JPS63190830A - 抗悪性腫瘍剤 - Google Patents
抗悪性腫瘍剤Info
- Publication number
- JPS63190830A JPS63190830A JP62226450A JP22645087A JPS63190830A JP S63190830 A JPS63190830 A JP S63190830A JP 62226450 A JP62226450 A JP 62226450A JP 22645087 A JP22645087 A JP 22645087A JP S63190830 A JPS63190830 A JP S63190830A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- stimulating factor
- human
- malignant tumor
- granulocyte colony
- human granulocyte
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明はヒト顆粒球コロニー刺激因子（以下ヒトＧ−Ｃ
３Ｆと略記する）を有効成分とする抗悪性ｌｌ！′Ｉ！
瘍剤、及びこれと抗悪性腫瘍血清との組み合ねばからな
る悪性腫瘍治療用キットに関する。
３Ｆと略記する）を有効成分とする抗悪性ｌｌ！′Ｉ！
瘍剤、及びこれと抗悪性腫瘍血清との組み合ねばからな
る悪性腫瘍治療用キットに関する。
本発明は造血因子（ｈｅｍｏｐｏｉｅｔｉｃ ｇｒｏｗ
ｔｈｆａｃｔｏｒ）の１つであるヒトＧ−Ｃ８Ｆを用い
て、悪性腫瘍の治療に役立てようとするものであって、
直接これに関連する報告類の見当たらない新規な抗悪性
腫瘍剤を提供しようとするものである。
ｔｈｆａｃｔｏｒ）の１つであるヒトＧ−Ｃ８Ｆを用い
て、悪性腫瘍の治療に役立てようとするものであって、
直接これに関連する報告類の見当たらない新規な抗悪性
腫瘍剤を提供しようとするものである。
ヒトＧ−Ｃ３Ｆはｉｎ ＶｉｔｒＯの実験系において顆
粒球の前駆細胞に働き顆粒球への分化増進を促す機能を
有している造血因子である〔例えばＨｃｔｃａｌｆ、
ｅｔ、ａｌ：Ｆｘｎ、）ｌｅｍａｔｏｌ−１−１８５，
ｒ１９７３）筈朱照〕。
粒球の前駆細胞に働き顆粒球への分化増進を促す機能を
有している造血因子である〔例えばＨｃｔｃａｌｆ、
ｅｔ、ａｌ：Ｆｘｎ、）ｌｅｍａｔｏｌ−１−１８５，
ｒ１９７３）筈朱照〕。
ところがこのヒトＧ−Ｃ３Ｆは今迄入手するのが極めて
困難であったため、医薬としての有用性又は有効性につ
いての検討が充分進展ｔ！ず、本発明が目的とするガン
の治療への可能性についても未検討のままに置かれてい
た。
困難であったため、医薬としての有用性又は有効性につ
いての検討が充分進展ｔ！ず、本発明が目的とするガン
の治療への可能性についても未検討のままに置かれてい
た。
この様な状況を打開すべく、本出願人は研究を重ねた結
果、遺伝子工学等によるヒトＧ−Ｃ３Ｆの製造方法の開
発に成功し、純粋均質でしかも天吊のヒトＧ−Ｃ３Ｆが
入手できるようになった（特願昭５９−１５３２７３号
、特願昭６０−２６９４５５ ＠、特願昭６０−２６９
４５６ ＠、特願昭６０−２７０８３８号、特願昭６０
−２７０８３９号等参照）。
果、遺伝子工学等によるヒトＧ−Ｃ３Ｆの製造方法の開
発に成功し、純粋均質でしかも天吊のヒトＧ−Ｃ３Ｆが
入手できるようになった（特願昭５９−１５３２７３号
、特願昭６０−２６９４５５ ＠、特願昭６０−２６９
４５６ ＠、特願昭６０−２７０８３８号、特願昭６０
−２７０８３９号等参照）。
この成果をふまえて、殺悪性腫瘍作用を有するヒト成熟
顆粒球に対するヒトＧ−Ｃ３Ｆの影響等を研究し、そこ
で得られた知見にもとづいて副作用の少ない優れた抗悪
性腫瘍剤を開発しようとするのが本発明の目的である。
顆粒球に対するヒトＧ−Ｃ３Ｆの影響等を研究し、そこ
で得られた知見にもとづいて副作用の少ない優れた抗悪
性腫瘍剤を開発しようとするのが本発明の目的である。
本発明者らは上記目的を達成するため、鋭意研究を重ね
た結果、悪性腫瘍細胞例えばヒト悪性黒色腫細胞（ＨＭ
Ｖ）において、 ■ヒトＧ−Ｃ３Ｆ存在下で前装置した顆粒球は、非存在
下で前装置した顆粒球に比べて約２〜４倍のｆｔｆ１Ｍ
Ｖ効果が認められた。
た結果、悪性腫瘍細胞例えばヒト悪性黒色腫細胞（ＨＭ
Ｖ）において、 ■ヒトＧ−Ｃ３Ｆ存在下で前装置した顆粒球は、非存在
下で前装置した顆粒球に比べて約２〜４倍のｆｔｆ１Ｍ
Ｖ効果が認められた。
■殺ＨＭＶ効果は正常ウサギ血清の存在下で影響されな
いが、抗ＨＭＶ血清の存在下ではぞの濃度に依存して最
高１０〜３０倍に増強した。
いが、抗ＨＭＶ血清の存在下ではぞの濃度に依存して最
高１０〜３０倍に増強した。
■ヒトＧ−Ｃ３Ｆとの前」ｆ置による顆粒球の殺１−Ｉ
Ｍ Ｖ効果の増強の程度は１、ヒトＧ−Ｃ８Ｆの濃度
と明らかな相関がある。
Ｍ Ｖ効果の増強の程度は１、ヒトＧ−Ｃ８Ｆの濃度
と明らかな相関がある。
という事実を確認し、この結果からヒトＧ−Ｃ８Ｆはヒ
ト成熟顆粒球（特に好中球）の殺悪性腫瘍作用（特に抗
悪性腫瘍血清存在下で）を著しく六進させることを見出
し本発明に到達した。
ト成熟顆粒球（特に好中球）の殺悪性腫瘍作用（特に抗
悪性腫瘍血清存在下で）を著しく六進させることを見出
し本発明に到達した。
