JPS6274904A - アフイニテイ−クロマトグラフイ−用担体の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔゛産業上の利用分野〕 本発明は、アフィニティークロマトグラフィー用担体に
関するものであり、詳しくは、特定のタンパク質・酵素
等の生体関連物質に対し特異的な親和力を有する色素を
担持した、分離能が高く、シかも篩い機械的強度を合わ
せもったアフィニティークロマトグラフィー用担体に関
する。

〔従来の技術〕

下記一般式（１）で示さｎる青色色素は、フォスフオフ
ルキトナーゼ、プロティンキナーゼなど（７）ＡＴＰを
基質とするキナーゼ群、アルコールデヒドロゲナーゼ、
乳酸デヒドロゲナーゼなどのＮＡＤを補酵素とする脱水
素酵素群など種々の酵素を吸着する。また、この色素は
アルブミン、インターフェロン、血液凝固因子及びリポ
タンパク質の様な非酵素系タンパク質に対しても特異的
な親和性をもっている。このような性質を利用して、こ
の青色色素を水不溶性指体に固定化し、上述の酵素・タ
ンパク質等の生理活性物質の分離・精製に用いられてき
た。

（式中　Ｒ１、Ｒ２はどちらか一方が水素原子で他方が
一８０ｓ°基を示す） 従来、この青色色素を固定化したアフィニティークロマ
トグラフィー用担体としては、架橋アガロースや、架橋
セルロースに担持したものが知らｎているが、ニ般に吸
着能力が低かったり、吸着した酵素・タンパク質の溶離
が困難な場合が多く、又機械的強度が弱く、価格も高価
なため、必ずしも工業的に有利なものではなかった。

〔発明の目的〕 本発明は、上記実情に鑑み、工業的に有利な青色色素相
持アフィニティークロマトグラフィー用担体を開発すべ
く種々検討を重ねた結果、親水性かつ多孔性の架橋共重
合体に青色色素を導入することにより、機械的強度の高
いかつ酵素・タンパク質の吸着容量が大きく、更に回収
率も高い、担体を得ることができることを見出し本発明
を完成した。

〔発明の構成〕

すなわち本発明の要旨は、ポリオールポリアクリレート
及びポリオールポリメタクリレートから選ばｎた架橋剤
成分とグリシジルアクリレート及びグリシジルメタクリ
レートから選ばまた単量体成分とを得られた共重合体の
細孔容積が乾燥状態でＯｏ−〜λ、Ｏｄ／ｆの範囲に入
る条件下で共重合させたのち、 （１）得られた多孔性架橋共重合体中のエポキシ基を加
水分解したのち下記一般式（Ｉ）で表わされる色素と反
応させるか、 又は （１１）得られた多孔性架橋共重合体を下記一般式（１
）で表わさｎる色素と反応させたのち、該多孔性架橋共
重合体中の残存エポキシ基を加水分解する ことを特徴とするアフィニティークロマトグラフィー用
担体のｆＪ−Ｂ方法に関するものである。

（式中、Ｒ１，Ｒ２はどちらか一方が水素原子で他方が
一８０３基を示す） 以下本発明の詳細な説明する。

本発明によるアフイニテイクロマトグラフイー用用体は
、用体知架橋構造を４えるポリオールポリアクリレート
又はポリオールポリメタクリレート、特異的な相互作用
を発現する上記一般式（１）で示される色素を含有する
エステル、及び親水性を刊与する下記一般式（ＩＩ）で
示されるグリセリンエステルという機能を異にする３つ
の構Ｉｌ１位から実質的に収立っている。

（式中、Ｒは水素原子又はメチル基を示す）ポリオール
ポリアクリレートまたはポリオールポリメタクリレート
としては１通常、エチレングリコールジメタクリレート
、ジエチレングリコールジメタクリレート、トリエチレ
ングリコールジメタクリレート、テトラエチレングリコ
ールジメタクリレート、プロピレングリコ−ルジメｌク
リレート、ジグロピレングリコールジメタクリレート、
トリプロピレングリコールジメタクリレート、トリメチ
ロールプロノくントリメタクリレート、ペンタエリスリ
トールテトラメタクリレ−）％’１３−ブチレングリコ
ールジメタクリレートおよびこれらに対応するアクリレ
ートが、単独でまたは混合して用いられる。

