JPS6287523A - 紅花エキス、該紅花エキスの製造方法及び該紅花エキスからなる血管拡張剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、特定成分のみを含有する紅花エキス、該紅花
エキスを工業的に有利に抽出する製造方法並びに該紅花
エキスからなる血管拡張剤に関する。

［従来の技術１ 紅花は生薬として優れた有効性を持っことが知られてお
り、持に通経薬、駆茫血薬として血行障害の治療等に古
くから使用されてきた。紅花の熱水、エタノール、又は
５０％水性エタノールエキスに末梢循環改善作用のある
ことが薬理学的に確認されているし特開昭５６−９２２
１８　：塗）２本和男ら、神奈川歯学、１．８（１）、
６４（１９８３）　ｌ。又、紅花熱水エキスに（士血液
凝固抑制作用もある２二とか報告されてイル、−１［小
管中央ら、’ｌ’雑誌、　１０４．１０５０　（１９８
４）　］（発明か解決しようとする問題点１ しかし５なから紅花ｆｉｔエキスは血管拡張作用が弱い
ｊ二め、多量に投与しなくてはならない。投与量は１川
音の年齢、体重、疾患の程度によっても異なるか、経［
二１投りの場合、大人１回当たり１０ｇ以上を必要とす
ることがある。紅花に黄吾、６創、日参等の（１！！の
生薬を組合せて相乗的効果を得る方法か提案されている
が（特開昭５６−９２２１６）　、活性の向−Ｌはネト
分であるっ又、紅花の成分に関しては、紅花赤色素のカ
ルサミン乃び紅花黄色素のサフラ”ノーイエローの構造
に関する報告があるが［小原平太部、小野寺準−９化学
系６学協連合東北地方大会講演予稿集、１０月、１０６
．　（１９８３）　］　、色素以外の成分に関しては全
く述べられていない。

本発明者らはかかる事情に鑑み、紅花エキスを効果的に
利用するべく鋭意研究を行なった結果、１、丁花租エギ
スには先に述べた血液凝固抑制作用の他に強い血小板凝
集抑制作用があり、この作用がアデノシソに起因−Ｉろ
、二どを県出しｔ二、従−）で、血小板凝集抑制作用ど
血ｉ＋’Ｌ疑固抑制作用を同時５．二巻する紅花ｉＹＩ
エキスは、その士↓ン肖化管潰７ら等の出血性疾患を併
イもした患台に投与することは好ましくないという新Ｉ
゛ニな問題点が指摘さ′れた。、そこで更に研究を重ね
た結果、色濃成分のカルサミン及びす゛フラワーイエＩ
Ｊ　−４：は血管拡張作用か無いこと、紅花粗エキスは
精製することにより血小板凝集抑制作用を有する成分（
アデノシン）、血液凝固抑制作用を有する成分及び色米
成分を除去できると共に血管拡張作用を茗（、り向上で
き・ること、血管拡張作用物質は水や含水有機、溶媒に
対ｒる溶解度か高く、ある特定の画分に濃縮されて複数
存在することを見出し、これらの知見に基づいて本発明
を完成するに至っｔ二。

［問題点を解決するための手段］ 即ち、本発明は、（１）カラムニ（’）ＤＳ（５１１）
、４φ×　２５０ｍｍ　、移動相：酢酸／アセト二ｌ・
リル、／水＝０．１／１／９８．９　、検出器＝Ｒ丁又
はＵ　Ｖ　（２５４ｎｍ）の条件の高速液体クロマトグ
ラフ、７−による；！！ＩＩ定においてｋ′＝０．５〜
６のみに主ピークの認められる紅花エキス、（２）紅花
の熱水抽出濃縮液に水溶性有機溶剤を加えて分別沈澱し
上清を得る。

該上清の濃縮物を水に再溶解して逆相系液体クロマトグ
ラフィー用カラムに注入し移動相として水を通した時保
持されない画分のみを回収するか、又は該」−清の濃縮
物を水溶性有機溶媒に再溶解して吸着剤を添加攪拌した
後吸着剤を回収し水で溶離する画分のみを回収すること
を特徴とする紅花エキスの製造方法、（３）カラム：　
ＯＤＳ（５μ）、４φ×　２５０ｍｍ　　、移動相：酢
酸／アセトニトリル／水＝０．１／１／９８．９、検出
器：ＲＩ又はＵ　Ｖ　（２５４ｎｍ）の条件の高速液体
クロマトグラフィーにょるイ創定においてｋ′＝０．５
〜６のみに主ピークの認められる紅花エキスからなる血
管拡張剤、の３項から成るものである。

