JPS63145300A - ウイルスにより特定されているプロテア−ゼの特異的阻害剤を製造する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は一般にウィルス感染を治療する方法、特にウィ
ルスにより特定されているプロテアーゼ（ｖｉｒｕｓ−
ｓｐｅｃｉｆｉｅｄ　ｐｒｏｔｅａｓｅｓ）の特異的な
ペプチド阻害剤を製造する方法に関する。

プロテアーゼはタンパク質を特定のペプチド結合のとこ
ろで切断する酵素である。生体系においては高度に特異
的なプロテアーゼ及び相補的なプロテアーゼ阻害剤が広
範囲な生物学的機能を媒介又は制御している。例えばプ
ロテアーゼはポリペプチドの翻ｙく後のプロセッシング
において萌駆体を切断して活性タンパク質を形成し、チ
モーデン活性化カスケード反応、例えば血液凝固、＃！
＆維素溶解及び免疫系の補体反応のための機構を提供し
、生物学的膜を横切って選ばれたタンパク質を輸送する
のを媒介する。従って、プロテアーゼはプロテアーゼ活
性の特異的阻害剤として機能するように設計された治療
薬の可能性のある標的に相当する。

ウィルスのデノムｉこよっ′Ｃコードされた（ｃｎｃｏ
ｄｅｄ）プロテアーゼはウィルスの複製において１１！
要な役割を演じる。ウィルスプロテアーゼは感染細胞に
よって生産された大きな面駆体ポリペプチドをより小さ
いタンパク質成分又はサブユニットに切断し、次いでこ
れらを集めてへ能的なウィルス構造物を形成する。ロジ
ツキー（Ｌｏｚ　ｉ　ｔｓｋ　ｉ　ｉ　）ら（Ｌスベク
ヒ・ソブレメメイ・ビオ口ｊｆ’−（販ムアＭ１ｍ、Ｂ
ｉｏｌ、）、９３：　　３５２−３６２（１９８２））
は、８類及び捕乳動物のウィルスの生殖におけるタンパ
ク貿加水分解の役割を検討し、ウィルスプロテアーゼ阻
害剤に関する一部の文献を概説した。

ウィルスにより特定されているプロテアーゼによるウィ
ルスポリペプチドの翻訳後のプロセッシングは幾つかの
重要な動物ウィルス科のｉ製（こおいて起こり、犬のも
のが含まれる。

１土に、んμ−代４Ｊγ７％ ピコルナウィルス　　　ポリオフィルスライ／フィルス コクサツキーワイルス ロ蹄疫ウィルス 肝炎Ａウイルス カルノオウイルス （ｃａｒｄｉｏｖｉｒｕｓ） トガウィルス　　　　　風疹ウィルス 黄熱病ウィルス （ｙｅｌｌｏｗ　ｆｅｖｅｒ　ｖｉｒｕｓ）デング熱ウ
ィルス （ｄｅｎｇｕｅ　ｖｉｒｕｓ） ウマ脳炎ウィルス （ｅｑｕｉｎｅ　ｃｎｃｅｐｂａｌｉｔｉｓｖｉｒｕｓ
） ＲＮＡ型腫瘍ウィルス　レトロフィルスオンコツイルレ
ス （ｏｎｃｏｖｉｒｕｓｅｓ） アデノウィルス　　　　種々の型 ウィルスにより特定されているプロテアーゼの役割は他
のウイルス科、特にミクソウィルス、パラミクソ“ンイ
ルス、ツクシニアツイルス、コモウィルス（ｃｏ［ｌ１
ｏｖｉｒｕｓｅｓ）及びレオウィルスの複製においても
提案されている。コラント、「ウィルスのタンパク質切
断の阻害Ｊ　（”Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｖｉｒ
ａｌ　　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｃｌｅａｖａｇｅ″）（〃ウ
リ編、佐りヱ仁土ノコＬ菟應店−（岐住畦匡り吠咀蛙匝
■旺）、１９８１．７カデミツク　ブレス（＾ｃａｄｅ
ｍｉｃ　Ｐｒｅ！３ｓ）、ニューヨーク）及びコラント
、「タンパク貿切断による動物ウィルスの複製の調節Ｊ
　（”ＲｅｇｕｌａＬｉｏｎ　ｏｆ　ＡｎｉｍａｌＶｉ
ｒａｌ　　Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ　　ｂｙ　　Ｐｒｏ
ｔｅｉｎ　　Ｃｌｅａｖａｇｅ”）（Ｌロチアーゼ及び
　初学的制御（Ｐｒｏｔｃａｓｅｓ　ａｎｄ　Ｂｉ。

ｊｉｃａｌ　Ｃｏｒ＋ｔｒｏｌ）、コールド　スプリン
グ　ハーバ−ラボラトリ−（Ｃｏｌｄ　ＳｐｒｉｎｇＨ
ａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）、１９７５）はウ
ィルス特定プロテアーゼに閃する文献のレビューである
。

ヒト及び動物における重要な病原体であるピコルナウィ
ルスはウィルスの生殖に関与する特異的プロテアーゼを
コードしている好例のウィルスである。

ピコルナウィルスは小さく、エンベロープを持たないＲ
）Ｊ　Ａを含むウィルスであり、ヒト及び他の動物にお
ける重要な病原体である。ピコルナウィルス群の原型は
ポリオフィルスであり、これは中枢神経系のよく知られ
た破壊病（ｄｅｖａｓｔａｔｉｎｇｄｉｓｅａｓｅ）で
あるポリオの原因となる作用物である。

過去１０年問、ポリオウィルス流行病は何千へもの子供
や若者に麻痺病（ｐａｒａｌｙｔｉｃ　ｄｉｓｅａｓｅ
）を引き起こし、工業化した西洋諸国においてこの病気
を効果的に免疫処置し、はとんど根絶させる研究に拍１
μをかけた。今日、衛生設備が原始的で人口密度の高い
地域ではポリオウィルスが広く行き渡った状態にある。

これに冒される子供もいるがこのような地域の大部分の
住民は主要なポリオウィルス型に対する抗体を持ってい
る。しかしながら、西洋諸国ではこのウィルスはそれほ
ど行き渡ってない。時折、臨床的に有意な事例が免疫の
ない人に起こる。

ヒトを冒す他のピコルナウイルスには穏やかな、１感染
症（ｍｉｌｄ　１ｎｔＣ５ｔｉｎａｌ　１ｎｆｅｃｔｉ
ｏｎｓ）と関連のあるコクサラキーウィルス、カゼ及び
軽症の呼吸器感染症と関連のあるライノウィルス、肝炎
Ａウィルス、脳心筋炎に関連のあるカルジオウィルスが
２−よれる。口蹄疫ウィルス（Ｆ　Ｍ　Ｄ　Ｖ　）はピ
コルナウィルスの一属であり、市牛及Ｖ′ｍが劃れてい
る（ｃ　１ｏｖｅｎ−ｈｏｏｖｅｄ）他の！！’ＪＪ物
を苦しめる。口蹄疫は非常１こ伝染性があり、この病気
の大発生が確実になると感染動物を含む総ての家ご群が
全滅する。

このように、口蹄疫流行病の経済的な結果は全く悲惨な
のもとなり得る。ＦＭＤＶによる感染に対しある程度の
保護を付与するワクチンが生産されているが、この病気
は多くの地域に残存している。

ピコルナウィルスは一般に類似の複製様式１こ従う。第
一に、感染性ウィルス粒子が標的細胞の表面の特異的な
受容体に非共有的に結合する。次いでウィルス粒子は細
胞膜に侵入し、覗外被して一重鎖ワイルスＲＮ　Ａ分子
となる。プラス鎖（ｐｏ！３ｓｊｔｉｖｅ）ＲＮ　Ａは
最初にウィルスＲＮ　Ａポリメラーゼを含むウィルレス
タンパク貿の合成のためのｙ＝　ＲＮＡ鋳型として働く
。ウィルスＲＮＡポリメラーゼはマイナス頻、すなわち
相補的ＲＮ　Ａの合成を触媒し、これは更にプラス鎖を
続いて製造するｒこめの鋳型として働く。感染過程が進
むと、それに比例してより多くの新しく合成されたプラ
ス鎖が成熟ピリオンに編入される。

ウィルスＲＮ　Ａポリメラーゼに加えて、ウィルスのデ
７ムは■Ｐい■Ｐ２、■Ｐ３及び■Ｐ４で示される４種
の主なキャプシド構造タンパク質、■ＰＧで示されるＲ
ＮＡキャッピングタンパク質（ＲＮＡ　ｃａｐｐｉ＊Ｈ
ｐｒｏｔＣｉｎ）及びウィルスにより特定されているプ
ロテアーゼを含む幾つかの非構造タンパク質をも特定す
る。ウィルスにより特定されているプロテアーゼはビフ
ルナウイルス複製において独特な役割を果たし、ウィル
スにより特定されているプロテアーゼ活性を阻害する抗
ツイルス化合物の設計のための標的を提供する。

宿主細胞のタンパク質合成のウィルスで誘発された活動
停止（ｖｉｒｕｓ−ｉｎｄｕｃｅｄ　５ｈｕｔｄｏＩｌ
Ｉｎ）に従い、宿主リポソームの連続な通路（ｃｏｎｔ
ｉｎｕｏｕｓ　ｐａｓｓａｇｅ）ｌこおいてウィルスｍ
　ＲＮＡ１Ｑ型に沿ってウィルスｍＲＮΔはウィルスタ
ンパク質に翻訳される。

得られた翻訳生成物はそれぞれが異なる機能を有する幾
つかのドメインを含むボリフ゛ロチインである。リボソ
ー入／タンパク貿複合体の分離に先だってこのポリプロ
ティンは宿主細胞及びウィルスにより特定されているプ
ロテアーゼによって切断される。本質的に即座に起こる
新生の（ｎａｓｃｅｎｔ））切断反応は、外見上、宿主
細胞の翻訳装置（ｔｒａｎｓＩａｔｉｏｎ　ａｐｐａｒ
ａｔｕｓ）に関連する細胞プロテアーゼによって媒介さ
れる。次いで、４次構造の補遺的変化及び他の変質を誘
導し、最終的にはキャプシドを組み立てる一連の中間の
切断反応は高度に特異的なフィルスにコードされたプロ
テアーゼ（ｖｉｒｕｓ−ｃｏｄｅｄ　ｐｒｏｔｅａｓｅ
）によって触媒される。また、タンパク質分解切断（ｐ
ｒｏｔｃｏｌｙｔｉｃ　ｃｌｅａｖａｇｅ＋））はウィ
ルスＲＮＡポリメラーゼを活性化及び非活性化すること
によってＲＮＡ８成をも調節している。

幾つかの（斤究系統によってピコルナウィルスに感染し
た細胞中１こ独特なウィルスにより特定されているプロ
テアーゼが存在することが示された。

第一に、以下に詳説するように、ウィルスによってψ 特定さン？ブ・テアーゼ活性は高度に部位４’＞　５’
４的であり、通常の細胞分解経路に関連したタンパク質
分Ｍ活性とは似ていない。第二に、この部位特異的酵素
活性は（鉄梁していない細胞の抽出物には見出だされな
いが、感染細胞の溶Ｉｎ物中には見出だされ、その量は
感染過程が進み、感染フィルスの量が増えると増加する
。第三に、ウィルスｍＲＮＡによりプログラムされた無
細胞タンパク質合成系は、キャプシドポリペプチドのプ
ロセッシングも行う特徴的なプロテアーゼ活性を生じる
。第四に、感染ｍ胞及び無細胞系において、このフィル
スプロテアーゼが異種ウィルス（１＋ｅＬｃｒｏｌｏｇ
ｏｕｓνＩｒ１ＪＳ（！！；）のタンパク質又は細胞タ
ンパク質を切断するには有効でないことが示された。

Ａｉ１記したように、ウィルスにより特定されているプ
ロテアーゼは高度に部位特異的である。過去数年の間に
、ウィルスにより特定されているプロテアーゼによって
認ｆ＆された切断部位のアミノ酸配列が幾つかのピコル
ナウィルスに対して決定さレタ。このデータは一部分は
クイルスタンバク質の米端貼分析法（ｅｎｄ−Ｆｉｒｏ
ｕｐ　ａｎｌｌｌｙｓｅｓ）によって与見られたが、ウ
ィルスのデノムｌ’ｔ　Ｎ　Ａ又はウィルスＲＮ　Ａに
相捕的なＤＮＡの塩ノ吉配列を決定することによって史
に悄ｔｉｔが与えられた。ピコルナウィルスの切断部位
を比較すると数種類の切断認識ｆ’ｆ６位があることが
明らかとなった。翻Ｊく中に本質的に即座にプロセッシ
ングされる初期の切断部位はキモトリプシン切断部位（
新しくて・きたカルボキシル末端は典型的には芳香族又
は疎水性残）、（によって与えられる）と類似している
。ウィルスにより特定されているプロテアーゼにより認
識される中間の、つまり続いてプロセッシングされる切
断部位は全く独特である。ピコルナウィルスの」、す合
、これらの部位はしばしば疎水性（ロイシン、イソロイ
シン又はバリン）配列に囲まれたグルタミン−グリシン
又はグルタミン酸−Ｘの結合によって特徴づけられる。

ウィルスにより特定さｉｔているプロテアーゼにより認
識されるりＪ断部位配列が高度に保存されることは保存
さｔした配列の構造を真似て設計した人為的な基質を、
特異的プロテアーゼ活性を阻害し従ってピコルナウィル
スの成製過程を崩壊させるのに使用できることを示１変
する。

多くの研究者がピコルナウィルスプロテアーゼ活性の特
ジ４的阻害削を捜し求めた。フラン）　（Ｋｏｒｈ矢り
免ニア５１〜７５９（１９７２））は簡単なアミノ酸の
クロロメチルケトン誘導体によるポリオウィルス及びエ
コーウィルス−１２のタンパク貿プロセッシング阻害に
ついて開示している。特に、コラントはトリルスルホニ
ルフェニルアラニルクロロメチルケトン（ＴＰＣＫ）及
１トリルスルホニルリシルクロロメチルケトン（’ｒＬ
ＣＫ）による阻“１すについて開示している。サマーズ
（Ｓｕ＋ｏ＋ｌ１ｅｒｓ　）ら（、□＋−ナル・オブ・
パイララジー１０：　８８０〜８８４（１９７２））は
同様に’１’　Ｐ　ＣＫ、　ｉ’　Ｌ　ＣＫ並びにカル
ボベンジルオキシフェニルアラニルクロロメチルケトン
（ＺＰＣＫ）のＤ−及びＬ−ｉ性体による大きなポリオ
ウィルスに特異なポリペプチドのプロテアーゼ切断の阻
害について開示している。続報においてコラントら＜１
ａ＋ツシンＮａｔｉ、Δｃａｄ、Ｓｃｉ、［ｌ５Ａ１７
　６：　　２　９　９　２　〜２　９　９　５（１９７
９））ｉｉカルボベンジルオキシロイシルクロロメチル
ケトン（Ｚ　Ｌ　ＣＫ　）によるポリオウィルスのタン
パク質プロセッシングの阻害について開示している。

