JPS6284102A - キサントモナスによつて製造される多糖類ポリマ− - Google Patents
キサントモナスによつて製造される多糖類ポリマ−Info
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- JPS6284102A JPS6284102A JP61178978A JP17897886A JPS6284102A JP S6284102 A JPS6284102 A JP S6284102A JP 61178978 A JP61178978 A JP 61178978A JP 17897886 A JP17897886 A JP 17897886A JP S6284102 A JPS6284102 A JP S6284102A
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- C09K8/08—Clay-free compositions containing natural organic compounds, e.g. polysaccharides, or derivatives thereof
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
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- Y10S507/00—Earth boring, well treating, and oil field chemistry
- Y10S507/935—Enhanced oil recovery
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
３ 劾ト爵、Ｊ哨ｒｗｉＬ哨
発Ｘ！！２ｆｉＬ量
キサンテン ガムは、キサントモナス
（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）属、たとえばカンペストリ
ス（ｃａｎ ｅｓｔｒｉｓ）種、アルビリニアンズ（ａ
ｌｂＮｉｎｅａｎｓ）、種、フラガリアふむ互１■１０
一種、ベシカトリア（ｖｅｓｉｃａｔｏｒｉａ）種、及
び同様のものの細菌によって生成される。キサンテン
ガムは、その珍しい物理的性質：すなわち非常に高い比
粘度及び偽塑性のために広く使用される生成物である。
ス（ｃａｎ ｅｓｔｒｉｓ）種、アルビリニアンズ（ａ
ｌｂＮｉｎｅａｎｓ）、種、フラガリアふむ互１■１０
一種、ベシカトリア（ｖｅｓｉｃａｔｏｒｉａ）種、及
び同様のものの細菌によって生成される。キサンテン
ガムは、その珍しい物理的性質：すなわち非常に高い比
粘度及び偽塑性のために広く使用される生成物である。
それは、増粘剤として食物中に及び移動度調整剤及びプ
ロフィール改質剤として二次オイル回収に並びに石油の
掘削用液体に通常使用される。
ロフィール改質剤として二次オイル回収に並びに石油の
掘削用液体に通常使用される。
化学的に、キサンテン ガムは陰イオン性へテロポリ−
サツカリドである。そのポリマーの反復単位は、５個の
糖成分：すなわち２個のグルコース成分、１個のグルコ
ウロン酸成分及び２個のマンノース成分から成るペンタ
マーである。それらは、グルコース成分がポリマー鎖の
主鎖を形成し、そしてマンノース−グルコウロン酸−マ
ンノースの側鎖が一般的に、１つ置きにグルコース成分
から延長するように配列されている。しばしば、この基
本構造体は特別にアセチル化及び／又はピルビン化され
る（（Ｊａｎｓｏｎ＋Ｐ、Ｅ、Ｊｅｎｎｅｌ、、及びＬ
ｉｎｄｂｅｒｇ＋Ｂ、＋ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ
Ｒｅ５ｅ−ａｒｃｈ＋ ４５＋ ２７５〜２８２ （１
９７５） ； Ｍｅ ｌ ｔｏｎ＋ Ｌ、 Ｄ、＊ Ｍ
ｉｎｏｌ ｔ＋ Ｌ、＋ Ｒｅｅｓ ＊ Ｄ、 Ａ 、
＋及び５ａｎｄｅｒｓｏｎ、Ｇ、Ｒ，、Ｃａｒｂｏｈ
ｙｏｌｒａｔｅ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ＋４６゜２４５〜２
５７（１９７６）））。この明細書に参照されているす
べての出版物を、特に引用によりこの明細書に組み入れ
る。その構造を下に示す： 以下４、白 天然に存在するキサンテン ガムの広い利用性にもかか
わらず、その物理的性質が制限となるいくらかの状況が
存在する。特に、二次オイル回収において、通常、オイ
ル産生リザーバの温度及びリザーバブライン中の塩濃度
がキサンテン溶液のために最適であるよりも高い。これ
らの状態が存在する場合、キサンテンは沈殿し、凝集し
そして／又は粘性を失う。従って、高温度及び高塩濃度
状態で十分に作用する新規の増粘性生成物が必要である
。
サツカリドである。そのポリマーの反復単位は、５個の
糖成分：すなわち２個のグルコース成分、１個のグルコ
ウロン酸成分及び２個のマンノース成分から成るペンタ
マーである。それらは、グルコース成分がポリマー鎖の
主鎖を形成し、そしてマンノース−グルコウロン酸−マ
ンノースの側鎖が一般的に、１つ置きにグルコース成分
から延長するように配列されている。しばしば、この基
本構造体は特別にアセチル化及び／又はピルビン化され
る（（Ｊａｎｓｏｎ＋Ｐ、Ｅ、Ｊｅｎｎｅｌ、、及びＬ
ｉｎｄｂｅｒｇ＋Ｂ、＋ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ
Ｒｅ５ｅ−ａｒｃｈ＋ ４５＋ ２７５〜２８２ （１
９７５） ； Ｍｅ ｌ ｔｏｎ＋ Ｌ、 Ｄ、＊ Ｍ
ｉｎｏｌ ｔ＋ Ｌ、＋ Ｒｅｅｓ ＊ Ｄ、 Ａ 、
＋及び５ａｎｄｅｒｓｏｎ、Ｇ、Ｒ，、Ｃａｒｂｏｈ
ｙｏｌｒａｔｅ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ＋４６゜２４５〜２
５７（１９７６）））。この明細書に参照されているす
べての出版物を、特に引用によりこの明細書に組み入れ
る。その構造を下に示す： 以下４、白 天然に存在するキサンテン ガムの広い利用性にもかか
わらず、その物理的性質が制限となるいくらかの状況が
存在する。特に、二次オイル回収において、通常、オイ
ル産生リザーバの温度及びリザーバブライン中の塩濃度
がキサンテン溶液のために最適であるよりも高い。これ
らの状態が存在する場合、キサンテンは沈殿し、凝集し
そして／又は粘性を失う。従って、高温度及び高塩濃度
状態で十分に作用する新規の増粘性生成物が必要である
。
発１１と【Ｗ
天然に存在するキサンテン ガムよりも良好な水の増粘
剤である多ｌａｉ類ポリマーを供給することが本発明の
目的である。
剤である多ｌａｉ類ポリマーを供給することが本発明の
目的である。
高温で及び／又は塩の存在において、天然に存在するキ
サンテン ガム以上に改良された流動学的性質を有する
多ＩＩ類ポリマーを供給することが、さらに本発明の目
的である。
サンテン ガム以上に改良された流動学的性質を有する
多ＩＩ類ポリマーを供給することが、さらに本発明の目
的である。
多ＩＩ類ポリマーを生成するための能力を有する微生物
を提供することが、さらに本発明の目的である。
を提供することが、さらに本発明の目的である。
多糖類ポリマーを生成するための能力を有する微生物を
好気性的に発酵することによって多ｗＩｉ類ポリマーを
製造するための方法を提供することが、さらに本発明の
目的である。
好気性的に発酵することによって多ｗＩｉ類ポリマーを
製造するための方法を提供することが、さらに本発明の
目的である。
本発明によれば、Ｄ−グルコース：Ｄ−マンノースの比
が約２：ｌである、グルコウロン酸成分を本質的に含ま
ない多ｆＩＮ類ポリマー（ここで、Ｄ−グルコース成分
はポリマー主鎖を形成するためにβ−〔１，４〕配置で
結合され、そしてＤ−マンノース成分は、一般的に１つ
置きにグルコース成分にα−〔１，３〕配置でそれぞれ
結合されている）を含有する組成物が提供される。本発
明はまた、多１１！［ポリマーを製造するための方法、
多糖類ポリマーを製造する微生物及び多糖類ポリマーを
用いての方法を企図する。
が約２：ｌである、グルコウロン酸成分を本質的に含ま
ない多ｆＩＮ類ポリマー（ここで、Ｄ−グルコース成分
はポリマー主鎖を形成するためにβ−〔１，４〕配置で
結合され、そしてＤ−マンノース成分は、一般的に１つ
置きにグルコース成分にα−〔１，３〕配置でそれぞれ
結合されている）を含有する組成物が提供される。本発
明はまた、多１１！［ポリマーを製造するための方法、
多糖類ポリマーを製造する微生物及び多糖類ポリマーを
用いての方法を企図する。
本発明の多ＩＩ！ｇポリマーは、キサンテン ガムの生
合成における段階の１つをブロックすることによって製
造され得る。従って、キサンテン ガムとしてβ−（１
，４）−Ｄ−グルコースの主鎖から延長する３個の糖の
側鎖を有するよりかむしろ、本発明の多糖類ポリマーは
、主鎖のグルコース成分に１つ置きに一般的に結合−さ
れる単糖成分を有する。本発明の多糖類ポリマーを、こ
の明細書で“ポリトリマー”と呼ぶ。なぜならば、それ
は、反復のトリマ一単位、すなわち、グルコース−グル
コース−マンノースから成るからである。
合成における段階の１つをブロックすることによって製
造され得る。従って、キサンテン ガムとしてβ−（１
，４）−Ｄ−グルコースの主鎖から延長する３個の糖の
側鎖を有するよりかむしろ、本発明の多糖類ポリマーは
、主鎖のグルコース成分に１つ置きに一般的に結合−さ
れる単糖成分を有する。本発明の多糖類ポリマーを、こ
の明細書で“ポリトリマー”と呼ぶ。なぜならば、それ
は、反復のトリマ一単位、すなわち、グルコース−グル
コース−マンノースから成るからである。
その構造〔ここでｎはポリマーにおける反復単位である
〕を下に示す。
〕を下に示す。
Ｏ
上に示されるよつに、ポリトリマーは、β−〔１゜４〕
配置で結合するＤ−グルコースの１つ置きの成分にα−
（１、３３配置で一般的に結合されるＤ−マンノースか
ら成る。常にではないが、キサンテン ガムにおけるよ
うに、酢酸成分が、５ｕｔｈｅｒｌａｎｃｌ、１．Ｗ、
＋Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ＋１゜
１０７〜１１５（１９８１）に記載されているようにマ
ンノースの６−〇位置でエステル化され得る。多糖類ポ
リマーの構造は、示されたようであると思われるが、合
成の一定の条件下で、マンノース成分が１つ置きのグル
コース残基で必ずしも結合され得ない。
配置で結合するＤ−グルコースの１つ置きの成分にα−
（１、３３配置で一般的に結合されるＤ−マンノースか
ら成る。常にではないが、キサンテン ガムにおけるよ
うに、酢酸成分が、５ｕｔｈｅｒｌａｎｃｌ、１．Ｗ、
＋Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ＋１゜
１０７〜１１５（１９８１）に記載されているようにマ
ンノースの６−〇位置でエステル化され得る。多糖類ポ
リマーの構造は、示されたようであると思われるが、合
成の一定の条件下で、マンノース成分が１つ置きのグル
コース残基で必ずしも結合され得ない。
日の貝 、なｉ日
本発明の多ＩＩＭ類ポリマーを、無細胞酵素系により製
造することができ又は適切な突然変異誘発の細胞を増殖
することによって製造することができる。多糖類ポリマ
ーを製造するための他の手段もまた、下に記載する。
造することができ又は適切な突然変異誘発の細胞を増殖
することによって製造することができる。多糖類ポリマ
ーを製造するための他の手段もまた、下に記載する。
キサンテン ガムを製造するための無細胞系の使用に関
する基本方法は、Ｉｅｌｐｉ、Ｌ、＋Ｃｏｕｓｏ＋Ｒ１
０，＋及びＤａｎｋｅｒｔ、Ｍ、Ａ、 （ＦＢＢＳ Ｌ
ｅｔｔｅｒｓ １３０＋２５３〜２５６＋（１９８１）
）に記載され、そして、本発明の多糖類ポリマーを製
造するためにもまた使用され得る。たとえば、野生型キ
サントモナスカンペストリス細胞を、冷凍−融解方法に
よって溶解することができ、そしてポリトリマー合成の
ための基質、すなわちＬＩＤＰ−グルコース及びＧ［ｌ
Ｐ−マンノースをアセチル−ＣｏＡと共に又はアセチル
−ＣｏＡなしに該溶解物に添加することができる。音波
処理、界面活性剤処理、酵素処理及びそれらの組み合せ
を含む、別の手段の細胞溶解を用いることができるが、
しかしこれだけには限定されない。溶解物を粗性の形で
使用することができ、又は酵素の精製法を用いることが
できる。キサンテン ガムの生合成経路の酵素は、通常
の経路におけるようにグルコース成分及びマンノース成
分を共有的に結合する。その酵素は新生類に付加するｕ
ｏｐ−グルコウロン酸を持たないので、その経路は反応
■（第１図の経路を参照のこと）でブロックされ、そし
て中間体のイソプレノイド脂質−ピロホスフェート−グ
ルコース−グルコース−マンノースが蓄積する。意外な
ことには、脂質結合のペンタマー（グルコース−グルコ
ース−マンノース−グルコウロン酸−マンノース）上に
通常作用するキサンテンポリマラーゼが脂質結合のトリ
マー（グルコース−グルコース−マンノース）を重合す
ることができる。従って、本発明のポリトリマーはイン
ビトロで合成され得る。
する基本方法は、Ｉｅｌｐｉ、Ｌ、＋Ｃｏｕｓｏ＋Ｒ１
０，＋及びＤａｎｋｅｒｔ、Ｍ、Ａ、 （ＦＢＢＳ Ｌ
ｅｔｔｅｒｓ １３０＋２５３〜２５６＋（１９８１）
）に記載され、そして、本発明の多糖類ポリマーを製
造するためにもまた使用され得る。たとえば、野生型キ
サントモナスカンペストリス細胞を、冷凍−融解方法に
よって溶解することができ、そしてポリトリマー合成の
ための基質、すなわちＬＩＤＰ−グルコース及びＧ［ｌ
Ｐ−マンノースをアセチル−ＣｏＡと共に又はアセチル
−ＣｏＡなしに該溶解物に添加することができる。音波
処理、界面活性剤処理、酵素処理及びそれらの組み合せ
を含む、別の手段の細胞溶解を用いることができるが、
しかしこれだけには限定されない。溶解物を粗性の形で
使用することができ、又は酵素の精製法を用いることが
できる。キサンテン ガムの生合成経路の酵素は、通常
の経路におけるようにグルコース成分及びマンノース成
分を共有的に結合する。その酵素は新生類に付加するｕ
ｏｐ−グルコウロン酸を持たないので、その経路は反応
■（第１図の経路を参照のこと）でブロックされ、そし
て中間体のイソプレノイド脂質−ピロホスフェート−グ
ルコース−グルコース−マンノースが蓄積する。意外な
ことには、脂質結合のペンタマー（グルコース−グルコ
ース−マンノース−グルコウロン酸−マンノース）上に
通常作用するキサンテンポリマラーゼが脂質結合のトリ
マー（グルコース−グルコース−マンノース）を重合す
ることができる。従って、本発明のポリトリマーはイン
ビトロで合成され得る。
上記のポリトリマーの無細胞合成は、キサントモナス
カンペストリス細胞がポリトリマーを合成するのに必要
なすべての酵素を有することを示す。しかしながら、全
細胞°を使用してインビボでポリトリマーを合成するた
めには、反応■（第１図を参照のこと）でキサンテン
ガム合成をブロッキングする手段が必要である。突然変
異誘発が反応■をブロックするために使用され得る。
カンペストリス細胞がポリトリマーを合成するのに必要
なすべての酵素を有することを示す。しかしながら、全
細胞°を使用してインビボでポリトリマーを合成するた
めには、反応■（第１図を参照のこと）でキサンテン
ガム合成をブロッキングする手段が必要である。突然変
異誘発が反応■をブロックするために使用され得る。
トランスボゾン（ＴｎｌＯ及びＴｎ９０３を含むが、そ
れだけに限定されない）を使用して、キサントモナスを
突然変異誘発することができる。これらのトランスポゾ
ンは、それぞれテトラサイクリン及びカナマイシンに対
する耐性を与える。トランスボゾンは遺伝子中にそれら
自身を挿入する能力を有する。すなわち、それらが挿入
される場合、それらはコード配列を分断することによっ
て突然変異を引き起こす（Ｋｌｅｃｋｎｅｒ、Ｎ、、Ａ
ｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓｏｆ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、
１５．３４１（１９８１）） ＋１そのトランスポゾン
は、いわゆる自殺ベクター、たとえばｐＨ１Ｋ２０１３
に基づいてキサントモナス中に導入され得る。このベク
ターは、非腸内細菌、たとえばキサントモナス中にそれ
自体を移行する能力を有するが、しかしその宿主中にお
いてそれ自体（複製体）を保持することはできない（Ｄ
ｉｔｔａ、Ｇ、、Ｃｏｒｂｉｎ、Ｄ、。
れだけに限定されない）を使用して、キサントモナスを
突然変異誘発することができる。これらのトランスポゾ
ンは、それぞれテトラサイクリン及びカナマイシンに対
する耐性を与える。トランスボゾンは遺伝子中にそれら
自身を挿入する能力を有する。すなわち、それらが挿入
される場合、それらはコード配列を分断することによっ
て突然変異を引き起こす（Ｋｌｅｃｋｎｅｒ、Ｎ、、Ａ
ｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓｏｆ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、
１５．３４１（１９８１）） ＋１そのトランスポゾン
は、いわゆる自殺ベクター、たとえばｐＨ１Ｋ２０１３
に基づいてキサントモナス中に導入され得る。このベク
ターは、非腸内細菌、たとえばキサントモナス中にそれ
自体を移行する能力を有するが、しかしその宿主中にお
いてそれ自体（複製体）を保持することはできない（Ｄ
ｉｔｔａ、Ｇ、、Ｃｏｒｂｉｎ、Ｄ、。
Ｈｅ１ｉｎｓｋｉ、口、Ｒ，，Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ１．Ａ
ｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ、 ７７＋７３４７〜７３５
１ （１９８０） ）。従って、その自殺ベクターが集
団のキサントモナス細胞中に専大され、そして続いて、
その集団がテトラサイクリン又はカナマイシンのいづれ
かにより攻撃される場合、残存する個体は、トランスボ
ゾンの１つがキサントモナスのゲノム中にそれ自体を挿
入した個体である。そのような攻撃の残存体（キサンテ
ン ガムを製造する能力を失った）についてスクリーン
することができる。そのような突然変異体は、野生型の
キサントモナスよりもムコイドを出現しない。
ｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ、 ７７＋７３４７〜７３５
１ （１９８０） ）。従って、その自殺ベクターが集
団のキサントモナス細胞中に専大され、そして続いて、