好ましくはエチレングリコールのジアクリレートまたは
ジメタクリレートが用いられる。これらの架橋剤は担体
中の１Ｏ（ｆｒ量）チ以上を占めるべきである。好まし
くはｗ体の７Ｏ−ｆＯ（重量）％、特にＪｏ−Ｊｏ（ｉ
黛）チを占める。担体中に占める架橋剤の比率が小さ過
ぎると担体の膨＠性が大きくなり１機械的強度の低下を
招き、クロマトグラフィー用担体として不適当となる。

逆に架橋剤の比率が大きくなり過ぎると、色素含有エス
テル部分の減少によるタンパク質吸着容量の低下または
、グリセリンエステル部分の減少による親水性の低下を
もたらす。

次に色素含有エステルに関して述べる。一般式（Ｉ）で
表される色素と［、ては、　　Ｏ１’ｂａｃｒｏｎ′Ｆ
。

ｂｕｔｔｓ　ＪＧ−Ａ　（Ｃ１ｂａ−Ｇｅｉｇｙ社裂）
あるいはＰｒｏｃｉＯｒｙＤｂｌｌｔｓ　Ｈ”Ｂ　（工
Ｃ工社匁）が市販されており、これらを用いることがで
きる。導入方法としては。

２つの方法が考えられる。

（１）架橋共重合体中のエポキシ基を加水分解したのち
色素を反応させる方法 この方法によれば、色素は、前記一般式（ｎ）で示され
るグリセリンエステル部分の水酸基に導入され下記一般
式（ＩＩ［）で示される構造単位をとる。

ＣＩｌり （式中、Ｒは水素原子又はメチル基を示し。

Ｒ１、Ｒ２はどちらか一方が水素原子で他方が一８０３
°基を示す） （１１）架橋共重合体を色素と反応させたのち、該架橋
共重合体中の残存エポキシ基を加水分解する方法 この方法によれば、色素は、下記一般式（至）で示され
るグリシジルエステル部分のエポキシ基て下記一般式（
ｖ）で示される構造単位として導入されるものと、上記
一般式（ＩＩＩ）で示される構造単位として導入される
ものが考えられる。

明確ではないが、恐らく上述の２種部の形態で色素が導
入されるものと推定される。

（式中、Ｆｆは水素原子又はメチル基を示す）（式中、
Ｒは水素原子又はメチル基を示し、Ｒ１、Ｒ２は、どち
らか一方が水素原子で他方が−８０８基を示す） （１１）の方法で色素を導入した後、残存するエポキシ
基は、加水分解されるので、ｆｌＪ、　（ｉｌｌいずれ
の方法で色素を導入しても、本発明に係る担体は、架橋
構造を与えるポリオールポリアクリレート、又はポリオ
ールポリメタクリレート部分、色素を含有するエステル
部分、及び一般式（ＩＩ）で示されるグリセリンエステ
ル部分トいう３つの構成単位から実質的に成立っている
ことには、かわりがない。

色素含有エステルは、担体の色素導入ｔが０、ｊ−３０
０μｎｏ１／ｆ　　となる量で相体に存在させる。導入
量がＯＪμｍｏｌ／ｆより小さいグとアフィニティーク
ロマトグラフィー用相体として実用性に乏しく又導入量
が５００μｎｏ１／ｆより大きくなると、相体の親水性
が低下し、タンパク質の回収率が低下する等実用上程々
の障害を生じる。

本発明に係る担体のさらに好適な色素導入量は！〜／　
００　ｐｍｏ１／９である。また、グリセリンエステル
単位は、（グリセリンエステル単位十色素含有エステル
単位）の合計モル数に対するグリセリンエステル単位の
モル数が１１％以上を占める量で担体中に存在させるの
が好ましい。

グリセリンエステルの量が少ないと担体の親水性が低下
する。

本発明に係る相体は、上記の架橋剤単位、色素含有エス
テル単位及びグリセリンエステル単位から本質的に成立
っているが、所望ならばアクリル酸又はメタクリル酸の
メチルエステルやエチルエステルなどの単位を含んでい
ても良い。

