JPS6317838A - 新規な有機フツ素化合物及びそれらの製造のための生化学法 - Google Patents
新規な有機フツ素化合物及びそれらの製造のための生化学法Info
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- JPS6317838A JPS6317838A JP62167984A JP16798487A JPS6317838A JP S6317838 A JPS6317838 A JP S6317838A JP 62167984 A JP62167984 A JP 62167984A JP 16798487 A JP16798487 A JP 16798487A JP S6317838 A JPS6317838 A JP S6317838A
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/566—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using specific carrier or receptor proteins as ligand binding reagents where possible specific carrier or receptor proteins are classified with their target compounds
- G01N33/567—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using specific carrier or receptor proteins as ligand binding reagents where possible specific carrier or receptor proteins are classified with their target compounds utilising isolate of tissue or organ as binding agent
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、成る新規なＭ機フッ素化合物及び生化学法に
よるそれらの製造に関する。
よるそれらの製造に関する。
デフランク（Ｄｅｆｒａｎｋ）及びリボンズ（Ｒｉｂｂ
ｏｎｓ）は、微生物シュードモナス・プチダ（Ｐｓｓｕ
ｄｏｍｏｎａｓｐｕｔｉｄａ）の成る株におけるｐ−シ
メン経路を研究中、シュードモナス中グテダの成るブロ
ック突然変異体用の基實としての弘−トリフルオロメチ
ル安息香酸を模型化合物として用いた（「バイオケム・
アンド・パイオフィス参レス・コム（Ｂｉｏｃｈｅｍ、
＆Ｂｉｏｐｈｙａ、 Ｒ＠ｓ、Ｃｏｍｍ、 ）ｔ７０
ｅ ４’ ＃ ／り７６゜第１／、２７〜／１３ｊ頁
」）。彼等は、は江別水分解を容易に受けて３−ヒドロ
キシ−≠−トリフルオロメチル安息：ｆ酸を生ずるとこ
ろのツエンジオールの蓄積についての形跡を分光番に二
って絡めた。彼等は主として、ｐ−クメートヲ経るｐ−
シス／の代謝を解明することに興味があった。
ｏｎｓ）は、微生物シュードモナス・プチダ（Ｐｓｓｕ
ｄｏｍｏｎａｓｐｕｔｉｄａ）の成る株におけるｐ−シ
メン経路を研究中、シュードモナス中グテダの成るブロ
ック突然変異体用の基實としての弘−トリフルオロメチ
ル安息香酸を模型化合物として用いた（「バイオケム・
アンド・パイオフィス参レス・コム（Ｂｉｏｃｈｅｍ、
＆Ｂｉｏｐｈｙａ、 Ｒ＠ｓ、Ｃｏｍｍ、 ）ｔ７０
ｅ ４’ ＃ ／り７６゜第１／、２７〜／１３ｊ頁
」）。彼等は、は江別水分解を容易に受けて３−ヒドロ
キシ−≠−トリフルオロメチル安息：ｆ酸を生ずるとこ
ろのツエンジオールの蓄積についての形跡を分光番に二
って絡めた。彼等は主として、ｐ−クメートヲ経るｐ−
シス／の代謝を解明することに興味があった。
更に、ベンゼン及び成るｔｉＩＬ侠ベンゼンを代謝して
それらの対応するカテコール及び更なる分解生成物にす
る、という仮生物シュードモナス・プチダの能力は、ギ
プンン（Ｇｉｂｓｏｎ）等の研充から知られている（「
バイオケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ） ｅ
７（７）、／７６ｇ、第２６ｊ３頁」及び「バイオケミ
ストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、り（７）、／
Ｐ７０゜第１６３１頁」）。かくして、咳代団は次の雰
糸接触反応順序に従う、と１百しられる：（１）
（Ｉｆ） ＜ｍ）この代謝経路に
よると、ベンゼン（１：Ｒ＝Ｈ）はジオキシゲナーゼに
よってシスー／、２−ジヒドロキシシクロヘキサ−Ｊ、
ｊ−ジエン（Ｉｔ：Ｒ＝Ｈ）（「シス−ベンゼングリコ
ール」又ｒｚｒベンゼンジヒドロジオール」としても知
られている。）に変換され、このものはジオールデヒド
ロゲナーゼのび川下でカテコール（Ｉｎ：Ｒ＝Ｈ）に変
換され、そして更なる分解生成物に更に＃集的にＫｋさ
れる。Ｒがメチルである関連経路は、シュードモナス・
プチダを用いるトルエン代謝の場合に起こる、と１どじ
られる（ギプソン（Ｇｉｂｓｏｎ） 等、ｒバイオケミ
ストリー（Ｂｉｏｃｈ＠ｍ１ｓｔｒｙ） ｐり（７）、
／り７０゜第１乙２７頁」）。
それらの対応するカテコール及び更なる分解生成物にす
る、という仮生物シュードモナス・プチダの能力は、ギ
プンン（Ｇｉｂｓｏｎ）等の研充から知られている（「
バイオケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ） ｅ
７（７）、／７６ｇ、第２６ｊ３頁」及び「バイオケミ
ストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、り（７）、／
Ｐ７０゜第１６３１頁」）。かくして、咳代団は次の雰
糸接触反応順序に従う、と１百しられる：（１）
（Ｉｆ） ＜ｍ）この代謝経路に
よると、ベンゼン（１：Ｒ＝Ｈ）はジオキシゲナーゼに
よってシスー／、２−ジヒドロキシシクロヘキサ−Ｊ、
ｊ−ジエン（Ｉｔ：Ｒ＝Ｈ）（「シス−ベンゼングリコ
ール」又ｒｚｒベンゼンジヒドロジオール」としても知
られている。）に変換され、このものはジオールデヒド
ロゲナーゼのび川下でカテコール（Ｉｎ：Ｒ＝Ｈ）に変
換され、そして更なる分解生成物に更に＃集的にＫｋさ
れる。Ｒがメチルである関連経路は、シュードモナス・