すなわち本発明は、ヒト顆粒球コロニー刺激因子を有効
成分とする抗悪性腫瘍剤を提供するものである。
成分とする抗悪性腫瘍剤を提供するものである。
コロニー刺激因子を有効性分とする製剤の組み合わせか
らなる悪性腫瘍治療用キットも同時に提供するものであ
る。
らなる悪性腫瘍治療用キットも同時に提供するものであ
る。
以下本発明の詳細な説明する
本発明の抗悪性腫瘍剤の有効成分であるヒトＧ−Ｃ３Ｆ
は純度の高いヒトＧ−Ｃ３Ｆであればその由来が制限さ
れるものではなく、例えば人の生体試料から抽出、分離
、精製したもの、ヒトＧ−ｃｓｒ：産生細胞を培養し、
その培養上清から単離したもの、細胞融合法を用いてヒ
トＧ−Ｃ３Ｆ産生ハイブリドーマを形成しこれから取得
したもの、遺伝子組換えによって、大腸菌、動物細胞等
の宿主を形質転換して得た形質転換体から産生けしめ単
ｌｉ！ｉ１１精製したもの、又はそれを化学修飾したも
の等のいずれも使用することができる。
は純度の高いヒトＧ−Ｃ３Ｆであればその由来が制限さ
れるものではなく、例えば人の生体試料から抽出、分離
、精製したもの、ヒトＧ−ｃｓｒ：産生細胞を培養し、
その培養上清から単離したもの、細胞融合法を用いてヒ
トＧ−Ｃ３Ｆ産生ハイブリドーマを形成しこれから取得
したもの、遺伝子組換えによって、大腸菌、動物細胞等
の宿主を形質転換して得た形質転換体から産生けしめ単
ｌｉ！ｉ１１精製したもの、又はそれを化学修飾したも
の等のいずれも使用することができる。
しかし、それらの中でもｔＪｉ度よく均質大量に入手で
きる本出願人が製造した次の〔１）及び（２）で示すヒ
トＧ−Ｃ３Ｆが特に好ましいものである。
きる本出願人が製造した次の〔１）及び（２）で示すヒ
トＧ−Ｃ３Ｆが特に好ましいものである。
（１）次の理化学的性質を有するヒトＧ−Ｃ８Ｆ０■分
子量ニドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動法による測定で 約１９，０００±１．００００ ■等電点：ｐＩ＝５．５±０．１ 、 ｐＩ＝５．８±
０．１゜ｐＩ＝６．１±０．１の三つの等電点のうち少
なくとも１つを有する。
子量ニドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動法による測定で 約１９，０００±１．００００ ■等電点：ｐＩ＝５．５±０．１ 、 ｐＩ＝５．８±
０．１゜ｐＩ＝６．１±０．１の三つの等電点のうち少
なくとも１つを有する。
■紫外部吸収： ２８０ｎｍに極大吸収を有し、２５０
ｎｍに極小値をもつ。
ｎｍに極小値をもつ。
■Ｎ末端から２１残塁目迄のアミノ酸配列が次の如くで
ある。
ある。
ｔ１２Ｎ−Ｔｌｌｒ−ＰｒＯ−ＬｅＬｌ−Ｇ Ｉ Ｖ−
ＰｒＯ−Ａ １ａ−３ｅｒ−ｓｅｒ−ｔｅｕ−ｐｒｏ−
Ｇ ｌ ｎ−３ｅｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ
−Ｃｙｓ−Ｌｃｕ−Ｇ ｌ ｕ−Ｇ ｌ ｎ−Ｖａ ｌ
−（２）下記のアミノ酸配列またはその一部で表わさ
れるヒト顆粒球コロニー刺激因子活性を有するポリペプ
チド又はこれと糖鎖部を有する糖蛋白質を含有プるヒト
Ｇ−Ｃ８Ｆ。
ＰｒＯ−Ａ １ａ−３ｅｒ−ｓｅｒ−ｔｅｕ−ｐｒｏ−
Ｇ ｌ ｎ−３ｅｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ
−Ｃｙｓ−Ｌｃｕ−Ｇ ｌ ｕ−Ｇ ｌ ｎ−Ｖａ ｌ
−（２）下記のアミノ酸配列またはその一部で表わさ
れるヒト顆粒球コロニー刺激因子活性を有するポリペプ
チド又はこれと糖鎖部を有する糖蛋白質を含有プるヒト
Ｇ−Ｃ８Ｆ。
（ト１ｅｔ）ｎＴｈｒ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｐｒ
ｏ Ａｌａ ｓｃｒ Ｓｅｒ ＬｅｔｊＰｒｏ Ｇｉ
ｎ Ｓｅｒ Ｐｈｃ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｌｙ
ｓ Ｃｙｓ Ｌｅｕ Ｇｌｕ ＧｌｎＶａｔ
へｒｇ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ａｓｐ
Ｇｌｙ 八ｌａ Ａｌａ ＬｅｕＧｌｎ Ｇｌｕ
Ｌｙｓ Ｌｅｕ （Ｖａｔ Ｓｅｒ Ｇｌ
ｕ ）ＩｌＩ Ｃｙｓ Ａｌａ ＴｈｒＴｙｒ
Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｃｙｓ Ｈｉｓ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｇ
ｌｕ Ｌｅｕ Ｖａｌ ＬｅｕＬｅｕ Ｇｌｙ ｔｌｉ
ｓ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｔｒｐ
Ａｌａ Ｐｒ。
ｏ Ａｌａ ｓｃｒ Ｓｅｒ ＬｅｔｊＰｒｏ Ｇｉ
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Ｇｌｙ 八ｌａ Ａｌａ ＬｅｕＧｌｎ Ｇｌｕ
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Ａｌａ Ｐｒ。
Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｐｒｏ
Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｇｌｎ
ＬｅｕＡｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｌｅｕ Ｓｅ
ｒ Ｇｌｎ Ｌｅｕ ｔｌｉｓ Ｓｅｒ Ｇ
ｌｙ ＬｅｕＰｈｅ ｔｅｕ Ｔｙｒ Ｇｌｎ Ｇｌ
ｙｔｅｌｌ Ｌｅｕ Ｇｉｎ Ａｌａ ｔｅｕ Ｇｌｕ
Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｇ
ｌｙ Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ｌｃｕ ＡｓｐＴｈｒ Ｌｅ
ｕ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｖａｔ Ａｌ
ａ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ａｌａ 丁ｈｒＴｈｒ
ｌｉｅ Ｔｒｐ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｈｅｔ Ｇｌ（Ｊ
ＧｌｔＪ Ｉｅｕ ｃ＋ｙ ）ｆ（！ＬＡ）ａ Ｐｒ
ｏ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｐｒｏ ’ｒ
ｈｒ Ｇ！ｎ Ｇｌｙ Ａｌａ ＮｅｔＰｒｏ
Ａｌａ Ｐｈｅ Ａｌａ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｐｈｅ
Ｇｌｎ Ａｒｇ Ａｒｇ ＡｌａＧｌｙ Ｇｌｙ Ｖａ
ｌ Ｌｅｕ Ｖａｔ Ａｌａ Ｓｅｒ １ｌｉｓ Ｌｅ
ｕ Ｇｌｎ ５ｅｒＰｈｅ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｖ
ａｔ Ｓｅｒ 丁ｙｒ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｌ
ｅｕ 八ｒｇ ｔｌｉｓＬｃｕ＾ｌａ Ｇｌｎ Ｐ
ｒｏ （但しｍはＯ又は１を表わし、ｎはＯ又は１を
表わす）。
Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｇｌｎ
ＬｅｕＡｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｌｅｕ Ｓｅ
ｒ Ｇｌｎ Ｌｅｕ ｔｌｉｓ Ｓｅｒ Ｇ
ｌｙ ＬｅｕＰｈｅ ｔｅｕ Ｔｙｒ Ｇｌｎ Ｇｌ
ｙｔｅｌｌ Ｌｅｕ Ｇｉｎ Ａｌａ ｔｅｕ Ｇｌｕ
Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｇ
ｌｙ Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ｌｃｕ ＡｓｐＴｈｒ Ｌｅ
ｕ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｖａｔ Ａｌ
ａ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ａｌａ 丁ｈｒＴｈｒ
ｌｉｅ Ｔｒｐ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｈｅｔ Ｇｌ（Ｊ
ＧｌｔＪ Ｉｅｕ ｃ＋ｙ ）ｆ（！ＬＡ）ａ Ｐｒ
ｏ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｐｒｏ ’ｒ
ｈｒ Ｇ！ｎ Ｇｌｙ Ａｌａ ＮｅｔＰｒｏ
Ａｌａ Ｐｈｅ Ａｌａ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｐｈｅ
Ｇｌｎ Ａｒｇ Ａｒｇ ＡｌａＧｌｙ Ｇｌｙ Ｖａ
ｌ Ｌｅｕ Ｖａｔ Ａｌａ Ｓｅｒ １ｌｉｓ Ｌｅ
ｕ Ｇｌｎ ５ｅｒＰｈｅ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｖ
ａｔ Ｓｅｒ 丁ｙｒ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｌ
ｅｕ 八ｒｇ ｔｌｉｓＬｃｕ＾ｌａ Ｇｌｎ Ｐ
ｒｏ （但しｍはＯ又は１を表わし、ｎはＯ又は１を
表わす）。
上記のヒトＧ−Ｃ３Ｆは例えば後述する参考例に示す方
法によって製造することができる。即ち、上記（１）の
ヒトＧ−Ｃ８Ｆは参考例１によって、又・（２）のヒト
Ｇ−Ｃ８Ｆは参考例２に承り方法に１ｎｔｉ７ス７とバ
で去＾ なおこれらの方法の詳細な製造条イ１については、本出
願人が先に出願した特願昭５９−１５３２７３号、特願
昭６０−２６９４５５＠、特願昭６０−２６９４５６号
、特願昭６０−２７０８３８号、特ＩＭ６０−２７０８
３９Ｑ（７）各明細ｍを参照されたい。
法によって製造することができる。即ち、上記（１）の
ヒトＧ−Ｃ８Ｆは参考例１によって、又・（２）のヒト
Ｇ−Ｃ８Ｆは参考例２に承り方法に１ｎｔｉ７ス７とバ
で去＾ なおこれらの方法の詳細な製造条イ１については、本出
願人が先に出願した特願昭５９−１５３２７３号、特願
昭６０−２６９４５５＠、特願昭６０−２６９４５６号
、特願昭６０−２７０８３８号、特ＩＭ６０−２７０８
３９Ｑ（７）各明細ｍを参照されたい。
又、その他の方法としてＧ−Ｃ３Ｆ産生細胞と自己増殖
能を有する悪性腫瘍細胞とを細胞融合して得られるハイ
ブリドーマをマイトジェンの存在または非存在下で培養
することによって得ることもできる。 これ等の方法で
