JPS6261321B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPS6261321B2 JPS6261321B2 JP58235100A JP23510083A JPS6261321B2 JP S6261321 B2 JPS6261321 B2 JP S6261321B2 JP 58235100 A JP58235100 A JP 58235100A JP 23510083 A JP23510083 A JP 23510083A JP S6261321 B2 JPS6261321 B2 JP S6261321B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- freeze
- sample
- under reduced
- red blood
- reduced pressure
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
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Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Drying Of Solid Materials (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は凍結乾燥物の製造方法に関し、さらに
詳しくは、凍結物を０℃以下の温度において減圧
下で乾燥する凍結乾燥法において、試料を含有す
る液体を、低温に冷却した板の上に滴下して上記
凍結物を形成せしめることを特徴とする凍結乾燥
物の製造方法に関する。
詳しくは、凍結物を０℃以下の温度において減圧
下で乾燥する凍結乾燥法において、試料を含有す
る液体を、低温に冷却した板の上に滴下して上記
凍結物を形成せしめることを特徴とする凍結乾燥
物の製造方法に関する。
従来、凍結乾燥物は、試料を含有する液体をバ
イアル瓶等の容器に注入し、液体窒素等の冷媒に
より極低温に凍結した後、０℃以下の温度におい
て減圧下で乾燥する方法により製造されていた。
イアル瓶等の容器に注入し、液体窒素等の冷媒に
より極低温に凍結した後、０℃以下の温度におい
て減圧下で乾燥する方法により製造されていた。
この方法は、
(1) 凍結乾燥時の容器としてバイアル瓶等を用
い、試料を分注器などで注入するため、微量の
試料を正確に凍結乾燥することが困難である、 (2) 容器の中に微量の試料が拡散するため、変性
の原因とり易い、 (3) 試料が直接に極低温の冷媒に触れるため、試
料が変性し凍結乾燥物の復元性が悪い場合があ
る、 等の欠点を有していた。
い、試料を分注器などで注入するため、微量の
試料を正確に凍結乾燥することが困難である、 (2) 容器の中に微量の試料が拡散するため、変性
の原因とり易い、 (3) 試料が直接に極低温の冷媒に触れるため、試
料が変性し凍結乾燥物の復元性が悪い場合があ
る、 等の欠点を有していた。
本発明者は種々研究の結果、試料を含有する液
体を冷却板上で半球状の凍結物とした後に減圧下
に乾燥すれば、微量の試料を正確に凍結乾燥する
ことができ、しかも試料の変性が少ないことを発
見し、本発明を完成した。
体を冷却板上で半球状の凍結物とした後に減圧下
に乾燥すれば、微量の試料を正確に凍結乾燥する
ことができ、しかも試料の変性が少ないことを発
見し、本発明を完成した。
本発明は、上述したように、凍結物を０℃以下
の温度において減圧下で乾燥する凍結乾燥法にお
いて、試料を含有する液体を、低温に冷却した板
の上に滴下して上記凍結物を形成せしめることを
特徴とする凍結乾燥物の製造方法である。
の温度において減圧下で乾燥する凍結乾燥法にお
いて、試料を含有する液体を、低温に冷却した板
の上に滴下して上記凍結物を形成せしめることを
特徴とする凍結乾燥物の製造方法である。
本発明の方法は従来の凍結乾燥方法により凍結
乾燥物を製造できるものならば何にでも適用する
ことができる。すなわち、ウイルス・細菌等の微
生物、細胞、動物等の赤血球、その他血清、体
液、酵素、合成ポリマー等である。
乾燥物を製造できるものならば何にでも適用する
ことができる。すなわち、ウイルス・細菌等の微
生物、細胞、動物等の赤血球、その他血清、体
液、酵素、合成ポリマー等である。
上記の試料を含有する液体は、溶液、懸濁液ま
たは乳濁液等何でもよい。
たは乳濁液等何でもよい。
冷却板の形状は底面が凍結乾燥機の棚に直接に
接触するものであればよく、冷却板の材料は、金
属、紙、ガラス、合成ポリマーなどを用いること
ができる。
接触するものであればよく、冷却板の材料は、金
属、紙、ガラス、合成ポリマーなどを用いること
ができる。
冷却板は瞬時に半球状の凍結物が形成される程
度に冷却されている必要があり、たとえば液体窒
素、ドライアイス−アセトン、フルオロカーボン
等を用いて冷却すればよい。
度に冷却されている必要があり、たとえば液体窒
素、ドライアイス−アセトン、フルオロカーボン
等を用いて冷却すればよい。
上記の方法により形成された半球状の凍結物
を、従来の凍結乾燥法と同様の方法により０℃以
下の温度において減圧下で乾燥すれば、本発明の
凍結乾燥物が得られる。
を、従来の凍結乾燥法と同様の方法により０℃以
下の温度において減圧下で乾燥すれば、本発明の
凍結乾燥物が得られる。
本発明の方法は、
(1) 試料を含有する液体の濃度および１滴の滴下
量を調節することにより、赤血球凝集活性単
位、重量、活性、または用量当りの細胞数など
の単位で所望の単位の凍結乾燥物を得ることが
できる、 (2) 本発明の方法で得られる半球状の凍結乾燥物
は、凍結する際に小さな表面積で瞬時に凍結
し、そのままの形状で乾燥するので、ウイルス
等にあつても活性は低下せず、また復元時の溶
解性がすぐれている、 (3) 試料が直接に極低温の冷媒に触れないため、
試料の変性が少ない、 等の種々の利点を有する。
量を調節することにより、赤血球凝集活性単
位、重量、活性、または用量当りの細胞数など
の単位で所望の単位の凍結乾燥物を得ることが
できる、 (2) 本発明の方法で得られる半球状の凍結乾燥物
は、凍結する際に小さな表面積で瞬時に凍結
し、そのままの形状で乾燥するので、ウイルス
等にあつても活性は低下せず、また復元時の溶
解性がすぐれている、 (3) 試料が直接に極低温の冷媒に触れないため、
試料の変性が少ない、 等の種々の利点を有する。
以下に本発明の方法を実施例を用いてさらに詳
細に説明する。
細に説明する。
実施例 １
風疹ウイルスを培養したろ液から、風疹ウイル
スを精製したもの（以下「精製ウイルス」いう）
に活性の保護剤および賦形剤として牛血清アルブ
ミンを添加し、バルビタール緩衝液を用いて赤血
球凝集活性が４単位になるように精製ウイルスの
水性懸濁液を調製した。
スを精製したもの（以下「精製ウイルス」いう）
に活性の保護剤および賦形剤として牛血清アルブ
ミンを添加し、バルビタール緩衝液を用いて赤血
球凝集活性が４単位になるように精製ウイルスの
水性懸濁液を調製した。
ドライアイスの上に乗せて０℃以下に冷却した
ガラス板の上に上記精製ウイルスの水性懸濁液
を、25μずつマイクロドロツパーを用いて滴下
し、半球状の凍結物を形成する。これを、通気性
のある蓋で被い、棚温度を−40℃に冷却した凍結
乾燥機に入れ、減圧下で16時間乾燥して精製風疹
ウイルスの半球状凍結乾燥物を得た。上記精製風
疹ウイルスの半球状凍結乾燥物は、25μの蒸留
水を用いて復元したとき、凍結乾燥前と同様に４
単位の赤血球凝集活性を保つていることがわかつ
た。
ガラス板の上に上記精製ウイルスの水性懸濁液
を、25μずつマイクロドロツパーを用いて滴下
し、半球状の凍結物を形成する。これを、通気性
のある蓋で被い、棚温度を−40℃に冷却した凍結
乾燥機に入れ、減圧下で16時間乾燥して精製風疹
ウイルスの半球状凍結乾燥物を得た。上記精製風
疹ウイルスの半球状凍結乾燥物は、25μの蒸留
水を用いて復元したとき、凍結乾燥前と同様に４
単位の赤血球凝集活性を保つていることがわかつ
た。
実施例 ２
羊赤血球を洗浄したのちホルムアルデヒドを添
加した生理的食塩液で固定し、次いで10−
20ppmのタンニン酸をカツプリング剤として含
有するリン酸緩衝食塩液を用いて処理した。
加した生理的食塩液で固定し、次いで10−
20ppmのタンニン酸をカツプリング剤として含
有するリン酸緩衝食塩液を用いて処理した。
上記のように調製した羊赤血球（担体）を2.5
％ｗ／ｖとしてリン酸緩衝食塩液中に浮遊させ、
この１容とヒトイムノグロブリン（30mg／dl）１
容とを37℃の恒温槽中で１時間インキユベート
し、遠心沈澱した後２回洗浄した羊赤血球を2.5
％ｗ／ｖの濃度で凍結乾燥の保護剤としてアミノ
酸、牛血清アルブミンを添加したリン酸緩衝食塩
液に浮遊せしめ、均質になるように撹拌したの
ち、液体窒素で外部から冷却したガラスのバイア
ル瓶の中へマイクロドロツパーを用いて25μず
つ滴下した。滴下した小滴は瓶の底に流動、分散
することなく瞬間的に小体積の形状で凍結した。
このバイアル瓶を、棚温度を−40℃に冷却した真
空凍結乾燥機に入れて12時間減圧下で凍結乾燥を
おこない、目的とするヒトイムノグロブリン感作
赤血球の凍結乾燥物を得た。
％ｗ／ｖとしてリン酸緩衝食塩液中に浮遊させ、
この１容とヒトイムノグロブリン（30mg／dl）１
容とを37℃の恒温槽中で１時間インキユベート
し、遠心沈澱した後２回洗浄した羊赤血球を2.5
％ｗ／ｖの濃度で凍結乾燥の保護剤としてアミノ
酸、牛血清アルブミンを添加したリン酸緩衝食塩
液に浮遊せしめ、均質になるように撹拌したの
