JPS63146830A - Ｔｎｆおよびｉｌ−１の作用を調節する組成物および方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 Ｉ　Ｎ　ＦおよびＩＬ上の作用を調節ｉＪ　？Ｊ絹成物
および方法 発明の分野 本発明は吐乳１．ＩＪ物にＪ３　ｋＪる１−Ｎ　Ｆおよ
び１１−上の作用を調節する方法、および１上１乳初物
における１−Ｎ「の作用の調節をｔニター（３：視）り
る／ｊ法に関するムのである。

本発明はまたＴ　Ｎ　Ｆおにび１１上の効果的なト１１
を含有する組成物に関するしのである。。

本発明のＶＹ　１ｊＩ ＩＦＥ−壊死因子（’Ｔ−Ｎ　Ｆ　）　Ａ；　Ｊ、ヒ上
’　ンク−ｎ　−ｉ’　−ｔシー１　（ＩＬ上）の化学
構造ｔま、アミノハウシーケンス（配列）で示しＩごＪ
：うに、相７ンに類似１１＋のないことが明らかにされ
（いる（　ｍ　７器文献１−６）しかしながら、これら
の細胞（Ｍ＞分裂は能に関するｌｄ近の情報によると、
作用機作が密１ｇに関連していることが１１１鳥示され
る。

Ｔ　Ｎ　Ｆ−アルファ、構造上同質のリンホカイン、Ｊ
ｊよびＴ　Ｎ　Ｉ”−ベーターとし呼ばれるリンホト−
ｔシンは、ある種の培薔ＩＩ１６、細胞にｉｎ　Ｖｉｔ
ｒＯ［１ｉＩＬ　ｍ性を仲介する、およびある種の移殖
可能ｎｉｉにおいてマウスに出血性壊死を誘発する能力
によってＪ、”ｉＩ定されたｂのである（参と文献７−
９）。

しかしながら、後に／Ｅって、−ｒ　Ｎ　Ｆは、細胞馬
活竹の他に、Ｓ胞機能に全く異種起原の他の作用を及ば
りことが見出された（１０）。

数種のこれらの作用は１し上の作用と区別のつかないＪ
、うに思われる。

例えば、ＩＮ＋−し！し一１ｂ線維芽細胞の生長を刺戟
し、これらの細胞に］ラゲナーピ、ブ１］スタグシンＩ
イン「２およびインターフＪ−ロンーベーター２を誘発
しく１ｌ上６）、脂肪細胞中でリボプロアインリバーピ
の活性を減少させ（１７゜１　Ｂ　”）　、内皮細胞に
おいては血液白血球への粘着力を増加し、おそらくその
粘着に関与するａ＋胞衣表面く白の合成を増強する（２
１〜２３）ことが見出されている。

１−Ｎ＋−同様、１Ｆ上はある種の腫瘍１１Ｉ胞に細胞
１ム性がある（２／Ｉ）。

シト１・、Ｘシン（ＣＴＸｓ）の多くの可能な作用の中
で、疑なりａＩＬ胞機能ど最ら関係の少い４川はＣＩ−
Ｘ　Ｓの細胞ｊｆ５活性由来の細胞死て゛ある。インタ
ーフェト１ン（ｌ　Ｆ　Ｎ　ｓ　）で処理した細胞は１
［Ｎｓによってこれらの柵（泡内に誘発したＩＮＦ−レ
ヒブター表現の増加によるＣＴＸｓによつＣ死滅させて
脆弱性の右０な増加を示１ことが見出されている（１０
．２８．３０．３３．３’ｌ　＞。

細胞青竹作用への脆弱性は少くとも部分的にはＣＴ　Ｘ
　ｓの他のｎ川への応答をＴ１ンｌ〜［ｌ−ルリろ４川
にｔよ独立しているｎ構によって調節をうけＣいるとい
ういくつかの′ｆｉ候がある。

そのようなわけで、異った培養系の細胞への０１Ｘｓの
作用を比較づると、細胞系毎に、著るしい差−°４が明
らかなった。一般的には、ＩＬ上！瘍細胞は１１−常細
胞Ｊ、りも脆弱であった。

これらの差異はＣＴＸＳのレセプター・レベルとも細Ｉ
Ｋの中で非１１１胞７ちｆｉ作用が誘発されるｈ用にら
無関係であった。

Ｃ１−Ｘ　ｓにＪ、って細胞を死滅させることは、ＩＦ
ＮＳによっても、また、１７ＮΔおよびたん白金酸の￥
４１害剤のようむ代謝性ブ［１ツカ−によっても増強さ
れる（１０＞。

ＩＮＦおにびＩＬ上は昌アフイニイフィ細胞表面すセブ
クーへの結合によりｄ能を発揮するという！１１実に関
しての先行知見は参考文献（２６）から（３２）で明ら
かにされている。

ｒ＜　Ｎ　Ａ　Ｊｊよび蛋白合成の阻害剤はある種の細
胞を腫瘍懐死囚丁（ＴＮＦ）の細胞重性作用に感作する
。

このようなｑｔ害剤なしで細胞を−Ｔ’　Ｎ　Ｆとｌ　
１１．’ｌ聞処ｉＩｌりると、細胞は感受性を減少して
、つづいて阻害剤／ｊ右上’　Ｔ　Ｎ　ｒ処理りると死
絨りる。

ＴＮＦによる死滅への脆弱性のこのよう／に減少は、効
果的にｒ　Ｎ　［ｄｉ　Ｊ、びリンホト４−シンの活性
を激減させる白血球産生シ１へ１−ン調製液で細胞を処
即す−る時にもまた観察された（１０）。

Ｉ　Ｎ　Ｆ　ｔ、１１．”養液中腫Ｊ３細胞にｃｙｔｏ
ｃｙｄａｌ　粘↑１をらつていることが知られている。

ＴＮＦによる死滅は感作剤、）ｊｌにｆｌＮＡおよびＩ
こん自合成阻害剤、ｉＩへわら代謝ブ［１ツカ−に」、
リハるしく増′強される。

このＪ、うａ感作剤は腫瘍細胞のｒ　Ｎ　ｌ”のｃｙｔ
ｏｃｙｄａｌ活性への脆弱性を増強・Ｊる。

Ｉ　Ｆ　Ｎ　ｓは感作剤の作用と同じような゛［Ｎ１：
のｃｙｔｏｃｙｄａｌ活竹に強い影響を及ばＪことも、
また、知ら札でいる１゜ また最近になって、選択的抗畦瘍機伯をイｊりると信じ
られ／ｊ　Ｔ　Ｎ　＋−はＪ：た正常組織へ破壊的影ツ
でを起こ１かもしれないということら明らかにされｌ：
Ｓ、。

このように、Ｔ　Ｎ　Ｆ　１．を感作剤のある１、１シ
、あるいは他の強化剤のあるなしで、一方ではルト瘍＃
ｌ１１胞の治療剤としてきわめてイミダ１でり、正常細
胞に３１）めて右前であるから知れない粗白ｌｒ１球産
ｉｔシト、ヘン調製液で処理した細胞番。１、この調製
液中のシ１〜１へ１−シン（Ｔ　Ｎ　ｒと関連た／υ白
リすホｉ・１ニシン）がｈ川しうる細胞山付作用へのＩ
Ｉ１６弱ｆ１を減少するということは以前から知られて
いたく５０）。

シ１へ１−キシンの調製液を数時間作用さＶｌそれから
シクロへキシミド（ＣＨＩ＞の存在下、もう一度調製液
を作用させると、その防御効果が観察される。

Ｃｌ１１の存在下の処理に先だって白血球産生シト′−
ン調製液で処理した場合の細胞死のｖ１合は、Ｃ１１１
の存在下、直らに、この調整液で処理した時の細胞死の
割合より低かった。

白血球産生シトー１ン調製液の活性成分は知られていな
い。

本発明にしたがって、Ｔ　Ｎ　Ｆの細胞Ｈｊ　ｆｔ作用
への白血球産生シトキン説感作細胞としてのＩＬ上の同
定（Ｔ　Ｎ　Ｆの破壊的効果への応答の減少）、Ｊｊよ
Ｕｉｎｖ日ｒｏ、ｉｎ　ｖｉｖｏでひきつづき行った研
究が本発明を完成づるに至らしめた。

−発明の概要 本発明は、１’　Ｎ　ｒ−ＪｊよびＩＬ上の作用、これ
らのシ１上ンの有毒および治療の作用、を調節する方法
を提供するムのである。

ｆＴｉらな作用の場合には、本発明は、ＴＮＦおよび（
ムしくは）Ｎ−、上の咄ｆし動物に弱み化したｍを投！
ｊすることにより、ｌ１ｌｉ乳仙物にＪｊいて−「Ｎ［
：および（もしくは）ＩＬ上の右ｔｎ　’、Ｅ作用を調
節りる方法を提供するものＣある。

調節されるＩＮＦおよび（もしくは）ＩＬ、上は内因性
であり、寸なわら、生体組織中に、きびしい場合には生
体組織に右７Ｂ　’、’；　ｆＦｉを発生し、ムしくは
内因的に’Ｊｌ常に有高な吊を患者に投与づる。

本発明の製剤組成および本発明の方法で用いられるＴＮ
ＩτＪ３　Ｊ：びＩＬ上は、天然縁＆！（・も（イデン
子）組換型のしのでしよい。

Ｔ　Ｎ　Ｆのあらゆる型、特にＴＮＦ−アルファと呼ば
れているＴＮＩそれ自体、Ｊｊよびリンホトキシンとし
呼ばれている一ＩＮＦ−ベーターが本発明Ｃは熟慮され
ている。

ＩＬ上の場合には、あらゆる亜をとくにＩＬ上−アルフ
ァとＩＬ上ベータが考慮されている。

ＴＮＦの使用、および本発明の方法ならびに製剤組成に
ＪｊりるＩＬ上様ペプチドも、また、本発明の範囲であ
る。

これらは、ヒｌ−Ｔ　Ｎ　Ｆあるいはｌ　ｌ−上の免疫
学的または生物学的作用を発現するポリペプチドである
。

本発明の使用に関しては、ＴＮＦおよびＩＬ上の誘導体
、ＴＮＩ−Ｉ　ＪｊよびＩＬ上様ベプヂドの誘導体、末
端または側鎖基のカルボキシルおよびアミノ桔のいずれ
かまたは両方の塩、ポリペプチドの未９工：または側鎖
の」（右結合によるｌ１ｆｌｉＩＬを含めて熟とされて
いる。

ジ１常にさびしい場合には、ＴＮＦをＩ　Ｌ、　上と一
緒に投′ｊすることににすＴＮＩ−の治療効果を増強づ
ることが望まれている。逆の投ちも同様に望まれる。

この目的のために、本発明においては、まず第一に、丁
Ｎ　Ｆ　６３よびＩＬ−上（あるいは誘導体、あるいは
ＴＮＦ−またはＩＬ上様ペプチド）と製剤１．認容され
る少くとも一種の賦形剤を３右する組成が提供されてい
る。

これらの組成は、そのイＴ　ｉｆｆへ効果を克服できる
なら、危機的場合には有用でありうる。

治療上は効果的であるが非常に重性のっよいＴＮ上また
はＩＬ上を患者に役！′：ＪｉｌるＩＪＩ！合、本発明
のこのましい方法は、治療に４１効であるが′Ｊｌｊ’
；ｒにｌｂ性のつよい上−Ｎ「またはＩＬ上の投ｔうに
先だって、弱ｊＦｊ化した１−Ｎ　ＦまたはＩ　１．上
の投５を包含する。