得たヒトＧ−Ｃ３Ｆは全て本発明に含まれる。
能を有する悪性腫瘍細胞とを細胞融合して得られるハイ
ブリドーマをマイトジェンの存在または非存在下で培養
することによって得ることもできる。 これ等の方法で
得たヒトＧ−Ｃ３Ｆは全て本発明に含まれる。
１７られたヒ１〜Ｇ−Ｃ３Ｆ含有液は必要により公知の
手段でさらに精製、濃縮した後凍結保存とするかまたは
凍結乾燥、真空乾燥などの手段により水分を除去して保
存することができる。
手段でさらに精製、濃縮した後凍結保存とするかまたは
凍結乾燥、真空乾燥などの手段により水分を除去して保
存することができる。
また所望によりヒトＧ−Ｃ３Ｆを適当な緩衝液に溶解し
た後、ミリポアフィルタ−等で無菌濾過して注射剤とす
ることもできる。
た後、ミリポアフィルタ−等で無菌濾過して注射剤とす
ることもできる。
さらに本発明の抗悪性腫瘍剤はヒトまたは動物医薬用に
適した医薬製剤としての形態をとるため吸着防止剤を含
むことができる。
適した医薬製剤としての形態をとるため吸着防止剤を含
むことができる。
本発明の抗悪性腫瘍剤に含まれるヒトＧ−Ｃ３Ｆの投与
量、投与回数は対象の疾患患者の病状を配慮して決める
ことができるが、通常成人−人当たり０．１〜５００μ
び、好ましくは０．５〜２００μびのヒトＧ−Ｃ３Ｆを
含有する製剤を１週間に１〜７回投与することができる
。しかし本発明はヒトＧ−Ｃ３Ｆの含有量によって限定
されるものではない。
量、投与回数は対象の疾患患者の病状を配慮して決める
ことができるが、通常成人−人当たり０．１〜５００μ
び、好ましくは０．５〜２００μびのヒトＧ−Ｃ３Ｆを
含有する製剤を１週間に１〜７回投与することができる
。しかし本発明はヒトＧ−Ｃ３Ｆの含有量によって限定
されるものではない。
次に本発明の悪性腫瘍治療用キットについて説明覆る。
後述する実験例（薬理効果）から明らかな通り、ヒトＧ
−Ｃ３Ｆは抗悪性腫瘍血清の存在下で著しく顆粒球の殺
悪性腫瘍作用を増大する。
−Ｃ３Ｆは抗悪性腫瘍血清の存在下で著しく顆粒球の殺
悪性腫瘍作用を増大する。
これは、該抗血清が顆粒球の腫瘍細胞認識力を高め、そ
れへのとりつきを容易にする結果、顆粒球（特に好中球
）の殺悪性腫瘍作用の効果が一段と向上をするためと推
定される。
れへのとりつきを容易にする結果、顆粒球（特に好中球
）の殺悪性腫瘍作用の効果が一段と向上をするためと推
定される。
この作用効果をガン治療に活用すべく開発したのが抗悪
性腫瘍血清とヒトＧ−Ｃ８Ｆを有効成分とする製剤の組
み合わせからなる本発明の悪性腫瘍治療用キットである
。
性腫瘍血清とヒトＧ−Ｃ８Ｆを有効成分とする製剤の組
み合わせからなる本発明の悪性腫瘍治療用キットである
。
本キットで用いられる抗悪性腫瘍血清は公知の方法で調
製されたものでよく、その投与量は通常成人−人当たり
０．１〜５ＣＣである。
製されたものでよく、その投与量は通常成人−人当たり
０．１〜５ＣＣである。
又、該抗悪性腫瘍血清の投与方法としては、本発明の抗
悪性腫瘍剤投与により顆粒球が増加し、それがピークと
なる約１時間前項に静脈注射等の注射によって投与する
のがよい。
悪性腫瘍剤投与により顆粒球が増加し、それがピークと
なる約１時間前項に静脈注射等の注射によって投与する
のがよい。
（実施例〕
以下本発明を参考例（ヒトＧ−Ｃ８Ｆの製造例）実験例
（薬理効果）、実施例（製剤例）をあげて説明するが、
本発明はこれらに限定されるものではない。
（薬理効果）、実施例（製剤例）をあげて説明するが、
本発明はこれらに限定されるものではない。
参考例１ （Ｇ−Ｃ８Ｆ産生細胞の培養によるヒトＧ
−Ｃ８Ｆの製造例） 特願昭５９−１５３２７３＠の実施例１に示す方法で樹
立したヒドロ腔底癌細胞由来のＧ−Ｃ３Ｆ産生細胞Ｊｔ
＋ｎ１ｌ１１ ”＋ １１％ ｋｌ ｒ％Ｌｍ 、ｔ
ｌｔｔ！”＃ＣＩ ｒｙ−リ１「１λまたは同様の方法
で樹立した細胞株ｃ Ｈｕ−２（Ｃ，Ｎ、Ｃ，）ｌ受託
番号ｌｌ−４８３Ｊ ）をウシ胎児血清を含有するＲＰ
ＭＩ １６４Ｃ）＠養液に浮遊した後、ローラーボト
ルにいれて回転培養を行った。細胞がローラーボトル内
壁に密に増殖したところで培養液を血清不含ＲＰＭＩ
１６４０にかえ、４日間培養後上清を回収。次いで血
清含有ＲＰＭＩ １６４０を加えて３日間培養した後
、培養液を血清不含ＲＰＭＩ １６４０に波音し、４
日間培養後上清を回収する。以下これを繰返し培養上清
を回収した。得られた血清不含培養上清を限界ろ過で約
１０００倍に濃縮し精製、次いで検定を行った。
−Ｃ８Ｆの製造例） 特願昭５９−１５３２７３＠の実施例１に示す方法で樹
立したヒドロ腔底癌細胞由来のＧ−Ｃ３Ｆ産生細胞Ｊｔ
＋ｎ１ｌ１１ ”＋ １１％ ｋｌ ｒ％Ｌｍ 、ｔ
ｌｔｔ！”＃ＣＩ ｒｙ−リ１「１λまたは同様の方法
で樹立した細胞株ｃ Ｈｕ−２（Ｃ，Ｎ、Ｃ，）ｌ受託
番号ｌｌ−４８３Ｊ ）をウシ胎児血清を含有するＲＰ
ＭＩ １６４Ｃ）＠養液に浮遊した後、ローラーボト
ルにいれて回転培養を行った。細胞がローラーボトル内
壁に密に増殖したところで培養液を血清不含ＲＰＭＩ
１６４０にかえ、４日間培養後上清を回収。次いで血
清含有ＲＰＭＩ １６４０を加えて３日間培養した後
、培養液を血清不含ＲＰＭＩ １６４０に波音し、４
日間培養後上清を回収する。以下これを繰返し培養上清
を回収した。得られた血清不含培養上清を限界ろ過で約
１０００倍に濃縮し精製、次いで検定を行った。