プチダを用いるトルエン代謝の場合に起こる、と１どじ
られる（ギプソン（Ｇｉｂｓｏｎ） 等、ｒバイオケミ
ストリー（Ｂｉｏｃｈ＠ｍ１ｓｔｒｙ） ｐり（７）、
／り７０゜第１乙２７頁」）。
式（ｎ）及び（Ｉｌｌ）の化合物は有用な％ＩＩＷ物で
りるが、反応を制御して所望化合物ｔ−純枠な生成物と
して光分な収率で得ることに困難であることがわかって
おり、また、就犬収率の所望ｌｆＥ成物を得よりとして
誘導操作及び突然変異操作の両方が用いられてきた。か
くして、シュードモナス・プチダ０株から式（Ｉｆ）の
化合物を生産する試みに、炭素源としてのベンゼン又は
トルエンを用いる夏洪反応用所賢＃Ｘを肪尋する必賢社
に頼ってきた。かくシて、ギブソン（Ｇｉｂｓｏｎ）等
はハロケ９ン化ベンゼンｔ−Ｍ化するシュードモナス・
プチダの能力について調ｆを行うときに辰素課としてト
ルエンを用いたものでアシ（「バイオケミストリー（Ｂ
ｉｏｃｈｅｍｉ＠ｔｒｙ） 、 ７ （／ ／ Ｌ ／
り７１．５ｐＪ３７り５頁」）、−万テイラー（Ｔａｙ
ｌｏｒ）Ｕシュードモナス−プチダの突然変異体から式
（ｎ）の化合Ｐ＠を製造する除に所賛＃巣を誘等するた
めに同様にトルエンを用いたのである（欧州特許第００
７１６０６号）。
りるが、反応を制御して所望化合物ｔ−純枠な生成物と
して光分な収率で得ることに困難であることがわかって
おり、また、就犬収率の所望ｌｆＥ成物を得よりとして
誘導操作及び突然変異操作の両方が用いられてきた。か
くして、シュードモナス・プチダ０株から式（Ｉｆ）の
化合物を生産する試みに、炭素源としてのベンゼン又は
トルエンを用いる夏洪反応用所賢＃Ｘを肪尋する必賢社
に頼ってきた。かくシて、ギブソン（Ｇｉｂｓｏｎ）等
はハロケ９ン化ベンゼンｔ−Ｍ化するシュードモナス・
プチダの能力について調ｆを行うときに辰素課としてト
ルエンを用いたものでアシ（「バイオケミストリー（Ｂ
ｉｏｃｈｅｍｉ＠ｔｒｙ） 、 ７ （／ ／ Ｌ ／
り７１．５ｐＪ３７り５頁」）、−万テイラー（Ｔａｙ
ｌｏｒ）Ｕシュードモナス−プチダの突然変異体から式
（ｎ）の化合Ｐ＠を製造する除に所賛＃巣を誘等するた
めに同様にトルエンを用いたのである（欧州特許第００
７１６０６号）。
／７ｒ安＃紫ｔ″誘導する必装注はかかる生化学法の商
業化の成魚から不利でりり、測成なら、誘導の目的のた
めに別の次系ＯＩＡを尋人することな反応混合吻を汚染
し並びに生成化合物の外磁の緑に問題が起こるからでお
る。
業化の成魚から不利でりり、測成なら、誘導の目的のた
めに別の次系ＯＩＡを尋人することな反応混合吻を汚染
し並びに生成化合物の外磁の緑に問題が起こるからでお
る。
フッ素含有の成る１ｍベンゼンがシュードモナス・プチ
ダの成る休によって変換されて勿丁規なジエンシスーノ
オール化合物を生成し、しかも該ジエンシス−ジオール
化合ＶＢ 、カテコール及ヒ更なる分解生成物を形成す
べき更なる反応に遮抗江である、といプことを本発明者
は属くべきことに見出した。
ダの成る休によって変換されて勿丁規なジエンシスーノ
オール化合物を生成し、しかも該ジエンシス−ジオール
化合ＶＢ 、カテコール及ヒ更なる分解生成物を形成す
べき更なる反応に遮抗江である、といプことを本発明者
は属くべきことに見出した。
本発明によれば、式
（式中、Ｘ及びＹの各々は独立的に水系又はフッ系でお
る。） の化合切が提供される。好ましくはＸは水素であり、好
ましくはＹは水素でめる・ （式中、Ｘ及びＹの各々は独立的に水系又はフッ系であ
る。） の化合物から式（ＩＶ）の化付物を製造するための主化
学法において、下記に短められるような野生型のシュー
ドモナス・プチダ倣ｌＥＥ物又はその突然変異体を培養
し、過当な培地中のその培養物に式（Ｖ）の化合物全供
給し、次いで式（ＩＶ）の化合物を回収する、ことｔｈ
倣とする上記生化学法が提供嘔れる。
る。） の化合切が提供される。好ましくはＸは水素であり、好
ましくはＹは水素でめる・ （式中、Ｘ及びＹの各々は独立的に水系又はフッ系であ
る。） の化合物から式（ＩＶ）の化付物を製造するための主化
学法において、下記に短められるような野生型のシュー
ドモナス・プチダ倣ｌＥＥ物又はその突然変異体を培養
し、過当な培地中のその培養物に式（Ｖ）の化合物全供
給し、次いで式（ＩＶ）の化合物を回収する、ことｔｈ
倣とする上記生化学法が提供嘔れる。
上記のシュードモナス・プチダは、スコツトラント、ア
バディーンのザφナショナル−コレクション・オブ・イ
ンダストリアル・バクテリア（ｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌ
Ｃｏ１１＠ｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ
Ｂａｃｌｒｉａ）ｓトリー・リサーチ・ステーション
（Ｔｏｒｒｙ Ｒｅ＋５ｅａｒｃｈＳｔａｔｉｏｎ）に
１９ｇ５年／２月６日から有効に寄託されかつ指定贅号
ＮＣＩＢ／２／りＱが付与嘔れているものでアク、不明
ｍｖにおいて「シュードモナス・プチダＮＣＩＢ１２１
９０」といり。シュードモナス・プチダＮＣＩＢ／２／
９０及びその突然変異体は本出願人の係属出厳（本出願
人の参照符号に１０３３）に記載てれ、特許捕求石れて
いる。シュードモナス・プチダＮＣＩＢ／、２／りＯ及
びその成る突然変異体に、本方法に必要なジオキシゲナ
ーゼを溝底する。
バディーンのザφナショナル−コレクション・オブ・イ
ンダストリアル・バクテリア（ｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌ
Ｃｏ１１＠ｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ
Ｂａｃｌｒｉａ）ｓトリー・リサーチ・ステーション
（Ｔｏｒｒｙ Ｒｅ＋５ｅａｒｃｈＳｔａｔｉｏｎ）に
１９ｇ５年／２月６日から有効に寄託されかつ指定贅号
ＮＣＩＢ／２／りＱが付与嘔れているものでアク、不明
ｍｖにおいて「シュードモナス・プチダＮＣＩＢ１２１
９０」といり。シュードモナス・プチダＮＣＩＢ／２／
９０及びその突然変異体は本出願人の係属出厳（本出願
人の参照符号に１０３３）に記載てれ、特許捕求石れて
いる。シュードモナス・プチダＮＣＩＢ／、２／りＯ及
びその成る突然変異体に、本方法に必要なジオキシゲナ
ーゼを溝底する。
シュードモナス・プチダＮＣＩＢ１２１９０は、ロッテ
ルダム、パーニスのシェル・リファイナリ（Ｓｂ＋ｅｌ
ｌ Ｒｅｆｉｎｆｓｒｙ）内の地面から採取された土−
試料から単離嘔れた。
