JPS63209595A - β−１，４−マンノビオ−スの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明はβ−１，４−マンノビオースの製造法、更に詳
細には、糖鎖の合成原料あるいは医薬として有用なβ−
１，４−マンノビオース（以下、単にマンノビオースと
いうことがある）の製造法に関する。

（従来の技術及びその問題点） マンノビオースは、Ｄ−マンノースがβ−１，４−グリ
コシド結合で２個結合した２ｔＪ！類で、例えばマンナ
ンを酵素又は酸で部分的に加水分解し、加水分解液から
精製・単離することにより得られる。

従来、このβ−１，４−グリコシド結合を切断する酵素
としては、例えばアスペルギルス属、バチルス属、トリ
コデルマ属、ストレプトミセス属、ペニシリウム属等に
属する微生物が産生ずるβ−マンナナーゼが知られてい
る。

しかしながら、従来知られているβ−マンナナーゼは活
性が低く、これをマンナン等に作用させた場合、いずれ
も加水分解あるいは部分加水分解の結果、マンノビオー
ス以外にＤ−マンノース、マンノトリオース、その他の
オリゴ糖が生成し、更に糖化率も悪く特にマンノビオー
スのみ生産する目的には有利なものとは云えなかった。

最近、放線菌であるストレプトミセス・エスピー　（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｌｅｙｃｅｓ　ｓｐ、）　ｆｌｈ１７が産
生するβ−マンナナーゼは、従来のβ−マンナナーゼに
比ベマンノビオースを多量に生成することが報告された
〔Ｊａｐａｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｔｒｏｐ
ｉｃａｌ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ。

２９　　＋３１．１６７−１７２　（１９８５）　）が
、このβ−マンナナーゼによりコブラマンナンを加水分
解して、Ｄ−マンノース１２重量％（以下、単に％で示
す）、マンノビオース７１％、マンノトリオース９％、
オリゴｖａ８％の糖組成物を得ているにすぎない。

つまりストレプトミセス・エスピー４１７の産生ずるβ
−マンナナーゼは、■活性が低くマンノビオースの生産
効率が悪い、■マンノビオースと共晶を形成するマンノ
トリオースの生産量が多いため、マンノビオースの単離
が困難である、及び■マンノトリオース同様分離が困難
なガラクトマンノオリゴ糖を生成する等の欠点を有して
いた。

また、酸による部分加水分解による方法は、マンノビオ
ースのみ製造する目的には不適当である点で、従来のβ
−マンナナーゼによる方法と同様の欠点を有していた。

（問題点を解決するための手段） 本発明者は、かかる実情において、マンノビオースの製
造に更に適した活性を有するβ−マンナナーゼ含有組成
物を産生ずる微生物を自然界から検索した結果、フィリ
ピンの土壌から分離したペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌ
ｌｉｕｍ）属に属する微生物が、■マンナンに対し高い
分解活性を有するβ−マンナナーゼ含有組成物を産生ず
ること、■これをマンナン又はマンナン含有天然物に作
用させた場合、驚くべきことにマンノトリオースをほと
んど生成せずマンノビオースを選択的に生成すること、
かつ、■このβ−マンナナーゼ含有組成物はβ−ガラク
トシダーゼ活性を有するため、コブラマンナンのような
ガラクトマンナンをマンノビオースにまで加水分解する
ことができ、ガラクトマンノオリゴ糖を生成しないこと
を見出し、本発明を完成した。

すなわち本発明は、次の理化学的性質、■作用 β−マンナナーゼ活性及びβ−ガラクトシダーゼ活性を
有し、マンナンに作用して、主としてβ−１，４−マン
ノビオースを生成し、マンノトリオースをほとんど生成
しない。