トガウィルスはＲＮＡを含み、典型的には節足動物由来
のウィルス科であり、黄熱病、風疹（はしか）、デング
熱、脳炎及びある様の無症状状態がこれに含まれる。ピ
コルナウィルスと同様に、トガウィルスはタンパク質切
断を使って総てのウィルスのポリペプチドを形成し、特
異的プロテアーゼがトガウィルスのデ／ムにコードされ
ているという証拠が存在する。ピコルナウィルスの場合
のように、高度に保存されたペプチド領域が１フィルス
ポリペプチド前駆体の切断部位に観察されており、この
ことはウィルスにより特定されているブロテ゛アーゼの
役割を示唆している。

ＲＮＡを含む腫瘍ウィルス、すなわちレトロウィルスに
は鳥類及び咄乳動物における種々の肉＋１１１！、白血
病、リンパ腫及び他のかん睡に関連する多くの属が含ま
れる。アデノウィルスはＤＮＡを含むウィルスであり、
リンパ様組織において潜伏感染を誘導し、時折、呼吸器
及び服の感染の急性の工ビンードを突発的に起こす。ピ
コルナウィルス及びトガウィルスと同様に、レトロウィ
ルス及びアデノウィルスは特異的ウィルスプロテアーゼ
をコードしていると思われる。

プロテアーゼ活性を阻害する能力を有する種々のペプチ
ド誘導体が知られている。［タンパク分解酵素のハロケ
トン阻害剤Ｊ　”Ｈａｌｏｋｅｔｏｎｅ　Ｉｎｌ＋１ｂ
ｉｔｏｒｑ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ　ＩＥｎｚ
ｙ＋＋＋ｅｓ”（ワインシュタイン（１４ｃｉｎｓｔｅ
ｉｎ）屍、アミノ　、ベプチドメびタン１９７７、ペー
ジ６５〜１７８、マルセル　デツカ−（Ｍａｒｃｅｌ　
Ｄｅｋｋｃｒ）、ニューヨーク）においてバワーズ（Ｐ
ｏｕ＋ｃｒｓ）はアミノ酸及びベブチ１ｔのハロケトン
４導体によるプロテアーゼ活性の阻害に関す４５３０：
　２４６〜２６１（１９７７）において一連のペプチド
クロロメチルケトン類による細菌プロテアーゼ、サブチ
リシンＢ　Ｐ　Ｎ　’の阻″８（二ついて開示している
。試験した化合物のうちで、アセチル−Ｌ−フェニルア
ラニル−し−グリシル−し−７ラニルーし一ロイシルク
ロロメチルケトン（Ａｃ　−Ｐｈ　ｅ　−Ｇｌ　ｙ　−
Ａｌ　ａ　　Ｌｅ　ｕ　ＣＨ２Ｃｌ　）が最も即効性の
阻害剤であった。関連する化合物、メトキシスクシニル
−Ｌ−”ｙｘニルアラニル−Ｌ−りＩＪリシルＬ−７ラ
ニルーし一ロイシルクロロメチルケトン（ＭｅＯ８ｕ　
ｃ　−Ｐｈ　ｃ　−Ｇｌ　ｙ　−Ａｌ　ａ　−Ｌｅ　ｕ
　ＣＨ□Ｃ１）が１９８１年１１月ブログクトプレナン
（ｐｒｏｄｕｃｔ　ｂｕｌｌｅｔｉｎ）のエンザイム　
システムス　プロダクツ（ｌＥｎｚｙＩＩｌｅ　５ｙｓ
ｔｅ＋＋＋ｓ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）によって開示されて
いる。

Ｂｉｏｐｂｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏ＋ａｍｕｎ、　）■：　
　３４３−３４９（１９７２）においである種のベプナ
ドアルデヒド類による消化プロテアーゼ、キモトリプシ
ンの阻占に関連する実験について述べている。また、イ
トウらはトリペプチジルメチルケトン ｕ　　Ｌｅｕ　　ＰＩ＋ｅＣＨ１によるキモトリプシン
の阻害に対して試験した。しかしながら、６００μｇ／
＋ａＲの阻害剤濃度において阻害が観察されなかった。

最後１こ、フィトカラ（Ｆｉｔｔｋａｕ）らはプラム（
Ｂｌａｈａ）他楊、ペプチド１９８２（ド　グリエター
（ｄｅＧｒｕｙＬｅｒ）、ニューヨーク、１９８３）、
ベーン６１７〜６２２の「ペプチドケトン類の合成及ゾ
性貿」　（“５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　　ａｎｄ　　Ｐｒｏ
ｐｅｒｔｉｅｓ　　ｏｆ　　ＰｅｐｔｉｄｅＫｅｔｏｎ
ｃｓ″）においである種のペプチドメチルケトン類によ
るサーモアクチ／ミセス　プル〃リス（ｌｌ＋ｅｒＩａ
ｏａｃｔｉｎｏＩＩＩｙｃｅｓ　ｖｕｌｇａｒｉＳ）の
熱安定なセリンプロテアーゼ、セルミターゼ（ｔｈｅｒ
ｍｉＬａｓｅ）の阻害についてＩＪＩＩ示している。

ここに、ウィルスにより特定されているプロテアーゼの
阻害剤を製造する一般的方法が確立された。この方法は
動物のウィルス感染を治療する新規な方法を表現する。

本発明はウィルスにより特定されているポリペプチド前
駆体を切断し、ウィルスに関連するタンパク質を形成さ
せるプロテアーゼの特ｙ４的阻害削を製造する方法にお
いて（ここで、阻害されるプロテアーゼはピコルナウィ
ルス、トガウィルス、ＲＮＡ型腫瘍゛ンイルス、アゾ７
“ンイルス、コモウィルス（ｃｏｍｏｖｉｒｕｓｅｓ）
及びフィルスプロテアーゼをコードする他のウィルスか
ら成る群から選ばれたライ、ルスによって特定される）
、 （ａ　）ウィルスのタンパク質、ＲＮＡ、ＤＮＡ。

ｌｌＲＮＡ又はウィルスＲＮＡに相補的なり　Ｎ　Ａを
単離し、 （ｂ　）該タンパク質、ＲＮＡ、ＤＮＡ、ｍ　ｆｌＮＡ
又はｃ　ＤＮＡを分析してウィルスにより特疋すれてい
るタンパク質のポリペプチド１）；ｊ躯体のアミノ酸配
列を提供し、 （ｃ　）アミノ酸配列の中のウィルスにより特定されて
いるプロテアーゼの切断認識部位を突き止め、（ｄ）ウ
ィルスによｌ）特定されているプロテアーゼの特異的ペ
プチド阻害剤を製造する ことを含み、該阻害剤は、前記ポリペプチド前駆体の切
断認識部位に隣接し且つその上流に位置するアミノ酸配
列に実質的に相当し、３〜５個の７ミ７酸又はアミノ酸
類似体のペプチド配列に共有結合したハロメチルケトン
類及びメチルケトン類がら成る群から選ばれたＣ末端阻
害剤部分を含んで成ることを特徴とする方法を提供する
ものである。

本発明の方法はＣ末端１こハロ／ナルケトン又はメチル
ケトン部分を（１′する選ばれたトリー、テトラ−及ブ
ペンタベプナドを提供する。これらの化合物はウィルス
により特定されているプロテアーゼの活性部位に結合す
ることができ、ウィルスプロテアーゼによるウィルスポ
リペプチドのプロセッシングを阻害する。

本発明の方法１こ従って製造される化合物は下記式 ％式％（） 式中、 Ａ１、Ａ′、ＡＪ及びＡ４はアミ／酸又はアミノ酸類似
体であり、それらのアイデンティティ−（ｉｄｅｎｔｉ
ｔｙ）及び配列は置換基Ｒ２の有価部（ｖａｌｕｅ）も
含め、ウィルスにより特定されるプロテアーゼの切断認
識部位に隣接し且つその上流に位置するアミノ酸に実質
的に相当し、 Ｒ’は一トｌ又はＮ末端保護へであり、ｔ＜ｚはアミノ
酸又はアミノ酸類似体の側鎖基であり、 Ｘは−１４、−ＣＩ又は−Ｂｒｔ’あり、０及び０は独
立に０又は１である、 のペプチドハロメチルケトン類及びペプチドメチルケト
ン類又は生理学的に許容できるそれらの塩である。

好ましくは、阻害剤のペプチド配列はポリペプチド前駆
体駆体の切断認識部位に隣接し且つその上ピこに位置す
るアミ／ｌＩＩ＆配列１こ」Ｅ確に相１「・トζ°ある
。不明細書において、“上流゛とは翻７”Ｊ＜　Ｊｊ向
に反対の方向を意味する。

本明細書において、特別なペプチド配列に関連し使用さ
れる“実質的に相当する（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ
ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄ）”という汀葉は主題のペプチド
配列が参照配列と同数のアミノ酸残店、参照配列と正羅
に相同であるか又は保存的に置換されたそれらのアイデ
ンティティ−及びその配列を含むことを示す。本明細書
において、“保存的に置換された（ｃｏｎｓｅｒｖａｔ
ｉｖｅｌｙ　５ｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ）″というＭ葉は
与えられた残基を生物学的に類似の残基に置き換えるこ
とを意味する。保存的な置換の例には脂肪族残基相互の
置換、例えばＩｆ　ｅ、Ｖａ　Ｉ　、Ｌｅｕ又はＡｌａ
相互の置換、極性残基相互の置換、例えばＬｙｓ及びＡ
ｒ）（、Ｇｌｕ及びＡｓｐ又はＧＩ　ｎ及びＡｓｎの間
の置換が含くまれる。前記において、“残基”とはアミ
ノ酸又はアミノ酸類似体を意味する。

前記したように、本発明の方法によって製造されるペプ
チド阻害剤のアミノ酸配列はウィルスにより特定されて
いるプロテアーゼによって認識される切断部位のアミノ
酸配列を参照することによって確立される。このデータ
は二つの一般的な方法を使用して導かれ得る。ｆ５−の
方法は、ウィルスタンパク質を精製したウィルス粒子又
は感染細胞から単離し、ｖＩＩｆリペプチドに分離する
ことができ、次いでこれを慣例のタンパク質配列分析方
法によってＮ及びＣ末端がら配列順序を決定するもので
ある（例えばエドマン分Ｍ）。この方法は公知の切断部
位に１１ＩｌＩ＃１１する配列のデータを提供する。第
二の方法は、ある様のウィルスのＲＮΔデ７ム（又はそ
れらのｃ　ＤＮＡ転写物）の塩基配列を決定して核酸の
一次配列を与えることができ、それからウィルスタンパ
ク質配列を翻訳の読み収り枠（ｏｐｅｎ　ｒｅａｄｉｎ
ｇ　ｆｒａｍｅ）を用いて導くというものである。次い
で導かれたアミノ酸配列を相同又は関連するウィルス（
ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ　ｏｒ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｖｉｒ
ｕｓｅｓ）の公知タンパク質の配列と比較することによ
って切断部位を決定する。

ウィルスタンパク質又は核酸を得、そして精製する方法
及びウィルス核酸の塩基配列を決定する方法はよく知ら
れており、本明細書では詳しく述べない、以下の適した
方法に関連する有用な一般的な参考文献を参照されたい
。

マキサム、ニー、エム、　（Ｍａｘａｍ、＾８Ｍ、）及
びギルベルト、グブリｓ、（ＧｉｌｂｅｒｔＪ、）、プ
ロセラシン７゛ｌ）。

す７１ｆ　−、エフ　、　（Ｓａｎｇｅｒ、Ｆ、　）、
ニラフラー。

ニス、（Ｎｉｃｋｌｅｒ、Ｓ、）及びカールソン、ニー
、アー／し、　（Ｃａｒｌｓｏｎ、八、ＩＬ）、プロセ
ッシングス・オプ・４　Ｇ　’／　（１９７７）。

ベア７チー、ディ＋、＋１−．　（Ｐｃａｔｔｉｅ、Ｄ
、Ａ、）７’ニー７６：　　１７６０〜１°７６４（１
９７９）。

シモンクサイト、ニー、　（Ｓｉｍｏｎｃｓｉｔｓ、八
、）、ブラウンソー。ノー、ノー、（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ
、（：、Ｇ、）、ブラツン、アール、ニス、　（Ｂｒｏ
ｕ＋ｎ、ＲｌＳ、　）、ルピン。

ノエー、アール、　（Ｒｕｂｉｎ、Ｊ、Ｒ，）及び〃イ
リー、エイチ、（Ｇｕｉｌｌｙ、１１．）、ネイチ＋　
−（Ｎａｔｕｒｅ）　２６９　：８３３〜８３６（１９
７７）。

以下に述べる参考文献には特別なウィルスのデノム又は
タンパク質に関する塩基配列決定の文論が記載されてい
る。

１、カロル、ニー、ビー、　（Ｃａｒｒｏｌｌ、八、Ｂ
、）、口１クランド、ディー、ノｚ　＋、　（Ｒｏａ＋
１ａｎｄ、Ｄ、Ｊ）及びクラーク、ビー、イー、　（Ｃ
１ａｒｋｅ、ｆｌ、Ｅ、）、ニュークレイツク・アシッ
ド・すｔ　−’ｆ　（Ｎｕｃｌｅｉｃ八ｃｉ牲−逸へ−
、リーζ：　２４６１（１９８４）（口蹄疫ウィルス）
。

２、ヘルパート、イー（ｌｌｅｒｌ＋ｃｒｔ、ヒ、）及
びムーラー、エム、　（Ｍｕｈｌｃｒ、Ｍ、）、１区四
１ユ）３０：１（１９８２Ｌ（アルファウィルス（ａｌ
ｐｂａｖｉｒｕｓ））。

３、クレンク、エイチ、ディ＋、　（Ｋｌｅｎｋ、Ｈ，
Ｄ、）、〃−テン、エイチ、ディ＋、（Ｇａｒｔｅｎ、
ｔｌ、Ｄ、）、ケイル、グブリュ、　（ＫｅｉｌＪ、）
、ニーマン、エイナ。

（Ｎ　ｉｅｍａｎｎ、　Ｈ，）、シュワルツ、アール、
ティー。

（Ｓｃｗａｒｚ、　Ｒ，Ｔ、　）及びロット、アール、
（Ｒｏｔｔ、Ｒ，）、ｒインフルエンザウイルス赤血球
凝集素のプロセッシング」（Ｐｒｏｃｅｓ！］ｉＢ　ｏ
ｆ　ｔｂｅ　Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ　Ｖｉｒｕｓ１１ｅ＋
ｎａＢｌｕｔｉｎｉｎ”）（ノー、コック、（Ｇ、Ｋｏ
ｃｈ）及びディー。リフター（Ｄ、Ｒｉｃｔｃｒ）編、
級］溝びウィルス立ミック　プレス（＾ｃａｄｅｍ：ｃ
　Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク、１９８０）。

４　、ニア　７　ント。ビー、　（Ｋｏｒａｎｔ、、１
１．）、チョワ、エヌ、　（Ｃｈｏｗ、Ｎ、）、ライブ
リー、エム、（Ｌｉｖｅｌｙ、Ｍ、）及ゾバワーズ、ノ
ｘ−０（Ｐｏｕ＋ｅｒｓ、Ｊ、）、プロセ・し６：　２
９９２（１９７９）、（ポリオウィルス）。

５、コラント、ビー、　（Ｋｏｒａｎｔ、Ｂ、）、ジャ
ーナル−ｍ　ｔ　フ・パイララシ−（Ｊ　、Ｖｉｒｏｌ
、）１０　：　７５１（１９７２）、（ポリオウィルス
）。

６、ツー。ティー、エイチ、　（Ｌｃｅ、’ｌ’、Ｉｔ
、　）、コリ〃ン、ノエー、イー、（ＣｏｌｉＨａｎ、
Ｊ、ｌミ、）、ホマ、ティー、　（ＩＩＯｍｍａ、　ｌ
’、　）、マクラン、エム、　エフ、（Ｍｃｌｎｎｅ。

