JPS6256843B2 - - Google Patents
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- JPS6256843B2 JPS6256843B2 JP54084681A JP8468179A JPS6256843B2 JP S6256843 B2 JPS6256843 B2 JP S6256843B2 JP 54084681 A JP54084681 A JP 54084681A JP 8468179 A JP8468179 A JP 8468179A JP S6256843 B2 JPS6256843 B2 JP S6256843B2
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- acid
- strain
- lipopolysaccharide
- mycobacterium tuberculosis
- fatty acids
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/04—Mycobacterium, e.g. Mycobacterium tuberculosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
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- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
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- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は、人型結核菌由来のリポ多糖体を組成
物とする、あるいはこの組成物を化学的に修飾す
ることによつて得られるリポ多糖体を組成物とす
る、新規な腫瘍免疫療法剤に関するものである。 近年各種菌体あるいは菌生産物から癌の治療に
有効な成分を抽出する試みが盛んに行われてい
る。特に真菌属の菌体から制癌活性を有するとさ
れる成分を抽出することにより、毒性が少なく且
つ制癌活性が強い成分を得る試みが盛んである。 また最近BCG菌体その他の真菌属の菌体成分
の動物の各種の癌に対する免疫療法剤として使用
し、癌を治療する臨床的研究が精力的に進められ
ている。しかしBCG菌体には有効成分とともに
副作用を惹起する成分が含まれており、菌体自身
の投与の回数を増すことは危険を伴う。従つて菌
体から副作用を示す成分を除き、有効成分を効率
よく抽出し、あるいは何らかの処理により有効性
を増強した成分が得られれば各種の癌の免疫療法
剤として理想的である。この主旨に基づいて、
BCGの細胞壁骨格成分（特開昭54−28813号）、
ムラミルジペプチド（特開昭52−156812号、特開
昭53−98922号）、ろうＤ物質中の長鎖脂肪酸を含
有する糖脂質（特開昭53−3514号、特開昭54−
28830号）等が開示されている。 本発明者は、ミコバクテリウム・ツベルクロー
シス青山Ｂ株またはミコバクテリウム・ツベルク
ローシスH37Rv株の幼弱菌体を熱水抽出し、リポ
多糖体成分を分画精製して、抗腫瘍活性を有し且
つ副反応を示さないリポアラビノマンナンを得
た。さらにこのリポアラビノマンナン、あるいは
このリポアラビノマンナンから鹸化により脂肪酸
を除いた無脂アラビノマンナンに化学的に脂肪酸
を修飾して、天然のリポアラビノマンナンと同等
あるいはそれ以上の抗腫瘍活性を有し且つ副反応
を示さないリポアラビノマンナンを得た。 次に本発明の腫瘍免疫療法剤の構成成分および
製法さらには腫瘍免疫治療効果について詳しく説
明する。 実験例 １ リポ多糖体の抽出法 (1‐1) 継代予培養したミコバクテリウム・ツベルク
ローシス青山Ｂ株をソートン培地に接種し、14
日間好気培養した菌体を取し、冷水で洗浄後
蒸留水を加えて菌体を浮遊させ、100℃、120分
間加熱後過して油出水溶液を得る。この水溶
液にスルホサリチル酸を加えて蛋白質成分を沈
降させ遠心分離した上澄を透析膜を用いて透析
し、透析内液に９倍量のエチルアルコールを加
え遠心分離して沈降した粗リポ多糖体を得る。 粗リポ多糖体を蒸留水に溶解し、等量のエチ
ルアルコールを加えて遠心分離した上澄を濃縮
した後、東洋曹達(株)製TSK Gel4000SW、
3000SW、および2000SWを組み合せたカラム
を用いる高速クロマトグラフイーによる分子篩
にかけて、分子量10000〜16000の画分を進め、
透析、濃縮し、更にE.Y.ラボラトリーズ製ア
ガロースビーズ−コンカナバリンＡによるアフ
イニテイークロマトグラフイーにより精製して
リポ多糖体を得た。 (1‐2) 実権例（１−１）と同条件下で培養したミコ
バクテリウム・ツベルクローシスH37Rv株の菌
体を、実験例（１−１）と同様操作することに
より粗多糖体を得、これを実験例（１−１）と
同様の手段により精製してリポ多糖体を得た。 実験例 ２ リポ多糖体の構成単糖分析 (2-1) 実験例（１−１）で得た精製リポ多糖体を硫
酸で加水分解し、アンバーライト1R−45（水
酸型）で中和し、薄層クロマトグラフイーで同
定したところ、アラビノース、マンノース、グ
ルコース（アラビノース：マンノース：グルコ
ーース＝６：４：痕跡）が検出された。同じ加
水分解後の中和物を既知の方法により還元、ア
セチル化して得られた糖アルコールアセチル化
物混合物を３種類の充填カラムを用いたガスク
ロマトグラフイーにより定量を行つたところア
ラビノース61％、マンノース38％、グルコース