しかしむがら、１記二種の物質の組み合ねｌよ、偏重化
された乙のを投与ずろｔ備治療におい−Ｃら治療上効果
的な品を投与りる第二段階にＪｊいてし、使用される。

本発明にしたがって、１−　Ｎ　Ｆ　３３よび（あるい
は）ＩＬ上は他の活性な物質なしに投与できるが、本発
明の好ましい具体例にしたがって、治療上は自効である
が非常に有高な（ｈｌ）の「Ｎトおにびくまたは）ＩＬ
上は効果的な闇の増感剤と組み合才〕Ｕて投与される。

好ましい増感剤とは代謝ブロッカ−であり、または化学
療法上活性な薬剤、アクブーツマイシン−Ｄのような薬
剤である。

増感作用は、また、イオン照射治療によっても１ｊわれ
る。

本発明のざらにムう一つの好ましい具体例にしたがって
、Ｔ　Ｎ　Ｆ’および（または）ＩＬ上の毒性作用を調
節することに関する方法は、１右ｉ’ｔ５　ｔｄのｌ　
Ｌ、上８よび（または）ＩＮＦの投与に先だら、または
続いてまたは同ｔ＋、’ｔのいずれかの治療の異った段
階にＪ３けるＩ’Ｆ　Ｎ　Ｓの投与を包含する。

いかなる起源の、天然起源または組み合わせによる、お
よびあらゆる型式のおよびアルファ、ベーターまたはガ
ンマ上ト型の、インターフエロンが本発明の方法と組成
において使用される。

好ましい具体例として、１１：Ｎ−ガンマ−が使用され
る。

木ブを明はまたＴＮＦおよび（または）ＩＬ上の有毒な
作用を調節する方法を提供する。そこで、Ｔ　Ｎ　Ｆ　
ｄ；よび（または）ＩＬ上および任意には増感剤まｊζ
は、インターフエロンが特有なｍ胞を標的とする。標的
は、特異的ａＩＬＩＬ面表面抗原識する抗体により、ま
たはホルモンと共同してＩＩＩ胞に作用Ｊるような細胞
に特異的な特性に阜ずく他の周知の方法により１ｊわれ
る。

本発明はざらに患名の細胞サンプル中のＴ　Ｎ　Ｆしし
ブタ−レベルのＲを含イ１１Ｊる弱ｊＧ化されＩこｈ）
の（上１で治療する患省によメけるＩＮＦ作用の調節を
監視する方法を提供りる。好ましい細胞サンプルは末梢
面白血球である。本発明のこの而は、本出願老等にＪ、
る発見すなわら、細胞表面レセプターへの放）１性標識
ＴＮＦの結合（よＩＬ〜１処坤の後は茗るしく減少する
ということに３，４づくものである。

ＴＮＦ結合性の減少は、ＩＬ上の適用数分内に開始され
、通常のレセプターへの結合のＩＬ上と１−Ｎ「の競争
によるものではむく、むしろ、ＩＬ上への１ＩＬＩ１１
応答としてＴ　Ｎ　Ｆに対するレセプターの表現の減少
をもたら１゜ 調節ｔま可逆的で、Ｔ　Ｎ　Ｆレセプターレベルは１上
１の除去数時聞内で完全に回復する。（表■を見よ）。

本発明のムう一方の側面にしたがって、ラツ剤−Ｌ認容
される少くとも一種の賦形剤と効果的な聞のｒ　Ｎ　Ｆ
　Ｊ３　にびＩＬ上を含有する組成が提供される。本発
明の組成は、活性成分を前混合することににすＪ：たは
、各活性成分を直列投与（ｔａｎｄｅｍａｄｍｉｎｉｓ
ｔｒａｔｉｏｎ）　’ｌ’　４１わちｉｎ　ｖｉｖｏ混
合により調製される。

賦形剤（キ１１リアー）のｆｌ質は、冶また目的に適用
される方法−クリームの形でまたは「１−シ」ンの形で
、−局所的応用にはまたは、活性物質が注！、）１適川
のためヒト血清アルブミンのような成分を加えて安定化
するような液剤の形ぐよる。

例えば、ｒ　Ｎ　Ｆ　Ｇ、ｔ　ＲＦ瘍ＩＩｌ胞と１０ピ
コｇ／−程度のＣＩ　Ｉσのヴイルス感染した細胞には
効果的に細胞ｄｉ性がある。

治療に適用されるＴ　Ｎ　Ｆ　１３よびくまたは）　Ｉ
　ｌ−−上のωは、標的組織において、この範囲か、ま
たはより高い濃度となるように調整される。組成はまた
増感剤たとえばシクロｌ＼−ｒシミド（ＣＩｌ＋）、ア
クチノマイシン１〕、マイトマイシンＣまたは、インタ
ーフエロン、とくに１［：Ｎ−ガンンーのような代謝ブ
ロッカーを含有することらでさる。

図面の説明 本発明は次の図面に関し１例に１つ−（さらに説明がな
される・ 第１図は、ＴＮｒの細胞ｊｂ竹に細胞を１８≧感肖りる
白血球産生シトキンとしてのＩＬ上の同定をを示Ｊもの
である。活性化したＵ〜９３７細胞により厚生じた粗シ
１−キン調製液は二１’ＬＩｆで分離する。

（ａ）　　１Ｍ食塩、１０＋＋＋Ｈ１！ｉＭす１−リウ
ム、ｐＨ７，４，０，１ＲＩＨｔ＝ＤＴ八、０．１％ポ
リエチレングライコール、３０％１ブレングライコール
を用い！ご１１目ｒｏｇｃｌ　Ａｃ八へ　４カラムによ
るゲルろ過。

（ｂ）　　イオン交換ＬＩ　Ｐ　ｌ−Ｃ１またはＭｏｎ
ｏ　　Ｑ　７Ｊ　ラム使用。１１ンプルは２０１１１Ｈ
ｔ−リエタノールアミン、ｐＨＩＯに溶解し、口塩水（
０−０，１２５Ｍ＞でグラアイエンド溶出づる。両段階
で、脱感作活性とＩＬ−上活性（胸腺１１１胞にＪ：る
ｙ−ミシンの取り込み）が共に精製される。ドデシルｌ
ａ　Ｍすｌ・リウム・ポリアクリルアミド電気泳動によ
り、分子噛約１７．０００の↑たん白と低分子品のごく
少量のたん白だけを含有りることが判った。

第２図は、ＩＬ上の防御活性とｐ１１２処理シト１ンを
Ｉ上１抗而清で中和した防御活性を検討することにより
ＩＮＦの細胞）１ｊ性を脱感作する白血球産生シトキン
としてのＩ　Ｌ　上の同定を示す。

ＩＬ上の防御効果およびグルろ過につづいて精製された
ｐＨ２，ｏ処理シトキン調製液の濃度依存（第１図）。

１．Ｌ上にＱｌ　　１？ｉ　Ｓｔ的シラビット抗血清１
：１００８釈にて使用）を８有する培地、または培地だ
ＧＪで、２時間、４℃でインキュベージコンする。

第３図は、ヒト５Ｖ−８０、ヒーラ−細胞、Ｌ上３２な
らびにマウスＬ　−９２９細５１１系のγ−Ｔ　Ｎ　Ｉ
”　ＪｊよびＩＬ上の防御活性の比較である。

防御効果は、指示ｎ亀の二種のシト１ンと４時間インキ
ュベーションすることにより引き出され、さらにγ−ｒ
Ｎ　Ｆ　（１００Ｕ／Ｉ＃Ｒ）　＋ＣＨＩ　（５０μＪ
／ａρ）と１２時ｎ４ン４−ユベーシコンした。

第４図は、ＴＮ’ＦおにびＩ　Ｌ上によるＴＮＦの細胞
ｍ性への抵抗誘導の反応速度を示している。

Ｓ　Ｖ　−８０細胞は指示された１：）問γ上−ＮＦ（
２０ｐＨ）（ｘ）ま／ｊはＩｆ上（７ｐＨ）　（拳〉ど
萌インニ％　ニｌベーションする（破線：土台培地だ１
′Ｊで前インキュベージコンした培地中での生＜７能力
）。

その後、細胞をりづぎ、ＴＮ［（１００ｐ旧ｔ　ＣＨｌ
（５０μｇ／−）で１２時間インキュベージコンする。

１細胞はＣＵｌだ【ノぐブＸアレンジした培養と比較し
た生育能力のパーセンテージで表されている。

第５図は、Ｉ　Ｌ　上に反応してＳ　Ｖ　−８０ＩＩＬ
胞へのＴＮＦの結合性の減少、およびＩＦＮ−ガンマ−
に反応しての結合性の増加の反応速度を示している。Ｉ
　Ｌ　上（３，５ｔ＋Ｈ）を４℃（ロ）または３７℃（
Ｘ）で、γ−−［「Ｎ−ガンマ−（０，６ｎＨ）　ヲ３
７℃（・＞−ｒｓｖ−８誘ｍ胞上にのせる。指示時間イ
ンキュベーションの後、１２５１−ＴＮＦ　（０，９ｎ
Ｈ添加）の特異的結合性が定量化される。結果は未処理
細胞（４２８０ｃｐＩｌ）への結合バーヒントで表され
る。γ−Ｔ［Ｎ−ガンマ−（０，６ｎＨ）と１６ｒｆ１
問およびざらにｌ　ｌ　上（３，５ｐＨ）との４時間に
インキュベ一シコンに続いての　　上ＴＮＦの結合性も
示されＣいる。。

第６図は、ｌ上１処理および１処１！ｕ　Ｓ　Ｖ　−８
０細胞への放１）Ｉ　Ｐｉ　ｊａ識ＴＮ「の結合性を示
している。指示温度で、ｔＩｉ則能標識Ｔ　Ｎ　Ｆを添
加し、下記のように処理した。

Ｌ１６ＡＮＤプログラムを使用りる結合性のスキツチＡ
７−ドブ１］ツト解析はｔｌＩ人図に示しである。

第７図は、種々の細胞への］−Ｎ［結合性にＪｊ　ＬＪ
るＩＬ上誘発減少の投！５吊曲線である。

！”５上１内皮細胞（φ）、Ｓｖε３０（Ｏ）、ヒーラ
−細胞（Ｘ）およびＬＪ９３７（［１）を指示温度のＩ
　＋、　上と／ｌ　１１１１間インキ１ベージ］ンした
。。

１２５１−ＴＮ［を３．６ｎｌＪ／Ｉｄｌ添加し表１に
記るしたＪ、うに定量化し、その特異的結合性は」ト処
理＝１ント１上ル１１１胞への結合ヤｌのバーヒントと
じて表わしである（１’ｓ１１細胞中１８００ｃｐＪ４
　、ＳＶ　８０１１１胞中１４００ＣＰＨ、ヒーー、７
−細胞中５５００ＣＰＨ、ＵＯ３７１１１胞中コ３３０
０ＣＰＨ）。

第８図は、ＴＮＦの結合性と前処理した細胞からＩし上
を除ムした後の細胞溶解への感受性を示シ”Ｃイル、、
　５Ｖ−８０１１１ｆＫ１ヲＩ　ｌ−上（３，５ｐ１１
）と４時間インキュベーションし、三回−（Ｊｌざ、そ
の後、Ｔ　Ｎ　Ｆの結合ｒｌ（Ｘ）およびＩＩ胞溶解効
果への感受性（・）を種々の時間に測定した。