Ｍ、Ｆ、）、タチバナ、エヌ、　（Ｔａｃｈｉｂａｎａ
、Ｎ、）及び工５６（１９８４）、ヒト′Ｆ細胞白血（
丙ウィルス（ｌｌｕｍａｎ　ｉ’−ｃｅｌｌ　　ｌｅｕ
ｋｅｍｉａ　ｖｉｒｕｓ）。

７、オロスツラン、ニス、　（Ｏｒｏｓｚｌａｎ、Ｓ、
）、ヘングージン。エル、イー、　（Ｈｅｎｄｅｒｓｏ
ｎ、Ｌ、Ｅ、）、コープランド、ティー、デー（Ｃｏｐ
ｅｌｕｎｄ、Ｔ、Ｄ、　）、シュルツ、ニー、エム、　
（Ｓｃｈｕｌｔｚ、＋へ１Ｍ、）及びラヒン。

イー、エム、　（Ｒａｂｉｎ、Ｅ、Ｍ、）、「マウ六白
血チ内ウィルスのｇａＩ？及びｅｎｖ遺伝子にコードさ
れたポリプロティンのプロセッシング及び梼逍」（Ｐｒ
ｏｃｅｓｓｉｎＨａｎｄ　　５ｔｒｕｃｔｕｒｅ　　ｏ
ｆ　　Ｍｕｒｉｎｃ　　ＬｅｕｋｅＩＩｌｉａ　　Ｖｉ
ｒｕｓ　ｇａｇ　ａｎｄ　ｅｎｖ　ＧｅｎｅＥｎｃｏｄ
ｅｄ　Ｐｏ１ｙｐｒｏＬｃｉｎｓ”）、（ノー、コック
、　（Ｇ、Ｋｏｃｈ）及びディー、リフターｓｉｓ１Ｍ
ｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ＰｒｏｃｃＳｓｉｒ
＋ｇｏｆ　Ｃｅｌｌｕｌａｒ−ｇｎｄ　Ｖｉｒａｌ　Ｐ
ｏ１Ｈ二状肚肘、）、アカデミツク　プレス（Δｃａｄ
ｅ＋＋＋ｉｃ　Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク、１９８０
）Ｉ１８、パルメンベルク、ニー、シー、　（Ｐｕｌｎ
ｅｎｂｅｒＨ。

＾、Ｃ０）、キルビー８イー、　エム、　（Ｋｉｒｂｙ
、Ｅ、Ｍ、　）、ノヤング、エム、アール、　（Ｊａｎ
ｄａｏＭ、Ｌ）、ドラーク、ニス、エル、　（Ｄｒａｋ
ｃ、Ｎ、Ｌ、）、デユー９．９−。

エム、　（Ｄｕｋｅ、ＧｌＭ、）、ポトラッッ、ケー、
エフ。

（ＰｏＬｒａｔｚ、に、Ｆ、　）及びコレット、エム、
ニス、（ＣｏｌｌｃＬｔ、Ｍ、Ｓ、　）、ソノ、−クレ
イツク・アシッド・リサ：ｌ−しζ：　２９６９（１９
８４＞、（脳心筋炎ツイルス（ｅｎｃｃｐｌ＋ａｌｏｍ
ｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ　ｖｉｒｕｓ））。

１）、セイ４　、　エム、（Ｓｃｉｋｉ、Ｍ、　）、セ
イスヶ、エイチ、　（Ｓｃｉｓｕｋｃ、Ｉｆ、　）、ヒ
ラヤマ、ワイ、　（ｌｌｉｒｕｙｕｍｕ、Ｙ、）及びヨ
シダ、エム、　（Ｙｏｓｈｉｄａ、Ｍ、）、プ□＊＋−
ｚ−（れ：３６８（１９８３）、ヒトＴ細胞白血病ウィ
ルス（Ｉｌｕｌｎａｎ　ｌ’−ｃｅｌｌ　　ｌｅｕｋｅ
ｍｉａ　ｖｉｒｕ！；）。

１０、スタンウェー、ノー、（Ｓｔａｎｕ＋ａｙ、Ｇ、
）ら、６２９（１９８３）、ポリオウィルス。

１１、ストラツス、イー、ジー、　（Ｓｔｒａｕｓｓ、
Ｅ、Ｇ、）、ライス、シー、エム、　（Ｒｉｃｅ、Ｃ，
Ｍ、）及びストラウス、ジェー、エイチ、　（ＳＬｒａ
ｕｓｓ、Ｊ、１１．）、ｔ＜４クラ−’）−（Ｖｉｒｏ
ｌｏｇｙ）１３３：　９２（１９８４）、シンドビスウ
イルス。

本明細再においては、アミノ酸残基又はアミノ酸に対し
、以ドの省略形を適用する。

二支ム正−二丈生五バー　二メー：Ｅ査−脩−Ｌ−アラ
ニン　　　　Ａ　　　　　　ＡｌｕＬ−フルギニン　　
　ＲＡｒｃ Ｌ−アスパラギン　　Ｎ　　　　　　Ａｓｎ■−一アス
パラギン酸　Ｄ　　　　　　ＡｓｐＬ−システィン　　
　ＣＣｙｓ Ｌ−グルタミン　　　Ｑ　　　　　　ＧｌｎＬ−グルタ
ミン酸　　Ｅ　　　　　　　Ｇｌｕグリシン　　　　　
　Ｇ　　　　　　ＧｉｙＬ−ヒスナノン　　　ＨＩ（ｉ
ｓ Ｉ−−イソロイシン　　Ｉ　　　　　　　Ｉ　ｌ　（！
Ｌ−ロインン　　　　Ｊ、　　　　　　ＬｃｕＬ−リシ
ン　　　　　Ｋ　　　　　　ＬｙｓＬ−メチオニン　　
　Ｍ　　　　　　ＭｅｔＬ−フェニルアラニンド　　　
　　ＰＩ＋ｅＬ−プロリン　　　　　Ｐ　　　　　　　
Ｐｒ。

Ｌ−セリン　　　　　Ｓ　　　　　　５ｅｒＬ−スレオ
ニン　　　Ｔ　　　　　　Ｔｌ＋ｒＬ５−トリプトファ
ン　Ｗ　　　　　　　”ｒ　ｒ　ｐＬ−チロシン　　　
　Ｙ　　　　　　’ｒｙｒＬ−バリン　　　　　Ｖ　　
　　　　Ｖａｔ萌に“Ｄ”の印を付けた場合、先の省略
形はＤの立体配置のアミ／ｆ′ｌｋを示す。

本明細書を通して、′Ｎ末端保護基”はアリールカルボ
ニル、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、ア
リールオキシカルボニル、アラルコキシカルボニル、ア
リールスルホニル又はアルキルスルホニル　ペプチド保
護基又はペプチド合成技術に精通した者に公知の他の均
等物を意味する。グロス（Ｇｒｏｓｓ）及びマイエンホ
ラファー（Ｍｅｉｅｎｈｏｆｃｒ）ｉｄ、ペプチド（Ｔ
ｈｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）、３巻（アカデミ・ンク　プ
レス（八ｃａｄｃｍｉａ　Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク
、１９８１）、ページ３〜８１には多くの適当な７ミノ
保護基が記載されている。本明細書において、個々に又
はより大きなハの部分として、“アルキル”は線状、環
状又は分岐状の炭素原子１〜１０個を有するｊｍ肪族部
分を意味し、″置換アルキル”は１個又は複数個のへテ
ロ原子、例えばＮ、Ｏ又はＳを含有する置換基を有する
アルキル部分を意味し、“アリール”は炭素原子６〜１
８個を有し、置換されてないか又は一つ又はそれ以上の
フルキル、置換アルキル、ニトロ、アルコキン又はハロ
基で置換された芳ぐ）腹部分、例えばフェニルを意味し
、“アルカリール°゛は脂肪族ｊｒ）換基を有しそして
随時他の１？を換壓、例えば一つ又はそれ以」二のアル
キル、置換アルキル、アルコキシ、又はアミノ基を有す
る仄索数７〜１９個の７リ一ル部分を意味し、′アラル
キル”は１個又は複数個の７リール基を含有し、炭素原
子６〜１８個を有する直線状又は分岐状のＩｌ’ｆｌ肋
族ｒｆＷ分を意味する０本明細書において、“ハロ”は
Ｃ１又はＢｒを意味する。

Ｎ末端保護基Ｒ’の適当なものの例にはホルミル、アセ
チル、トリフルオロアセチル、ベンノルオキシカルボニ
ル（カルボベンゾキシ）、置換ベンジルオキシカルボニ
ル ルボニル リルオキシカルボニル、７タロイル、ベンゾイル、アセ
トアセチル、クロロ７セチル、７エ／キシカルボニル、
メトキシスクシニル、スクシニル、２。

４−ノニトロフェニル、ダンシル（ｄａｎｓｙ　ｌ　）
、ｐ−メトキシベンゼンスルホニル、ｐ−トルエンスル
ボニル、メタンスルホニル及びフェニルチオが含まれる
。

Ｎ末端保護基Ｒ１のある種のものは本明細書を通して以
ドのように省略する： Ｚ　　　　　：　カルボベンゾキシ Ｂｏａ　　　　：ｔ−ブチルオキシカルボニルＡｃ　　
　　：　アセチル ビし　　　　　：　エチル Ｓｕｅ　　　　：　　スクシニル Ｍｅ　ＯＳｕ　ｃ　：　　メトキシスクシニルＤＮＳ　
　　　：　　ダンシル ＤＮＰ：２．４−ノ二トロフェニル アミノ基側頷を有する化合物は該側鎖に結合する適当な
Ｎ末端保護基を随１時含むことができる。

同様に、酸又はヒドロキシ側鎖を有するアミノ酸残基は
ベンノル又は飢の過当なエステル又はエーテルの形態で
保護できる。

的記したように、Ａ１−Ａ４は立体配置りのアミノ酸又
はアミノ酸Ｍ似体であり得る。本明細書において、“類
似体”は天然には存在しないアミノ酸である下記式（１
１） ］ 式中、 Ｒ　Ｊは随時末端がヒドロキシ、アミ／、ホスフェート
又はチオ１にであるアルキル、置換アルキル、アリール
、アラルキル又はアルカリール晶であることができる の基を意味する。このような類似体の例にはヒドロキシ
プロリン、七−カルボキシグルタメート、Ｏ−ホスホセ
リン、カルニチン、システィン酸、フェニルグリシン、
ａ−７ミノイソ酪酸及びα−アミノカプロン酸が含まれ
る。

生理学的に許容できる式（Ｈの化合物の塩には、もし存
在するならば、遊離塩基の酸付加塩が含まれる。ここで
、該酸は有機又は無機酸、例えば塩酸、リン酸、マレイ
ン酸、酢酸、クエン酸、コハク酸等である。あるいはま
た、ナトリウム、カリウム及１アンモニウム塩を含む遊
離ペプチド酸（ｐｃｌｌｔｉｄｉｃ　ａｃｉｄｓ）の塩
も本発明の範囲内に含まれる。

ピコルナウィルスのタンパク質の切断部位の間の相同関
係（ｂｏ＋ｎｏ　ｌ　ｏｇｙ　）を第２図に示す。第２
図に、ピコルナウィルス１型のタンパク質に対する塩基
配列データに加えて、２２個の公知切断部位を記す。ウ
ィルスにより特定されるプロテアーゼによって認識され
る切断部位を斜線で示し、正確に相同なもの（ｅｘａｃ
ｔ　ｈｏｍｏｌｏｇｙ）は黒点で示す。第２図に記載の
データはピコルナウィルスの切断部位がしばしば、しば
しば疎水性残基、例えばアラニン、バリン、インロイシ
ン又はロイシンに囲まれたグルタミン−グリシン又はグ
ルタミン酸−グリシン配列の存在によってマークされる
ことを示唆する。

これまでに同定された他の切断部位はアスパラギン残基
を含む。

トガウイルスの溝近タンパク質の切断部位はもつと変化
に富んでいる。トガウィルス科の小仲間（ｓｕｂｓｅｔ
）であるアルファウィルスの４５合、アラニン残基が存
在する傾向にある。セムリキ　７オーレスト　ウィルス
（Ｓｅｍｌｉｋｉ　Ｆｏｒｅｓｔ　ｖｉｒｕｓ）とシン
ドビス　ウィルス（Ｓｉｎｄｂｉｓ　ｖｉｒｕｓ）とを
比較すると個々の部位が中位から高度に保存されている
のが観察されるが、異なる部位は実質的に化学的に異な
っており、これは幾つかのプロテアーゼの関与を示唆し
ている。エンベロープタンパク質２と３との間で切断さ
れる二塩栽のａ　ｒ　ｇ　−ａ　ｒ　ｇ／ｓｅｒ又はｌ
ｙｓ−ａｒｇ／ｓｅｒ部位を除く総ての切断はキモトリ
プシンを二類似したものと考えられる。

本発明の方法によって特定される化合物は単独で、互い
に組み合わせて、他の治療薬と組み合わせて又は種々の
不活性な生理学的に許容できる担体と組み合わせて種々
の投快形態で経Ｆ」的又は非経口的に使用できる。必要
な投与量は化合物、使用される投与形態及び治療される
動物によって変わるであろう。典型としては、より低い
投与量で療法を始め、所望の阻二ｇ効果が達成されるま
で投与量を増加させる。

本発明の化合物はケ）ナー（にＣｔｔｎｅｒ）らにより
５２：　　５６（１９７４）及びケトナーらによる７ニ
デーで開示されたものと一般に同様の方法によって製造
て゛きる。

ｊ？ｌ初１こ、Ｎ−保、′ａ（Ｎ−ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ
）ペプチド類又はアミノ酸類を約１当量のＮ−メチルモ
ルホリン層び１！！！Ｉ量のクロロギ酸イソブチルと約
−２０℃においで反応させ、混合ペプチド−イソ酪酸無
水物（ｍｉｘｅｄ　ｐｅｐｔｉｄｅ−ｉｓｏｂｕｔｙｒ
ｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎ）＋ｙｄｒｉｄｅ）を生成させる
。この標準的な方法はアングーソン（＾ｎｄｅｒｓｏｎ
　）ら、ジャーナル・オブーアメリカン・ケミカル・ソ
サイアティ−（Ｊ、＾ｍｅｒ、Ｃｈｅｗ、Ｓｏｃ、）８
９：　５０１２（１９６７）ｌ：記ｆｌｊｔでイル、　
ｆｊｓ二に、得られた混合無水物をテトラヒドロフラン
又は他の適当な不活性非プロトン性溶剤中の約１当社の
ノアゾ〆タンでＯ′Ｃにおいて処理し、Ｎ−保護ペプチ
ド又はアミノ酸ノアゾメチルケトンを生成させる。第三
に、この化合物を０°Ｃにおいて無水エタ／−ル又はエ
ーテル中のＨＣ１又はＩ（巳τ・の溶液で処理し、Ｎ−
保護ハロメチルケトンを生成させる。第四に、メチルプ
トン類を対応するＮ−保護ハロメチルケトン類から触媒
として木炭上の１０％パラジウムを使用し無水メタノー
ル中の水素化分解によって生成できる。

