルコール、オレフィン、エステル（
ずな４つち、ルイス酸存在下のアルギル化を促進する）
、ハロゲン化アンル、カルボン酸、無水物（すなわち、
アルキル化を促進する）などがある。また、アミド生成
反応を行い得る他の官能端がある。そのような群の例に
は、酸また酸誘導体、例えばカルボン酸、無水物、ハロ
ゲン化アンルなどがある。

活性部分（すなわち、「オステオスタト」の分子領域）
を、以下のように図示し得る： このような「オステオスタト」の効力は、骨部位で直ぐ
に実現され得ろ（ずなイつち、画部分の活性部位は、有
効な状態にある。プロドラッグではない。）。しかし、
好ましくは、このような「オステオスタト」の効力は、
まず白骨部分の親和性によって化合物が骨部位に局在す
ることによって段階的に実現されろ。内部で化合されて
いるので、オステオスタトは、プロトラッグであり得る
。すなわち、阻害剤の活性部位は化合物の内部にあり、
直ぐには存効ではなく、当初活性を示さない。しかし、
骨部位で起こる酵素的加水分解条件（ずなわち、炭酸の
生成による）に付すと、炭酸脱水酵素阻害剤は、阻害し
ようとしているプロセス自体に応じて第２段階において
遊離される。この作用は、理想的なフィートバンク機構
を反映し、特定の必要に応じてのみもたらされる。

以下の式は、本発明化合物の合成に使用し得る方法の例
である 反応式Ｉ スルホノアミド（炭酸脱水酵素阻害剤）十 テトラザイタリンまたはノホスポネート（向骨剤）↓ （オステオスタト） 合成の典ヘリ的な例を、式Ｈに示す 本発明の化合物は、不斉炭素原子１個またはそれ以上を
有し、ラセミおよび光学活性体であり得る。置換基に応
じて、本発明化合物は、付加塩をも形成し得ろ。このよ
うな形態は全て、本発明の範囲内であることが意図され
ている。

本発明化合物は、明らかに立体異性体であり、それ故得
られた化合物は、異性体の混合物（分離可能）である。

また、出発化合物として特定の異性体を選択すれば、好
ましい立体異性体を合成することかできる。

本発明の処置用組成物の活性成分および化合物を、約０
．１〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日の用ｍで投与すると、
変性骨疾患の治療および予防に優れた効果が現れる。最
適の結果をもたらすための好ましい用量は、約１〜約１
０　ｍｇ／　ｋｇ体体重日日あり、そのような投与量単
位を用いて、体重的７０ｋｇの被設与体には、２４時間
当たり、活性化合物投与全量が約７〜約７００Ｂになる
ようにする。この投与ｍを、最適の治療効果が得られる
ように調節し得る。この場合、１回約５０ｍｇの用量で
、１日に２回投与することか好ましい。例えば、１日に
何度かに分割して投与するが、または用量を、治療状況
（急を要するか否か）に比例して変化させることができ
る。明確な実際の利点は、活性成分を好都合な投与方法
（例えば経口、静脈内、筋肉内または皮下投与）で投与
し得ることである。

活性化合物を、例えば不活性希釈剤または消化可能な担
体と共に経口投与してよく、または硬もしくは軟カプセ
ルに充填してよく、または打錠して錠剤としてよく、ま
たは患者の食物に直接混ぜてよい。経口投与には、活性
化合物を賦形剤と組み合わせ、摂取し得る錠剤、舌下錠
、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸局剤、シ
ロップ剤、ウェファ−剤なとの形で使用することかでき
ろ。

そのような組成物および製剤は、活性化合物を少なくと
も約５％含有しなければならない。組成物および製剤の
割合は、もちろん種々であってよく、通例、単位の約１
〜約ｌＯ重量％である。そのような処置に有用な化合物
の活性化合物の量は、適当な用量が得られるような量で
ある。本発明の好ましい組成物または製剤は、経口投与
量単位が活性化合物約５〜約５００ｍｇを含有するよう
に調製される。