以下、本発明の構成について詳述する。

本発明に係る紅花エキスζよ、淡黄色粉末であり、僅か
にアミン様臭を有する。本紅花エキスは、水、メタノー
ル、水性エタノール、水性アセトンには良好に溶解し、
エタノール、アセトンには殆ど溶解しない。本紅花エキ
スは紅花色素が実質的に除去されており、λｍａｘ　＝
　２６４ｎｍで可視部には殆ど吸収を持たない（第１図
）。本紅花エキスは、カラム：　ＯＤＳ（５ｕ）、４φ
×２５０ｍｍ　　％移動相：酢酸／アセトニトリル／水
＝０．１／１／９８．９、検出器：ＲＩ叉はＵＶ　（２
５４ｎｍ）の条件の高速液体クロマトグラフィーによる
測定においてｋ′＝０．５〜６のみに主ピークが認めら
れるものである（第２図）。

次に本発明に係る紅花エキスの製造方法について述べる
。。

紅花の熱水抽出は、生薬抽出の常法に準じて行なえばよ
い。すなわち乾燥紅花１０００部に対し水約１００００
部を用いて、５０〜９０℃で約１時間ずつ３回程度抽出
する。抽出溶剤としては、熱水が最も効率的に有効成分
が回収できるため好まししく。冷水又はアルコール類、
アセトン及びこれらの含水溶剤で抽出すると有効成分が
十分に抽出できないので好ましくない１．この段階で抽
出液を減圧乾固すれば約３３０部の紅花粗エキス（Ａ）
が得られる。。

次いで、得られた熱水抽出液を熱時に濾過した後、約８
００部に士で減圧濃縮し、水溶性有機溶剤を加えて分別
沈澱させ上清を分取する。

水溶性有機溶剤としては、メタノール、エタノール等の
アルコール類、アセトン等が挙げられるが、アセトンが
少ない添加量で沈澱ができること、回収が容易なことか
ら工業的に最も有利である。アセトンの添加量は、抽出
濃縮液の３倍容から７倍容の範囲にすればよいが、５倍
容に設定すれば、非有効成分を十分に沈澱除去でき、し
かも有効成分のほぼ全量を上清に残せるため好ましい。

該上清を減圧乾固すると、紅花粗エキス（Ｂ）約６０部
が得られる。

次に逆用系液体クロマトグラフィーによる分取であるが
、該紅花粗エキス（Ｂ）６０部を水６０部で溶解し濾過
して、逆用系液体クロマトグラフィー用充填剤２０００
部を充填したカラムに注入し、溶出力の弱い水等を移動
相として流した時保持されない画分のみを回収し；斌圧
乾固して、紅花工４】ス約１６部を得る。

逆用系液体クロマトグラフｆ−の充填剤はＣ８夕、イブ
やＣＩ８タイプ等が挙げられるが、分収用破砕型Ｃ８タ
イプのものが、保持力が適当で、水のみの移動相で有効
成分を溶出できるため工業的に最も有利である。

本発明に係る紅花エキスのもう一つの製造方法は、逆相
系液体クロマトグラフィーのかわりにシリカゲルを吸着
剤として利用し、濃縮精製する方法である。

即ち、分別沈澱により濃縮された紅花粗エキス（Ｂ）６
０部を水溶性有機溶剤約１０００部に再溶解し、吸着剤
約２００部を添加して、室温で約１時開綿やかに攪拌し
た後、シリカゲルを取り出し、水約５００部で溶離する
画分を回収し、減圧乾固することにより、紅花エキス約
１２部を得る。

吸着剤としては、シリカゲル、活性炭、活性アルミナ、
ケイソウ土等が挙げられ、−力水溶性有機溶剤としては
、アルコール類、アセトン等が挙げられるか、シリカゲ
ルとアセトンを組合せてこの操作を行なえば、有効成分
を選択的にしかも良好に吸脱着でき、しかも回収率が高
いため最も好ましい。

上記した分別沈澱及び、逆用系液体クロマトグラフィー
分取士たは吸着剤を用いた精製工程で多糖類、サフラワ
ーイエロー等の非有効成分及び、血小板凝集抑制作用成
分及び血液凝固抑制作用成分等の副作用成分が除去され
る。

本発明に係る紅花エキスは、水溶性有機溶剤で分別沈澱
後の紅花粗エキス（Ｂ）をざらに分画する時、最も極性
の高い画分に濃縮されて回収される。この特性を考慮す
れば、該紅花粗エキス（Ｂ）をざらに濃縮精製する方法
としては、本発明に係る逆相系液体クロマトグラフィー
やシリカゲル吸着剤を利用する方法以外にも、より一般
的にはカラムクロマトグラフィー、ゲル濾過法、イオン
交換樹脂法、溶媒分配法、あるいはこれらの手段の組合
せ等当該分野で汎用される多くの分別精製方法でも達成
し得る。

本紅花エキス中の血管拡張作用物質は、水酸基、カルボ
キシル基、アミノ基等の極性基を持つか、あるいは配糖
体であり、比較的極性が高く、少なくとも５種以上の物
質から構成されていると推定される。

本発明の紅花エキスからなる血管拡張剤は、医薬品とし
て臨床的には高血圧治療薬、四肢循環不全の治療薬及び
脳循環改善薬等として使用できる。投与方法は経口、非
経口のいずれの手段であってもよい。投与量は患者の年
齢、体重、疾患の程度によっても異なるが、大人１回当
たり、経口投与の場合、０．５〜５００ｍｇ程度、非経
口投与の場合０゜００５〜２５ｍｇ程度が適当であり、
予防用および治療用の両方に用いることができる。通常
、上記有効量の紅花エキスに薬理学的に許容される媒体
、担体、賦形剤、結合剤、保存剤、安定剤、香味剤、着
色剤等を配合して通常用いられる経口及び非経口投与形
態に適合する単位投与剤型に製剤されるが、適宜、他の
血管拡張剤等信の薬剤を配合してもよい。

また、本発明に係る紅花エキスは、紅花色素か実質的に
除去されており塗布部位や衣服等を汚すことが無いため
、皮膚外用剤としても有用であり、霜やはや凍傷等の予
防、治療の為の外用医薬品、および育毛剤、浴用剤、化
粧料等に軟膏、クリーム、ローション、乳化液、粉末等
の剤型で用いることが可能である。皮膚外用剤中の紅花
エキスの配合量はｏ、ｏｏｉ〜２０重量％程度が好まし
い。

該皮膚外用剤には紅花エキスの他に通常化Ｍ、ｆＥ↓、
医薬品等の皮膚外用剤に用いられる成分例九ば油分、水
、保湿剤、増粘剤、防腐剤、金属イオン封ｔＱ剤、紫外
線吸収剤、薬剤、生薬、分散剤、香ｔｚ［等を必要に応
じて本発明の効果を損なわない範囲で配合できる。

更に本発明に係る紅花エキスは安全性が高いことから、
健康食品等として予防的に用いることも可能である。

［実施例１ 次に、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明する。本
発明はこれにより限定されるものではない４）実施例に
先立ち、各実施例と比較例で採用した血管拡張作用、血
小板凝集抑制作用及び血液、凝固抑制作用の試験法につ
いて説明する。っ（血管拡張作用の試験法） 健康な日本臼色神ウサギ（雄、体重２．５〜・３．５ｋ
ｇ）より大動脈を摘出し、ラセン状標本を作製した。こ
れをタイロード液を満たし？：１０ｍ１の標本Ｊｆｊ中
にセルフ、インを用いて懸垂した。Ｐ！、本槽内のタイ
ロード液は３７℃に保ち、９５％０２と５％ＣＯ２の混
合ガスを供給した。これに被験物質０　、１　ｍＯ−を
滴下し、滴下後の等張性収縮ないし弛緩をポリグラフシ
ステム（日本光電製）により測定しＬ：。

又、ノルアドレナリン１０−””　１０　””　ｍｏｌ
やＫ　Ｃ１１０−５〜１０−’　ｍｏｌにて予め収縮を
惹起した状態で被験物質０．１ｍ（Ｌを滴下し、その後
の作用も調べた。被験物質の作用程度は、得られたチャ
ート上の収縮或は弛緩の幅から、対照としたノルアドレ
ナリン等の作用と対比しＴ評価した。判定は、著しく拡
張を＋＋＋、明らかに拡張を＋＋、僅かに拡張を＋、拡
張作用無しを−として、４段階で評価した。

（血小板凝集抑制作用の試験法） 健康な日本−色種ウサギ（雄、体重２．５〜３．５ｋｇ
）より採取した血液を９５０ｒｐｍで１５分間遠心分離
し、上層の白色懸濁部分を分取して、これを多血小板血
漿とした。残った血液を更に３００Ｏｒｐｍで１０分間
遠心分離し、上清を分取して、これを乏血小板血漿とし
た。予め金属製回転子を入れた血小板凝集測定用試験管
に多血小板血漿と乏血小板血漿をそれぞれ２５０μｌ採
り、血小板凝集針（理化学電気工業製）にセットして透
過率を０および１００に調整した。多血小板血漿側に被
験物質１２．５μ店を添加して３７℃に１分間保ち、次
に凝集惹起物質として２０μＭＡＤＰ、２０μｇ／＋ｎ
ｌｌコラーゲン懸濁液又は５ｍＭアラキドン酸を２５μ
色添加し、透過率の変化を５分間記録した。被験物質及
び対照の凝集曲線のベースラインと最大凝集の記録紙上
の距離（＋ｎｏ＋）を測定し、次式により凝集抑制率（
％）を算出した。

凝集抑制率（％）＝ 被験物質の最大〆凝集（ｍｍ） １００−　　　　　　　　　　−−　Ｘ　１００対照の
最大凝集（ｍ＋ｎ） 判定は、凝集抑制率１００〜８０％を＋＋＋、８０〜５
０を＋＋、５０〜２０％を十及び２０〜０％を−として
、４段階で評価した。

（血液凝固抑制作用の試験法） （１）活性部分トロンボプラスチン時間測定試験（ＡＰ
ＴＴ） ＡＰＴＴ試薬（血小板第３因子試薬、アクチン）１００
μ店を小試験管に採り、３７”Ｃて１分間保った。これ
に被験物質２５１Ｊｌ）−と乏血小板血漿１２５μＬを
加え、史に３７℃で２分間保った。これに、予め３７℃
加温しておいた２０ｍＭ　ＣａＣ！２水溶液１００μＬ
を添加し３７℃に保ちながら静かに混和した。

２０ｍＭ　ＣａＣｌ２水溶液添加からフィブリン析出、
トての時間を測定した。対照として被験物質と同じ溶媒
について同様に測定した。

（２）プロトロンビン時間側定試！９（ＰＴ）被験物質
５０μＬと乏血小板血漿２００μ店を小試験管に採り、
３７℃で２分間加温した。これにＰＴ試薬（シンプラス
チン）２００ｕｌを添加し、３７℃に保ちながらフィブ
リン析出までの時間を測定した。対照として被験物質と
同じ溶媒について同様に）同定した。

ＡＰＴＴ、　ＰＴ共に次式より相対時間（％）を算出し
た。

被験物質の測定値（秒） 相対時間（％）＝　　　　　　　　　　　　Ｘ１００対
照の測定値（秒） 判定は、相対時間１５０％以上を＋＋＋、１５０〜１２
０を＋＋、１２０〜１００％を十及び１００％以下を−
として、４段階で評価した。

実施例１ 乾燥紅花１ｋｇを、７０℃に加熱した水１０Ｑ、で、１
時間ずつ３回抽出し、熱時に濾過した後０．７１まで減
圧濃縮した。これにアセトン３．５Ｌを攪拌しながら徐
々に添加し、添加後１時間静置すると、タール状の沈澱
が生じた。上清を減圧乾固したところ、黄褐色粉末５９
ｇを得た。これに水を加えて１００ｍ１ｌとして、加温
しながら溶解し、放冷後２５００ｒｐｍで１０分間遠心
分離して不溶物を沈澱除去した。得られた上清のうち５
０ｍＱ、を、粒径４４〜６３μｍ破砕型逆相系Ｃ８充填
剤７５０　ｇからなる内径５ｃｍ　、長き５０ｃｍのス
テンレススチール製カラムに注入し、移動相として水を
毎分５００　Ｍで流し、ｋ′＝０〜２の殆ど保持されな
い画分のみを回収した。次にメタノール３．ＯＬをカラ
ムに流して洗浄した後、再び移動相を水として、同様の
操作で残りの上清５０ｍＮを処理した。回収した画分を
合わせて減圧乾固したところ、淡黄色の紅花エキス粉末
１６ｇを得た。

実施例２ 実施例１の紅花熱水抽出、分別沈澱の操作により得られ
黄褐色粉末５９ｇにアセトン１０００＋ｎｉを加えて溶
解し、粒径４４〜６３μｍ破砕型シリカゲル２００　ｇ
を添加して、室温で１時間緩やかに攪拌し六二後、３０
分間静置した。上清を除去し、水５００＋ｄを加えて１
時間緩やかに攪拌した後、３０分間静置した。上清の水
溶液を回収し、減圧乾固したところ淡黄色の紅花エキス
粉末１２ｇを得た。

比較例１ 乾燥紅花１ｋｇを、水１０Ｑ、にて、７０℃で１時間ず
つ３回抽出し、熱時に濾過して、減圧乾固したところ、
暗黄色で吸湿性の高い紅花粗エキス３２７ｇを得た。

比較例２ 乾燥紅花１．ｋｇを、５０％水性エタノール１０Ｑ、に
て、７０℃で１時間ずつ３回抽出し、熱時に濾過して、
減圧乾固したところ、暗黄色で吸湿性の高い紅花粗エキ
ス３５６ｇを得た。

比較例３ 乾燥紅花１ｋｇを、エタノール１０１にて、７０℃で１
時間ずつ３回抽出し、熱時に濾過して、減圧乾固したと
ころ、暗黄色の紅花粗エキス３１２ｇを得た。

実施例１および２で得られた紅花エキスをｄｄＹ系マウ
ス（ｌｌｔｉ雄４〜５週齢、体重２０〜２３ｇ）に投与
した時のＬＤｓｏ値を第１表に示す１つ第１表から明ら
かなように本発明に係る紅花エキスは安全性の高いもの
である。

（以下余白） 実施例１．２及び比較例１．２．３で得られた紅花エキ
スと紅花粗エキスについてそれぞれ血管拡張作用、血小
板凝集抑制作用及び血液凝固抑制作用を評価した結果を
第２表と第３表に示す。

第２表　血管拡張作用の試験結果 第３表　血液凝固抑制作用泣び血液凝固抑制第２表から
明らかなように、本発明による紅花エキス（実施例１．
２）は、従来汎用されてきた紅花粗エキス（比較例１．
２．３）に比べて著しく強い末梢血管拡張作用を示し、
従来の和エキスの約１７２０又はそれ以下の投与量で同
程度の作用を有していた。

又、第３表から明らかなように、本発明の紅花エキス（
実施例１．２）は、従来の紅花粗エキス（比較例１．２
．３）とは異なり、血小板凝集抑制作用及び血液凝固抑
制作用を全く示さなかフた。なお比較例３の紅花粗エキ
スから、血小板凝集抑制作用物質としてアデノシンが最
高で０．１４％検出された。

実施例３　注射液（静脈内投与用） 実施例１で得た紅花エキスに５ｍｇ／ｍｔの濃度になる
ように生理食塩水（日本薬局方収載量）を加えて溶解し
、除菌後１　ｍｔのアンプルに充填溶閉し加熱減菌して
、血管拡張剤とした。

実施例４　錠剤 実施例２で得た紅花エキスを除菌後、紅花エキス１００
ｍｇと微結晶セルロース５０ｍｇとを含有する錠剤を常
法に従って調製し、シロップゼラチン沈降性炭酸カルシ
ウムで糖衣をほどこし、血管拡張剤とした。この錠剤は
１回の投与量１〜３錠で使用される。