ルダム、パーニスのシェル・リファイナリ（Ｓｂ＋ｅｌ
ｌ Ｒｅｆｉｎｆｓｒｙ）内の地面から採取された土−
試料から単離嘔れた。
適当な突然変異体は、化学的突然変異誘発操作を用いて
（ガえは、Ｎ−メチル−シーニトロ−Ｎ−ニトロソグア
ニジン（以後、ｒ ＮＴＧ Ｊという。）を用いて）あ
るいは物理的突然に異ｄ発操作を用いて（紫外線照射を
用いて）得られるものでるる。
（ガえは、Ｎ−メチル−シーニトロ−Ｎ−ニトロソグア
ニジン（以後、ｒ ＮＴＧ Ｊという。）を用いて）あ
るいは物理的突然に異ｄ発操作を用いて（紫外線照射を
用いて）得られるものでるる。
シュードモナス・プチダ又はその突然変異体の培養は、
いかなる適当な炭素源の存在下で最初に生育されてもよ
い、しかしながら、好ｌしい炭素源はコハク酸であシ、
適当にはコノ１り酸二ナトリウムの如き塩の形態にある
ものでるる。他の同禄なしかし比較的安価な炭素源は、
クエン酸及びフマル酸から肪導されたもの洞えはクエン
酸三ナトリウム及びフマル酸二ナトリウムである。
いかなる適当な炭素源の存在下で最初に生育されてもよ
い、しかしながら、好ｌしい炭素源はコハク酸であシ、
適当にはコノ１り酸二ナトリウムの如き塩の形態にある
ものでるる。他の同禄なしかし比較的安価な炭素源は、
クエン酸及びフマル酸から肪導されたもの洞えはクエン
酸三ナトリウム及びフマル酸二ナトリウムである。
別の好ましい炭素源は糖蜜でおシ、゛ラム混合酒楯密（
ｂｌａｃｋ ５ｔｒａｐ ｍｏｌａｓｓｅｓ）”として
市販ちれているサトウキビ糖蜜の形態及びテンサイ抛密
の形態のいずれでもよい。
ｂｌａｃｋ ５ｔｒａｐ ｍｏｌａｓｓｅｓ）”として
市販ちれているサトウキビ糖蜜の形態及びテンサイ抛密
の形態のいずれでもよい。
使用培地は、式（Ｆ／）の化合物の収率を最適にするよ
う選択される。しかしながら、培地に好ｌしくに、初期
の炭素源用の上述したコハク酸、クエン酸又はフマル酸
の塩あるいは糖蜜を言む。
う選択される。しかしながら、培地に好ｌしくに、初期
の炭素源用の上述したコハク酸、クエン酸又はフマル酸
の塩あるいは糖蜜を言む。
生成化合物は得られた発酵肉汁から過当な手段によって
回収され得、例えば粒状木炭上に吸溜させた恢適当な浴
媒を用いてストリッピングに’６い、そして生成物の使
用目的に依シ必安に応じて更に精製することにニジ回収
され得る。別の回収手段には、婚媒抽出がある。
回収され得、例えば粒状木炭上に吸溜させた恢適当な浴
媒を用いてストリッピングに’６い、そして生成物の使
用目的に依シ必安に応じて更に精製することにニジ回収
され得る。別の回収手段には、婚媒抽出がある。
シュードモナス・プチダ倣生物がベンゼン又はトルエン
でもって生存しかつムコン殴及び史なる分解生成物への
完全な代謝経路を触媒し得ることを示しているギプンン
（Ｇｌｂａｏｎ）等及び他の研死者による上記の研究に
かんがみて、式（Ｖ）の化合物が、シュードモナス・プ
チダの休出の基員として用いられる場合生成物として式
（■）の化Ｂ物のみ生じる、といり発見は特に禽くべき
ことである。
でもって生存しかつムコン殴及び史なる分解生成物への
完全な代謝経路を触媒し得ることを示しているギプンン
（Ｇｌｂａｏｎ）等及び他の研死者による上記の研究に
かんがみて、式（Ｖ）の化合物が、シュードモナス・プ
チダの休出の基員として用いられる場合生成物として式
（■）の化Ｂ物のみ生じる、といり発見は特に禽くべき
ことである。
かくして、式（ＩＶ）の化合Ｖは、上記の全体的反応ｊ
貝序における仮胱工８（ｎから■へ）を肛鍼するのに心
細なＵ＝であるシュードモナス・プチダのジオールデヒ
ドロダナーゼ用の基質としてｆｊ用し得ないと認められ
る。Ｘがフッ素でおる化合物α）及び（Ｖ）の場合のこ
の選択性に特に鳥くべきことであり、何故なら、ｐ−ク
ロロ−ペンシトリフルオライドはＪ反応用の適白な蚤負
ではなく、対応するジオールへの実質的ＫＭが認められ
なかったからである。
貝序における仮胱工８（ｎから■へ）を肛鍼するのに心
細なＵ＝であるシュードモナス・プチダのジオールデヒ
ドロダナーゼ用の基質としてｆｊ用し得ないと認められ
る。Ｘがフッ素でおる化合物α）及び（Ｖ）の場合のこ
の選択性に特に鳥くべきことであり、何故なら、ｐ−ク
ロロ−ペンシトリフルオライドはＪ反応用の適白な蚤負
ではなく、対応するジオールへの実質的ＫＭが認められ
なかったからである。
式（ＩＶ）の化合物は、レリえはポリマー、医薬品及び
有慨フッ素農薬品の分野Ｖこおける価辿める耕炊中同体
である。トリフルオロメチル置快基の存在はしばしば、
特に集体ある生切学的注負を萎する。
有慨フッ素農薬品の分野Ｖこおける価辿める耕炊中同体
である。トリフルオロメチル置快基の存在はしばしば、
特に集体ある生切学的注負を萎する。
かくして、列えはシスー／、２−ゾヒドロキシー３−ト
リフルオロメチルシクロヘキサ−３Ｊ−ジエン（ｒｖ：
ｘ冨Ｈ、Ｙ＝Ｈ）は、広範なトリフルオロメチル芳香涙
、脂肋挾及び脂環式の化合物に化学的に変快δれ得る。
リフルオロメチルシクロヘキサ−３Ｊ−ジエン（ｒｖ：
ｘ冨Ｈ、Ｙ＝Ｈ）は、広範なトリフルオロメチル芳香涙
、脂肋挾及び脂環式の化合物に化学的に変快δれ得る。
レリとして、〇−及びｍ−トリフルオロメチルフェノー
ル（両刀とも価＋ｍ ｈ◇中間坏でるる。）への脱水が
早り゛られる。かくして、ｏ−）リフルオロメチルフェ
ノールは、耐ブロッキング注フィルムを形成するポリマ
ーの製造、成り抗炎症系の製造、並びに侃化亜鉛の泡沫
浮違用組底物におけるフッ化カルシウム降下剤として用
いられ得ル。ｒｎ−）リフルオロメチルフェノールな、
血液中のコレステロール及びトリグリセライドの破波を
下げる成るフェニル酢酸エステルの製造、成る（プチド
及び植物Ｗｉ＆剤の製造、証びに成る可靜注の銅フタロ
シアニン染料の製造に有用である。
ル（両刀とも価＋ｍ ｈ◇中間坏でるる。）への脱水が
早り゛られる。かくして、ｏ−）リフルオロメチルフェ
ノールは、耐ブロッキング注フィルムを形成するポリマ
ーの製造、成り抗炎症系の製造、並びに侃化亜鉛の泡沫
浮違用組底物におけるフッ化カルシウム降下剤として用
いられ得ル。ｒｎ−）リフルオロメチルフェノールな、
血液中のコレステロール及びトリグリセライドの破波を
下げる成るフェニル酢酸エステルの製造、成る（プチド
及び植物Ｗｉ＆剤の製造、証びに成る可靜注の銅フタロ
シアニン染料の製造に有用である。
次の円によシ、本発明を説明する。
シュードモナス・プチダＮＣＩＢ／、２／りＱに、ＮＣ
ＩＢによって次の工うに特徴づけられかつ内矩１れた。
