JPS62281855A - ビタミン，ビタミン誘導体，またはホルモンを含有する包接化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、ビタミン、ビタミン誘導体、またはホルモン
を含有し、該化合物の水溶性および安定性を著しく向上
させる包接化合物に関する。

（従来の技術） 各種ビタミン、薬剤などの安定性を高めそして／あるい
はその水溶性の度合を高めて、注射剤や健康食品に利用
すべく、該化合物を包接化することが知られている。例
えば、熱や光に不安定な脂溶性のビタミンＤ３をシクロ
デキストリンに作用させて、熱安定性および光安定性に
優れ水溶性の高い包接化合物とする方法が特開昭５２−
１３０９０４号公報に開示されている。このほか、活性
型ビタミンＤ、誘導体とシクロデキストリンとの包接化
合物（特開昭５１−１２８４１７号公報）、活性型ビタ
ミンＤ。

誘導体と胆汁酸との包接化合物（特開昭５５−６９５６
２号公報）などが知られている。

（発明が解決しようとする問題点） このように各種ビタミンなどを包接化することによりそ
の化学的安定性を向上させ、同時に水溶性の度合を向上
させることが可能であるが１例えばこれらビタミン類を
注射用製剤として用いるにはその水溶性の度合はいまだ
充分とはいえない。

本発明の目的は、シクロデキストリン誘導体を用いて各
種ビタミンやホルモンを包接化することにより該ビタミ
ンやホルモンの安定性を向上させかつその水溶性を高め
る包接化合物を提供することにある。

（問題点を解決するための手段） 本発明のビタミン、ビタミン誘導体、またはホルモンを
含有する包接化合物は、ビタミン、ビタミン誘導体、ま
たはホルモンと、マルトシルシクロデキストリンとから
なり、そのことにより上記目的が達成される。

本発明の包接化合物のホスト化合物はマルトシルシクロ
デキストリン（Ｍａｌ−ＣＤ）である。これはシクロデ
キストリンを構成するグルコースの１個にマルトースが
α−（１−６）結合して得られる分岐シクロデキストリ
ンである。このようなＭａｌ　−ＣＤはシクロデキスト
リン（ＣＤ）とマルトースとをシュードモナス属菌の産
生ずるイソアミラーゼにより縮合させて得られる（アミ
ラーゼシンポジウム（１９８５）　、檜作進ら）ことが
知られている。このイソアミラーゼは蒸出らにより発見
された酵素であり（Ｂｉｏｃｈｉｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ
、　Ａｃｔａ＋　２１２　、４５８　　（１９７０）　
）　、グリコーゲンやアミロペクチンのα−（１−６）
結合を加水分解してアミロース様直鎖多糖類を生成する
性質を有する。このイソアミラーゼの逆反応を利用する
ことにより、上記縮合反応が達成される。例えば、　Ｃ
Ｏ，マルトースおよびイソアミラーゼを適当な緩衝液中
４０〜６５°Ｃで４８時間程度反応させることによりＭ
ａｔ−ＣＯが生成する。

マルトースおよびイソアミラーゼはＣＤ１モルに対しそ
れぞれ０．５〜２モルおよび５万〜２０万Ｕの割合で用
いられる。ここでイソアミラーゼのＩＵは。

１分間に１μｍｏｌのブドウ糖相当の還元力を生ずる酵
素量をいう（Ａｇｒｉｃ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｉｍ、
　　４１．２０７７（１９７７））　、反応液は１通常
、冷却して過剰のβ−ＣＤを析出させ、これを除去した
後、カラムクロマトグラフィにより精製してＭａｌ−Ｃ
Ｄが得られる。

