JPS6251624A - 注射用徐放性製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 乳牛にウシソマトトロピンを投与すると、ミルクの組成
に悪影響せずミルクの生産量が高まるということは３５
年以上前から知られている。コート等（Ｃｏｔｅｓ、　
ｅｔ　ａｌ、　）のネイチャー　（Ｎ　ａｔｕｒｅ）−
１６４，９９２（１９４９）参照。コートおよび彼のグ
ループの研究後、乳牛におけるソマトトロピンとミルク
生産の増加の関係を更に調べるために多数の実験が行な
われ、最近は遺伝的に改良された微生物によって産生さ
れたソマトトロピンを使用しての実験に焦点が移ってい
る。例えばエパード等ＣＥｐｐａｒｄ　　ｅｔ　　ａｌ
、　）のブロク・コーネル、ナトウル・コンブ（Ｐｒｏ
ｃ、　Ｃｏｒｎｅｌｌ　　Ｎａｔｒ、　　ＣｏｎＬ）、
１９８４、ｐ、５参照。ある研究者達は、微生物によっ
て合成されたウシソマトトロピンが、ミルク生産を増加
さ仕ろのに天然のホルモンより効果的であると報告して
いる。デゲーター等（ＤｅＧｏｅｔｅｒ　　ｅｔ　　ａ
ｌ、　）、ヨーロッパ特許公開第００８５０３６号。

本発明は、当業界に、約１％〜約２０％のロウおよび約
８０％〜約９９％の油からなる担体に懸濁された有効濃
度のウシソマトトロピンを含有するウソソマトトロピン
の注射用徐放性製剤を提供するものである。

本明細書中、別に断らない限り、パーセント、割合等の
全ての記載は重量単位である。

本発明はまた、上の注射用徐放性製剤の有効量を雌ウシ
に投与することからなる乳牛のミルク生産を増加させる
方法を提供するものである。

製剤のロウ成分は、植物および動物起源のロウ類から選
ばれるのが好ましい。例えば有用なロウには、エスパル
ト（アフリカハネガヤ）ロウ、日本ロウ、ジョジョバロ
ウ、羊毛ロウ、鯨ロウ、中国ロウおよび、なかでもカル
ナウバ（ブラジルロウャン）ロウおよびミツロウがある
。ミツロウは種々の精製等級で容易に人手し得るが、市
販の高純度の白色ミツロウおよび通常の黄色ミツロウの
両方か本製剤に使用されるのに好適である。また、石油
ロウ、鉱ロウおよびシリコンロウし使用することかでき
る。

浦は、かなり純粋な形態で容易に人手し得、生理学的に
許容し得る油類から選ばれる。もちろん浦は、保存に安
定であり、放置によって沈澱を生成せず、化学反応が見
られず、これが投与された動物において生理学的反応が
認められない様に十分精製されなければならない。好ま
しい油類は、ダイズ油、落花生油、ゴマ油、綿実油、コ
ーン油、オリーブ油、トウゴマの実部、ヤシ油、アーモ
ンド油等の植物油があり、落花生油およびゴマ油が特に
好ましい。石油からの油、鉱油およびシリコン曲を含む
その他の油類も使用することができる。

担体を調製する場合、油とロウの割合の通常の範囲は、
ロウが約１％〜約２０％である。約５％〜約１５％のロ
ウを使用するのが好ましく、約５％〜約ｌＯ％のロウを
使用するのがより好まししい。通常、ロウの濃度が大き
くなるほど、製剤の徐放作用か長くなる。ロウ濃度の上
限は、この製剤が穴の大きい皮下注射針を通して注射し
得るものでなければならないという条件によって決めら
れる。従って、ロウ濃度の大体の上限は約２０％である
が、製剤の粘性および注入能力は多数の因子、特にソマ
トトロピンの粒子サイズおよび濃度、および製剤の保存
温度によって影響される。この様に、ロウ濃度の上限は
明確な数字ではなく、製剤のその他の状況に従って幾分
異なり得る大体の数字である。

製剤の担体は、浦とロウからなるものとして記載する。

完全に満足な製剤は、他の成分を使用仕ずに製造された
。しかしながら、製剤化学者には、ある状況では比較的
低濃度の他の成分の添加が望ましく、それが本発明の本
質に影響するしのではないということが理解されるであ
ろう。この様な少量の成分は、例えば着色剤、保存剤、
注射部位の感染症に対する抗生物質、粘度調節剤または
安定化剤および製剤の貯蔵寿命を延ばすための抗酸化剤
を包含する。この様な少■成分の量は、最終製剤の百分
の数パーセントから数％の範囲であってもよい。