１％であり、このリポ多糖体の糖成分はアラビ
ノマンナンであることを確認した。 (2‐2) 実験例（１−２）で得た精製リポ多糖体を実
験例（２−１）と同様手法により構成単糖分析
を行つた結果、アラビノース56％、マンノース
44％であり、このリポ多糖体の糖成分はアラビ
ノマンナンであることを確認した。 実験例 ３ リポ多糖体の糖鎖構造分析 (3‐1) 実験例（１−１）で得た精製リポ多糖体を箱
守の方法で完全メチル化し、硫酸で加水分解
後、アンバーライト1R−45（水酸型）で中
和、公知の方法で還元、アセチル化して得られ
る部分メチル化糖アルコールアセチル化物混合
物を４種類の充填カラムおよびSCOT毛管カラ
ムによるガスクロマトグラフイーにかけ、検出
されたピークを別途合成した標準部分メチル化
糖アルコールアセタートのピークと比較し、各
部分メチル化糖成分を同定、定量した。さらに
GC−MSにより各ピークの断片から各糖成分の
確認同定を行つた。 ガスクロマトグラフイーにより得られた部分
メチル化糖アルコールの量的関係および予想糖
鎖結合は表１の如くである。
物とする、あるいはこの組成物を化学的に修飾す
ることによつて得られるリポ多糖体を組成物とす
る、新規な腫瘍免疫療法剤に関するものである。 近年各種菌体あるいは菌生産物から癌の治療に
有効な成分を抽出する試みが盛んに行われてい
る。特に真菌属の菌体から制癌活性を有するとさ
れる成分を抽出することにより、毒性が少なく且
つ制癌活性が強い成分を得る試みが盛んである。 また最近BCG菌体その他の真菌属の菌体成分
の動物の各種の癌に対する免疫療法剤として使用
し、癌を治療する臨床的研究が精力的に進められ
ている。しかしBCG菌体には有効成分とともに
副作用を惹起する成分が含まれており、菌体自身
の投与の回数を増すことは危険を伴う。従つて菌
体から副作用を示す成分を除き、有効成分を効率
よく抽出し、あるいは何らかの処理により有効性
を増強した成分が得られれば各種の癌の免疫療法
剤として理想的である。この主旨に基づいて、
BCGの細胞壁骨格成分（特開昭54−28813号）、
ムラミルジペプチド（特開昭52−156812号、特開
昭53−98922号）、ろうＤ物質中の長鎖脂肪酸を含
有する糖脂質（特開昭53−3514号、特開昭54−
28830号）等が開示されている。 本発明者は、ミコバクテリウム・ツベルクロー
シス青山Ｂ株またはミコバクテリウム・ツベルク
ローシスH37Rv株の幼弱菌体を熱水抽出し、リポ
多糖体成分を分画精製して、抗腫瘍活性を有し且
つ副反応を示さないリポアラビノマンナンを得
た。さらにこのリポアラビノマンナン、あるいは
このリポアラビノマンナンから鹸化により脂肪酸
を除いた無脂アラビノマンナンに化学的に脂肪酸
を修飾して、天然のリポアラビノマンナンと同等
あるいはそれ以上の抗腫瘍活性を有し且つ副反応
を示さないリポアラビノマンナンを得た。 次に本発明の腫瘍免疫療法剤の構成成分および
製法さらには腫瘍免疫治療効果について詳しく説
明する。 実験例 １ リポ多糖体の抽出法 (1‐1) 継代予培養したミコバクテリウム・ツベルク
ローシス青山Ｂ株をソートン培地に接種し、14
日間好気培養した菌体を取し、冷水で洗浄後
蒸留水を加えて菌体を浮遊させ、100℃、120分
間加熱後過して油出水溶液を得る。この水溶
液にスルホサリチル酸を加えて蛋白質成分を沈
降させ遠心分離した上澄を透析膜を用いて透析
し、透析内液に９倍量のエチルアルコールを加
え遠心分離して沈降した粗リポ多糖体を得る。 粗リポ多糖体を蒸留水に溶解し、等量のエチ
ルアルコールを加えて遠心分離した上澄を濃縮
した後、東洋曹達(株)製TSK Gel4000SW、
3000SW、および2000SWを組み合せたカラム
を用いる高速クロマトグラフイーによる分子篩
にかけて、分子量10000〜16000の画分を進め、
透析、濃縮し、更にE.Y.ラボラトリーズ製ア
ガロースビーズ−コンカナバリンＡによるアフ
イニテイークロマトグラフイーにより精製して
リポ多糖体を得た。 (1‐2) 実権例（１−１）と同条件下で培養したミコ
バクテリウム・ツベルクローシスH37Rv株の菌
体を、実験例（１−１）と同様操作することに
より粗多糖体を得、これを実験例（１−１）と
同様の手段により精製してリポ多糖体を得た。 実験例 ２ リポ多糖体の構成単糖分析 (2-1) 実験例（１−１）で得た精製リポ多糖体を硫
酸で加水分解し、アンバーライト1R−45（水
酸型）で中和し、薄層クロマトグラフイーで同
定したところ、アラビノース、マンノース、グ
ルコース（アラビノース：マンノース：グルコ
ーース＝６：４：痕跡）が検出された。同じ加
水分解後の中和物を既知の方法により還元、ア
セチル化して得られた糖アルコールアセチル化
物混合物を３種類の充填カラムを用いたガスク
ロマトグラフイーにより定量を行つたところア
ラビノース61％、マンノース38％、グルコース
１％であり、このリポ多糖体の糖成分はアラビ
ノマンナンであることを確認した。 (2‐2) 実験例（１−２）で得た精製リポ多糖体を実
験例（２−１）と同様手法により構成単糖分析
を行つた結果、アラビノース56％、マンノース
44％であり、このリポ多糖体の糖成分はアラビ
ノマンナンであることを確認した。 実験例 ３ リポ多糖体の糖鎖構造分析 (3‐1) 実験例（１−１）で得た精製リポ多糖体を箱
守の方法で完全メチル化し、硫酸で加水分解
後、アンバーライト1R−45（水酸型）で中
和、公知の方法で還元、アセチル化して得られ
る部分メチル化糖アルコールアセチル化物混合
物を４種類の充填カラムおよびSCOT毛管カラ
ムによるガスクロマトグラフイーにかけ、検出
されたピークを別途合成した標準部分メチル化
