JPS63126894A - カルシトニン遺伝子関連ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 皮呈上皇肌■分互 本発明は、カルシウム代謝異常、心臓病、潰瘍などの治
療薬または脳循環改善薬などの医薬として有用な新規ニ
ワトリカルシトニン遺伝子関連ペプチド（ｃｈｉｃｋｅ
ｎ　　Ｃａ１ｃｉｔｏｎｉｎＧｏｎｅ　　Ｒｅ１ａｔｅ
ｄ　　ＰｓｐｔｉｄｅＨ以下ｃ−ＣＯＲＰという）に関
する。

ｌ米立挟歪 最近、ニワトリのＤＮＡ構造解析により、Ｃ−Ｃ０ＲＰ
のアミノ酸順序が推定されている（ＦＥＢＳ　　Ｌｅｔ
ｔｅｒｓ、Ｖｏｌ、２０３．Ｎｏ。

１．７−１０．Ｊｕｌｙ　　１９８６）。

が　゛しよ゛と　る。　占 しかしながら、ｃ−ＣＧＲＰが単離もしくは合成された
報告はなく、どのような作用あるいは活性を有している
か否か不明であり、このｃ−ＣＯＲＰを合成し、その生
物活性を公知のＣ０ＲＰと比較し、その有用性を探索す
ることは、医学上重要なことである。

口　占を”するための 本発明者らは、このｃ−ＣＯＲＰを合成し、その生物活
性について比較した結果、既知のヒトＣ０ＲＰ　（ｈ−
ＣＯＲＰ）　　（Ｎａ　ｔ　ｕ　ｒ　ｅ、　　３０８（
１９）、７４６　７４Ｂ（１９８４）、Ｎｅｕｒｏｐｅ
ｐｔｉｄａｓ、　　４．　４２５−４３４　　（１９８
４）　　、Ｎａｔｕｒｅ、　　３１３　　（３）、　　
５４−５６（１９８４））より極めて血清カルシウムお
よびリン低下作用活性が強く、しかもその活性発現の持
続性の優れていることを知った。

本発明は上記の知見に基づいて完成されたものであり、
その目的とするところは、ｃ−ＣＯＲＰを提供するもの
である。

即ち、本発明は、式 ％式％ で表されるペプチドまたはその塩である。

本発明のペプチド〔ｌ〕　（以下単に「ｃ−ＣＧＲＰＪ
と称することがある）は、公知のペプチド合成の常法手
段に従って合成できる。液相法によって実施する場合に
は、例えば、Ｃ末端のフェニルアラニル基のカルボキシ
ル基をアミド基に転化し、式〔１〕で示されるアミノ酸
順序に個々の保護されたアミノ酸および（または）保護
された低級ペプチドを縮合し、縮合反応の最終段階でＬ
−システイニル基のメルカプト基の保護基およびその他
の側鎖の官能基の保護基を酸分解により脱離し、メルカ
プト基を酸化してジスルフィド橋を形成することにより
得られる。

縮合反応自体は、ペプチド合成のための常法手段に従っ
て、保護基の脱着、縮合反応を繰り返すことにより行わ
れる。即ち、本ペプチド〔１〕の原料ならびにすべての
中間体の製造において使用される各種の保護基は、ペプ
チド合成において既知なもの、例えば、加水分解、酸分
解、還元、アミツリシス、ヒドラジツリシスなどのよう
な既知手段によって容易に脱離することのできる保護基
が用いられる。このような保護基はペプチド合成化学の
分野の文献ならびに参考書に記載されている。

本発明においては、α−アミノ基の保護に１−ブチルオ
キシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基、ｐ−
メトキシベンジルオキシカルボニル基を用い、側鎖のア
ミノ基、即ちリジンの８−アミノ基の保護にベンジルオ
キシカルボニル基、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニ
ル基を用い、α−カルボキシル基の保護にメチルエステ
ル基、ベンジルエステル基を用い、側鎖のカルボキシル
基、即ちアスパラギン酸の側鎖カルボキシル基の保護に
ベンジルエステル基を用い、セリンおよびスレオニンの
水酸基の保護にベンジル基を用い、アルギニンのグアニ
ジル基中のアミノ基の保護にメシチレン−２−スルホニ
ル基またはトシル基を用い、システィンのメルカプト基
の保護基にｐ−メトキシベンジル基またはアセトアミド
メチル基を用いるのが好ましい。

