JPS6232364A - 血清中の不飽和鉄結合能の測定方法 - Google Patents

血清中の不飽和鉄結合能の測定方法

Info

Publication number
JPS6232364A
JPS6232364A JP17182285A JP17182285A JPS6232364A JP S6232364 A JPS6232364 A JP S6232364A JP 17182285 A JP17182285 A JP 17182285A JP 17182285 A JP17182285 A JP 17182285A JP S6232364 A JPS6232364 A JP S6232364A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
iron
ascorbic acid
serum
reagent
reducing agent
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP17182285A
Other languages
English (en)
Inventor
Yoshisumi Ueno
上野 義澄
Hajime Yoshimura
一 芳村
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
SHINOTESUTO KENKYUSHO KK
Shino Test Corp
Original Assignee
SHINOTESUTO KENKYUSHO KK
Shino Test Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by SHINOTESUTO KENKYUSHO KK, Shino Test Corp filed Critical SHINOTESUTO KENKYUSHO KK
Priority to JP17182285A priority Critical patent/JPS6232364A/ja
Publication of JPS6232364A publication Critical patent/JPS6232364A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 [産業上の利用分野] 本発明は、血清中の不飽和鉄結合能の定量方法に関する
ものである。
血清鉄は、β−グロブリンに属するトランスフェリンと
結合し、ヘモグロビン合成のため骨髄の赤芽球や鉄を必
要とする各組織へ鉄を運んでいる。
正常人ではトランスフェリンの約1/3が鉄と結合し、
残り約2/3は未結合の形で存在する。そj  で  
  而 梼 th 6) A L  ら  ・/  フ
  7−  11   ’ノ  シ ±士 A、fTh
  叛  ス。
鉄の総量を総鉄結合能(T I BC)といい、未結合
、又は不飽和のトランスフェリンに結合しうる鉄量を不
飽和鉄結合能(U I BC)といい、この関係はT 
I BC=U I BC十血清鉄となる。
血清鉄、総及び不飽和鉄結合能の動向は、臨床面におい
て各種貧血の分類、肝疾患、急性及び慢性感染症など各
種の疾患と関係があり、その測定は臨床上極めて重要で
ある。
[従来の技術] 不飽和鉄結合能の測定方法としては、従来より鉄イオン
とそのキレート剤を使用し、錯体生成を行ない、鉄イオ
ン濃度を化学的発色により比色定量する方法が主として
行なわれている。この方法は、血清に既知過剰量の鉄を
添加したのち、結合していない残余の鉄を炭酸マグネシ
ウム、陰イオン交換樹脂で吸着除去してトランスフェリ
ン結合鉄を測定して総鉄結合能を求め、−別に測定した
血清鉄を差し引いて求めるものと、吸着剤を使用せず、
既知量の鉄を血清に添加し血清中のトランスフェリンを
飽和させた後、遊離の鉄イオンを比色定量し添加した鉄
イオン濃度から差し引くことによって不飽和鉄結合能を
測定するものとに大別される。前者の方法に比べ後者の
方法は、大量の検体を正確に、かつ迅速に処理できる自
動分析に適しているため多用されている。
鉄イオン濃度を化学的発色により比色測定するための公
知の発色剤は、その殆どが三価鉄とはキレート生成しな
いため、予め三価鉄を二価に還元する必要がある。還元
剤としてはチオグリコール酸、アスコルビン酸、塩酸ヒ
ドロキシルアミン等が広く用いられている。特に、アス
コルビン酸は鉄測定用の還元剤として最も適しているが
、その使用に当たっては安定性の面で極めて重大な問題
点を有している〔特開昭59−50364号公報〕。