糖アルコールアセタートのピークと比較し、各
部分メチル化糖成分を同定、定量した。さらに
GC−MSにより各ピークの断片から各糖成分の
確認同定を行つた。 ガスクロマトグラフイーにより得られた部分
メチル化糖アルコールの量的関係および予想糖
鎖結合は表１の如くである。
【表】
(3‐2)
実験例（１−２）で得た精製リポ多糖体を実験
例（３−１）と同様に操作してガスクロマトグラ
フイー分析で得られた部分メチル化糖アルコール
アセタートの量的関係及び予想糖鎖結合は表２の
如くである。
例（３−１）と同様に操作してガスクロマトグラ
フイー分析で得られた部分メチル化糖アルコール
アセタートの量的関係及び予想糖鎖結合は表２の
如くである。
【表】
【表】
実験例 ４
リポ多糖体の脂肪酸分析
(4‐1)
実験例（１−１）で得た精製リポ多糖体１mg
に内部標準としてラウリン酸メチル100μｇを
含み、3.3％の塩化水素を含むメチルアルコー
ル１mlを加え、窒素ガス封管中で加メタノール
分解し、低温濃縮して、塩化メチレンに溶解し
２種類の充填カラムを用いるガスクロマトグラ
フイーにより、標準の脂肪酸メチルエステルの
保持時間から構成脂肪酸を同定、定量した。さ
らに各脂肪酸メチルエステルピークはGC−MS
により同定した。 ガスクロマトグラフイーによる同定結果は表
３の如くであつた。
に内部標準としてラウリン酸メチル100μｇを
含み、3.3％の塩化水素を含むメチルアルコー
ル１mlを加え、窒素ガス封管中で加メタノール
分解し、低温濃縮して、塩化メチレンに溶解し
２種類の充填カラムを用いるガスクロマトグラ
フイーにより、標準の脂肪酸メチルエステルの
保持時間から構成脂肪酸を同定、定量した。さ
らに各脂肪酸メチルエステルピークはGC−MS
により同定した。 ガスクロマトグラフイーによる同定結果は表
３の如くであつた。
【表】
従つてこのリポ多糖体試料の脂肪酸含量は約
15％（１mgに対して150.7μｇ）であり実験例
（１−１）で求めた平均分子量13000のリポ多糖
体１グラム分子内に約7.6グラム分子（1950グ
ラム当量）の脂肪酸が含まれていると考えられ
る。 (4‐2) 実験例（１−２）で得た精製リポ多糖体につ
いて、実験例（４−１）と同様操作により脂肪
酸分析を行つた結果は表４の如くであり、この
リポ多糖体は、平均分子量約12000のリポ多糖
体１グラム分子中に約39グラム分子（1000グラ
ム当量）の脂肪酸が含まれていると考えられ
る。
15％（１mgに対して150.7μｇ）であり実験例
（１−１）で求めた平均分子量13000のリポ多糖
体１グラム分子内に約7.6グラム分子（1950グ
ラム当量）の脂肪酸が含まれていると考えられ
る。 (4‐2) 実験例（１−２）で得た精製リポ多糖体につ
いて、実験例（４−１）と同様操作により脂肪
酸分析を行つた結果は表４の如くであり、この
リポ多糖体は、平均分子量約12000のリポ多糖
体１グラム分子中に約39グラム分子（1000グラ
ム当量）の脂肪酸が含まれていると考えられ
る。
【表】
実験例 ５
リポ多糖体の脂肪酸結合構造の分析
(5‐1)
実験例（１−１）で示した精製リポ多糖体を
ジメチルスルホキシド中でｐ−トルエンスルホ
ン酸を触媒としてメチルビニルエーテルで処理
して、遊離の水酸基をメトキシエチル化し、鹸
化により脂肪酸を除き、遊離した水酸基を箱守
法でメチル化後、メチルアルコール含有酸加水
分解によりメトキシエチル基を除去し、酸加水
分解により部分メチル化単糖混合物を得た。こ
の混合物を公知の方法により還元、アセチル化
して、キシリトールを内部標準として３種類の
充填カラムによるガスクロマトグラフイーによ
る分析を行い、標準の遊離単糖および部分メチ
ル化単糖の糖アルコールアセタートと比較して
同定、定量を行つた。 同定されたピークは表５の如くであつた。
ジメチルスルホキシド中でｐ−トルエンスルホ
ン酸を触媒としてメチルビニルエーテルで処理
して、遊離の水酸基をメトキシエチル化し、鹸
化により脂肪酸を除き、遊離した水酸基を箱守
法でメチル化後、メチルアルコール含有酸加水
分解によりメトキシエチル基を除去し、酸加水
分解により部分メチル化単糖混合物を得た。こ
の混合物を公知の方法により還元、アセチル化
して、キシリトールを内部標準として３種類の
充填カラムによるガスクロマトグラフイーによ
る分析を行い、標準の遊離単糖および部分メチ
ル化単糖の糖アルコールアセタートと比較して
同定、定量を行つた。 同定されたピークは表５の如くであつた。
【表】
この結果、構成単糖10分子当り約１個の脂肪
酸が結合しており、結合部位はアラビノースの
５位がほとんどで、アラビノースの２位、マン
ノースの６位に若干、その他の部位にも少量結
合していると思われる。 以上の分析結果から、このリポ多糖体の構造
を推定すると、アラビノース約47個とマンノー
ス約30個から成る平均分子量約11000のアラビ
ノマンナンにパルミチン酸を中心として炭素数
14乃至19の脂肪酸が約８個結合した平均分子量
約13000のリポ多糖体と考えられる。 (5‐2) 実験例（１−２）で得た精製リポ多糖体を実
験例（５−１）と同様に処理して得られた部分
メチル化糖アルコールアセタートのピークは表
６の如くであり、構成単糖16分子当り約１個の
脂肪酸が結合しており、結合部位はアラビノー
スの５位及び２位、マンノースの６位が主であ
ることが推察された。
酸が結合しており、結合部位はアラビノースの
５位がほとんどで、アラビノースの２位、マン
ノースの６位に若干、その他の部位にも少量結
合していると思われる。 以上の分析結果から、このリポ多糖体の構造
を推定すると、アラビノース約47個とマンノー
ス約30個から成る平均分子量約11000のアラビ