錠剤、トローチ剤、丸薬、カプセル剤なども、以下の成
分を含有し得る：結合剤（例えばトラガカントガム、ア
ラビアゴム、トウモロコシデンプンまたはゼラチン）；
賦形剤：崩壊剤（例えばトウモロコシデンプン、ジャガ
イモデンプン、アルギン酸など）；滑沢剤；および甘味
料（例えば白糖、乳糖またはサッカリン）または香料（
例えばペパーミント、冬緑浦またはチェリーフレーバー
）。投与量単位がカプセル剤である場合には、前記のよ
うな物質に加えて、液体担体を加えることができる。被
覆剤として、または投与量単位の物理的形態を別に変化
させるために、種々の他の物質が存在し得る。例えば、
錠剤、丸薬またはカプセル剤を、シェラツク、糖または
その両方で被覆し得る。

シロップ剤またはエリキシル剤は、活性化合物、甘味料
（白糖）、保存剤（メチルおよびプロピルパラベン）、
色素並びに香料（例えばヂエリーまたはオレンジフレー
バー）を含有し得る。当然、投与量単位の調製に使用さ
れる物質は、いずれも薬学的に純粋、かつ使用量では実
質的に無毒性であるべきである。加えて、活性化合物を
、徐放性製剤に組み込むことができる。

活性化合物を、非経口的または腹腔内に投与することも
できる。グリセロール、液体ポリエチレングリコールお
よびその混合物並びに油中の分散剤を調製することもて
きる。通常の貯蔵および使用条件下では、これらの製剤
は、微生物の生長を防ぐ保存剤を含有する。

注射に適当な剤形には、滅菌水溶液または分散液、およ
び滅菌注射溶液もしくは分散液を用時調製するための滅
菌粉末がある。いずれも場合も、製剤は、滅菌されてお
り、かつ容易に注射できる程度に流動性でなければなら
ない。これは、製造および貯蔵条件下に安定でなければ
ならず、微生物（例えばバクテリアおよび菌類）の感染
作用から保護されなければならない。担体は、溶媒また
は分散媒質、例えば水、エタノール、ポリオール（例え
ばクリセロール、プｌ：ｌピレンクリコールおよび、成
体ボリエヂレノクリコールなと）、その適当な混合物お
よびｈｒｆ物性浦てあ−てよい３例えば、レンチンのよ
うな被覆の使用、分散剤の場合は、所定の粒子径の保持
、および界面活性剤の使用によって、適当な流動性を保
持することができる。種々の抗菌剤および抗真菌剤、例
えばパラベン、クロ（ｙブタノール、フェノール、ソル
ビン酸、チメロザルなとによって、微生物の作用を妨害
することかできろ。多くの場合、等張化剤（例えば、糖
、または塩化ナトリウム）を含有４〜ることが好ましい
。組成物中に、吸収を遅ら什る物質（例えばアルミニウ
ムモノステアレー１・およびゼラチン）を使用「ろこと
によって、注射用組成物の吸収を延長することかできる
。

滅菌注射溶液は、適当な溶媒中の所定量の活性化合物を
、１１り記の種々の曲の成分と組み合イっせ、要ずれば
次いで滅菌濾過することによって：Ａ製される。通例、
分散剤は、種々の滅菌活性成分を、屑本的な分散媒質を
含有する滅菌担体および前記のような所定の他の成分と
組み合わせることによって調製される。滅菌ｔ−を射溶
液」１１製用の滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、
減圧乾燥および凍結乾燥法であり、これによ−）で、活
性成分と追加の所望の成分との粉末（その溶液は、前辺
て滅菌、ｌゼ過されている）が得られる。

本明細書中、「薬学的に許容し得る担体」には、溶媒、
分散媒質、被覆剤、抗菌および抗真菌剤、等張および吸
収遅延剤なとが含まれる。そのような媒質およびＦ＋ｌ
ｔ助剤を薬学的に活性な物質に使用することは、当業者
によく知られている。活性成分に適合しない従来の媒質
または補助剤を除いては、治療用組成物におけるその使
用が色図されている。追加の活性成分を組成物に組み入
れることらできる。

投与の簡便および用量の均一化のために、非経口投与用
組成物を投与量単位に調製することが特に有利である。

ここで使用する投与ｍ単位とは、処置するポ乳動物に対
して単位投与型として適当な物理的に個々の単位をρ味
し、各単位は、所望の治療効果が得られるように計算さ
れた所定量の活性成分と必要な薬剤担体とを組み合わせ
たしのを含有する。本発明の新規投与量単位の規格は、
（ａ）活性物質固宵の性質および達成ケる特定の治療効
果、並びに（１））生物の前記のような疾病を処置する
ための活性物質を合成する分野における本質的な制限に
直接基づいている。