本ペプチド〔１〕の合成においては、個々のアミノ酸お
よび（または）低級ペプチドの縮合は、例えば、保護さ
れたα−アミノ酸および活性化末端カルボキシル基をも
つアミノ酸または低級ペプチドと遊離のα−アミノ基お
よび保護された末端カルボキシル基をもつアミノ酸また
は低級ペプチドとを反応させるか、あるいは活性化α−
アミノ基および保護された末端カルボキシル基をもつア
ミノ酸または低級ペプチドと′ｆ１離の末端カルボキシ
ル基をもつアミノ酸または低級ペプチドとを反応させる
ことにより実施することができる。

この場合、カルボキシル基は、例えば、酸アジド、酸無
水物、酸イミダゾリドまたは活性エステル、例えば、シ
アノメチルエステル、ｐ−ニトロフェニルエステル、Ｎ
−ヒドロキシコハク酸イミドエステルなどに変換するこ
とによって活性化することができる。また、カルボジイ
ミド、例えばＮ、　Ｎ’−ジシクロへキシル−カルボジ
イミド（ＤＣＣ）、Ｎ−エチル−Ｎ’−３−ジメチルア
ミノプロピル−カルボジイミド、Ｎ、Ｎ’　　−カルボ
ニル−ジイミダゾールなどの縮合剤を使用して反応させ
ることによって活性化することができる。

本発明において好ましい縮合方法は、アジド法、活性エ
ステル法、混合酸無水物法およびカルボジイミド法であ
る。縮合の各段階ではラセミ化が起こらない方法または
ラセミ化が最小になる方法を用いるのが望ましく、好ま
しくはアジド法、活性エステル法、Ｗｕｎｓｃｈ法（Ｚ
、Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｃｈ、、２１ｂ、４２６　（１９
６６））またはＧｅｉｇｅｒ法（Ｃｈｅｍ、Ｂｅｒ、、
１０３．７８８　（１９７０））などを用いる。

縮合順序は式（１）で示されるアミノ酸順序であれば、
如何なる順序からも合成し得るが、Ｃ末端側から順次ア
ミノ酸および（または）低級ペプチドを連結させるのが
好ましい。

かくして得られる鎖状保護ペプチドから目的のペプチド
（１）を得るには、先ず上記鎖状保護ペプチド、即ち保
護されたω−アミノ基、側鎖カルボキシル基、水酸基、
グアニジノ基およびメルカプト基を有するヘプタトリア
コンタペプチドアミドの保護基が脱離される。これらの
保護基は、好ましくは、酸分解、例えばトリフルオロメ
タンスルホン酸、無水弗化水素などによる方法によって
一段階で脱離され、遊離メルカプト基を有するヘプタト
リアコンタペプチドアミドが得られる。

次いで、このペプチドアミドは酸化によりジスルフィド
橋が形成され、目的のペプチド〔１〕が得られるのであ
るが、このジスルフィド橋の形成は通常、水中の大気酸
素、氷酢酸中の沃素、有機溶媒中のショートエタン、水
溶液中のフェリシアン化カリウムなどで酸化することに
よって行われる。

本発明においては、上記の液相法によるペプチド合成法
の他に、固相法によるペプチド合成法を一部または全部
利用してペプチド〔１〕を合成することができる。

例えば、１番目から３７番目までのペプチドフラグメン
トを固相法により合成することにより保護されたヘプタ
トリアコンタペプチド結合樹脂が得られる。これらの保
護基および樹脂は、公知の方法、例えば、トリフルオロ
メタンスルホン酸、無水弗化水素などによる方法によっ
て一段階で脱離され、遊離メルカプト基を有するヘプタ
トリアコンタペプチドアミドが得られる。このペプチド
アミドは前記の液相法で述べたと同じ方法でジスルフィ
ド橋を形成することにより目的のペプチド〔１〕が得ら
れる。

上記の固相法で用いられる樹脂としては、固相法で通常
用いられる樹脂、例えばベンズヒドリルアミン樹脂、ｐ
−メチルベンズヒドリルアミン樹脂などが挙げられる。

この樹脂は官能基当量や架橋度の違いによって所望の性
状を有する樹脂が入手可能であり、市販品を購入するこ
ともできる。

上記の固相法においては、樹脂に式〔１〕で示されるア
ミノ酸順序にＣ−末端のアミノ酸から１番目のアミノ酸
までを順次一つずつ縮合させて行う、該アミノ酸の官能
基は公知の方法により保護基で保護される。上記の保護
基の例としては、上記で述べた通りである。