本発明に係る担体は、架橋剤とアクリル酸又はメタクリ
ル酸のグリシジルエステルとヲ共重合させて、架橋共重
合体とし１次いで（１）グリシジルエステルのエポキシ
を水と反応させて開環した後生成する水酸基を利用して
色素を導入するか、あるいは、Ｃ１１）該架橋共重合体
に直接１色素を反応させた後、グリシジルエステルの残
存エポキシ基を水と反応させて開環することにより容易
にＭ　造することができる。

担体の多孔質イヒ方法に関しては、後述するが、タンパ
ク質の如く巨大分子を対象とする場合は、担体の多孔質
化が不可欠である。多孔度が不足していると、タンパク
質は担体内のボア中に拡散できず、相体粒子表面でしか
吸溜反応がおこらないので吸Ｍｕｍの低下を招く。又、
逆に多孔質化が進みすぎると相体の機械的強度が低下し
、りａマドグラフィー用狽体として実用上障害が生じる
。

担体の細孔容積としては１色素を導入する前の架橋共重
合体の段階で０．２〜コ、Ｏｄ／？−乾燥共重合体の範
囲内にあるべきであり、好しくは。

０．１１−ｗ　／、！肩ｅ／ｆ−乾燥共重合体である。

重合反応は公知の任意の方法で行ない得るが、通常は適
当な分散安宗剤を存在させた水性媒体中で懸濁重合方式
で行ない、粒状の共重合体を得るのが好ましい。分散安
定剤としては１通常、ゼラチン、ポリアクリル酸ソーダ
、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール
等が用いられる。また、水性媒体中には塩かを溶解させ
て重合反応原料の水性媒体中への溶解を防止するのが好
ましい。塩としては、塩化ナトリウム、塩化力ルシウム
、硫酸ナトリウム、炭酸す）　ＩＪウム等が用いられる
。重合反応は一般に適当な重合開始剤を用いて行なわれ
る。重合開始剤と（７ては、一般に過酸化ベンゾイル、
１−ブチルハイドロパーオキサイド、アゾビスインブチ
ａニド■ノル、ジメチルアゾビス（メテルバＬ／−））
、７／ヒス（α、ａ−ジメチルバレロニトリル）、２．
２′−７ゾビスー２．ＩＩ−ジメチルバレロニトリル等
の有機過酸化物や有もヌアゾビス化合物等が用いられる
。これらの重合開始剤は。

通常、反応原料のｏｏｔ−ｔ（重１）％となるような奇
で使用される。

重合反応は通常、攪拌下にｊＯ−９０℃で６〜２０時間
で完了する。多孔質の架橋共重合体を得るためには、こ
の重合反応に際し１重合性のモノマーの他に多孔質化剤
を共存させて実施し１反応後、該多孔質化剤を除去すれ
ばよい。

多孔質の架橋共重合体の輿法は公知であり、通常は、（
１）反応原料中に、これに均一に混和するが、生成する
架橋共重合体に対しては親和性の少ない溶媒を存在させ
て重合し、その後該溶媒を除去する方法、（２）反応原
料中に線状重合体を存在させて重合し、生成した架橋共
重合体から該線状重合体を抽出除去する方法、（３）反
応原料中に線状重合体と生成する架橋共重合体に親和性
を有する溶媒を存在させて重合し、生成した架橋共重合
体から該線状重合体を抽出除去する方法、（４）反応原
料中に（１）でのべた溶媒及び反応原料に均一に混合し
、かつ生成する架橋共重合体に対しても親和性を有する
溶媒を共存させて重合し、その後読溶媒を除去するいず
れかが用いられる。

先に述べた様に、タンパク質等の巨大分子を対象とする
本発明に係るクロマトグラフィー用担体としては、青色
色素を導入する前の架橋共重合体の段階で乾燥状態にお
いて測定したその細孔容積が０２〜２０　ｒｙｅ／ｆの
範囲内にあるべきで、好ましくはＯ１≠〜ｔ　、ｓ　ｒ
ｐｒｌ／ｌの範囲内にあるべきである。