[発明が解決しようとする問題点] 従来アスコルビン酸を還元剤として用いる場合、これを
溶液状態で長期間保存するのは困難であり、更にニトロ
ソ7工7−ル誘導体等の還元されやすい官能基を有する
発色剤(す〃ンド)との共存下での安定化は極めて困難
であった。本発明は、アスコルビン酸を還元剤として、
長期間溶液状態で安定化させ、更に、このことにより還
元されやすい官能基を有する発色剤どの共存下での安定
化を目的とするものである。
即ち、アスコルビン酸は、溶液状態では酸性下(pH1
,5付近)においても徐々に分解(酸化)され、特に室
温(25°C)での保存性は極めで悪い。このことは、
アスコルビン酸と還元されやすい官能基を有する発色剤
との共存を困難にするばかりでなく、測定試液の安定性
に大きく影響する。
この様な問題に討して、アスコルビン酸と発色剤とを各
々独立させる試薬系が考えられるが、測定繰作の簡便化
のため1こは、試薬を混合して用いることが望まれてい
る。訓定試薬を2試薬系に所望する限り、試薬として使
用する三価鉄とアスコルビン酸の共存の問題がでてくる
。これは、例えば三価鉄は発色剤と共存させるとブラン
クの上昇がみられること、又アスコルビン酸と共存させ
ると二価鉄に還元されて、トランスフェリンとの反応が
遅く不完全となる。更に、これらの手段は還元剤として
のアスコルビン酸の安定化という問題に対して、本質的
な解決方法とはなり得ない。
本発明者らは、かかる問題点iこつき鋭意研究を重ねた
結果、アスコルビン酸誘導体を使用すれば、それらの問
題点が克服されることを見出し、本発明を完成するに到
った。
[問題点を解決するための手段] 本発明は、不飽和鉄結合能の比色測定において7スコル
ビン酸誘導体を用い、これを酵素作用でアスコルビン酸
に分解し、これを三価鉄の還元剤として使用することを
特徴とする血清中の不飽和鉄結合能の測定方法である。
本発明におけるアスコルビン酸誘導体とは、アスコルビ
ン酸−2(又は3)−リン酸エステル、アスコルビン酸
−2(又は3)−入ルホン酸エステル、アスコルビン酸
−2(又は3)−脂肪酸モノエステル、アスコルビン酸
脂肪酸ジエステルなどが挙げられる。そして、それらに
作用する酵素としては、ホスファターゼ、サルファター
ゼ、又l+11ゼゴロ千イン11バー、J/嘘か田い7
+ 鮭3俸田により生成するアスコルビン酸は三価鉄を
二価1こ還元することにより、二価鉄と発色剤との反応
が生ずる。発色剤は公知のものを用いればよいが、特に
2−ニトロソ−5−(N−プロピル−N−スルホプロピ
ルアミノ)7エ/−ル、2−ニトロソ−5−(N−エチ
ル−N−スルホプロピルアミ/)7エ/−ル9の二Fロ
ソ7工/−ル誘導体、バソ7エナンスロリン等が好まし
い。
本発明の測定方法は、第1試薬、又は第2試薬にアスコ
ルビン酸N導体と酵素を別個に、そして三価鉄と発色剤
を第1試薬、又は第2試薬に別個に添加したものを用意
する。次に、三価鉄の入った試薬と血清とを反応させ、
この後発色剤の入った試薬を加えて反応させる。この方
法により、血清中の不飽和トランスフェリンは添加され
た鉄と結合して飽和トランスフェリンとなる。この時、
結合しなかった鉄は、酵素の作用によりアスコルビン酸
誘導体から生成したアスコルビン酸によって二価鉄に還
元され、発色剤とキレート結合して呈色する。そこで、
添加さfiだ既知過剰量の鉄から、結合しなかった残余
鉄量を差し引くことにより不飽和鉄結合能を求めること
が可能になる。
〔作用〕
本発明で用いるアスコルビン酸誘導体は、酵素の作用で
分解後アスコルビン酸が遊離して、初めて還元剤となる
ので、発色剤との共存状態で長期間安定である。又、ア
スコルビン酸と鉄を共存させる場合、鉄が二価に還元さ
れてトランスフェリンとの反応が遅く不完全であったが
、これは本発明によりM消され、鉄と還元剤との共存が
可能になる。
第1表は、従来のアスコルビン酸を還元剤に使用した場
合と本発明の還元剤の安定性を効力試験で示したもので
ある。例えば、2〜8℃保存におけるアスコルビン酸で
は60日口重約50%還元力が減少するのに対し、本発
明の還元力は殆ど変化しない。そして、この比較は25
℃では更に顕著に現われる。
第2表は、本発明の還元剤の安定性を含量試験で従来の
アスコルビン酸と比較した結果を示したものである。ア
スコルビン酸は21日口重2〜8℃で60%、25°C
で90%の含量低下があるのに対し、本発明の還元剤は
同条件下で60日経過しても変化しない、尚、アスコル
ビン酸の定量はヨードメトリー法(日本薬局方第10改
正、参照)で行ない、調製時を100とし、溶解液のp