上記の固相反応に際しては、樹脂を反応器に入れ、ジク
ロロメタン、クロロホルム、ジメチルホルムアミド、ベ
ンゼンまたは樹脂を膨潤させる溶媒を樹脂１ｇに対し、
溶媒２〜２０ｍ１の割合で添加する。これに、予め別の
反応器で、樹脂中のアミノ基１当量に対し１〜６当量の
Ｂｏｃ−アミノ酸とＤＣＣを反応させ、得られた対称酸
無水物を副生したジシクロヘキシル尿素（Ｄ　ＣＵ）よ
り分離して、上記樹脂の入った反応器に加える。縮合剤
（ＤＣＣ）の使用量はＢｏｃ−アミノ酸１当量に対し、
０．５から３当量を用いる０反応は通常５〜６０分行わ
れる。

各工程で得られたＢｏｃ−アミノ酸−樹脂またはＢｏｃ
−ペプチド−樹脂の一部を採取し、常法（Ｔ、Ｆａｉｒ
ｗｅｌｌ、ｅｔ　　ａｌ、、Ｂｉ。

ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２２．２６９１　　（１９８３）
〕に従い反応したＢｏｃ−アミノ酸量を測定してカップ
リング量を求めればよい。

次に、α−アミノ基の保護基であるＢｏｃをトリフルオ
ロ酢酸の如き酸で脱離して、順次縮合反応を遂行すれば
よい、上記の固相法によるペプチド合成は自動固相合成
機を用いるが、手動法で遂行してもよい、これらの操作
は全て窒素ガス気流下で行うのが望ましい。

このようにして１番目から３７番目までのペプチドフラ
グメントが結合した樹脂が得られる。

このようにして得られた保護されたヘプタトリアコンタ
ペプチド結合樹脂は上記で述べた通り、無水弗化水素な
どにより一段階で保護基と樹脂が脱離され、′ｆ！離メ
ルカプト基を有するヘプタトリアコンタペプチドアミド
が得られる。

前記遊離メルカプト基を有するヘプタトリアコンタペプ
チドアミドは前記の通りジスルフィド橋を形成すること
により目的のペプチド〔１〕が得られる。

このようにして得られたペプチド（１）は、ペプチドま
たは蛋白質を精製する公知の手段によって分離精製する
ことができる０例えば、セファデックスＧ−２５、セフ
ァデックスＧ−５０、セファデックスＬＨ−２０などの
ゲル濾過剤を用いるゲル濾過法、カルボキシメチルセル
ロース、その他のイオン交換樹脂などを用いるカラムク
ロマトクラフィー、高速液体クロマトグラフィーなどに
より行うことができる。

本発明の新規ペプチド〔１〕は、その方法の条件により
塩基またはその塩の形で得られる０例えば、酢酸などの
公知の有機酸との塩を形成することができる。

尚、本明細書中に記載の略記号は、次の意味を有する。

ＡｌａＨＬ−アラニン Ｃｙｓ；Ｌ−システィン ＡｓｎＨＬ−アスパラギン Ｔｈｒ；Ｌ−スレオニン ＶａｌＨＬ−バリン Ｈｉｓ；Ｌ−ヒスチジン ＡｒｇＨＬ−アルギニン Ｌ　ｅ　ｕ　；　Ｌ−ロイシン Ａ３１）；Ｌ−アスパラギン酸 Ｐ　ｈ　ｅ　；　Ｌ−フェニルアラニンＳ　ｅ　ｒ　；
　Ｌ−セリン Ｇ１ｙＨグリシン Ｌｙｓ；Ｌ−リジン Ｐｒｏ；Ｌ−プロリン ＢｏｃＨｔ−ブチルオキシカルボニル ＣＩ−ＺＨｐ−クロロベンジルオキシカルボニル１３ｚ
ｌＢベンジル ＭＢｚｌＨｐ−メトキシベンジル Ｔｏｓ；）シル ０ＢＺＩ；ベンジルエステル ＴＦＡ；）リフルオロ酢酸 エーテル；ジエチルエーテル ＤＭＦ、Ｎ、Ｎ’　　−ジメチルホルムアミドＤＭＳＯ
；ジメチルスルホキサイド Ｍ　ｅ　ＯＨＨメタノール ＤＣＭ、ジクロロメタン ＤＣＣ；Ｎ、Ｎ’　　−ジシクロへキシル−カルボジイ
ミド ＤＩＥＡ、ジイソプロピルエチルアミンＨＯＢｔ；ｌ−
ヒドロキシベンゾトリアゾールＭＢＨＡ樹脂；ｐ−メチ
ルベンズヒドリルアミン樹脂 光里皇四米 血清カルシウムおよびリン低下作用 〈活性測定法〉 ｃ−ＣＧＲＰおよびｈ−ＣＧＲＰ各々８０ｐｇを０．１
％牛血清アルブミン含有クエン酸緩衝液（ｐＨ６，５）
Ｃ以下単に溶解液と称する）１ｍｌに溶し、ウィスター
系ラット（８０−９０ｇ）１群５−６匹に８０ｇｇ／ｋ
ｇになるよう尾静脈より投与し、３０分および６０分後
に腹部下行大動脈より採血し、血清カルシウム濃度を原
子吸光より測定し、また血清リン濃度はゴールデンベル
クらの方法（Ｃ１ｉｎ、Ｃｈｅｍ、、１２．８７１−８
８２　（１９６６））により測定した。