その集団がテトラサイクリン又はカナマイシンのいづれ
かにより攻撃される場合、残存する個体は、トランスボ
ゾンの１つがキサントモナスのゲノム中にそれ自体を挿
入した個体である。そのような攻撃の残存体（キサンテ
ン ガムを製造する能力を失った）についてスクリーン
することができる。そのような突然変異体は、野生型の
キサントモナスよりもムコイドを出現しない。
本発明の他の態様においては、突然変異誘発の他の方法
を使用して、キサンテン ガムを製造するための能力を
失った突然変異体を生成することができる。そのような
方法は、容易に当業者によって行なうことができ、そし
て照射、組換えＤＮＡ技法及び化学的な突然変異誘発物
質による処理を含む（それだけに限定されない） （
Ｍｔｌｌｅｒ＋Ｊ、Ｈ，＋Ｅｘ ｅｒｉｍｅｎｔｓユｎ
Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（１９７２）
；Ｄａｖｉｓ。
を使用して、キサンテン ガムを製造するための能力を
失った突然変異体を生成することができる。そのような
方法は、容易に当業者によって行なうことができ、そし
て照射、組換えＤＮＡ技法及び化学的な突然変異誘発物
質による処理を含む（それだけに限定されない） （
Ｍｔｌｌｅｒ＋Ｊ、Ｈ，＋Ｅｘ ｅｒｉｍｅｎｔｓユｎ
Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（１９７２）
；Ｄａｖｉｓ。
Ｒ，Ｗ、、Ｂｏｔｓｔｅｉｎ、Ｄ、＋及びＲｏｔｈ、Ｊ
、Ｒ，＋ＡｄｖａｎｃｅｄＢａｃｔｅｒｉａｌ Ｇｅ
ｎｅｔｉｃｓ（１９８０）；Ｍａｎｆａｔｉｓ、Ｔ、、
Ｆｒ１ｔｓｃｈ。
、Ｒ，＋ＡｄｖａｎｃｅｄＢａｃｔｅｒｉａｌ Ｇｅ
ｎｅｔｉｃｓ（１９８０）；Ｍａｎｆａｔｉｓ、Ｔ、、
Ｆｒ１ｔｓｃｈ。
Ｅ、Ｐ、、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、Ｊ、、 Ｍｏ１ｅｃｕｌ
ａｎ Ｃ１ｏｎ’ｎ １９Ｂ２）＋Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒ
ｉｎｇ Ｈａｒｒｏｒ） ｅ野生型よりもムコイドを出
現しない突然変異体をまず選択するたとができるが、所
望の変異体は、ある多糖類を製造するための能力を保持
する。キサンテン ガム欠失突然変異体のそれぞれの無
細胞抽出物を調製することができ、そして異なった組み
合せの基質を添加し、そしてその生成物を分析すること
によって試験する。たとえば、ＵＤＰ−グルコース、Ｇ
ＤＰ−マンノース及びｔｌＤＰ−グルコウロン酸を基質
として添加するなら、生成物は、ＵＤＰ−グルコース及
びＧＤＰ−マンノースが添加される場合に生成される生
成物と同一であろう。他方、適切な突然変異体は、おの
おのの突然変異体の培養ブイヨンを検定することによっ
て、ポリトリマーの存在について検出され得る。従って
、キサンテンガム欠失突然変異体は、キサンテン ガム
経路の反応■でブロックされているらしいことが見出さ
れ得る。この記載の突然変異体は、Ａｍｅｒｉｃａｎ
ＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ、Ｒｏ
ｃｋｖｉｌｌｅ、ＭａｒｙｌａｎｄにＡＴＣＣ番号５３
１９５として寄託された。そのような突然変異体を使用
して、インビボでポリトリマーを合成することができる
。
ａｎ Ｃ１ｏｎ’ｎ １９Ｂ２）＋Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒ
ｉｎｇ Ｈａｒｒｏｒ） ｅ野生型よりもムコイドを出
現しない突然変異体をまず選択するたとができるが、所
望の変異体は、ある多糖類を製造するための能力を保持
する。キサンテン ガム欠失突然変異体のそれぞれの無
細胞抽出物を調製することができ、そして異なった組み
合せの基質を添加し、そしてその生成物を分析すること
によって試験する。たとえば、ＵＤＰ−グルコース、Ｇ
ＤＰ−マンノース及びｔｌＤＰ−グルコウロン酸を基質
として添加するなら、生成物は、ＵＤＰ−グルコース及
びＧＤＰ−マンノースが添加される場合に生成される生
成物と同一であろう。他方、適切な突然変異体は、おの
おのの突然変異体の培養ブイヨンを検定することによっ
て、ポリトリマーの存在について検出され得る。従って
、キサンテンガム欠失突然変異体は、キサンテン ガム
経路の反応■でブロックされているらしいことが見出さ
れ得る。この記載の突然変異体は、Ａｍｅｒｉｃａｎ
ＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ、Ｒｏ
ｃｋｖｉｌｌｅ、ＭａｒｙｌａｎｄにＡＴＣＣ番号５３
１９５として寄託された。そのような突然変異体を使用
して、インビボでポリトリマーを合成することができる
。
グリコシルトランスフェラーゼＩＶ突然変異体を、本発
明のポリトリマーを製造するために例において使用した
が、発明の他の態様は、ＵＤＰ−グルコウロン酸代謝に
おける突然変異体の使用を企図する。
明のポリトリマーを製造するために例において使用した
が、発明の他の態様は、ＵＤＰ−グルコウロン酸代謝に
おける突然変異体の使用を企図する。
そのような突然変異体は単離され、そしてＡｍｅｒｉｃ
ａｎＴｙｐｅ Ｃｕ１ｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ
、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭａｒｙｌａｎｄにＡＴＣＣ番
号５３１９６として寄託された。
ａｎＴｙｐｅ Ｃｕ１ｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ
、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭａｒｙｌａｎｄにＡＴＣＣ番
号５３１９６として寄託された。
同じ生成物に到達するために、野生型グリコシルトラン
スフェラーゼＩＶ又はｔｌＤＰ−グルコウロン酸生合成
の酵素阻害物質を使用することは、本発明の範囲外では
ない。たとえば、キサンテン ガムの側鎖から末端のマ
ンノース成分及びグルコウロン酸成分を除去することに
よるような、天然のキサンテン ガムの酵素的及び化学
的分解を含む、ポリトリマーを生成するための他の変法
がなお企画される。
スフェラーゼＩＶ又はｔｌＤＰ−グルコウロン酸生合成
の酵素阻害物質を使用することは、本発明の範囲外では
ない。たとえば、キサンテン ガムの側鎖から末端のマ
ンノース成分及びグルコウロン酸成分を除去することに
よるような、天然のキサンテン ガムの酵素的及び化学
的分解を含む、ポリトリマーを生成するための他の変法
がなお企画される。
キサントモナスの菌株を突然変異誘発するための類似す
るスケムを用いて、他の新規の多Ｉｉ類ポリマーを生成
する突然変異体を得ることが可能である。たとえば、ア
セチラーゼ遺伝子の突然変異は、完全にアセチル化され
ていないキサンテンガムを生成する。アセチラーゼ突然
変異及びグリコシルトランスフェラーゼＩＶ突然変異を
同じ菌株（二重突然変異体）に行なう場合、アセチル化
されていないポリトリマーが生成される。他の突然変異
及びキサンテン経路の突然変異の組み合せは新規生成物
を得るために可能である。
るスケムを用いて、他の新規の多Ｉｉ類ポリマーを生成
する突然変異体を得ることが可能である。たとえば、ア
セチラーゼ遺伝子の突然変異は、完全にアセチル化され
ていないキサンテンガムを生成する。アセチラーゼ突然
変異及びグリコシルトランスフェラーゼＩＶ突然変異を
同じ菌株（二重突然変異体）に行なう場合、アセチル化
されていないポリトリマーが生成される。他の突然変異
及びキサンテン経路の突然変異の組み合せは新規生成物
を得るために可能である。
その突然変異体を、野生型キサントモナスの増殖のため
に当業界で知られている条件下で増殖することができる
。たとえば、それちは、適切な同化できる炭素源、たと
えばグルコース、スクロース、マルトース、澱粉、転化
糖、複合糖質たとえば、糖密又はコーンシロップ、種々
の有機酸類及び同様のもの上で増殖され得る。炭素源の
混合物もまた、使用され得る。供給される炭素源の濃度
は、しばしばｌＩｌ当り約１０〜６０ｇの間である。
に当業界で知られている条件下で増殖することができる
。たとえば、それちは、適切な同化できる炭素源、たと
えばグルコース、スクロース、マルトース、澱粉、転化
糖、複合糖質たとえば、糖密又はコーンシロップ、種々
の有機酸類及び同様のもの上で増殖され得る。炭素源の
混合物もまた、使用され得る。供給される炭素源の濃度
は、しばしばｌＩｌ当り約１０〜６０ｇの間である。
さらに、増殖のために必要なものは、−ａ的に１１当り
約０．１−１．０ ｇの濃度の同化できる有機又は無機
窒素源及び鉱物（その選択は当業者の間で容易である）
である、適切な窒素源の例は、アンモニウム塩、硝酸塩
、尿素、酵母抽出物、ペプトン又は他の加水分解される
タンパク質性物質もしくはその混合物である。適切な鉱
物の例は、リン、硫黄、カリウム、ナトリウム、鉄、マ
グネシウムを含み、そしてこれらはしばしば、キレート
剤たとえば、ＥＤＴＡ又はクエン酸と共に添加される。
約０．１−１．０ ｇの濃度の同化できる有機又は無機
窒素源及び鉱物（その選択は当業者の間で容易である）
である、適切な窒素源の例は、アンモニウム塩、硝酸塩