前述した多孔質化剤として、本発明に係る重合反応に好
適に使用できるものは、ベンゼン。

トルエン、エチルベンゼンＪａルベンゼン、ｎ−オクタ
ン、ジクロルエタン、ｎ−オクタツール、シクロヘキサ
ノール、酢酸ブチル、フタル酸ジプチル、メチルインブ
チルカルビノール等が挙げられ、通常、その使用量は全
重合性モノマーに対して５〜３００％（重′Ｍ）とされ
る。

架橋共重合体と色素との反応は以下の様に行なう。

（１）架橋共重合体中のエポキシ基をカロ水分解したの
ち色素と反応させる場合 か＼ エポキシ基の加水分解は、硫酸−／　＋）ン酸を含む水
中に該架橋共重合体を５濁させ３０〜１００℃で３−２
０時間保持すれば良い。このようにして得られたグリセ
リンモノエステル含有架橋共重合体を色素を溶解した水
溶液に懸濁させ、３０分〜６０分攪拌後、炭酸ソーダ水
酸化ナトリウム等を添カロして、系のｐＨをアルカリ性
にして、２０〜り０℃で０．５〜１２時間反応させれば
よい、この際１食塩、芒硝等の無機塩を添加しておくと
色素の導入量を増加させることができる。又、色素導入
量は、前述の反応条件を選択することによっても調節す
ることができる。

（１１）　　架橋共重合体に直接色素を反応させる場合
グリシジルエステル含有架橋共重合体を色素及び炭酸ソ
ーダ・水酸化す）　ＩＪワム等のアルカリをｍ解した水
溶液に懸濁させ２０〜り０℃でＯ，Ｓ〜ノコ時間反応さ
せればよい。この際食塩・芒硝等の無機塩を添加してお
くと色素の導入量を増加させることができる。又、色素
導入量は、前述の反応条件を選択することによっても調
節すること；つ；できる。色素を導入した後、残存する
グリシジルエステル部分のエポキシ基の開環反応？・ま
、該架橋共重合体を硫醸かリン酸を含む水中に懸濁させ
３０〜１００℃でｊ−２０時間保持すれば良い。

〔実施例〕

以下実施例により本発明を更に具体的に説明するが本発
明は、その要旨を超えない限り、以下の実施例に限定さ
れるものではない。

実施例−７ クリシジルメタクリレート２１０９．エチレングリコー
ルジメタクリレートタ０２．トルエン３００９及び２．
２′−アゾビス−λ、≠−ジメチルバレロニトリル３ｔ
の混合物を、脱塩水、２１００ｙｄにポリビニルアルコ
ール−２／Ｆと塩化ナトリウムに弘ｆを溶解した溶液Ｐ
こ加え、攪拌しながら７０′ｃ″′ｃ／時間懸濁重合さ
せた。反応物を冷却したのち生成した共重合体粒子を戸
別し、水洗した。次いでこの共重合体を、メタノール／
、ｊ　を中に入れ室温で３時間攪拌する操作を３回反復
した後、濾過し、１０℃で１６時間乾燥した。

２１１１の平均径／８０μの多孔質共重合体粒子（５津
製作所製オートボアタコ００型を用いて、水銀圧入法に
より求めた、乾燥粒子の細孔容積は、　　０．７５　ｍ
ｅ／ｌであった、）が祷られ（以下ポリマーＡと略す。

）収率はりＩｒ易であった。

ポリマーＡを７ぴダｔ、ｉｏ％硫酸水溶液７ｊ０−中に
入れ、攪拌しなからＳＯ℃で５時間保持した。冷却後反
応物ｆｔＰ別し、十分水洗しグリセリン七ノエステル含
有架橋共重合体粒子ｊ　ｊ　Ｏｒｄ　ｆ：得た。（以下
ポリマーＢと略す。）その後、ポリマーＢの伺溜水分を
遠心分離器を用いて除いた。そのうちの’Ｉｊ？’ｆ：
、９を色色素０１ｂａｃｒｏｎｏｂｌｕｅ　３　Ｇ　−
Ａ　（Ｃ！ｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ社’Ａ）０．♂Ｖ。