例えば有用な着色剤には、ＦＤ＆Ｃ着色剤およびＤ＆Ｃ
着色剤がある。保存剤は、安息香酸、クロルブタノール
、ソルビン酸カリウム、ソルビン酸、二酸化イ才つ、没
食子酸プロピルエステル、パラベン類、エチルバニリン
、グリセリン、フェノール、パラクロロフェノール等を
包含する。粘度調節剤は、例えばミリスチン酸イソプロ
ピルエステル、熔融二酸化ケイ素、アルギン酸ナトリウ
ム、メチルセルロース、アルミニウムモノステアレート
、ヘキサグリセロールジステアレート、グリセロールモ
ノステアレート等を包含する。有用な安定化剤には、エ
チレンジアミンおよび寒天の様な物質がある。抗酸化剤
は、パルミチン酸アスコルビル、重亜硫酸ナトリウム、
メタ重亜硫酸ナトリウム、二酸化イオウ、マレイン酸、
没食子酸プロピルエステル、ナトリウムホルムアルデヒ
ドスルホキシレート、ＢＨＡ、ＢＨＴＳｔ−ブチルヒド
ロキノン等の様な化合物から選ばれる。これらは全て、
製薬化学者にとって既知である。

本発明の製剤に使用されるウシソマトトロピンの供給源
およびタイプは重要ではない。便利さおよび経済性によ
って、動物から得られる天然のソマトトロピンを使用し
てもよいし、またはあらゆるタイプの微生物起源のソマ
トトロピンを使用してもよい。天然および微生物起源の
両ウシソマトトロピンの物理特性は、本発明製剤での使
用に同等に望ましい。従って、全てのウシソマトトロピ
ンは本製剤での使用に好適な活性成分である。

微生物の使用によってウシソマトトロピンを製造するた
めの多数の方法が公開されている。幾つかの改良された
微生物が、通常、ポリペプチド鎖の末端で１または少数
の外部アミノ酸をつけ加えることによって改良されたソ
マトトロピンを産生ずるということは特筆すべきことで
ある。文献によれば、これらの改良ホルモン類は、天然
のウシソマトトロピンと同じ特性および活性を有してい
る。従って本明細書において、「ウシソマトトロピン」
という語句は、天然のウシソマトトロピンの特性および
活性を有する、遺伝的に改良された微生物によって合成
された改良ウシソマトトロピンを包含している。

以下の特許文書および出版物群は、ウシソマトトロピン
を合成する改良された微生物およびその様な微生物の利
用方法を記載している。

メイン等（Ｍａｙｎｅ、　ｅｔ　　ａｔ、　）のヨーロ
ーｔパ特許公開第００９５３６１号、 ジョージ等（Ｇｅｏｒｇｅ、　ｅｔ　　ａｌ、　）のヨ
ーローｔパ特許公開第０１１１８１４号、 ロー７トマン等（Ｒｏｔｔｍａｎ、　ｅｔ　　ａｌ、　
）のヨー０−）パ特許公開００６７０２６号、 ミラー等（ＭＮＩｅｒ、　ｅｔ　　ａｌ、　）のヨーロ
ッパ特許公開００４７６００号、 フレーザー等（Ｆｒａｚｅｒ、　ｅｔ　　ａｔ、　）の
ヨーロッパ特許公開００６８６４６号、 アビプ等（Ａｖｉｖ、　ｅｔ　　ａｌ、　）の英国特許
出願第２０７３２４５号、 ド・ボアー等（Ｄｅ　　Ｂｏｅｒ、　ｅｔ　ａｉ、　）
のヨーロッパ特許公開００７５４４４号、 ンヨーナー等（Ｓｃｈｏｎｅｒ、　ｅｔ　ａｌ、　）の
バイオテクノロジー（Ｂ　ｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）
、２月号、１９８５、＋５１−１５４、 ンヨーナー等（Ｓｃｈｏｎｅｒ、　ｅｔ　ａｔ、　）の
プロシーディンゲス・才ブ・ナショナル・アカデミ−・
サイエンシズ（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ、　Ａｃａｄ、　Ｓ
ｃｉ、　）米国、８Ｌ　５４０３−０７（＋９８４）。