ＩＢによって次の工うに特徴づけられかつ内矩１れた。
特段記鯖がなければ、試験は２Ｊ℃にてなδれ、生Ｍは
ラブ・エム（ＬＡＢ Ｍ）栄養寒天上でなちれた。
ラブ・エム（ＬＡＢ Ｍ）栄養寒天上でなちれた。
細胞形態
コハクは塩寒天上３０℃にて、２≠時間生肯烙せた後、
禾誉内汁と０．７チＷ摩天との混合物に移して乙３０倍
の位相差該倣蜆で奴察すると、細胞は、解法の小さくか
つ短かい桿状薗又は球状−である。
禾誉内汁と０．７チＷ摩天との混合物に移して乙３０倍
の位相差該倣蜆で奴察すると、細胞は、解法の小さくか
つ短かい桿状薗又は球状−である。
グラム陰性
胞子−
壜動注十
≠ｇ待時間ｇＥ、胃友、コロニーは丸く、整斉で（ｒｅ
ｇｕｌａｒ） ｓ全林で（＠ｎｔｉｙ＠）、滑らかで、
不透明で、低凸状で、借入白色で、直径／■未満である
。
ｇｕｌａｒ） ｓ全林で（＠ｎｔｉｙ＠）、滑らかで、
不透明で、低凸状で、借入白色で、直径／■未満である
。
３７℃＋
≠／℃−
カタラーゼ＋
″０−Ｆグルコース１は、ヘイワード（Ｈａｙｗａｒｄ
）及びホゾキス（Ｈｏｄｇｋｉｓｓ）の「ジエイ・ケ９
ン・ミクロパイオル（Ｊ、Ｇｅｎ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏ
ｌ、）＊ ２６ （／ ５’乙／）。
）及びホゾキス（Ｈｏｄｇｋｉｓｓ）の「ジエイ・ケ９
ン・ミクロパイオル（Ｊ、Ｇｅｎ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏ
ｌ、）＊ ２６ （／ ５’乙／）。
７３３〜／≠０」に記載のぼ化−発酵培地に／％Ｗの濾
過Ｒ相隣みＤ−ダルコースが補充されたものを用いて行
われた。管法ｖ：、科に接穂し、そして／≠日間培培養
た。
過Ｒ相隣みＤ−ダルコースが補充されたものを用いて行
われた。管法ｖ：、科に接穂し、そして／≠日間培培養
た。
シュードモナス・プチダＮＣＩＢ／２／９０ば、弘℃の
栄養寒天傾斜体上にあるいは凍結乾燥物として都合工く
貯蔵され得る。
栄養寒天傾斜体上にあるいは凍結乾燥物として都合工く
貯蔵され得る。
列／に記載のシュードモナス・プチダＮＣＩＢ／２／り
０の紫外線呆然ｆ異坏は、運動性が随性でおる以外は、
上述したのと同じ％注七肩していた。
０の紫外線呆然ｆ異坏は、運動性が随性でおる以外は、
上述したのと同じ％注七肩していた。
レリ／ シュードモナス・プチダＮＣＩＢ ／ 、２
／り０の突然変異体を用いる、シスーへニージヒドロ
キシー３−トリフルオロメチルシクロヘキサ−３，ｊ−
ジエンの製造 （、）栄誉木醪液 酵母エキス ３ｇコハク酸二
ナトリウム六水和物 １０１（ＮＨ４）２Ｓ
Ｏ４，２ｇ 金属浴液 １０ゴ、２ ｊ
ｍＭリン酸塩緩衝ｇ、ｆ１７．０ １０００ｔｒｔ
ｉ（ｂ）金為倚液 ＣａＣ１２・−２Ｈ２０／ −２ｊ Ｔｎ９ＭｎＳＯ２
’ ４ＬＨ２０，２ｊ”９ ＺｎＳＯ４・７Ｈ２０、！ｊ”９ 水 ｉ
ｏｏ、１ｉｆｔ（ｃ）ペプトン靜液 Ｍｇ５０・７Ｈ２０，２，１７ バクトベプトン（ディフコ（Ｄｉｆｃｏ）） ０．
．２ｇ水
１０祷（ｄ）シュードモナス・プチダの突然変異
体の単離−７のリンば塩緩賃液中のシュードモナス・プ
チダＮＣＩＢ／２／り０の懸濁液／ＩＩＬｌの７リコー
ト金、栄養素寒天板上に広げた。クロマトクルス紫外線
うンｆ’ｚ用いて、ｊ〜３０分間該寒天板を照射した。
／り０の突然変異体を用いる、シスーへニージヒドロ
キシー３−トリフルオロメチルシクロヘキサ−３，ｊ−
ジエンの製造 （、）栄誉木醪液 酵母エキス ３ｇコハク酸二
ナトリウム六水和物 １０１（ＮＨ４）２Ｓ
Ｏ４，２ｇ 金属浴液 １０ゴ、２ ｊ
ｍＭリン酸塩緩衝ｇ、ｆ１７．０ １０００ｔｒｔ
ｉ（ｂ）金為倚液 ＣａＣ１２・−２Ｈ２０／ −２ｊ Ｔｎ９ＭｎＳＯ２
’ ４ＬＨ２０，２ｊ”９ ＺｎＳＯ４・７Ｈ２０、！ｊ”９ 水 ｉ
ｏｏ、１ｉｆｔ（ｃ）ペプトン靜液 Ｍｇ５０・７Ｈ２０，２，１７ バクトベプトン（ディフコ（Ｄｉｆｃｏ）） ０．
．２ｇ水
１０祷（ｄ）シュードモナス・プチダの突然変異
体の単離−７のリンば塩緩賃液中のシュードモナス・プ
チダＮＣＩＢ／２／り０の懸濁液／ＩＩＬｌの７リコー
ト金、栄養素寒天板上に広げた。クロマトクルス紫外線
うンｆ’ｚ用いて、ｊ〜３０分間該寒天板を照射した。
鈑寒天板を３０℃にて一夜培養し、次いで３０℃のフル
オロベンゼン雰囲気中に東き、更に！≠時間培養した。
オロベンゼン雰囲気中に東き、更に！≠時間培養した。
３１Ｉ−個の生存コロニーを檜表し、そして振とうフラ
スコ芙枳におけるフルオロカテコールの蓄積北方につい
て試験した。フルオロカテコールは、ガスクロマトグラ
フィによシ分析評愉された。比較実績において、突然変
異株は３〜≠時闇で０．６ Ｊ！／ｌ蓄槓し蓄積同じ条
件下で、野生株ＮＣＩＢ／、２１５；）Ｏは０．≠／
＆／ｌ蓄槓蓄積。
スコ芙枳におけるフルオロカテコールの蓄積北方につい
て試験した。フルオロカテコールは、ガスクロマトグラ
フィによシ分析評愉された。比較実績において、突然変
異株は３〜≠時闇で０．６ Ｊ！／ｌ蓄槓し蓄積同じ条
件下で、野生株ＮＣＩＢ／、２１５；）Ｏは０．≠／
＆／ｌ蓄槓蓄積。
ペプトン浴液ｃｏ、／ｍｌ）ｔ２ｓｏｍｉ三角フラスコ
中の栄養菓浴Ｋ （ｊ Ｏｍｔｌ ）に添加し、次いで
、上記の＝うにして羊内山されたシュードモナス・プチ
ダの突然変異体を接種し、ぞして振と９器上３０℃にて
／７時間培貫した。ペンシトリフルオライド（０，／
ｄ ）を鈑フラスコに添刀口し、次いでクラス：１をシ
ールした。３０℃に２ける乙時間の培″４投、シスーへ
コージヒドロキシ−３−） ！Ｊフルオロメチルシクロ
ヘキサー３Ｊ−ツエンのｍＫ（ＧＬＣにより測定）は０
．ざ３９／１Ｖｃ４シており、反応物を凍結に工って急
冷した。その肉汁金塩化ナトリウムで飽和しそしてエー
テルで抽出することにより、生成物を単隠しだ。エーテ
ル抽出物を蒸発して得られた物買金エーテルーインタン
から再結晶して、融点りｊ−９７℃のジエンーノオール
（ＩＶ ：Ｘ＝）１ 、 Ｙ ＝Ｈ）七得た。
中の栄養菓浴Ｋ （ｊ Ｏｍｔｌ ）に添加し、次いで
、上記の＝うにして羊内山されたシュードモナス・プチ
ダの突然変異体を接種し、ぞして振と９器上３０℃にて
／７時間培貫した。ペンシトリフルオライド（０，／
ｄ ）を鈑フラスコに添刀口し、次いでクラス：１をシ
ールした。３０℃に２ける乙時間の培″４投、シスーへ
コージヒドロキシ−３−） ！Ｊフルオロメチルシクロ
ヘキサー３Ｊ−ツエンのｍＫ（ＧＬＣにより測定）は０
．ざ３９／１Ｖｃ４シており、反応物を凍結に工って急