放銅能標識ＴＮＦ　（０，２ｎＨ）の結合ｔ’ｌは、Ｉ
　１−上　（２５９５ＣＤＩＬ　）と処理しむかった細
胞への結合のバーセントで表しである。１−　Ｎ　ｌ’
＝　（１００１１Ｍ）ににろ死滅の割合は、Ｃｌ１１だ
けでｆ−へ／レンジした培養と比較して生ｎ能カバー廿
ントで表わしている。

第９図は、代謝ブ［Ｉツカ−、シフ［］ヘキシイミド（
ＣＩＩＬ）の存在ｔのＩ　Ｌ上によるＴＮＦの細胞ｉｆ
ｆ性の増強を示し【いる。細胞溶解作用は４秤の異った
細胞系、５Ｖ−８０、ヒーラ−細胞、Ｌ　１３２　Ｊｊ
よびＬ−９２９で検晶１した。ＩＬ上は、Ｃ１１ｌ（５
０μ９　／　ｍ（！　）と共に（０）またはＣｌ１１（
５０μ９／ｄ）とγＴＮＦ（１０ＬＪ／−）とＩＬに（
×）、指定濃度に１２時間添加した。

第１０図は、Ｔ　Ｎ　Ｆ　Ｊｊよｒ、ｙｉｔ−ｉに反応
してマウスの脱感作作用を示寸。マ・クスに、ＩＮＦ（
・）　、Ｉ　Ｌ上（０）また１工ＴＮにとＩし上の両者
各０．５ｕｗ／マウス（ロ）指示書を注）１する。１２
時時用Ｎ後マウスにＴＮＦ　（５μび）とΔＣし上）（
２０μシ）を再び注射し、その優の生存時間を記録した
。

第′１１図は、マウスにおｔノる一ＩＮＦとＩＬ上へ反
応しての均−Ｊｊ　Ｊ’、び不拘−説感作を示している
。マウスにＴＮＦ（５μ９二口）、ＩＬ上（０，２μｇ
：［Ｉｌ］）またはｐｎｓ　＜口）だけを注射した。１
２１１．’１間後、ＴＮＦ　（２μ９）または１Ｌ上（
０，４μシ）を、今回もよΔｃＤ　（２０μび）または
Ｇ　ａ　Ｉ　Ｎ　（１８Ｎ　）のどｈらかを一結にｔｌ
Ｏ上シ、その後の生存時間を記録しに０第１２図は、Ｔ
　Ｎ　ｌ二に反応しての脱感伯陵応速度を示している。

マウスに−ｒＮｌ−（１０μｇ：Ｄ）　　　、　　　Ｉ
　　　Ｌ上（０，／Ｉ　　μ　ｆｆ　　　：　　ｒＡ　
）　　　；Ｌ／、：ｔ、ＬＩ）　ｔ３　ｓだけ（ロ）を
注射した。指定時間後、−ンウスにガラクトサミン（Ｇ
ａｌｎ）（１８μ１ｇ）を、１０分後再びＴＮｒ（３μ
ｒＪ）を性用し、工の生存時間を記録した。

第１３図は、ＩＩＣＧｔ−感作したマウスにバクテリア
、１ンドトキシン（Ｌ　ｌ）　Ｓ　）の致死効果にλ・
１し、致死量以下を注射したＩｎ　＜７）　Ｔ　Ｎ　Ｆ
　Ｊｊよび１１上の防御効果を示す。

に　５７　／　Ｂ　Ｌ　’？マウス−ＰＢＳＯ，５ｍｅ
ＩＬ１３ＣＧ（ＢａｃｉＩＬｕｓ　Ｃａ１ＬＩＬＩＱＬ
ｔＯＧ１１ｔ３ｒｉｎ　）　０　、３８Ｉｎ９を静ｒｍ
　ＬＩ　ＱＪ　Ｌ、　／、：。２週間後、Ｐ１３Ｓ、　
　Ｉ　Ｎ　Ｆ　（１０μ９）またはＩＬ上（０，４μＵ
）のどれかを腹腔内注射した。１２＋１’ｉ間後、マウ
スにＬＰＳ（［５ｃｈｃｒｉｃｌ＋ｉｓ　ｃｏｌｉ、面
線型０１２７：フエノール仙出にＪ、り調装）を金石づ
るＰＢｓ　　Ｏ，５ｔｔｄｌをＶＪｆ！内に１１−則し
た。その後の生存時間を２録しＩこ　。

１’ｌ１ｍ球産に１シト４ンの相調製液を０１１２とす
る。

ＩＮＦは、このような処ＩＩＩ＋で−その細胞溶解機能
に関しても、その自身の細胞青竹への抵抗を誘発Ｊ°る
能力に関してし、両方に共に、不活性化する。−ｒ　Ｎ
　Ｆの／、ｆい溶液ｔよ第１図に示したように分割分離
し、１１１２１へ作活性はＩＬ上と共に精製する。

Ｖｌ感作活性は、供試サンプルをヒトＳ　Ｖ　８０！１
１１胞に数時間添加し、モの後Ｔ　Ｎ　ｌ：とＣ１１ｌ
添加し、その結果の細胞死の割合を測定して測定する。

Ｉ　Ｌ−’Ｉとしての１１５２　ＩｖＡ作シトキンの確
認は、さらに、０′！２図に示したように、ｔ　１．−
　ｉに対する甲−特異抗体で１１上を中和することによ
って証明した。

ＬＪ−９３７細胞により産上した半・粗シト４ン調製液
の脱感４話性の定ハ）により、この溶液を１１＝１に対
して増強した抗血清く・処理した揚台（×・・・・・・
×）、処理しない場合（Ｘ−Ｘ）ＩＬ上ＬＬ　＋１１２
感作効果（・）を仲介りることをシ［明した。。

三種のｙ＋！るヒト細胞系：　Ｓ　Ｖ　８０、ピーラ−
細胞、Ｌ　上３２でＩＬ上の脱感り効果がシ１明され、
第３図に示した。１、うに、このＩＪｉ！象の一般性を
図丞した。

シトキンの細胞溶解および１μ１２感作活性は、細胞溶
解活性の測定にはシトキン試験液連続希釈しくｊ）０μ
９／ｍｅ（７）ｅｌｆ　Ｉと１２時間インキュベーショ
ンしｌζ５Ｖ８０を用いて数字的に測定し、感作活性の
測定には、シトキン試験液と４時間イン１〕ベージ］ン
し、さらに指示濃度でＴＮＦ−おＪ：びＣｌ１ｌ　　５
０ｔｔび／ｌｄと１２時間イン４ユベーシ二１ンした。

死滅する細胞の割合を、！コートラルレッド取り込み試
験で定量化した。

細胞溶解活性単位を成育可能で残存する細胞のｈｌが（
ＣＩＩ＋だけでインニ１コベーションして土台可能残ｉ
ＩＬるけの５０％と４【るシトキン試験液の濃度として
定義した。

防６１１活竹の単１１７は、ＩＮＦにより死滅する細胞
の５０％を防す１１１ろシトキン濃度として定義された
。

このようにして、ＩＮＦのよる死滅への抵抗を誘発Ｊる
ｐＨ２，ｏ処即シトキン調製液の成分は、次の知見にＪ
、ｔいで、Ｉ　ｔ、　上と定義される。

ａＩＬｌ上の説感作活竹および１）機内活性（胸腺１Ｉ
ｆＩ＋ＩＩ化）は、ＩＪ−９３７産生シト４ンの粗調製
液が一連の分割分離をされている時に、共に精製され、
ｌ　Ｌ上の効果的な精製法となる。（第１図を見よ）。

ｂ）１１上への単−抗血清はこのような調製液のｌｉｄ
感作Ａｉ性を中和したく第２図を見よ）。

Ｃ）異なつｌこ起源の１し上が、シト４ンの粗調製液と
同じ稈麿効果的に細胞毒性への抵抗を誘発した。抵抗は
、第２図に示したように、１１Ｉｌ当りＩＬ上０，１ユ
ニツト（３Ｄ（＋＞程度の９砧の処即Ｃさへし観察され
た。

１１上調製液を馬染しているバクデリアリボボリリツカ
ライドは、１０μｇ／ｄ稈の＾いｌＩ’Ｊ度添加した葡
ぐち、抵抗を誘発しなかった。

２、　天然精製ＩＬ上の調製 天然１な！ＦＪＩＩ−上番よ次のように調製り゛る。、
：４−ベーター−−ホルボール上２−ミリスアイ１〜上
３−アセデート（４−β−ｐｔ＋ｏｒｂｏｌ　上２−−
ｙｒｉｓＬａｔｃ　　上３−ａｃｅｔａｔｅ　　）　　
　（５ｎｕ／ＩＱ　　）　　と　しンダイヴイールス（
４８）によりヒト組織球すンパ腫細胞系Ｕ９３７中に誘
発したシＩ−キンの粗調製液をＰＧ−３５０−２００（
Ｓｉｇｉａ　、　Ｓｔ。

［ｏｕｔｓ、ｎｏ）に吸着した。感作活性とＬ　Ａ　Ｆ
活性の大部分、および細胞溶解活性とＩＬ−Ｎの小部分
は、結合しない物質中に回収された。＾ｍ１ｃｏｎ　Ｙ
Ｈ５股で限外ろ過して濃縮し、それらに銅するモノクロ
ーナル抗体から構成した免疫吸着剤カラムを適用して−
ｒＦＮ−アルファと他の残りのＴＮ＋−を除去した。

てれから、ｇ４酸塩緩衝生理食塩水ｐＨ２、０で１２１
：５１聞透析した。不要物Ｃ，ｉ遠心分離により除去し
た。

１Ｍａ１！水、１０ｍＨ＊Ｉ’ＩＬ−ト’）　’／ムｌ
１ｍ液、ｐｔ＋７．４との平衡に続いて、た／ｕ白はＵ
　ｌ　ｔ　ｒｏｇｃ　ｌ＾Ｃ＾５）４　カラム（１６ｘ
　１１０ｍ＞で分離分割した。、ｉ７′ｆ解液は、１Ｍ
口塩水、１０１帽ＬＪＩ−リウｔ１緩衡液ｐＨ’７．４
．０．１餉ＨエチレンデイアミンテトラアＬ／ブイツク
アシド、０．１％ポリ１チレングリコール（Ｍｒ７００
０−９０００）、３０％−［ヂレングリ］−ル。

２、ｂｍＱフラクシ］ンを集め、ＬＡＦ活性と［Ｎ［へ
の抵抗誘発を試験した。活性のあるフラクシヨンを婁め
ｔ、１ｌｉｉｌｉ′ｉシ、２０　ｍＮ９１　ａ　ｔ　ト
’Ｊ　’７　ムｐｉｔ７．４で平１ｉｉとし、同じ緩衝
液で前処Ｌ’ｌ！平衡としＬ：　ｌ）　ＬＡ　Ｅ　５ｃ
ｐｈａｃｃｌカラム＜７ｍり　　（ファルマシ７、ラブ
慟ナラ、スウェーデン）に添加する。

防Ｉ２Ｉ＋活性もＬＡＦ活性活性シカラム合しない物質
中にほとんど回収された。

ドデシル［Ｍ）」・リウム、ポリアクリルアミドゲル電
気ｖＫ仙゛Ｃ分析して、この物ｔ１は１ｙｉｒ約１７０
００の上たん白とＭ　ｒのＪ：り小さい少量の他のたん
白を含打することが判った。ＣＬ　Ａ　Ｆ　話ｆｌ−リ
ンパ球活竹化囚了活竹） ３、　　ｉＩＬＩＬ前へのＩＬ上８よび°丁Ｎ　Ｆの’
Ａ＋　！Ｊ！の相関関係 Ｇ１１ｌ＋７）ＩＬ存ず１下、ヒト５ｖ−８ｏ細飽申誘
発されたＩＬ上の防御効果は、第３図に示しｒＳＪ、う
に、Ｔ　Ｎ　Ｆによって誘発されたものに匹敵した。

しかしながら、第９図に示したよ・うに、ＩＮ＋二と異
り、ＩＬ上はＣＩｌ＋の存右下これらの細胞にわずかに
検出される程度の細胞溶解効果を右・」る。

第９図に示したように、ｖＩａの状況下で、’ｊ　１．
’ｉわち、細；畿中たん白の合成がブロックされる１１
５．１１−上は細胞死滅に逆の増強効果を−ｂっことが
できる。

低い濃度においてさえも、ＩＬ上はＴＮｒの細１泡ｄｉ
性を増強し、１−　Ｎ　Ｆの低ｌｒＪ度での細胞死滅の
効率をＩ　Ｌ　＝上非り６下の２５（８＾濃度ぐ引き出
される効率まで増強した。

他の二種のヒト１１１胞系−ヒーラ細胞どし１３２−ニ
Ｊ３　イテ、０１１１と共存す６時は、Ｉ　Ｌ　−’Ｉ
　（し自体用らかに細胞溶解性であり、この細胞応性は
Ｔ　Ｎ　Ｆの重性に加ｃ′＞性である（第７図）。ヒー
ラ−細胞においてもし１３２においても、ＴＮＦの場合
と回じように、ＣＩ上１の非存右下にこれらのシトキン
を添加した時、ＩＬ上の防御効果が観察される（第３図
）。

ｌ　Ｌ　・上または］“Ｎ　Ｆは、Ｃ１１１の存在にＪ
ｊい゛Ｃ介在する細胞ｍ性に対ηるだ番ノでなく、他の
試薬によりたん白の合成が抑圧された細胞の死滅に対し
ても、防御を提供する。

表■は、たｌυ白合成阻害剤エメチンとＲＮ八へ成阻害
剤アク１ノマイシン１）の存在下５ｖ−ｓｏＩｌ胞に対
する１−Ｎ　Ｆの細胞毒性を示している。Ｃ１上１、Ｉ
ＩＩＬ；＜、コＦＬら２４１ｊ（７）　［１害剤Ｇ；ｉ
　Ｓ　Ｖ　−８０ｌｉｌ胞を１’Ｎ「による死滅に感作
した。

すなわら、Ｃｕ１ｌの場合とｌｉｌじように、両阻害剤
による感作は、これら阻害剤の非存在）”１ｍ上まｌこ
はｒＮＦのどちらかで前処理すると、非常に減少する。

４、　　　ＩＣ上処理後観察されるＴ　Ｎ　ｌ”の細胞
ｍ性に対り−る抵抗の増加へのＴ　Ｎ　Ｆレセプタ減少
の１３ｔｌ係 上−Ｎ　Ｆの場合とＩＭＩじ＜ＩＬ−上で５１！ｌ１ｇ
１　Ｌ／た細胞は、ＴＮｒのＩＩｌ胞溶解効果によりＩ
Ｌ（抗性とイする（５０）、第４図に示したように、ｌ
　ｌ−上おＪ：びＴＮＦによる抵抗の誘発は、−「Ｎ［
の揚台成仏がｒＩ’　ＩＩＩ　１．：ｊ”ｌ　達−４６
コト４ｉ：　Ｗ、　ＧＪ　４ｊ、ｌｉｄ　Ｕ　９　イム
Ｔｌ　−スをとる。

Ｔ　Ｎ　Ｆレセプターレベルが約１時間ですでにその最
底給にａ１達してム（第５図）、細胞Ｆｆ１解への抵抗
はＩ　Ｌ上の添加につづいて約５ＩＩ１１問まで増加し
続ける（第４図）。

ＩＬ上でｓ　ｖ　−ａ　ｏ　ｓｔｔ胞を処理Ｊると抵抗
の増加がマツくなることは、これらのＩＩＩ胞にＪｊい
て、！１−上は反対の作用も及ぼしうるという事実にお
（らく関係がある。

’Ｉ　Ｎ　Ｆの添加に先だってＩし上を添加した助は、
細胞溶解への抵抗を誘発Ｊる一方、１Ｎ１：と同１＋、
１に添加した１１．１は、細胞毒ヂ［を増強することが
見出される（４８）。

実際、第４図に示したように、１時間以内ＩＬ上で処理
した５Ｖ−８０１１胞はＴＮＦの細胞溶解効果へ未処理
ｌｉｌ胞よりより高い脆弱性を示したく第４図のダッシ
ュライン）。

ＴＮＦのレセプターへの（Ｌ上の効果とＴＮＦによる細
胞溶解への細胞脆弱性への１し上の効果のきわめて明白
な矛盾は、この２種の効果からの恢復に観察される。

第８図に示したように、５ｖ−ａｏ細胞からＩＬ上を除
去すると１’　Ｎ　Ｆのレセプターの非常に急速な恢復
が続くが、細胞溶解効果への脆弱性は恢復し’Ｊい。

！し上を除去して７ｈ問後、ＴＮＦレセプターは正規の
レベルにほとんど恢復し、一方、■Ｎ「による死、滅へ
のＩＩＬ抗は不変のままであった。処理細胞からＩ　Ｌ
　上の除去後のたん白による死滅へのＭ（抗のＭ１ト）
とＴ　Ｎ　Ｆレセプターの恢復は、ｌ上１はＴ　Ｎ　ｒ
による死滅への細胞抵抗へ寄与し、加へて、ｉ　Ｎ　ｒ
へのレセプターへ効果を及ぽす別の変化を誘発１Ｊると
いうことを示して、いる。

５、ＩＬ上に反応する上−　Ｎ　Ｆ　Ｌ／　１７　ター
　（７）　減少Ｓ　Ｖ　−８０ＩＬ胞を１Ｌ上で処理り
るとＩ−Ｎ　ｌ−レセプターの表出が減少する。反応速
度を検討すると、Ｔ　Ｎ　Ｆ結合はＩＬ上を添加して１
分以内に減少を始め、約１時間で最底レベルに到達づる
ことが見出された。その後、わずかに増加した。

ＩＬ上の存右下２０時聞後できへも、１’　Ｎ　［結合
は非処し’１ＩＬｌ胞にＪｊけるよりら有危に低かつｌ
こ（第５図）。

第６図に示した結合性のス１−Ａ７ツブＸ７−ド・プ１
１ット解析μＩ　Ｌ　上処理細胞においてら非処理細胞
においてムＴＮＦは均一の性質のレセプターに結合し、
結合部位の親和性はＩＬ上処即の後す不変のままである
ということを示した。−・方、その密度は非常に減少す
る。

（９００レセプター／細ＩＩＩ、１１上　６０１）（１
／−で４時間処理した細胞中Ｋｄ９．７ｘ１０”Ｍ、比
較］ントＩ］−ル値６２００レセプター／ＩＩＬ胞、Ｋ
（」１、Ｉ　Ｘ　１０”　Ｍ＞く り返へし実験で、［Ｎ［レセプターレベルの変動（２２
３４−６９６０結合部位／細胞）とＫｄ測定値の変動（
９，６ｘ　１０−”　Ｍ−３，Ｉ　Ｘ１Ｘ１０上Ｏも観
測された。しかしながら、１〕Ｍ△同様、ＩＬ上は、す
べての実験で、ＴＮＩ：の結合部位数だＧＪでなくその
親和性にも影響していることが判った。代表的な例から
のデーターが第６図に示されている。（１〕ＭΔ−４−
ベーター小ルボール上２−ミリステイト上３−アヒｔ上
”　）。

１−Ｎ［レセプターの減少は温■依存性であった。

第５図に示したように、Ｔ　Ｎ　Ｆの添加に数時間先だ
って１１上を添加するかまたはＴ　Ｎ　Ｆの大過剰（５
００１８以上）を加えた時でさへ、ＴＮＦレセプターの
減少は４℃では観察されない。他方、ｌ　Ｌ　上の効果
はたん白金酸に依存しないようである。

Ｔ　Ｎ　Ｆと１上１はその標的細胞への結合では直接的
には競合しないことが見出されていた。この知見は、Ｔ
　Ｎ　＋−とＩＬ上へのレセプターは全く別の分子であ
り、■ＮＦへのレセプター表現は１Ｌ上による規制をう
りるということを示している。

表１と第５図に示したように、４℃で、族１３１能標識
−［Ｎ［°と１１′１１時かまたはＩ　Ｎ　Ｆの添加数
時間前かに細胞に添加した１ｍ上はＴＮＩ−の結合性に
影響しなかった１１反対に、３７℃で、ヒト線紺芽細胞
Ｓ　Ｖ　−Ｂ　Ｏと包皮線１１　］細１１（１”Ｓ　　
１１）ヲ１１−上で処理するとＴＮＦ結合のルるしく急
速な減少が起った１、結合は１ｍ上の添加後１１１．’
ｒ間で最大に阻７Ｔされ、それから、徐々に恢復した、
。

しかしながら、ｔ　＋−−ｉ処理の開始２０　＋１．’
ｉ間後でさへ、結合はなお著るしく減少していた。

１−　Ｎ　ＦレセプターへのＩＦＮ−ガンマ−の効果ら
、また、第５図に示したＪこうに、検討された。

他のＩＩ胞のように、１ＦＮ−ガンマ−は、Ｉｒ’Ｎの
添加の数時間（Ｕに開始したＩ　Ｎ　Ｆのレセプターの
増加を５Ｖ−８０細胞中に誘発した。

ＩＦＮによりＴ　Ｎ　Ｆのレセプターを増加した細胞は
また一ＩＮＦししブタ−の数を減少してＩＬ上に対応し
た。しかし、Ｉ　Ｆ　Ｎで処理しなかつＩこ細胞と同稈
１ｒｉに低いレベルでｔよないが。５Ｖ−８０細胞のＩ
ｒＮ−ガンマ−の定ｉ１は、ＩＬ上またｔ、ｔ　１　Ｎ
　Ｆによる細胞処理の慢ｂ、そのレベルに変化がむいこ
とを示した。

第７図に示したように、ヒト包皮線維芽細胞は、Ｓ　Ｖ
　−８０判１胞よりらされめて人さく、１−Ｎ上結合に
関して１１上の９１宋に応答１Ｊることが見出されＩこ
、、　Ｔ　Ｎ　Ｉ”レセプターはより明白シミ減少を示
し、効果はＪ、り低いｌ　Ｌ　上１７！麿で６観測する
ことかできた。

減少はこれらの１１１ＩＩＬ中３．５ｘ１０−”Ｍ　　
ＩＬ上（０，０２１−八Ｆ　　ｔＪ　／　ｍｅ　）の少
量によっでム起つ！、：。

Ｉ　Ｎ　ＩＬ／　Ｌフタ−（７）ｉｄ少は、Ｓ　Ｖ　−
８０１１１胞中にＪハノる稈効果的ではないが、ヒーラ
上１１Ｉ胞中でｂまたｌ　Ｌ上によって誘発された。

−／ノー、Ｕ　−９３７１１１網肉ＩＬ！細胞をＩＬ上
で処理した１時には、ｌＮｌ−レしブタ−の減少は観察
されなかつｌζ１．放用ｆｉｉ：標識＋　１−−上のシ
゛シつだ細胞型への結合を吟味りろと、人■に示したよ
うに、ＩＬ上のり１宋とこのたん白のレセプターレベル
の間にｔま相Ｉｌ＋関係のあることを示唆した。

＋　１−−−　ｉ結合１１は、［Ｓ１１細胞で最高で、
ＳＶ−Ｂ　ＯＩＩＬ　ＩＩＬて°はＪ、り低く、＋５−
ｙ−ＩＨ胞ｃ　ｔｉｔきわめてｉｔ　＜、ｔＪ　９３７
１１１１泡では検出レベル以下であつＩこ、、Ｉ−ＮＦ
は、結合に関して、標識ＩＬ上と競合しなかった。さら
に、１−　Ｎ　Ｆ（１７ｎ（１／　ｍＱ　）Ｔ：４時間
細胞を処理し−Ｃシｌ　ｌ−−上を結合する能力は減少
しなかった（表１）。また、放（）１能標識γ−ＩＦＮ
−ガンマ−の細胞への結合性はＩＬ上またはＴ　Ｎ　Ｆ
処ｌｊｌ後も右怠に変化しなかった。

Ｇ、１−ＮＦおよび１１上の致死作用へのＩＩＬ２感作
９〜１３週令の老Ｂａ１ｂ／Ｃマウスを全実験に用いた
。ＩＮＦｌ　１Ｌ上、ＬＰＳ、アクブノマイシン１〕（
Δｃｔ−［））ど［）−ガラクトリ°ミン（ＧａｌＮ）
をＰＬ３Ｓに溶解し、各０．５ｔｎｌ宛駒腔内に注射し
た。

致死Ｊｉｌ測定のためにｔま、Ｔ’　Ｎ　ｒ、Ｉ　＋−
上または１１）Ｓを単独で、あるいは、ＡＣ−Ｄまたは
Ｇ　ａＩＮの注射１０分後に投与した。脱感性実験では
、致死量決定試験と同じ方法で行う１２峙問前に、Ｔ　
Ｎ　ｌ−または１し〜１を注（ト）した。処置の後、死
の時刻を決定するため７２ＩＩＬｌ￥間マウスをたえず
観察した。リベての場合、７２時間生存したマウスはそ
の■、１点で全く正常に見えた。さらに、これらのマウ
スの一部を１週間観察したが、悪化の兆候ＬＬ見られな
かつｌＣ，′！ｊべての実験は２系列で行い同じ結果が
得られた。各実験では、実験上のポイント１０に２匹の
マウスを検討した。各要員（ポイント）で用いられた２
匹のマウスの平均生存期間だＧＪでなく実際のな生存期
間提示しである。

Ａｃｔ−０’とＧａ１ＮはＴＮＦとＩＬ上（７）致死作
用にマウスを感作する。Δａｔ−ＤとＧａ１Ｎの感ｆ’
１Ｔｆｌ用の性質を明らかに１にとを試みて、これらの
試薬の非存在下、ＴＮＦまたはＩＬ上をｉ１Ｑ！Ｉ−Ｊ
ると次のＡａｔ−ＤまたはＧａ１Ｎと一緒の１’　Ｎ　
ＦまたはＩ　Ｌ上のｔ［射へのマウスの応答に影響りる
のかどうかを試験した。図１０、ＩＬに示したように、
Ｉ’　Ｎ　Ｆ注射１２１１５聞後、ＴＨＥ−上△ｃ　ｔ
、　上）を注射したマウスはＴＮＦ単独で前処ｌ甲しな
かつＩこマウスよりも良１１１間、ＴＮＦ＋Ａ　Ｃｔ上
）の致死的作用にもかかわらず生（ｊした。

（の防御効果は、Ｔ　Ｎ　Ｆ高投与量（５μｇ／マ・ク
ス）で前処理したマウスで明らかで、ＴＮＦｏ、０２μ
９程度で前処理したマウスのよｊいてざへ明らかに認め
られる。同様に、ＩＬ上−＋△Ｃ１−０を）ＩＱ４後の
マウスの成育は１し上の先だら注射で延長した。ｌ　Ｌ
　上の前処理はまたＴＮＦ＋−Ａｃｔ−［）の次の）１
）１にしかかわらず生存Ｊるマウスの能力を増強した。

逆に、Ｔ　Ｎ　ｒで前処理したマウスは、ＩＬ上＋ＡＣ
ｔ−［）の致死作用にもかかわらず生存Ｊ−る能力を増
強することを示した。

Ｔ　Ｎ　ＦとＩし上をマウスに同時に注射することは、
第１０図の長方形に示したように１Ｎ　ｌ”またはＩＬ
上のどちらかを巾独事ｙ曾ｉ′）１するよりも、より効
果的にＡ　ｃ　ｔ　−Ｄ　＋　−Ｉ−Ｎ　ｒ’の致死作
用からマウスを防１１１ｖる。

Ｔ　Ｎ　ＦまたはＩＬ上を注射したマウスは、また、Ｇ
ａ１Ｎの存在において、’ｌ−Ｎ　ｌ−またはＩＬ上の
引き続きのｔｔ−ロ・１の致死作用からも防御された。

その防Ｉ２１１は、Ａｃｔ−Ｄの存在において、これら
のシトキンが及ぼす致死作用への防御よりもより効果的
であった。

第１１図に記載されている実験のＴＮＦと１し上の添加
ｆＪ　ｌｆｔでは、ＡＣｔ−Ｄによる感作化はＩＬ上ま
たは−Ｉ　Ｎ　Ｆの前処理により、やや遅延する。

一方、Ｇａ１Ｎによる感作で起る死は実際的に防止され
る。Ｇａ１Ｎ感作実験（ブヤレンジ）が、第１２図に示
した防御効果の反応速度を検討づるのに選ばれた。ＴＮ
Ｆ、Ｇａ１Ｎの致死ｎ川からの部分防御は、生存期間を
延長し、ＴＮＦまたはＩＬ上甲独の注射３０分後に（そ
れぞれ、１０μ９と０．４μｇ／マウス）すでに観察で
きる。丁Ｎ　Ｆ　／　Ｉ　１．、上注射１時門後、マウ
スは完全に防ａＩＬされた。ｔｆ　ＩＩＩ　１２時間後
も、防御はＨ持された。ＩＮＦ前処１１！　２４助聞俊
、２匹中１匹のマウスがＴＮＦ＋Ｇａ１Ｎｔ、）４１を
した時に死んだが、防御作用の減少を暗示している。前
処理４８時間後、防ｔ１１１は完全に無効であった。

７、使用（７人）ならびに投与（ン入）本発明の組成（
物）は抗１ｉｔｕ、抗菌（バクテリア）、抗ウイルスま
たは抗駆虫の治療に用いることができる。

マウスに投与した効果的な樋は、ＩＬ上の前処理の場合
マウス体重１Ｕ当り０．５５−２５ｎの範囲で、次のＴ
　Ｎ　ｔの治療はく戊子）０．１上０μｇ／体市りの範
囲で、次のＴＮＦ＋Ａｃｔ−Ｄの場合（腹腔内）（れぞ
れ、４−４０μｇ／　５１　オよび０．５上．５１１９
／９である。

ヒトに投与する活性化合物の聞ＬＬ、種々の因子上，？
、者の状態、治療される症状、３痛のきびしさ、投！ｊ
の方法（ルート）、および処方Ｊる医師の判所によるら
のである。

よりさびしい場合には、１−Ｎ「と１１上の組み合わｔ
！畠投与、任意には、、インターフエロンおにび（３し
たは）感作剤が一緒に、がにえられる。

Ｉ　Ｌ上とＴＮＩの投Ｑは、インリー゛ノ丁ロン、代謝
ブ【上ツノ上まは化学掠７人上活性な薬剤と間開または
なしで、認容されｌこ投与型式のいずれかによるムので
ある。

「射による投与が好ましい。周知の適切な投与型式は、
静脈内１１射、腹腔的注射、筋肉内注目、または外１ｔ
２内注川または輸液である。ｎ所治療も外部感染の場合
にも考えられる。

本発明の組成（￥／Ａ）は次の活性な物質を混合して投
与のために調製される。すなわら、ＩＬ上、−「Ｎ［、
ｌ　ＦＮＳ、代謝ブロッカ−または化学療法ト活性な薬
剤。

生理学的に認容される賦形剤（キャリアー）としては、
すむわら、使用投与型式および濃度で受領名（忠省）に
無害な：１ヤリアを使用する。たとへば、キ＼１リアー
は次の物質の中の１つまたはそれ以上である。

ｖＡ函剤、抗酸化剤、湿潤剤、乳化剤、アミノ酸、ポリ
ペプチド、たん白、炭水化物、［ＤＴＡのようなキレー
ト剤および他の安定剤と賦形剤。

本発明による組成（物）の１ＰＡは次のようなものであ
る＝２９の滅菌ガラス製バイアル、バイアル八は、名山
化した吊のｌし上を生ｙ１食塩水にｗＩ解したしのを含
有する。

バイアル１３は治療上イｊ効な間のＴＮＦを生理食塩水
にＦＲ解したものを含有する。

バイアルΔおよび［３の投与１１２ケのバイアルに添付
の説明；！：にしたがって行われる。

説明；１：はバイアルへの内容物を社射し、予め決めら
れた間隔の後バイアルＢの内容物を）ｔｏＡＪ−るよう
に指示している。

表１の説明： 指示ｍ　ｎａへの　　１−７ＴＮ　Ｆ　（３，６ｎｏ／
ｒｄ）、１２５１−Ｉ　Ｌ上（４９ｎｇ／ｄ）と　　１
−　ｒ　ｌ　Ｆ　Ｎ−ガンマ−の結合を下記のように４
０℃で測定した。Ｉ　Ｌ　上とＴＮＦ相！ｊのレセプタ
ーへの結合の競争は、指定ｉ１匹で標識していないシト
上ンを添加してｆｉ’ｉｌ　ＩＩ、５に結合試験にＩａ
識蛋白を用いて、検討した。

Ｉ　Ｌ　上または−Ｉ　Ｎ　Ｆの前処理の効果は、標識
シトキンの添加に先だち、３７℃４時間細胞にイのたｌ
υ自を添加して検討した。

ヒＩ−Ｔ　Ｎ　ｒとＩｌ”Ｎ−ガンマ−を前述のように
（３０，４４）　１１１ＤＮ＊ＩＩＦ、識した。

最初に、クロラミンＴ試薬をももいて化成０４活性４２
Ｃｉ／ｓＦ、次にポルトン・ハンター試薬を用いて化成
！）ＩＦｆｉ性１８Ｃｉ／ｇ Ｉ　Ｌ　上をクロラミンＴ試薬をもちいて（３１）化成
）１活＋ｔ’１４０ｃｉ／ｇ放射沃素化した。

沃素化の後の生物活性の回収率は９５％以上で、ＴＮＦ
の細胞ｍ性に対するそのたん自の防御効果を測定して評
価した（２５）。

５Ｖ８０（４５）、ヒーラ−細胞（４６）または包皮５
５１１ｍ芽腫細胞ＦＳ細胞株（本研究室で確立）へのＩ
ｌｉ射能標識たん白の結合性を決定するため、これらの
細胞を１８Ｍ・組ｎ培養プレートの成育培地（イーグル
の胎児子ウシ血ｖ４１０％を含有する最小必須培地）に
、２．５ｘｌＯ５１１１胞／プレートの密度で、接種し
た。

３７℃で２４時間イン：−二１ベーションした後、プレ
ートを氷水に移し、成育培地を除去し、放）ｊ能標識た
ん白を２通りに、単独かまたは１００倍以上の非標識た
ん白の存在下、２０＋ＨＩＬ０Ｄ（ｊＳ　緩衡剤と１５
ｍＨすＩ−リウムアジドを含有する１５０の成ｎ培地に
添加した。