Ｍａｌ−ＣＤの調製に利用されるＣＤの炭素数は特に限
定されない。例えば、炭素数６のα−シクロデキストリ
ン、炭素数７のβ−シクロデキストリン。

炭素数８のＴ−シクロデキストリンが用いられる。

ＣＤとマルトースとの反応の速度はＣＤの炭素数が大き
い程大きい。

このようにして、　ＣＤにマルトース鎖が導入されると
水溶性が極めて高くなる。例えば、　　Ｍａｌ−β−Ｃ
Ｄの水溶性はβ−ＣＤの数十倍である。その結果。

Ｍａｌ−β−ＣＤをホスト化合物とする包接化合物の溶
解度もβ−ＣＤをホストとする場合よりはるかに高くな
り、非常に高濃度の水溶液を得ることが可能になる。

被包接化物のうち、ビタミンとしては、とタミンＡ類、
ビタミンＤ類、ビタミンＥ［、ビタミンに類１葉酸（ビ
タミンＭ）などが挙げられる。例えば、ビタミンＡ類と
してはビタミンＡ＋、Ａｚおよびパルミチン酸レチノー
ルが、ビタミンＤ類としてはビタミンＤ　＋、　Ｄ　ｚ
、　Ｄ　３＋　Ｄ　Ｉ＋およびり、が。

ビタミンＥｌｆｉとしてはα−トコフェロール、β−ト
コフェロール、γ−トコフェロール、δ−トコフェロー
ルおよびニコチン酸〃−α−トコフェロールが、ビタミ
ンに類としてはビタミンＫｒ、Ｋｚ。

Ｋ　３　＋およびに４が挙げられる。ビタミン誘導体と
しては、上記ビタミンの各種誘導体が挙げられる。

例えば、５．ｓ−トランス−コレカルシフェロール、２
５−ヒドロキシコレカルシフェロール、１−α−ヒドロ
キシコレカルシフェロールなどのビタミンＤｚ　ｍＡｓ
体；　５，６　　ｈランス−エルゴカルシフェロールな
どのビタミンＤ２誘導体などが挙げられる。

ホルモンとしては、主として、ステロイドホルモン類が
用いられる。それには１例えば、ベタメサゾン、トリア
ムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、フルオシノ
ロンアセトニド、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、
エストリオールがある。

本発明の包接化合物は１例えば９次の方法で調製される
。

■Ｍａｌ　−ＣＤの水溶液に難水溶性の被包接化物を添
加し、必要に応じて加温し攪拌（振盪）する。

残留した未反応の被包接化物を濾過、遠心分離などによ
って除去すると包接化合物の水溶液が得られる。

■被包接化物をあらかじめ適当な水と相溶可能な有機溶
媒に溶解しておき、これを水溶液中のＭａｌ　−ＣＤと
接触させ２次いで、有機溶媒および水を留去した後、残
渣に水を加えて溶かし、未反応の被包接化物を除去する
と包接化合物の水溶液が得られる。

■適当な有機溶媒に難水溶性の被包接化物を溶解し、こ
れにＭａｌ−ＣＤを添加する。これを振盪して反応させ
た後、溶媒を−４縮乾固し９次いで、これに水を加える
。未反応の被包接化物を除去すると包接化合物の水溶液
が得られる。

■水に難溶な酸性被包接化物については、アンモニア水
に溶解させ、これにＭａｌ　−ＣＤを加えて凍結乾燥す
る。凍結乾燥の過程において過剰なアンモニアが除去さ
れ、被包接化物のアンモニウム塩の包接化合物が得られ
る。

■水溶性の被包接化物については、　　Ｍａｌ　−ＣＤ
７に溶液と被包接化物の水溶液とを混合することにより
、包接化合物の水溶液が得られる。

このようにして得られた包接化合物は、水溶性の高いＭ
ａｌ−ＣＤを用いるため水溶性が極めて高い。

例えば、ビタミンＤ、のＭａｌ−β−ＣＤ包接化合物は
、β−ＣＤ包接化合物に比べて６００倍以上の水溶性を
示す。ビタミンＡ類、Ｄ類、Ｅ類、に類やステロイドホ
ルモンなどの脂溶性の物質も水に対する溶解度が非常に
高くなるため９例えば、これらを注射剤として用いるこ
とが可能となる。従来の乳化懸濁液を注射剤とする場合
には、ショックによる死亡事故が起こりやすいなどの問
題があるが。

