JPS63129930A - ダイズの完熟種子を用いた不定胚誘導法 - Google Patents
ダイズの完熟種子を用いた不定胚誘導法Info
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- JPS63129930A JPS63129930A JP61275290A JP27529086A JPS63129930A JP S63129930 A JPS63129930 A JP S63129930A JP 61275290 A JP61275290 A JP 61275290A JP 27529086 A JP27529086 A JP 27529086A JP S63129930 A JPS63129930 A JP S63129930A
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Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明はダイズ完Ｆ！種子からの不定胚の誘導法に関す
るものであり、組織培養・細胞培養を利用した種苗の大
量増殖に関するものである。
るものであり、組織培養・細胞培養を利用した種苗の大
量増殖に関するものである。
従来の技術
ここに言う不定胚（ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｅｍｂ
ｒｙｏ）とは、植物の組織培養中にある一定の条件下で
、体細胞の一部が受精卵由来の胚（ｅｍｂｒｙｏ）
と同様の構造を持ったものに発育した場合に使われる言
葉であり、アメリカのＳ Ｌｅｗａｒｄ ら（１９５８
）がニンジンの胚軸の組織培養で観察、報告したのが最
初である。その後代が国の中田ら（１９６８）がタバコ
の朽培養で花粉粒からの不定胚誘導を報告して、層性生
殖器官（花粉粒）からの不定胚発生も知られるようにな
り、Ａｍｍ１ｒａｔｏ （１９８３）によれば現在まで
にすでに６０数種の植物で不定胚誘導の報告が知られて
いる。
ｒｙｏ）とは、植物の組織培養中にある一定の条件下で
、体細胞の一部が受精卵由来の胚（ｅｍｂｒｙｏ）
と同様の構造を持ったものに発育した場合に使われる言
葉であり、アメリカのＳ Ｌｅｗａｒｄ ら（１９５８
）がニンジンの胚軸の組織培養で観察、報告したのが最
初である。その後代が国の中田ら（１９６８）がタバコ
の朽培養で花粉粒からの不定胚誘導を報告して、層性生
殖器官（花粉粒）からの不定胚発生も知られるようにな
り、Ａｍｍ１ｒａｔｏ （１９８３）によれば現在まで
にすでに６０数種の植物で不定胚誘導の報告が知られて
いる。
ダイズは、主要な植物タンパク資源として、遺伝子ｍ換
えや細胞融合の重要なターゲットとなっている。
えや細胞融合の重要なターゲットとなっている。
多くの研究グループが組織や細胞からの不定胚Ｆ’ｉ、
Ｉの研究に取り組んで来たにもかかわらず、長年にわた
って成功しなかったが、１９８５年１２月にアメリカに
おける３つの研究グループ（コーネル大学、ケンタノキ
ー大学、アグリシーズ社）が相次いでダイズの未熟胚を
材料に用いることによって、そのカルスから不定胚を誘
導しうろことを示したつ 発明が解決しようとする問題点 上述の３つのグループの研究発表はいずれも培養の出発
点に受粉後２０〜２５日のダイズ未熟胚（ｉｍｍａ ｔ
ｕｒｅ ｅｍｂｒｙｏ）を用いたときにのみ成功してお
り、材料の供給が限定される困難を伴っていた。また、
培養に用いている培地組成も複雑で単純化される必要が
あった。
Ｉの研究に取り組んで来たにもかかわらず、長年にわた
って成功しなかったが、１９８５年１２月にアメリカに
おける３つの研究グループ（コーネル大学、ケンタノキ
ー大学、アグリシーズ社）が相次いでダイズの未熟胚を
材料に用いることによって、そのカルスから不定胚を誘
導しうろことを示したつ 発明が解決しようとする問題点 上述の３つのグループの研究発表はいずれも培養の出発
点に受粉後２０〜２５日のダイズ未熟胚（ｉｍｍａ ｔ
ｕｒｅ ｅｍｂｒｙｏ）を用いたときにのみ成功してお
り、材料の供給が限定される困難を伴っていた。また、
培養に用いている培地組成も複雑で単純化される必要が
あった。
問題点を解決するための手段
本発明者らは、これらアメリカのグループとは全く独自
にダイズの細胞培養による効率の良い不定胚誘導条件の
検討を重ねていたが、従来の方法とは異なる手法で、効
率的で再現性の高い方法の実現に成功した。
にダイズの細胞培養による効率の良い不定胚誘導条件の
検討を重ねていたが、従来の方法とは異なる手法で、効
率的で再現性の高い方法の実現に成功した。
すなわち、本発明の方法は■供試材料には誰でも容易に
入手できる完熟種子を用い、■カルス形成用、不定胚誘
導用培地とも単純な培地を用い、■液体振盪培養、液体
旋回、液体回転培養法等の液体培養法を用いるものであ
る。
入手できる完熟種子を用い、■カルス形成用、不定胚誘
導用培地とも単純な培地を用い、■液体振盪培養、液体