冷した。その肉汁金塩化ナトリウムで飽和しそしてエー
テルで抽出することにより、生成物を単隠しだ。エーテ
ル抽出物を蒸発して得られた物買金エーテルーインタン
から再結晶して、融点りｊ−９７℃のジエンーノオール
（ＩＶ ：Ｘ＝）１ 、 Ｙ ＝Ｈ）七得た。
Ｃ，Ｈ，Ｏ□Ｆ３としての計算ｌ＠Ｃ≠６．７チ、Ｈ３
，５；’％測定値 Ｃ４１−Ａ、Ｉ
ＩＬ％、ＨｔＩＬ、０％円形二色性極大値 （Ｈ２Ｏ，２０’） ４ｇ −、Ｚ、、２（，２ｊ７
ｎｍ）、 ７．Ｐ（，２／６ｎｍ）Ｘ量スペクトル ｒｎ／ｅ ／了（７（Ｍ＋） 索外スペクトル （Ｈ２Ｏ） λｍ＊ｘ２６３ ｎｍ （’４’２／
／ ）’Ｈ−ＮＭＲ ≠３ （７（ｄ、１．ＣＭ（ＯＨ）入＋’、 ｊ ２
（ｄ、ｌ、 ＣＨ（ＯＨ））、乙、 Ｏｊ （ｍ、 ｌ
、 ＝Ｃ）Ｉ−）、衣０り（ＡＢの部分、 ｌ 、＝
ＣＨ，）、６、ｊ ７ （ｍ、ｌ、＝Ｃ旦−） ガニ シュードモナス・プチダＮＣＩＢ１２１９０の用
の基負としてのペンシトリフルオライドとフルオロベン
ゼンの比ｆ ２５０−の三角フラスコ中に入れられた栄養素溶Ｍ（Ｆ
ｉ／に、記載したもの）の二つのアリコートの谷々（！
０ｕｔ）に飼／に記載のベゾトン浴液＜０．１ｍ１）ｋ
添加した。次いで、各フラスコにシュードモナス・プチ
ダＮＣＩＢＩ２／り０を機種し、そして薇とり器上で３
０℃にて７７時ｌ１１１培誉した。
，５；’％測定値 Ｃ４１−Ａ、Ｉ
ＩＬ％、ＨｔＩＬ、０％円形二色性極大値 （Ｈ２Ｏ，２０’） ４ｇ −、Ｚ、、２（，２ｊ７
ｎｍ）、 ７．Ｐ（，２／６ｎｍ）Ｘ量スペクトル ｒｎ／ｅ ／了（７（Ｍ＋） 索外スペクトル （Ｈ２Ｏ） λｍ＊ｘ２６３ ｎｍ （’４’２／
／ ）’Ｈ−ＮＭＲ ≠３ （７（ｄ、１．ＣＭ（ＯＨ）入＋’、 ｊ ２
（ｄ、ｌ、 ＣＨ（ＯＨ））、乙、 Ｏｊ （ｍ、 ｌ
、 ＝Ｃ）Ｉ−）、衣０り（ＡＢの部分、 ｌ 、＝
ＣＨ，）、６、ｊ ７ （ｍ、ｌ、＝Ｃ旦−） ガニ シュードモナス・プチダＮＣＩＢ１２１９０の用
の基負としてのペンシトリフルオライドとフルオロベン
ゼンの比ｆ ２５０−の三角フラスコ中に入れられた栄養素溶Ｍ（Ｆ
ｉ／に、記載したもの）の二つのアリコートの谷々（！
０ｕｔ）に飼／に記載のベゾトン浴液＜０．１ｍ１）ｋ
添加した。次いで、各フラスコにシュードモナス・プチ
ダＮＣＩＢＩ２／り０を機種し、そして薇とり器上で３
０℃にて７７時ｌ１１１培誉した。
フルオロベンゼン（０，／１ＩＬ７り（比較トＬ、−Ｃ
） ＆びペンシトリフルオライド（０，／ＸＬＩＩ）（
本元男に＝る）をそれぞれフラスコＡ及びＢ Ｋ Ｉｓ
加し、次いでこｎらのフラスコを７−ルしそして振とう
器上に３０℃に更に直いた。反ルレの過程上ＧＣＬに↓
つて追跡し、それらの結果を下犯位下す。フラスコ人に
ついて、式（ｎ）（Ｒ＝Ｆ）の化合物（下記において「
ジエン−ジオール」として百反する。）及び式（Ｉｌｌ
）（Ｒ＝Ｆ）の化合物（下ｉａに２いて「カテコール」
としてぎ反する。）の収率を測廻した。フラスコＢにつ
いて、対応するジエンーノオール化合物（式Ｎ：Ｘ＝Ｈ
，Ｙ＝Ｈ）及び対工し、すゐカテコール（式１１［：Ｒ
＝ＣＦ３）の収率を測定した。
） ＆びペンシトリフルオライド（０，／ＸＬＩＩ）（
本元男に＝る）をそれぞれフラスコＡ及びＢ Ｋ Ｉｓ
加し、次いでこｎらのフラスコを７−ルしそして振とう
器上に３０℃に更に直いた。反ルレの過程上ＧＣＬに↓
つて追跡し、それらの結果を下犯位下す。フラスコ人に
ついて、式（ｎ）（Ｒ＝Ｆ）の化合物（下記において「
ジエン−ジオール」として百反する。）及び式（Ｉｌｌ
）（Ｒ＝Ｆ）の化合物（下ｉａに２いて「カテコール」
としてぎ反する。）の収率を測廻した。フラスコＢにつ
いて、対応するジエンーノオール化合物（式Ｎ：Ｘ＝Ｈ
，Ｙ＝Ｈ）及び対工し、すゐカテコール（式１１［：Ｒ
＝ＣＦ３）の収率を測定した。
フラスコＡ
ｔ （ｍｉ ｎ ） ツエン−ジオール（１１：Ｒ
＝Ｆ） カテコール（１：Ｒ＝Ｆ）濃度（Ｉη／ｌ）
濃度＜ｍ９／１１）弘３ ≠／
ｔｌＬに’／２１． ２７
／ｊｊ２６２ ０ ／！
；０≠３６ ０ ６３／ ’ｌ−
５３００ フラスコＢ ｔ （ｍｉ ｎ） ジエン−ジオール（ＩＶ：Ｘ＝
Ｈ） カテ＝ｒ−ル（１１：Ｒ＝ＣＦ５）濃度＜ｎ
Ｌ９／ｌ） ６度（η／ｌ）ｊ弘 ２
／タ ０／３に ３０２
０．２７２ ４Ａ３４Ａ
Ｏ弘！Ｉ−≠ ≠弘弘
Ｏ７弘６ｊ 弘６了 ０
シユードモナス中プチダＮＣＩＢ／２／ｙＯがシスー／
、２−ノヒドロキシー３−フルオロヘキサ−３，ｊ−ジ
エン（ｎ：Ｒ＝Ｆ）ｋ経るフルオロベンゼンの３−フル
オロカテコール（Ｉｍ！：Ｒ＝Ｆ）への変洪を触媒しか
つ逐次反応としてのノエンーノオー〃及びカテコールの
生成及び訛退が認められるのに対し、ペンシトリフルオ
ライドの場合反ＧＥｈｔ１ノオール段階（ＩＶ：Ｘ＝Ｈ
，Ｙ＝Ｈ）にて停止し、対応するカテコール（Ｉｌｌ
： Ｒ；ＣＦ３）は生成しない、ということを上記の結
果は−らかに示している。
＝Ｆ） カテコール（１：Ｒ＝Ｆ）濃度（Ｉη／ｌ）
濃度＜ｍ９／１１）弘３ ≠／
ｔｌＬに’／２１． ２７
／ｊｊ２６２ ０ ／！
；０≠３６ ０ ６３／ ’ｌ−
５３００ フラスコＢ ｔ （ｍｉ ｎ） ジエン−ジオール（ＩＶ：Ｘ＝
Ｈ） カテ＝ｒ−ル（１１：Ｒ＝ＣＦ５）濃度＜ｎ
Ｌ９／ｌ） ６度（η／ｌ）ｊ弘 ２
／タ ０／３に ３０２
０．２７２ ４Ａ３４Ａ
Ｏ弘！Ｉ−≠ ≠弘弘
Ｏ７弘６ｊ 弘６了 ０
シユードモナス中プチダＮＣＩＢ／２／ｙＯがシスー／
、２−ノヒドロキシー３−フルオロヘキサ−３，ｊ−ジ
エン（ｎ：Ｒ＝Ｆ）ｋ経るフルオロベンゼンの３−フル
オロカテコール（Ｉｍ！：Ｒ＝Ｆ）への変洪を触媒しか
つ逐次反応としてのノエンーノオー〃及びカテコールの
生成及び訛退が認められるのに対し、ペンシトリフルオ
ライドの場合反ＧＥｈｔ１ノオール段階（ＩＶ：Ｘ＝Ｈ
，Ｙ＝Ｈ）にて停止し、対応するカテコール（Ｉｌｌ
： Ｒ；ＣＦ３）は生成しない、ということを上記の結
果は−らかに示している。
ガ３ シュードモナス・プチダＮＣＩＢ ／ ２ ／７
０及び種々の炭素１＃Ｌ’に用いる、シスー／、２−ジ
ヒドロキシー３−トリフルオロメチルシクロヘキサ−３
，ｊ−ツエンの装造 栄誉素溶液 酵母エキス ３．０９（Ｎ）ｉ４）
２ＳＯ４，４０１ 金属溶漱 ｌＯゴペプトン浴叡
２ゴ炭業源 下
記の表１参照２ ｊ ｍＭリン醗塩緩＠液（Ｐｉ’ｉ７
） １０１００Ｏペプトンｇｇ：列ｌに用いられた
もの 金Ｓａｔ ：刻ｌに用いられたもの 弐／に示した蚕卵された炭素源１ｃ官有する栄簀素浴液