■基質特異性 マンナン、ガラクトマンナンに特異的に作用するが、キ
シラン、セルロースには作用しない。

■至適ｐＨ及び安定ｐＨ範囲 至適ｐＨは約５．８、安定ｐｌ＋範囲は約４〜約８であ
る。

■至適温度 約４０〜約６０℃ ■ｐＨによる失活の条件（３０℃） ｐｏｓ、ｓで３時間保持した時の活性を１００％とする
とき、ｐ１１２で約６５％、ｐ）１４で約９０％及びｐ
Ｈ８で約９５％の活性がある。

■温度による失活の条件（ｐＨ５，８）温度５０℃で３
時間保持した時の活性を１００％とするとき、４０℃で
約１００％、７０℃で約４０％の活性がある。

を有する、β−マンナナーゼ含有組成物を、マンナン又
はマンナン含有天然物に作用させる、：とを特徴とする
β−１，４−マンノビオースの製造法を提供するもので
ある。

本発明で使用されるβ−マンナナーゼ含有組成物として
は、例えばペニシリウム属に属するβ−マンナナーゼ生
産菌を培養して得られる培養液、特に好ましくは培養ろ
液等が挙げられる。ペニシリウム属に属するβ−マンナ
ナーゼ生産菌としては、例えばペニシリウム・　パープ
ルゲナム　（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　　ｐｕｒｐｕｒ
ｏｇｅｎｕｍ）　、ペニシリウム′クリソゲナム（Ｐ、
ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕ＋＋）、ペニシリウム゛エクスパ
ンサム（Ｐ、ｅｘｐａｎｓｕｍ）　、ペニシリウム・フ
ニクロサム（Ｐ、　ｆｕｎｉｃｕｌｏｓｕｍ）　％ペニ
シリウム・イサリフォーム（Ｐ、ｉｓａｒｉｉｆｏｒｍ
ｅ）、ペニシリウム・オクロ−クロロン（Ｐ、ｏｃｈｒ
ｏ−ｃｈｔｏｒｏｎ）　、ペニシリウム・ビスカリウム
（Ｐ、ｐｉｓｅａｒｉｕｍ）　、ペニシリウム・パルク
ロサム（Ｐ、　ｖｅｒｒｕｅｕ　Ｉｏｓｕｍ）、ペニシ
リウム・フォートマンニ（Ｐ、ｗｏｒｔｍａｎｎｉ）等
が挙げられる０例えば、ペニシリウム・パープルゲナム
陽６１８は本発明者が見出した新閑株であって、次の菌
学的性質を有する。

（１）培地における生育状態 ■麦芽寒天培地 麦芽寒天培地での生育は５℃では全く起こらず、２５℃
では７日間でコロニーの直径が３〜４０に達する。性状
はビロード状である。１４日間でコ１７二−の直径は７
〜８ｏｍに達し、中心部より順次分生子形成し、それに
従ってくすんだ黄緑色、かんらん緑色、灰緑色等を生ず
る。集落裏面に一部赤色部があり、りんご様の芳香がす
る。３７℃の生育では７日間ではコロニーの直径が５〜
６ｃ１１に達する。１４日間ではコロニーの直径が８〜
９ｃｍに達し、良く分生子形成し、色は黄緑から灰緑色
になる。コロニーの裏面は中心部が赤色である。

■ツアペック寒天培地 ツアペック寒天培地での生育は５℃では全く起こらない
。２５℃では７日間でコロニーは直径１〜２ｃ＋１に達
し、性状はビロード状である。１４日間ではコロニーの
直径が３〜４ｃｍに達するが分生子は形成しない、３７
℃の生育では７日間でコロニーの直径が１〜２ｏである
。１４日間でコロニーは４〜５０に達し中心部が灰緑色
となる。

■ワックスマン氏寒天培地 ワックスマン氏寒天培地での生育は５℃では起こらない
、２５℃では７日間でコロニーの直径が４〜５Ｃ１１に
達し、コロニーの性状は白いビロード状である。１４日
間ではコロニーの直径は７〜８１に達し、分生子部分の
色は灰緑色で、コロニーの裏面は赤色である。３７℃の
生育では７日間でコロニーの直径が４〜５１に達し、性
状はビロード状である。１４日間でコロニーの直径は７
〜８０に達し、コロニーの分生子部分は灰緑色となる。