 l−IはpH1゜5付近にした。一方、本発明法にお
ける還元剤は液体クロマトグラフ法(カラム:4.6φ
×15cm、溶a液:0.08M酢酸緩衝液、2.8m
Mn−ヘキシルアミン、0.1mMEDTA、2%メタ
ノール、検出器:UV254n111)で測定し、調整
時を100とした。
以下余白。、−:゛・( □  1.、・ 第 1 表 〜薯以 = 〕1実 221゜ □扁■ 第2表 苓〉 い %〉 た %〉 下、実施例により本発明を説明する。
寓例1 成薬 も1試薬 トリスヒドロキシルアミン            1
9.4gクエン酸ナトリウム            
      2.s、?鉄ミョウバン        
            8.64■スワ/−ルAM1
03EX             4,0gアルカリ
性ホスファターゼ          330U/f以
上を水に溶解して塩酸でpH8,6に買整し後、水で全
量1,000zfとする。
第2試薬 トリスヒドロキシルアミン            1
9.4g2−ニトロン−5−(N−プロピル−N−スル
ホプロピルアミ/)7エ7ノール         1
,20゜アスコルビン酸すン酸エステルマグネシクム[
0,28g(商品名二二ツコールVC−100、日光ケ
ミカルX社製)以上を水に溶解して塩酸″′cpH8,
6に調整し後、水で全量1,000zj2とする。
2、操作法 血清0,25zlに上記第1試薬3 xlを加え37℃
で5分間インキュベーションした後、上記第2試薬11
1を加え37°Cで20分間インキュベーションの後、
750r++++の吸光度を測定して下記の計算式によ
って不飽和鉄結合能(U IBC)値を求める。
く計算式〉 ER8:サンプルに水を用いた時の吸光度Es :サン
プルに検体(血清)を用いた時の吸光度1200μg/
dNは第1試薬中の鉄の濃度3、結果 上記により求めた不飽和鉄結合能値を従来法で求めた値
と比較したものが第3表である。この結果、従来法との
開に有意の差は認められなlvl。
尚、従来法の除蛋白法は血清鉄を松原法、総鉄結合能は
Ram5ay法(Medical Technolog
y t Vol、 11 +No、10= p、999
 (1983)参照〕で行ない、イオン交換樹脂法は血
清鉄をFeネオ”シフテスト″、総鉄結合能はTIBC
ネオ゛シフテスト′(共にシフテスト研究所製品)で行
ない、U I BC=TIBC−血清鉄により値を求め
た。又、アスコルビン酸法は本発明と同様の原理で測定
し、余剰の鉄(Fe”″)を7スコルビン酸で還元する
方法で求めた6 57.  、 以下余白お・′Jゝ tjS3  表 ■ w PSAP法:2−二トロン−5−(N−プロピル−
N−スルホプロピルアミノ)7エ/−ル バ ン 法:バソ7エナンスロリンスルホン酸ナトリウ
ム実施例2 1、試薬 第1試薬 実施例1の第1試薬と同様。
第2試薬 実施例1の第2試薬と、2−ニトロン−5−(N−プロ
ピル−N−スルホプロピルアミ7)フェノールをバソ7
エナンスロリンスルホン酸ナトリウムに変えるほか、同
様。
2、操作法 実施例1の操作法と同様。
3、結果 上記により求めた不飽和鉄結合能値を実施例1と同様に
第3表に示す、この結果、従来法との間に有意の差は認
められない。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 不飽和鉄結合能の比色測定において、アスコルビン酸誘
    導体を用い、これを酵素作用でアスコルビン酸に分解し
    、これを三価鉄の還元剤として使用することを特徴とす
    る血清中の不飽和鉄結合能の測定方法。
JP17182285A 1985-08-06 1985-08-06 血清中の不飽和鉄結合能の測定方法 Pending JPS6232364A (ja)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP17182285A JPS6232364A (ja) 1985-08-06 1985-08-06 血清中の不飽和鉄結合能の測定方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP17182285A JPS6232364A (ja) 1985-08-06 1985-08-06 血清中の不飽和鉄結合能の測定方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JPS6232364A true JPS6232364A (ja) 1987-02-12