、尿素、酵母抽出物、ペプトン又は他の加水分解される
タンパク質性物質もしくはその混合物である。適切な鉱
物の例は、リン、硫黄、カリウム、ナトリウム、鉄、マ
グネシウムを含み、そしてこれらはしばしば、キレート
剤たとえば、ＥＤＴＡ又はクエン酸と共に添加される。
一般的にキサントモナスの増殖のための適温は、約１８
〜３５℃、好ましくは約２８〜３２℃の間である。キサ
ントモナス細胞は、適切なレベルの溶解酸素、たとえば
約１０％以上の飽和度を維持するために、空気又は酵素
を供給することによって好気的に増殖される。好ましく
は、そのレベルは約２０％以上に保持される。しばしば
ｐ旧よ約６．０〜８．０、好ましくは約６．５〜７．５
で維持される。
〜３５℃、好ましくは約２８〜３２℃の間である。キサ
ントモナス細胞は、適切なレベルの溶解酸素、たとえば
約１０％以上の飽和度を維持するために、空気又は酵素
を供給することによって好気的に増殖される。好ましく
は、そのレベルは約２０％以上に保持される。しばしば
ｐ旧よ約６．０〜８．０、好ましくは約６．５〜７．５
で維持される。
本発明の多糖類ポリマーは、適切な方法によって発酵ブ
イヨンから回収され得る。イソプロパツール、エタノー
ル又は他の適切なアルコールによる沈殿によって、ポリ
トリマーガムを容易に収得する。一般的に、アルコール
は、体積に基づいて、約５０〜７５％の濃度に、好まし
くは塩化カリウム、塩化ナトリウム又は他の塩の存在下
で添加される。他方、そのポリマーは、限外瀘過によっ
てブイヨンから回収され得る。
イヨンから回収され得る。イソプロパツール、エタノー
ル又は他の適切なアルコールによる沈殿によって、ポリ
トリマーガムを容易に収得する。一般的に、アルコール
は、体積に基づいて、約５０〜７５％の濃度に、好まし
くは塩化カリウム、塩化ナトリウム又は他の塩の存在下
で添加される。他方、そのポリマーは、限外瀘過によっ
てブイヨンから回収され得る。
グルコース：マンノースの比を測定するために化学的分
析をポリトリマーガムに対して実施する場合、２：１の
理論値からの変動が見出される。
析をポリトリマーガムに対して実施する場合、２：１の
理論値からの変動が見出される。
キサンテン ガムを分析する場合、同じタイプの変動が
見出される。グルコース：マン−ノースの比の測定範囲
は、一般的−に約１．４：１〜約２．４：１の間であろ
う。好ましくは、その比は１．７７１〜２．１：１の間
であろう。
見出される。グルコース：マン−ノースの比の測定範囲
は、一般的−に約１．４：１〜約２．４：１の間であろ
う。好ましくは、その比は１．７７１〜２．１：１の間
であろう。
多糖類ポリマーのマンノース残基のアセチル化のレベル
は一様でない。さらに、微生物、たとえばマンノース残
基をアセチル化することができないアセチラーゼ−欠失
突然変異体を用いて、多糖類ポリマーを製造することは
、本発明の範囲外でない。そのような場合、多糖類ポリ
マー中にアセチル化されていないマンノース残基が存在
する。
は一様でない。さらに、微生物、たとえばマンノース残
基をアセチル化することができないアセチラーゼ−欠失
突然変異体を用いて、多糖類ポリマーを製造することは
、本発明の範囲外でない。そのような場合、多糖類ポリ
マー中にアセチル化されていないマンノース残基が存在
する。
典型的には、発酵ブイヨン中のポリトリマーの濃度は、
約０．１％（Ｗ／Ｗ）である。発酵条件の通常の試験及
び典型的且つ組換えＤＭＡ株の改良技法（すべては当業
者に知られている）を用いて、収率を改良することがで
きる。
約０．１％（Ｗ／Ｗ）である。発酵条件の通常の試験及
び典型的且つ組換えＤＭＡ株の改良技法（すべては当業
者に知られている）を用いて、収率を改良することがで
きる。
重量を基準に、ポリトリマーは水性媒体の増粘剤として
キサンテンよりすぐれている。ポリトリマー溶液の粘度
は、高温及び／又は高い塩度の状態で保持される。その
ような溶液は、いづれか所望の濃度、好ましくは約０．
Ｏ１〜１〜約１の間で、水性媒体中に多［１’！ポリマ
ーを溶解することによって調製され得る０本発明の生成
物は、二次オイル回収に使用のために理想的である。当
業界においてキサンテン ガムにより使用され、そして
二次オイル回収において良く知られているような技法は
、多糖類ポリマーに関して適切である。たとえば、Ｌｉ
ｎｄｂｌｏｍ、Ｇ、Ｐ、＋など、、アメリカ３．１９８
．２６８を参照のこと。
キサンテンよりすぐれている。ポリトリマー溶液の粘度
は、高温及び／又は高い塩度の状態で保持される。その
ような溶液は、いづれか所望の濃度、好ましくは約０．
Ｏ１〜１〜約１の間で、水性媒体中に多［１’！ポリマ
ーを溶解することによって調製され得る０本発明の生成
物は、二次オイル回収に使用のために理想的である。当
業界においてキサンテン ガムにより使用され、そして
二次オイル回収において良く知られているような技法は
、多糖類ポリマーに関して適切である。たとえば、Ｌｉ
ｎｄｂｌｏｍ、Ｇ、Ｐ、＋など、、アメリカ３．１９８
．２６８を参照のこと。
高められたオイル回収に使囲のために移動度調整溶液を
、多糖類ポリマーから調製することができる。約１００
〜約３．０００ｐｐ輪の濃度の多糖類ポリマーがそのよ
うな移動度調整溶液のためにふされしい。他の既知の添
加剤もまた、オイル回収をさらに増すためにこれらの溶
液中に、又はこれらの溶液と一緒に使用することができ
る。たとえば、そのような添加剤、界面活性剤及びアル
カリ剤を含む。
、多糖類ポリマーから調製することができる。約１００
〜約３．０００ｐｐ輪の濃度の多糖類ポリマーがそのよ
うな移動度調整溶液のためにふされしい。他の既知の添
加剤もまた、オイル回収をさらに増すためにこれらの溶
液中に、又はこれらの溶液と一緒に使用することができ
る。たとえば、そのような添加剤、界面活性剤及びアル
カリ剤を含む。
キサンテン ガムのような多糖類ポリマーはまた、食物
、化粧品、医薬配合物、祇サイジング剤、でい水、印刷
インキ、及び同様のものにおける増粘剤としても使用さ
れ得る。さら−に、それは、パイプ中における流体の流
れの摩擦抵抗を減するために使用され得る。
、化粧品、医薬配合物、祇サイジング剤、でい水、印刷
インキ、及び同様のものにおける増粘剤としても使用さ
れ得る。さら−に、それは、パイプ中における流体の流
れの摩擦抵抗を減するために使用され得る。
次の例は、測的に記載されているか、この発明の範囲を
限定するものではない。
限定するものではない。
■−上
この例は、本発明の生成物をインビトロでどのようにし
て調製することができるかを示し、そしてそれをキサン
テン経路の不完全な生成物として同定する。
て調製することができるかを示し、そしてそれをキサン
テン経路の不完全な生成物として同定する。
農１１１りかλ１製
キサントモナスカンペストリス８１４５９５４−Ｌを、
アメリカ農務省のＮｏｒｔｈｅｒｎ Ｒｅｇｉｏｎａｌ
Ｒｅ５ｅａｒｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから得た
。Ｊａａｎｅ５ｓＡ、＋など。（アメリカ農務省、ＡＲ
５−ＮＣ−５１、１４ページ（１９７６） ）によって
記載されているように、細菌を、２％（Ｗ／ ｖ ）グ
ルコースにより補われているＹＭ（酵母−麦芽培地）に
おいて増殖した。培養物を３０℃で３０Ｏｒｐｍで後期
対数増殖期に増殖する。その細胞を３０℃でＹＭ＋２％
（ｗ／ｖ）グルコースプレート上で力価した。その細胞
を遠心分離によって収得し、そして７０＋Ｍ冷Ｔｒｉｓ
−ＨＣｊ！ （ｐＨ８，２）により洗浄した。洗浄され
た細胞を、１０ｍＭのＨＤＴＡを含む７０１のＴｒｉｓ
−ＨＣｌ（ｐＨ８，２）中に再懸濁し、そしてＧａｒｃ
ｉａ＋ Ｒ，Ｃ，＋など、 ＣＥｕｒｏｐｅａｎ Ｊ
ｏｕｒｎａｌｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４３．
９３〜１０５（１９７４） ）に類似する方法によって
３回凍結融解した。この処理の後、懸濁液の上昇した粘
度及び細胞の生存度の完全な喪失（１０６個の細胞のう
ち１個の生存細胞）によって明示されるように、この方
法は細胞を破裂せしめた。アリコートの凍結融解された
細胞溶解物を一８０℃で凍結した。タンパク質濃度を、
８１０ ＲＡＤ検定（ＢＩＯＲＡＤ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｉｅｓ＋リッチモンド、カリフォルニア）により測定
し、そして細胞溶解物ｌｌ１ｌ当り５〜７■の細胞タン
パク質が存在することが見出された。
アメリカ農務省のＮｏｒｔｈｅｒｎ Ｒｅｇｉｏｎａｌ
Ｒｅ５ｅａｒｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから得た
。Ｊａａｎｅ５ｓＡ、＋など。（アメリカ農務省、ＡＲ
５−ＮＣ−５１、１４ページ（１９７６） ）によって
記載されているように、細菌を、２％（Ｗ／ ｖ ）グ
ルコースにより補われているＹＭ（酵母−麦芽培地）に
おいて増殖した。培養物を３０℃で３０Ｏｒｐｍで後期
対数増殖期に増殖する。その細胞を３０℃でＹＭ＋２％
（ｗ／ｖ）グルコースプレート上で力価した。その細胞
を遠心分離によって収得し、そして７０＋Ｍ冷Ｔｒｉｓ
−ＨＣｊ！ （ｐＨ８，２）により洗浄した。洗浄され
た細胞を、１０ｍＭのＨＤＴＡを含む７０１のＴｒｉｓ
−ＨＣｌ（ｐＨ８，２）中に再懸濁し、そしてＧａｒｃ