）１保＋Ｊｌ　（ｄｅｐｒｏｔｅｃｔｅｄ）ハロメチル
ケトンを前記方法に従って生成した他のＮ−保護ペプチ
ド類又はアミノ酸類の混合無水物と結合（ｃｏａｐｌ　
ｉｎｇ）させることによってより大きなペプチドハロメ
チルケトン類を組み立てることができる。Ｎ末端アミノ
基の脱保護はトリフルオロ酢酸、無水ＨＦ、無水ＨＣｌ
で処理するか又は当業者１こ公知の他の方法によって達
成できる。

へロメチルケトンよりはむしろ脱保護メチルケトンを使
用し、類似の結合方法によって対応するペプチドハロメ
チルケトン類を製造できる。これらの方法の特別な例は
以下に■１示され一〇いる。

本発明の範囲内の化合物を生成するのに適した一般的な
適用方法は１記実施例の前段薄に記載されている。合成
力法及び実施例において、他に指示がなければ部及びパ
ーセントは総て重量単位であり、度は総てセ氏である。

Ｎ−保護アミノ酸又はペプチド約１〜２ｇをテトラヒド
ロフラン（ｉ″ＨＦ）２０＋ｎｊ２に溶解し、得られた
溶液を−２，０°Ｃに冷却する。ト■−メチルモルホリ
ン（１当量）及びクロロギ酸イソブチル（１当量）を加
え、５分後に冷えたＴ　ＨＦを更にＩＯＪ及びトリエチ
ルアミンを１当量加える。得られた混合物をジメチルホ
ルムアミド（Ｄ　Ｍ　Ｆ　）　５　ｍＡ）こ；容　　、
解した当量のアミン塩酸塩又はトリフルオロ酢酸塩にす
ぐに加える。次いで反応系を１時間、−２０°Ｃにおい
て、次いで２時間、約２３　’Ｃにおい一ζ攪拌する。

得られた混合物を濾過し、次いでそれによって得られた
９戸液を蒸発させること１こよって約５−に濃縮する。

得られた２ａ縮物又は残渣を酢酸エチルに溶解し、次い
で０．２Ｎ塩酸、５％炭炭酸水ナナトリツム溶液び飽和
塩化ナトリツム水溶液で続けて洗浄する。次いで得られ
た有ＰＩ　ｌａｒ液を硫酸す）　１７ウム上で簡Ａ１に
乾燥し、ろ過し、最後に蒸発させ、粗製のベブチＩＪ生
成物を得る。

２、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミード（０８児−と冬１
−例−ｋ Ｎ−保護アミノ酸及びペプチドのＮ−ヒドロキシスクシ
ンイミドエステル類はアングーソンら、−イ、１１゜＝
　　８６：　　１８３９（１９６４）に記載されたもの
と実質的に類似の方法によって製造でさる。Ｏ３ｕエス
テルを最小容量のジオキサンに溶解し、得られた溶液を
等容量の、トリエチルアミン１．５当量及びアミノ酸（
１，５当量）又はペプチド（１，１当ｉｔ、）から成る
水性溶液１こ加え、反応混合物を形成する。約５分後、
完全な溶液が得られなければ反応混合物の少量の試駐拭
料は水で希釈し、もうひとつの試料はジオキサンで希釈
できる。

得られた結果を基づいて、次いで反応混合物を適当な溶
ｆｉ１１　（水又はジオキサン）で完全に７８解するま
でＳ釈する。反応が終わった後、反応山”、合物を塩酸
で酸性にし、得られた生成物を酢酸エチルに抽出虹る。

次いで得られた抽出物を０．２Ｎ塩酸、次い″ｃ鉋相和
塩化）　ｌ）ラム中の０．２Ｎ塩酸で洗浄する。次いで
洗浄した抽出物を硫酸ナトリウム上で乾燥し、７Ｊ１過
し、最後に、乾燥するまで蒸発させ、＄ｌＬ　製のペプ
チドを得る。

３、他」揄づｐ友 ベア”−ｆ’ｆのグンシル、２，４−ジニトロ７エ二ル
及びメトキシスクシニル誘導体は選ばれた塩化物、弗化
物又はＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを適当な
ペプチドと反応させることによって！！遺される。アセ
チル及びスクシニルｙ、導体は対応する無水物から製造
できる。ペプチド塩酸塩又はトリフルオロ酢酸塩を５０
％水性ジオキサン中（二〇、２５ミリモル／　ｍｆｌの
水△飄でンが１稈し、イ：）られた溶液を０゛Ｃに冷却
する。迅ばれた結合試薬（１，０〜１．２当量）をジオ
キサン中に溶解し、炭酸水素ナトリウム２当量と一結に
加える。得られた反応系をニンヒドリン陽性物質の消失
に従って検査する。

４、メチルエステル類のケン化 Ｎ−保護メチルエステルをジオキサン（１ミリ−［：　
ル／　ｍｌｌ　）ニ溶解し、等容量の１　、ＯＯＮ＊ｌ
’ｌｉＨヒナトリウムを３０分間にわたって加える。出
発物質の消失は薄）９４クロマトグラフイーによって険
た士る。この反応が終わった後、当量の１．０（ｊＮｊ
ｊ“）６酸を加え、溶液を水で］、　ＯＬｌ　ｍＡに希
釈する。次いで生成物を酢酸エチル中に抽呂し、？１シ
られな抽出物を０．２Ｎ塩酸、次いで飽和塩化ナトリウ
ム中の０．２Ｎ塩酸で洗浄する。次いで溶剤を蒸発させ
ることによって除去し、粗製のカルボン酸を得る。

５、、！３ｏｃ７，１先旗湊ｊυ覧 選ばれたペプチドをトリフルオロ酢酸に溶解し、得られ
た溶液を５分間、２３°Ｃにおいて攪拌することによっ
てＢｏａ保護基をペプチド類から除去する１次いで冷エ
ーテルを加える。エーテルを加えて沈殿物が得られるな
らばそれをエーテルですり砕き、単離する。沈殿物が得
られないならばエーテルを蒸発させ、トルエンを加えて
残りのトリフルオロ酢酸を一緒に蒸発させ、トリフルオ
ロ酢酸塩として脱保護ペプチドを得る。

あるいはまた、１３ｏｃ保護ペプチドをエタノール性塩
酸（２，０〜３　、５　Ｎ　）に溶解し、得られた溶液
を約２３゛Ｃで約３０分間、攪拌し、次い′ｔ″溶剤を
蒸発させてもよい。総ての場合に、ペプチドヒドロクロ
リド又はトリフルオロ酢酸塩を減圧下、固体水酸化カリ
ウム及び五酸化リンの存在下で一晩乾燥する。

６、し−ブチルエステル類（Ｂｕ　）の延に広鞄し−ブ
チルペプチドニスデル類をトリフルオロ酢酸に溶解し、
得られた溶液を１時間、約２１）℃において攪拌する。

次いで溶剤を蒸発させ、得られた残渣をトルエンに再溶
解させる。２回目のトルエン蒸発段階の後、残渣を減圧
下、固体水酸化カリウム上で乾燥する。粗製生成物を適
当な溶剤、例えばトルエン又は酢酸エチルから結晶させ
る。

７、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）方法５Ｘ１０ｃ
ｍシリカゲル扱上て°蛍光試薬を用い′ζ１’　Ｌ　Ｃ
処理を行う。ＵＶ光又はヨウ素びんを使用する慣例の方
法によってスポットをＩＪ視化する。

Ｂｏｃ基によって保護された遊離のアミノ基を有するペ
プチド類をＨＣｌ１４気にさらし、太いでニンヒドリン
で染色する。次の溶剤系がクロマトグラフィー用に有用
である。

メタノール：クロロホルム（１：９） ブタ／−ル：酢酸：水（４：　ｌ　　１）酢酸エチル：
ヘキサン（８：２） ：＝　＝−咎上：ペプチドハロメチルケトン　の製１Ｊ
ｆＬ本覧 示された文献の方法によって又は以下に記載したように
代表的なごりペプチドハロメチルケトン類を′ｉｉ造し
た。

クロロギ酸イソブチルを使用する混合無水物方法を用い
、Ｎ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニルグリンルーし一
アラニンをロイシンクロロメチルケトンヒドロクロリド
と縮合することによってＡＣ−ｐＨ（！−Ｇｌｙ　−Ａ
ｌ　ａ　　Ｌｃ　ｕ　Ｃ）ｌｚｃｌを製造した。バワー
ズ（Ｐｏｗｅｒｓ）ら、−ビオキミカ・玉２−（郁シジ
力・ｌムム（Ｂｉｏｃｂｅｍ、肚叶蝕り弄状４−）丸し
ル：　　２４６−２６１　（１９７７）には類似のノブ
法が記載されている。粗製生成物を酢酸エチルから＋Ｉ
Ｊ粘品し、ｒＩ色結晶性固体（融点、１５２．４〜］Ｓ
３，８°Ｃ）（融）、う、は】６゛ｌ〜１６８°Ｃと報
告されている）を生成させた。

）３．ん１疹１！」ビづりヨＬ二ノ」ユニ↓ヱ也」巨以
しＴＨＦ１００ｄ中のＺ−Ｐｈ　ｅ　−Ｇｌ　ｙ　　Ａ
ｌａ　　ＯＨ４，００２（９，４ミリモル）及びＮ−メ
チルモルホリン０．９５ｇの溶液を窒素ドに−２０“Ｃ
に冷却し、次いでクロロギ酸イソブチル１，２８９を加
えた。５分後、無水アセトン中のロイシンクロロメチル
ケトンヒドロクロリド１，１４ｙの７８液を加え、次い
でＮ−メチルモルホリン０．９５ｙを加えた。得られた
反応混合物を攪拌し、２時間にわたって約２５°Ｃに暖
めた。溶剤を蒸発させ、得られた残渣を酢酸エチルに溶
解した。この溶液を氷水、次いで冷５％クエン酸で洗浄
した。得られた溶液を乾燥し、次いで溶Ａｌｌを蒸発さ
せ、泡状の固体５．６３ｇを得た。この物質をエーテル
２５Ｏｆｆｌβで一晩すり砕いた。得られたゲル様生成
物をエーテルから炉別し、史にエーテルで洗浄し、粗製
生成物３．ｌ　ｏｇを微細な白色粉末として得た。２゜
５６３を暖めた酢酸エチル２５＋Ｊに溶解し、濁った溶
液を生成させた。この′＃液を炭素（セライト）を通し
て濾過し、史にエーテル２　ｆ）　Ｏｍλを加えた。

結晶種を加えた後、１．１５１？の微細な針状結晶のＺ
　　　Ｐｂ　ｅ　　　Ｇｌ　　ｙ　　　Ａｌ　　ａ　　
　Ｌｃ　　ｕ　　ｃ＋−ｒ２ｃｌが沈殿し、これを集め
た。これらの結晶は１３８−１４１．８℃テ融解した：
δＢ−５９°（Ｃ＝　Ｏ。

４５ｇ／アセトン１００＋ｏβ）。

ＣｚｓＨ３７ＣＩ　Ｎ−ＯＧ： 計算値：Ｃ６０，７８、Ｈ６，５１、Ｎ　９．７８、実
験　イ直　：Ｃ６１）、４５　　、　　Ｈ６，４４、Ｎ
　　９．６　９　　、Ｃ，７！、−Ｐｌ＋　ｅ　−Ｃａ
ｌ　ｙ　−Ｌｃ　ｕ　−ＬｅｕＣＨ２ＣＩ標題の化合物
の合成の卒備段階として、Ｚ−Ｐｈ　ｃ　−Ｇｌ　ｙ　
　Ｌｅ　ｕ　−ＯＨを以ドの方法で製造した。

Ｚ−Ｐｈ　ｅ−ＯＬ−１のＮ−ヒドロキシスクシンイミ
ドニスデル（１９，１５ｇ、４８．３ミリモルンをノオ
キサン５０ｍλに溶解し、得られた溶液を濾過してＨＧ
Ｉ　ｙ　　　Ｌｃ　ｕ　　　０Ｈ（１，０，Ｏｇ、５３
゜１ミリモル）、トリエチルアミン（１０，１ｍＡ、７
２．４ミｌＪモル）及び水（５０ｍｊｉ）から成る溶液
に入れた。この反応混合物を約２３℃で一晩、攪拌し、
次いで蒸発させることによって約６０％に濃縮した。得
られた濃縮溶液を酸性になるまで１．ＯＮ塩酸で希釈し
た。生成物Ｚ−Ｐｈ　ｅ　−Ｇｌ　ｙ−Ｌｅｕ−ＯＮを
酢酸エチルに抽出し、得られた抽出物を０．２Ｎ塩酸、
次いで０．１ＯＮ塩酸に調節された飽和塩化す）　＋７
ウム水溶准で洗浄した。洗浄後、酢酸エチル溶液を無水
硫酸ナトリウム上で乾燥し、ｒ過した。次いで酢酸エチ
ルを＆発させ、白色の泡状生成物２２．５ｇを得、次い
でこれを酢酸エチルから結晶させてＺ−Ｐｈ　ｃ　−Ｇ
ｌ　ｙ　−Ｌｅｕ−ＯＨ（融、白：、１４７−１４８°
Ｃ）１６．７Ｊを得た。

Ｃ２５Ｈ３＋　Ｎユ０６： 計算値：Ｃ６３，９４、Ｈ６、６７、Ｈ８，１ノ５、実
験値：Ｃ６４，１９、Ｈ６，６５、Ｈ８，９０、ケトナ
ー（Ｋｅｔｔｎｃｒ）ら、アチーブ・オプ・三人。

３（１９７４）によって開ボされたものと実質的に類似
の方法によってＨＬｃ　ｕ　ＣＨ２Ｃｌ　・ＨＣｌを製
造した。

テトラヒドロフラン１０−にＺ−Ｐｈｃ−Ｇｌｙ　−Ｌ
ｅ　ｕ　−０Ｈ（１，０５ｇ、２．２４ミリモル）を溶
解し、得られた溶液を一２０°Ｃに冷却し、Ｎ−メチル
モルホリン（０，２５ｎβ、２．２４ミリモル）及びク
ロロギ酸インブナル（０，２９ｎβ、２．２４ミリモル
）を加えることによって混合無水物を製造した。得られ
た混合物を５分間、−２０°Ｃで攪拌し、次いで冷テト
ラヒドロフラン２０の２及びトリエチルアミン（０，３
１ｎβ、２．２４ミリモルンン ／　を加えた。この混合物を冷Ｎ、Ｎ−ツメチルホルム
アミド５　＋ｎｆｌ中のＨ−Ｌｅ　ｕ　ＣＨ２Ｃｌ　　
・ＨＣＩ＜ｏ、４８ｇ、２．２４ミリモル）の溶液に加
えた。

得られた反応混合物を約１時間、−２０°Ｃ″ｃ攪件し
、次いで２時間、約２：３℃で攪拌した。次いで混合物
を汀１過し、テトラヒドロフランをン戸７ｃ１．から蒸
発させた。得られた残渣を酢酸エチルＩ　ＯＯｍ１１こ
溶解した。次いでこの溶液を０．２Ｎ塩酸、５％炭酸水
素す）　ｌ）ラム水浴液及び飽和塩化す）　ＩＪツム水
溶欣で続けて洗浄した。次いで洗浄した抽出物を無水硫
酸ナトリウム上で乾燥し、次いで溶剤を蒸発させて１．
２２の泡状物を得た。この生成物を酢酸エチルから結晶
させてＺ　　ＰＩ＋ｅ　　Ｇｌｙ　　Ｌｅ　ｕ　　Ｌｅ
　ｕ　ＣＨ２Ｃｌ　（融点、１６０−１６１．５’Ｃ）
０．９４ｇを得た。