のアリコー）（ｊ（７，ｄ）にシュードモナス・プチダ
ＮＣＩＢ／２／り０を機種し、そして熾と５器上２ｊＯ
ゴの三角フラスコ中３０℃にて１７時間培養した。ペン
シトリフルオライド（０，１ｍ１）−’ｘ各フラスコＩ
Ｃ添加し、次いで谷フラスコをシールしそして振とり器
上３０℃にて更に培養した。
０及び種々の炭素１＃Ｌ’に用いる、シスー／、２−ジ
ヒドロキシー３−トリフルオロメチルシクロヘキサ−３
，ｊ−ツエンの装造 栄誉素溶液 酵母エキス ３．０９（Ｎ）ｉ４）
２ＳＯ４，４０１ 金属溶漱 ｌＯゴペプトン浴叡
２ゴ炭業源 下
記の表１参照２ ｊ ｍＭリン醗塩緩＠液（Ｐｉ’ｉ７
） １０１００Ｏペプトンｇｇ：列ｌに用いられた
もの 金Ｓａｔ ：刻ｌに用いられたもの 弐／に示した蚕卵された炭素源１ｃ官有する栄簀素浴液
のアリコー）（ｊ（７，ｄ）にシュードモナス・プチダ
ＮＣＩＢ／２／り０を機種し、そして熾と５器上２ｊＯ
ゴの三角フラスコ中３０℃にて１７時間培養した。ペン
シトリフルオライド（０，１ｍ１）−’ｘ各フラスコＩ
Ｃ添加し、次いで谷フラスコをシールしそして振とり器
上３０℃にて更に培養した。
生成物シスームニージヒドロキシ−３−トリフルオロメ
チルシクロヘキ″？ −３，ｊ−ジエン（■：Ｘ＝Ｈ，
Ｙ＝Ｈ）の生ｂＸ、’５− ＧＬＣによシ監視し、それ
らの結果を表１に示す。
チルシクロヘキ″？ −３，ｊ−ジエン（■：Ｘ＝Ｈ，
Ｙ＝Ｈ）の生ｂＸ、’５− ＧＬＣによシ監視し、それ
らの結果を表１に示す。
（以下余白）
細胞の生育がすべての場合に起ったけれども、所望のジ
エン−ジオール生成物の生成は、炭素源としてコハク酸
基、クエン酸１遍又はフマル酸塩を用いる場合に大いに
向上ちれた、ということが留葱逼れる。
エン−ジオール生成物の生成は、炭素源としてコハク酸
基、クエン酸１遍又はフマル酸塩を用いる場合に大いに
向上ちれた、ということが留葱逼れる。
捌弘 シュードモナス・プチダＮＣＩＢ／、２／りＱを
用いる発酵装置におけるシスー／、２−ジヒドロキシー
３−トリフルオロメチルシクロヘキサ−３Ｊ−ツエンの
製造 １０９／ｌのコハク酸二ナトリウム六水和物２１！／ｌ
の（ＮＨ４） ２Ｓ０４ ３ ！ｌ／ｌの酵母エキス゛（ディフコ（Ｄｉｒｃｏ）
）０、≠ｉ／ｌのＭｇＳＯ４・７Ｈ２０ ，２３ｍＭのリン酸カリウム緩衝故中の０．０’１−ｊ
ｌ／ｌのノぐクトペデトン、最終ＰＨ７，０ 発酵装置中の♂！のＹＥＭにシュードモナス・プチダＮ
ＣＩＢ１２１９０の２０時間の振と５培養切（ベンゼン
にて生育した振とプ培養物から得た保存斜面培養９１Ｊ
（ｓｔｏｃｋ ｓｌ龜ｎｔ） ） ｋ接極し、同じ培
地＜５ｏｘｔｔ＞で生育した。その有＠俸を、改厚宋％
物（、Ｐｉｉ７．．２ｏ／ｌｏｏ、ｏｉｓｙｘのＫＰＯ
４緩衝欣甲コハク酸二ナトリウム＜３２０１ ）及び（
ＮＨ４）２ＳＯ４（乙≠９））を弘Ｑ ｍｌ／ｂにて迩
続供柘しなからｊ ００ ｒｐｍかつｓｏｏｍｔ窒気／
ｍｉｎにて２０時間生育させると、Ｌｆ９７１の細胞
乾燥態量に達した・次いで、エアレーション（通気）を
増大して（ｊ ００ ｒｐａ＋ 、 ７ｊ Ｏｍｌ窒気
／ ｍｉｎ ） 、 、２０〜３０−の空気飽和友の酸
素水力にして７時間行った。
用いる発酵装置におけるシスー／、２−ジヒドロキシー
３−トリフルオロメチルシクロヘキサ−３Ｊ−ツエンの
製造 １０９／ｌのコハク酸二ナトリウム六水和物２１！／ｌ
の（ＮＨ４） ２Ｓ０４ ３ ！ｌ／ｌの酵母エキス゛（ディフコ（Ｄｉｒｃｏ）
）０、≠ｉ／ｌのＭｇＳＯ４・７Ｈ２０ ，２３ｍＭのリン酸カリウム緩衝故中の０．０’１−ｊ
ｌ／ｌのノぐクトペデトン、最終ＰＨ７，０ 発酵装置中の♂！のＹＥＭにシュードモナス・プチダＮ
ＣＩＢ１２１９０の２０時間の振と５培養切（ベンゼン
にて生育した振とプ培養物から得た保存斜面培養９１Ｊ
（ｓｔｏｃｋ ｓｌ龜ｎｔ） ） ｋ接極し、同じ培
地＜５ｏｘｔｔ＞で生育した。その有＠俸を、改厚宋％
物（、Ｐｉｉ７．．２ｏ／ｌｏｏ、ｏｉｓｙｘのＫＰＯ
４緩衝欣甲コハク酸二ナトリウム＜３２０１ ）及び（
ＮＨ４）２ＳＯ４（乙≠９））を弘Ｑ ｍｌ／ｂにて迩
続供柘しなからｊ ００ ｒｐｍかつｓｏｏｍｔ窒気／
ｍｉｎにて２０時間生育させると、Ｌｆ９７１の細胞
乾燥態量に達した・次いで、エアレーション（通気）を
増大して（ｊ ００ ｒｐａ＋ 、 ７ｊ Ｏｍｌ窒気
／ ｍｉｎ ） 、 、２０〜３０−の空気飽和友の酸
素水力にして７時間行った。
次いで、ペンシトリフルオライドｉ ＨＰＬＣポンプを
経てｊＱμｌ／ｍ ｉ ｎにて礒加した。これらの条件
を用いると、ＧＬＣＫよって反応混合物中に生成物は検
出ちれなかった。かくして、低度の基質浴屏度と高度の
エアレーションとの組み合わせは、反応が起こるのに光
分渦い徴匿が遅放され得る創に基質を放出ガス中に除去
し枕ける、と結論された。
経てｊＱμｌ／ｍ ｉ ｎにて礒加した。これらの条件
を用いると、ＧＬＣＫよって反応混合物中に生成物は検
出ちれなかった。かくして、低度の基質浴屏度と高度の
エアレーションとの組み合わせは、反応が起こるのに光
分渦い徴匿が遅放され得る創に基質を放出ガス中に除去
し枕ける、と結論された。
この影＃ｔ−減じるとともに適切な酸素張力（〉３０％
）を依然維狩するために、かんはん氷の込反を乙ｊＯｒ
ｐｍに上ける一方、エアレーションを３００成／ｍ ｉ
ｎに減じ丸。ｊｇの基質を、ｊＯμｌ／ｍｉｎの流量
を依然梅持しながらパッチ的に添加した。生成物の生ｇ
は直ちに始まるということがＧＬＣＫ工って認められ、
６０分恢０．３１／ｌｉｃ達した。基實（ｊｇ）の更な
る添７ＪＩ］を２およそ２時間間隔にて行い、しかも連
続的添加（ｊＯμｇ／ｗｉｎ）を維狩した。生成物の碗
度はおおよそ６時閣後／、 ２６ Ｅｌ／ｌに遅し、こ
の時点にてかんはん滅に故障し、拠戚を停止した。生成
物を木炭上に吸盾させ、次いでソックスレー装置（Ｅｔ
２０：Ｍ・ｏａ＝３：／）中でストリッピングを行った
。浴媒を蒸発させるとトリフルオロメチルシクロヘキサ
−３，ｊ−ジエンの水浴成約６０−が得られ、そしてＩ
ｊｌのＮａＣ１ｚｆｊＷ加して結晶化させた。／：弘の
ｇｔ２０：ガソリンから再結晶させると、純粋なトリフ
ルオロメチルシクロヘキサ−３，６−ジエンおお工そ／
２＆＜＝／、に９／ｌ）が得られた。
）を依然維狩するために、かんはん氷の込反を乙ｊＯｒ
ｐｍに上ける一方、エアレーションを３００成／ｍ ｉ
ｎに減じ丸。ｊｇの基質を、ｊＯμｌ／ｍｉｎの流量
を依然梅持しながらパッチ的に添加した。生成物の生ｇ
は直ちに始まるということがＧＬＣＫ工って認められ、