本発明の包接化合物を用いると、このよ゛うな問題が全
く生じない。このような包接化合物は注射剤のほか、各
種健康食品などにも好適に用いられる。

（実施例） 以下に本発明を参考例および実施例につき説明する。

１考炎 マルトシル−β−シクロデキストリンの調製：マルトー
ス２７．４　ｇ　、　　β−シクロデキストリン（β−
ＣＤ）　　７．３　ｇおよびシュードモナス属菌から得
られたイソアミラーゼ６９４Ｕを５０ｍＭの酢酸ナトリ
ウム緩衝液（ｐＨ３，５）　８抛２に加えて溶解させ、
４５℃で４８時間インキュベートした。これを１００℃
に１５分間保って酵素（イソアミラーゼ）を失活させ２
反応液を７５％容量となるまでに濃縮した。次に、これ
を０℃に冷却し、析出したβ−ＣＤを遠心分離（１００
００Ｇ、　　１時間）にかけて除去した。上清液をセフ
ァデックスＧ−１５カラム（６，ＯＸ１１５　ａｍ）に
かけると、まず、マルトースが溶出された。マルトース
の溶出後半の部分と一緒にマルトシルβ−シクロデキス
トリン（Ｍａｌ−β−ＣＤ）が溶出されはじめ、　　Ｍ
ａｌ−β−ＣＤの溶出終了後、β−ＣＤが溶出された。

マルトースとＭａｔ−β−ＣＤとを含有するフラクショ
ンおよびＭａｌ−β−ＣＤのフラクションをあわせて濃
縮し、バイオゲルＰ−２カラム（２，６Ｘ９５ＣＩｍ）
にかけた。水を溶離液として展開したところ、　　Ｍａ
ｌ−β−ＣＤ　６４４Ｎが得られた。Ｍａｌ−β−ＣＤ
の純度は、　ＴＳ）ｌ　ｇｅｔ　Ｎｌ！ｚ−６０を充填
剤とした高速液体クロマトグラフィにより測定したとこ
ろ、９９％であった。

１里Ｍ ５Ｘ１０”ＭのＭａｌ−β−ＣＤ　（ホスト化合物）の
水溶液０．１ｃａｌを試験管に入れた。これにビタミン
Ｄ３　　（被包接化物）　１３．５１Ｗ　（３，５Ｘ　
１０−’ｍｏｌ）の粉末を加え、シーロンフィルム（ア
メリカン　カンカンパニー社製）で密栓した。３０℃で
１６時間振盪し０．２μｍのメンブランフィルタ−で未
反応のビタミ゛ンＤ３を除去した。得られた水溶液中の
ビタミンＤ、の含量を高速液体クロマトグラフィ　（１
１ＰＬｃ）を用い下記の条件で測定した。

ビタミンＤ、含量測定条件 測定機器：　Ｗａｔｅｒｓ　　６０００Ａ検出器　：　
ＵＶＩＤＥＣ−１００Ｉ［［検出波長：　２６５ｎｍ カラム　：　Ｆｉｎｅｐａｋ　　ＳＩＬ　Ｃｐｓ溶離液
　：　ＣＨ３０Ｈ−ＨｚＯ（９０：　１０）混液流速　
　：　１．５＋ｍ　１　／分 保持時間：約１５分 Ｍａｌ−β−ＣＤの濃度がそれぞれ１．０Ｘ１０−”Ｍ
　。

２．５Ｘ１０−”Ｍ　＃よび５．０Ｘ１０−”Ｍ　（７
）水溶液、オヨび比較のためＭａｌ−β−ＣＤを全く含
有しない精製水についても、同様の方法によりビタミン
Ｄ３の含量を測定した。次に、ホスト化合物としてＭａ
ｌ−β−ＣＤの代わりにβ−ＣＤを用いた場合について
。