主な活性成分は、有効量を好都合かつ効果的に投与でき
ろように、適当な薬学的に許容し得ろ担体と共に、前記
のような投与量単位として合成されろ。！１″！位投与
■は、例えば、主な活性成分を約０．１〜約１０００ｍ
ｇ、　ｈＴましくは約５〜約５００ｍｇ含Ｙ了する。割
合で示すと、活性成分は、通例、担体１ｍｃ当たり約１
〜約１００ｍｇ存在する。追加の活性成分を含有する組
成物の場合には、その投与量は、首記成分の通常の投与
量および投与方法に照らして決定される。

本発明のさらに詳しい理解、およびその他の目的のため
に、以下の記述および実施例を挙げる。

［実施例］ 寒湾男土 吸 アセタゾラミド１モルを、ＤＭＳＯＩＯ％（ｗｔ／Ｖ）
溶液に溶解し、窒素雰囲気中、室温で撹拌しながらピリ
ジノ２２モルに加えた。アジポイルジクロリド１モルを
、室温で１日間にわたって浦和した。次いで、テトラサ
イクリン（塩基）１モルを加え、加熱して５０°Ｃに２
日間保った。

精製 水中の水酸燐灰石のｌ　Ｑ％スラリー５００ｍ１２を前
記生成物に加え、３時間撹拌した。上澄をデカントし、
水で１回洗った。ＥＤＴＡ　１モル（ａｑ）を、水酸燐
灰石中に存在するカルシウムと当ｍとなるように加えた
。ＨＯ２でｐｌ−Ｉを３に調節し、ｎ−ブチルアルコー
ル５００ｍＱを積層して６時間放置した。２相を分離し
、次いでブチルアルコールを回収し、回転蒸発器に入れ
た（３回）。溶媒を除去し、薬物残渣が得られた：収率
（理論値）１５４％。

この実験の目的のために、アセタゾラミトおよびアジポ
イルジクロリドの反応生成物（エステル）であるオステ
オスタト中間体を合成した。

び燐庚石への吸収 骨に対するオステオスタトの親和性を試験するために、
試験化合物を、骨の無機成分である水酸燐灰石［Ｃａ＋
ｏ（ＰＯ４）ｅＯＨ７］のスラリーと共にインキュベー
トした。アセタゾラミド、テトラサイクリン、オステオ
スタト中間体および前記のように合成したオステオスタ
トの、水酸燐灰石結晶への結合力、並びにこの結合を解
離するために必要な条件を評価した。

アセタゾラミドもオステオスタト中間体も、骨に対して
特に親和性は無かった。テトラサイクリンおよびオステ
オスタしは、いずれら骨に強く結合シ、オステオスタト
の骨親和性は、テトラサイクリンのそれよりもわずかに
高いことがまず分かった。この望ましい性質のために、
低用量で使用する（副作用を最少にする）ことかでき、
これらの薬剤の骨に対する特異性が高まる。これらの化
合物の結合度を、３６０ｎｍにおけるＵＶ分光検査法に
よって監視した。データを第１ａ−１ｄ図に示す。

炭酸脱水酵素阻害 炭酸脱水酵素活性のアッセイ（マレン（Ｍ　ａｒｅｎ）
、ジャーナル・オブ・ファーマコロジー・アンド・エク
スペリメンタル・セラビューティクス（ＪＰｈａｒｍａ
ｃｏｌ、　Ｅｘｐ、　Ｔｈｅｒ、　）、＋３０：２［３
，１９６０年参照）には、既知の溶液の酸性化速度の測
定が伴う。酵素非存在下の反応時間（第２ａ−２ｄ図中
に、非触媒時間として示す。）が５０〜６０秒間となる
ように条件を選択する。炭酸脱水酵素適当量添加後の反
応時間は、約２０秒間に短縮する。次いて、試験溶液を
加え、反応時間が延長すれば、阻害剤が存在することが
わかる。

各化合物について、非触媒反応、酵素触媒反応時間およ
び試験化合物存在下の酵素触媒反応時間の棒グラフを、
第２ａ−２ｄ図に示す。穏やかな加水分解条件に付す前
後に化合物を試験した。試験化合物を当景加えた。示さ
れた値は、５測定値の平均に、平均値の標桑誤差を加え
た値または引いた値である。各試験溶液について、使用
した溶媒をも試験して、溶媒が反応時間に影響しないこ
とを確認した。いずれの場合も、加えた溶媒はいかなる
作用をも有していなかった。

