【発明の詳細な説明】[Detailed description of the invention]
本発明は脳卒中治療剤に関し、更に詳しくは５
−メチル−７−ジエチルアミノ−Ｓ−トリアゾロ
（１・５−ａ）−ピリミジンを有効成分とする脳卒
中治療剤に関する。
脳卒中、心筋梗塞、狭心症、高血圧症等の循環
器系疾患は悪性腫瘍とともに我国の死亡原因の大
きな割合を占めており、極めて重要な疾患であ
る。これらの疾患の治療薬としては現在、多くの
薬剤が開発されているが、それらの殆んどは対症
療法用のものであり、これらの疾患を根本から治
療しうる薬剤は未だ実用に供せられていない。最
近、これらの疾患の原因としてトロンボキサン
A2（以下TXA2と略す）が重要視されてきてい
る。TXA2はプロスタグランジンH2（PGH2）を基
質として血小板の小胞体に存在するTXA2合成酵
素によつて生成されるプロスタグランジンの中間
体であり、強力な血小板凝集作用と血管収縮作用
を有していることが知られている。このTXA2は
生体内において、正常な作用として止血作用を発
現しているばかりでなく、血管の異常収縮や血栓
形成を引き起こし、脳卒中、心筋梗塞、狭心症等
の病態を発現する原因物質と考えられている。し
たがつて、このTXA2の作用を適当にコントロー
ルしうる薬剤は前記のような疾患を根本的に治療
もしくは予防しうる、極めて有用な薬剤となり得
るものと考えられる。
このような観点から、本発明者らは多くの化学
物質について研究を重ねた結果、５−メチル−７
−ジエチルアミノ−Ｓ−トリアゾロ（１・５−
ａ）−ピリミジン（一般名トラピジル
（Trapidil）、以下TRと略す）がTXA2の血小板凝
集作用及び血管収縮作用を抑制するばかりでな
く、TXA2の生成をも抑制することを見出し、本
発明を完成した。
TRは次式〔〕：
で表わされる構造を有する既知の化合物であつて
水および有機溶媒に溶け易く、苦味を有する白色
〜微黄色の結晶性粉末であり、冠血管拡張作用を
する（橋本虎六他、応用薬理、８、33−
（1974））。
次にTRのTXA2に対する薬理作用を実験例に
よつて説明する。
実験例 １
TXA2によつて引き起こされる大動脈収縮に対
するTRの効果
シマモト（Shimamoto）らの方法
（Shimamoto、T.etal Proc.Japan Acad.、52591
（1976））およびハンベルグ（Hamberg）らの方
法（Hamberg、M.etal、Proc.Nat Acad.Sci.、
71345（1974））に準じて次のように行なつた。
ウサギの血小板を二酸化炭素ガス５％を含む酸
素ガスで飽和したカルシウム フリークレーブス
液に懸濁し、これにトロンビン（持田製薬製）を
血小板３×108個あたり１単位の割合で添加し
て、37℃で30秒間反応させた後、この反応液をウ
サギ大動脈条片を懸垂したオルガンバス（Organ
bath）中に添加して、大動脈条片の収縮を観察し
た。
TRは30μｇ／ml（バス中の濃度）を前記反応
液を添加する５分前にバス中に添加した。なお、
この条件下においてはTR自体による動脈条片の
弛緩反応は生じないことを予め確認した。
結果を第１図に示した。TR30μｇ／mlの添加
はウサギ血小板から生成したTXA2による大動脈
条片の収縮を著明に抑制した。
実験例 ２
血小板におけるTXA2の合成におよぼすTRの
効果
TXA2は血小板において特異的に生成されるこ
とが知られているので、TRがTXA2の合成に対
してどのような影響を及ぼすかを調べた。
ハンベルグ（Hamberg）らの方法
（Hamberg、M.etal、Proc.Nat.Acad.Sci.、71、
3824（1974）、Hamberg、M.etal、Proc.Nat.