Ｃ３２Ｆ１．３Ｎ、Ｏ，ＣＩ　： 計寥フ、イ０シ［：Ｃ６２，４７、Ｈ７，０６、Ｈ９，
１１、実験値：Ｃ６２，３２、Ｈ６，９０、Ｈ９，１４
、Ｄ、Ｚ−Ｐｔ＋　ｅ　−Ｇｌ　ｙ　　Ａｌ　ａ　−Ｌ
ｅｕＣＨ２Ｂｒ前記Ｚ−ＰＩ＋　ｅ　−Ｇｌ　ｙ　−Ｌ
ｅ　ｕ　−Ｌｅ　ｕＣＨ２Ｃ１の製造に対して記載した
方法に実質的に従って、Ｚ−Ｐｈ　ｅ　−Ｇｌ　ｙ　−
Ａｌ　ａ　−０１１（０，４１Ｌ　Ｏ，９ｂミリモル）
の混合無水物を製造し、Ｈ−Ｌｅ　ｕ　ＣＦ（２Ｂｒ　
＆）ｌＢｒに結合させた。得られた生成物を酢酸エチル
：ヘキサンから結晶させて０．３０ｇを得た。生成物を
同じ溶剤から再結晶させて０．０７バ融点、１３５．５
〜１：３８℃（分解））を得た。

Ｃ２，ＨｚｔＮ４０６ｕｒ　： 計ＳＦ、値：Ｃ５６，３９、Ｈ６，０５、Ｈ９，０７、
実験値：Ｃ５６，７０、Ｈ６，２０、Ｈ８，’３７、Ｅ
、Ｚ−Ｐｈ　ｅ　二Ｇｌ　　　−Ａｌ　ａ　−ＶａｌＣ
Ｈ２Ｃｌ最初に、”ｌ’　ＨＦ　１０　ｄにＢｏ　ｃ　
−Ｖａ　ｌ　−０Ｈ（６，５ｇ、３０ミリモル）を溶解
し、これをＮ−メチルモルホリン（３，３Ｊ、３０ミリ
モル）及びクロロギ酸イソブチル（３，９ｖｎＲ１３０
ミリモル）ｔｌ’１０分間、−２０°Ｃにおいて処理す
ることによって面躯体ＨＶａ　ｌ　ＣＨ２Ｃｌ　　・１
−ＩＣＩ　を製造した。（；トられｒこ混合物を濾過し
、残った物質を冷′ｌ′１１Ｆ　４０　ＩＪで洗浄した
。−緒にした１ｒ５液をノアジメタン：エーテル２００
ｍβに加えた。得られた溶液を２時間、０°Ｃにおいて
攪拌し、次いで溶剤を蒸発させることによって除去して
油状物を得た。

油状物を酢酸二チル（こ溶解し、５％炭酸水素ナトリウ
ム、次いで飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、次いで
硫酸ナトリウム上で乾燥した。溶剤を蒸発すると６，４
！？の油状物が得られた。油状物をエーテル１００１ａ
ｆｔに溶解し、得られた溶液を５％過剰のエタ／−ル性
ＨＣＩ　で１５分間、０℃において処理した。この′＃
衣を冷水、次いで飽ネ１１塩化す）　ｌ）ラム水溶液で
洗浄し、次いで硫酸ナトリワノ、上で乾燥した。溶剤を
蒸発後、生成物をヘキサンで洗浄して２．７３のＢｏ　
ｃ　−Ｖａ　ｌ　ＣＨ２Ｃ１（融点、７０−７３°Ｃ）
を得た。Ｂｏａ−ＶａｌＣｆ４２ＣＩ　（１，０ｙ）を
５　ＩＪの３Ｎｘタノール性１−Ｉ　ＣＩで３０分間、
約２３°Ｃにおいて攪拌することによって脱ブロック（
ｄｅｂｌｏｃｋ）　シた。溶剤を蒸発し、得られｒこ残
渣をエーテルですり砕いて０゜６９９のＨ−Ｖａ　Ｉ　
ＣＨ２Ｃｌ　　−ＨＣｌ　　を得た。

次いで面記Ｚ　　Ｐｈｅ　−Ｇｌ　ｙ−Ｌｅｕ　　Ｌｅ
ｕｃＨ，ｃｌの製造で記載したものと実質的に類似の方
法によってＺ−Ｐｔ＋　ｅ　−Ｇｌ　ｙ　−Ａｌ　ａ　
−０［（（１，６０ｇ、３．７３ミリモル）をＨ−Ｖａ
ｌＣＨ２Ｃｌ　　・ＨＣＩ　に結合させた。得られた生
成物を酢酸エチル：エーテルから結晶させてＺ−Ｐｈ　
ｅ　　Ｇｌ　ｙ　−Ａｌ　ａ　　Ｖａ　ｌ　ＣＨｚＣｌ
　（Ｗ点、１４３〜１４４°Ｃ）１．２９ｇを得た。

ＣｚａＨ２ｓＮ　−０−ＣＩ　： 計算イ直：Ｃ６０，１４、Ｉ−＋　　６　　、３　２　
　、　Ｎ　　１　０．０　２　　、実数値：Ｃ５９，９
２、Ｈ６，２５、Ｎ　１０．０５、Ｆ、Ｚ−ｆヨｌｅニ
ゴＵ−ＬニコＷ−虹二」）工旦）（、ＣＩテトラヒドロ
７ラン３０　ｄにＢｏ　ｃ　−Ｔｙ　ｒ−ＯＨ（１０ｙ
、３５．５ミリモル）を溶解し、次いでこれをＮ−メチ
ルモルホリン（３，９１ｍＡ、３５゜５ミリモル）及び
クロロギ酸イソブチル（４，６２！ｎβ、３５．５ミリ
モル）と５分間、−２０℃において反応させることによ
ってＢｏ　ｃ　−ＴｙｒＣＨＮｚを製造した。得られた
反応混合物を濾過し、濾過して残った物質を冷テトラヒ
ドロ７ラン５０ｍＡで洗浄した。得られたン戸液を集め
て一緒にした。−緒にした炉液をノアジメタン：エーテ
ル（〜４０ミＩＪモル）１５０ｎ＋Ｒに加え、得られた
反応混合物を１５分間、Ｏ′Ｃにおいて攪拌した。次い
で溶剤を室、Ａ気流で？Ａ発させた。残渣を酢酸エチル
にｉ８１臀し、得られｊこ溶液を水、次いで飽和塩化ナ
トリウム水溶液で洗浄した。洗浄した溶液を硫酸ナトリ
ウム上で乾燥し、次いで溶剤を蒸発させて粗製生成物を
得た。この物質をシリカゲル７５ｇを含イ１゛する４　
ｃａｎカラムで、溶剤としてクロロホルムを使用してク
ロマトグラフィー処理してＢｏｃＴｙ　ｒ　ＣＨＮ　２
　、’３　、６７　ｇを得た。この生成物をエーテルか
ら結晶し、第一生成′！ｌＪ１．ｏＧｇ１点、１３６〜
１３７“Ｃ）及び第二生成物ｏ、ｓｓｇ（融点、１３３
．５〜１３４，５“Ｃ）を得た。ＣＤＣｌ３中のＮＭＲ
はδ５．２７にジアゾプロトンを示しｔこ。

ＣＩ　、ト１　　＋　　ｓ　Ｎ　　３０　４　：計算値
：Ｃ５８，９９、Ｈ６，２８、Ｎ　１３．７６、実験値
：Ｃ５９，０８、Ｈ６，１６、Ｎ１３．６５、ｔ３　ｏ
　　ｃ　　−’ｌ’ｙ　　ｒ　　ＣＩＩＮ　　２（１，
８１５−１５、９２ミリモル）をテトラヒドロフラン３
０ｍ１ｌこ７腎解し、得られた溶液を３．４５Ｎエタ／
−ル性）１ｃｌ（１゜７２ｄ、５．９２　ミ’）　モル
）テ５　ｆｌｆｌ、０゛Ｃにおいて処理した。溶剤を温
度を調］ｈｔず１こロータリーエバポレーターで蒸発さ
せることによって除去した。残渣を酢酸エチルに溶解し
、得らｔＮ、た？Ｂ液を０．２Ｎ塩酸、次いで飽和塩化
ナトリワム水溶液で洗浄した。洗浄した溶液を硫酸ナト
リウム上で乾燥し、次いで溶剤を蒸発させ、結晶性のＢ
ｏｃＴ　ｙ　ｒ　Ｃ）（２ＣＩ　を得た。結晶ｔ　４ｉ
ｔ　離シ、冷エーテルで洗浄して第一４１：、放物（を
訓点、１１０〜１］２°Ｃ）（１，４５３及び第二生１
我物（融〕、°、（、〕１（）〜１１２　’Ｃ）　ｔ）
、９０ｇを得た。ＣＤＣｈのＮ　Ｍ　Ｒスペクトルは一
〇ＯＣＲ，ＣＩのメチレンプロトンがδ４．１に二重線
として現れたこと以外は予想したものと一致した。

Ｃ，、Ｈ，。Ｎｏ、０１： 計算値：Ｃ５７，４１、Ｈ６，４４、Ｎ　４，４６、す
に験　イ直　：Ｃ５７，６６、Ｈ６，６６、Ｎ　　４．
５　　２　．８ｏ　ｃ　−Ｔｙ　ｒ　ＣＨ２Ｃｌ　（０
，５９）を３．５Ｎエタノール性ＨＣＩ　　２０−で３
０分間、約２３℃において処理することによって脱ブロ
ック（ｄｅｂ　ｌ　。

ｃｋ）した。溶剤を蒸発し、得られた生成物、Ｈ−’ｌ
’ｙ　ｒ　ＣＨ２Ｃｌ　　・ＨＣＩ　（０，４５ｇ）を
固体水酸化カリツム及び五酸化リン上で減圧下で乾燥し
た。

次いで前記方法ＣにおけるＺ　　Ｐｈ　ｅ　−Ｇｌ　ｙ
−Ｌｅ　ｕ　−Ｌｅ　ｕ　ＣＨｚＣｌのｔｉ造で記載し
たものと実質的に類似の混合無水物結合方法によってＺ
−Ｐｈ　　ｅ　　　　　　Ｇｌ　　　ｙ　　　　　　Ａ
ｌ　　　ａ　　　−０Ｈ（０，７１ｇ。

１．８０ミリモル）をＨ−１”　ｙ　ｒ　Ｃ）（２ＣＩ
　　・ＨＣＩＩこ結合させた。生成物を酢酸エチルから
結晶させて０．７３９のＺ−Ｐｈ　ｅ　−Ｇｌ　ｙ　　
Ａｌ　ａ　−Ｔｙ　ｒ　ＣＨ２Ｃｌ　Ｏ０’７３ｇを得
た。生成物は１４０〜１６０℃でゆっくり分解し、１６
０〜１６０゜５°Ｃにおいて完全に分解するとともに１
ｉ！！解した。

Ｃ５ｚｌ−１ｓ５Ｎ　＜０７Ｃｌ　： 計算値：Ｃ６１，６７、Ｈ５，６７、Ｈ８，９９、実験
値：Ｃ６１，６０、Ｈ５，９２、Ｈ８，（ｉ９、前記方
法Ｃに記載したようにＺ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ　−Ｌａ　ｕ
　　　ＯＨがらＭｅ　Ｏ８ｕ　ｃ　　　Ｐｌ＋　ｅ　−
Ｇｌ　ｙ　−Ｌｅ　ｕ−ＯＨを製造した。ＺＰＩ＋ｅ−
Ｇｌ　ｙ　−Ｌｅ　ｕ　−−０１−１（４，００，９，
８，５２ミリモル）をメタノール１００１０ｆｌに溶解
し、１．０当量の２！１天水Ｉ　Ｃ＋及び炭素上の１０
％Ｐｄの存在１、バー（Ｐａｒｒ）装置で一晩、水素化
した。得られた反応清。

合物を濾過し、溶剤を蒸発してＨ−Ｐｈｅ　−Ｇｌｙ　
　Ｌｅｕ　　０Ｉ−１３，１１？を泡状物として得た。

この１Ｒ物をＮ、Ｎ−ツメチルホルムアミド５ｍ！に溶
解し、これにメトキシコハク酸のＮ−ヒドロキシスクシ
ンイミドエステル（１，９ｇ、８．４ミリモル）及びト
リエチルアミン（１，２ｍｌ、８．４ミリモル）を加え
た。この反応混合物をＯｏＳ　Ｏ時間、室温で攪拌し、
次いで更にトリエチルアミン（０゜５８ωβ、４，２ミ
１７モル）を加えた。次いで反応混合物を一晩攪拌した
。この時点で５％炭酸水素ナトリウム水溶液５１Ｉｌβ
を加えた。５分後、反応混合物を５％炭酸水素す）　＋
７９ム水ｆ８液で５０ωβに希釈して沈殿物を得、これ
を捨てた。酢酸エチルを反応混合物に加え、生成物Ｍｅ
　Ｏ３ｕ　ｃ　−Ｐｈ　ｅ−Ｇｌ　ｙ　−Ｌｅ　ｕ−Ｏ
ＬＩを抽出した。得られた抽出混合物の水性部分を塩酸
で酸性化し、次いで酢酸エチル相即ち抽出物を水性部分
から分離した。

抽出物を０．２ＯＮ塩酸、次いで０．２ＯＮ塩酸中で調
製された飽和塩化ナトリウムで洗浄した。次いで洗浄し
た溶液を硫酸す）　＋７ウム上で乾燥した。

溶剤を蒸発させ、得られた残渣を酢酸エチルから結晶さ
せてＭｅ　Ｏ３ｕ　ｃ　−Ｐｈ　ｅ　＝Ｇｌ　ｙ　　Ｌ
ｅＬｌ　　（）　ｆ４　（融、白１．１６７．５〜１６
８゜５°Ｃ）１．３０１ｉＩを得た。

ＣｚｚＨ３２Ｎ　３０　、： 計算イｌｒｆ：Ｃ５８１１、Ｈ６，７６、Ｈ９，３７、
実験値：Ｃ５９，２０、Ｈ６，９９、Ｎ　９．０６、次
いでＺ−Ｐｈ　ｅ　　Ｇｌ　ｙ　−Ｌｅ　ｕ　−Ｌｅ　
ｕＣＨ２ＣＩの製造で記載したものと実質的にｊｆｌ似
の方法によってＭｃＯ８ｕｃ−Ｐｈｅ　　Ｇｌｙ−Ｌｅ
　ｕ−ＯＨ（１，０ｉ？、２．２３ミリモル）をｆ（−
Ｌｃ　ｕ　ＣＨ２Ｃｌ　　・）（ＣＩ　に結合させた。

結合後、溶剤を蒸発し、泡状生成物を得、これを酢酸エ
チルから結晶させ、第一生成物Ｍｅ　Ｏ３ｕ　ｃ　−Ｐ
ｂｅ　−Ｇｌ　ｙ　−Ｌｅ　ｕ　　Ｌｅ　ｕ　ＣＨ２Ｃ
ｌ　（融点、１１６〜１１７℃）０．３０ｇ及び第二生
成物（融点、１１５〜１１６℃）０．２５．を得た。第
一生成物の試料を分析した。