非粘看竹ｔＪ９３７１Ｑ胞（４７）は、他の点では全く
同じ條畳で、管の中で放（ト）能標識したＴＮＦを５ｘ
１０５１１１１１ｄサンプルとインキュベーションした
。

４℃でたえず攪拌しながら２１＋、ｓ間インキ、１ベー
シ二１ンした後、「６１１とヒーラ−細胞を次の物質を
含有する緩Ｖｌｉ液で３回すすぎ洗浄した。１４０ｍＨ
Ｎａｃｊ！、１．５ｍＨＫＩＬ　　Ｐｏ　　、　８ｍＨ
Ｎａ　　ｔＩＬ）ｏ　　、２．７ｍＨＫＣｊ！、０．５
Ｉｌ１ＭＭ　ｇＣｊ！　　、０−９　ＩＮ　　Ｃａ　Ｃ
ｊ　　、Ｑ　、５％つシ血清アルブミン、１５ｍＭナト
リウムアジド（Ｐ＋１８　／　＋３３　Ａ　）。

それから、Ｒ１胞ｔよ５ｍＨＥＤ’ｒ八を含有するＣａ
２＋とＭｇ”のないＰＯ３中で分離凸れ、会合している
標識化合物１１を測定りるため計数管に移した。

５ｖａｏ細胞は冷時！Ａ質と分離することが判り、・ぞ
れ故、標識たん白とインキュベーションした後、管に移
し、遠心分軸で３回、各回１０分間、２５０ｇで、５　
ｙｄ　　Ｆ）Ｂ　Ｓ　／　Ｂ　Ｓ八に再り゛スペントし
て、洗浄した。それから、計数管に移した。Ｕ９３７ら
同じ方法ぐ洗浄した。

放射性標識Ｔ　Ｎ　Ｆおよび１１−上の非特異的結合性
は、過剰の非標識シトキンの存在下に観測される。ａ１
丁ＮＦおよび１し上にそれぞれＳＶ４０　　では２００
．２００ＣＰＭＦＳＩＩ　　　では３００，２００ヒー ラ−Ｉｎでは ７００．５００ ｊＪ　９３７細胞ぐ１よ６００，２００である１１：Ｎ
−ガンマ−の非特異的結合性は、５■８０精１１４ｒ３
００ＣＰＭ、Ｆ　８１１細胞ｒ　０００　ＣＰＭであっ
た。特異的結合性は、Ｉａ、識シトニ髪ン甲独で観測さ
れた結合性から非特異的結合性の値を差し引くことで轟
１粋された。

結合性における内部！Ｉ！複変Ｖ口よ平均値の１０％内
であった。

−８８な　　　　；　　冨 ｉ ≧ へ ｌ　Ｌ上またはＴＮＦで前処１！１４時間俊、または前
処理しない５Ｖ８０細胞の指示された感作剤を１緒に１
２時間添加した一ＩＮＦの細胞溶解作用への脆弱性を試
験した。

生ｖＡ数はニコートラルレッドの取り込みを（００）、
（ｒＮ［で培養中）、感作剤単独でインキュベートした
培地の４菌数に比較したパーセンテージで表されている
。

入ＩＩＬ　、　　　ｌ　Ｌ　上に友応してヒｌ−末梢血
白血球にＪ、るＴＮＦレセプター表現の減少Ｉ　 Ｌ　上適用　　　　　［Ｎ１：結合（ｔＪ　／　ｍｅ　
＞　　　　顆粒球　　　　中核白血球（ＩＰＨ） ０　　　　　　５２０　　　　　　１１Ｇ２０．０１　
　　　　　！１１ｏ　　　　　　　ｎ、ｄ。

０、１　　　　　２８０　　　　　　　ｎ、ｄ。

顆粒球と（１１核白而球はＭｏｎｏｐｏｌｙ　ｃｕｓｈ
ｉｏｎで遠心分前により１ｉ鮮血液から分離した。Ｄｕ
ｌｂａｃｃｏの改良［ａすＩＣｌ３地で３７℃、１時間
インＶユベーションし　Ｉこ　。

１２５１−標識ＴＮＦの１０６白血球への結合を測定し
た。表に示したＪ、うに、顆粒球により］−Ｎ［レレブ
ター表現の有怠な減少がＩＬＩ−０，ＩＵ／ｄ（ＬＡＦ
活性）で誘発されることが判った。

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Ｊ、　　＆　Ｖａｄａｓ、　　Ｈ，＾、　　Ｐｒｏｃ、
　　ｎａｔｎ、　　Ａｃａｄ、　　Ｓｃｉ、　　Ｕ。

Ｓ、＾、８２　　、　　８Ｇｆｉ７−８６７１（１９８
５）。

２２、５ｃｈｌｅｉａ＋（！ｒ、　Ｒ，Ｐ、　＆　Ｒｕ
ｔｌｅｃｌｇａ、　Ｂ　、に、　Ｊ。

１ｍ１ｎＱ１．　　１３６，６４９−６５４（１９８Ｇ
）。

２３、Ｐｏｂｃｒ、Ｊ、Ｓ、ｃｌ、ａｔ、Ｊ、　　ｌ＋
ｕｎｕｎｏ１．１３６．１６８０上ｔ３８７（１９８Ｇ
）。

２４．０ｎｅｌａｋｉ、　　に、、Ｈａｔｓｕｓｈｉｍ
ａ、に、、Ａｇｇａｊｗａｔ、ａ。

Ｂ、＆　０ｐｐＯｎｈＯｉｌ、　　Ｊｌ、　　Ｊ、ＩＬ
ｌ１ｌ１１ｎ０１　　、　１３５．　３９６２２５、　
　ＨｔＪｎＳＯｎ、　　Ｐ、Ｊ、　　＆　　Ｒｏｂａｒ
ｄ、　　Ｄ、　　Ａ１１ａｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ。

１０７．２２０−２３９（１９８０）。

２６゜にｕＩＬ、ｒ、ｃ、、Ｊａｃｏｂｓ、Ｓ、＆　Ｃ
ｕａＬｒｅｃａｓａｓ、Ｐ。

Ｐｒ０Ｃ，ｎａｔｎ、　　Ａｃａｄ、　　　Ｓｃｉ、１
１．ｓ、Ａ、８２　．５７５６−５−　　　　。

７［１０（１９８！ｉ）。

２７、　１ｓｕｊｉａ＋ｏＬｏ　　、　　Ｈｌ、Ｙｉｐ
、　　１／、に、　　＆　Ｖｉｌｖｃａｋ、　　ＪＰｒ
ＯＣ，ｎａｔｎ、　　Ａｃａｄ、　　Ｓｃｉ、　　Ｕ、
Ｓ、＾　８２．　７０２Ｂ−７６３０（１９８！＋）。

２８、＾ｇｇａｒｗａｌ、　　Ｂ、Ｂ、、　　Ｉｃ５ｓ
ａｌｕ、　　１．　　ｒ　　、　　＆　１ｌａｓｓ。

Ｐ、１．　　ＮａＬＩＩｒｏ　　３１８．ｔ３６５−（
５６７（［１８！＋）２９、８ｅｇｌｉｏｎｉ、　Ｃ，
、ｔ４ｃｃａｎｄｌｅｓｓ、　Ｓ、、　−ｒａＶＯｒｎ
！Ｏｒ。

Ｊ、　　＆　１ｉａｒｓ、　　ｗ、　　Ｊ、　　Ｂｉｏ
ｌ、　　Ｃｈ（！１．　２６０１３３９！＋上３３４）
７（１９８５）。

３０、　　ｌ５ｒａｅｌ、Ｓ、、１ｌａｂｎ、　　ｒ　
　、１ｌｏｌｒｉａｎｎ、ＩＬ、＆１４ａＩＬａｃｈ、
　　Ｄ、　　ｌａｉｍｕｎｏｌ、　　１ｅｔｔｅｒ、　
　１２　２１７−２２７（１９８Ｇ） ３１、　　Ｄｏｗｅｒ、Ｓ、、に、　　Ｑｔ　ａｔ、　
　Ｊ、　　ｌＸｐ、　　Ｈａｄ、　　胆ム５０１−５１
！１（１９Ｂ！ｉ）。

３２、　Ｈａｔｓｕｓｈｉｍａ、に、、＾ｋａｈｏｓｈ
ｉ、　Ｔ、、　Ｙａｍａｒｌａ。

Ｈ，、ｒｕｒｕｔａｎｉ、　　Ｙ、　　＆　Ｏｐｐｃｎ
ｈｃｉｍ、　　Ｊ、、１．　　Ｉ（！（ＩＢｏｃ、　　
Ｆｅｄ、　　八１．　５（Ｉｃ、　　［Ｘ、　　Ｂｉｏ
ｌ、　　仙、６２０（＾ｂｓｔｒ、２７０８）　　（１
９８Ｂ）。

３３、　１ｓｕｊｉａ＋ｏｔｏ、　　Ｈ，、Ｙｉｐ、　
　Ｙ、に、　　＆　Ｖｉｌｖｃａｋ、　　Ｊ、Ｊ。

Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３Ｇ　　、２４４１−２４４４（１
９８Ｂ）。

３４．１１ｕｇｇｉｃｒｏ、Ｖ、、Ｔａｖｅｒｎｉｅｒ
、　　　Ｊ、、ｔｉｅｒｓ、　　Ｉｄ＆　Ｂａｇｌｉｏ
ｎｉ、　　Ｃ，Ｊ、　　［＋ｕｕｎｏ１　１３６，２４
４５−２４５０（１９８Ｇ）。

３！１．Ｒａ１ａｔｌ（ｌｒｆ、Ｇ、、５ｉｐｅ、Ｊ、
Ｄ、、ＤｌｎａｒｏＩＬＯ。

Ｃ，Ａ、、　　Ｈｉｚｃｌ、Ｓ、Ｂ、　　＆　Ｃｏｔｔ
ｏｎ　　、　　ＩＬ、　　ｔｔ、　　Ｊ、　　Ｅｘｐ、
　　　Ｗｅｄ、　　１６２，９３０−９４２（１９８！
ｌ）。

３６、Ｈａｙ、　　％Ｊ、Ｓ、、ＪａＣＯ１）Ｓ、Ｓ、
＆　　ｃｕａｔｒｅｃａｓａｓ　　、Ｐ。

ｐｒｏｃ、ｎａｔｎ、　　＾ｃａｄ、Ｓｃｉ、１１．ｓ
、Ａ、８１，２０１Ｇ−２０２０（１９８４）。

３７　にｅＩＬｓｌ＋ｅｒ、　　Ｄ、　　Ｊ、、Ｐｅ５
ｓｉｎ、　　Ｊ、　　Ｅ、　　Ｒｕｏｈｏ、　　八、［
。

＆　　Ｊｏｈｎｓｏｎ、ｃ、ｔ、、ｐｒｏｃ、ｎａｔｎ
、　　＾ｃａｄ、ｓｃｉ、ｌＪ、ｓ。

Ａ、８１，４３１６−４３２０（１９８４）。

３Ｂ、　　１ｗａｓｈｉｔａ、Ｓ、＆　　１ｒｅｄ、　
　Ｆｏｘ、Ｃ，Ｊ　　、Ｂｉｏｌ。

ｃｈｅｎ＋、２５９．２５！１９−２５６１（１９Ｇ４
）３９、Ｃｏｃｈｅｔ、Ｃ，、Ｇ１１ｌ、Ｇ、Ｎ、、Ｈ
ａｉｓｃｎｌ＋ｅｌｄａｒ。

Ｊ、、　　Ｃｏｏｐｅｒ、　　Ｊ、八、　　＆　　１ｌ
ｕｎｔｃｒ、　　１．　　Ｊ、　　Ｂｉｏｌ。

ＣｈＯｌ、　　２ｂ９．　２５５３−２ｂ５Ｂ口９８４
）。

４０、　　ロａｖｉｓ、　　Ｒ，Ｊ、　　＆　　Ｃｚｃ
ｃｔ＋、　Ｈ，Ｐ、　　Ｊ、　　　ＢｉｏｌＣｈｕｍ、
２５９，８５４！＞−８５４９（１９８４）４１、　　
Ｔａｋａｖａｍａ、　　Ｓ、　、１４１＋目ｅ、　　Ｈ
，Ｆ、、　　Ｉａｕｒｉｓ、　　ν　＆にａｈｎ、Ｒ，
Ｃ，Ｐｒｏｃ、ｎａｔｎ、　　＾Ｃ７１１１，Ｓｃｉ、
　　ｕ、ｓ、八　　　８１１．ニー　７７９７　−７８
０１（１９＋１４）。