精製及び検定は前記特願［１ｉ５９−１５３２７３号明
細店の実施例と同じ方法で行った。
細店の実施例と同じ方法で行った。
参考例２
（遺伝子組換えによるヒトＧ−Ｃ３Ｆの製造例）本出願
人によって微工研に寄託されているエシェリヒア・コリ
（Ｅ、Ｃｏ１１）χ１７７６Ｒ−２株（ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−９５５＞から切り出してぎたヒトＧ−Ｃ３Ｆ遺伝子
を有するＣＤＮＡ断片をベクターｐｄＫＣＲに組み込み
ｐｆ−ＩＧＶ２プラスミドとした後これを５ａｌＩで処
理し、次いでＤＮＡポリメラーゼ−にｌｅｎｏｗ断片を
反応させる。
人によって微工研に寄託されているエシェリヒア・コリ
（Ｅ、Ｃｏ１１）χ１７７６Ｒ−２株（ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−９５５＞から切り出してぎたヒトＧ−Ｃ３Ｆ遺伝子
を有するＣＤＮＡ断片をベクターｐｄＫＣＲに組み込み
ｐｆ−ＩＧＶ２プラスミドとした後これを５ａｌＩで処
理し、次いでＤＮＡポリメラーゼ−にｌｅｎｏｗ断片を
反応させる。
このＤＮＡｋ：ＥｃｏＲＩリンカ−を付加し、再びＥＣ
０ＲＩで部分消化した後、アガロースゲル電気泳動にて
約２．７Ｋｂのフラグメントを回収する。
０ＲＩで部分消化した後、アガロースゲル電気泳動にて
約２．７Ｋｂのフラグメントを回収する。
一方、ｐＡｄＤ２６ＳＶｐＡプラスミド（Ｋａｕ ｆｍ
ａｎ、 Ｒ，Ｇ、 ＆ ５ｈａｒｐ、 Ｐ、 Ａ、 （
１９８２）Ｈｏ１．Ｃｅｌ １． Ｂｉｏｌ、 ２巻１
３０４−〜１３１９）をＥＣ０ＲＩで処理し、８ＡＰ処
理し、脱リン酸覆る。次でフェノール処理後電気泳動で
ｐＡｄＤ２６ＳＶｐＡのＥＣ０ＲＩ断片を回収した。
ａｎ、 Ｒ，Ｇ、 ＆ ５ｈａｒｐ、 Ｐ、 Ａ、 （
１９８２）Ｈｏ１．Ｃｅｌ １． Ｂｉｏｌ、 ２巻１
３０４−〜１３１９）をＥＣ０ＲＩで処理し、８ＡＰ処
理し、脱リン酸覆る。次でフェノール処理後電気泳動で
ｐＡｄＤ２６ＳＶｐＡのＥＣ０ＲＩ断片を回収した。
上記の２．７ｋｂ断片とｐＡｄＤ２６ＳＶｐＡ断片をア
ニールし、Ｅ、ｃｏ Ｉ ｉ ＤＨＩ株に塩化ルビジ
ウム法により形質転換してｐ）−ＩＧＶ２−ｄｈｆｒプ
ラスミドを得た； つぎにＣＨＯ細胞（ｄｈｆｒ’″株、コロンビア大学叶
、Ｌ、Ｃｈａｓｉｎより入手）を９ｒｍ径のプレート（
ＮＵｎｃ社製）中１０％仔牛血清を含むα最小必チ几培
地チミジン添加）で培養増殖し、これをリン酸−カルシ
ウム法（Ｗｉ（ｌｌｅｒ’等、Ｃｅ１ｌ１４１７２５頁
（１９７８） ）によって形質転換した。
ニールし、Ｅ、ｃｏ Ｉ ｉ ＤＨＩ株に塩化ルビジ
ウム法により形質転換してｐ）−ＩＧＶ２−ｄｈｆｒプ
ラスミドを得た； つぎにＣＨＯ細胞（ｄｈｆｒ’″株、コロンビア大学叶
、Ｌ、Ｃｈａｓｉｎより入手）を９ｒｍ径のプレート（
ＮＵｎｃ社製）中１０％仔牛血清を含むα最小必チ几培
地チミジン添加）で培養増殖し、これをリン酸−カルシ
ウム法（Ｗｉ（ｌｌｅｒ’等、Ｃｅ１ｌ１４１７２５頁
（１９７８） ）によって形質転換した。
即ら、前記のｐｆ−ＩＧＶ２−ｄ ｈ ｆ ｒプラスミ
ド１μ９にキャリアーＤＮＡ （子牛胸腺ＤＮＡ）を適
量加えて、ＴＥ溶液３７５μｇに溶解し１ＭＣａＣρ２
１２５μｇを加える。３〜５分氷上で冷やし５００μＪ
）の２ＸＨＢＳ （５０ｍＭ ＨｅｐｅＳ、２８０ ｍ
ＨＮａＣＮ １１．５ ｍＭ リン酸緩衝液）を加え再
び水冷後、上記のＣＨＯ細胞培養液１ｒｒＩｌと混合し
、プレートに移し、ＣＯ２イン１〜ユベーター中で９時
間培養でる。
ド１μ９にキャリアーＤＮＡ （子牛胸腺ＤＮＡ）を適
量加えて、ＴＥ溶液３７５μｇに溶解し１ＭＣａＣρ２
１２５μｇを加える。３〜５分氷上で冷やし５００μＪ
）の２ＸＨＢＳ （５０ｍＭ ＨｅｐｅＳ、２８０ ｍ
ＨＮａＣＮ １１．５ ｍＭ リン酸緩衝液）を加え再
び水冷後、上記のＣＨＯ細胞培養液１ｒｒＩｌと混合し
、プレートに移し、ＣＯ２イン１〜ユベーター中で９時
間培養でる。
以下洗浄、２０％グリセロール含有ＴＢＳ（Ｔｒｉｓ−
ｂｕｆｆｅｒｅｄ ５ａｌｉｎｅ）添加、再び洗浄した
後非選択培地（前出α−ＭＥＭ培地、ヌクレオシド添加
）を添加して２日間インキュベートし、選択ｊ８地で１
：１０に細胞を分割した。次いで２日毎に選択培地（ヌ
クレオシド無添加）にて培地交換を行いながら培養を続
行し生じた集塊（ｆＯｃ ｉ ）を選別して新しいプレ
ートに移した。
ｂｕｆｆｅｒｅｄ ５ａｌｉｎｅ）添加、再び洗浄した
後非選択培地（前出α−ＭＥＭ培地、ヌクレオシド添加
）を添加して２日間インキュベートし、選択ｊ８地で１
：１０に細胞を分割した。次いで２日毎に選択培地（ヌ
クレオシド無添加）にて培地交換を行いながら培養を続
行し生じた集塊（ｆＯｃ ｉ ）を選別して新しいプレ
ートに移した。
新しいプレートでは０．０２μＭメトトレキセート（Ｍ
−ｒＸ）存在下で増殖し再び０．１μＭＭ−ｒＸ存在下
で増殖させてクローニングを行った。
−ｒＸ）存在下で増殖し再び０．１μＭＭ−ｒＸ存在下
で増殖させてクローニングを行った。
更にクローニングを続けた結果１０ｍｙ／Ｊ以上のヒト
Ｇ−Ｃ８Ｆの生産を確認した。
Ｇ−Ｃ８Ｆの生産を確認した。
なお、精製、検定は特願昭６０−２６９４５６ ＠明細
書の実施例２及び１５の記載の方法によって行った。
書の実施例２及び１５の記載の方法によって行った。