Ｃ，，８，３Ｎ、Ｏ？ＣＩ　： 計算値：Ｃ５８，５１、Ｈ’７．３０、Ｎ　９，４２、
実験値：Ｃ５８，６７、Ｈ７、２０、Ｈ９，３１、Ｈ，
Ｓｕ　ｃ　−Ｐｂ　ｅ　　Ｇｌ　ｙ　−Ａｌ　ｕ　　Ｌ
ｃ　ｕＣ１１２Ｃ１ テトラヒドロ７ラン又はアミンヒドロクロリドを溶解す
るのに必要な最小量の水を含有するテトラヒドロ７ラン
中のアミン成分を加えることｆ：徐さ、前記混合無水物
結合方法に実質的に従って調製した。メチルエステルは
メタノール中の水性水酸化ナトリウムでケン化した。

混合無水物方法を用いて、Ｂｏｃ　　Ｇｌｙ　−０Ｈ（
３５，０ｇ、２００ミリモル）をＨ−Ａｌａ−○ＣＨ，
・ＨＣＩ（２７，９１？、２００ミリモル）に結合させ
ることによって製造した。得られた生成物（４３，５ｆ
！、１ロアミリモル）をジオキサン中の無水ＨＣＩ　で
脱ブロックした。脱ブロツク後、ジオキサン：エーテル
から結晶させ、２７，１．のト■Ｇｌ　ｙ　−Ａｔ　ａ
　　ＯＣＲ，・ト［Ｃｌ　　を得た。

混合無水物方法を用いて、Ｂｏ　ｃ　−Ｐｂ　ｅ　−０
）＋（２６，５ｇ、１００ミリモル）をＨ−Ｇｌｙ−Ａ
ｌ　　　ａ　　　−ＯＣＨ，・　　ＨＣＩ　　　Ｎ　　
　９．６　　ｇ、　　　１　００　　ミ　　リモル）に
結合させた。酢酸エチル：ヘキサンがら結晶化した後、
３０．２１．のＢｏｃ　Ｐｈｅ　　Ｇｌｙ　−Ａｌ　ａ
　　０ＣＨ３（融点、１２６．４−１２７゜８゛Ｃ）を
得た。

ＣＩＩＨ２！Ｎ　ｚＯｓ： 計算値：Ｃ５８，９５、Ｎ７，７１、Ｎ　１０．３１、
実験値：Ｃ５９，４９、Ｎ７，０５、Ｎ　１０，２６、
Ｂｏ　ｃ−Ｐｈｃ　　　Ｇｌ　　ｙ　　　Ａｌ　　ａ　
　　０ＣＨｐ（２８，４ｇ、６９．７ミリモル）をケン
化して、固体Ｂｏ　ｃ　−Ｐｈ　ｅ　−Ｇｌ　ｙ　　　
Ａｌ　ａ　−０Ｈ２２ｇを得た。これをアセトン：エー
テルから結晶させ、２０ｇの生成物（融点、１０５．７
〜１０９℃）を得た。

Ｃ１９８２７Ｎ　＊０６： 計算値：　Ｃ５８，００，＋１６．９２、Ｎ　１０．６
８、実験値：Ｃ５８，０４、Ｈ６，７８、Ｎ　１０，６
　Ｇ、混合無水物方法を用いて、Ｂｏ　ｃ　−Ｐｈ　ｅ
　−Ｇｌ　ｙ　−Ａｌ　ａ　−０Ｈ（１１，８９，３０
ミリモル）をＨ−Ｌｅ　ｕ　ＣＨ２Ｃｌ　　・ＭＣＩ　
（６，０６ｙ、３０ミリモル）に結合させることによっ
てＢｏ　ｃ　−Ｐｈｅ　−Ｇｌ　ｙ　−Ａｌ　ａ　−Ｌ
ｅ　ｕ　ＣＨ２Ｃｌ　　を製造した。Ｂｏ　ｃ　−Ｐｈ
　ｅ　−Ｇｌ　ｙ　−Ａｌ　ａ　　ＯＨの混合無水物を
テトラヒドロ７ラン３０〇−及びアセトン２５−の溶液
中で調製し、次いでアセトン中のＨＬｅ　ｕ　ＣＨ２Ｃ
ｌ　　・）−ＩＣＩ　を加えた。得られた粗製生成物１
７．６９をエーテルに溶解し、炭素で処理し、ｔ濾過し
た。エーテルから結晶させて生成物Ｂｏｃ−Ｐｈｅ　　
Ｇｌ　ｙ　　Ａｌ　ａ　　ＬｅｕＣＨ２Ｃ１（１０，０
ｇ）を得た。

Ｃ２゜Ｈ，、Ｎ、０６Ｃ１： 計算値：Ｃ５７，９３、Ｎ７，２９、Ｎ　１０．３９、
実験値：Ｃ５７，９２、Ｎ７．５３、Ｎ１０．１７、Ｂ
ｏａ　　　Ｐｈｃ−Ｇｌｙ　　　Ａｌａ−ＬｅｕＣＩ−
１ｚ　ＣＩ　（０、３０ｙ）を無水トリフルオロ酢酸１
ｍβで５０間、約２１３℃において処理し、トリフルす
口部酸塩を形成させ、これを冷エーテルを加えることに
よって沈殿させ、次いで更に冷エーテルで洗浄した。次
いでこの塩を固体水酸化カリウム及び五酸化リン上で乾
燥し、Ｈ−Ｐｈ　ｅ　　Ｇｌ　ｙ−Ａｌ　ａ　　Ｌｅ　
ＩＪ　Ｃ１（２ＣＩ　　）リフルオロｌ’ｌ　Ｍ　ＪＡ
ＭＯｌ：３１ｇ（０，５５ミリモル）を得た。この生成
物を５０％ノオキサン：水２　ｎ＋ｊｉに溶ガイし、得
られた溶液を０°Ｃに冷却した。ジオキサン１　ｍｌに
溶解した炭酸水素ナトリウム（０，０９ｇ、　　１．１
１　ミリモル）及び無水コハク酸（０，０６６ｙ、０．
６６ミリモル）を加えた。１時間後、１．ＯＮ塩酸０．
５５＋ｎＡを加え、得られた溶液を水で１０＋Ｊｉこ希
釈し、４℃で一晩保つ。この間に、生成物Ｓｕｃ　　Ｐ
ｈｅ　−Ｇｌ　ｙ　−Ａｔ　ａ　　Ｌｅ　ｕ　Ｃ１−１
２ＣＩ　は溶液から結晶する。この生成物を濾過し、０
．１ＯＮ冷塩酸１００ｄで洗浄した。減圧下で乾燥後、
０゜１８９のＳｕ　ｃ　−Ｐｈ　ｅ　　　Ｇｌ　ｙ　−
Ａｔ　ａ　−Ｌｅｕ　ＣＨ２ＣＩ　（ＮＡ点、１５７．
５−１５８°Ｃ）を得た。

Ｃ２５８３５Ｎ　＜０７ＣＩ　： 計算値：Ｃ５５，７０、Ｈ６，５６、Ｎ　１０．４０、
実験値：Ｃ５５，４’／、Ｈ６，５９、Ｎ　１０．４８
、Ｓｕ　ｃ　−Ｐｈ　ｅ　　Ｇｌ　ｙ　−Ａ、ｌ　ｕ　
−１，、ｅ　ｕｃｌｌ。

ＣＩ　（０，２ｏ、、、０．３　’７ミリモル）をアセ
トン１０−に溶屓し、得られた溶液をノアジメタン：エ
ーテル（１０ｍＡ）で３０分間、０°Ｃにおいて処理し
た。溶液を約２３℃に暖めた後、溶剤を蒸発させた。残
渣をアセトンに溶解し、得られた溶液をンｒ過し、溶剤
を蒸発させることによって濃縮した。

濃縮物を酢酸エチルで希釈し、この溶液を蒸発させるこ
と１こよって町びン農縮し、はとんどのアセトンを除去
した。結晶性の生成物が分離した。この生成物を単離し
、冷＃酸エチルで洗浄して０．１１９のＭｅ　Ｏ８ｕ　
ｃ　−Ｐｈ　ｅ　−Ｇｌ　ｙ　　　Ａｌ　ａ　−Ｌ　ｅ
　ｕ　ＣＨ２ＣＩ　（融点、１２８．５〜１２９．５℃
）を得た。

Ｃ２ｉＨｚｔＮ　４０７Ｃｌ　： 計作値：Ｃ５Ｇ、４５、Ｈ６，’／６、Ｎ１０．１：（
、実験値：Ｃ５６，２Ｂ、Ｈ６，６９、Ｎ　１０，０１
１．１　、Ｂｏ　ｃ　−Ｇｌ　ｙ　−Ａｌ　ａ　−Ｌｅ
　ｕ　ＣＨ２ＣｌＮ−ヒドロキシスクシンイミド結合方
法によってＢｏ　ｃ　−Ｇｌ　ｙ　−Ａｌ　ａ　　ＯＨ
を９Ｊｌ遺した。Ｂｏ　　ｃ　　−Ｇｌ　　ｙ　　−０
８ｕ　　（７，６１ｇ　、　　２８　、２　ミ　リ　モ
ル）をジメチルスルホキシド１０＋Ｊに溶解し、得られ
た溶液を水２　Ｏｔｎｌ中のＨＡｌａ　　０ｆ（（３゜
７６２．４２．３ミリモル）及びトリエチルアミン（５
，８９＋＋＋Ｊ、４２．３ミリモル）から成る溶液に加
えた。−晩攪拌後、沈殿物を濾過によって除去した。イ
）られた溶液を水で希釈し、次いで塩酸で酸性にした。

水相は分離し、これから生成物を酢酸エチルを加えるこ
とによって抽出した。＃酸エチル抽出物を０．２Ｎ塩酸
、次いで０．２Ｎ塩酸中で調製された飽和塩化ナトリウ
ムで洗浄した。次いで洗浄した酢酸エチル溶液を硫酸す
）　ｌ）ラム上で乾燥し、濾過した。次いで溶剤をｉへ
発させて泡状生成物を得、これを酢酸エチル：ヘキサン
から結晶させるで２．８８ｇのＢｏｃ　Ｇｌｙ−八１ａ
−０）［（融、Ω：、１２８〜１３０℃）を得た。

Ｃ１。トｒ　　１ｓ　Ｎ　　２０　　ｓ　：計算値：Ｃ
４８，７６、Ｈ７，３８、Ｎｉｌ、３８、実験値：Ｃ４
９，１２、Ｈ７，２７、Ｎ１１．２８、Ｚ−Ｐｈ　ｅ　
−Ｇｌ　ｙ　−Ｌｅ　ｕ　−Ｌｅｕ　ＣＨ２ＣｌＮ ってＨ−１，、、ｅ　ｕ　ＣＨ２Ｃｌ　　・ＨＣＩにＢ
ｏｃ−Ｇｌ　ｙ　−Ａｌ　ａ　　　０Ｈ（２，５ｇ、１
０．２ミリモル）を結合させた６酢酸エチルを蒸発させ
ると３．’７　＆の泡状物が得られた。酢酸エチル：ヘ
キサンから結晶させると３．１ｇのＢｏ　ｃ　−Ｇｌ　
ｙ　−、Ａｌ　ａ　−Ｌｅ　ｕ　ＣＨｚＣＩ　（融点、
９５−９！３．５℃）が得られた。ＣＩ？Ｈ３゜Ｎ、０
５Ｃｉ　： 計算値：Ｃ５２，０９、Ｈ７，７３、Ｎ　１０，７２、
実験値：Ｃ５２，２１、Ｈ７，４６、Ｎ　１０，６３、
Ｋ、Ｚ二上上」ニーＳｅ　ｒ二コ穎−り二山工部ン±バ
Ｊ−次の混合無水物結合方法に従ってＺＰｈｅ−３ｃ　
ｒ　（ＯＣＨ２ＣｓＨｓ）−Ａｌ　ａ　−ＯＨを製造し
た。

最初に、混合無水物方法によってＢｏｃ　　Ｓｅｒ　（
ＯＣＨ２ＣＧＨ５）　　ＯＨ（４、９３２，１６，７ミ
リモル）をＨ−ＡＩ　ＩＩ　０ＣＨｘ・ＨＣＩ　（２，
８０ｇ、２０．０ミリモル）に結合させて油状物６．１
ｇを得た。次いでＢｏ　ｃ　−３ｅ　ｒ　（ＯＣＨ２Ｃ
ｓｔｌｓ）−Ａ　ｌ　ａ　　　ＯＣＩ−ｉ　ｓをトＩＪ
フルオロ酢酸で説ブロックし、混合無水物方法を用いて
、得られた生成物、ＨＳｅ　ｒ　　（１：）ＣＨｚＣｇ
ＬＩｓ）、Ａｌ　　ａ　　　０ＣＨｘトリフルオロアセ
テ−）（６，１５ｇ、１５．６ミリモル）をＺ　−Ｐ　
Ｉ＋　ｅ　−ＯＨ（３、８９ｇ、１３．０ミリモル）に
結合した。この生成物を酢酸エチルから結晶させ、５．
４ｇのＺ−Ｐｈ　ｅ　−Ｓｅ　ｒ　（ＯＣＨ２ＣｇＨｓ
）　　Ａ　ｌ　ａ　　ＯＣＨ＊（ｔＭＩ息、１５８−１
５９°Ｃ）を得た。

Ｃ＊ｔＨ’ｘｓＮ＊（）ｔ： 計算値：Ｃ６６，２８、Ｈ６，２９、Ｎ　７．４８、実
験値：Ｃ６５，５４、Ｈ６，２４、Ｈ７，３７、ノオキ
サン１６−及び１．ＯＯＮ水酸化ナトリウム８．２５−
を使用すること以外は実質的に曲記と同様に、Ｚ　　Ｐ
ｈ　ｅ　−８ｅ　ｒ　（ＯＣ８２Ｃ６Ｆ＋、）Ａｌ　ａ
　　　０ＣＨ３（４，６３ｙ、８．２４ミリモル）をケ
ン化した。所望の生成物、Ｚ　　Ｐｂｃ　　Ｓｅｒ　（
ＯＣＨ２ＣＩＩＨ５）　　Ａ　Ｉ　ａ　　ＯＨをメタ／
−ル：酢酸エチルから結晶させて、３　、５７（融点、
１７１．５〜１７２．５℃）を得た。

Ｃ＊ｏＨ＊ｓＮ　３０７： 計算値：Ｃ６５，７９、Ｈ６，０８、Ｎ　７，６７、実
験値：Ｃ６５，５０、Ｈ５，８６、Ｈ７，８４、前記方
法ＣのＺ−Ｐｈ　ｅ−Ｇｌｙ　　Ｌｅ　ｕ　−Ｌ。

ｅｕｃＨ２ｃＩの製造で使用したものと実質的に類似の
混合無水物結合方法によって、Ｚ−Ｐｈｅ−８ｅ　ｒ　
（ＯＣＨ２Ｃ６Ｈ５）−Ａｌ　ａ　−０Ｈ（１、：（７
Ｌ　　２．５ミリモル）を１−１　１−ｅ　ｕ　ＣＨ２
Ｃｌ　　。