有効濃度のウシソマトトロピンを担体と混合し、製剤を
製造する。濃度は所望の徐放作用の長さおよび投与すべ
き用量によってら左右される。もちろん、人手し得るソ
マトトロピンの純度および活性を考慮に入れる必要があ
る。

乳牛１頭当たり、製剤２−１０グラムの範囲の注射で、
都合よい長い時間の持続放出が得られ、この量は、投与
者への不便または雌ウシへの不快を起こすほど多くない
ことが判明した。この様な飛で投与される製剤中のソマ
トトロピンの濃度は、約５％〜約３５％の範囲、好まし
くは約ＩＯ％〜約２５％の範囲である。

本製剤のための担体は、必要なだけ加熱してロウを浦に
溶解することによって調製される。使用される少量の成
分も、混合物が熱い間に加えるのが都合よい。混合物が
冷えた時、その粘性はロウが少なくとも１部分、溶液か
ら析出するので、急激に高まる。はぼ周囲温度に冷却し
た後に担体をホモジナイズし、ロウの粒子サイズを小さ
くし、混合物の粘性を下げるのが好ましい。通常のタイ
プの装置が有効である。例えば、混合物を高圧下で細い
穴を通して押し出す機械、または防止翼でぴったりと囲
まれた高速攪拌機で激しい流れを生じさせる高速ミキサ
ーを使用することができる。

多数の商品名の多くのタイプの装置が有用であり、高速
攪拌が得られる装置のいずれでも十分である。

微細な粒末の形態のウシソマトトロピンを調製し、これ
をホモジナイズした担体と比較的穏やかに混合するのが
好ましい。製剤が注射用なので、ソマトトロピンの粒子
サイズは、容易に皮下注射針を通る様に十分小さくして
おかなければならない。プロペラ攪拌機等の様な穏やか
な攪拌手段でソマトトロピンと担体を混合するのが望ま
しいが、ミキサーの高エネルギ一部を通る時に混合物の
局部的な加熱および過剰な攪拌を避けるように十分に注
意するなら、ソマトトロピンを加えた後に高エネルギー
混合を行なってもよい。

以下に、約２８日間の、ウシソマトトロピンの優れた徐
放性投与の例を示す。注射と注射の間が２８日間である
ことか好適かつ経済的であると考えられるが、本発明の
範囲を逸脱することなく、より長い期間とすることもで
きる。従って、本発明製剤はウシソマトトロピンを投与
するための非常に優れた方法であると思われる。

本発明および本発明の製剤の調製法が十分理解されるよ
う、以下に、本発明に係る徐放性製剤の具体例を示す。

実施例１ ゴマ油１８００ｇを約１００℃に加熱し、精製白色ミツ
ロウ２００ｇを加えた。この混合物をロウが油に溶解す
るまで一定温度で攪拌し、次いで、混合物を一定速度で
穏やかに攪拌しながら約２２℃に冷却した。次に、この
浦−ロウ混合物が全体になめらかなりリーム状になり、
その粘性が低下するまで、ウルトラ−ターラックス（Ｕ
ｌｔｒａ−Ｔ　ｕｒｒａｘ）ホモジナイザーで混合物を
ホモジナイズした。

この油−ロウ混合物１３．１６ｇに、２２℃で穏やかに
攪拌しながら、ヨーロッパ特許公開第００９５３６１号
に記載の改良エシェリキア・コリ　（Ｅ　５ｈｅｒｉｃ
ｈｉａ　　ｃｏｌｉ）培養によって合成されたウシソマ
トトロピン２．８３９を加えた。このソマトトロピンの
製品は非常に純粋であり、可溶化した物質を光学密度測
定により調べると、約７５％の総タンパクを含存してお
り、サイズエクスクル−ジョンクロマトグラフィーで調
べると、その９５％がモノマーウシソマトトロピンおよ
び類似物質であった。この製品は、ウシソマトトロピン
および類似物質を約１２．６％余有していた。