ｉａ＋ Ｒ，Ｃ，＋など、 ＣＥｕｒｏｐｅａｎ Ｊ
ｏｕｒｎａｌｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４３．
９３〜１０５（１９７４） ）に類似する方法によって
３回凍結融解した。この処理の後、懸濁液の上昇した粘
度及び細胞の生存度の完全な喪失（１０６個の細胞のう
ち１個の生存細胞）によって明示されるように、この方
法は細胞を破裂せしめた。アリコートの凍結融解された
細胞溶解物を一８０℃で凍結した。タンパク質濃度を、
８１０ ＲＡＤ検定（ＢＩＯＲＡＤ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｉｅｓ＋リッチモンド、カリフォルニア）により測定
し、そして細胞溶解物ｌｌ１ｌ当り５〜７■の細胞タン
パク質が存在することが見出された。
以下刃Ｚ白
ユ治Ａはｍ汰
Ｉｅｌｐｉ、Ｌ、＋Ｃｏｕｓｏ＋Ｒ，Ｄ、、及びＤａｎ
ｋｅｒｔ、Ｍ、＾、、ＦＢＢＳＬｅｔｔｅｒｓ、 １３
０．２５３〜２５６（１９８１）に記載されるように、
アリコートの凍結融解された細胞溶解物（３００〜４０
０μｇのタンパク質に等しい） 、、 ＤＮＡａｓｅ
１（１０μｇ／ ｍｅ ）及びＭｇＣｌ ｔ （８ｍ
Ｍ）を、２０分間２０℃でブレインインキエベートした
。目的とする放射性糖ヌクレオチド（ＵＤＰ〜グルコー
ス及びＧＤＰ−マンノース）を含むＰＨ８，２で７０ｍ
ＭのＴｒｉｓ−ＨＣＩ （ＵＤＰ−グルコウロン酸を
含むか又は含まない）の同体積を添加し、そして２０℃
でインキエベートした。種々の時間で、４ｗＭのＨＤＴ
Ａを添加することによってその反応を停止した。そのサ
ンプルを遠心分離し、そしてそのペレットを緩衝液によ
り２度洗浄した。上清液を集め、キャリアキサンテン（
１００μｇ）を添加し、そしてキサンテン＋合成された
ポリマーをエタノール（６０％）−に（Ｊ （０，８％
）により沈澱せしめた。この沈澱したポリマーを水中に
再懸濁し、そしてさらに２度再沈殿せしめ、導入されな
かったラベルを除去した。そのガム画分に取り込まれた
放射能を液体シンチレーションカウンターで測定し、そ
してそのデータを処理し、ピコモルに換算してその取込
みを得た。
ｋｅｒｔ、Ｍ、＾、、ＦＢＢＳＬｅｔｔｅｒｓ、 １３
０．２５３〜２５６（１９８１）に記載されるように、
アリコートの凍結融解された細胞溶解物（３００〜４０
０μｇのタンパク質に等しい） 、、 ＤＮＡａｓｅ
１（１０μｇ／ ｍｅ ）及びＭｇＣｌ ｔ （８ｍ
Ｍ）を、２０分間２０℃でブレインインキエベートした
。目的とする放射性糖ヌクレオチド（ＵＤＰ〜グルコー
ス及びＧＤＰ−マンノース）を含むＰＨ８，２で７０ｍ
ＭのＴｒｉｓ−ＨＣＩ （ＵＤＰ−グルコウロン酸を
含むか又は含まない）の同体積を添加し、そして２０℃
でインキエベートした。種々の時間で、４ｗＭのＨＤＴ
Ａを添加することによってその反応を停止した。そのサ
ンプルを遠心分離し、そしてそのペレットを緩衝液によ
り２度洗浄した。上清液を集め、キャリアキサンテン（
１００μｇ）を添加し、そしてキサンテン＋合成された
ポリマーをエタノール（６０％）−に（Ｊ （０，８％
）により沈澱せしめた。この沈澱したポリマーを水中に
再懸濁し、そしてさらに２度再沈殿せしめ、導入されな
かったラベルを除去した。そのガム画分に取り込まれた
放射能を液体シンチレーションカウンターで測定し、そ
してそのデータを処理し、ピコモルに換算してその取込
みを得た。
茅上表
基１組肚競江ｉｓ Ｂ１４５９５４−Ｌの凍結融解細胞
溶解物によるガム中へのラベルされた糖の取込み＋ＵＤ
ＰＧ、ＧＤＰＭ ９８ ２０１
２．１８１４５９５４−Ｌの細胞溶解物を２０℃で３０
分間インキエベートし、そしてこの明細書に記載されて
いるようにして処理し、ガム画分を得た。マンノースに
対するグルコースのモル比は、ガム画分中に取込まれた
トリチウムによりラベルされた糖に対する１４Ｃにより
ラベルされた糖のピコモルの比である。
溶解物によるガム中へのラベルされた糖の取込み＋ＵＤ
ＰＧ、ＧＤＰＭ ９８ ２０１
２．１８１４５９５４−Ｌの細胞溶解物を２０℃で３０
分間インキエベートし、そしてこの明細書に記載されて
いるようにして処理し、ガム画分を得た。マンノースに
対するグルコースのモル比は、ガム画分中に取込まれた
トリチウムによりラベルされた糖に対する１４Ｃにより
ラベルされた糖のピコモルの比である。
すべての３種の糖成分の存在においては、キサンテン
ガムのために予期した通り、グルコース：マンノースの
比は１．０：１であった。Ｕ叶−グルコウロン酸がない
場合、その比は２．１：１であった。第１表を参照のこ
と、この比は、多ａｍポリマーが、キサンテン ガムの
生合成経路において中間体であるトリマ一単位から構成
されるという仮説に矛盾しない。
ガムのために予期した通り、グルコース：マンノースの
比は１．０：１であった。Ｕ叶−グルコウロン酸がない
場合、その比は２．１：１であった。第１表を参照のこ
と、この比は、多ａｍポリマーが、キサンテン ガムの
生合成経路において中間体であるトリマ一単位から構成
されるという仮説に矛盾しない。
パルス−チェイス インビトロ実験は、脂質結合のセロ
ビオース（グルコースダイマー）が脂質結合のトリマー
（グルコース−グルコース−マンノース）及び続いてポ
リトリマーガムに加工されたことを示した。菌株Ｂ１４
５９５４−Ｌの凍結融解細胞溶解物を上記のようにして
調製した。
ビオース（グルコースダイマー）が脂質結合のトリマー
（グルコース−グルコース−マンノース）及び続いてポ
リトリマーガムに加工されたことを示した。菌株Ｂ１４
５９５４−Ｌの凍結融解細胞溶解物を上記のようにして
調製した。
υＤＰ−（”Ｃ）グルコースをその細胞溶解物に添加し
、“パルス”を行ない、そして放射性ラベルされたセロ
ビオースを、１３分のインキュページ日ンの間に脂質キ
ャリアー上に蓄積せしめた。
、“パルス”を行ない、そして放射性ラベルされたセロ
ビオースを、１３分のインキュページ日ンの間に脂質キ
ャリアー上に蓄積せしめた。
“チェイス”は、１００倍過剰のラベルされていないυ
ＤＰ−クルコース及びＧＤＰ−（”旧マンノースの添加
から成る。細胞溶解物及び糖ヌクレオチドのインキュベ
ーション混合物のアリコートを種々の時間で取り、そし
て有機抽出物（脂質キャリアー結合の両分）及び水性画
分（ガムを含む）を生成するために処理する。有機抽出
物のオリゴ糖を脂質キャリアーから酸加水解し、脱リン
酸化し、薄層クロマトグラフィーによって分離し、クロ
マトグラムから除去し、そして放射性ラベルを定量した
。
ＤＰ−クルコース及びＧＤＰ−（”旧マンノースの添加
から成る。細胞溶解物及び糖ヌクレオチドのインキュベ
ーション混合物のアリコートを種々の時間で取り、そし
て有機抽出物（脂質キャリアー結合の両分）及び水性画
分（ガムを含む）を生成するために処理する。有機抽出
物のオリゴ糖を脂質キャリアーから酸加水解し、脱リン
酸化し、薄層クロマトグラフィーによって分離し、クロ
マトグラムから除去し、そして放射性ラベルを定量した
。
１１表
Ｂ１４５９５４−Ｌの細胞溶解物によるパルス−チェイ
スインビトロ実験におけるＵＤＰ−（目Ｃ〕グルコース
の成り行 パルス （１２分）９ピコモル 脂質結合のセロビオー
スチェイス（４分） １ピコモル 脂質結合のセロビオ
ース６ピ３モル 脂質結合のトリマー チェイス（１６分）０．５ピコモル 脂質結合のセロビ
オース６ピコ ３ピコモル 可溶性ポリトリマー チェイス（４８分）０．２ピコモル 脂質結合のセロビ
オース０、４ピコモル 脂質結合のトリマー １０ピコモル 可溶性ポリトリマー 実験条件及び有機画分及び可溶性ガム画分の加工は例１
に記載されている。
スインビトロ実験におけるＵＤＰ−（目Ｃ〕グルコース
の成り行 パルス （１２分）９ピコモル 脂質結合のセロビオー
スチェイス（４分） １ピコモル 脂質結合のセロビオ
ース６ピ３モル 脂質結合のトリマー チェイス（１６分）０．５ピコモル 脂質結合のセロビ
オース６ピコ ３ピコモル 可溶性ポリトリマー チェイス（４８分）０．２ピコモル 脂質結合のセロビ
オース０、４ピコモル 脂質結合のトリマー １０ピコモル 可溶性ポリトリマー 実験条件及び有機画分及び可溶性ガム画分の加工は例１
に記載されている。
第２表に見られるようにＵＤＰ− （”Ｃ ）グルコー
スからのラベルされたグルコースは、′パルス”におい
て直ちに、脂質結合のセロビオース中に取込まれた。Ｇ
ＤＰ−マンノース及び過剰のＵＤＰ−グルコースめ添加
後（チェイス）、ラベ／ｌｚされたセロビオースは、急
速にラベルされた脂質結合のトリマーに転換され、そし
てこれは後で、チェイスが始まった後約１６分で水性画
分中にポリトリマーガムとして検出された。これは、Ｕ
ＤＰ−グルコース、脂質結合のセロビオース、脂質結合
のトリマー及びポリトリマーガムの前駆体−生成物関係
及びキサンテンの生合成経路に対するそれらの関係を示
す。
スからのラベルされたグルコースは、′パルス”におい
て直ちに、脂質結合のセロビオース中に取込まれた。Ｇ
ＤＰ−マンノース及び過剰のＵＤＰ−グルコースめ添加
後（チェイス）、ラベ／ｌｚされたセロビオースは、急
速にラベルされた脂質結合のトリマーに転換され、そし
てこれは後で、チェイスが始まった後約１６分で水性画
分中にポリトリマーガムとして検出された。これは、Ｕ
ＤＰ−グルコース、脂質結合のセロビオース、脂質結合
のトリマー及びポリトリマーガムの前駆体−生成物関係