■ポテト・デキストロース寒天培地 ポテト・デキストロース寒天培地での生育は５℃では起
こらない、２５℃では７日間でコロニーの直径は５〜６
ｏに達し、性状は白いうすいビロード状である。１４日
間ではコロニーの直径は８〜９１に達する。３７℃の生
育では７日間でコロニーの直径が５〜６１に達し、性状
は白いビロード状である。１４日間でコロニーの直径は
８〜９Ｇに達する８分生子の形成は少ない。

（２）生理的、生態的性質 ■最適生育条件 ｐＨ５〜７ 温度３２〜３７℃ ■生育の範囲 ｐｉ（４〜８ 温度１５〜４５℃ ■その他、顕著な特徴 マンナン含有培地での培養によりβ−マンナナーゼを囲
体外に生産する。

（Ｊ顕微鏡的所見 ■分生子柄 滑面で直径は１００〜１５０Ｘ２．５〜３μである。

■ベニシリ 対称の複輪生体である。

■メトレ ４〜６本の末生を持ち、直径は１０〜１５×３μである
。

■フィアライド ４〜６本の輪生を持ち直径は１０〜１２×２〜２．５μ
である。

■分生子 形状は亜球形で直径は２．５〜３　Ｘ　２．５〜３μで
ある。

以上の菌学的性質を「ア・マニュアル・オブ・ザ・ベニ
シリア（Ａ　ＭＡＮＬＩＡＬ　ＯＦ　Ｔｈｅ　ＰＥＮＩ
ＣＩＬＬＩ＾）」（１９４９）　Ｃケネス　ビー、レー
バー及びチャールズトム　（ＫＥＮＮＥＴＨＢ、　　Ｒ
ＡＰＥＲａｎｄ　ＣＨＡＲＬＥＳ　ＴＩＩＯＭ））　　
、［ザ・ジーナス・ペニシリウム・アンド・インク・テ
レオモルフインク・ステーブ・ニーペニシリウム・アン
ド・タラロミセス（Ｔｈｅ　　ｇｅｎｕｓＰＥＮＴＣＩ
ＬＬＩＵＭ　　　ａｎｄ　　ｉｔ’ｓ　　ｔｅｌｅｏｍ
ｏｒｆｈｉｃ　　ｓｔａｔｅｓｅｕｐｅｎｉｅｉｌｌｉ
ｕｍ　ａｎｄ　ｔａｌａｒｏｍｙｅｅｓ）Ｊ　（１９７
９）　（ジョン　アイ、ビット（Ｊｌ（ＯＮ　Ｔ、　Ｐ
ＩＴＴン〕及び「菌Ｍ図漏（下）　Ｊ　（１９７８）　
（椿啓介他）に照合し、その菌種を検索したところ、本
菌株は、ペニシリウム・パープルゲナムに属する。

更に、本菌株は、近似するペニシリウム・パープルゲナ
ム・ストール（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｐｕｒｐｕｒ
ｏｇｅｎｕ＋＊５ｔａｌｌ）と比較すると、ペニシリウ
ム・パープルゲナム・ストールは、３７℃での培養では
２５℃での培養に比べ生育が悪く、また、麦芽寒天培地
で集落裏面は無色でツアペック培地で裏面が赤くなると
上記文献に記載されているが、本菌株では、逆に３７℃
で生育状態が良く、また麦芽寒天培地で集落裏面に赤い
色素を生産する点で相異する。

従って、本発明者は、本菌株をペニシリウム・バーブル
ゲナム陽６１８と命名し、工業技術院微生物工業技術研
究所に微工研菌寄第９１８９号（ＦＥ［２Ｍ　Ｐ−９１
８９）として苓託した。

β−マンナナーゼ含有組成物を得るためには、ペニシリ
ウム属に属するβ−マンナナーゼ生産菌、例えばペニシ
リウム・バーブルゲナム磁６１８を栄養源含有培地に接
種して好気的に培養する。

培養に使用される栄養源としては、例えばコブラミル、
ヤシ殻等由来のマンナン等が好ましい。

コプラミルとは、ココナツヤシより油脂を搾油した残渣
で通常マンナンを約４５〜５０％含有している。窒素源
としては、例えば尿素、硝酸アンモニウム、硫酸アンモ
ニウム、酵母エキス、ペプトン、コーンステーブリカー
等を使用することができる。培地としては、更にリン酸
二水素カリウム、硫酸マグネシウム等の無機塩類を含む
ものが好適に使用される。

培養は、好ましくは培養温度３０〜４０℃、特に好まし
くは３２〜３７℃、初発ｐＨ５〜６で振盪培養等により
行なうことができる。かかる条件で培養を行なえば、培
養ろ液のβ−マンナナーゼ活性は、通常培養５日前後で
最高に達する。

かくして得られるβ−マンナナーゼ含有組成物を、マン
ナン又はマンナン含有天然物に作用させれば、マンノビ
オースを主成分とする加水分解液が得られる。

マンナンとしては、例えばココナツヤシ殻、ぞうげヤシ
殻、針葉樹等に由来するものが挙げられる。また、マン
ナン含有天然物としては、例えばココナツヤシ殻、ぞう
げヤシ殻等のマンナンを含有するものであれば何れをも
使用できるが、大量に生産され容易に入手できるものと
してコブラミルが特ムこ好適である。

β−マンナナーゼ含有組成物をマンナン又はマンナン含
有組成物に作用させるには、例えばβ−マンナナーゼ含
有培養液をろ過した後、ろ液に対して好ましくは１〜２
０％（Ｗ／Ｖ）、特に好ましくは７〜１０％（讐／ν）
のコブラミルをこのろ液に加え、好ましくはｐＨ４，５
〜８．０、特に好ましくはｐｌ＋５．５〜６，５．４０
〜５０℃で約２日間攪拌する。

かかる条件では、約２日間で加水分解が終了する。

かくして得られる加水分解液は、液体クロマｊ・グラフ
ィ分析によれば、原料の収穫期の差、菌の経時変化、培
養条件等によって異なるが、はぼ次のＮＭｉ成を有し、
マンノトリオース及びガラク）−マンノオリゴ糖をほと
んど含まない７ Ｄ−マンノース　　　　１〜２０％ マンノビオース　　６５〜９０％ マンノトリオース　　１〜３％ その他の単糖　　　　５〜１５％ なお、その他の単糖としては、例えばＬ−アラビノース
、Ｄ−ガラクト−ス、Ｄ−グルコース等が含まれる。

次いで、加水分解液からマンノビオースを単離する。

加水分解液がＤ−マンノースを多く含む場合には、この
ままではこの加水分解液からマンノビオースを結晶化す
ることは困難である。また、マンノ１−リオースは水に
対する溶解性が低いため、マンノビオースの結晶化の際
に共晶を生じ、マンノトリオースの含量が多い場合には
分離が困難となる。従って、加水分解液からマンノビオ
ースを単離するにはこれらのことを考慮して行なう必要
がある。尤も、叙上の如くして得られた加水分解液には
、マンノトリオースがほとんど含まれないため、主とし
てＤ−マンノースの除去を行なえばよく、Ｄ−マンノー
スを除去した加水分解液を濃縮、結晶化処理すれば、通
常純度が９８％以上のマンノビオースが単離できる。

加水分解液からＤ−マンノースを除去する方法としては
、例えばＤ−マンノースを酵母で資化する方法、あるい
はクロマト分離法等が挙げられる。

Ｄ−マンノースを酵母で資化する方法は常法に従って実
施するこ吉ができる。この場合、酵母はＤ−マンノース
を資化するがマンノＩ・リオースは資化しない。

また、クロマ１−分離法は、加水分解液を例えば金属塩
型イオン交換樹脂、ゼオライト等の無機物担体を充填し
たカラムに通し、マンノビオース画分を採取することに
より行なわれる。