実施例２−７ 以下の実施例は、実質上、実施例１の記載に従って行な
った。便宜上、これらの組成物を表にする。

肛一体　　　　　　　　ソマトトロピン％２　ゴマ油／
白色ミツロウ （９５％７５％＞　　　　　　１２．４３　落花生油／
黄色ミツロウ （９０％／１０％）　　　　　１２．６・１　落花生油
／黄色ミツロウ （９９％７１％）　　　　　　＋　２．６５　落花生油
／黄色ミツロウ （９９％／１％）　　　　　　１２．６６、落花生油／
黄色ミツロウ （９９％７１％）　　　　　　Ｉ　Ｏ，９７落花生油／
黄色ミツロウ （９０％７１０％）　　　　　１２．６８、ノリコン（
ポリジメチルシロキサ ン）油、医薬等級３５０ｃｓ／シリ コンロウ（ステアロキシトリメヂ ルンランーステアリルアルコー ル）（９０％／１０％）　　　　　＋２．６９、実施例
８と同成分であるが、食 品等級のシリコン油 （９０％７１０％）　　　　　１２．６１０、ノリコン
（ポリフェニルメチルシロキサンコポリマー、２２．５
ｃｓ ）ｌｌｌＩＩ／シリコンロウ（ステアロキシトリメチル
シラン−ステアリ ルアルコール）（９０％７１０％’）　　　　１２．６
実施例８−２６ 以下の群の製剤例は実施例１の記載と同じ方法で調製し
たものであり、本発明を更に説明するものである。

賎−岑　　　　　　　　ソマトトロピン％１１、落花生
油／黄色ミツロウ （９０％７１０％）１５ １２、落花生油／白色ミツロウ （９５％７５％）　　　　　　　６ １３、落花生油／カルナウバロウ （９５％７５％）３５ １４、ダイズ浦／カルナウバロウ （８７％７１３％）２７ １５、ゴマ油／黄色ミツロウ （８５％／１５％）　　　　　９ １６、綿実油／白色ミツロウ （９７％７３％）　　　　　５ １７、綿実油／カルナウバロウ （９２％７８％）　　　　　　１８ １８、ダイズ浦／黄色ミツロウ （８５％／１５％）２２ １９　　ジョジョバ浦／シリコンロウ （８０％７２０％）３０ ２０、ヤシ油７石４ｈロウ （８２％７１８％）２５ ２１、シリコン油／カルナウバロウ （９５％７５％）２０ ２２、オリーブ油／ミツロウ （９３％７７％）１７ ２３、コーン油／ジョジョバロウ （９８％７２％）３２ ２４　　アーモンド油／エスパルトロウ（８９％７１１
％）２４ ２５、トウゴマの更油／日本ロウ （８６％７１４％）１４ ２６、鉱油／羊毛ロウ（８３％／１７）　　　　　　ｌ
　６実施例２７ 胆 ゴマ油　　　　　　　　　　　　　８９．８０％白色ミ
ツロウ　　　　　　　　　　９．９８没食子酸プロピル
エステル　　　　０．０２メチルパラベン　　　　　　
　　　０．１８プロピルパラベン　　　　　　　　　０
．０２これらの成分を混合し、約１２５℃に加熱し、室
温に冷却した。冷却した混合物を実施例１の記載に従っ
てホモジナイズし、室温に冷却した。担体８２重量部に
、攪拌しながら実施例１に記載のウシソマトトロピン製
品１８１奄部を加え、ウシソマトトロピンおよび類似物
質を１２．８％含有する製剤を調製した。

試験例１ 試験開始時に１日当たり、平均約５６ボンドのミルクを
産出していたホルスタイン種雌ウシで本発明の組成物を
試験した。各々７頭の雌ウシからなる試験群および対照
群を使用した。対照群雄ウシの１頭はハードウェア病の
ために除かなければならなかったし、処置群雄ウシの２
頭は各々ハードウェア病および乳房炎のために試験から
除いた。

雌ウソをロープで大きく区切った畜舎に入れ、畜舎を清
掃して寝わらを敷きかえる間、１日に２時間、屋外運動
をさせた。

雌ウシに、全て乾燥物質を基本として６０％の飼料（３
部の貯蔵トウモロコシ（草）および１部の細断したアル
ファルファの干し草）および４０％の濃縮物からなる飼
料を与えた。飼料の濃縮物部分は、以下の組成であった
。

収−外　　　　　　　　　　　　パーセント乾燥ビート
バルブ　　　　　　　　１０．００％粗びきトウモロコ
ン　　　　　　　４８．５０ダイズ油ミール　　　　　
　　　　３３．１０石灰石　　　　　　　　　　　　　
　１．６５サトウキビの糖蜜　　　　　　　　　３．５
０リン酸−ナトリウム　　　　　　　　ｌ、０５ビタミ
ンＡ、Ｄ３および Ｅプレミックス　　　０．３５ セレニウムプレミックス　　　　　　０．０５重炭酸ナ
トリウム　　　　　　　　　０，７５微量元素の塩　　
　　　　　　　　１．０５雌ウシを１日２回、約１１〜
１３時間の間隔で搾乳した。ミルクの生産量を記録し、
ミルクのサンプルを常法により分析した。１４日の調節
期間の後、処置群の雌ウシに１４−ゲージの注射針を使
用し、実施例６デボー製剤７．３９の皮下注射を行なっ
た。最初の注射後２９日目間動物に実施例７の製剤７．
３９を注射し、最初の注射後５７日目量、実施例７の製
剤７．３９の第３回注射を行なった。

