JPS6227665A

JPS6227665A - 脂質測定法

Info

Publication number: JPS6227665A
Application number: JP60167004A
Authority: JP
Inventors: Mamiko Nakako; 中子　真美子; Yoshio Hanasato; 善夫花里; Mitsuo Maeda; 満雄前田
Original assignee: SEITAI KINOU RIYOU KAGAKUHIN SHINSEIZOU GIJUTSU KENKYU KUMIAI
Current assignee: SEITAI KINOU RIYOU KAGAKUHIN SHINSEIZOU GIJUTSU KENKYU KUMIAI
Priority date: 1985-07-29
Filing date: 1985-07-29
Publication date: 1987-02-05

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）この発明は酵素センサを適用した脂質測定法に関するも
のである。

（従来の技術）一般に、中性脂質の測定においては、脂質を加水分解し
生じたグリセロールの定量を行うという方法を用いてい
た。しかしこの方法には、操作の煩雑さに伴う種々の欠
点があり、これらの欠点を克服するためセンサによる測
定法が試みられてきた。

例えば、日本化学会第４８秋季年会講演予稿集、Ｐ４７
８に示された脂質測定法は、酵素センサとして水素イオ
ン感応性電界効果をトランジスタ（以下ｐＨ−ｌ５ＦＥ
Ｔと称する）上に有機膜を形成し、その上にリポプロテ
ィンリパーゼを化学修飾したものを用い、また標準試料
としてトリオレインを選び、これをトリトンｘ−ｉｏｏ
　（ポリオキシエチレンクリコールｐ−ｔ−オクチルフ
ェニルエーテルのオキシエチレングリコール基の重合数
が９．１０のものの商品名）溶液に懸濁させ遠心分離し
、得られた中間層の液を試料として、パッチ方式によっ
て測定を行うものであり、その測定原理は次の如きもの
である。即ち、ｐＨ−ｌ５ＦＥＴ上の有機膜に化学修飾
により固定化されたリポプロティンＩＪ　、ξ−ゼは、
脂質試料を次式（１）に従って脂肪酸とグリセロールに
分解する。この分解生成物である脂肪酸ｔｐＨ−ＩＳＦ
ＥＴで定量することによって脂質濃度の測定が可能とな
る。

式（１）％式％：ＣＨ２０ＣＯＲｓ　　　　　　　　　アルキル基ＣＨＯ
ＣＯＲ２＋ＣＨＯＣＯＲ，、＋　Ｒ，Ｃ０ＯＨ＋　Ｒ，
Ｃ０ＯＨＣＨ２０）１ＣＨ２ＣＯＲ２＋Ｒ，Ｃ０ＯＨ＋　Ｒ３Ｃ０ＯＨＨ２０
ＨＨ２０ＨＣＨＯＨ＋　Ｒ２Ｃ０ＯＨ曇ＣＨ，０Ｉ（（発明が解決しょうとする問題点）上述の測定法は、血清中の脂質定量を主な使用目的とし
ており、脂質に対するセンサの応答が得られることを確
認するため、水難溶性のトリオレインを用いてなされて
いる。そして、このトリオレインをトリトンＸ−１００
溶液に懸濁させ、遠心分離で得られた中間層を回収して
脂質センサ用試料とするもので、未だ操作の煩雑さが残
されていた。

（問題点を解決するための手段）この発明は上記のような問題点を解消するためになされ
たもので、水難溶性の脂質試料を簡便に調整し、測定に
供することを目的とする。

即ちこの発明は、酵素センサによる脂質測定において、
界面活性剤を用いて水難溶性の脂質を可溶化して、セン
サ用試料としたことを特徴とする脂質測定法である。こ
こで界面活性剤として、ポリオキシエチレングリコール
ｐ−ｔ−オクチル７二二ルエーテル、アルキルグルコシ
ド、ホリオキシエチレンクリコールステアリルエーテル
、ホリオキシエチレングリコールンルビタンモノラウレ
ート、ソルビタンラウレート、ジギ゛トニン等の非イオ
ン性界面活性剤、コール酸塩、デオキシコール酸塩等の
陰イオン性界回活性剤、ドデシルトリメチルア／モニウ
ムブロミド、セチルトリメチルアンモニウムブロミド等
の陽イオン性界面活性剤、デオキシリゾレシチン、単鎖
レシチン等の両性界面活性剤が用いられる。

（作　用）この発明では、試料調整のため界面活性剤を用いた結果
、脂質を可溶化することができ、測定操作の簡略化が可
能となる。

（実施例）以下、この発明の一実施例を図について説明する。第１
図は測定に用いる酵素センサの構造図で、１はリード線
、２はエポキシ樹脂、３は参照電極、４はｐＨ−ｌ５Ｆ
ＥＴ、５はリパ−ゼ固定化膜、６は基材である。リパー
ゼ固定化膜５は、リパーゼを感光性樹脂を用いて包括固
定化したものである。