く結果〉 本発明品であるｃ−ＣＯＲＰ８０μｇ／ｋｇを投与（−
・−）すると、第１図に示す通り、血清カルシウムがコ
ントロール群（溶解液投与群）（−Ｘ−）に比べ２０％
以上も低下した。

またｈ−ＣＯＲＰＯＲ群＜−０−＞と比較しても有意に
低下し、その活性発現時間も有意に延長した。　一方、
第２Ｕ！Ｊに示す通り、本発明品のｃ−ＣＯＲＰＯＲ群
（−・−）は血清リンがコントロール群＜　−ｘ　−＞
に比べ約３０％も低下し、ｈ−ＣＯＲＰ投与群（−〇−
）と比較しても有意に低下し、その活性発現時間も有意
に延長した。

上記の通り、本発明のペプチド〔１〕はｈ−ｃＧＲＰよ
り血清カルシウムおよびリン低下作用活性が強く、しか
もその活性発現の持続性が優れており、カルシウム代謝
異常、心臓病、潰瘍などの治療薬または脳循環改善薬な
どとして有用である。

叉施勇 次に実施例を挙げて本発明の製造例を具体的に説明する
。

実施例　１ ｃｍＣｏＲＰの製造 保護−ｃ−ＣＧＲＰ　（１３７）−ＭＢＨＡ樹脂、即ち
Ｈ−Ａｌａ−Ｃｙｓ　（ＭＢｚ　Ｉ）−Ａｓｎ−Ｔｈｒ
　（Ｂｚ　１）−Ａｌａ−Ｔｈｒ　（Ｂｚ　１）−Ｃｙ
ｓ　（ＭＢｚ　１）−Ｖａ　１−Ｔｈｒ　（Ｂｚｌ）　
−Ｈｉｓ−Ａｒｇ　（Ｔｏｓ）−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｓ
ｐ　（ＯＢｚ　１）−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−３ｅｒ　　（Ｂ
ｚｌ）−Ａｒｇ　　（Ｔｏｓ）−３ｅｔ　　（Ｂｚｌ）
−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａ　　１−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（ＣＩ
−Ｚ）−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｖａ　　１−Ｐｒｏ
−Ｔｈｒ　　（Ｂｚ　　１）−Ａｓｎ−Ｖａ　　ｌ　−
Ｇｌｙ−３ｅｒ　　（Ｂｚ　　１）−Ｌｙｓ　　（ＣＩ
−Ｚ）−Ａｌ　ａ−Ｐｈｅ−ＭＢＨＡ樹脂１．４７ｇに
アニソール３ｍＬジメチルスルフィド３ｍ！、エタンジ
チオール０．６ｍｌを加え、これに無水弗化水素３０ｍ
１を加え、０°Ｃで１時間攪拌した。