（作用） 本発明に係るβ−マンナナーゼ含有組成物が、これをマ
ンナン等に作用させた場合、後記実施例に示す如く、マ
ンノビオースを極めて選択的に生成する作用機序は次の
ようであると考えられる。

すなわち、本発明に係るβ−マンナナ−・ゼ含有組成物
のβ−マンナナーゼはエンド型β−マンナナーゼと考え
られる。そし２て、このエンド型β−マンナナーゼはマ
ンナンをランダムに切断する。しかし、一旦生成したマ
ンノビオースには全く作用せず、マンノトリオースへの
作用性がやや弱い。

７、マンノース単位に切断されたものは再結合によって
２１１！以上の糖に合成される。このため、通常は、最
終的にはマンノビオースとマンノトリオースの混合物が
生成する。

しかしながら、本発明に係るβ−マンナナーゼ含有組成
物の活性は極めて高いため、マンノトリオースの生成量
が少なくなっている。このβ−マンナナーゼ含有組成物
の活性は、例えばこれにマンナン等のみ加えることによ
り作用させる場合、８ｕ／培養液ｌｌ１１以上であるこ
とが好ましく、活性の低下に従いマンノトリオースの生
成量は増加する。

このことは、例えば後記実施例１において、培養液を希
釈し、酵素活性を低下させた以外は実施例１と同様にマ
ンナンに作用させたところ、４８時間加水分解後のる液
中の糖含有量が減少したのみならず、マンノトリオース
含有率が増加したことによって裏づけられる。

（実施例） 次に実施例、参考例及び比較例により本発明を説明する
。

なお、本発明に係るβ−マンナナーゼ含有組成物の活性
は次に示す方法で測定した。

ｐＨ５，８のマツクルへインバッファー水溶１４ｍβ、
蒸溜水５Ｉｌｌと粉砕した脱脂コブラミル１５０■を１
５分間５０℃でインキュベートし、被検液ｌ１１１を加
え５０℃で３０分間反応させた。反応液に生じた還元糖
をソモギー法により定量する。被検液ｌ　Ｉｌｌが１分
間に還元糖１■を遊離する時の値を１単位（ｕ）と定義
する。

参考例１ β−マンナナーゼ生産菌、ペニシリウム・パープルゲナ
ム患６１８は、次の方法により分離した。

フィリピンの土壌０．５ｇを滅菌水ＩＱｍ６で懸濁し、
その０．５ｍｆｆ１を滅菌水１０ｍｌ１に懸濁し、更に
その０．５＋ｗＩｌを滅菌水１０ｍｆｆに懸濁し、その
−滴をシャーレ中のマンナン寒天培地に滴下し、表面に
広げる。生えてきたコロニー中周囲に透明帯（マンナン
溶解部分）のあるものを分離、採取し、約５００検体を
スラント化した。この各スラントを１００ＩＩＩ！坂ロ
フラスコで振盪培養を行ないβ−マンナナーゼ活性を測
定し、活性のあるものを５０検体選択した。更に１００
ｍｊ！坂ロフラスコで振盪培養を行ないβ−マンナナー
ゼ活性を測定し、最も活性のある本面を得た。

参考例２ コブラミル４％、ＫＨｇＰＯｎ　１％、門ＥＳＯ４・７
Ｂ、００．０５％、ペプトン０．９％、酵母エキス０．
２％、コーンステーブリカー０．５％からなる液体培地
（ｐＨ５，４）　　１００１１ｎを５００ｍｊ！坂ロフ
ラスコに採取し、定法により加熱殺菌した。これにペニ
シリウム・パープルゲナム阻６１８の１白金耳を接種し
、３５℃で５日間振盪培養した。この培養液をろ過した
後マンナンの加水分解活性を測定したところ１４．８０
　／培養液ｍｅであった。