儒停留物の、骨への輸送 アセタゾラミド、オステオスタト中間体、テトラサイク
リンおよび前記のように合成したオステオスタトを、鶏
の受精卵に、増殖の盛んな期間に投与した。卵がふ化す
る前日に、これらのヒナから長骨を採り、骨を酸の希水
溶液（０，１ＮＨＣρ、４８時間）に溶解し、この加水
分解物を、３６００ｍにおけるＵＶ分光検査法に付し、
薬物沈着を評価した。テトラサイクリンもオステオスタ
トら、骨にほとんど等モルで沈着していた。データを第
３図に示す。

骨吸収のインビボ阻害 用いたモデルは、インデユースト・セカンダリ−・ハイ
パーパラチロイド・ラット（誘導続発性上皮小体亢進症
ラッド　ｒ　ｎｄｕｃｅｄ　　Ｓ　ｅｃｏｎｄａｒｙＨ
ｙｐｅｒｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ　　Ｒａｔ、　　Ｉ　
５ＨＲ）であった。

このモデルは長年使用し、炭酸脱水酵素阻害剤の効果を
実証したものである。

ｌ５ＨＲにおいて、上皮小体ホルモンが骨に及ぼず作用
によって、時間の経過に伴って血漿力ルンウム濃度が上
昇する。この研究において、対照動物およびテトラサイ
クリン投与動物は、予想通りの血漿カルシウム濃度上昇
を示した。しかし、合成したオステオスタト等モル用量
で前処理された動物は、血漿カルシウムの上昇を示さな
かった。

このことは、この薬物がインビボ阻害剤であることを示
している。第４図参照。

これらの実験を、スプラーグーダウレイ（Ｓｐｒａｇｕ
ｅ　−Ｄ　ａｗｌｅｙ）派生雌ラットを用いて行った。

処理の萌には、血漿カルシウム濃度は、１、１±０．３
ｍｇ／ｄＱであった。

腎動脈結さっの２時間後に血液試料を採った。

常に、対照群（薬物賦形剤ノメヂルスルポキンドを注射
したもの）は、血漿カルノウム濃度の著しい上昇を示し
た。テトラサイクリン処理動物にも、同様の上昇が見ら
れた。オステオスタト５０ｍｇ／ｋｇを採血の２．１時
間前に投与された動物は、血漿力ルノウムの上背、を示
さなかった。テトラサイクリンの投与量は、オステオス
タトの投与量と等モルであった。

特定の好ましい態様に関して本発明を記載してきたが、
当業各は、本発明の範囲ないで変化および改良を加え得
ることを理解するであろう。

【図面の簡単な説明】

第１３．１ｂ、ＩＣおよび１６図は、それぞれ、アセド
アシラミド、テトラサイクリン、「オステオスタト」中
間体および「オステオスタト」について、３６０ｎｍに
おけるＵＶスペクトル法でモニターして得たヒドロキノ
アパタイト（ＨＡ）結合（吸着）パーセントを示す図で
ある。図中、ＡはＨＡ非結合フラクノヨン、ＢはＩ−（
Ａ結合フラクンヨン、ＣはＩ−（Ａからの０．１Ｍ燐酸
緩衝液溶離フラクノヨン、ＤはＨＡからの０，２Ｍ燐酸
緩衝液溶離フラクションを示す。 第２ａ、２ｂ、２ｃおよび２ｄ図は、それぞれ、アセド
アシラミド、テトラサイクリン、［オステオスタト」中
間体および「オステオスタｌ−Ｊの存在下における、炭
酸脱水酵素活性アッセイによる非触媒反応時間（Ｅ）、
酵素触媒反応時間（Ｆ）、並びに酸加水分解Ｆｒ（ｃ）
および後（１１）の活性を示す図である。 第３図は、媒質対照、テトラサイクリン、「オステオス
タト」中間体および「オステオスタト」のインビトロに
おける相対的骨結合度を示す図である。 第４図は、ＤＭＳＯ（対照）、テトラサイクリンおよび
「オステオスタト」で処理した雌ラットにおける血漿カ
ルノウム濃度を示す図である。 特許出願人　リザーヂ・コーポレイノヨン代　理　人　
弁理士　青　山　葆　ほか１名図面の浄書（内容に変更
なし） 第１ｑ図　　　　　　　　第１ｂ図 第１ｃ図　　　　　　　　第１ｄ図 ｊｉ２ａ図　　　　　　　　　第２ｂ図ＥＦ　　　Ｇｌ
−Ｉ　　　　　　　　Ｅ　　　Ｆ　　　Ｇ　　　Ｈ第２
Ｃ図　　　　　　　　第２ｄ図 Ｅ　　ＦＧＨＥＦ　　ＧＨ 第３図 第４図 手続補正書（自発） 昭和　６１年　６月５　日 ”ｉｆ′ｊ″１８３　　　　　６ １、事件の表示 昭和６１年特許願第　　１０２９６５　　　　号２、発
明の名称 骨を標的とした炭酸脱水酵素阻害剤 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 住所　アメリカ合衆国ニューヨーク、ニューヨーク、ブ
ロードウェイ２５、スィート　８５３名称　リサーチ・
コーポレイション ４、代理人 ５、補正命令の日付　自発 ６、補正の対象　図面