実験例１
（顆粒球の殺黒色腫細胞（ＨＭＶ）効果と添加抗＋１Ｍ
Ｖ血清及びヒトＧ−Ｃ３Ｆ濃度変動の影響〕ｄｅＸｔｒ
ａｎ沈隋法、Ｆｉｃｏｌ １−ＨＶｐａＱ（Ｊｅ（１，
０７７）重層遠心法、低張ショック赤血球除去法を用い
て、健常者末梢血顆粒球を分離したく純度及び生細胞率
９０％以上）。分離された細胞に種々の濃度のヒトＧ−
Ｃ３Ｆを添加し培養液中で３１℃、１時間インキュベー
トした後、洗浄し、ヒト成熟顆粒球の調製をした。
Ｖ血清及びヒトＧ−Ｃ３Ｆ濃度変動の影響〕ｄｅＸｔｒ
ａｎ沈隋法、Ｆｉｃｏｌ １−ＨＶｐａＱ（Ｊｅ（１，
０７７）重層遠心法、低張ショック赤血球除去法を用い
て、健常者末梢血顆粒球を分離したく純度及び生細胞率
９０％以上）。分離された細胞に種々の濃度のヒトＧ−
Ｃ３Ｆを添加し培養液中で３１℃、１時間インキュベー
トした後、洗浄し、ヒト成熟顆粒球の調製をした。
次に一定数のヒト悪性黒色腫細胞株（１−ＩＭＶ）をマ
イクロプレート中で庇訓ｙ−／ｌｌＩ飽１】＜存分「ウ
ェル底に付着したところで表１に示す各濃度のウリギ正
常血清又は抗ＨＭＶ血清と上記の調製済みの一定数の成
熟顆粒球を添加し、３７℃、２４時間培養した。その後
各ウェルを培養液で洗浄し、付着して生存している細胞
の数を染色後算定した。
イクロプレート中で庇訓ｙ−／ｌｌＩ飽１】＜存分「ウ
ェル底に付着したところで表１に示す各濃度のウリギ正
常血清又は抗ＨＭＶ血清と上記の調製済みの一定数の成
熟顆粒球を添加し、３７℃、２４時間培養した。その後
各ウェルを培養液で洗浄し、付着して生存している細胞
の数を染色後算定した。
結果を表１に示す。
表１から明らかな通り、ヒトＧ−Ｃ３Ｆを添加し調製し
た顆粒球は無添加の場合に比べ約２〜４倍の殺ＨＭＶ効
果が認められ、且つ抗）−ＩＭＶ而清面添加するとその
傾向がいっそう顕著となる。
た顆粒球は無添加の場合に比べ約２〜４倍の殺ＨＭＶ効
果が認められ、且つ抗）−ＩＭＶ而清面添加するとその
傾向がいっそう顕著となる。
又、ヒトＧ−Ｃ３Ｆとのインキュベートによる顆粒球の
殺トＩＭＶ効果の増強の程度にはヒトＧ−Ｃ３Ｆの濃度
と明らかな相関がみられる。
殺トＩＭＶ効果の増強の程度にはヒトＧ−Ｃ３Ｆの濃度
と明らかな相関がみられる。
これらの結果はヒトＧ−Ｃ３Ｆがヒト成熟顆粒球の殺）
−ＩＭＶ作用を著しく亢進することを明らかにしている
。
−ＩＭＶ作用を著しく亢進することを明らかにしている
。
（以下余白）
実験例２
〔顆粒球の殺黒色腫細胞効果と添加ヒｔ−Ｇ−Ｃ３「及
び抗日ＭＶ血清淵度変動の影響〕 一定数のｌ−ＩＭＶをマイクロプレート中で培養し、生
細胞が充分にウェル底に付着したところで表２に示す各
ｔａの抗）ＩＭＶ血清又は正常血清を添加し、次で実験
例１と同様にして調製した活性化顆粒球又は非活性化顆
粒球を加え、３７℃、２４時間インキュベートした。そ
の後各ウェルを培養液で洗浄し付着生存している細胞の
数を染色後駄ン定した。
び抗日ＭＶ血清淵度変動の影響〕 一定数のｌ−ＩＭＶをマイクロプレート中で培養し、生
細胞が充分にウェル底に付着したところで表２に示す各
ｔａの抗）ＩＭＶ血清又は正常血清を添加し、次で実験
例１と同様にして調製した活性化顆粒球又は非活性化顆
粒球を加え、３７℃、２４時間インキュベートした。そ
の後各ウェルを培養液で洗浄し付着生存している細胞の
数を染色後駄ン定した。
結果を表２に示す。
表２より明らかな通り、殺＋１ＭＶ効果は正常血清の存
在下では影響されないが、抗ＨＭＶ血清の存在下ではそ
の濃度に依存して最高約３０倍に増強される。
在下では影響されないが、抗ＨＭＶ血清の存在下ではそ
の濃度に依存して最高約３０倍に増強される。
又、実験例１の結果と同様にヒトＧ−Ｃ３ｆ’で活性化
された顆粒球はヒトＧ−Ｃ８Ｆを用いた非活ｆ′ｔの顆
粒球に比べ殺ＨＭＶ効果が正常血清添加下でも２倍以上
優れており、この差は抗）−ＩＭＶ血消存在下ではより
顕著になることがわかる。
された顆粒球はヒトＧ−Ｃ８Ｆを用いた非活ｆ′ｔの顆
粒球に比べ殺ＨＭＶ効果が正常血清添加下でも２倍以上
優れており、この差は抗）−ＩＭＶ血消存在下ではより
顕著になることがわかる。
これらの結果はヒトＧ−Ｃ３Ｆが抗）−ＩＭＶ血を存在
下でヒト成熟顆粒球の殺ＨＭＶ作用をｆｌ著に亢進ｕし
める動きがあることを示している。
下でヒト成熟顆粒球の殺ＨＭＶ作用をｆｌ著に亢進ｕし
める動きがあることを示している。
（以下余白）
実験例３
〔ヒトＧ−Ｃ３ｒ−゛の有無と顆粒球又はリンパ球の各
種腫瘍細胞に対する殺効果〕 実験例１と同様にして釘當者末梢血顆粒球及びリンパ球
を分離し、ヒトＧ−Ｃ３Ｆを添加後インキュベートし、
活性化させた。コントロールとしてはヒトＧ−Ｃ３Ｆを
添加′Ｕずに同様にインキュベートしたものを用意した
。
種腫瘍細胞に対する殺効果〕 実験例１と同様にして釘當者末梢血顆粒球及びリンパ球
を分離し、ヒトＧ−Ｃ３Ｆを添加後インキュベートし、
活性化させた。コントロールとしてはヒトＧ−Ｃ３Ｆを
添加′Ｕずに同様にインキュベートしたものを用意した
。
一７’Ｊ、表３に示す各腫瘍細胞に上記の活性化顆粒球
又は非活性化顆粒球もしくはリンパ球を加え、インキュ
ベートし、各種１１！Ｉ！瘍細胞のＤＮＡ合成を［３Ｈ
ｌサイミジンの取り込み率でみた。結果を表３に示す。
又は非活性化顆粒球もしくはリンパ球を加え、インキュ
ベートし、各種１１！Ｉ！瘍細胞のＤＮＡ合成を［３Ｈ