ノマンナンにパルミチン酸を中心として炭素数
14乃至19の脂肪酸が約８個結合した平均分子量
約13000のリポ多糖体と考えられる。 (5‐2) 実験例（１−２）で得た精製リポ多糖体を実
験例（５−１）と同様に処理して得られた部分
メチル化糖アルコールアセタートのピークは表
６の如くであり、構成単糖16分子当り約１個の
脂肪酸が結合しており、結合部位はアラビノー
スの５位及び２位、マンノースの６位が主であ
ることが推察された。
【表】
このリポ多糖体はアラビノース約42個、マン
ノース約34個から成る平均分子量約11000のア
ラビノマンナンにパルミチン酸を中心として炭
素数14乃至19の脂肪酸が平均４〜５個結合した
平均分子量約12000のリポ多糖体と考えられ
る。 実験例 ６ リポアラビノマンナンの合成 多糖体に脂肪酸を結合させてリポ多糖体を得る
方法はそれ自体公知であるが、公知の方法により
無脂および低脂のアラビノマンナンに適宜脂肪酸
を結合させて腫瘍免疫治療上より有効なリポアラ
ビノマンナンを得た。 (6‐1) 実験例（１−１）に示した菌体からアルカリ
抽出し、実験例（１−１）と同様の方法により
分子篩にかけて集めた分子量約8500乃至14000
のアラビノマンナンをアフイニテイークロマト
グラフイーで精製し、乾燥後、このもの10mgを
Ｎ・Ｎ−ジメチルホルムアミド・ピリジン中、
10mgのパルミチン酸無水物と50℃、20時間反応
させ、エチルエーテルを加えて沈澱する生成物
を遠心分離してエチルエーテルで洗浄後乾燥し
て、リポアラビノマンナン11mgを得た。 このリポアラビノマンナンは、分析の結果、
糖鎖構造は実験例（２−１）、（３−１）とほと
んど同じで、パルミチン酸がアラビノマンナン
のアラビノースの５位を主として重量換算約
9.8％結合しており、平均分子量約12500であつ
た。 (6‐2) 実験例（１−１）に示したと同じ方法により
得られた脂肪酸含量約３％のアラビノマンナン
５mgをピリジン中、10mgの塩化パルミトイルと
超音波処理後、37℃、18時間反応させ、エチル
アルコールを加えて沈澱する生成物を集め、エ
チルエーテルで洗浄後乾燥し、リポアラビノマ
ンナン4.3mgを得た。 このリポアラビノマンナンは、分析の結果、
糖鎖構造は実験例（２−１）、（３−１）と大差
なく、アラビノマンナン糖鎖のアラビノースの
５位、マンノースの６位を主として約28％パル
ミチン酸が結合しており、平均分子量約14000
であつた。 (6‐3) 実験例（１−２）に示した菌体からアルカリ
抽出し、実験例（１−２）と同様の方法により
精製したアラビノマンナンを乾燥後、このもの
10mgをＮ・Ｎ−ジメチルホルムアミド１mlに溶
解し、ピリジン１mlを加え、更に８mgの塩化パ
ルミトイルを0.1mlのＮ・Ｎ−ジメチルホルム
アミドに溶解したものを加えて、37℃、16時間
反応させ、エタノールを加えて沈殿する生成物
を遠心分離して、エチルエーテルで洗浄、乾燥
して、リポアラビノマンナン約10mgを得た。 このリポアラビノマンナンは、分析の結果、
糖鎖構造は実験例（２−２）（３−２）とほと
んど同じで、パルミチン酸がアラビノマンナン
のアラビノースの５位を主として重量換算約
7.6％結合しており、平均分子量約12000であつ
た。 (6‐4) 実験例（１−２）に示したと同じ方法により
得られた脂肪酸含量約２％のアラビノマンナン
５mgをピリジン中、８mgの塩化パルミトイルと
超音波処理後、37℃、18時間反応させ、エチル
アルコールを加えて沈殿する生成物を集め、エ
チルエーテルで洗浄後乾燥し、リポアラビノマ
ンナン3.8ｇを得た。 このリポアラビノマンナンは、分析の結果、
糖鎖構造は実験例（２−２）（３−２）と大差
なく、アラビノマンナン糖鎖のアラビノースの
５位、マンノースの６位を主として約18％パル
ミチン酸が結合しており、平均分子量約13500
であつた。 尚、パルミチン酸の代りにステアリン酸を用
いても同様に実施できる。 実験例 ７ 抗腫瘍活性 Sarcoma−180腫瘍細胞（１×106個）を、BCG
で感作させておいたマウス（10週令雌ddY）に皮
下移植し、その翌日から、生理食塩水に無菌的に
溶解させた各種目的リポアラビノマンナンを各群
（１群８匹）のマウス１匹当り0.02μｇ乃至2.0μ
ｇを融日に８回皮下投与した。ついで腫瘍細胞を
移植してから30日後に動物を殺し、腫瘍重量を測
定して目的リポアラビノマンナンの抗腫瘍活性を
調べた。 結果は表７に示す。
ノース約34個から成る平均分子量約11000のア
ラビノマンナンにパルミチン酸を中心として炭
素数14乃至19の脂肪酸が平均４〜５個結合した
平均分子量約12000のリポ多糖体と考えられ
る。 実験例 ６ リポアラビノマンナンの合成 多糖体に脂肪酸を結合させてリポ多糖体を得る
方法はそれ自体公知であるが、公知の方法により
無脂および低脂のアラビノマンナンに適宜脂肪酸
を結合させて腫瘍免疫治療上より有効なリポアラ
ビノマンナンを得た。 (6‐1) 実験例（１−１）に示した菌体からアルカリ
抽出し、実験例（１−１）と同様の方法により
分子篩にかけて集めた分子量約8500乃至14000
のアラビノマンナンをアフイニテイークロマト
グラフイーで精製し、乾燥後、このもの10mgを
Ｎ・Ｎ−ジメチルホルムアミド・ピリジン中、
10mgのパルミチン酸無水物と50℃、20時間反応
させ、エチルエーテルを加えて沈澱する生成物
を遠心分離してエチルエーテルで洗浄後乾燥し
て、リポアラビノマンナン11mgを得た。 このリポアラビノマンナンは、分析の結果、
糖鎖構造は実験例（２−１）、（３−１）とほと
んど同じで、パルミチン酸がアラビノマンナン