前記と同様の方法により、ビタミンＤ３含量の測定を行
ない、　　Ｍａｌ−β−ＣＤの場合と比較した。ただし
、この場合の両ＣＤの濃度は、β−ＣＤの溶解度が低い
ため５　Ｘｌ０−’Ｍ、　Ｉ　Ｘｌ０−３Ｍ、　２　Ｘ
ｌ０−３Ｍ、　３　ｘｌｏ−’Ｍ、　４　ｘ　ＩＱ−３
Ｍおよび５Ｘ１０−’ＩＩとした。それぞれの結果を第
１図および第２図のグラフで示す。

Ｍａｌ−β−ＣＤをホスト化合物とした包接化合物およ
びβ−ＣＤをホスト化合物とした包接化合物の見かけの
安定度定数（Ｋ）を第２図から算出した。

見かけの安定度定数は次式で示される。

ビタミンＤ、・　Ｍａｌ−β−ＣＤ包接化合物の見かけ
の安定度定数は約８１ＱＱＭ−’　、そしてビタミンＤ
、−β−ＣＤ包接化合物の見かけの安定度定数は約１８
００１’ｌ−’であった。本発明の包接化合物の見かけ
の安定度定数はβ−ＣＤを用いた包接化合物の見かけの
安定度定数に比べて高い。このことから、　　Ｍａｌ−
β−ＣＤはビタミンＤｏｔを包接しやすく、水溶液中で
はビタミンＤ、が包接された状態で安定であり、かつ包
接化合物自体の水溶性が高いことが明らかである。なお
、β−ＣＤ包接化合物の溶解度相図はＢ。

型をとり包接化合物が沈澱してくるのに反し、Ｍａｌ−
β−ＣＤ包接化合物のそれは包接化合物の沈澱を生じな
いＡ、型であることから、さらに溶解度上昇の可能性が
示唆される。

（発明の効果） 本発明によれば、このように、各種ビタミンやビタミン
誘導体、またはホルモンを含有する包接化合物が得られ
る。このような包接化合物は上記ビタミンなどの被包接
化物を分解させることなく安定に保持する。該被包接化
物の水溶性も著しく向上する。そのため、従来乳化液の
形で注射剤としていたビタミンＤなどの脂溶性ビタミン
やホルモン類を水溶液の形で利用することが可能となる
。

このような包接化合物は、注射剤のほか、各種健康食品
などにも好適に用いられる。

２、図　の　車な説■ 第１図および第２図は、マルトシル−β−シクロデキス
トリンおよびβ−シクロデキストリンの水溶液にビタミ
ンＤ、をそれぞれ加えたときのビタミンＤ、の溶解性を
示すグラフである。

以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ビタミン、ビタミン誘導体、またはホルモンとマル
   トシルシクロデキストリンとからなる包接化合物。 ２、前記ビタミンがビタミンＡ類、ビタミンＤ類、ビタ
   ミンＥ類、ビタミンＫ類および葉酸のうちの少なくとも
   一種である特許請求の範囲第１項に記載の包接化合物。 ３、前記ビタミンＤ類がビタミンＤ＿２および／または
   ビタミンＤ＿３である特許請求の範囲第２項に記載の包
   接化合物。 ４、前記ビタミン誘導体が活性型ビタミンＤ＿３誘導体
   である特許請求の範囲第１項に記載の包接化合物。 ５、前記ホルモンがステロイドホルモン類である特許請
   求の範囲第１項に記載の包接化合物。 ６、前記マルトシルシクロデキストリンがマルトシルα
   −シクロデキストリン、マルトシルβ−シクロデキスト
   リンおよびマルトシルγ−シクロデキストリンのうちの
   少なくとも一種である特許請求の範囲第１項に記載の包
   接化合物。