ＮａＣ１１０１を溶解した水溶液１００ｄ中に入れ。

２０℃で１時間攪拌した。その後無水Ｎａ２ＣＯ３１０
，ｔｆを加え、ざ０℃でｒ時間反応させた。

反応物を戸別後、水で十分洗浄し、Ａ／−！ｌの製品を
得た。

水洗時回収した未反応の色素含有溶液の６１３ｎｍ　に
おける吸光度を測定し、未反応色素量を求め製品の色素
担持量を算出したところ　５．７（２−色素／ｌ−担体
）であった。

実施例−２ ■ 青色色素０ｊ−ｂａｃｒｏｎ　　’ｂｌｕｅ　３　Ｇ　
−Ａをｏ３　！ｌＦ用いた以外は実施例−ｌと全く同一
の操作を行った。

ｔｔｒｄの製品が得られ１色素担持量は、２Ｊ（？−色
素／を一担体）であった。

実施例−３ 青色色素Ｃ！１ｂａｃｒｏｎｏｂｌｊｔｅ　３　Ｇ　−
Ａ　ｆ　Ｏ，２を用いた以外は実施例−７と全く同一の
操作を行った。

Ｊ／ｄの製品が得られ、色素担持量は、ｉ、３（２−色
素／を一担体）であった。

実施例−≠ 青色色素Ｃ１ｂａｃｒｏｎ＠ｂｌｕｅ　３　Ｇ　−Ａを
２．０２用いた以外は実施例−７と全く同一の操作を行
った。

ＪＪｄの製品が得られ、色素担持量は、／！（ｆ−色素
／を一担体）であった。

実施例−ｊ ■ 青色色素０１ｂａｃｒｏｎ　ｂｌ＋ｉｅ　ｊ　Ｇ　−Ａ
θ、！ｖ１無水Ｎａ２００３２．／　ｆを溶解した水溶
液１００ｙｄ中に、実施例−ｌで得られたポリマーＡを
３を入れ、ｔｏ℃て３時間反応させた。反応物を戸別し
、十分水洗した。次に反応物をｉｏｓ硫酸水溶液ｊ　Ｏ
ｍｌ中に入れよ０℃で５時間反応させた。反応物を戸別
水洗し製品／ｊ−を得だ。

実施例−７と同様の方法で色素担持量を求めたところコ
、弘（を−色素／を一担体）であった。

応用例−ノ 牛血清アルブミン（シグマ社製試薬）を所定量０．／　
Ｍ　）リス・塩酸緩衝溶液（ｐＨ７，ｊＯ）に溶解させ
、各種濃度（０，０６Ｗ／’Ｊ％〜０．７０□％）のア
ルダばン溶Ｈ，を調整した。

実施例−／、２．Ｊ、Ｆで得られた色素担持担体各ｓ、
ｏｙｔｔを０．／　Ｍ　）　ＩＪス・塩酸緩衝溶液（ｐ
ｌＩ　７．ｓ　Ｏ）で十分平衡化した後、遠心分離し１
伺Ｎ溶液を除去し、前述の各種濃度のアルブミン症液１
００ｄ中に添加し、ＩＱ℃で７２時間振とり攪拌した。

振とり後、上澄液のコｒＯｎｍにおけるＵＶ吸光度を測
定することにより、アルブミンの吸Ｍ量を求めた。

結果を吸着等温蔵の形で１図−１にまとめて示した。

次いで該吸Ｍ相体を全（オ戸別し、０．／Ｍト＋Ｊス・
塩酸緩衝溶液（ＰＨ７，ｓＯ）　ｔθ０−！ｔでよく洗
浄した。次に遠心分離し、伺着溶液を除いた後、／、ｊ
Ｍ　Ｎａ１ｌ含有０．１Ｍトリス・塩酸緩衝溶液（ｐＨ
７，ｊＯ）／　００ｒｔｔｌ中に添加し、７０℃でｌコ
時間振とう撹拌した。