のアラビノースの５位を主として重量換算約
9.8％結合しており、平均分子量約12500であつ
た。 (6‐2) 実験例（１−１）に示したと同じ方法により
得られた脂肪酸含量約３％のアラビノマンナン
５mgをピリジン中、10mgの塩化パルミトイルと
超音波処理後、37℃、18時間反応させ、エチル
アルコールを加えて沈澱する生成物を集め、エ
チルエーテルで洗浄後乾燥し、リポアラビノマ
ンナン4.3mgを得た。 このリポアラビノマンナンは、分析の結果、
糖鎖構造は実験例（２−１）、（３−１）と大差
なく、アラビノマンナン糖鎖のアラビノースの
５位、マンノースの６位を主として約28％パル
ミチン酸が結合しており、平均分子量約14000
であつた。 (6‐3) 実験例（１−２）に示した菌体からアルカリ
抽出し、実験例（１−２）と同様の方法により
精製したアラビノマンナンを乾燥後、このもの
10mgをＮ・Ｎ−ジメチルホルムアミド１mlに溶
解し、ピリジン１mlを加え、更に８mgの塩化パ
ルミトイルを0.1mlのＮ・Ｎ−ジメチルホルム
アミドに溶解したものを加えて、37℃、16時間
反応させ、エタノールを加えて沈殿する生成物
を遠心分離して、エチルエーテルで洗浄、乾燥
して、リポアラビノマンナン約10mgを得た。 このリポアラビノマンナンは、分析の結果、
糖鎖構造は実験例（２−２）（３−２）とほと
んど同じで、パルミチン酸がアラビノマンナン
のアラビノースの５位を主として重量換算約
7.6％結合しており、平均分子量約12000であつ
た。 (6‐4) 実験例（１−２）に示したと同じ方法により
得られた脂肪酸含量約２％のアラビノマンナン
５mgをピリジン中、８mgの塩化パルミトイルと
超音波処理後、37℃、18時間反応させ、エチル
アルコールを加えて沈殿する生成物を集め、エ
チルエーテルで洗浄後乾燥し、リポアラビノマ
ンナン3.8ｇを得た。 このリポアラビノマンナンは、分析の結果、
糖鎖構造は実験例（２−２）（３−２）と大差
なく、アラビノマンナン糖鎖のアラビノースの
５位、マンノースの６位を主として約18％パル
ミチン酸が結合しており、平均分子量約13500
であつた。 尚、パルミチン酸の代りにステアリン酸を用
いても同様に実施できる。 実験例 ７ 抗腫瘍活性 Sarcoma−180腫瘍細胞（１×106個）を、BCG
で感作させておいたマウス（10週令雌ddY）に皮
下移植し、その翌日から、生理食塩水に無菌的に
溶解させた各種目的リポアラビノマンナンを各群
（１群８匹）のマウス１匹当り0.02μｇ乃至2.0μ
ｇを融日に８回皮下投与した。ついで腫瘍細胞を
移植してから30日後に動物を殺し、腫瘍重量を測
定して目的リポアラビノマンナンの抗腫瘍活性を
調べた。 結果は表７に示す。
【表】
【表】
【表】
前記表７から明らかなごとく本目的リポ多糖
体、すなわち無脂又は低脂のアラビノマンナンに
脂肪酸を結合させたリポアラビノマンナンも、抽
出精製した天然リポアラビノマンナンも、共に非
常に少ない投与量にて腫瘍増殖の強い抑制を示
す。特に脂肪酸含量の高いアラビノマンナンはよ
り少量投与量でも抗腫瘍効果を示す。 既に抗腫瘍効果の認められている結核菌体また
はその抽出物は複雑な化学成分の混合物であるの
に対し、本発明のリポアラビノマンナンは単離精
製されたリポ多糖体という単明な化学組成物であ
るという特徴をもつものであり、菌体が持つ副作
用を除去できるという点で今後極めて有用な腫瘍
免疫療法剤として期待されるものである。
体、すなわち無脂又は低脂のアラビノマンナンに
脂肪酸を結合させたリポアラビノマンナンも、抽
出精製した天然リポアラビノマンナンも、共に非
常に少ない投与量にて腫瘍増殖の強い抑制を示
す。特に脂肪酸含量の高いアラビノマンナンはよ
り少量投与量でも抗腫瘍効果を示す。 既に抗腫瘍効果の認められている結核菌体また
はその抽出物は複雑な化学成分の混合物であるの
に対し、本発明のリポアラビノマンナンは単離精
製されたリポ多糖体という単明な化学組成物であ
るという特徴をもつものであり、菌体が持つ副作
用を除去できるという点で今後極めて有用な腫瘍
免疫療法剤として期待されるものである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 人型結核菌ミコバクテリウム・ツベルクロー
シス青山Ｂ株（Mycobacterium tuberculosis
Aoyama Ｂ strain）またはミコバクテリウム・
ツベルクローシスH37Rv株（Mycobacterium
tuberculosis H37Rv strain）の菌体を熱水抽出、
精製して得られる、アラビノマンナンを多糖鎖と
し、脂肪酸をエステル結合した脂肪酸含量１〜28
％で、分子量10000〜16000のリポ多糖体を有効成
分とする腫瘍免疫療法剤。 ただし、前記特許請求の範囲１項で示した脂肪
酸は、パルミチン酸、ミリスチン酸、ステアリン
酸、ツベルクロステアリン酸、ヘプタデカン酸、
オレイン酸、リノール酸の残基である。 また前記特許請求の範囲１項で示した組成物の
糖組成は、アラビノース30〜74％、マンノース20
〜50％、グルコース０〜10％、ガラクトース０〜
13％である。 ２ 人型結核菌ミコバクテリウム・ツベルクロー
シス青山Ｂ株またはミコバクテリウム・ツベルク
ローシスH37Rv株の菌体をアルカリ抽出、精製し
て得られるアラビノマンナンに、適宜な割合に脂
肪酸をエステル結合させて得られる脂肪酸含量１
〜28％で、分子量10000〜16000のリポ多糖体を有
効成分とする腫瘍免疫療法剤。 ただし、前記特許請求の範囲２項で示した脂肪
酸は、パルミチン酸、ミリスチン酸、ステアリン
酸、ツベルクロステアリン酸、ヘプタデカン酸、