４２、　　ｌｃｃｂ上ｕｎｄｌ）ｃｒｇ、　　１．Ｈ，
Ｆ、ｅｔ　　ａｔ、　　Ｐｒｏｃ。

ＩＩ　ａ　ｔ　ｎ　、　　＾ｃａｄ、　　Ｓｃｉ、　　
Ｕ、Ｓ、＾、　　８２．　５Ｇ５１−５６５５（１り８
！１） ４３、　１ｌａｌ＋ｎ、　　ｒ、　　ａｔ　ａｔ、　　
Ｐｒｏｃ、　　ｎａＬｎ、　　＾ｃａｄ、　　Ｓｃｉ。

Ｕ、Ｓ、＾、　　８２．　３８１４−３８１８（１９８
５）　　。

４４、　０ｒＣＩＬａＩＬＳｋＶ、　　Ｐ、、　　Ｒｕ
Ｌｌ！ｎ５ＩＯｉｎ、　　Ｈ，＆　　Ｉ’１ＳＣｔｌＯ
ｒ。

Ｄ、Ｇ、　　Ｊ、　　［ｌ１ｌＩＩＬＪｎ０１．　１３
６、　　１６９上７：１（１９８Ｇ）。

４り、　　Ｉｏｄａｒｏ、　　Ｊ、Ｇ、、　　Ｇｒｅｅ
ｎ、　　Ｉｌ、　　＆　５ｗ１ｒｌ、　　Ｈ，Ｒ１５ｃ
ｉｅｎｃｅ　田３．１２５２上２５４０’Ｊ６（ｉ）。

４Ｇ、　　ＧＯｙ、　　Ｇ、０．、　　Ｃｏｒｆｍａｎ
、　　Ｗ、Ｄ、　　＆　　にｕｂｉｃｅｋ、　　Ｈ，Ｔ
。

Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｃｓ、、　　１２．　２６４−２６５
（Ｈ）５２）。

４７、Ｓｕｎｄｓｔｒｏｍ　Ｃ，＆　Ｎｉ１ｓｓｏｎ、
　　に、　　Ｉｎｔ、　　Ｊ。

ｃａｎｃｅｒ　１７．　５６５−ｂ７７（１９７６）。

４１１、　八ｄｃｒｋａ、　　［）、＋　　Ｉｌ、　　
ＩＬ０１ｔＩＬａｒｌｎ、　　１．　　Ｔａｋｅｒ、　
　Ｉ。

１１ａｉ＋ｎ　ａｎｄ　Ｄ、　　ＷａＩＬａｃｈ、　　
Ｊ、　　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　１３０．　２９３８−２
　９４２（１！３８Ｇ）。

４９、　　Ｈａｔｓｕｓｈｉｇ＋ａ、　　に、、　Ｓ、
に、　　Ｄｕｒｕ（［、Ｓ、ＫｉｍｂａＩＬ、１ｎｄ　
Ｊ、Ｊ、　　ＯｐｐＯｎｈｃｉｍ、　　Ｃｅ１１．　　
Ｉｍｍｕｎｏｌ　　、９２．　２９０（１９８４）。

５０、　　ＷａＩＬａｃｈ、　　ロ、、　　Ｊ、　　Ｉ
ｎ＋ｍｕｎｏ１　１：ｉ２：２４６４（１９８４）。

【図面の簡単な説明】

第１図は、Ｉ　Ｎ　）−の細胞−ｈｖｌに細胞を脱感性
する白血球産生シト上−ンとしての！Ｌ上の同定をを六
がものである。 第２図ｔよ、ＩＬ〜１の防御活性とｐ１１２処理シ１〜
キンをＩ　Ｌ　上抗血清で中和した防１２ａ話性を検６
・ｔＪることにＪ、すｌ　Ｎ　Ｆの細胞７：ｊ　ｆｌを
脱感性する白血球産生シトギンとしてのＩＬ上の同定を
示す。 第３図は、ヒト５Ｖ−８０、ヒーラ−細胞、１−＝１３
２ならびにマウスＬ　−９２９細胞系のγ−Ｔ’　Ｎ　
「およびｌ［〜１の防ｔｉＩＬ活ｔｌの比較である。 第４図は、ＴＮＦおよびｌ　Ｌ上によるＴ　Ｎ　Ｆの１
１１胞市ｆ１への抵抗誘導の反応速度を示している。 第５図は、ＩＬ　　１１Ｃｋ応しｒＳＶ　　８０ｙａ胞
へのＴＮＦの結合性の減少、およびＩＦＮ−ガンマ−に
反応して結合性の増加の反応速瓜を示している、。 第６図は、ＩＬ上処理オＪ、び非処１！Ｉ！ｓ　ｖ　−
ａＯ１１１１胞への成用ｔ’ｌ標識ＩＮＦの結合性を示
している。 第７図は、種々の細胞へのＴ　Ｎ　Ｆ’　＄２．合竹転
打１）るｌ　Ｌ　上誘発減少の投与４曲線である。 第Ｅ３図は、］°Ｎ１−の結合性と前処理した細胞から
！し上を除去した後のｍ胞溶解への感受性を示している
。 第９図（ま、代謝ブＥ］ツカ−・シク□ヘキシイミド（
ＣＩＬ　Ｉ　＞　（７）？？ｆＦ下（７）　Ｉ　Ｌ　上
ｋ：ｊ；ルＴＮ　ＦＩＬＩＬ胞山竹の増強を示しくいる
。 第１０図は、ｌ’ＮＦおよびｌ　ｌ−上ｋ二役応じてマ
ウスの脱感作作用を承り。 第１１図番、Ｌ１マウスにお１ノる上−　Ｎ　ＦとＩ　
＋−−、１へ反応しての均−および不拘−説感作を承し
ている。 第１２図は、ＴＮＦに反応しての脱感作反応速度を示し
ている。 第１３図１１、［３ＣＧで感性したマウスにバク７゛す
７・エンドトキシン（ＬＰＳ）の致死効果にス・１し、
致死吊以Ｆを注射した時のＴ　Ｎ　Ｆ　およびＩＬ上の
防御効果を示す。

Claims (69)