実施例１ ５１のジャファーメンタ−にコプラミル４％、ｘｏ、ｐ
ｏ、　１％、ＭｇＳＯ４・７１１□００゜０５％、ペプ
トン０．９％、酵母エキス０．２％、コーンステープリ
カー〇、５％からなる液体培地（ｐ）１５．４）　　３
　（！を入れ、定法により加熱殺菌した。これに参考例
２と同じ方法で調製した培養液３００ＩＩ１１を種菌と
して接種した後、３５℃で４日間培養した。この培養液
の酵素活性を測定したところ１６．２ｕ／培養液ｍＩ！
であった。

この培養液をろ過したところ２．８ｅのろ過液が得られ
た。このろ過液にコブラミル２８０ｇを加えｐＨ５，８
，５０℃で４８時間加水分解した後ろ過したところ２，
５１２のろ過液を得た。このろ過液を液体クロマトグラ
フィーで分析したところ下記の糖組成であった。

Ｄ−マンノース　　　１．２％ マンノビオース　　８４，２％ マンノトリオース　　１．９％ その他の単ｔＪ！　　　　１２．７％ 実施例２ 実施例１で得られた加水分解ろ過液１１にパン酵母２ｇ
を加え３５℃で２日間培養した。この買化液をろ過した
後ＩＪ！組成を分析したところ次の通りであった。

■）−マンノース　　　　０．１％ マンノビオース　　　９１．５％ マンノトリオース　　　２．１％ その他の単糖　　　　　６．３％ このろ過液を７５％迄濃縮したところ５９ｇの濃縮液が
得られた。この濃縮液に３０ｍ１のエタノールを加え１
日間結晶化させたところ２３．５　ｇのマンノビオース
が得られた。このものの純度は９８．１％、融点１９１
〜１９２℃であった。

実施例３ 実施例１で得られた加水分解ろ過液ＩＩ！を定法により
イオン交換樹脂で脱塩した後５０％迄濃縮したところ８
８ｇの濃縮液が得られた。

次にポリスチレンスルフォン酸型陽イオン交換樹脂ＳＫ
−ＩＢＳ　（三菱化成工業特製、５０〜１００メツシユ
）３００ｓｉｊ！をジャケット付きカラム（内径’ｌ、
　４　ｃｓ　Ｘ長さ８０ｅ＋ｍ）に充填し、これに５％
塩酸水溶液を流し水洗した後、次いで５％水酸化ナトリ
ウム水溶液を流し水洗して樹脂をナトリウム型とした。

このカラムを６０℃に保温しながら上記で調製した濃縮
液３０ｇを塔上部より供給し、次いで水で連続的に溶出
してフラクシロンコレクターにより分画した。この際の
溶出液の流速は１００震Ｉ！、７時で、各分画容重ば１
０１Ｉｌｌであった。各フラクションを液体クロマトグ
ラフィで分析した。その結果を第１表及び第１図に示４
″。

このフラクション魚１４〜２２を集めた液の糖組成は次
の通りであった。

Ｄ−マンノース　　　　０．６％ マンノビオース　　　９０．５％ マンノトリオース　　　２．５％ その他の単糖　　　　　６．４％ この液を７５％迄濃縮したところ１２．３　ｇの濃縮液
が得られたゆこの濃縮液にエタノール６１ｍ１を加え１
日間結晶化したところ７．６ｇのマンノビオースが得ら
れた。純度は９８．２％、融点１９１〜１９２℃であっ
た。

（以下余白） 第　　　　１　　　　表　　　　　　　華位ｒｅ　／　
ｍ　ｊ！比較例１ 参考例２において、β−マンナナーゼ生産菌として、ペ
ニシリウム・パープルゲナム磁６１８の代りにストレプ
トミセス・エスピー阻１７を用いた以外は参考例２と同
様に操作して培養液を得た。