及びキサンテンの生合成経路に対するそれらの関係を示
す。
この例は、グリコシルトランスフェラーゼＩＶ欠失突然
変異体によってインビトロで合成されたポリトリマーガ
ムにおけるグルコース：マンノースのモル比を示す。
変異体によってインビトロで合成されたポリトリマーガ
ムにおけるグルコース：マンノースのモル比を示す。
細胞溶解物を調製するための方法は上の例１に記載され
ている．その細胞溶解物を調製するために使用される菌
株は、ＡＴＣＣ番号５３１９５と示される菌株であった
。ｔｌＤＰ− （”Ｃ ）グルコースのみ、ｔｌＤＰ−
（１４Ｃ ］ グルコース及びＧＤＰ− （知）マン
ノース、又はＵＤＰ− （”Ｃ ）グルコース、ＧＤＰ
− （”１１）マンノース及びラベルされていないＵＤ
Ｐ−グルコウロン酸から成る、１，２又は３ヌクレオチ
ド付加の糖のいづれかを、その細胞溶解物に添加した。
ている．その細胞溶解物を調製するために使用される菌
株は、ＡＴＣＣ番号５３１９５と示される菌株であった
。ｔｌＤＰ− （”Ｃ ）グルコースのみ、ｔｌＤＰ−
（１４Ｃ ］ グルコース及びＧＤＰ− （知）マン
ノース、又はＵＤＰ− （”Ｃ ）グルコース、ＧＤＰ
− （”１１）マンノース及びラベルされていないＵＤ
Ｐ−グルコウロン酸から成る、１，２又は３ヌクレオチ
ド付加の糖のいづれかを、その細胞溶解物に添加した。
その糖基質の添加の後３０分で、水性画分を処理し、そ
して例１に記載しているようにして分析した。
して例１に記載しているようにして分析した。
結果は第３表に示される。２種の糖基質、すなわちＵＤ
Ｐ−グルコース及びＧＤＰ−マンノースが、インキュベ
ーション混合物中に存在する場合、グルコース：マンノ
ースのモル比はガム中で２．４：１であった。すべての
３種の糖基質を細胞溶解物と共にインキュベートする場
合、得られーるガムはグルコース：マンノースのモル比
が２．３：１であった。
Ｐ−グルコース及びＧＤＰ−マンノースが、インキュベ
ーション混合物中に存在する場合、グルコース：マンノ
ースのモル比はガム中で２．４：１であった。すべての
３種の糖基質を細胞溶解物と共にインキュベートする場
合、得られーるガムはグルコース：マンノースのモル比
が２．３：１であった。
星１表
ＡＴＣＣ番号５３１９５の凍結融解細胞溶解物によるポ
リトリマーガム中へのラベルされた糖の取込み＋２υＤ
ＰＧ，ＣＤＰＭ ７１ １７４
２．４省略形は第１表の凡例に説明されている。Ａ
ＴＣＣ番号５３１９５の細胞溶解物を、示されている反
応混合物中で３０分間２０℃でインキュベートし、そし
て例２に記載されているようにして処理し、ガム両分を
得た。示されるグルコース：マンノースのモル比は、処
理された両分中に取込まれたトリチウムによりラベルさ
れた糖に対する、１４Ｃによりラベルされた＊唐のピコ
モルの比である。
リトリマーガム中へのラベルされた糖の取込み＋２υＤ
ＰＧ，ＣＤＰＭ ７１ １７４
２．４省略形は第１表の凡例に説明されている。Ａ
ＴＣＣ番号５３１９５の細胞溶解物を、示されている反
応混合物中で３０分間２０℃でインキュベートし、そし
て例２に記載されているようにして処理し、ガム両分を
得た。示されるグルコース：マンノースのモル比は、処
理された両分中に取込まれたトリチウムによりラベルさ
れた糖に対する、１４Ｃによりラベルされた＊唐のピコ
モルの比である。
グリコシルトランスフェラーゼＩＶ欠失の突然変異体か
らの無細胞溶解物を使用する場合、ｔｌＤＰ−グルコウ
ロン酸の存在は、多１ｉ類ポリマー中に取込まれるグル
コース：マンノースの比に影響を及ぼさなかった。すべ
ての３種の糖と共にインキュベートされた場合の突然変
異体の細胞溶解物の生化学的表現型は、２種の糖基質だ
けとインキュベートされた場合の野生型細胞溶解物の表
現型に類似し、そしてここで、インビトロで生成される
ガムの両者は、グルコース成分：マンノース成分のモル
比がおよそ２：ｌであった。
らの無細胞溶解物を使用する場合、ｔｌＤＰ−グルコウ
ロン酸の存在は、多１ｉ類ポリマー中に取込まれるグル
コース：マンノースの比に影響を及ぼさなかった。すべ
ての３種の糖と共にインキュベートされた場合の突然変
異体の細胞溶解物の生化学的表現型は、２種の糖基質だ
けとインキュベートされた場合の野生型細胞溶解物の表
現型に類似し、そしてここで、インビトロで生成される
ガムの両者は、グルコース成分：マンノース成分のモル
比がおよそ２：ｌであった。
±−１
この例は、ポリトリマーガムを形成するために重合され
るトリマー中間体がキサンテン ガムにおけるのと同じ
糖のアノマー配置を有することを示す。さらに、それは
、トリマーのマンノースが脂質結合の中間体において非
還元グルコースのセロビオースに付加されていることを
示す。
るトリマー中間体がキサンテン ガムにおけるのと同じ
糖のアノマー配置を有することを示す。さらに、それは
、トリマーのマンノースが脂質結合の中間体において非
還元グルコースのセロビオースに付加されていることを
示す。
α−マンノシダーゼ（ＥＣ３，２，１，２４）及びβ−
グルコシダーゼ（ＥＣ３，２，１，２１）を用いて、例
１において記載しているようにして合成され、そして二
重にラベルされたトリマー性オリゴ糖を別々に又は連続
的に処理した。α−マンノシダーゼは、α−１結合によ
って付加されている、末端の非置換マンノース残基を加
水分解するであろう。β−グルコシダーゼは、β−１結
合で付加されている、末端の非置換Ｄ−グルコシル残基
を加水分解するであろう。
グルコシダーゼ（ＥＣ３，２，１，２１）を用いて、例
１において記載しているようにして合成され、そして二
重にラベルされたトリマー性オリゴ糖を別々に又は連続
的に処理した。α−マンノシダーゼは、α−１結合によ
って付加されている、末端の非置換マンノース残基を加
水分解するであろう。β−グルコシダーゼは、β−１結
合で付加されている、末端の非置換Ｄ−グルコシル残基
を加水分解するであろう。
トリマーを脂質から除去し、そして脱リン酸化した」次
に、α−マンノシダーゼがアセチル化したマンノース成
分を認識することができないので、これを、たとえばｐ
ｏｉｚで２〜３時間塩基処理することによって脱アセチ
ル化した。
に、α−マンノシダーゼがアセチル化したマンノース成
分を認識することができないので、これを、たとえばｐ
ｏｉｚで２〜３時間塩基処理することによって脱アセチ
ル化した。
その結果は次のとおりであった。β−グルコシダーゼに
よるトリマー性オリゴ糖の処理は、それに変化を与えな
かった。トリマー性オリゴマーをまずα−マンノシダー
ゼ及び次にβ−グルコシダーゼにより処理する場合、グ
ルコース及びマンノースが形成された。その結果は、マ
ンノースがトリマー性中間体においてα−結合によって
非還元性グルコースに付加され、そしてそのグルコース
成分がβ−結合されていることを確かにする。これは、
トリマーが正常なキサンテン酵素経路の中間生成物であ
ることを確かにする。
よるトリマー性オリゴ糖の処理は、それに変化を与えな
かった。トリマー性オリゴマーをまずα−マンノシダー
ゼ及び次にβ−グルコシダーゼにより処理する場合、グ
ルコース及びマンノースが形成された。その結果は、マ
ンノースがトリマー性中間体においてα−結合によって
非還元性グルコースに付加され、そしてそのグルコース
成分がβ−結合されていることを確かにする。これは、
トリマーが正常なキサンテン酵素経路の中間生成物であ
ることを確かにする。
拠−土
この例は、グリコシルトランスフェラーゼＩＶのための
遺伝子の障害により不完全なキサンテンガムである突然
変異菌株を生成するために使用された突然変異誘発及び
スクリーニングの方法を示す。
遺伝子の障害により不完全なキサンテンガムである突然
変異菌株を生成するために使用された突然変異誘発及び
スクリーニングの方法を示す。
ストレプトマイシンに対する染色体耐性により遺伝学的
に標識されたキサントモナス カンペストリスを、プラ
スミドｐＲＫ２０１３： ：ＴｎｌＯを含むＬｐ−ｆｉ
ＬＥ３９２と接合する受容菌として使用した。プラスミ
ドｐＰＫ２０１３は、カナマシン耐性をコードするＴｎ
９０３を含み［Ｆｉｇｕｒｓｋｉ＋Ｄ、Ｈ，、及びＨｅ
１ｉｎｓｋｉ＋Ｄ、Ｒ０＋Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａ
ｄ、Ｓｃｉ、、Ｕ、Ｓ、Ａ、、 ７６＋ １６４８〜
１６５２（１９７９）） 、そしてそのプラスミドはキ
サントモナス中において複製することができない（Ｄ
ｉ ｔ ｔａ ＊’Ｇ 、ｒなど、、前記）。トランポ
ゾンＴｎｌＯはテトラサイクリン耐性をコードする。ス
トレプトマイシン及びカナマイシン、又はストレプトマ
イシン及びテトラサイクリンに対して耐性であるトラン
スコンシュガント（ｔｒａｎｓｃｏｎｊ ｕｇａｎ ｔ
ｓ）を選択した。前者は約４ Ｘｌ０−’／受容菌の頻
度で生じ、そして多分、Ｔｎ９０３のトランスポジショ
ンに起因した。後者は約３ｘｌＯ−ｈ／受容菌の頻度で
生じ、そして多分、キサントモナスカンペストリスのゲ
ノム中へのＴｎｌＯのトランスポジションに起因した。
に標識されたキサントモナス カンペストリスを、プラ
スミドｐＲＫ２０１３： ：ＴｎｌＯを含むＬｐ−ｆｉ
ＬＥ３９２と接合する受容菌として使用した。プラスミ
ドｐＰＫ２０１３は、カナマシン耐性をコードするＴｎ
９０３を含み［Ｆｉｇｕｒｓｋｉ＋Ｄ、Ｈ，、及びＨｅ