実施例５　軟膏 実施例２で得た紅花エキスを除菌後、紅花エキス１０ｇ
と吸水軟膏（日本薬局方収載量）　９０ｇを均一に練り
合わせて軟膏を得た１、この軟膏は１日１１−〜５回患
部に塗布される。

実施例６　乳液 （１）ステアリン酸　　　　　　　　　２．０重量％（
２）セタノール　　　　　　　　　　１．５（３）ワセ
リン　　　　　　　　　　　３．０（４）ラノリンアル
コール　　　　　　２．０（５）流動パラフィン　　　
　　　　１０．０（６）ポリオキシエチレンモノオレイ
ン酸エステル（１０Ｅ、Ｏ，）　　　　　　２．０（７
）香料　　　　　　　　　　　　　０．５（８）防腐剤
、酸化防止剤　　　　　適量（９）グリセリン　　　　
　　　　　　３．０（１０）プロピレングリコール　　
　　　５．０（１１）　トリエタノールアミン　　　　
　１．０（１２）紅花エキス　　　　　　　　　　２．
０（１３）精製水　　　　　　　　　　　残余製法 （１３）に（９）　（１０）　（１１）　（１２）を加
え、７０℃で加熱り昆合した。（１）　（２）　（３）
　（４）　（５）　（６）　（７）　（８）を加熱融解
して７０℃とした。この油相成分に、前述した水相成分
を徐々に攪拌しながら加えた後、ホモミキサーにより均
一に乳化した。乳化後熱交換器により３０℃まで冷却し
て乳液を得た。

［効果１ 本発明に係る紅花エキスは、従来汎用されていた紅花租
エキスと比べて著しく強い血管拡張作用を有しており、
従来のものの約１７２０又はそれ以下の投与量で同程度
の作用が発現するものである。

ま−た、本発明の紅花エキスは従来の紅花粗エキスとは
異なり、血小板凝集抑制作用及び血液凝固抑制作用等の
副作用成分を含有しないものである。

また本発明の製造方法によれば、血小板凝集抑制作用及
び血液凝固抑制作用等の副作用成分が無く、血管拡張作
用が著しく強い紅花エキスを工業的に有利な方法で得る
ことができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は紅花エキス１ｍｇ／ｍ！水溶液の紫外−可視部
吸光度曲線を示すものである。第２図はカラム：ＯＤＳ
（５μ）、４φ×　２５０ｍｍ　　、移動相：酢酸／ア
セトニドυル／水＝　０．１　／　１　／９８．９、流
速：１．０ｍ１ｊ／ｍｉｎ、検出器：ＲＩ又はＵ　Ｖ　
（２５４ｎｍ）の条件の高速液体クロマトグラフィーに
よる測定における紅花エキスのクロマトグラムである。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）カラム：ＯＤＳ（５μ）４φ×２５０ｍｍ、移動
   相：酢酸／アセトニトリル／水＝０．１／１／９８．９
   、検出器：ＲＩ又はＵＶ（２５４ｎｍ）の条件の高速液
   体クロマトグラフィーによる測定においてｋ′＝０．５
   〜６のみに主ピークの認められる紅花エキス。
2. （２）紅花の熱水抽出濃縮液に水溶性有機溶剤を加えて
   分別沈澱し上清を得る。該上清の濃縮物を水に再溶解し
   て逆相系液体クロマトグラフィー用カラムに注入し移動
   相として水を通じた時保持されない画分のみを回収する
   か、又は該上清の濃縮物を水溶性有機溶媒に再溶解して
   吸着剤を添加攪拌した後吸着剤を回収し水で溶離する画
   分のみを回収することを特徴とする紅花エキスの製造方
   法。
3. （３）カラム：ＯＤＳ（５μ）４φ×２５０ｍｍ、移動
   相：酢酸／アセトニトリル／水＝０．１／１／９８．９
   、検出器：ＲＩ又はＵＶ（２５４ｎｍ）の条件の高速液
   体クロマトグラフィーによる測定においてｋ′＝０．５
   〜６のみに主ピークの認められる紅花エキスからなる血
   管拡張剤。