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、変性骨疾患の処置および予防に有用な化合物であっ
   て、向骨剤および炭酸脱水酵素阻害剤の反応生成物を含
   んで成る化合物。 ２、薬学的に許容し得る担体と組み合わせて使用する特
   許請求の範囲第１項記載の化合物。 ３、阻害剤が、ミトラマイシンである特許請求の範囲第
   １項記載の化合物。 ４、向骨剤が、テトラサイクリン化合物またはジホスホ
   ネートである特許請求の範囲第１項記載の化合物。 ５、テトラサイクリン化合物が、塩酸クロルテトラサイ
   クリン、塩酸デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、
   テトラサイクリン、メタサイクリンまたはオキシテトラ
   サイクリンである特許請求の範囲第４項記載の化合物。 ６、ジホスホネートが、エタン−１−ヒドロキシ−１，
   １−ジホスホン酸、ジクロロメタンジホスホン酸または
   ３−アミノ−１−ヒドロキシプロパン−１，１−ジホス
   ホン酸である特許請求の範囲第４項記載の化合物。 ７、前記酵素阻害剤が、複素環式スルホンアミドまたは
   イミダゾール化合物である特許請求第１項記載の化合物
   。 ８、前記スルホンアミドが、アセタゾラミド、メタゾラ
   ミド、エトキシゾラミドまたはベンゾラミドである特許
   請求第７項記載の化合物。 ９、反応生成物が、架橋剤をさらに含んで成る特許請求
   の範囲第１項記載の化合物。 １０、前記架橋剤が、アジポイルジクロリドである特許
   請求の反応第９項記載の化合物。 １１、前記化合物約５〜約５００ｍｇを含んで成る単位
   投与量形の特許請求の範囲第２項記載の組成物。 １２、変性骨疾患の処置および予防に有用な化合物の製
   造方法であって、向骨剤と炭酸脱水酵素阻害剤を、前記
   反応物質の反応生成物を生成する条件下に生成するに足
   る時間反応させることを含んで成る方法。 １３、最初に向骨剤を架橋剤と接触させることを含んで
   成る特許請求の範囲第１２項記載の方法。 １４、前記架橋剤が、アジポイルジクロリドである特許
   請求の範囲第１３項記載の方法。 １５、阻害剤がミトラマイシンである特許請求の範囲第
   １２〜１４項のいずれかに記載の方法。 １６、向骨剤が、テトラサイクリン化合物またはジホス
   ホネートである特許請求の範囲第１２〜１５項のいずれ
   かに記載の方法。 １７、テトラサイクリン化合物が、塩酸クロルテトラサ
   イクリン、塩酸デメクロサイクリン、ドキシサイクリン
   、テトラサイクリン、メタサイクリンまたはオキシテト
   ラサイクリンである特許請求の範囲第１６項記載の方法
   。 １８、ジホスホネートが、エタン−１−ヒドロキシ−１
   ，１−ジホスホン酸、ジクロロメタンジホスホン酸また
   は３−アミノ−１−ヒドロキシプロパン−１，１−ジホ
   スホン酸である特許請求の範囲第１６項記載の方法。 １９、前記酵素阻害剤が、複素環式スルホンアミドまた
   はイミダゾール化合物である特許請求の範囲第１２〜１
   ８項のいずれかに記載の方法。 ２０、前記スルホンアミドが、アセタゾラミド、メタゾ
   ラミド、エトキシゾラミドまたはベンゾラミドである特
   許請求の範囲第１９項記載の方法。