１ｉｎｓｋｉ＋Ｄ、Ｒ０＋Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａ
ｄ、Ｓｃｉ、、Ｕ、Ｓ、Ａ、、 ７６＋ １６４８〜
１６５２（１９７９）） 、そしてそのプラスミドはキ
サントモナス中において複製することができない（Ｄ
ｉ ｔ ｔａ ＊’Ｇ 、ｒなど、、前記）。トランポ
ゾンＴｎｌＯはテトラサイクリン耐性をコードする。ス
トレプトマイシン及びカナマイシン、又はストレプトマ
イシン及びテトラサイクリンに対して耐性であるトラン
スコンシュガント（ｔｒａｎｓｃｏｎｊ ｕｇａｎ ｔ
ｓ）を選択した。前者は約４ Ｘｌ０−’／受容菌の頻
度で生じ、そして多分、Ｔｎ９０３のトランスポジショ
ンに起因した。後者は約３ｘｌＯ−ｈ／受容菌の頻度で
生じ、そして多分、キサントモナスカンペストリスのゲ
ノム中へのＴｎｌＯのトランスポジションに起因した。
栄養要求株が約２％の頻度でこれらのトランスコンシュ
ガントの間に見出された。それらの要求は種々の栄養要
求物の間で広く異なった。このことは、これらのトラン
スボゾンがキサントモナス中への挿入のために特に好ま
しい遺伝子座を持たないことを示す。その栄養要求株の
原栄養性復帰細胞が選択され、そしてほとんどが薬物感
受性であることが見出された。このことは、栄養要求株
がトランスポゾン挿入によって引き起こされたことを示
す。
ガントの間に見出された。それらの要求は種々の栄養要
求物の間で広く異なった。このことは、これらのトラン
スボゾンがキサントモナス中への挿入のために特に好ま
しい遺伝子座を持たないことを示す。その栄養要求株の
原栄養性復帰細胞が選択され、そしてほとんどが薬物感
受性であることが見出された。このことは、栄養要求株
がトランスポゾン挿入によって引き起こされたことを示
す。
二重耐性トランスコンジガントの間のキサンテン ガム
欠失の突然変異体についてスクリーンするために、キサ
ント ガム産生コロニイとキサント ガム非産生コロニ
イと間に形態的な区別を高めるコンゴレッドダイ（Ｃｏ
ｎｇｏ Ｒｅｏｄ ｄｙｅ）を、固形培地に添加した。
欠失の突然変異体についてスクリーンするために、キサ
ント ガム産生コロニイとキサント ガム非産生コロニ
イと間に形態的な区別を高めるコンゴレッドダイ（Ｃｏ
ｎｇｏ Ｒｅｏｄ ｄｙｅ）を、固形培地に添加した。
コロニイの形態を、３０℃で７〜１２日間イ日間インキ
トベート、試験した。キサンテン ガム欠失の突然変異
体がおよそ１０１の頻度で見出された。
トベート、試験した。キサンテン ガム欠失の突然変異
体がおよそ１０１の頻度で見出された。
キサンテン ガム欠失の突然変異体の中からグリコシル
トランスフェラーゼＩＶ突然変異体を同定するために、
おのおのの凍結融解細胞溶解体を調製した。放射性ラベ
ルされたＵＤＰ−グルコース及びＧＤＰ−マンノースを
ｕＤＰ−グルコウロン酸と共に又はなしに添加した。目
的とする突然変異体は、ＵＤＰ−グルコウロン酸の存在
に関係なく、約２：１のグルコース：マンノースの比を
有するガムを製造した。この説明のいくつかの突然変異
体が見出された。それらはＴｎｌＯ挿入による障害を含
む。Ｔｎ９０４によって誘発された突然変異体もまた、
この表現型を有することが見出された。さらに、ニトロ
ソグアニジンによって誘発された、この表現型を有する
突然変異体を単離した。
トランスフェラーゼＩＶ突然変異体を同定するために、
おのおのの凍結融解細胞溶解体を調製した。放射性ラベ
ルされたＵＤＰ−グルコース及びＧＤＰ−マンノースを
ｕＤＰ−グルコウロン酸と共に又はなしに添加した。目
的とする突然変異体は、ＵＤＰ−グルコウロン酸の存在
に関係なく、約２：１のグルコース：マンノースの比を
有するガムを製造した。この説明のいくつかの突然変異
体が見出された。それらはＴｎｌＯ挿入による障害を含
む。Ｔｎ９０４によって誘発された突然変異体もまた、
この表現型を有することが見出された。さらに、ニトロ
ソグアニジンによって誘発された、この表現型を有する
突然変異体を単離した。
■−工
この例は、インビボでポリトリマーガムを生成するため
のグリコシルトランスフェラーゼＩＶ欠失突然変異体の
使用を示す。
のグリコシルトランスフェラーゼＩＶ欠失突然変異体の
使用を示す。
インビボで合成されるガムを得るために、野生型ＮＲＲ
Ｌ Ｂ−１４５９Ｓ４〜Ｌ及び例４のグリコシルトラン
スフェラーゼＩＶ欠失突然変異体（ＡＴＣＣ番号５３１
９５）のそ糺ぞれ５１を、ｐｎｓ、ｏ〜８．０に調整さ
れたｐｌ＋により２８℃〜３２℃で発酵槽中において好
気的に増殖せしめた。１０ｇ＃！のリン酸カリウム、１
．４３ｇ／ｊ！の硫酸アンモニウム、２ｇ／ｌのクエン
酸、３０ｇ／ｌのグルコース及び微量元素を含む最少培
地を使用した。１４５時間後、そのガムを回収し、そし
て精製した。細胞を遠心分離によって除去し、そしてイ
ソプロパツール（５５％Ｖ／Ｖ）及び塩化ナトリウム（
０，５％ｗ ／ ｖ ）の添加によってブイヨンからガ
ムを沈殿せしめた。沈殿物を濾過することによって集め
、そして水に再溶解した。ガムを塩なしでイソプロパツ
ール（５５％Ｖ ／ Ｖ ）により沈殿せしめ、そして
水に再溶解した。その調製物を、１２．ＯＯＯＭＷカッ
トオフ膜透析チューブを用いて３日間水に対して透析し
た。
Ｌ Ｂ−１４５９Ｓ４〜Ｌ及び例４のグリコシルトラン
スフェラーゼＩＶ欠失突然変異体（ＡＴＣＣ番号５３１
９５）のそ糺ぞれ５１を、ｐｎｓ、ｏ〜８．０に調整さ
れたｐｌ＋により２８℃〜３２℃で発酵槽中において好
気的に増殖せしめた。１０ｇ＃！のリン酸カリウム、１
．４３ｇ／ｊ！の硫酸アンモニウム、２ｇ／ｌのクエン
酸、３０ｇ／ｌのグルコース及び微量元素を含む最少培
地を使用した。１４５時間後、そのガムを回収し、そし
て精製した。細胞を遠心分離によって除去し、そしてイ
ソプロパツール（５５％Ｖ／Ｖ）及び塩化ナトリウム（
０，５％ｗ ／ ｖ ）の添加によってブイヨンからガ
ムを沈殿せしめた。沈殿物を濾過することによって集め
、そして水に再溶解した。ガムを塩なしでイソプロパツ
ール（５５％Ｖ ／ Ｖ ）により沈殿せしめ、そして
水に再溶解した。その調製物を、１２．ＯＯＯＭＷカッ
トオフ膜透析チューブを用いて３日間水に対して透析し
た。
高性能液体クロマトグラフィー（ＩＩＰＬｃ）によって
の続く分析による多Ｗ類ポリマーの完全な酸加水分解に
よって、グルコース：マンノース比を測定し、そしてイ
ンビトロで合成されたポリマーのために見出された比と
一敗することが見出された。
の続く分析による多Ｗ類ポリマーの完全な酸加水分解に
よって、グルコース：マンノース比を測定し、そしてイ
ンビトロで合成されたポリマーのために見出された比と
一敗することが見出された。
約２．１５：１のグルコース：マンノース比を有するガ
ムを製造する、グリコシルトランスフェラーゼＩＶ欠失
の突然変異体をＡＴＣＣ番号５３１９５と名づけ、そし
て他方、野生型は約０．９６：１の比のガムを製造した
。
ムを製造する、グリコシルトランスフェラーゼＩＶ欠失
の突然変異体をＡＴＣＣ番号５３１９５と名づけ、そし
て他方、野生型は約０．９６：１の比のガムを製造した
。
インビボで産生された他のポリトリマーガムのサンプル
を、ＨＰＬＣ又は酸加水分解後の糖の酵素分析によって
検定した。行なわれた２４種の分析に関しては、グルコ
ース：マンノースのモル比の範囲は１．４３：１〜２．
４４：１であった。グリコシルトランスフェラーゼＩＶ
欠失の突然変−異株によって製造されたポリトリマーの
ための平均比は１．９０±０．１５：１であった。
を、ＨＰＬＣ又は酸加水分解後の糖の酵素分析によって
検定した。行なわれた２４種の分析に関しては、グルコ
ース：マンノースのモル比の範囲は１．４３：１〜２．
４４：１であった。グリコシルトランスフェラーゼＩＶ
欠失の突然変−異株によって製造されたポリトリマーの
ための平均比は１．９０±０．１５：１であった。
また、適度に検出できる、インビボで産生されたポリト
リマーのＨＰＬＣ分析によって示されるように、第１に
、グルコウロン酸の非存在、第２に、ピルビン酸の非存
在、第３に、アセテートの存在及び第４に、グルコース
及びマンノースよりも他の糖の非存在があった。
リマーのＨＰＬＣ分析によって示されるように、第１に
、グルコウロン酸の非存在、第２に、ピルビン酸の非存
在、第３に、アセテートの存在及び第４に、グルコース
及びマンノースよりも他の糖の非存在があった。
■−工
この例は、温度及び無機塩濃度の範囲にわたって、ポリ
トリマーがキサンテン ガムに比較して、改良された流
動学的性質を示す水溶液を提供することを示す。
トリマーがキサンテン ガムに比較して、改良された流
動学的性質を示す水溶液を提供することを示す。
ポリトリマーガム（例５に従ってインビボで合成された
）及びキサンテン ガム（精製されたＰｆｉｚｅ Ｆｌ
ｏｃｏｎ ４８００）の溶液を、１０重量％の塩化ナト
リウムを含む水中において１ 、０００ｐｐ…の濃度で
製造した。
）及びキサンテン ガム（精製されたＰｆｉｚｅ Ｆｌ
ｏｃｏｎ ４８００）の溶液を、１０重量％の塩化ナト
リウムを含む水中において１ 、０００ｐｐ…の濃度で
製造した。
ポリトリマーガムは、広い範囲の剪断速度にわたってキ
サンテン ガムよりも実質的に高い粘度を示す（第２図
）。
サンテン ガムよりも実質的に高い粘度を示す（第２図
）。
室温でキサンテンの粘度に対するポリトリマーの粘度の
比は、水塩度により異なり、そして第３図に示されるよ
うに、０〜２０重量％の塩化ナトリウムの塩度範囲にわ