ＨＣＩに結合させることによってＺ−Ｐｈｅ−３ｅ　ｒ
　（ＯＣＨｚＣｓＨｓ）−Ａｌ　ａ　−Ｌｅ　ｕ　Ｃ１
（２Ｃ１を製造した。生成物を結晶性固体０．９８ｇ（
融点、１６７〜１６８°Ｃ）として得た。

Ｃ３７Ｈ＝　、Ｎ　４０７　： 計算値：Ｃ６４，０９、Ｈ６，５６、Ｈ８，０Ｂ、実験
値：Ｃ６４，２２、ｌ−１６，３８、Ｈ８，０８、市販
のＨＦ′ａ共（ペプチド・インスチチュート社（Ｐｅｐ
ｔｉｄｅ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ　Ｉｎｃ、））中の無水
ＨＦ’　１５ｄ及びアニソール１−の混合物でＺ−Ｐｈ
ｅ−Ｓｅ　ｒ　（ＯＣ８２ＣｓＨｓ）−Ａｌ　ａ　　Ｌ
ｅ　ｕ　ＣＨ２Ｃ１（０，７１，，１０，２ミリモル）
を処理した。０℃で７０分後、ＨＦを蒸発によって除去
し、残渣を得、これを減圧ド、水酸化カリウム上で一晩
乾燥した。残渣をエーテルですり砕いた後、０．３　ｓ
９のＨ−Ｐｈ　ｅ　−３ｅ　ｒ　−Ａｌ　ｎ　−Ｌｅｕ
ＣＨｚＣＩ・ＨＦを得た。

このヒドロフルオリド塩（０，３９，，０，７１ミリモ
ル）を水２　ｒａｉｌ及びジオキサン１　ｍｆｌの混合
物に溶解した。得られた溶液を０”Ｃに冷却し、カルボ
ベンゾキシクロリド（０，１０ｍＬ　Ｏ，７１ミリモル
）及び炭酸水素ナトリウム（０，１２，，１，４２ミリ
モル）を加えた。０℃で３０分後、ニンヒドリン陽性物
質は検出できなかった。得られた反応混合物を酢酸エチ
ルで希釈し、得られた有機層を５％炭炭酸水雲）　＋７
ウム溶該、０．２Ｎ塩酸及び飽和塩化す）　ｌ）ラムで
続けて洗浄した。洗浄した溶液を硫酸す）　＋７ウム上
で乾燥し、溶剤を蒸発し、残渣を得、これをヘキサンで
５０％に希釈し、Ｚ−−Ｐｈ　　ａ　　　　　　Ｓｅ　
　ｒ　　　−Ａｔ　　　ａ　　　−Ｌｅ　　ｕ　　　Ｃ
ＨｚＣｌ　　　（融、α、１５５〜１５７℃）を得た。

Ｃ３゜Ｈ＝ｅＮ　４０　ｔｃ　ｌ　： 計算値：Ｃ５９，７３、Ｈ６，５３、Ｎ　９．２９、実
験　値　：Ｃ５９，８１、Ｈ６，４７、Ｈ９，１３、Ｌ
、Ｚ−Ｐｌ＋ｅ　　Ｇｌ　　Ｓｅ　ｒ　−Ｌ、ｅｕＣＨ
２Ｃ１下記の方法でＺ−Ｐｈ　ｃ　　Ｇｌ　ｙ　　Ｓｅ
　ｒ　−Ｌｅ　ｕ　Ｃ）（２Ｃｌ　を製造した。最初に
、無水１（Ｆ１５ｍｌ及びアニソール１−の混合物で処
理することによってＺ−Ｐｈ　ｅ　−Ｇｌ　ｙ　−３ｅ
ｒ　（ＯＣ０２ＣａＨｓ）　　Ａｌ　ａ　−−Ｌｅ　ｕ
　ＣＨ２Ｃｌ　（０，９１Ｌ？、１４゜４ミリモル）を
脱ブロックして（方法Ｋ）、０．６９２のＨ−Ｐｈ　ｅ
　−Ｇｌ　ｙ　−３ｃｒ　−Ｌｅｕ　ＣＨ２Ｃｌ・ＨＦ
を得た。次いでこの中間体（０，５９ｇ、１２．４ミｌ
ｊモル）を方法にの方法に実質的に従って、カルボベン
ゾキシクロリドと結合させ、酢酸エチル／ヘキサンから
結晶化後、Ｚ−Ｐｈ　ｅ　−Ｇｌ　ｙ−３ｅ　ｒ　−Ｌ
ｅ　ｕ　ＣＨ２Ｃｌ　（融点、１４６−１４６．５℃）
０．４ｇを得た。

Ｃ２１Ｈ＊ｔＮｎＯｙｃｌ　： 計算値：　Ｃ５９，１２、Ｈ６，３４、Ｈ９，５１、実
験値：Ｃ５９，４５、Ｈ６，３７、Ｎ　９，４６、本発
明の選ばれた化合物は二種の検定においてウィルスプロ
テアーゼ活性を阻害した。ウィルス切断検定と呼ばれる
第一検定は選ばれた試験化合物の存在ド及び非存在下に
成長したウィルス感染１−（ｅＬａ＆！ａ胞におけるタ
ンパク質合成様式（ラベル付きアミノ酸を混入すること
によって可視化させる）を比較することである。プラー
ク阻害検定として知られる第二検定は寒天付加細胞培地
（ａｐｒ−ｏｖｅｒｌａｉｄ　ｃｅｌｌ　ｃｕｌｔｕｒ
ｅＳ）における試験化合物のウィルス感染性に対する効
果を評価することである。もちろん試験化合物の毒性効
果がもしあればプラーク阻害検定の培１！時期に観察さ
れるであろう。両検定を以下に更に詳しく記載する。

ヱコ」ヒ入塑」１灸冗− この検定においては、成長しているＨｅ１ａ−Ｏ細胞の
試料を一つの細胞につき感染ウィルス粒子約１０個のウ
ィルス濃度でヒト　ボリオミリチス　ウィルス２型（ｈ
ｕｍａｎ　ｐｏｌｉｏｍｙｅｌｉｔｉｓ　ｖｉｒｕｓｔ
ｙｐｅ　２）又はヒト　ライノウィルス　ＩＡ型（ｈｕ
ｎ＋ａｎｒｈｉｎｏｖｉｒｕｓ　ｔｙｐｅ　１＾）にさ
らした。数時間後、宿主細胞の代謝は者しく阻害され、
加えた放射性アミノ酸はウィルスタンパク質にのみ編入
した。種々の濃度の試験化合物を細胞試料に加えた後、
ウィルスタンパク質を感染の適当な中間周期（ｍｉｄ−
ｅｙｅｌｅ）（細胞をウィルスに最初にさらしな後３〜
５時間）において６０分間ラベルした。次いでわ１胞試
料を１％（Ｗ／Ｖ）ドデシル硫酸ナトリウム及ゾ１％（
Ｖ／Ｖ）２−メルカプトエタノールを含有する０、ＯＩ
Ｍ）リス（ヒドロキシメチル）アミツメタン緩衝液（ｐ
Ｈ６，８）に溶解した。コラン９９２（１９７９）によ
って先に記載されたように、得られた放射性同位体でラ
ベルした（ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ）ウィルスタンパ
ク貿をポリアクリルアミドデルの電気泳動によって分離
し、次いでオートラジオグラフィーによって検出した。

選ばれた濃度の試験化合物がウィルスタンパク貿のプロ
セラシンクの通常の様式を崩壊させたならばその化合物
をその試験濃度において活性であるとして記録した。

ウィルスプロテアーゼ阻害活性を示す？Ｊ、験化金化合
物在ｉにラベルされた細胞試料に対応するゲルは対照デ
ルでは明白でないＩＣＪ分子景タンパク質種の存在によ
って一般にはっきりと見分けることができた。

プラーク阻’ｄｆ　４灸定− この検定において、培養したＨｅ　Ｌａ細胞を６０ｍ１
１１のプラスチックのベト、す皿に集’ｌｊ　（ｃｏｎ
ｆ　Ｉ　ｕｅｎｃｙ）に成長させた。次いでそれぞれの
培養物を約３００プラーク形成単位（ｐｌａｑｕｅ−ｆ
ｏｒＩ６ｉＢ　ｕｎｉｔｓ）のウィルスで感染させた。

ポリオウィルス２型及びライノウィルスＩＡ型を以下に
報告する試験１こおいて使用した。与えられた実験に使
用したウィルスを３４．５℃において３０分間、、＃Ｊ
胞に吸収させた。

各試験化合物をエタ／−ル又はジメチルスルホキシドに
溶解して試験される最も高い濃度の１００倍の濃度にし
た。次いで得られた溶液を熱で非活性化したウシ胎児血
清（ｆ’（！ｔａｌ　ｃａｌｆ　ｓｅｒｕｍ）５％及び
寒天０．３８％を含有するマフコイ培地（ＭｃＣｏｙ’
ｓ　＋ａｅｄｉｕｍ）の溶液に入れて１：　１００ｊこ
希釈した。次いで寒天培地に入れて２倍希釈液をつくっ
た。

ウィルスを細胞に吸着させた後、過剰のウィルスを洗い
流し、それぞれの培養皿に試９．される化合物の前もっ
て選ばれた希釈剤を含有する寒天培地５Ｉβを付加した
（ｏｖｅｒｌａｙ）。対照培地に寒天培地のみを付加し
た。次いで、それぞれの培地を３４．５°Ｃでインキエ
ベートシ、プラークの発生を可能とした。

プラークは培養物中の死滅した細胞のほぼ円形の領域の
ことであり、ウィルスの一つのプラーク形成単位が最初
に一つの細胞に感染した領域を示す。寒天の付加によっ
てウィルスの移動性は制限され、その結果、ウィルス感
染は連続した細胞間にのみｆ永遠される。

対照培養物中のプラークが十分に大きくて容易に観ジ；
４することができ、まだ比較的分離している時に、総て
の培養物を１％クリスタルバイオレットで染色した。プ
ラークは感染していない細胞の深紫色の場に透明な領域
として現れた。有毒な投与量の試験化合物を加えると培
養皿中に目に見える細胞の分離が起こる。

ポリオウィルスを使用したウィルス切断検定において代
表的なテトラペプチド及１トリペプチドクロロメチルケ
トン類をプロテアーゼ阻害活性について試験した一連の
実験によって得られた結果を下記の表１及び２に述べる
。結果は以下のように評価される。

−活性なし 十／−低活性 ＋　　　　１０ｏ鹿／１ｒＰｔで活性 ＋＋　　　５０趨／　ｍＡで活性 十十＋　　　ｒ、ｏ鹿／　Ｉｌ＋２で活性＋十十＋　　
＜Ｓμｇ／鎗βで活性 Ｉ　Ｚ−Ｐｌ＋ｅ−Ｃ１ｙ−八１ａ−１ｅｕｃＩＩｚｃ
ｌ　　　　　　＋　十十２＾ｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−八１
ａ−ＬｃｕＣｌｌ、Ｃ１＋　十十３５ｕｃ−Ｐｈｅ−Ｃ
＋ｌｙ−八１ａ−ＬｅｕＣ１ｌ、Ｃｌ　　　　　＋　十
士４　ＭｅＯ５ｕｃ−Ｐｈｃ−Ｇｌｙ−＾１ａ−Ｌｅｕ
Ｃｉｉ、ＣＩ　　　＋　十十５　ＤＮＳ−Ｐｈｅ−Ｇｌ
ｙ−＾１ａ−ＬｃｕＣ）ＩｚＣｌ　　　　＋　＋　十６
　ＤＮＰ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−＾１ａ−ＬｃｕＣＩＩ２Ｃ
１＋　＋　＋７　　Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−八１ａ−ＬｅｕＣ
ＩＩｚＣｌ　　　　　　　　　　　　　　　＋　　＋８
　Ｚ−Ｌｃｕ−Ｇｌｙ−＾１ａ−ＬｃｕＣ！ＩｚＣ１＋
＋　＋９２−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＬｅｕＣＩｌｚ
Ｃｌ　　　　　＋＋＋１０　　Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−八
Ｉｎ−１，ｅｕｃＩＩ２Ｂｒ　　　　　　　　　＋＋　
十　　　。

１１　Ｚ−ＰＩ＋ｅ−Ｇｌｙ−＾１ａ−ＶａｌＣＩ！□
ｃｌ　　　　　＋＋１２　Ｚ−Ｐｈｃ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ
−ＬｃｕＣｌ１２ＣＩ　　　　　＋　十＋　十１３　２
−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−＾１ａ−ＬｃｕＣＩＩ□Ｃ１＋　＋
１４　　Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｐｔ＋ｅ−Ｌｅｕ（：Ｈ
ｚＣｌ　　　　　　　　＋　＋１５　Ｚ−Ｐｈｅ−に１
ｙ−Ｓｅｒ−ＬｅｕＣＩＩ２Ｃｌ　　　　　＋＋１６　
Ｚ−Ｐｈｃ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ＬｅｕＣＩＩ２Ｃｌ　　
　　　＋＋１７　ＭｅＯＳｕｃ−＾１ａ−１１ｅ−Ｐｈ
ｅ−ＬｅｕＣＩＩｚＣＩ　　　＋＋＋１１（ＭｅＯＳｕ
ｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ（ＯＣｔ１３）ｅ
ｌ１２ｃｌ＋＋＋＋ １９　　ＭｅＯＳｕｃ−＾１１１−１１ｅ−Ｐｂｅ−Ｇ
ｌｕ（ＯＣＩＩｓ）、ＣＩｌ□Ｃ１十干＋ ２０　２−ｆ’ｈｅ−Ｇｌｙ−八ｌａ−’ｒｒｙｃＩＩ
２ｃｌ　　　　　　　　　　　＋　＋Δ　　ＩＩ−Ｐｈ
ｅ−Ｇｌｙ−＾１ａ−ＬｅｕＣＨ２ＣＩ　　　　　士／
−ＢＺ−へｌ　ａ　−Ｇ　ｌ　ｙ−八１ａ−ＬｅｕＣＩ
１２ＣＩ　　　　　　　　　　＋　／　−（２−Ｇｌｎ
−Ｇｌｓ’−＾１ａ−ＬｅｕＣｔｌｚＣ１＋Ｄ　　　Ｚ
−１”ｈｅ−Ｐｈｅ−＾１ａ−ＬｅｕＣＩＩ□Ｃ１＋／
　−Ｅ　Ｚ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−＾１ａ−ＬｅｕＣＩＩｚ
Ｃｌ　十Ｆ　　　　Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｅ
ｕＣｆ１２ＣＩ　　　　　　＋Ｇ　Ｚ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ
−＾１ｎ−ＬｅｕＣＨ□Ｃ１十ｔｌ　　　　Ｚ−Ｐｈｅ
−Ｐｒｏ−＾１ａ−ＬｅｕＣＩ１２Ｃ１，−＋Ｉ　　　
　　八ｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−ＬｅｕＣＩＩｚＣ
１＋／−Ｊ　　　　　Ａｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＥ’ｒ
）−へ１ａ−ＬｅｕＣｔ１２ＣＩ十／− Ｋ　　　Ａｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−＾１ａ−ＬｅｕＣＩｌ
□Ｃｌ　　　　＋／　−前記のプラーク阻害検定によっ
て、Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌ　ｙ　　Ｌｅ　ｕ　　Ｌｅ　ｕ　
ＣＨ２ＣｌのライノツイルスＩＡ型に対する抗ウィルス
活性を評価した。