上澄液の、ｚ　ｒ　ｏ　ｎｍにおけるＵＶ吸光度の測定
よりアルダはンの溶隨量を求めた。

その結果いずれの場合も溶離率は７５％以上であった。

ここて溶離率（％）＝（溶離ｆ／吸眉伍）×１００であ
る。

応用例−２ 実施例−７で得られた色素相持相体ＩＡ、０ｒｘｔを内
径Ａ　ｗｘ　ｆ３のガラスカラムに詰め、２℃ｍＭ）リ
ス・塩酸緩衝溶液（ｐＨ７，ｊｏ　）で十分平衡化した
。

次イテヒト血清アルブミン（シグマ社製試薬）ｒ、ｚ　
ｑ％α−ラクトアルブミン（シグマ社製試薬）　ｔｔ、
Ｓ■を含有する２　−ｔ　ｙｎＭ　）　ＩＪス・塩酸緩
衝溶液（ｐＨ７，ｔｏ　）　ｊ、ｏ　ｄを上記カラムｊ
Ｃチャージしその後、２ｊｒｒ＋Ｍ）ｌ）ヌ・塩酸緩衝
溶液（ｐＨ７，ｊＯ）２ｒｄで洗浄した。次’Ａ　テ２
　Ｊ’　ｍｌの０，２　ｊ　Ｍ　ＮａＣ！１含有、？　
ｒ　ｍＭ　）リス・塩ヅ□緩衝溶液（ｐＨ７，６０）で
、更に、２ψＭの／　、ｊ　１／Ｉ　ＮａＣ１含有２ｊ
ｍＭ）リス・塩酸緩衝溶液（ｐＨ７，ｊＯ）で溶離した
。操作はすべて室温で行ない、流速は８ｖ１０て通液し
た。流出液は、フラクションコレクターで受け、各フラ
クションを液体クロマトグラフィーを用いて分析し各成
分タン・くりの濃度を算出した。結果を図−コに示した
。

尚、タンパクの回収率は、α−ラクトアルブミンがりを
係でヒト血清アルブミンがり！ｒ％てあった。

図−２より、イオン交換体では等ゴ点が接近しているた
めに分離しにぐい２つのタンパクも本発明指体を用いる
ときれいに分離できることがわかる。

応用ｆ！Ｊ−Ｊ Ｏ１λＷ／Ｖ％の濃度になる様に牛血清アルブミンをｏ
、ｔ　Ｍ　）リス・塩酸緩衝溶液（ｐＨ７，ｒＯ）に溶
解させえ。

実施例〜！で得られた色素担持担体！、θａｔを０．１
Ｍトリス・塩酸緩衝溶液（ｐＨ７，ｓｏ）で十分平衡化
した後、遠心分離し、刺着浴液を除去し、前述のアルブ
ミン溶液ｔｏｏｙ中に添加し１０℃で７２時間振とう攪
拌した。振とり後、上澄液の２１０　ｎｍにおけるＵＶ
吸光度を測定することによりアルブミンの吸着量を求め
たところ、ｚ、ｓ　（ｙ−アルフ波ン／を一担体）であ
った。

次いで該吸着担体を全潰戸別し、０．１　Ｍ　）リス・
塩酸緩衝溶液（ｐＨ７，ｊＯ）ｌＯＯＩＩｊでよく洗浄
した。次に遠心分離し、Ｕｉｆｌｊ液を除いた後。

ノ、ｊ　Ｍ　ＮａＣ１含有トリス・塩酸緩衝溶液（ｐＨ
７ｊ０）１０θｄ中に添加し、ノθ℃でノコ時間振とり
攪拌した。上澄前の、２　ｒ　ＯｎｒｈにおけるＵＶ吸
光度の測定より、アルブミンの溶離率を求めたところり
１％であった。

応用例−μ 内径１ｏｒａａｄのガラスカラム（ジャケット＋１）に
粒径を７４ｔ−２０１μに整粒した実棒Ｆｌ−／で得ら
れた担体（平均径／４ｔ１μ）、ゲθ−を充填した。指
体の層高は、ｊｕｔｙｌＩであつ九。カラムを循環水で
２ｊ℃に保ち、カラム上部から。