反応後、無水弗化水素を減圧下留去後、残渣をエーテル
で洗浄し、これに１０％酢酸５０ｍ１を加え、ペプチド
を抽出した。抽出液をＤｏｗｅ　ｘＷＧＲのカラム（２
，５Ｘ１５ｃｍ）に通し、１Ｍ酢酸１６０ｍ１で溶出し
た。得られた溶出液を凍結乾燥し、５２５ｍｇの白色粉
末を得た。この粉末１５０ｍｇを８Ｍ尿素、５ｍＭジチ
オスライトールを含む５０ｍＭＮａ＝　ＨＰＯａｌ：Ｉ
ｋ街液（ｐＨ７，５）ｌＱｍｌに溶解し、室温で１時間
撹拌した。その後、５０ｍＭＮａｔ　ＨＰＣｌｍ　緩衝
液（ｐＨ７，５）１１２５ｍｌで希釈し、２０ｍＭＫｓ
　Ｆ　ｅ　（ＣＮ）　ｈ水溶液８ｍｌを加えた。この溶
液をＣＨＰ−２０Ｐ　（三菱化成工業社製）のカラム（
２，５Ｘ１０ｃｍ）にチャージし、５％アセトニトリル
含有０．１Ｎギ酸水溶液５００ｍ１〜４５％アセトニト
リル含有０．１Ｎギ酸水溶液５００ｍ１の直線型濃度勾
配によるグラジェント溶出を行った。溶出液をｌＱｍｌ
づつ分画し、その１００μｌを使用してフォリン・ロー
リ−法により発色させ、７５０ｎｍで測定し、フラグ２
５フ４９〜６０番目を集め、凍結乾燥して白色粉末７５
　ｍ　ｇを得た。これをＣＭ−）ヨパール６５０Ｍのカ
ラム（２゜５ｘ５ｃｍ）にチャージし、０゜ＩＮ酢酸水
溶液２５０ｍ１〜０．４Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（ｐ
Ｈ５＞２５０ｍ１の直線型濃度勾配によるグラジェント
溶出を行った。溶出液を７ｍｌづつ分画し、フラグ２３
フ３２〜４０番目を集め、凍結乾燥した。得られた白色
粉末を０゜１Ｍ酢酸に溶解し、５ｅｐｈａｄｅｘ　　Ｇ
−２５Ｆｉｎｅのカラム（２，６×３０ｃｍ）にチャー
ジし、０．１Ｍ酢酸で溶出した。溶出液を１０ｍ１づつ
分画し、フラグ９３フフ〜１３番目を集め、凍結乾燥し
て白色粉末１２．３ｍｇを得た。

これを下記の条件による逆相系高速液体クロマトグラフ
ィー（ＨＰ　Ｌ　Ｃ）により精製し、ｃ−ＣＧＲＰの精
製品６．１ｍｇを得た。

カラム、ＹＭＣ−ＧＥＬ　　ＯＤＳ　　Ｓ−５ＡＭｔｙ
ｐｅ　（２０ｍｍｌＤＸ２５０ｍｍ）緩衝液；０．１％
ＴＦＡ−アセトニトリル（アセトニトリルを３０分間に
２５〜３５％に変化させるグラジェント溶出） 流速；７ｍｌ／分 分取；約２５．８分に溶出されるピークを分取した。

本島の物性； ｐｉ；１０．２５以上 〔α〕富’　　−４４，６６’　（ｃ＝０．１０３．Ｏ
。

１Ｍ酢酸） アミノ酸分析値（６Ｎ塩酸加水分解）；Ａｓｐ４．８３
　（５）　、Ｔｈｒ３．６６　（４）、５ｅｔ２．６２
　（３）　、Ｐｒｏｏ、８６　（１）、Ｇｌｙ３．　９
５　　（４）　　、Ａｌａ４．　００　　（４）　　、
Ｖａ　　１３．　７３　　（４）　　、Ｌｅｕ２．　０
２　　（２）　　、Ｐｈｅ２．　８７　　（３）　　、
Ｌｙｓ２．　０８　　（２）　　、）（ｉｓｏ、　　９
４　　（１）　　、Ａｒｇ２．　００　　（２）　　、
シスチン１．１０　（１） アミノ酸分析値（トリプシン・アミノペプチダーゼによ
る酵素分解）； Ａｓｐｌ、１０　（１）　、Ａｓｎ４．０５　（４）、
Ｔｈｒ３．４０　（４）　、５ｅｒ３．０６　（３）、
Ｐｒｏｏ、９５　（１）　、Ｇ１３１３．９７　（４）
、Ａｌａ４．００　（４）、Ｖａｌ３．７５　（４）、
Ｌｅｕ２．１４　（２）　、Ｐｈｅ２．９０　（３）、
Ｌｙｓ２．２１　　（２）　、Ｈｉｓｓ、９８　（１）
、Ａｒｇｌ、９８　　（２）　、シスチン０．８８　（
１）（Ａｒｇはシトルリンにて定量） 上記の保護−ｃ−ＣＯＲＰ　（１−３７）−ＭＢＨＡ樹
脂は次の方法により得た。

固相合成装置としてＡｐｐｌｉｅｄ　　Ｂｉｏｓｙｓｔ
ｅｍｓ社製４３０−Ａペプチドシンセサイザーを用いて
固相合成を行った。

ＭＢＨＡ樹脂（Ａｐｐｌ　ｆｅｄ　　Ｂｉｏｓｙｓｔ　
ｅｍｓ社製、アミノ基０．６０ｍモル／ｇ）０゜８ｇを
ペプチド固相合成用反応容器に入れ、ＤＣＭ８ｍｌ　　
（４回、各１分）、６０％ＴＦＡ含有ＤＣＭｔ８液８ｍ
ｌ　　（２０分）　、ＤＣＭ４ｍｌ　　（３回、各１５
秒）　、ＤＩＥＡ１ｍｌ含有ＤＭＦ溶液３ｍｌ　（２回
、各１分）　、ＤＭＦ８ｍｌ　（６回、各４０秒）の順
に窒素ガス気流中攪拌下処理し、各々の処理後濾過した
。

一方、アミノ酸順序３７番目のＢｏｃ−Ｐｈｅ２ｍモル
をＤＣＭ５ｍｌに溶解し、アミノ酸活性化容器中でＤＣ
Ｃ（０，５Ｍ−ＤＣＭ溶液）２ｍｌを加え、５分間反応
させた０反応液を濾過して濃縮容器に移し、これにＤＭ
Ｆ３ｍｌを加え、窒素ガス気流下ＤＣＭを留去した。こ
れにＤＭＦ　３ｍｌを加え、前記の反応容器に移して２
５分間反応させた０次いで、ＤＣＭ８ｍｌ　　（，６回
、各２０秒）で洗浄、濾過してＢｏｃ−Ｐｈｅ−ＭＢＨ
Ａ樹脂を得た。

次に、前記のＢｏｃ−Ｐｈｅ−ＭＢＨＡ樹脂を反応容器
中ＤＣＭ８ｍｌ　　（４回、各１分）で洗浄し、濾過し
た。これに６０％ＴＦＡ含有４０％ＤＣＭ溶液８ｍｌを
加え、２０分間攪拌し、Ｂｏａ基を脱離した。得られた
樹脂をＤＣＭ４ｍｌ　　（３回、各１５秒）、ＤＩＥＡ
１ｍｌ含有ＤＭＦ溶液３ｍ１（２回、各１分）　、ＤＭ
Ｆ８ｍｌ　　（６回、各４０秒）で順次洗浄し、濾過し
た。

一方、アミノ酸順序３６番目のＢｏｃ−Ａｌａ２ｍモル
をＤＣＭ５ｍｌに溶解し、アミノ酸活性化容器中でＤＣ
Ｃ（０，５Ｍ−ＤＣＭ溶液）２ｍｌを加え、５分間反応
させた０次いで、Ｂｏｃ−Ｐｈｅの場合と同様に処理し
、ＤＭＦを加えて窒素ガス気流下で濃縮した後、反応容
器に移して２０分間反応させた０次いで、ＤＣＭ８ｍｌ
　　（６回、各２０秒）で洗浄、濾過してＢｏｃ−Ａｌ
ａ−Ｐｈｅ−樹脂を得た。

以下、順次３５番目から１番目までのアミノ酸をカップ
リングし、最後に６０％ＴＦＡ含有ＤＣＭ溶液にてＢｏ
ａ基を脱離し、ＤＣＭ、Ｄ　Ｉ　ＥＡおよびＤＭＦで順
次洗浄して、保護−ｃ−ＣＧＲＰ　（１−３７）−ＭＢ
ＨＡ樹脂を得た。