Ｉ　Ｎ　／　ｍｌ、において９０％プラーク減少によっ
て得点される抗ウィルス活性が認められたが、細胞毒性
はヒ）　Ｈｅ　Ｌａ　−０細胞において約１５　ｔｔｇ
　／　−の濃度で始めて検出された。

ォヶミストリー・アンド・バイオフィジックス（＾ｒｃ
ｈ、ｌｌｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏ　ｈ　ｓ、）１６５：　
７３９（１９７４）によって開示されたものと実質的に
類似の方法によってＨＬｅｕＣＨ，・Ｉ（Ｂｒを製造し
た。

Ｚ−Ｐｈ　ｅ　−Ｇｌ　ｙ　　Ａｌ　ａ　−ＯＨを次の
方法に従って製造した。Ｚ−Ｐｈｅ−ＯＨのＮ−ヒドロ
キシスクシンイミドエステルをジオキサンに溶解し、得
られた？８液を約１当量のＨ−Ｇｌ　、　Ｌ−Ａｌａ　
　ＯＨ１約１．５当量のトリエチルアミン及び水を含有
する溶状に濾過して入れる。得られた反応混合物を約２
３℃て゛−晩攪攪拌、次いで蒸発させることによって元
の容積の約６０％に７農縮する。

次いでこの濃縮溶液を酸性になる本で１．ＯＮｔＭ酸で
希釈した。得られた生成物を酢酸エチルに抽出し、得ら
れた抽出物を０．２Ｎ塩酸、次いで０゜１Ｎ塩酸に調節
された飽和塩化す）　＋７ウム水溶液で洗浄した。次い
で洗浄した抽出物を無水硫酸ナトリツム上で乾燥し、濾
過した０次いで溶剤を抽出物から蒸発させ、生成物Ｚ−
Ｐｈ　ｅ　−Ｇｌ　ｙ　−Ａｌａ−〇Ｆ１を泡として得
られた。この＄１１製生成物を酢酸エチルから再結晶し
た。

Ｚ−Ｐｈ　ｅ　−Ｇｌ　ｙ　−Ａｌ　ａ　−ＯＨをＨ−
ＬｅＬＩＣＩ（３・ＨＢｒ　と次のように結合させた。

第一に、Ｚ　　Ｐｈ　ｅ　−Ｇｌ　ｙ　　Ａｌ　ａ　−
０Ｈ）混合無水物をＺ−Ｐｈ　ｅ　−Ｇｌ　ｙ　　Ａｔ
　ａ　　０Ｈ（１，２２ｇ、２．８５ミリモル）及びＮ
−メチルモルホリン（０，３２Ｊ、２．８５ミリモル）
をテトラヒドロ７ラン３５＋ａβに溶解することによっ
て調製した。

得られた溶液を約−２０°Ｃに冷却し、クロロギ酸イソ
ブチル０．２５Ｊ（１，９０ミリモル）を加えた。

１０分後、得られた溶液をトリエチルアミン０゜２６ｍ
１１．９０ミリモル）を含有する冷ツメチルホルムアミ
ド５ｄ中に溶解したＨ−ＬｅｕＣＨ３・ＨＢｒ　（０，
４０ｇ、１．９０ミリモル）に加えた。

得られた混合物を１時間、−２０℃において攪拌し、約
２３℃に暖め、次いで約２３°Ｃで一晩攪拌した。得ら
れた溶液を濾過し、次いで蒸発して約５−の容量にした
。酢酸エチル１００ｍβを加え、得られた溶液を５％Ｒ
酸水索す）　ｌ）ラム、（）、２Ｎ塩酸及び飽和塩化ナ
トリツム水溶液で続けて洗浄した。硫酸す）　＋７ウム
上で乾燥し、濾過して不溶解物質を除去した後、溶剤を
蒸発によって除去すると白色固形物０．８８．が生成し
、これを熱い酢酸エチルから再結晶し、第一生成物（０
，２７ｇ、融点１３３〜１３４“Ｃ）及び第二生成物（
０，２５ｇ、融）！Ｊ、１３３．５〜１３４°Ｃ）を得
た。薄層クロマトグフ７４−（Ｍｅ　ＯＨ：　ＣＨＣｌ
　３（１：　　９、■：Ｖ）　）ｔ’ｌ：に−’ｌｉ　
　ＸｒｉＣ７）　（ＲｆＯ，４８）ヲ示シ、ＮＭＲスペ
クトルは予想した構造と一致した。

Ｃ２９Ｈ３＠Ｎ　４０６： 計算値：　Ｃ６４，６５；　Ｈ７，１２；　Ｎ　１０．
４０′３！、駿値：　Ｃ６４，５１；　Ｉ（６，９１；
　ＮＩｏ、５６Ｂ：　Ｍｅ　Ｏ８ｕ　ｅ　−Ｐｈ　ｅ　
−Ｇｌ　ｙ　　Ｌｅ　ｕ　−ＬすＣ１ｌ、− 先の実施例１のＺ−Ｐｈ　ｅ　−Ｇｌ　ｙ　−Ａｌ　ａ
　−−Ｌｅ　ｕ　ＣＨ，＋の製造に対して記載したもの
と実質的に類似の）ｊ法によってＺ−Ｐｈ　ｅ　−Ｇｌ
　ｙ−Ｌｅ　ｕ　　　０Ｈ（２，２３＋＋、４．フロミ
リモル）をＨ−Ｌ　ｃ　ｕ　ＣＴ−１３・ＨＢｒに結合
させることによってＺ−Ｐｈ　ｅ　−Ｇｌ　ｙ　−Ｌｅ
　ｕ　　　Ｌｃ　ｕ　ＣＨ：ｌを９！１造した。生成物
を酢酸エチルから再結晶すると２．３４１＃のＺ　　Ｐ
ｈｅ　　　Ｇｌ　ｙ−Ｌｃｕ−ＬｅｕＣＨ，（融点１６
５．５〜１６６．５°Ｃ）が生成する。

Ｃ、、＋１　、、Ｎ　、０６： 計算値：　Ｃ６６，２６；　Ｈ７，６６；　Ｎ９．６６
実験値：　Ｃ６６，４８；　Ｈ７，７５；　Ｎ９．６６
Ｚ　　Ｐｈｅ　　Ｇｌ　ｙ　　Ｌｅｕ　　Ｌｃｕ　ＣＨ
３（１゜０ｇ、１．７２ミリモル）を無水エタノール１
００Ｉ１１２に溶解し、炭素上の１０％パラノクム０．
５９及び４Ｎエタノール性ＨＣＩ　　　０．５ｍλをを
加えた。

得られた混合物を初期圧力４０ビー・ニス・アイ（ρ５
ｉ）（２７６ＫＰａ）で−晩水素化した。触媒を濾過に
よって除去し、次いで溶剤を蒸発すると泡状物０．８　
ｓ、、が生成し、エーテルを加えた後固形化した。この
生成物をエーテルで十分に洗浄し、減圧下、固体水酸化
カリウム及び五酸化リン上で乾燥した。

Ｈ−Ｐｈ　ｅ　−Ｇｌ　ｙ　−Ｌｃ　ｕ　−Ｌｅ　ｕ　
ＣＨｓ・ＨＣＩ　（０，６２ｇ、１．２９ミリモル）及
びメチルスクシネートのＮ−ヒドロキシスクシンイミド
（０，３ｏｇ、１．２９ミリモル）をＮ、Ｎ−ジメチル
ホルムアミド５　ｄに溶解し、次いでトリエチルアミン
（０，１８ω２．１．２９ミリモル）を加えた。−晩攪
拌後、５％炭酸水素す）　＋７ツム水溶０．５　ｖＲを
加え、得られた溶液を１５分間攪拌した。得られた生成
物を酢酸エチルに抽出した。抽出物を５％炭酸水素す）
　＋７ウム水溶液、０．２Ｎ塩酸及び飽和水性塩化す）
　＋７ウムで続けて洗浄した。洗浄した抽出物を無水硫
酸す）　ｌ）ラム−Ｌで乾燥し、濾過しだ。次いで溶剤
を蒸発すると油状の生成物が生成した。生成物を酢酸エ
チル：ヘキサンから結晶させると０．６８ｇのＭｅ　Ｏ
８ｕ　ｃ、　−Ｐｈ　ｅ　−Ｇｌｙ　　Ｌ、ｅｕ　　Ｌ
ｃｕＣ）＋３（融点１１３．５−１１４゛Ｃ）が生成し
た。

Ｃ２９Ｈ４１Ｎ　−０７： 計算値：　Ｃ６２，４５：　Ｈ７，４２；　Ｎ　１０．
０５実験値：　ＣＧ　２．０９：　Ｈ７，８２：　Ｎ　
１０．１０ｉ１ｆｔ’ＬＪ：ｉ）ラベプチドメチルケト
ンリ１ｙλ３　’ＩＩ　？−（２）鉾１ ウィルス切断検定及びプラーク阻°１イ検定において選
ばれたテトラペプチドメチルケトン！＋±ウィルスプロ
テアーゼ活性を阻害することが示された。

これらの検定は実質的に前記と同様に行なわれｔこ。

ウィルス切断検定において、ド記化合物は：Ｊ、験濃度
１００Ｎ／−でポリオウィルス２型及びフイ／ウィルス
ＩＡ型に対し活性をポした６化合物Ｚ−Ｐｂ　ｅ　　Ｇ
ｌ　ｙ　−Ａｌ　ａ　−Ｌｅ　ｕ　Ｃ）ｌ）及びＭｅ　
Ｏ８ｕ　ｅ　−Ｐｈ　ｅ　　Ｇｌ　ｙ　　Ｌｃ　ｕ　−
Ｌｅ　ｕＣＨ，もまた５０Ｉｔｇ／−においてポリオウ
ィルス２型に対して活性であった。化合物ＢｏＣ−Ｐｈ
ｅ　−Ｇｌ　ｙ　−Ａｌ　ａ　　Ｌｅ　ｕ　ＣＨ＊はこ
の検定では活性を示さなかった。

試験例　　　　　　　　　　　牝え覧 Ｉ　　　　　　　Ｚ−Ｐｈｃ−Ｇｌｙ−ΔＩｎ−Ｌｅｕ
ＣＩＩ３２　　　　　　　　　　　　　　　　　ＭｅＯ
５ｕｃ−Ｐｈｅ−に　ｌ　ｙ−八ｌ　ｕ−１，ｅｕｃＩ
ｌ　ｚ３Ｚ−１’ｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｃｕ−ＬｅｕＣＩＩ
＊プラーク阻害夾定堡方Ｍ９１４ウィルス活ｆしのノッ
カーｎＺ−、Ｐｈ　ｅ　−Ｇｌ　ｙ　−Ａｌ　ｕ　−Ｌ
ｅ　ｕ　ＣＨ＊の快χ− 化合物Ｚ−Ｐｈ　ｅ　　Ｇｌ　ｙ　−Ａｌ　ａ　−１，
ｃ　ｕＱ　Ｈ３はこれを濃度５ＯＮ／ｄで寒天付加物に
編入すると、対照皿と比較し、ポリオフィルス２型及び
ライノウィルスＩＡ型を有するプラークを９０％以上減
少させた。この化合物に関する検定では、１＋ｏＨ／−
までの濃度において細胞毒性が観察されなかった。

【図面の簡単な説明】

！ｅｌし１は一般化されたピコルナウィルスのＲＮＡ′
ｆツムの遺伝子地し１であり、特別なピコルナウィルス
のタンパク賀１こ対応する［＜ＮΔ領領域相対位ｊｒｔ
を示す。翻ｎ＜ｈ向は左から右で７）る。 第２図は幾つかの公知のウィルスにより特定されるプロ
テアーゼの切断認ｆ＆部位間のアミノ酸配列の相同関係
を示す図である。 介　１　ろ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ウイルスにより特定されているポリペプチド前駆体
   を切断して、ウイルスに関連するタンパク質を形成させ
   るプロテアーゼの特異的阻害剤を製造する方法において
   （ここで、阻害されるべきプロテアーゼはピコルナウイ
   ルス、トガウイルス、ＲＮＡ型腫瘍ウイルス、アデノウ
   イルス、コモウイルス及びウイルスプロテアーゼをコー
   ドする他のウイルスから成る群から選ばれたウイルスに
   よつて特定される）、 （ａ）ウイルスのタンパク質、ＲＮＡ、ＤＮＡ、ｍＲＮ
   Ａ又はウイルスＲＮＡに相補的なＤＮＡを単離し、 （ｂ）該タンパク質、ＲＮＡ、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ又はｃ
   ＤＮＡを分析してウイルスにより特定されているタンパ
   ク質のポリペプチド前駆体のアミノ酸配列を提供し、 （ｃ）該アミノ酸配列中においてウイルスにより特定さ
   れているプロテアーゼの切断認識部位を突き止め、 （ｄ）ウイルスにより特定されているプロテアーゼの特
   異的ペプチド阻害剤を製造する ことを含み、該阻害剤は、前記ポリペプチド前駆体の切
   断認識部位に隣接しかつその上流に位置するアミノ酸配
   列に実質的に相当する３〜５個のアミノ酸又はアミノ酸
   類似体のペプチド配列に共有結合したハロメチルケトン
   類及びメチルケトン類から成る群から選ばれたＣ末端の
   阻害剤部分を含んで成ることを特徴とする方法。 ２、該ペプチド阻害剤がハロメチルケトン部分を含む特
   許請求の範囲第１項記載の方法。 ３、該ペプチド阻害剤がメチルケトン部分を含む特許請
   求の範囲第１項記載の方法。 ４、該阻害剤のペプチド配列が４つのアミノ酸又はアミ
   ノ酸類似体から成る特許請求の範囲第２項記載の方法。 ５、該阻害剤のペプチド配列が４つのアミノ酸又はアミ
   ノ酸類似体から成る特許請求の範囲第３項記載の方法。 ６、該阻害剤のペプチド配列がポリペプチド前駆体の切
   断認識部位に隣接しかつその上流に位置するアミノ酸配
   列と正確に相同性である特許請求の範囲第１項記載の方
   法。 ７、該ウイルスがピコルナウイルスである特許請求の範
   囲第１項記載の方法。 ８、該ウイルスがライノウイルスである特許請求の範囲
   第７項記載の方法。 ９、該ウイルスが口蹄疫ウイルスである特許請求の範囲
   第７項記載の方法。 １０、該ウイルスがトガウイルスである特許請求の範囲
   第１項記載の方法。 １１、該ウイルスがＲＮＡ型腫瘍ウイルスである特許請
   求の範囲第１項記載の方法。 １２、該ウイルスがヒトＴ細胞白血病ウイルスである特
   許請求の範囲第１１項記載の方法。 １３、特許請求の範囲第１項記載の方法によって製造さ
   れるウイルスにより特定されているプロテアーゼの特異
   的阻害剤。 １４、特許請求の範囲第６項記載の方法によって製造さ
   れるウイルスにより特定されているプロテアーゼの特異
   的阻害剤。 １５、特許請求の範囲第７項記載の方法によって製造さ
   れるウイルスにより特定されているプロテアーゼの特異
   的阻害剤。 １６、特許請求の範囲第１０項記載の方法によって製造
   されるウイルスにより特定されているプロテアーゼの特
   異的阻害剤。 １７、特許請求の範囲第１１項記載の方法によって製造
   されるウイルスにより特定されているプロテアーゼの特
   異的阻害剤。 １８、特許請求の範囲第１２項記載の方法によって製造
   されるウイルスにより特定されているプロテアーゼの特
   異的阻害剤。