０．０１Ｍ％ｐＨ７，ｏのリン醸緩衝溶液を一定流速で
流した。充填層が安定し、カラムの上部にとりつけた圧
力計の指針が一定になったところで圧力計の自盛りを読
みとり、その値から担体を充填していない、いわゆる空
力ラムの状態で前述した操作と全く同様の操作をし六場
合の圧力計の読みとり値をさし引いて圧力損失（Δｐ、
単位Ｈ７ｃｄ７ｓ　ｏｃｍ−ｂｅａ　）　’に求めた。

Ｄｉｔ速（ＬＶ：ｉ流速、単位”／ｆ（ｒ）ｔ一種ｋ　
Ｋ　Ｆ（て圧力損失（Δｐ）を測定したところ図−３に
示した結果となった。測定した流速範囲内では（Ｌｖと
して７ｍ／Ｈｒ以下）１本発明担体を用いた場合のΔｐ
とＴ、Ｖの、間には直線関係が成立し、ＬＶ　＝　７　
ｍ／Ｈｒという高流速で通液しても、物体粒子の変形、
破砕は全く昭められなかつ九。

比較例−ノ 実施例−ノで得られた４５体を用いる代わりに、架橋ア
ガロースに青色色素Ｃ１ｂａｃｒｏｎ′８１Ｂ１ｕｅ　
３　Ｇ−Ａを導入した相体を用いる以外応用例−グと全
く同一の操作を行い、Δｐと１．Ｖの関係を求めた。そ
の結果を図−３に示した。

架橋アカロース基体の本担体を用いた場合は。

流速がＬｖ＝１ｍ／Ｒｒをこえたあたりから、Δｐが急
激に立ちはじめ、ＬＶ＝２．　ｓ　ｍ／ａｒ以上では、
通液が困難となった。

〔発明の効果〕

本発明に係るアフィニティークロマトグラフィー用担体
は、その内部にグリセリンモノエステル構造を含んでい
るので親水性に富んでいる。

又基体それ自身は、多孔質で架橋剤を含めて全体が脂肪
族成分で構虜されていて芳香族成分を含まないという特
徴がある。従って、親水性に富んだ多孔質基体にアフィ
ニティーリガンドである青色色素を導入した担仕となっ
ているので。

穏やかな溶離条件で、タンパク質の回収率が高いという
効果が発現される。更に本発明に係る担体は、機械的強
度が高く、カラムに充填したときの圧力損失が少ない。

従って、本発明に係る担体は、カラム法で用いる場合、
１高を高くしても、高流速処理が可能となり、工業的に
有用なアフィニティークロマトグラフィー用担体である
。

ｌ　画面の簡単な説明 第１図は、実施例−！−≠で得られた色素担持担体の牛
血清アルブミンに対する吸着量と平衡濃度との関係を示
す図である。

第２図は、実施例−Ｉ″″Ｃ得られた色素担持担体を用
いて、α−ラクトアルブミンと牛血清アルプばノを分離
した場合の溶離挙動を示す図である。

第３図は、実施例−７で得られた色素」持相体、及び比
較例として架橋アガロース基体の担体を用いて、！Ｅカ
損失と流速のｒ、１際を測定した結果を示す図である。

出　願　人　　三菱化成工業株式会社 代　理　人　　弁理士　長径用　　− （ほか７名）

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）ポリオールポリアクリレート及びポリオールポリ
   メタクリレートから選ばれた架橋剤成分とグリシジルア
   クリレート及びグリシジルメタクリレートから選ばれた
   単量体成分とを得られた共重合体の細孔容積が乾燥状態
   で０．２〜２．０ｍｌ／ｇの範囲に入る条件下で共重合
   させたのち、 （ｉ）得られた多孔性架橋共重合体中のエポキシ基を加
   水分解したのち下記一般式（ I ）で表わされる色素と
   反応させるか、 又は （ｉｉ）得られた多孔性架橋共重合体を下記一般式（
   I ）で表わされる色素と反応させたのち、該多孔性架橋
   共重合体中の残存エポキシ基 を加水分解する ことを特徴とするアフイニテイークロマトグラフイー用
   担体の製造方法 ▲数式、化学式、表等があります▼・・・・・・（ I
   ） （式中Ｒ＾１、Ｒ＾２はどちらか一方が水素原子で他方
   が−ＳＯ＿３＾■基を示す）