オレイン酸、リノール酸の残基である。 また前記特許請求の範囲２項で示した組成物の
糖組成は、アラビノース30〜74％、マンノース20
〜50％、グルコース０〜10％、ガラクトース０〜
13％である。 ３ 人型結核菌ミコバクテリウム・ツベルクロー
シス青山Ｂ株またはミコバクテリウム・ツベルク
ローシスH37Rv株の菌体を熱水抽出、精製して得
られる、アラビノマンナンを多糖鎖とし、脂肪酸
をエステル結合したリポ多糖体に、更に適宜な割
合に脂肪酸をエステル結合させて得られる脂肪酸
含量１〜28％で、分子量10000〜16000のリポ多糖
体を有効成分とする腫瘍免疫療法剤。 ただし、前記特許請求の範囲３項で示した脂肪
酸は、パルミチン酸、ミリスチン酸、ステアリン
酸、ツベルクロステアリン酸、ヘプタデカン酸、
オレイン酸、リノール酸の残基である。 また前記特許請求の範囲３項で示した組成物の
糖組成は、アラビノース30〜74％、マンノース20
〜50％、グルコース０〜10％、ガラクトース０〜
13％である。
Priority Applications (9)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8468179A JPS568320A (en) | 1979-07-04 | 1979-07-04 | Drug for tumor immunotherapy comprising lipopolysaccharide as active constituent |
| US06/147,127 US4329452A (en) | 1979-07-04 | 1980-05-06 | Immunotherapeutic agent for tumors comprising lipopolysaccharide as an active component |
| FR8012794A FR2484258A1 (fr) | 1979-07-04 | 1980-06-09 | Agent immunotherapique pour tumeurs, avec du lipopolysaccharide comme composant actif, et procede de preparation de cet agent |
| ES493061A ES493061A0 (es) | 1979-07-04 | 1980-07-03 | Un procedimiento para preparar un lipopolisacarido |
| SU802943651A SU1232124A3 (ru) | 1979-07-04 | 1980-07-03 | Способ получени липоарабиноманнана,обладающего противоопухолевой активностью |
| CH5128/80A CH650799A5 (de) | 1979-07-04 | 1980-07-03 | Verfahren zur herstellung von lipopolysacchariden mit antitumoraktivitaet und immunotherapeutische mittel gegen tumore. |
| CA355,290A CA1132047A (en) | 1979-07-04 | 1980-07-03 | Immunotherapeutic agent for tumors comprising lipopolysaccharide as an active component |
| IT23219/80A IT1132168B (it) | 1979-07-04 | 1980-07-03 | Agente immunoterapeutico per tumori comprendente lipopolisaccaride come un componente attivo |
| US06/293,999 US4394502A (en) | 1979-07-04 | 1981-08-18 | Immunotherapeutic agent for tumors comprising lipopolysaccharide as an active component |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8468179A JPS568320A (en) | 1979-07-04 | 1979-07-04 | Drug for tumor immunotherapy comprising lipopolysaccharide as active constituent |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS568320A JPS568320A (en) | 1981-01-28 |
| JPS6256843B2 true JPS6256843B2 (ja) | 1987-11-27 |
Family
ID=13837428
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8468179A Granted JPS568320A (en) | 1979-07-04 | 1979-07-04 | Drug for tumor immunotherapy comprising lipopolysaccharide as active constituent |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4329452A (ja) |
| JP (1) | JPS568320A (ja) |
| CA (1) | CA1132047A (ja) |
| CH (1) | CH650799A5 (ja) |
| ES (1) | ES493061A0 (ja) |
| FR (1) | FR2484258A1 (ja) |
| IT (1) | IT1132168B (ja) |
| SU (1) | SU1232124A3 (ja) |
Families Citing this family (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5718619A (en) * | 1980-07-10 | 1982-01-30 | Chisato Maruyama | Tumor immunotherapy agent containing lipopolysaccharide as active principle |
| JPS59161320A (ja) * | 1983-03-04 | 1984-09-12 | Maruyama Chisato | リポ多糖体およびその製造法 |
| US4612304A (en) * | 1985-06-11 | 1986-09-16 | Ss Pharmaceutical Co., Ltd. | Antitumor formulation containing lipopolysaccharide with trehalose derivatives |
| US4818751A (en) * | 1985-07-02 | 1989-04-04 | Zeria Shinyaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Cosmetics |
| EP0295749A1 (en) * | 1987-06-15 | 1988-12-21 | Duphar International Research B.V | Sulpholipopolysaccharides as stimulators of the non-specific defence mechanism |
| US4798369A (en) * | 1987-11-03 | 1989-01-17 | The Firestone Tire & Rubber Company | Ultrasonic air spring system |
| US7063844B2 (en) | 1992-12-10 | 2006-06-20 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Presentation of hydrophobic antigens to T-cells by CD1 molecules |
| US5853737A (en) * | 1992-12-10 | 1998-12-29 | Brigham And Women's Hospital | Method for inducing a CD1-restricted immune response |
| US6238676B1 (en) * | 1992-12-10 | 2001-05-29 | Brigham And Women's Hospital | Presentation of hydrophobic antigens to T-cells by CD1 molecules |
| EP0710484A3 (en) * | 1994-10-07 | 1996-10-23 | Univ Illinois | Mixture of alpha-D-glucopyranosyl- (1-6) -alpha-D glucopyranose as an anti-tumor agent |
| CA2293821C (en) * | 1997-06-10 | 2004-05-11 | Tai Ho Chung | Carbohydrate complex extracted from mycobacterium tuberculosis and process for the preparation thereof |
| US5869645A (en) * | 1997-10-15 | 1999-02-09 | Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Method for isolating high molecular weight antineoplastic glycans using urea |
| NZ505538A (en) * | 2000-07-03 | 2004-12-24 | Malaghan Inst Of Medical Res | A vaccine comprising immunogenic acyl glyceryl phosphatidylinositol manno-oligosaccharide (PIM); and the use of PIM for inducing an immune response in a patient effective in the prevention or treatment of Th2-mediated diseases or disorders such as asthma |
| DK1765391T3 (da) * | 2004-06-07 | 2013-03-25 | Qu Biolog Inc | Bakterielle præparater til behandlingen af cancer |
| US9107864B2 (en) | 2004-06-07 | 2015-08-18 | Qu Biologics Inc. | Tissue targeted antigenic activation of the immune response to treat cancers |
| US8034359B2 (en) | 2004-06-07 | 2011-10-11 | Qu Biologics Inc. | Tissue targeted antigenic activation of the immune response to cancers |
| US8501198B2 (en) | 2004-06-07 | 2013-08-06 | Qu Biologics Inc. | Tissue targeted antigenic activation of the immune response to treat cancers |
| US20070161546A1 (en) * | 2005-12-15 | 2007-07-12 | Colm King | Methods and compositions for treatment of cancer |
| US8980279B2 (en) | 2010-07-26 | 2015-03-17 | Qu Biologics | Personalized site-specific immunomodulation |
| JP2015157763A (ja) * | 2012-05-28 | 2015-09-03 | エヌエーアイ株式会社 | 認知症の治療剤及び予防剤 |
| US10709373B2 (en) | 2014-03-31 | 2020-07-14 | University Of Utah Research Foundation | Fluid analysis device and associated systems and methods |
| US10251946B2 (en) | 2014-05-02 | 2019-04-09 | Qu Biologics Inc. | Anti-microbial immunomodulation |
| TW202228739A (zh) * | 2020-10-09 | 2022-08-01 | 日商志瑞亞新藥工業股份有限公司 | 結核菌萃取物之新穎用途 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1188519A (en) * | 1966-10-27 | 1970-04-15 | Wellcome Found | Method for the Purification of Lipopolysaccharides |
| FR2227862A1 (en) * | 1973-05-04 | 1974-11-29 | Anvar | Non-arthrogenic immunological adjuvants - obtained by extraction of lipid-free mycobacterial residues |
| NL7308450A (ja) * | 1972-06-20 | 1973-12-27 | ||
| FR2275224A1 (fr) * | 1974-06-20 | 1976-01-16 | Anvar | Fractions mycobacteriennes utilisables comme agent anti-infectieux, et procede pour leur preparation |
-
1979
- 1979-07-04 JP JP8468179A patent/JPS568320A/ja active Granted
-
1980
- 1980-05-06 US US06/147,127 patent/US4329452A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-06-09 FR FR8012794A patent/FR2484258A1/fr active Granted
- 1980-07-03 ES ES493061A patent/ES493061A0/es active Granted
- 1980-07-03 IT IT23219/80A patent/IT1132168B/it active
- 1980-07-03 CH CH5128/80A patent/CH650799A5/de not_active IP Right Cessation
- 1980-07-03 SU SU802943651A patent/SU1232124A3/ru active
- 1980-07-03 CA CA355,290A patent/CA1132047A/en not_active Expired
-
1981
- 1981-08-18 US US06/293,999 patent/US4394502A/en not_active Expired - Lifetime
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| CA1132047A (en) | 1982-09-21 |
| FR2484258A1 (fr) | 1981-12-18 |
| IT1132168B (it) | 1986-06-25 |
| JPS568320A (en) | 1981-01-28 |
| FR2484258B1 (ja) | 1984-11-30 |
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