Acad.Sci.、722994（1975））に準じて次のように
行なつた。
ウサギの血小板１×108個をカルシウムフリー
クレーブス液１mlに懸濁し、これにトロンビン１
単位を添加して37℃で30秒間反応させた後、この
反応液にエタノール４mlを加えて反応を停止させ
た。ついで、クエン酸酸性下にエチルエーテルで
TXA2の代謝物であるトロンボキサンB2（以下
TXB2と略す）を抽出し、モリタ（Morita）らの
方法（Morita、I.、etal、J.Chromatograply、
154、285（1978））に準じてオキシム化した後更
にトリメチルシリル化してマスフラグメントグラ
フイー（D300、日本電子製）により定量した。
TRはトロンビン添加５分前にウサギの血小板懸
濁液に添加した。
結果を第２図に示す。TRを添加した群のTXB2
量は対照群のそれに比して著明に減少しており、
TRは血小板におけるTXA2の合成を抑制した。
実験例 ３
高コレステロール食の投与によつて生じる血中
TXB2量の変化に対するTRの効果
高コレステロール食を投与されたウサギでは動
脈硬化の進展につれて血小板におけるTXA2の合
成能が高まることが知られている。そこで、TR
がTXA2の合成にどのような効果を示すかを、
TXA2の代謝物であるTXB2を測定することによ
つて調べた。
ラツトに高コレステロール食（コレステロール
９ｇ、オリーブ油120ｇ、シヨ糖310ｇ、コール酸
３ｇ、蒸留水200ｇをエマルジヨンとしたもの）
40mg／Kgを経口投与し、その直後および６時間後
にTR30mg／Kgを経口投与した。高コレステロー
ル食投与24時間後、エーテル麻酔下に下大静脈よ
り採血して血清を分取し、この血清中のTXB2量
を実験例３と同様に定量した。結果を第３図に示
した。高コレステロール食の投与によつて増加す
る血中TXB2量は、予め、TRを経口投与すること
によつて抑制されることから、TRはTXA2合成
を抑制しているものと推察される。
実験例 ４
急性毒性実験
マウス及びラツトをそれぞれ10匹を１群として
各群に固形飼料と水道水とを自由に摂取させて飼
育するとともに、TRを経口、静脈注射および皮
下注射によつて投与して、急性毒性を調べた。
LD50の算出は、経口投与の場合は投与後７日
間の死亡率から、静脈注射および皮下注射の場合
は投与後３日間の死亡率から、それぞれリツチフ
イールド・ウイルコツクソン（Litchfield−
Wilcoxon）法によつて求めた。
結果を第１表に示した。
The present invention relates to a therapeutic agent for stroke, and more specifically, 5
-Methyl-7-diethylamino-S-triazolo(1,5-a)-pyrimidine as an active ingredient. Circulatory system diseases such as stroke, myocardial infarction, angina pectoris, and hypertension account for a large proportion of the causes of death in Japan, along with malignant tumors, and are extremely important diseases. Currently, many drugs have been developed to treat these diseases, but most of them are for symptomatic treatment, and drugs that can fundamentally treat these diseases have not yet been put into practical use. It hasn't been done yet. Recently, thromboxane has been shown to be a cause of these diseases.
A 2 (hereinafter abbreviated as TXA 2 ) is becoming more important. TXA 2 is a prostaglandin intermediate produced by TXA 2 synthase present in the endoplasmic reticulum of platelets using prostaglandin H 2 (PGH 2 ) as a substrate, and has strong platelet aggregation and vasoconstriction effects. It is known that it has In vivo, TXA 2 not only exhibits a hemostatic effect as a normal function, but also causes abnormal constriction of blood vessels and thrombus formation, and is a causative agent of pathological conditions such as stroke, myocardial infarction, and angina pectoris. It is considered. Therefore, it is thought that a drug that can appropriately control the action of TXA 2 could be an extremely useful drug that can fundamentally treat or prevent the above-mentioned diseases. From this point of view, the present inventors conducted research on many chemical substances and found that 5-methyl-7
-diethylamino-S-triazolo(1,5-
a) It was discovered that -pyrimidine (generic name: Trapidil, hereinafter abbreviated as TR) not only suppresses the platelet aggregation effect and vasoconstriction effect of TXA 2 , but also suppresses the production of TXA 2 , and the present invention was realized. completed. TR is the following formula []: It is a known compound having the structure represented by the following, which is easily soluble in water and organic solvents, and is a white to slightly yellow crystalline powder with a bitter taste, which has a coronary vasodilator effect (Toroku Hashimoto et al., Applied Pharmacology, 8). , 33−
(1974)). Next, the pharmacological effect of TR on TXA 2 will be explained using experimental examples. Experimental Example 1 Effect of TR on aortic constriction induced by TXA 2 Method of Shimamoto et al. (Shimamoto, T. etal Proc. Japan Acad., 52591)
(1976)) and the method of Hamberg et al. (Hamberg, M.etal, Proc.Nat Acad.Sci.,
71345 (1974)) as follows. Rabbit platelets were suspended in calcium-free Clave's solution saturated with oxygen gas containing 5% carbon dioxide gas, and thrombin (manufactured by Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.) was added at a rate of 1 unit per 3 x 10 8 platelets. After reacting at 37°C for 30 seconds, the reaction solution was transferred to an organ bath with a rabbit aorta strip suspended.