Family

ID=15930381

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP17182285A Pending JPS6232364A (ja) 1985-08-06 1985-08-06 血清中の不飽和鉄結合能の測定方法

Country Status (1)

Country Link
JP (1) JPS6232364A (ja)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH06265131A (ja) * 1993-03-12 1994-09-20 Toosetsu Kk 排気トップ
WO1995013544A1 (en) * 1992-09-30 1995-05-18 Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd. Reagent for determining unsaturated iron-binding capacity
US6753499B1 (en) 2000-03-28 2004-06-22 Japan Science And Technology Corporation Method and apparatus for detecting anomalous discharge in plasma processing equipment using weakly-ionized thermal non-equilibrium plasma

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995013544A1 (en) * 1992-09-30 1995-05-18 Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd. Reagent for determining unsaturated iron-binding capacity
JPH06265131A (ja) * 1993-03-12 1994-09-20 Toosetsu Kk 排気トップ
US6753499B1 (en) 2000-03-28 2004-06-22 Japan Science And Technology Corporation Method and apparatus for detecting anomalous discharge in plasma processing equipment using weakly-ionized thermal non-equilibrium plasma

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US3791931A (en) Reagent and method for determination of lactate dehydrogenase
EP0137400A2 (en) Determination of unsaturated iron-binding capacity
JPS6232364A (ja) 血清中の不飽和鉄結合能の測定方法
JP4639287B2 (ja) 酵素的測定試薬の安定化方法
US3773467A (en) Microassay diagnostic test method
JPH05505243A (ja) 血清鉄アッセイに関する試薬及び方法
JP4691627B2 (ja) 非特異的発色の抑制方法
US5106753A (en) Method for determining manganese level in blood using a porphyrin composition
JP4224563B2 (ja) 溶液状態のアスコルビン酸又はその塩の安定化方法、アスコルビン酸又はその塩を存在させた溶液、及び試料中の測定対象物質の測定試薬
JP2694004B2 (ja) 血清又は血漿中のフルクトサミンの測定法
JP3260020B2 (ja) Uibc測定用試薬
JP2632989B2 (ja) 不飽和鉄結合能の測定方法
CN101762709B (zh) 一种胆固醇水质定标液及其制备方法
JPH06247855A (ja) アスコルビン酸又は/及びその塩を含む溶液の安定化方法
JP4123181B2 (ja) カルシウムの測定方法および測定試薬
CN104237223B (zh) 测定铁‑碳水化合物络合物中不稳定铁含量的方法
JP4558119B2 (ja) クレアチンキナーゼ検出用の液状試薬
DE69014025T2 (de) Stabilisiertes Trinder-Reagens.
JP3170066B2 (ja) 不飽和鉄結合能測定試薬
JP3057183B2 (ja) 蛍光基質液の安定化法
HU192806B (en) Improved test plate apt for the detection of hidden blood and process for the detection of blood
JP3095887B2 (ja) 不飽和鉄結合能の定量法および定量試薬
JPS6231912B2 (ja)
JP2000166595A (ja) 抱合型ビリルビン測定用試薬
JP2797102B2 (ja) 酸性ホスフアターゼ活性測定用試液