たって、２〜２．５の間に存在する。キサンテンの粘度
に対するポリトリマーの粘度の比はまた、ポリマー濃度
により異なる（第４図）。最後に、キサンテンの粘度よ
りもすぐれたポリトリマーの粘度の改良が、０〜２０重
量％の塩化ナトリウムの水塩度について、２５〜７５℃
の範囲にわたる温度により増大する（第５図）。
比は、水塩度により異なり、そして第３図に示されるよ
うに、０〜２０重量％の塩化ナトリウムの塩度範囲にわ
たって、２〜２．５の間に存在する。キサンテンの粘度
に対するポリトリマーの粘度の比はまた、ポリマー濃度
により異なる（第４図）。最後に、キサンテンの粘度よ
りもすぐれたポリトリマーの粘度の改良が、０〜２０重
量％の塩化ナトリウムの水塩度について、２５〜７５℃
の範囲にわたる温度により増大する（第５図）。
本発明の変法は当業者にとって明らかであろうから、本
発明を、特許請求の範囲によってのみ限定する。
発明を、特許請求の範囲によってのみ限定する。
以下余白
第１図は、キサンテン ガムの生合成の推定される経路
を示す。それはいくつかの実験所のデータに基づかれる
。Ｉｅｌｐｉ＋Ｌ、、Ｃｏｕｓｏ、Ｒ，０，＋及びＤａ
ｎｋｅｒｔ、Ｍ、Ａ、、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙ
、Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍ＋１１０２ ＋１４００〜１４０Ｂ
（１９８１）、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ、１３０．２
５３〜２５６（１９８１）、Ｂｉｏｃｈｅｍ、１ｎｔｅ
ｒｎ、、 ６ 、３２３〜３３３（１９８３）；０ｓ
ｂｏｒｎ、 Ｍ、Ｊ、及びＷｅｉｎｅｒ＋ １．Ｍ、＋
Ｊ、８ｉｏ１．Ｃｈｅｍ、＋２４３＋２６３１〜２６３
９（１９６７）；Ｔｒｏｙ、Ｆ、＾、、＾ｎｎｕａｌ
Ｒｅｖｉｅｗｓ ｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、 ３
３＋５１９〜５６０（１９７９）を参照のこと。 使用される省略形は、ｇｌｕ＝グルコース、ｇｌｕＡ
＝グルコウロン酸、ｍａｎ”マンノース、ｇｌｕ−ｇｌ
ｕ −セロビオース、Ｐ＝ニリン、ＰＰ＝ピロリン酸、
Ｃ５５＝イソプレノイド脂質キヤリ、アー、ＰＥＰ ＝
ホスホエノールピルビン酸、ＡｃＣｏＡ ＝アセチル補
酵素ＡＳ Ｉ−Ｖ＝グリコジルトランスフェラーゼ、Ｕ
ＤＰ ＝ウリジン５°−ニリン酸、及びＧＤＰ ＝グア
ノシン５゛−ニリン酸である。 第２図は、１０重量％のＮａＣｊ！ブライン中において
それぞれ１１０００ｐｐでのポリトリマー溶液の粘度及
びキサンテン ガム溶液の粘度を剪断速度の関数として
示す。 第３図は、それぞれ１１０００ｐｐのキサンテン ガム
溶液の粘度に対するポリトリマー溶液の粘度の比をブラ
イン塩度の関数として示す。 第４図は、１０重量％のＮａＣ１ブライン中においてキ
サンテン ガム溶液の粘度に対するポリトリマー溶液の
粘度の比をポリマー濃度の関数として示す。 第５図は、種々の塩度のブライン塩度ョれぞれ１０００
ｐｐ−のキサンテン ガム溶液の粘度に対するポリトリ
マー溶液の粘度の比を温度の関数として示す。 以下７１：白 Ｊ″
を示す。それはいくつかの実験所のデータに基づかれる
。Ｉｅｌｐｉ＋Ｌ、、Ｃｏｕｓｏ、Ｒ，０，＋及びＤａ
ｎｋｅｒｔ、Ｍ、Ａ、、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙ
、Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍ＋１１０２ ＋１４００〜１４０Ｂ
（１９８１）、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ、１３０．２
５３〜２５６（１９８１）、Ｂｉｏｃｈｅｍ、１ｎｔｅ
ｒｎ、、 ６ 、３２３〜３３３（１９８３）；０ｓ
ｂｏｒｎ、 Ｍ、Ｊ、及びＷｅｉｎｅｒ＋ １．Ｍ、＋
Ｊ、８ｉｏ１．Ｃｈｅｍ、＋２４３＋２６３１〜２６３
９（１９６７）；Ｔｒｏｙ、Ｆ、＾、、＾ｎｎｕａｌ
Ｒｅｖｉｅｗｓ ｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、 ３
３＋５１９〜５６０（１９７９）を参照のこと。 使用される省略形は、ｇｌｕ＝グルコース、ｇｌｕＡ
＝グルコウロン酸、ｍａｎ”マンノース、ｇｌｕ−ｇｌ
ｕ −セロビオース、Ｐ＝ニリン、ＰＰ＝ピロリン酸、
Ｃ５５＝イソプレノイド脂質キヤリ、アー、ＰＥＰ ＝
ホスホエノールピルビン酸、ＡｃＣｏＡ ＝アセチル補
酵素ＡＳ Ｉ−Ｖ＝グリコジルトランスフェラーゼ、Ｕ
ＤＰ ＝ウリジン５°−ニリン酸、及びＧＤＰ ＝グア
ノシン５゛−ニリン酸である。 第２図は、１０重量％のＮａＣｊ！ブライン中において
それぞれ１１０００ｐｐでのポリトリマー溶液の粘度及
びキサンテン ガム溶液の粘度を剪断速度の関数として
示す。 第３図は、それぞれ１１０００ｐｐのキサンテン ガム
溶液の粘度に対するポリトリマー溶液の粘度の比をブラ
イン塩度の関数として示す。 第４図は、１０重量％のＮａＣ１ブライン中においてキ
サンテン ガム溶液の粘度に対するポリトリマー溶液の
粘度の比をポリマー濃度の関数として示す。 第５図は、種々の塩度のブライン塩度ョれぞれ１０００
ｐｐ−のキサンテン ガム溶液の粘度に対するポリトリ
マー溶液の粘度の比を温度の関数として示す。 以下７１：白 Ｊ″
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、グルコウロン酸成分を本質的に含まない、Ｄ−グル
コース：Ｄ−マンノースの比が約２：１の水溶性多糖類
ポリマー（ここで、Ｄ−グルコース成分がβ−〔１，４
〕配置で結合され、そしてＤ−マンノース成分が一般的
に１つ置きにグルコース成分にα−〔１，３〕配置で結
合されている）を含有する組成物。 ２、前記多糖類ポリマーのマンノース成分が６−０位置
でアセチル化されている特許請求の範囲第１項記載の組
成物。 ３、前記多糖類ポリマーのマンノース成分が６−０位置
でアセチル化されていない特許請求の範囲第１項記載の
組成物。 ４、前記多糖類ポリマーが約０．００１重量％よりも多
い量で水溶液中に存在する特許請求の範囲第１項記載の
組成物。 ５、前記多糖類ポリマーが約１重量％よりも多い量で水
溶液中に存在する特許請求の範囲第１項記載の組成物。 ６、グルコウロン酸成分を本質的に含まない、Ｄ−グル
コース：Ｄ−マンノースの比が約２：１の水溶性多糖類
ポリマーの製造方法であって、グルコウロン酸を多糖類
ポリマー中に導入することができないキサントモナス（
Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）属の微生物を適切な増殖培地
に接種し、そして該接種された増殖培地を適切な温度及
び溶解酸素レベルで、インキュベートして、Ｄ−グルコ
ース：Ｄ−マンノースの比が約２：１である多糖類ポリ
マーを生成することを含んで成る方法。 ７、前記多糖類ポリマーを、沈殿又は限外瀘過によって
増殖培地から回収する特許請求の範囲第６項記載の方法
。 ８、前記微生物がキサントモナスカンペストリス（Ｘａ
ｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）種からで
ある特許請求の範囲第６項記載の方法。 ９、前記微生物がキサントモナスのグリコシルトランス
フェラーゼIV欠失の突然変異体である特許請求の範囲第
６項記載の方法。 １０、前記微生物がキサントモナスのＵＤＰ−グルコウ
ロン酸欠失の突然変異体である特許請求の範囲第６項記
載の方法。 １１、キサントモナスカンペストリスのトランスフェラ
ーゼIV突然変異体をＮＲＲＬ Ｂ−１４５９ Ｓ４−Ｌ
としてＡＴＣＣに寄託し、そしてＡＴＣＣ番号５３１９
５を得る特許請求の範囲第９項記載の方法。 １２、キサントモナスカンペストリスのＵＤＰ−グルコ
ウロン酸突然変異体をＮＲＲＬ Ｂ−１４５９ Ｓ４−
ＬとしてＡＴＣＣに寄託し、そしてＡＴＣＣ番号５３１
９６を得る特許請求の範囲第１０項記載の方法。 １３、グルコウロン酸を含まずそしてグルコース：マン
ノースの比が約２：１の多糖類ポリマーを生成する能力
を有するキサントモナス属の微生物の微生物学的に純粋
な培養物。 １４、前記微生物をキサンテン生成微生物の突然変異誘
発によって得る特許請求の範囲第１３項記載の微生物学
的に純粋な培養物。 １５、ＡＴＣＣ番号５３１９５の微生物と同一の特性を
有する特許請求の範囲第１４項記載の微生物学的に純粋
な培養物。 １６、ＡＴＣＣ取得番号５３１９６の微生物と同一の特
性を有する特許請求の範囲第１４項記載の微生物学的に
純粋な培養物。 １７、グルコウロン酸成分を本質的に含まず、そしてＤ
−グルコース：Ｄ−マンノースの比が約２：１の水溶性
多糖類ポリマーを、所望の濃度で水性培地中に溶解する
ことを含んで成る水性培地の粘度を増すための方法。 １８、オイル産生地下形成体からオイルの回収のための
方法であって、グルコース：マンノースの比が約２：１
の多糖類ポリマーを含む溶液を穴に注入し、多孔質岩石
から閉じ込められたオイルを置換し、そしてその置換さ
れたオイルを集めることを含んで成る方法。
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