The contraction of the aortic strip was observed. TR was added at 30 μg/ml (concentration in the bath) to the bath 5 minutes before adding the reaction solution. In addition,
It was previously confirmed that under these conditions, the relaxation reaction of the arterial strip by TR itself did not occur. The results are shown in Figure 1. Addition of 30 μg/ml of TR significantly inhibited the contraction of aortic strips caused by TXA 2 produced from rabbit platelets. Experimental example 2 Effect of TR on the synthesis of TXA 2 in platelets Since TXA 2 is known to be specifically produced in platelets, we investigated the effect of TR on the synthesis of TXA 2 . Examined. The method of Hamberg et al. (Hamberg, M. etal, Proc. Nat. Acad. Sci., 71 ,
3824 (1974), Hamberg, M. etal, Proc. Nat.
Acad.Sci., 72 2994 (1975)). 1 × 10 8 rabbit platelets were suspended in 1 ml of calcium-free Clave's solution, and thrombin 1 was added to this.
After adding the unit and reacting at 37°C for 30 seconds, 4 ml of ethanol was added to the reaction solution to stop the reaction. Then, it was diluted with ethyl ether under citric acid.
Thromboxane B 2 , a metabolite of TXA 2 (hereinafter referred to as
TXB 2 ) was extracted using the method of Morita et al. (Morita, I. et al., J. Chromatograply,
154 , 285 (1978)) and then further trimethylsilylated and quantified by mass fragment graphie (D300, manufactured by JEOL Ltd.).
TR was added to the rabbit platelet suspension 5 minutes before addition of thrombin. The results are shown in Figure 2. TXB 2 in the group with TR added
The amount was significantly decreased compared to that in the control group,
TR suppressed the synthesis of TXA2 in platelets. Experimental example 3 Blood produced by administration of high cholesterol food
Effect of TR on changes in TXB2 content It is known that in rabbits fed a high-cholesterol diet, the ability to synthesize TXA2 in platelets increases as arteriosclerosis progresses. Therefore, T.R.
What effect does it have on the synthesis of TXA 2 ?
This was investigated by measuring TXB 2 , a metabolite of TXA 2 . High cholesterol diet for rats (emulsion of 9g cholesterol, 120g olive oil, 310g sucrose, 3g cholic acid, and 200g distilled water)
40 mg/Kg was orally administered, and immediately and 6 hours later, TR 30 mg/Kg was orally administered. 24 hours after administration of the high-cholesterol diet, blood was collected from the inferior vena cava under ether anesthesia, serum was collected, and the amount of TXB 2 in the serum was determined in the same manner as in Experimental Example 3. The results are shown in Figure 3. Since the amount of TXB 2 in the blood, which increases due to the administration of a high-cholesterol diet, is suppressed by oral administration of TR in advance, it is inferred that TR suppresses TXA 2 synthesis. Experimental Example 4 Acute Toxicity Experiment Mice and rats were raised in groups of 10 each with free access to solid food and tap water, and TR was administered orally, intravenously, and subcutaneously. The acute toxicity was investigated. LD 50 is calculated from the mortality rate 7 days after administration for oral administration, and from the mortality rate 3 days after administration for intravenous injection and subcutaneous injection, respectively.
Wilcoxon) law. The results are shown in Table 1.