６０分恢０．３１／ｌｉｃ達した。基實（ｊｇ）の更な
る添７ＪＩ］を２およそ２時間間隔にて行い、しかも連
続的添加（ｊＯμｇ／ｗｉｎ）を維狩した。生成物の碗
度はおおよそ６時閣後／、 ２６ Ｅｌ／ｌに遅し、こ
の時点にてかんはん滅に故障し、拠戚を停止した。生成
物を木炭上に吸盾させ、次いでソックスレー装置（Ｅｔ
２０：Ｍ・ｏａ＝３：／）中でストリッピングを行った
。浴媒を蒸発させるとトリフルオロメチルシクロヘキサ
−３，ｊ−ジエンの水浴成約６０−が得られ、そしてＩ
ｊｌのＮａＣ１ｚｆｊＷ加して結晶化させた。／：弘の
ｇｔ２０：ガソリンから再結晶させると、純粋なトリフ
ルオロメチルシクロヘキサ−３，６−ジエンおお工そ／
２＆＜＝／、に９／ｌ）が得られた。
レリ５ シュードモナス・プチダＮＣＩＢ／２／り０を
用いる、シスーへニージヒドロキシー３−トリフルオロ
メチル−６−フルオロシクロヘキサ−ｊｔｊ−ツエン（
■：ｘ＝ｒ、ｙ＝Ｈ）の製造 ？ｂＸとしてｐ−フルオロベンシトリフルオライド（Ｖ
：Ｘ＝Ｆ）及び微生物として野生型のシュードモナス・
プチダＮＣＩＢ１２１９０を用いて、飼／を株）返した
。エーテル佃出物を蒸発ちせると高紹ｉ日性生成物が得
られ、買置分析法にニジシス−／、２−ジヒドロキシ−
３−トリフルオロメチル−６−フルオロシクロヘキサ−
３，ｊ−ツエン（ｉＶ：Ｘ＝Ｆ。
用いる、シスーへニージヒドロキシー３−トリフルオロ
メチル−６−フルオロシクロヘキサ−ｊｔｊ−ツエン（
■：ｘ＝ｒ、ｙ＝Ｈ）の製造 ？ｂＸとしてｐ−フルオロベンシトリフルオライド（Ｖ
：Ｘ＝Ｆ）及び微生物として野生型のシュードモナス・
プチダＮＣＩＢ１２１９０を用いて、飼／を株）返した
。エーテル佃出物を蒸発ちせると高紹ｉ日性生成物が得
られ、買置分析法にニジシス−／、２−ジヒドロキシ−
３−トリフルオロメチル−６−フルオロシクロヘキサ−
３，ｊ−ツエン（ｉＶ：Ｘ＝Ｆ。
Ｙ＝Ｈ）と同定された。３！［−分析法の結果ｔ１１１
Ｑ／＠ ＝ ／り♂における栽イオンに対して辰２に示
す・ 表 ！ パーセント するパーセントｔ
ｌＬ７ ≠ｇ ｌｏｉ
ｉｏ。
Ｑ／＠ ＝ ／り♂における栽イオンに対して辰２に示
す・ 表 ！ パーセント するパーセントｔ
ｌＬ７ ≠ｇ ｌｏｉ
ｉｏ。
！；／ ５７ ／３２
≠了６７ Ｊ−０／６２
３７７ｊ ’Ａ３
／ ７了 ２≠♂３
ｇ０ しｌＩ６ シスームーーノヒドロキシー３−トリフ／Ｌ
／オロメチル−４１−−フルオロシクロ、キサーＪ、ｊ
−ジエン（■二Ｘ≧Ｈ，Ｙ＝Ｆ）（Ｎ）１４）２ＳＯ４
（，２ｇ／ｌ ） 、Ｍｇ５０４−７Ｈ，、Ｏ（ＯＡＬ
９／ ｌ）、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２０（０，０４’ｊ！
／ｌ ）、バクトペゾト：、’＜ｏ、ｏｔＡｉ／ｌ ）
及びベンゼン（Ｓ；０６）を含有するｊ Ｑ ｍｌのリ
ン酸カリウム緩両液（，２ｊｍｐ、ｐ”７．０）中で、
野ｔｆａシュードモナス・プチダＮＣＩＢ／’２／りＱ
を主胃石せた。その培養物を、シールしたフラスコ中３
０’Ｃにて振とり器上で／♂時四培培養た。その細胞を
遠心分能に工って果めそして５ｏｒｄｌのリン絃カリウ
ム緩衝液（，２ｊミ！７モル鱗度、−７，（７）中にＮ
ａ濁させた。シールてれる２５０ＩＬ＆のフラスコ中に
この再懸濁された細胞を入れ、エタノール＜ｉｏｏμｇ
＞及びオルトーフルオロペ／ソトリフルオライドＣ，１
００ｍ９）ｔＴＩＡ加した。その混合′１３ＩＪを、３
０°にて振とうさぜながら２１Ｉ−時削ｊ反応さぜた。
≠了６７ Ｊ−０／６２
３７７ｊ ’Ａ３
／ ７了 ２≠♂３
ｇ０ しｌＩ６ シスームーーノヒドロキシー３−トリフ／Ｌ
／オロメチル−４１−−フルオロシクロ、キサーＪ、ｊ
−ジエン（■二Ｘ≧Ｈ，Ｙ＝Ｆ）（Ｎ）１４）２ＳＯ４
（，２ｇ／ｌ ） 、Ｍｇ５０４−７Ｈ，、Ｏ（ＯＡＬ
９／ ｌ）、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２０（０，０４’ｊ！
／ｌ ）、バクトペゾト：、’＜ｏ、ｏｔＡｉ／ｌ ）
及びベンゼン（Ｓ；０６）を含有するｊ Ｑ ｍｌのリ
ン酸カリウム緩両液（，２ｊｍｐ、ｐ”７．０）中で、
野ｔｆａシュードモナス・プチダＮＣＩＢ／’２／りＱ
を主胃石せた。その培養物を、シールしたフラスコ中３
０’Ｃにて振とり器上で／♂時四培培養た。その細胞を
遠心分能に工って果めそして５ｏｒｄｌのリン絃カリウ
ム緩衝液（，２ｊミ！７モル鱗度、−７，（７）中にＮ
ａ濁させた。シールてれる２５０ＩＬ＆のフラスコ中に
この再懸濁された細胞を入れ、エタノール＜ｉｏｏμｇ
＞及びオルトーフルオロペ／ソトリフルオライドＣ，１
００ｍ９）ｔＴＩＡ加した。その混合′１３ＩＪを、３
０°にて振とうさぜながら２１Ｉ−時削ｊ反応さぜた。
遠心分離後、上地ｔエチルアセテートで抽出し、抽出９
ｔＪをＮｓ ２ ＳＯ４上で乾燥させそして蒸発式せた
。その残渣中の主成分μ、買電分析法ムび１Ｈ−帛恨分
析によってシュー／１．２−ジヒドロキシ−４−フルオ
ロ−３，−） ！ｊフルオロメチルシクロヘキサー３．
６−ジエンでるることが示ちれ、そしてば接触脱水反応
に二って≠−フルオロー３−トリフルオロメチルフェノ
ール金生じた。Ｘλスペクトル七茨３に示す。３６０
ＭＨｚでのプロトンＮＭＲスペクトル（ｃｐｃｚＢ中）
はδ１ＡｔＩ−７、ｌＡ、６０ 。
ｔＪをＮｓ ２ ＳＯ４上で乾燥させそして蒸発式せた
。その残渣中の主成分μ、買電分析法ムび１Ｈ−帛恨分
析によってシュー／１．２−ジヒドロキシ−４−フルオ
ロ−３，−） ！ｊフルオロメチルシクロヘキサー３．
６−ジエンでるることが示ちれ、そしてば接触脱水反応
に二って≠−フルオロー３−トリフルオロメチルフェノ
ール金生じた。Ｘλスペクトル七茨３に示す。３６０
ＭＨｚでのプロトンＮＭＲスペクトル（ｃｐｃｚＢ中）
はδ１ＡｔＩ−７、ｌＡ、６０ 。
よ７２及び乙、２ ｊ ｐｏｐ−１１１１にて多重線を
示し、ｋ合足数は構造と一致していた。上記残置の一部
ぐニーＭ塩酸で一夜処理石れ、そしてその混合物をエチ
ルアセテートで抽出された。その抽出物中の主成分は、
化学的に合成てれた本物の試料に対して實警スペクトル
、 Ｈ−ＮＭＲ及び Ｆ−ＮｌｈｌＲの結果について比
較することにより、≠−フルオロー３−トリフルオロメ
チルフェノールと１司足烙れた。
示し、ｋ合足数は構造と一致していた。上記残置の一部
ぐニーＭ塩酸で一夜処理石れ、そしてその混合物をエチ
ルアセテートで抽出された。その抽出物中の主成分は、
化学的に合成てれた本物の試料に対して實警スペクトル