旋回、液体回転培養法等の液体培養法を用いるものであ
る。
作用
本発明者らの用いた手法は以下の通りである。
１）不定胚誘導のための培養部位に完熟種子を用いた。
完熟種子を表面殺菌後、種皮を除去して内部の子葉を切
断し、所定の寒天培地で培養してカルス（ＣａｌｌｕＳ
；不定形細胞塊）を形成させ、そのカルスを所定の液体
培地に移植して振盪または回転培養に移すと不定胚が誘
導される。ダイズの完熟種子を出発点にした不定胚誘導
法は他に前例がなく、本発明者が最初である。
断し、所定の寒天培地で培養してカルス（ＣａｌｌｕＳ
；不定形細胞塊）を形成させ、そのカルスを所定の液体
培地に移植して振盪または回転培養に移すと不定胚が誘
導される。ダイズの完熟種子を出発点にした不定胚誘導
法は他に前例がなく、本発明者が最初である。
２）最初のカルス形成用培地にはＭＳ無機養分（Ｍｕｒ
ａｓｈｉｇｅ ら、１９６２） ＋２． ４−Ｄ
２ｇ／ｌの寒天培地が適当で、その培地で形成されたカ
ルス２０■をＭＳ無機養分だけのホルモンフリーの液体
培地に移して振盪及び回転培養すると培養３〜４週間後
には多数の不定胚が誘導された。この培地組成は現在ま
でに知られている不定胚誘導用培地のどの培地よりもシ
ンプルである。
ａｓｈｉｇｅ ら、１９６２） ＋２． ４−Ｄ
２ｇ／ｌの寒天培地が適当で、その培地で形成されたカ
ルス２０■をＭＳ無機養分だけのホルモンフリーの液体
培地に移して振盪及び回転培養すると培養３〜４週間後
には多数の不定胚が誘導された。この培地組成は現在ま
でに知られている不定胚誘導用培地のどの培地よりもシ
ンプルである。
３）カルスの液体振盪培養及び液体回転培養のいずれか
らも多数の不定胚の誘導が認められた。振盪培養は往復
振盪、旋回振盪（いずれも６０〜１１５ｒ、ｐ。
らも多数の不定胚の誘導が認められた。振盪培養は往復
振盪、旋回振盪（いずれも６０〜１１５ｒ、ｐ。
ｍ、）とも認められ、回転培養でもｌ ｒ、ｐ、ｍ、
（１分間１回転） ５ｒ、ｐ、ｍ、 （１分間５回転
）とも認められた。
（１分間１回転） ５ｒ、ｐ、ｍ、 （１分間５回転
）とも認められた。
本発明者らの用いた回転培養器は直径４５ｃｍのドラム
が回転する方式のもので、２３１φの試験管１００本架
０ものである。回転培養法による不定胚誘導の報告例は
ダイズについてはもちろん、他のすべての作物について
も前例が無く、本発明者が最初である。
が回転する方式のもので、２３１φの試験管１００本架
０ものである。回転培養法による不定胚誘導の報告例は
ダイズについてはもちろん、他のすべての作物について
も前例が無く、本発明者が最初である。
実施例
１）ダイズの保存品種１ダンフイールド”と“プアー”
の２品種の種子を中性洗剤で良くすすいでから、３％ア
ンチホルミン液に１０分間浸漬して滅菌する。
の２品種の種子を中性洗剤で良くすすいでから、３％ア
ンチホルミン液に１０分間浸漬して滅菌する。
滅菌の終了した種子は胎座の部分から慎重に種皮を除去
し、種子の内部の子葉と胚軸を摘出する。子葉と胚軸は
それぞれ区別して細断しく２１巾）、カルス形成用培地
に置床する。
し、種子の内部の子葉と胚軸を摘出する。子葉と胚軸は
それぞれ区別して細断しく２１巾）、カルス形成用培地
に置床する。
２）カルス形成用培地にはＭＳ＋２．４−Ｄ ２■／
ｌ添加の寒天培地を用い、２５℃ １２時間照明（照度
約２．０Ｏ０１ｕｘ）の埼養室で培養すると１〜２週間
後にはカルス形成が始まる。
ｌ添加の寒天培地を用い、２５℃ １２時間照明（照度
約２．０Ｏ０１ｕｘ）の埼養室で培養すると１〜２週間
後にはカルス形成が始まる。
３）形成後２〜３ａ間のカルスを２０〜３０１＋１？程
度に分割しＭＳ無機養分十ショ糟３０ｇ／Ａのホルモン
フリーの液体培地に移植し液体振盪培養（６０〜１１５
ｒ、ｐ、ｍ、、往復、旋回とも）、及び液体回転培養（
１ｒ、ｐ、ｍ、及び５ ｒ、ｐ、ｍ、）を行う。培養開
始２週間目ごろから芭離細胞の狂的生長が認められるよ
うになり、３〜４週間目には各ステージの胚が多数認め
−られた。最も早く認められたのは、６０〜１１５ｒ。
度に分割しＭＳ無機養分十ショ糟３０ｇ／Ａのホルモン
フリーの液体培地に移植し液体振盪培養（６０〜１１５
ｒ、ｐ、ｍ、、往復、旋回とも）、及び液体回転培養（
１ｒ、ｐ、ｍ、及び５ ｒ、ｐ、ｍ、）を行う。培養開
始２週間目ごろから芭離細胞の狂的生長が認められるよ
うになり、３〜４週間目には各ステージの胚が多数認め
−られた。最も早く認められたのは、６０〜１１５ｒ。
ｐ、ｍ、往復振盪培養の三角フラスコ中であり、次いで
６０〜ｉ １５ ｒ、ｐ、ｍ、旋回振盪、５ ｒ、ｐ、
ｎ＋、回転の順で最後はｌ ｒ、ｐ、ｉ、回転であった
。誘導された不定胚の形状についてみると、量も正常で
同調的な発育を示したのは１ ｒ、ｐ、ｍ、及び５ｒ、
ｐ、ｍ、回転培養の試験管中であり、往復及び旋回振盪
培養の不定胚は発根が先行して奇形的な発育を示すもの
もあった。
６０〜ｉ １５ ｒ、ｐ、ｍ、旋回振盪、５ ｒ、ｐ、