次いでこの培養液を種菌として用いて実施例１と同様に
して培養液を得た。この培養液のβ−マンナナーゼ活性
は５．３　ｕ　／培養液Ｉａｇであった。

従って、本発明に使用されるβ−マンナナーゼ含有組成
物は、ストレプトミセス・エスピー阻１７の培養液に比
べ３倍以上のβ−マンナナーゼ活性を有することが明ら
かとなった。

更にこの培養液をろ過し２．７１のろ液を得た。

このろ液にコブラミル１４０ｇを加え、ｐＨ６，８，４
０℃で４８時間加水分解した後ろ過したところ、２．５
１のろ液を得た。このろ液の＃Ｍ組成は下記のようであ
った。

Ｄ−マンノース　　　１０．５％ マンノビオース　　　６３．５％ マンノトリオース　　　９，８％ オリゴ糖　　　　　　１１．２％ その他の単Ｆ　　　　　　５．０％ 従って、本発明の方法では、マンノトリオース及びオリ
ゴ糖（主にガラクトマンノオリゴ糖）をほとんど含まな
い糖液を製造できることが明らかとなった。

（発明の効果） 本発明のマンノビオースの製造法は、叙上の如く、ペニ
シリウム属に属するβ−マンナナーゼ生産菌の産生ずる
β−マンナナーゼ含有組成物をマンナン等に作用せしめ
るものであるため、マンノトリオース及びガラクトマン
ノオリゴ糖をほとんど含まないマンノビオース含有ｔｕ
ｉ成物を得ることができ、これからマンノビオースを分
離するための精製工程が簡略化し容易なものとなった結
果、従来困難であったマンノビオースの大量生産を可能
にした。

マンノビオースは、従来試薬として販売されておらず、
従って用途開発研究が行なわれてなかった。近年、動物
細胞壁に存在する糖鎖の研究が進み、＃Ｍ鎖が抗原抗体
に関与していることが判明した。この糖鎖中にはマンノ
ビオース骨格が存在しており、マンノビオースが安価に
製造出来るならばこの＃Ｎ鎖の合成原料として使用でき
る。更に転移酵素を使用することによりマンノースを含
む新規な糖を製造することができ、医薬品として有用で
ある。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例３における糖を含む濃縮液の溶出曲線を
示す図面である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　次の理化学的性質、 （１）作用 β−マンナナーゼ活性及びβ−ガラクトシダーゼ活性を
   有し、マンナンに作用して、主としてβ−１，４−マン
   ノビオースを生成し、マンノトリオースをほとんど生成
   しない。 （２）基質特異性 マンナン、ガラクトマンナンに特異的に作用するが、キ
   シラン、セルロースには作用しない。 （３）至適ｐＨ及び安定ｐＨ範囲 至適ｐＨは約５．８、安定ｐＨ範囲は約４〜約８である
   。 （４）至適温度 約４０〜約６０℃ （５）ｐＨによる失活の条件（３０℃） ｐＨ５．８で３時間保持した時の活性を１００％とする
   とき、ｐＨ２で約６５％、ｐＨ４で約９０％及びｐＨ８
   で約９５％の活性がある。 （６）温度による失活の条件（ｐＨ５．８）温度５０℃
   で３時間保持した時の活性を１００％とするとき、４０
   ℃で約１００％、７０℃で約４０％の活性がある。 を有する、β−マンナナーゼ含有組成物を、マンナン又
   はマンナン含有天然物に作用させることを特徴とするβ
   −１，４−マンノビオースの製造法。 ２　β−マンナナーゼ含有組成物がペニシリウム属に属
   するβ−マンナナーゼ生産菌を培養して得られる培養液
   又は培養ろ液である特許請求の範囲第１項記載のβ−１
   ，４−マンノビオースの製造法。 ３　ペニシリウム属に属するβ−マンナナーゼ生産菌が
   ペニシリウム・パープルゲナムＮｏ．６１８（微工研菌
   寄第９１８９号）である特許請求の範囲第２項記載のβ
   −１，４−マンノビオースの製造法。