、 Ｈ−ＮＭＲ及び Ｆ−ＮｌｈｌＲの結果について比
較することにより、≠−フルオロー３−トリフルオロメ
チルフェノールと１司足烙れた。
（以下余白）
Claims (9)
- （１）式（IV） ▲数式、化学式、表等があります▼（IV） （式中、Ｘ及びＹの各々は独立的に水素又はフツ素であ
る。） の化合物。 - （２）シス−１，２−ジヒドロキシ−３−トリフルオロ
メチルシクロヘキサ−３，５−ジエンである化合物。 - （３）シス−１，２−ジヒドロキシ−３−トリフルオロ
メチル−６−フルオロシクロヘキサ−３，５−ジエンで
ある化合物。 - （４）シス−１，２−ジヒドロキシ−３−トリフルオロ
メチル−４−フルオロシクロヘキサ−３，５−ジエンで
ある化合物。 - （５）式（Ｖ） ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｖ） （式中、Ｘ及びＹの各々は独立的に水素又はフッ素であ
る。） の化合物から特許請求の範囲第１項記載の式（IV）の化
合物を製造するための生化学法において、シュードモナ
ス・プチダ（Ｐ．ｐｕｔｉｄａ）ＮＣＩＢ１２１９０及
びその突然変異体から選ばれた微生物を培養し、適当な
培地中のその培養物に式（Ｖ）の化合物を供給し、次い
で式（IV）の化合物を回収する、ことを特徴とする上記
生化学法。 - （６）微生物をコハク酸塩、クエン酸塩又はフマル酸塩
の存在下で培養する、特許請求の範囲第５項記載の生化
学法。 - （７）培地がコハク酸塩、クエン酸塩又はフマル酸塩を
含む、特許請求の範囲第５項又は第６項記載の生化学法
。 - （８）微生物が野生型のシュードモナス・プチダ（Ｐ．
ｐｕｔｉｄａ）ＮＣＩＢ１２１９０である、特許請求の
範囲第５〜７項のいずれか１項記載の生化学法。 - （９）微生物がシュードモナス・プチダ（Ｐ．ｐｕｔｉ
ｄａ）ＮＣＩＢ１２１９０の紫外線突然変異体である、
特許請求の範囲第５〜７項のいずれか１項記載の生化学
法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB8616614 | 1986-07-08 | ||
| GB868616614A GB8616614D0 (en) | 1986-07-08 | 1986-07-08 | Organofluorine compounds |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6317838A true JPS6317838A (ja) | 1988-01-25 |
Family
ID=10600731
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62167984A Pending JPS6317838A (ja) | 1986-07-08 | 1987-07-07 | 新規な有機フツ素化合物及びそれらの製造のための生化学法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4877732A (ja) |
| JP (1) | JPS6317838A (ja) |
| CA (1) | CA1288715C (ja) |
| DE (1) | DE3783816T2 (ja) |
| GB (1) | GB8616614D0 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5824540A (en) * | 1995-06-20 | 1998-10-20 | Merck & Co., Inc. | Pseudomonas putida strain with dioxygenase activity |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3268971D1 (en) * | 1981-10-06 | 1986-03-20 | Ici Plc | Biochemical process |
| US4634668A (en) * | 1982-09-07 | 1987-01-06 | Celanese Corporation | 4-methylcyclohexa-3,5-diene-1,2-diol-1-carboxylic acid produced by Pseudomonas putida ATCC No. 39119 |
| US4532209A (en) * | 1982-09-07 | 1985-07-30 | Celanese Corporation | Production of para-cresol |
| US4535059A (en) * | 1983-01-13 | 1985-08-13 | Celanese Corporation | Muconic acid productivity by a stabilized mutant microorganism population |
-
1986
- 1986-07-08 GB GB868616614A patent/GB8616614D0/en active Pending
-
1987
- 1987-07-02 US US07/069,137 patent/US4877732A/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-07-07 JP JP62167984A patent/JPS6317838A/ja active Pending
- 1987-07-07 CA CA000541431A patent/CA1288715C/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-07-07 DE DE8787201288T patent/DE3783816T2/de not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3783816D1 (de) | 1993-03-11 |
| CA1288715C (en) | 1991-09-10 |
| US4877732A (en) | 1989-10-31 |
| GB8616614D0 (en) | 1986-08-13 |
| DE3783816T2 (de) | 1993-06-17 |
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