ｎ＋、回転の順で最後はｌ ｒ、ｐ、ｉ、回転であった
。誘導された不定胚の形状についてみると、量も正常で
同調的な発育を示したのは１ ｒ、ｐ、ｍ、及び５ｒ、
ｐ、ｍ、回転培養の試験管中であり、往復及び旋回振盪
培養の不定胚は発根が先行して奇形的な発育を示すもの
もあった。
４）不定胚の誘導は供試した２品種“ダンフィールドと
“プアー”の両者で認められたが、“ダンフィールド”
が特に高率であった。完熟種子中の子葉と胚軸では子葉
起源のカルスから高率に認められた。
“プアー”の両者で認められたが、“ダンフィールド”
が特に高率であった。完熟種子中の子葉と胚軸では子葉
起源のカルスから高率に認められた。
発明の効果
本発明者らによるダイズの不定胚誘導法の開発によって
、従来の未熟胚を利用した方法に比べ、■完熟種子を用
いるので、市販の種子、貯蔵中の種子など、いつでも供
試材料が用意できる、■供試する培地が極めてシンプル
で良く、それだけ再現性も高い、 ■振侵壇養でも回転培養でも不定胚が誘導できる、とい
う利点がある。これらの利点によって今後ダイズの細胞
培養による不定胚誘導法として末法の利用価値は極めて
高いと考えられる。
、従来の未熟胚を利用した方法に比べ、■完熟種子を用
いるので、市販の種子、貯蔵中の種子など、いつでも供
試材料が用意できる、■供試する培地が極めてシンプル
で良く、それだけ再現性も高い、 ■振侵壇養でも回転培養でも不定胚が誘導できる、とい
う利点がある。これらの利点によって今後ダイズの細胞
培養による不定胚誘導法として末法の利用価値は極めて
高いと考えられる。
Claims (4)
- （１）ダイズの完熟種子中の子葉を材料に、カルスを形
成させ、そのカルスを液体培養することによって、多数
の不定胚を誘導する方法。 - （２）カルス形成を２，４−Ｄの存在下で行い、不定胚
の誘導を２，４−Ｄの不存在下で行う特許請求の範囲第
１項に記載の方法。 - （３）カルス形成用及び不定胚誘導用培地がＭＳ無機養
分培地である特許請求の範囲第１項または第２項に記載
の方法。 - （４）不定胚誘導を液体回転培養で行い、その回転直径
が約４５ｃｍであり、そして、その回転数が１−５ｒ．
ｐ．ｍ．である特許請求の範囲第１項、第２項または第
３項に記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61275290A JPS63129930A (ja) | 1986-11-20 | 1986-11-20 | ダイズの完熟種子を用いた不定胚誘導法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61275290A JPS63129930A (ja) | 1986-11-20 | 1986-11-20 | ダイズの完熟種子を用いた不定胚誘導法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63129930A true JPS63129930A (ja) | 1988-06-02 |
| JPH054047B2 JPH054047B2 (ja) | 1993-01-19 |
Family
ID=17553368
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61275290A Granted JPS63129930A (ja) | 1986-11-20 | 1986-11-20 | ダイズの完熟種子を用いた不定胚誘導法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63129930A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997012512A3 (en) * | 1995-10-04 | 1997-05-22 | Calgene Inc | Transformation of cotton plants |
-
1986
- 1986-11-20 JP JP61275290A patent/JPS63129930A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997012512A3 (en) * | 1995-10-04 | 1997-05-22 | Calgene Inc | Transformation of cotton plants |
| US5846797A (en) * | 1995-10-04 | 1998-12-08 | Calgene, Inc. | Cotton transformation |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH054047B2 (ja) | 1993-01-19 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |