JPS6317840B2 - - Google Patents
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- JPS6317840B2 JPS6317840B2 JP53078762A JP7876278A JPS6317840B2 JP S6317840 B2 JPS6317840 B2 JP S6317840B2 JP 53078762 A JP53078762 A JP 53078762A JP 7876278 A JP7876278 A JP 7876278A JP S6317840 B2 JPS6317840 B2 JP S6317840B2
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/20—Hypnotics; Sedatives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
- C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
- C07F9/09—Esters of phosphoric acids
- C07F9/091—Esters of phosphoric acids with hydroxyalkyl compounds with further substituents on alkyl
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
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Description
本発明は価値ある生物学的及び薬理学的性質を
有する新規なホスホリル化ノナペプチド及びその
製造方法に関する。 該新規化合物は一般式 で示されるホスホリル化ノナペプチドである。 配列Ｌ−Trp−Ｌ−Ala−Gly−Gly−Ｌ−Asp
−Ｌ−Ala−Ｌ−Ser−Gly−Ｌ−Glu（MW＝
849）を有する、以後DSIP（デルター睡眠誘発ペ
プチド）と称するノナペプチドは、家兎の血液か
ら液素性睡眠因子（humoral sleep factor）と
して1971年から1977年までの間に単離され、精製
されそして特性決定がなされた。その構造もまた
最終的に解明されている（Pflu¨gers Arch.369、
99−101、1977）。合成DSIPを使用して行なわれ
た生物学的試験によれば、合成DSIPは、家兎に
脳内−脳室内（intracerebral ventricularly）投
与した場合に、家兎血液から単離された天然
DSIPと比較して同じ結果を与えた（Experientia
33、548、1977）。6nMol DSIP／Kgの脳内−脳
室内投与量は、自然の正統な深い睡眠期間中に見
出される現象と等しいことがEEG（脳波）におい
て現われるところの、家兎における生物学的効果
を誘発した（Proc.Natl.Acad.Sci.USA74、1282
−1286、1977）。合成により製造されたDSIPもま
た猫及びラツトに30nMol／Kgを静脈内投与する
と活性であり、それによりEEG記録及び受動的
行動試験（passive behavioural tests）は深い
及び逆説睡眠（paradoxal sleep）における意義
ある改善を示した。隔離したラツトの頭部に対す
る動脈潅流（arterial perfusion）による合成
DSIPの投与もまた睡眠に相当するEEG記録を与
えた、動物試験において、人間医薬においても使
用できる適用方法もまた、自然の睡眠状態を誘発
せしめた。 しかしながら、一連の実験において、DSIPの
投与に続く睡眠の誘発は、投与量を僅か±
20nMol／Kg体重だけ変えた時、はつきりと効果
を生じるか又は全く効果を生じない、即ち正しい
量のDSIPの正確な投与量のみが所望の効果を達
成することが判明した。更に、静脈内投与は睡眠
を誘発させるための脳内−脳室内投与に必要な投
与量よりも実質的に高い6nMol／Kgという投与量
を必要とし、そして更に、静脈内経路により投与
を行なう場合には睡眠の誘発が遅延することが判
明した。 上記二つの型の適用に従う活性のこれらの差異
は驚くべきことではない。何故ならば、DSIP型
のオリゴペプチドには静脈内（皮下又は経皮）適
用すると速やかな酵素による分解を受け、更に血
液脳関門を（blood brain barrier）容易に透過
しないことが経験上知られているからである。 従つて、本発明の目的は、酵素による分解に対
して一層安定あり、血液脳関門をさらに容易に透
過しそして改善された生物学的及び薬理学的性質
を有するDSIP型の化合物を見出すことにある。 比較試験によれば、セリンのOH基がホスホリ
ン化されたDSIPは、ラツトに静脈内投与すると、
DSIPと比較して必要な投与量の減少をもたらす
のみならず、より速やかな開始期（onset）及び
より長い、即ちより長時間の持続を伴なう抗進さ
れた活性を与えることが示されている。この持続
した且つ抗進された活性は重要な治療学的利点を
構成するものである。 本発明に従う化合物は、式 Ｌ−Trp−Ｌ−Ala−Gly−Gly−Ｌ−Asp−Ｌ−
Ala−Ｌ −Ser−Gly−Ｌ−Glu （） のノナペプチドをホスホリル化するか、或いは少
なくとも１個の官能基が保護されている式（）
の化合物から保護基を離脱させることを特徴とす
る方法により製造することができる。 本発明の最終生成物に導びく個々の反応及びそ
れらの精製並びに出発物質の製造は、通常の方法
を使用して、即ち、ペプチド化学において良く知
られている方法を使用して行なうことができる
［たとえば“Methoden der organischen
Chemie”（Houben−Weyl）Vol.XV parts1及び
２、Georg Thieme Verlag、Stuttgart、1974、
参照］。 かくして、たとえば、合成により製造された
DSIP又はホスホリル化されるべきセリンのOH
基以外の官能基が保護されている式（）の化合
物の１つを出発物質として使用することができ
る。 ホスホリル化はジベンジルホスホリルクロライ
ド又はジフエニルホスホリルクロライドの如きリ
ン酸の一官能性誘導体との反応により行なうこと
ができる。 該保護基は、ペプチド配列の変更を生ぜしめな
い穏やかな条件下にそれらが除去され得るように
選ぶべきである。使用し得る保護基の例には、Ｎ
−ベンジルオキシカルボニル、Ｎ−ベンジル−、
ベンジルエステル−及びエーテル基が包含され
る。何故なら、それらは接触水素添加分解により
容易に除去され得るからである。保護されたセリ
ンペプチドはジベンジルホスホリルクロライドを
使用して無水ピリジン中でホスホリル化すること
ができる。 得られるホスフエート誘導体は洗浄し、水性酸
又は塩基で精製し、ｔ−ブタノール溶液中で水素
添加分解に付す。得られるホスホリル化ペプチド
を薄層又はアニオン交換クロマトグラフイーによ
り精製することができる。ジフエニルホスホリル
クロライドによるセリン含有ペプチドのホスホリ
ル化は、パラジウム触媒を用いた水素添加分解に
よりＮ−ベンジルオキシカルボニル−及びベンジ
ルエステル基を選択的に脱離させる点で好まし
い。一方又は両方のフエニル基を除去するため
に、白金触媒を使用することができる［Acta.
Chem.Scan.13、1407及び1422（1959）］。 他方、保護されていないDSIP配列を用いて出
発し、これをモノハロゲノリン酸［たとえば、
CIPO（OH）2でホスホリル化することもできる。 次に実施例により、本発明のホスホリル化ノナ
ペプチドの製造法につきさらに具体的に説明す
る。 実施例 １ Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−DSIP−ベン
ジルエステルのホスホリル化 酸化バリウム上で乾燥したピリジン10ml中に溶
解したＮ−ベンジルオキシカルボニル−DSIP−
ベンジルエステルの溶液（5nMol）を殆んど凍結
するまで冷却した。次いで、ジベンジルから新し
く調整したジベンジルホスホリルクロライドを加
え、その混合物をよく振とうし、４℃で一夜放置
した。次いで冷酢酸エチル75ml及び冷水75mlを該
混合物に加え、そして遠心分離した。続いて上澄
水を冷水、1M H2SO4、H2O、飽和NaHCO3溶
液及び水で洗浄し、無水Na2SO4上で乾燥した。
保護されたペプチドのホスフエートエステルが溶
媒の真空蒸留の後に固体の形態で得られた。次い
で該固体をｔ−ブタノール／水の混合物中に溶解
し、そして10％Pd／Ｃを使用して水素添加した。
その反応混合物を過し、触媒及び液を水で洗
浄し、一緒にした洗液を真空下に蒸発乾固した。
このようにして得られたセリンのヒドロキシ基が
ホスホリル化されたDSIP
有する新規なホスホリル化ノナペプチド及びその
製造方法に関する。 該新規化合物は一般式 で示されるホスホリル化ノナペプチドである。 配列Ｌ−Trp−Ｌ−Ala−Gly−Gly−Ｌ−Asp
−Ｌ−Ala−Ｌ−Ser−Gly−Ｌ−Glu（MW＝
849）を有する、以後DSIP（デルター睡眠誘発ペ
プチド）と称するノナペプチドは、家兎の血液か
ら液素性睡眠因子（humoral sleep factor）と
して1971年から1977年までの間に単離され、精製
されそして特性決定がなされた。その構造もまた
最終的に解明されている（Pflu¨gers Arch.369、
99−101、1977）。合成DSIPを使用して行なわれ
た生物学的試験によれば、合成DSIPは、家兎に
脳内−脳室内（intracerebral ventricularly）投
与した場合に、家兎血液から単離された天然
DSIPと比較して同じ結果を与えた（Experientia
33、548、1977）。6nMol DSIP／Kgの脳内−脳
室内投与量は、自然の正統な深い睡眠期間中に見
出される現象と等しいことがEEG（脳波）におい
て現われるところの、家兎における生物学的効果
を誘発した（Proc.Natl.Acad.Sci.USA74、1282
−1286、1977）。合成により製造されたDSIPもま
た猫及びラツトに30nMol／Kgを静脈内投与する
と活性であり、それによりEEG記録及び受動的
行動試験（passive behavioural tests）は深い
及び逆説睡眠（paradoxal sleep）における意義
ある改善を示した。隔離したラツトの頭部に対す
る動脈潅流（arterial perfusion）による合成
DSIPの投与もまた睡眠に相当するEEG記録を与
えた、動物試験において、人間医薬においても使
用できる適用方法もまた、自然の睡眠状態を誘発
せしめた。 しかしながら、一連の実験において、DSIPの
投与に続く睡眠の誘発は、投与量を僅か±
20nMol／Kg体重だけ変えた時、はつきりと効果
を生じるか又は全く効果を生じない、即ち正しい
量のDSIPの正確な投与量のみが所望の効果を達
成することが判明した。更に、静脈内投与は睡眠
を誘発させるための脳内−脳室内投与に必要な投
与量よりも実質的に高い6nMol／Kgという投与量
を必要とし、そして更に、静脈内経路により投与
を行なう場合には睡眠の誘発が遅延することが判
明した。 上記二つの型の適用に従う活性のこれらの差異
は驚くべきことではない。何故ならば、DSIP型
のオリゴペプチドには静脈内（皮下又は経皮）適
用すると速やかな酵素による分解を受け、更に血
液脳関門を（blood brain barrier）容易に透過
しないことが経験上知られているからである。 従つて、本発明の目的は、酵素による分解に対
して一層安定あり、血液脳関門をさらに容易に透
過しそして改善された生物学的及び薬理学的性質
を有するDSIP型の化合物を見出すことにある。 比較試験によれば、セリンのOH基がホスホリ
ン化されたDSIPは、ラツトに静脈内投与すると、
DSIPと比較して必要な投与量の減少をもたらす
のみならず、より速やかな開始期（onset）及び
より長い、即ちより長時間の持続を伴なう抗進さ
れた活性を与えることが示されている。この持続
した且つ抗進された活性は重要な治療学的利点を
構成するものである。 本発明に従う化合物は、式 Ｌ−Trp−Ｌ−Ala−Gly−Gly−Ｌ−Asp−Ｌ−
Ala−Ｌ −Ser−Gly−Ｌ−Glu （） のノナペプチドをホスホリル化するか、或いは少
なくとも１個の官能基が保護されている式（）
の化合物から保護基を離脱させることを特徴とす
る方法により製造することができる。 本発明の最終生成物に導びく個々の反応及びそ
れらの精製並びに出発物質の製造は、通常の方法
を使用して、即ち、ペプチド化学において良く知
られている方法を使用して行なうことができる
［たとえば“Methoden der organischen
Chemie”（Houben−Weyl）Vol.XV parts1及び
２、Georg Thieme Verlag、Stuttgart、1974、
参照］。 かくして、たとえば、合成により製造された
DSIP又はホスホリル化されるべきセリンのOH
基以外の官能基が保護されている式（）の化合
物の１つを出発物質として使用することができ
る。 ホスホリル化はジベンジルホスホリルクロライ
ド又はジフエニルホスホリルクロライドの如きリ
ン酸の一官能性誘導体との反応により行なうこと
ができる。 該保護基は、ペプチド配列の変更を生ぜしめな
い穏やかな条件下にそれらが除去され得るように
選ぶべきである。使用し得る保護基の例には、Ｎ
−ベンジルオキシカルボニル、Ｎ−ベンジル−、
ベンジルエステル−及びエーテル基が包含され
る。何故なら、それらは接触水素添加分解により
容易に除去され得るからである。保護されたセリ
ンペプチドはジベンジルホスホリルクロライドを
使用して無水ピリジン中でホスホリル化すること
ができる。 得られるホスフエート誘導体は洗浄し、水性酸
又は塩基で精製し、ｔ−ブタノール溶液中で水素
添加分解に付す。得られるホスホリル化ペプチド
を薄層又はアニオン交換クロマトグラフイーによ
り精製することができる。ジフエニルホスホリル
クロライドによるセリン含有ペプチドのホスホリ
ル化は、パラジウム触媒を用いた水素添加分解に
よりＮ−ベンジルオキシカルボニル−及びベンジ
ルエステル基を選択的に脱離させる点で好まし
い。一方又は両方のフエニル基を除去するため
に、白金触媒を使用することができる［Acta.
Chem.Scan.13、1407及び1422（1959）］。 他方、保護されていないDSIP配列を用いて出
発し、これをモノハロゲノリン酸［たとえば、
CIPO（OH）2でホスホリル化することもできる。 次に実施例により、本発明のホスホリル化ノナ
ペプチドの製造法につきさらに具体的に説明す
る。 実施例 １ Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−DSIP−ベン
ジルエステルのホスホリル化 酸化バリウム上で乾燥したピリジン10ml中に溶
解したＮ−ベンジルオキシカルボニル−DSIP−
ベンジルエステルの溶液（5nMol）を殆んど凍結
するまで冷却した。次いで、ジベンジルから新し
く調整したジベンジルホスホリルクロライドを加
え、その混合物をよく振とうし、４℃で一夜放置
した。次いで冷酢酸エチル75ml及び冷水75mlを該
混合物に加え、そして遠心分離した。続いて上澄
水を冷水、1M H2SO4、H2O、飽和NaHCO3溶
液及び水で洗浄し、無水Na2SO4上で乾燥した。
保護されたペプチドのホスフエートエステルが溶
媒の真空蒸留の後に固体の形態で得られた。次い
で該固体をｔ−ブタノール／水の混合物中に溶解
し、そして10％Pd／Ｃを使用して水素添加した。
その反応混合物を過し、触媒及び液を水で洗
浄し、一緒にした洗液を真空下に蒸発乾固した。
このようにして得られたセリンのヒドロキシ基が
ホスホリル化されたDSIP
【式】を、薄層クロマトグラフイ
ー又はアニオン交換体を使用して精製した
［Acta.Chem.Scan.15、163（1961）。］ 実施例 ２ DSIPのホスホリル化 DSIP5mg及びＬ−トリプトフアン１mgをオキシ
塩化リン１mlと混合した。その混合物を濃ギ酸
100ml中に溶解し、水分を排除して０℃で８時間
撹拌した。次いで生成物を高真空下にNaOH上
で凍結乾燥した。氷水２mlを添加した後、1N
NaOHを使用して溶液のPHを０℃で８に調節し
た。このPHを２時間一定に保持した。再びその溶
液を凍結乾燥し、得られる凍結乾燥物を水0.5ml
中に溶解した。この溶液の100μ分量をシリカ
ゲルプレートに塗布し（層厚さ２mm、結合剤を含
まない）、そしてアセトン／水（７：3V／Ｖ）で
室温にて８時間展開した。周囲の細長部分を除い
てプレートをアルミ箔で覆い、そしてフロレスカ
ミン（florescamine）溶液（アセトン中0.2％）
を噴霧した。紫外線を使用して、所望の物質を含
有するバンドの位置を決定することができた
（Rf0.47）。これらを掻き取り、水で溶出した。
25000ｇでの溶出液の遠心分離から生じる上澄液
を凍結乾燥した。かくして得られた物質を
H2O0.5ml中に溶解し、そしてセフアデツクス
（Sephadex）−G15カラムに詰め、次いで水で溶
出した。１mlの画分を集めた。280nｍにて紫外
線吸収を示した画分を集め、そして凍結乾燥し
た。 このようにして精製し、凍結乾燥した物質 を後述するラツトにおける目醒め試験（rising
Test）に使用した［J.Biol.Chem.202、67
（1953）］。 実施例 ３ オキシ塩化リン３ml中のDSIP20mg
（23.5μMol）を０℃でギ酸500μ中に溶解した。
次いで反応混合物を、水分を完全に排除しつつ
200時間０℃で撹拌した。次いで過剰のオキシ塩
化リン及びギ酸を高真空下に除去した。ホスフエ
ートエステル基の塩素原子を除去するため、上記
物質を氷水５ml中に溶解し、そして０〜４℃で２
時間PH８にて撹拌した。この物質を最終的に凍結
乾燥した。 次いで凍結乾燥した生成物を水1.2ml中に溶解
し、そして調製薄層クロマトグラフイー（シリカ
ゲル）のため、６枚のプレートに、各々の場合に
プレートの縁から２cmのところまで塗布した。ア
セトン／水（７：３、Ｖ／Ｖ）を使用して室温で
８時間展開を行なつた。プレートを３cm巾の縁の
周囲の細長部分を除いてアルミ箔で覆い、そして
フロレスカミン溶液（アセトン中0.2％）を噴霧
した。350nｍにおける紫外線によるプレートの
照射は縁の周囲に斑点を示した。0.6のRf値を有
するバンドに印を付け、除去し、水で溶出した。
溶出液を10分間20000ｇにて遠心分離し、そして
上澄液を凍結乾燥した。 凍結したペプチドを水２ml中に溶解し、セフア
デツクスＧ−15カラム（220ml）に詰め、水で溶
出した。 280nｍの紫外線を使用して上記画分の評価を
行ない、そして平坦な肩を有するピークを示し
た。このピークに帰属する画分を３つのプールに
分け、別々に凍結乾燥した。プール１及び２から
の物質をセフアデツクスG15上でクロマトグラフ
処理し、再び凍結乾燥した。 プール１の物質はセリンのOH基がホスホリル
化された実質的に100％DSIPであることを確認し
た。それは水／アセトン（７：3V／Ｖ）系中で
のシリカゲルプレート上のRf値0.42を有する。ホ
スホリル化されていない出発物質は同様な条件下
にRf値0.87を示した。収率25％。 目醒め試験における生物学的活性の決定 ランダム二重盲検法において、８匹の試験ラツ
ト及び８匹の対照動物における覚醒状態を同時的
に定量した。目醒め試験において、試験動物の各
目醒め点として数えた。実験は、真夜中前のラツ
トが活発に活動する期間中の３時間に、0.2ml
NaCl溶液中の本発明の物質（試験Ｔ）又はNaCl
溶液単独0.2ml（対照Ｃ）の静脈内注射後90分間
行なつた。計数は再びランダム二重盲検条件下に
先入観のない公平な３人により行なつた。対照動
物の目醒めの頻度を100％と定め、試験動物の目
醒め回数の減少を計算した。その結果を下記表に
要約する。
［Acta.Chem.Scan.15、163（1961）。］ 実施例 ２ DSIPのホスホリル化 DSIP5mg及びＬ−トリプトフアン１mgをオキシ
塩化リン１mlと混合した。その混合物を濃ギ酸
100ml中に溶解し、水分を排除して０℃で８時間
撹拌した。次いで生成物を高真空下にNaOH上
で凍結乾燥した。氷水２mlを添加した後、1N
NaOHを使用して溶液のPHを０℃で８に調節し
た。このPHを２時間一定に保持した。再びその溶
液を凍結乾燥し、得られる凍結乾燥物を水0.5ml
中に溶解した。この溶液の100μ分量をシリカ
ゲルプレートに塗布し（層厚さ２mm、結合剤を含
まない）、そしてアセトン／水（７：3V／Ｖ）で
室温にて８時間展開した。周囲の細長部分を除い
てプレートをアルミ箔で覆い、そしてフロレスカ
ミン（florescamine）溶液（アセトン中0.2％）
を噴霧した。紫外線を使用して、所望の物質を含
有するバンドの位置を決定することができた
（Rf0.47）。これらを掻き取り、水で溶出した。
25000ｇでの溶出液の遠心分離から生じる上澄液
を凍結乾燥した。かくして得られた物質を
H2O0.5ml中に溶解し、そしてセフアデツクス
（Sephadex）−G15カラムに詰め、次いで水で溶
出した。１mlの画分を集めた。280nｍにて紫外
線吸収を示した画分を集め、そして凍結乾燥し
た。 このようにして精製し、凍結乾燥した物質 を後述するラツトにおける目醒め試験（rising
Test）に使用した［J.Biol.Chem.202、67
（1953）］。 実施例 ３ オキシ塩化リン３ml中のDSIP20mg
（23.5μMol）を０℃でギ酸500μ中に溶解した。
次いで反応混合物を、水分を完全に排除しつつ
200時間０℃で撹拌した。次いで過剰のオキシ塩
化リン及びギ酸を高真空下に除去した。ホスフエ
ートエステル基の塩素原子を除去するため、上記
物質を氷水５ml中に溶解し、そして０〜４℃で２
時間PH８にて撹拌した。この物質を最終的に凍結
乾燥した。 次いで凍結乾燥した生成物を水1.2ml中に溶解
し、そして調製薄層クロマトグラフイー（シリカ
ゲル）のため、６枚のプレートに、各々の場合に
プレートの縁から２cmのところまで塗布した。ア
セトン／水（７：３、Ｖ／Ｖ）を使用して室温で
８時間展開を行なつた。プレートを３cm巾の縁の
周囲の細長部分を除いてアルミ箔で覆い、そして
フロレスカミン溶液（アセトン中0.2％）を噴霧
した。350nｍにおける紫外線によるプレートの
照射は縁の周囲に斑点を示した。0.6のRf値を有
するバンドに印を付け、除去し、水で溶出した。
溶出液を10分間20000ｇにて遠心分離し、そして
上澄液を凍結乾燥した。 凍結したペプチドを水２ml中に溶解し、セフア
デツクスＧ−15カラム（220ml）に詰め、水で溶
出した。 280nｍの紫外線を使用して上記画分の評価を
行ない、そして平坦な肩を有するピークを示し
た。このピークに帰属する画分を３つのプールに
分け、別々に凍結乾燥した。プール１及び２から
の物質をセフアデツクスG15上でクロマトグラフ
処理し、再び凍結乾燥した。 プール１の物質はセリンのOH基がホスホリル
化された実質的に100％DSIPであることを確認し
た。それは水／アセトン（７：3V／Ｖ）系中で
のシリカゲルプレート上のRf値0.42を有する。ホ
スホリル化されていない出発物質は同様な条件下
にRf値0.87を示した。収率25％。 目醒め試験における生物学的活性の決定 ランダム二重盲検法において、８匹の試験ラツ
ト及び８匹の対照動物における覚醒状態を同時的
に定量した。目醒め試験において、試験動物の各
目醒め点として数えた。実験は、真夜中前のラツ
トが活発に活動する期間中の３時間に、0.2ml
NaCl溶液中の本発明の物質（試験Ｔ）又はNaCl
溶液単独0.2ml（対照Ｃ）の静脈内注射後90分間
行なつた。計数は再びランダム二重盲検条件下に
先入観のない公平な３人により行なつた。対照動
物の目醒めの頻度を100％と定め、試験動物の目
醒め回数の減少を計算した。その結果を下記表に
要約する。
【表】
＊ セリン基のホスホリル化
また、本発明の化合物のマウスにおける急性毒
性（LD50）は２〜４ｇ／Kg i.v.である。６週間
の毒性試験において、最高６mg／Kg／日の投与量
でラツト及びイヌに何らのネガテイブな結果は生
じなかつた。 本発明の化合物のヒトに対する有効投与量範囲
は一般に２〜10μｇ／Kg体重（i.v.）であり、好適
には約5μｇ／Kgである。注入（infusion）は緩徐
に行なうべきであり、１日７回まで繰り返すこと
ができる。 本発明の化合物は、本発明の活性成分を直接放
出するか又は遅延放出する薬剤調製物において、
たとえば水、ゼラチン、アラビアゴム、ラクトー
ス、殿粉、ステアリン酸マグネシウム、タルク、
植物油、ポリアルキレングリコール又は黄色ワセ
リンの如き経腸又は非経口投与に適する有機又は
無機の不活性担体物質との混合物として使用する
ことができる。該薬剤調製物は、たとえば、錠
剤、糖衣剤又はカプセル剤の如き固体形態、或い
は溶液剤、懸濁剤又は乳剤の如き液体形態である
ことができる。所望により、それらは無菌化し及
び／又は保存剤、安定剤、湿潤剤又は乳化剤、味
覚改良良剤、滲透圧を変えるための塩もしくは緩
衝剤の如き補助物質を含有することができる。本
発明の薬剤組成物の製造は通常の方法にて行なう
ことができる。
また、本発明の化合物のマウスにおける急性毒
性（LD50）は２〜４ｇ／Kg i.v.である。６週間
の毒性試験において、最高６mg／Kg／日の投与量
でラツト及びイヌに何らのネガテイブな結果は生
じなかつた。 本発明の化合物のヒトに対する有効投与量範囲
は一般に２〜10μｇ／Kg体重（i.v.）であり、好適
には約5μｇ／Kgである。注入（infusion）は緩徐
に行なうべきであり、１日７回まで繰り返すこと
ができる。 本発明の化合物は、本発明の活性成分を直接放
出するか又は遅延放出する薬剤調製物において、
たとえば水、ゼラチン、アラビアゴム、ラクトー
ス、殿粉、ステアリン酸マグネシウム、タルク、
植物油、ポリアルキレングリコール又は黄色ワセ
リンの如き経腸又は非経口投与に適する有機又は
無機の不活性担体物質との混合物として使用する
ことができる。該薬剤調製物は、たとえば、錠
剤、糖衣剤又はカプセル剤の如き固体形態、或い
は溶液剤、懸濁剤又は乳剤の如き液体形態である
ことができる。所望により、それらは無菌化し及
び／又は保存剤、安定剤、湿潤剤又は乳化剤、味
覚改良良剤、滲透圧を変えるための塩もしくは緩
衝剤の如き補助物質を含有することができる。本
発明の薬剤組成物の製造は通常の方法にて行なう
ことができる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 式 で示されるホスホリル化ノナペプチド。 ２ 式 Ｌ−Trp−Ｌ−Ala−Gly−Gly−Ｌ−Asp−Ｌ−
Ala− Ｌ−Ser−Gly−Ｌ−Glu で示されるノナペプチドをホスホリル化すること
を特徴とする式 で示されるホスホリル化ノナペプチドの製造方
法。 ３ 該ホスホリル化を、リン酸、リン酸エステ
ル、リン酸ハライド、リン酸ハライドエステル又
はピロホスフエートとの反応により行なう特許請
求の範囲第２項記載の方法。 ４ 該ホスホリル化をクロロリン酸を使用して行
なう特許請求の範囲第３項記載の方法。 ５ 式 で示されるホスホリル化ノナペプチドを有効成分
として含有することを特徴とする睡眠誘発剤。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH809277A CH634331A5 (de) | 1977-06-30 | 1977-06-30 | Phosphorylierte nonapeptide und verfahren zu deren herstellung. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5439050A JPS5439050A (en) | 1979-03-24 |
| JPS6317840B2 true JPS6317840B2 (ja) | 1988-04-15 |
Family
ID=4335033
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7876278A Granted JPS5439050A (en) | 1977-06-30 | 1978-06-30 | Phosphorylized nonapeptide |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4165312A (ja) |
| JP (1) | JPS5439050A (ja) |
| CH (1) | CH634331A5 (ja) |
| DE (1) | DE2828433A1 (ja) |
| FR (1) | FR2396016A1 (ja) |
| GB (1) | GB2000511B (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| CA1188989A (en) * | 1981-05-21 | 1985-06-18 | Richard R. Scherschlicht | Nonapeptide for the treatment of drug withdrawal symptoms |
| AP2001002245A0 (en) * | 1999-02-05 | 2001-09-30 | Univ Manchester | Regulation of anesthesia. |
| WO2004072106A1 (ja) * | 2003-02-14 | 2004-08-26 | Shimadzu Corporation | ペプチドのリン酸基を脱離する方法及びペプチドの解析方法 |
| RU2005128993A (ru) * | 2005-09-08 | 2007-03-20 | Общество С Ограниченной Ответственностью Исследовательский Центр "Комкон" (Ru) | Средство для коррекции стресс-индуцируемых нейромедиаторных, нейроэндокринных и метаболических нарушений, а также способ профилактики и лечения сопутствующих им паталогических состояний |
| CN112535727A (zh) * | 2020-12-24 | 2021-03-23 | 安域生物制药(杭州)有限公司 | 一种具有睡眠改善作用的短肽凝胶及其制备方法 |
| CN113214354B (zh) * | 2021-03-04 | 2022-03-25 | 北京北科华夏生物医药科技有限公司 | 改性九肽及其制备方法和应用 |
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|---|---|---|---|---|
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-
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- 1977-06-30 CH CH809277A patent/CH634331A5/de not_active IP Right Cessation
-
1978
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- 1978-06-28 DE DE19782828433 patent/DE2828433A1/de active Granted
- 1978-06-29 GB GB7828280A patent/GB2000511B/en not_active Expired
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- 1978-06-30 FR FR7819629A patent/FR2396016A1/fr active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GB2000511A (en) | 1979-01-10 |
| GB2000511B (en) | 1982-01-13 |
| FR2396016A1 (fr) | 1979-01-26 |
| US4165312A (en) | 1979-08-21 |
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| DE2828433C2 (ja) | 1988-01-21 |
| CH634331A5 (de) | 1983-01-31 |
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