この様に、この試験は２８日の持続放出期間、３期で構
成される。

デボ−注射剤からのソマトトロピンの放出を、処置群雄
ウシの血漿中のウシソマトトロピンの濃度を測定するこ
とによって調べた。各週の月曜日および金曜日に頚静脈
または尾骨静脈の穿刺によって血液サンプルを採取し、
このサンプルを２重抗体放射免疫検定によって分析した
。

各々２８日からなる３期間に得られた結果を平均し、以
下の表を作成した。表中、分析の平均値をウソソマトト
ロピンのナノグラム／ｍ（２で表わす。

対照群の結果は全ていつも２．９〜３．３ｎｇ／ｍ（ｌ
の非常に狭い範囲に収まるので、表にしていない。

旦　　　　　　　　　ソマトトロピンの濃度２　　　　
　　　　　　　　　１２８　ｎｇ／ｘ１２ソマトトロピ
ンの優れた放出から予想される様に、処置群雄ウソのミ
ルク生産量は有意に高まり、そのミルクの組成は正常で
あった。

試験例２ この試験では、各々３頭の雌ウシからなる処置群および
対照群を使用した。実質上、上の試験例１の記載に従っ
て雌ウシを処置し、飼料を与え、その結果を試験例１と
同じ方法でソマトトロピンの血漿中濃度を分析すること
によって調べた。この試験では、各雌ウシに実施例５の
デボ−製剤７゜３９を注射した後、２９日間調べた。以
下の結果が得られた。この試験では、対照群雄ウシにお
けるソマトトロピン濃度に有意な差異があったので、対
照群のデータも示す。

０５　ｎｇ／　ｍＱ　　６　ｎｇ／　ｍＱ６　　　　　
　　　　　　　ｔｏ　　　　　　８１＋２　　　　　　
　　　　１４　　　　　４７＋６　　　　　　　　　　
　　　１３　　　　　　３４試験例３ 各群が３頭だけの雌ウシからなるという意思外は実質上
試験例１の記載に従い、更に試験を行なった。対照群は
使用しなかったが、処置館のサンプルを採取して分析し
、試験のための対照とした。

上の実施例１，２および３の製剤を使用し、試験の０白
目に各動物に適当なデボ−製剤４．９９を注射した。

試験期間の種々の日に動物の血液のサンプルを採取し、
ウシソマトトロピンについて分析し、以下の結果を得た
。

ジ　　　　　ソマトトロピンの濃度 −５２，９ｎｇ／杼３．６ｎｇ／ｍ（１３，３ｎｇｙｌ
ｌ−２２，３１，２１，６ ｔ　　　　４３　　　　５６　　　　　４２４　　　７
４　　　　＋０９　　　　　７６特許出願人　イーライ
・リリー・アンド・カンパニー

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、約１％〜約２０％のロウおよび約８０％〜約９９％
   の油からなる担体に懸濁した有効濃度のウシソマトトロ
   ピンを含有することを特徴とするウシソマトトロピンの
   注射用徐放性製剤。 ２、油が植物油である第１項に記載の製剤。 ３、ロウが植物または動物起源のものである第１項に記
   載の製剤。 ４、担体がホモジナイズされ、約５％〜約１５％のロウ
   からなる第１項に記載の製剤。 ５、ロウがミツロウまたはカルナウバロウである第４項
   に記載の製剤。 ６、油が落花生油またはゴマ油である第１項に記載の製
   剤。 ７、油が落花生油またはゴマ油である第５項に記載の製
   剤。 ８、担体がホモジナイズされ、約５％〜約１０％のロウ
   からなる第７項に記載の製剤。 ９、ソマトトロピンが遺伝的に改良された微生物によっ
   て合成される第１項に記載の製剤。 １０、雌ウシに第１項〜第９項のいずれかに記載の徐放
   性製剤の有効量を投与することからなる乳牛のミルク生
   産を増加させる方法。