ｌサイミジンの取り込み率でみた。結果を表３に示す。
表３より明らかな通り、ＩＩＭＶだけでなく他の腫瘍細
胞に対しでもヒトａ−ｃｓｒは成熟顆粒球の殺腫瘍細胞
作用を亢進させることが認められる。
胞に対しでもヒトａ−ｃｓｒは成熟顆粒球の殺腫瘍細胞
作用を亢進させることが認められる。
一方リンパ球には顆粒球のような効果は認められない。
（以下余白）表３
Ｇ−Ｃ３Ｆ有無と顆粒球及びリンパ球の各種腫瘍細胞の
殺効果 単位：ｃｐｍ 上記の実験の結果をまとめると前述した通り、■ヒトＧ
−Ｃ３Ｆ存在下で前町首した顆粒球は、非存在下でＷ置
した顆粒球に比べて約２〜４倍の殺１−Ｉ Ｍ Ｖ効果
が認められた。
殺効果 単位：ｃｐｍ 上記の実験の結果をまとめると前述した通り、■ヒトＧ
−Ｃ３Ｆ存在下で前町首した顆粒球は、非存在下でＷ置
した顆粒球に比べて約２〜４倍の殺１−Ｉ Ｍ Ｖ効果
が認められた。
■殺ＨＭＶ効果は正常ウリギ血漬の存在下で影響されな
いが、抗）−ＩＭＶ血清の存在下ではぞの濃度に依存し
て最高１０〜３０倍に増強した。
いが、抗）−ＩＭＶ血清の存在下ではぞの濃度に依存し
て最高１０〜３０倍に増強した。
■ヒ］−〇−Ｃ３Ｆとの前装置による顆粒球の殺＋−Ｉ
ＭＶ効果の増強の程度は、ヒトＧ−Ｃ３Ｆの濃度と明ら
かな相関があった。
ＭＶ効果の増強の程度は、ヒトＧ−Ｃ３Ｆの濃度と明ら
かな相関があった。
■上記の傾向はＩＩＭＶ以外の腫瘍細胞に対しても同様
に認められた。
に認められた。
したがって、ヒトＧ−Ｃ３Ｆはヒト成熟顆粒球の殺腫瘍
細胞作用（特に抗腫瘍血清存在下で）を若し’ＵＣ進さ
せることが確認された。
細胞作用（特に抗腫瘍血清存在下で）を若し’ＵＣ進さ
せることが確認された。
実施例１（製剤例）
参考例１によって得られ且つ精製されたヒトＧ−Ｃ８Ｆ
を無菌処理した後−２０℃で凍結された凍結物を用いて
注射剤とした。
を無菌処理した後−２０℃で凍結された凍結物を用いて
注射剤とした。
実施例２（製剤例）
参考例２によって得られ且つ精製されたヒトＧ−Ｃ３Ｆ
を無菌操作で１０ｔｔｄｌバイアル瓶に５ｄ充填し、−
２０℃で２１１結乾燥後ゴム栓にて施栓した凍結乾燥物
を用いて注射剤とした。
を無菌操作で１０ｔｔｄｌバイアル瓶に５ｄ充填し、−
２０℃で２１１結乾燥後ゴム栓にて施栓した凍結乾燥物
を用いて注射剤とした。
（発明の効果〕
本発明の抗悪性腫瘍剤は人の体にもともと存在している
じト成熟顆粒球の抗ＪＥＴ’瘍作用を純化されたヒ］へ
Ｇ−Ｃ３Ｆによって増強し、且つ抗腫瘍細胞血ｆｆｉを
（Ｊｆ存ｕしめることによって、さらに一段と増強させ
、この作用にもとづいて悪性腫瘍を治療しようとづるも
のであり、副作用の少ないガン治療剤となる期待が大ぎ
い。
じト成熟顆粒球の抗ＪＥＴ’瘍作用を純化されたヒ］へ
Ｇ−Ｃ３Ｆによって増強し、且つ抗腫瘍細胞血ｆｆｉを
（Ｊｆ存ｕしめることによって、さらに一段と増強させ
、この作用にもとづいて悪性腫瘍を治療しようとづるも
のであり、副作用の少ないガン治療剤となる期待が大ぎ
い。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ ヒト顆粒球コロニー刺激因子を有効成分とする抗悪
性腫瘍剤。 ２ 悪性腫瘍が悪性黒色腫であることを特徴とする特許
請求の範囲第１項記載の抗悪性腫瘍剤。 ３ ヒト顆粒球コロニー刺激因子が好中球コロニー刺激
因子であることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載
の抗悪性腫瘍剤。 ４ ヒト顆粒球コロニー刺激因子がヒト顆粒球コロニー
刺激因子産生細胞の培養上清から得られたものであるこ
とを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の抗悪性腫瘍
剤。 ５ ヒト顆粒球コロニー刺激因子が次の理化学的性質を
有するものであることを特徴とする特許請求の範囲第１
項記載の抗悪性腫瘍剤。 「理化学的性質」 （１）分子量：ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリル
アミドゲル電気泳動法による測定で １９，０００±１，０００。 （２）等電点：ｐＩ＝５．５±０．１、ｐＩ＝５．８±
０．１、ｐＩ＝６．１±０．１の三つの等電点のう ち少なくとも１つを有する。 （３）紫外部吸収：２８０ｎｍに極大吸収を有し、２５
０ｎｍに極小値をもつ。 （４）Ｎ末端から２１残基目迄のアミノ酸配列が次の如
くである。 【アミノ酸配列があります】 ６ ヒト顆粒球コロニー刺激因子がヒト顆粒球コロニー
刺激因子活性を有するポリペプチドをコードする遺伝子
を含む組換えベクターを含有する形質転換体から産生さ
れたヒト顆粒球コロニー刺激因子活性を有するポリペプ
チドまたは糖蛋白質であることを特徴とする特許請求の
範囲第１項に記載の抗悪性腫瘍剤。 ７ ヒト顆粒球コロニー刺激因子活性を有するポリペプ
チドが下記のアミノ酸配列またはその一部で表わされる
特許請求の範囲第１項に記載の抗悪性腫瘍剤。 【アミノ酸配列があります】（但しｍは０又は１を表わ
し、ｎは０又は１を表わす） ８ ヒト顆粒球コロニー刺激因子活性を有する糖蛋白質
が下記のアミノ酸配列またはその一部で表わされるポリ
ペプチドと糖鎖部とを有するものである特許請求の範囲
第１項に記載の抗悪性腫瘍剤。 【アミノ酸配列があります】 【アミノ酸配列があります】（ただしｍは０または１を