第２図はフロ一方式による脂質測定装置の概略図で、７
は洗浄液、８は可溶化した脂質試料、９は切ジ換えノ々
ルブ、ｌＯはポンプ、１）はウォータージャケット、１
２は酵素センサ、１はリード線、１３は測定回路、１４
は記録計、１５は洗浄液あるいは脂質試料をウォーター
ジャケット内に流すためのチューブである。

この装置において、脂質試料８がチューブ１５を通って
酵素センサ１２に達すると、リスぞ−ゼ固定化膜５中の
りノぞ−ゼは脂質を前記式（１）に従って分解する。こ
の反応の結果生ずる脂肪酸をｐＨ−Ｉ　５ＦＩ４でモニ
タし、測定回路１３で信号処理を行い、記録計１４に記
録する。脂質試料として、界面活性剤トリトンＸ−１０
０溶液によって可溶化されたトリオレイン（３ｍＭ　）
を選び、測定を行った結果得られた応答曲線を第３図に
示す。この図から明らかなように、安定したセンサの応
答が得られている。

さらに、界面活性剤トリトンＸ−１００溶液によって可
溶化されたトリオレインについての検量線を第４図に示
す。測定は１ｍＭ）リスマレイン酸緩衝液中で、ＰＨ７
，０，３０℃の条件で行った。第４図から明らかなよう
に、トリオレイン濃度０６ｍＭ〜３．０ｍＭの範囲で直
線応答を得ている。

なお、上記実施例ではフロ一方式による脂質測定法を示
したが、パンチ方式でも同様に測定可能である。また界
面活性剤としてトリトンＸ−１００溶液を用いたが、他
の非イオン性界面活性剤や、コール酸塩等の陰イオン性
界面活性剤、ドデシルトリメチルアンモニウムブロミド
等の陽イオン性π　界面活性剤、レシチン等の両性界面
活性剤を用いても、上記実施例と同様の効果を奏する。

さらに脂質試料としてトリオレインを用いた力；、他の
水難溶性脂質でも同様に測定可能である。

また酵素センサに関しては、ｐＨ−ｌ５ＦＥＴの代ｐに
ガラス電極など水素イオンの測定が可能なものを用いて
も良く、す・々−ゼの代りにリボプロティンリパーゼを
用いることも可能である。さらに酵素の固定化に感光性
樹脂による包括固定法を用いているが、ポリアクリルア
ミドや寒天による固定化や化学修飾による固定化等でも
上記実施例と同様の効果を奏する。

（発明の効果）以上のように、この発明の脂質測定法では界面活性剤を
用いたことにより、水難溶性の脂質を可溶化することが
でき、従来法に比べよυ簡便な試料調製及び測定が可能
となるのである。

【図面の簡単な説明】

第１図は測定に用いた酵素センサの構造図、第２図は７
０一方式による脂質測定装置の概略図、第３図は測定の
結果得られたセンサの応答を示す曲線図、第４図は酵素
センサのトリオレインに対する検量線を示す図である。１・・・リード線、２・・・エポキシ樹脂、３・・・参
照電極、４・・・ｐｉ（−ＩＳＦＥＴ、５・・・Ｕ、ξ
−ゼ固定化膜、６・・・基材、７・・・洗浄液、８・・
・可溶化した脂質試料、９・・・切り換えバルブ、１０
・・・ポンプ、１）・・・ウォータージャケント、１２
・・・酵素センサ、１３・・・測定回路、１４・・・記
録計、１５・・・チューブ。なお図中、同一符号は同一または相当部分を示す。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）酵素センサによる脂質測定において、界面活性剤
を用いて水難溶性の脂質を可溶化して、センサ用試料と
したことを特徴とする脂質測定法。
（２）界面活性剤として、ポリオキシエチレングリコー
ルｐ−ｔ−オクチルフェニルエーテル、アルキルグルコ
シド、ポリオキシエチレングリコールステアリルエーテ
ル、ポリオキシエチレングリコールソルビタンモノラウ
レート、ソルビタンラウレート、ジギトニン等の非イオ
ン性界面活性剤を用いることを特徴とする特許請求の範
囲第（１）項記載の脂質測定法。
（３）界面活性剤として、コール酸塩、デオキシコール
酸塩等の陰イオン性界面活性剤を用いることを特徴とす
る特許請求の範囲第（１）項記載の脂質測定法。
（４）界面活性剤として、ドデシルトリメチルアンモニ
ウムブロミド、セチルトリメチルアンモニウムブロミド
等の陽イオン性界面活性剤を用いることを特徴とする特
許請求の範囲第（１）項記載の脂質測定法。
（５）界面活性剤として、デオキシリゾレシチン、単鎖
レシチン等の両性界面活性剤を用いることを特徴とする
特許請求の範囲第（１）項記載の脂質測定法。