【特許請求の範囲】
1. （１）、ＴＮＦ、ＴＮＦ様ペプチドまたはその誘導体、
   および（または）ＩＬ−１、ＩＬ−１様ペプチドまたは
   その誘導体の哺乳動物における有害な作用を調節する方
   法、および上述の哺乳動物にＴＮＦ、ＴＮＦ様ペプチド
   またはその誘導体および（または）ＩＬ−１、ＩＬ−１
   様ペプチドまたはその誘導体の弱毒化した量を投与する
   ことを包含する方法。
2. （２）、調節されるＴＮＦおよび（または）ＩＬ−１が
   内因性のものである（生体由来のもの）、特許請求の範
   囲第１項記載の方法。
3. （３）、調節されたＴＮＦ、ＴＮＦ様ペプチドまたはそ
   の誘導体、および（または）ＩＬ−１、ＩＬ−１様ペプ
   チドまたはその誘導体が外因性のものである特許請求の
   範囲囲第１項記載の方法。
4. （４）、ＴＮＦ、ＴＮＦ様ペプチドまたはその誘導体、
   および（または）ＩＬ−１、ＩＬ−１様ペプチドまたは
   その誘導体の治療上は有効であるがきわめて有害な量を
   投与するに先だち、ＴＮＦ、ＴＮＦ様ペプチドまたはそ
   の誘導体、および（または）ＩＬ−１、ＩＬ−１様ペプ
   チドまたはその誘導体、および（または）ＩＬ−１、Ｉ
   Ｌ−１様ペプチドまたはその誘導体の哺乳動物に弱毒化
   した量の投与を包含する特許請求の範囲第１項〜第３項
   のいずれか１項記載の方法。
5. （５）、ＴＮＦが天然由来のＴＮＦである特許請求の範
   囲第１項記載の方法。
6. （６）、ＴＮＦが組み換え型ＴＮＦである特許請求の範
   囲第１項記載の方法。
7. （７）、ＴＮＦがアルフア−ＴＮＦである特許請求の範
   囲第１項記載の方法。
8. （８）、ＴＮＦがベーター−ＴＮＦである特許請求の範
   囲第１項記載の方法。
9. （９）、ＩＬ−１が天然型ＩＬ−１である特許請求の範
   囲第１項記載の方法。
10. （１０）、ＩＬ−２が組み換え型ＩＬ−１である特許請
    求の範囲第１項記載の方法。
11. （１１）、ＴＮＦ、ＴＮＦ様ペプチドまたはその誘導体
    の哺乳動物に弱毒化された量を投与することを包含する
    特許請求の範囲第１項〜第４項のいずれか１項記載の方
    法。
12. （１２）、ＩＬ−１、ＩＬ−１様ペプチドまたはその誘
    導体の哺乳動物に弱毒化された量を投与することを包含
    する特許請求の範囲第１項〜第４項のいずれか１項記載
    の方法。
13. （１３）、ＴＮＦ、ＴＮＦ様ペプチドまたはその誘導体
    の、哺乳動物に弱毒化された量をＩＬ−１、ＩＬ−１様
    ペプチドまたはその誘導体と一緒に投与することを包含
    する特許請求の範囲第１項〜第４項のいずれか１項記載
    の方法。
14. （１４）、治療上は有効であるがきわめて有害な活性物
    質がＴＮＦ、ＴＮＦ様ペプチドまたはその誘導体である
    特許請求の範囲第４項記載の方法。
15. （１５）、治療上は有効であるがきわめて有害な活性物
    質がＩＬ−１、ＩＬ−１様ペプチドまたはその誘導体で
    ある特許請求の範囲第４項記載の方法。
16. （１６）、治療上は有効であるがきわめて有害な活性物
    質がＴＮＦ、ＴＮＦ様ペプチドまたはその誘導体であり
    、ＩＬ−１、ＩＬ−１様ペプチドまたはその誘導体が一
    緒である特許請求の範囲第４項記載の方法。
17. （１７）、哺乳動物に弱毒化した量のＴＮＦを投与する
    ことを包含する特許請求の範囲第１項〜第１１項のいず
    れか１項記載の方法。
18. （１８）、哺乳動物に弱毒化した量のＩＬ−１を投与す
    ることを包含する特許請求の範囲第１項〜第１２項記載
    の方法。
19. （１９）、哺乳動物に弱毒化した量のＴＮＦをＩＬ−１
    と一緒に投与することを包含する特許請求の範囲第１項
    〜第１３項のいずれか１項記載の方法。
20. （２０）、治療上は有効であるがきわめて有毒な活性物
    質がＴＮＦである特許請求の範囲第４項記載の方法。
21. （２１）、治療上は有効であるがきわめて有害な活性物
    質がＩＬ−１である特許請求の範囲第１項記載の方法。
22. （２２）、治療上は有効であるがきわめて有害な活性物
    質がＴＮＦであり、ＩＬ−１が一緒である特許請求の範
    囲第４項記載の方法。
23. （２３）、ＴＮＦ、ＴＮＦ様ペプチドまたはその誘導体
    および（または）ＩＬ−１、ＩＬ−１様ペプチドまたは
    その誘導体の治療上有効な量が感作剤の効果的な量と組
    み合わせて投与する特許請求の範囲第４項記載の方法。
24. （２４）、哺乳動物に効果的な量のインターフエロンを
    投与することをさらに包含する特許請求の範囲第１項〜
    第４項のいずれか１項記載の方法。
25. （２５）、ＴＮＦ、ＴＮＦ様ペプチドまたはその誘導体
    および（または）ＩＬ−１、ＩＬ−１様ペプチドまたは
    その誘導体の非有害量の投与に先だち、インターフエロ
    ンが投与される特許請求の範囲第２４項記載の方法。
26. （２６）、ＴＮＦ、ＴＮＦ様ペプチドまたはその誘導体
    および（または）ＩＬ−１、ＩＬ−１様ペプチドまたは
    その誘導体の非有害量を投与した後、インターフエロン
    を投与する特許請求の範囲第２４項記載の方法。
27. （２７）、ＴＮＦ、ＩＮＦ様ペプチドまたはその誘導体
    および（または）ＩＬ−１、ＩＬ−１様ペプチドまたは
    その誘導体の非有害量をインターフエロンと同時に投与
    する特許請求の範囲第２４項記載の方法。
28. （２８）、感作剤が代謝ブロツカーである特許請求の範
    囲第２３項記載の方法。
29. （２９）、感作剤が化学療法上活性な薬剤である特許請
    求の範囲第２３項記載の方法。
30. （３０）、感作剤がアクチノマイシンＤである特許請求
    の範囲第２３項記載の方法。
31. （３１）、インターフエロンが天然のインターフエロン
    である特許請求の範囲第２４項記載の方法。
32. （３２）、インターフエロンが組み換え型インターフエ
    ロンである特許請求の範囲第２４項記載の方法。
33. （３３）、インターフエロンがアルフアーインターフエ
    ロンである特許請求の範囲第３１項又は第３２項記載の
    方法。
34. （３４）、インターフエロンがベーターインターフエロ
    ンである特許請求の範囲第３１項又は第３２項記載の方
    法。
35. （３５）、インターフエロンがガンマーインターフエロ
    ンである特許請求の範囲第３１項又は第３２項記載の方
    法。
36. （３６）、ＴＮＦ、ＴＮＦ様ペプチドまたはその誘導体
    および（または）ＩＬ−１、ＩＬ−１様ペプチドまたは
    その誘導体、感作剤またはインターフエロンが特異細胞
    を標的としている特許請求の範囲第１項、第３項、第２
    ３項又は第２４項記載の方法。
37. （３７）、ＩＬ−１の弱毒化された量が細胞当りＴＮＦ
    のレセプター数を少くとも８０％に減少させる特許請求
    の範囲第１項又は第１８項記載の方法。
38. （３８）、ＩＬ−１で治療している患者においてＴＮＦ
    の作用を調節することを監視する方法であつて上述の患
    者の細胞サンプル中にはＴＮＦレセプターレベルを含有
    している方法。
39. （３９）、細胞サンプルが末梢血液白血球である特許請
    求の範囲第３８項記載の方法。
40. （４０）、ＴＮＦ、ＴＮＦ様ペプチドまたはその誘導体
    、およびＩＬ−１、ＩＬ−１様ペプチド、またはその誘
    導体、少くとも１種の製剤上認容された賦形剤を一緒に
    含有する組成物。
41. （４１）、ＩＮＦ、ＴＮＦ様ペプチドまたはその誘導体
    、および（または）ＩＬ−１、ＩＬ−１様ペプチドまた
    はその誘導体の効果を調節する特許請求の範囲第４０項
    記載の組成物。
42. （４２）、ＴＮＦ、ＴＮＦ様ペプチドまたはその誘導体
    、および（または）ＩＬ−１、ＩＬ−１様ペプチドまた
    はその誘導体の有害な作用を調節する特許請求の範囲第
    ４１項記載の組成物。
43. （４３）、内因性ＴＮＦおよび（または）内因性ＩＬ−
    １の有害な作用を調節する特許請求の範囲第４２項記載
    の組成物。
44. （４４）、外因性ＴＮＦ、ＴＮＦ様ペプチドまたはその
    誘導体、および（または）外因性ＩＬ−１、ＩＬ−１様
    ペプチドまたはその誘導体の有害な作用を調節する特許
    請求の範囲第４２項記載の組成物。
45. （４５）、ＴＮＦの細胞毒性作用を増強する特許請求の
    範囲第４０項記載の組成物。
46. （４６）、ＩＬ−１の細胞毒性作用を増強する特許請求
    の範囲第４０項記載の組成物。
47. （４７）、哺乳動物に弱毒化された量のＴＮＦ、ＴＮＦ
    様ペプチドまたはその誘導体と治療上は有効であるがき
    わめて有害な量のＩＬ−１、ＩＬ−１様ペプチドまたは
    その誘導体を含有する特許請求の範囲第４０項記載の組
    成物。
48. （４８）、哺乳動物に弱毒化された量のＩＬ−１、ＩＬ
    −１様ペプチドまたはその誘導体と治療上は有効である
    がきわめて有害な量のＴＮＦ、ＴＮＦ様ペプチドまたは
    その誘導体を含有する特許請求の範囲第４０項記載の組
    成物。
49. （４９）、組成物がｉｎ　ｖｉｖｏで調製される特許請
    求の範囲第４６項又は第４７項記載の組成物。
50. （５０）、ＩＬ−１、ＩＬ−１様ペプチドまたはその誘
    導体の投与に先だつて、ＴＮＦ、ＴＮＦ様ペプチドまた
    はその誘導体を投与することにより調製された特許請求
    の範囲第４９項記載の組成物。
51. （５１）、ＴＮＦ、ＴＮＦ様ペプチドまたはその誘導体
    の投与に先立だつて、ＩＬ−１、ＩＬ−１様ペプチドま
    たはその誘導体を投与することにより調製された特許請
    求の範囲第４９項記載の組成物。
52. （５２）、感作剤をさらに含有する特許請求の範囲第４
    ０項記載の組成物。
53. （５３）、インターフエロンをさらに含有する特許請求
    の範囲第４０項記載の組成物。
54. （５４）、感作剤が代謝ブロツカーである特許請求の範
    囲第５２項記載の組成物。
55. （５５）、感作剤が化学療法上活性な薬剤である特許請
    求の範囲第５２項記載の組成物。
56. （５６）、感作剤がアクチノマイシンＤである特許請求
    の範囲第５２項記載の組成物。
57. （５７）、インターフエロンがアルフアー、ベーター、
    ガンマーインターフエロンから選択される特許請求の範
    囲第５３項記載の組成物。
58. （５８）、インターフエロンが天然由来のインターフエ
    ロンである特許請求の範囲第５７項記載の組成物。
59. （５９）、インターフエロンが組み換え型インターフエ
    ロンである特許請求の範囲第５７項記載の組成物。
60. （６０）、哺乳動物に弱毒化された量のＴＮＦと治療上
    は有効であるがきわめて有害な量のＩＬ−１を含有する
    特許請求の範囲第４７項記載の組成物。
61. （６１）、哺乳動物に弱毒化された量のＩＬ−１と治療
    上は有効であるがきわめて有害な量のＴＮＦを含有する
    特許請求の範囲第４８項記載の組成物。
62. （６２）、弱毒化された量のＩＬ−１、ＩＬ−１様ペプ
    チドまたはその誘導体を少くとも一種の製剤上認容され
    た賦形剤を容器の中に一緒に含有し（ａ）、治療上は有
    効であるがきわめて有害な量のＴＮＦ、ＴＮＦ様ペプチ
    ドまたはその誘導体を少くとも一種の製剤上認容された
    賦形剤と容器の中に一緒に含有し（ｂ）、容器（ｂ）の
    内容物の投与に先だつて、容器（ａ）の内容物を患者に
    投与する指示書を含有する特許請求の範囲第４０項記載
    の組成物。
63. （６３）、弱毒化された量のＴＮＦ、ＴＮＦ様ペプチド
    またはその誘導体を少くとも１種の製剤上認容された賦
    形剤を容器の中に一緒に含有し（ａ）、治療上は有効で
    あるがきわめて有害な量のＩＬ−１、ＩＬ−１様ペプチ
    ドまたはその誘導体を少くとも１種の製剤上認容された
    賦形剤と容器の中に一緒に含有し（ｂ）、容器（ｂ）の
    内容物投与に先だつて、容器（ａ）の内容物を患者に投
    与する指示書を含有する特許請求の範囲第４０項記載の
    組成物。
64. （６４）弱毒化した量のＩＬ−１、ＩＬ−１様ペプチド
    またはその誘導体を少くとも１種の製剤上認容された賦
    形剤と容器の中に一緒に含有し（ａ）、治療上は有効で
    あるがきわめて有害な量のＴＮＦ、ＴＮＦ様ペプチドま
    たはその誘導体およびＩＬ−１、ＩＬ−１様ペプチドま
    たはその誘導体を少くとも１種の製剤上認容された賦形
    剤と容器の中に一緒に含有し（ｂ）、容器（ｂ）の内容
    物投与に先だつて容器（ａ）の内容物を患者に投与する
    指示書を含有する特許請求の範囲第４０項記載の組成物
    。
65. （６５）、弱毒化した量のＴＮＦ、ＴＮＦ様ペプチドま
    たはその誘導体を少くとも１種の製剤上認容された賦形
    剤と容器の中に一緒に含有し（ａ）、治療上は有効であ
    るがきわめて有害な量のＩＬ−１、ＩＬ−１様ペプチド
    またはその誘導体およびＴＮＦ、ＴＮＦ様ペプチドまた
    はその誘導体を少くとも１種の製剤上認容された賦形剤
    と容器の中に一緒に含有し（ｂ）、容器（ｂ）の内容物
    投与に先だつて容器（ａ）の内容物を患者に投与する指
    示書を含有する特許請求の範囲第４０項記載の組成物。
66. （６６）、容器（ａ）または容器（ｂ）の内容物を投与
    前、同時または後に容器（ｃ）の内容物を投与するため
    の指示書を添付したインターフエロンを含有する容器（
    ｃ）をさらに含有する特許請求の範囲第６２項〜第６５
    項のいずれか１項記載の組成物。
67. （６７）容器（ａ）または容器（ｂ）の内容物を投与す
    る前、同時または後に容器（ｃ）の内容物を投与するた
    めの指示書を添付した感作剤を含有する容器（ｃ）をさ
    らに含有する特許請求の範囲第６２項〜第６５項のいず
    れか１項記載の組成物。
68. （６８）、感作剤が代謝ブロツカーである特許請求の範
    囲第６２項〜第６５項のいずれか１項記載の組成物。
69. （６９）感作剤がアクチノマイシン−Ｄである特許請求
    の範囲第６７項記載の組成物。