表わす）。 ９ 抗ヒト悪性腫瘍血清とヒト顆粒球コロニー刺激因子
を有効性分とする製剤の組み合わせからなる悪性腫瘍治
療用キット。 １０ 悪性腫瘍が悪性黒色腫であることを特徴とする特
許請求の範囲第９項記載の悪性腫瘍治療用キット。 １１ ヒト顆粒球コロニー刺激因子が好中球コロニー刺
激因子であることを特徴とする特許請求の範囲第９項記
載の悪性腫瘍治療用キット。 １２ ヒト顆粒球コロニー刺激因子がヒト顆粒球コロニ
ー刺激因子産生細胞の培養上清から得られたものである
ことを特徴とする特許請求の範囲第９項記載の悪性腫瘍
治療用キット。 １３ ヒト顆粒球コロニー刺激因子が次の理化学的性質
を有するものであることを特徴とする特許請求の範囲第
９項記載の悪性腫瘍治療用キット。 「理化学的性質」 （１）分子量：ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリル
アミドゲル電気泳動法による測定で １９，０００±１，０００。 （２）等電点：ｐＩ＝５．５±０．１、ｐＩ＝５．８±
０．１、ｐＩ＝６．１±０．１の三つの等電点のう ち少なくとも１つを有する。 （３）紫外部吸収：２８０ｎｍに極大吸収を有し、２５
０ｎｍに極少値をもつ。 （４）Ｎ末端から２１残基目迄のアミノ酸配列が次の如
くである。 【アミノ酸配列があります】 １４ ヒト顆粒球コロニー刺激因子がヒト顆粒球コロニ
ー刺激因子活性を有するポリペプチドをコードする遺伝
子を含む組換えベクターを含有する形質転換体から産生
されたヒト顆粒球コロニー刺激因子活性を有するポリペ
プチドまたは糖蛋白質であることを特徴とする特許請求
の範囲第９項に記載の悪性腫瘍治療用キット。 １５ ヒト顆粒球コロニー刺激因子活性を有するポリペ
プチドが下記のアミノ酸配列またはその一部で表わされ
る特許請求の範囲第９項に記載の悪性腫瘍治療用キット
。 【アミノ酸配列があります】 【アミノ酸配列があります】（但しｍは０又は１を表わ
し、ｎは０又は１を表わす） １６ ヒト顆粒球コロニー刺激因子活性を有する糖蛋白
質が下記のアミノ酸配列またはその一部で表わされるポ
リペプチドと糖鎖部とを有するものである特許請求の範
囲第９項に記載の悪性腫瘍治療用キット。 【アミノ酸配列があります】 【アミノ酸配列があります】（ただしｍは０または１を
表わす）。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61-215035 | 1986-09-13 | ||
| JP21503586 | 1986-09-13 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8184245A Division JP2697725B2 (ja) | 1986-09-13 | 1996-06-26 | 悪性腫瘍治療用キット |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63190830A true JPS63190830A (ja) | 1988-08-08 |
| JP2589094B2 JP2589094B2 (ja) | 1997-03-12 |
Family
ID=16665674
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62226450A Expired - Lifetime JP2589094B2 (ja) | 1986-09-13 | 1987-09-11 | 抗悪性腫瘍剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2589094B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH05503574A (ja) * | 1990-01-31 | 1993-06-10 | アルフレッド・テヴェス・ゲーエムベーハー | 作動伝達液の状態を測定するための装置 |
| JP2009143942A (ja) * | 2000-04-12 | 2009-07-02 | Univ Of British Columbia | 造血細胞のｃｘｃｒ４アゴニスト処理 |
-
1987
- 1987-09-11 JP JP62226450A patent/JP2589094B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH05503574A (ja) * | 1990-01-31 | 1993-06-10 | アルフレッド・テヴェス・ゲーエムベーハー | 作動伝達液の状態を測定するための装置 |
| JP2009143942A (ja) * | 2000-04-12 | 2009-07-02 | Univ Of British Columbia | 造血細胞のｃｘｃｒ４アゴニスト処理 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2589094B2 (ja) | 1997-03-12 |
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Legal Events
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