ち、液体窒素で外部から冷却したガラスのバイア
ル瓶の中へマイクロドロツパーを用いて25μず
つ滴下した。滴下した小滴は瓶の底に流動、分散
することなく瞬間的に小体積の形状で凍結した。
このバイアル瓶を、棚温度を−40℃に冷却した真
空凍結乾燥機に入れて12時間減圧下で凍結乾燥を
おこない、目的とするヒトイムノグロブリン感作
赤血球の凍結乾燥物を得た。
実施例 ３
鳥類、哺乳類の赤血球を洗浄し２％グルタルア
ルデヒドを添加した生理的食塩液を用いて固定し
たのち残余のグルタルアルデヒドを遠心分離によ
つて洗浄除去し、赤血球の膜構成成分の失活を防
止する目的でアミノ酸、糖、牛血清アルブミンを
保護剤として用い、この中に赤血球を10％ｗ／ｖ
で浮遊させ赤血球懸濁液を得た。これを、ドライ
アイスの上で冷却した厚紙の上でマイクロピペツ
トを用いて50μずつ滴下した。滴下した小滴
は、瞬時に半球状の凍結物を形成した。凍結物
は、実施例１と同様に棚温度を−40℃に冷却した
真空凍結乾燥機に入れて16時間減圧下で凍結乾燥
をおこない、目的とする赤血球の凍結乾燥物を得
た。
ルデヒドを添加した生理的食塩液を用いて固定し
たのち残余のグルタルアルデヒドを遠心分離によ
つて洗浄除去し、赤血球の膜構成成分の失活を防
止する目的でアミノ酸、糖、牛血清アルブミンを
保護剤として用い、この中に赤血球を10％ｗ／ｖ
で浮遊させ赤血球懸濁液を得た。これを、ドライ
アイスの上で冷却した厚紙の上でマイクロピペツ
トを用いて50μずつ滴下した。滴下した小滴
は、瞬時に半球状の凍結物を形成した。凍結物
は、実施例１と同様に棚温度を−40℃に冷却した
真空凍結乾燥機に入れて16時間減圧下で凍結乾燥
をおこない、目的とする赤血球の凍結乾燥物を得
た。
Claims (1)
- １ 凍結物を０℃以下の温度において減圧下で乾
燥する凍結乾燥法において、試料を含有する液体
を、低温に冷却した板の上に滴下して上記凍結物
を形成せしめることを特徴とする凍結乾燥物の製
造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58235100A JPS60129102A (ja) | 1983-12-15 | 1983-12-15 | 凍結乾燥物の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58235100A JPS60129102A (ja) | 1983-12-15 | 1983-12-15 | 凍結乾燥物の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60129102A JPS60129102A (ja) | 1985-07-10 |
| JPS6261321B2 true JPS6261321B2 (ja) | 1987-12-21 |
Family
ID=16981054
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58235100A Granted JPS60129102A (ja) | 1983-12-15 | 1983-12-15 | 凍結乾燥物の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60129102A (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0612008U (ja) * | 1991-10-02 | 1994-02-15 | 株式会社ノダ | 積層板 |
| JP2549259Y2 (ja) * | 1991-11-20 | 1997-09-30 | 株式会社ノダ | 積層板 |
| US5593824A (en) * | 1994-09-02 | 1997-01-14 | Pharmacia Biotech, Inc. | Biological reagent spheres |
| US5565318A (en) * | 1994-09-02 | 1996-10-15 | Pharmacia Biotech, Inc. | Room temperature stable reagent semi-spheres |
| CN104918486B (zh) * | 2012-11-30 | 2017-12-15 | 法玛科思莫斯股份公司 | 冷冻保护试剂,冷冻保护和冷冻保存的组合物,其用途,和冷冻保存方法 |
-
1983
- 1983-12-15 JP JP58235100A patent/JPS60129102A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS60129102A (ja) | 1985-07-10 |
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