用いた保護アミノ酸は次の通りである。

アミノ酸　　保護アミノ酸　　　　　　使用量順序　　
　　　　　　　　　　　　　ｍや、。

３５　　　Ｂｏａ−Ｌｙｓ　　（ＣＩ−Ｚ）　　　２３
４　　　Ｂｏｃ−３ｅｒ　　（Ｂ２１）　　　　２３３
　　　Ｂｏｃ−Ｇｌｙ　　　　　　　　　２３２　　　
Ｂｏｃ−Ｖａｌ　　　　　　　　　２３１　　　Ｂｏｃ
−Ａｓｎ　　　　　　　　２Ｘ２３０　　　Ｂｏｃ−Ｔ
ｈｒ　　　　　　　　　’１２９　　　Ｂｏｃ−Ｐｒｏ
　　　　　　　　　２２８　　　Ｂｏｃ−Ｖａｔ　　　
　　　　　　２２７　　　Ｂｏｃ−Ｐｈｅ　　　　　　
　　　２２６　　　Ｂｏｃ−Ａｓｎ　　　　　　　　２
Ｘ２２５　　　Ｂｏｃ−Ａｓｎ　　　　　　　　２Ｘ２
２４　　　Ｂｏａ−Ｌｙｓ　　（Ｃ１−Ｚ）　　　２２
３　　　Ｂｏｃ−Ｇｌｙ　　　　　　　　　２２２　　
　Ｂｏｃ−Ｖａｌ　　　　　　　　　２２１　　　Ｂｏ
ｃ−Ｇｌｙ　　　　　　　　　２２０　　　Ｂｏｃ−Ｇ
ｌｙ　　　　　　　　　２１９　　　　Ｂｏｃ−３ｅｔ
　　（Ｂｚｌ）　　　　２１８　　　　Ｂｏｃ−Ａｒｇ
　　（Ｔｏｓ）　　　２ｘ２１７　　　　Ｂｏｃ−３ｅ
ｒ　　（Ｂｚｌ）　　　　２１６　　　　Ｂｏｃ−Ｌｅ
ｕ　　　　　　　　　　　’１１５　　　　Ｂｏｃ−Ｐ
ｈｅ　　　　　　　　　　　’１１４　　　　Ｂｏｃ−
Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）　　　２１３　　　　Ｂｏｃ−Ａｌ
ａ　　　　　　　　　　　２１２　　　　Ｂｏｃ−Ｌｅ
ｕ　　　　　　　　　　　２１　１　　　　Ｂｏｃ−Ａ
ｒｇ　　（Ｔｏｓ）　　　２Ｘ２１０　　　　Ｂｏｃ−
Ｈ４ｓ　　（Ｔｏｓ）　　　　２９　　　　Ｂｏａ−Ｔ
ｈｒ　　（Ｂｚ　　ｌ）　　　　　２８Ｂｏｃ−Ｖａ１
２ ７　　　　Ｂｏｃ−Ｃｙｓ　　（ＭＢｚｌ）　　　２６
　　　　Ｂｏｃ−Ｔｈｒ　　（Ｂｚ　　Ｉ）　　　　　
２５Ｂｏｃ−Ａｌａ２ ４　　　　Ｂｏｃ−Ｔｈｒ　　（Ｂｚｌ）　　　　　２
３　　　　Ｂｏｃ−Ａｓｎ　　　　　　　　　２Ｘ２２
　　　　Ｂｏｃ−Ｃｙｓ　　（ＭＢＺ　　＋）　　　２
１Ｂｏｃ−Ａｌａ２ 上記固相合成において、ＡＳｎ、Ａｒｇを用いた場合は
、２ｍモルのアミノ酸をＤＭＦ−ＤＣＭ（３：　１）混
合溶媒４ｍｌ中、ＤＣＣ溶液２ｍｌ、ＨＯＢｔ溶液（０
，５Ｍ−ＤＭＦ溶液）２ｍｌを加え、１分間反応させた
後、他のアミノ酸と同様に処理し、反応容器に移してカ
ンプリング反応をし、ＤＣＭ洗浄、濾過後、もう一度２
ｍモルアミノ酸をＤＭＦ−ＤＣＭ　（３：　１）混合溶
媒４ｍｌ中、ＤＣＣ溶液２ｍｌ、ＨＯＢｔ溶液（０，５
Ｍ−ＤＭＦ溶−ｉｆｆｌ）２ｍｌを加え、２５分間反応
させたものを反応容器に移してカンプリング反応させる
、いわゆるダブル・カップリング法で行った。

【図面の簡単な説明】

第１図はラットの血清カルシウムに対するｈ−ＣＯＲＰ
および本発明のｃ−ＣＯＲＰの効果を表す曲線を示し、
第２図はラットの無機リン値に対するｈ−ＣＯＲＰおよ
び本発明のｃ−ＣＯＲＰの効果を表す曲線を示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）、式 【アミノ酸配列があります】 で表されるペプチドまたはその塩。