【表】
以上の実験例に示したように、TRはTXA2の
血小板凝集作用および血管収縮作用を抑制するば
かりでなく、TXA2の生成をも抑制する。したが
つて、TXA2が現在、脳卒中、脳動脈硬化症の原
因物質であると考えられていることを勘案する
と、TRはこれらの疾患を根本的に治療もしくは
予防しうる薬剤として極めて有用性の高いものと
いうことができる。
TRを人体に投与する場合には、通常、１日量
100〜500mgを経口的に服用するが病状等に応じて
適宜増減してさしつかえない。剤形としては常法
に従い、錠剤又はカプセル剤とするのが有利であ
る。即ち、乳糖、澱粉、マンニツト等の賦形剤、
カルボキシメチルセルロース、馬鈴薯澱粉等の崩
壊剤、馬鈴薯澱粉、アラビアゴム等の結合剤、ス
テアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ等の滑
沢剤を用いて錠剤またはカプセル剤を製造するこ
とができる。又、錠剤には必要に応じて糖衣を施
してもよい。
以下に製剤を実施例として示すが、製剤はこれ
のみに限定されるものではない。
実施例 １
錠 剤
(i) TR 50ｇ
(ii) 乳糖 適量
(iii) 結晶セルロース 60ｇ
(iv) 馬鈴薯澱粉 54ｇ
(v) ステアリン酸マグネシウム ２ｇ
上記のうち、(i)〜(iv)を混合し、予め別けておい
た(iv)の一部を10％の糊として添加して顆粒を製造
し、乾燥する。次いで、これに(v)を添加して混合
して、１錠200mgの錠剤とする。前記錠剤は必要
に応じて常法により糖衣を施してもよい。
実施例 ２
カプセル剤
(i) TR 50ｇ
(ii) リン酸水素カルシウム 50ｇ
(iii) ケイ酸アルミニウム 適量
(iv) 結晶セルロース 60ｇ
(v) ステアリン酸マグネシウム ２ｇ
上記の(i)〜(v)を混合し、更にふるいを通してよ
く混合した後、常法に従い１カプセル200mgのカ
プセル剤とする。
実施例 ３
注射剤
TRの結晶100ｇをとり、これを２の注射用蒸
留水に溶解した後、常法によつて１アンプル当り
100mg／２mlの注射剤とする。[Table] As shown in the experimental examples above, TR not only suppresses the platelet aggregation effect and vasoconstriction effect of TXA 2 , but also suppresses the production of TXA 2 . Therefore, considering that TXA 2 is currently thought to be a causative agent of stroke and cerebral arteriosclerosis, TR is extremely useful as a drug that can fundamentally treat or prevent these diseases. It can be said that it is expensive. When TR is administered to humans, the daily dose is usually
The dose is 100 to 500 mg orally, but the dose may be increased or decreased as appropriate depending on the medical condition. The dosage form is preferably tablets or capsules according to conventional methods. That is, excipients such as lactose, starch, mannitrate, etc.
Tablets or capsules can be manufactured using a disintegrant such as carboxymethyl cellulose or potato starch, a binder such as potato starch or gum arabic, and a lubricant such as magnesium stearate, talc, or silica. Furthermore, the tablets may be coated with sugar if necessary. The formulations are shown below as examples, but the formulations are not limited thereto. Example 1 Tablet (i) TR 50g (ii) Lactose appropriate amount (iii) Crystalline cellulose 60g (iv) Potato starch 54g (v) Magnesium stearate 2g Among the above, (i) to (iv) were mixed and prepared in advance. A portion of (iv) set aside is added as 10% glue to make granules and dried. Next, (v) is added to this and mixed to form a 200 mg tablet. The tablets may be coated with sugar by a conventional method, if necessary. Example 2 Capsule (i) TR 50g (ii) Calcium hydrogen phosphate 50g (iii) Aluminum silicate appropriate amount (iv) Crystalline cellulose 60g (v) Magnesium stearate 2g Mix the above (i) to (v). After passing the mixture through a sieve and mixing thoroughly, it is made into capsules of 200 mg each according to a conventional method. Example 3 Injection Take 100g of crystals of TR, dissolve it in distilled water for injection in step 2, and then dissolve it per ampoule in a conventional manner.
100mg/2ml injection.
【図面の簡単な説明】[Brief explanation of the drawing]
第１図は実験例１の結果を示すグラフ、第２図
は実験例２の結果を示すグラフ、第３図は実験例
３の結果を示すグラフである。
FIG. 1 is a graph showing the results of Experimental Example 1, FIG. 2 is a graph showing the results of Experimental Example 2, and FIG. 3 is a graph showing the results of Experimental Example 3.