JPS63209746A - リポソ−ムの製法 - Google Patents

リポソ−ムの製法

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JPS63209746A
JPS63209746A JP62042827A JP4282787A JPS63209746A JP S63209746 A JPS63209746 A JP S63209746A JP 62042827 A JP62042827 A JP 62042827A JP 4282787 A JP4282787 A JP 4282787A JP S63209746 A JPS63209746 A JP S63209746A
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suspension
liposome
liposomes
inert gas
solvent
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Kazuhiko Suzuki
鈴木　一比好
Keisuke Sakaguchi
坂口　圭介
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Terumo Corp
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/795—Porphyrin- or corrin-ring-containing peptides
    • C07K14/805—Haemoglobins; Myoglobins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • A61K9/1277—Preparation processes; Proliposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は新規なリポソームの製法に関するものである。
さらに詳しくは、本発明は高粘度の水溶液を内部に取り
込んでなるリポソームの製法に関する。
リポソーム（ｌ１９ｏｓｏｓ＋ｅ）は脂質２分子膜から
なり、内部に水層を含んだ閉鎖小胞体である。生体膜は
脂質の２分子構造をとっている七いわれており、従って
リポソームは生体膜のモデル膜としてその物理化学的性
質の研究に広く用いられている。
また、リポソームは内部の水層や膜内に種々の物質を取
り込むことができ、細胞と融合したり、細胞に取り込ま
れたりするので生体内へ物質を送り込むキャリヤーとし
て利用される。リポソームを利用した研究は生物学、医
学、薬学など広範な分野にわたっており、酵素や制ガン
剤を運ぶキャリヤーとしての利用、免疫学分野での利用
、細胞との相互作用、ドラッグデリバリ−システムとし
ての利用等が研究されている。
［従来の技術］ リポソームは上述したように極めて広範な利用分野を有
するが、従来のリポソームの製法では、高粘度の水溶液
を内部に取り込んだリポソームを得ることは不可能であ
った。従来のリポソームの製法としてはいわゆる薄膜法
、界面活性剤除去法および逆相法等が知られている。薄
膜法は容器の内面にリポソーム形成脂質の薄膜をつくり
、そこへ取り込ませたい物質を溶解させた水溶液を加え
、振盪処理するかまたは超音波処理してリポソームをつ
くる方法である。界面活性剤除去法は取り込ませたい物
質を溶解させた水溶液にリポソーム形成脂質と界面活性
剤を溶解させて混合ミセルをつくり、次いで透析により
界面活性剤を除去しリポソームをつくる方法である。逆
相法は、リポソーム形成脂質を溶かした有機溶媒溶液に
取り込ませたい物質を溶解させた水溶液を加えてＷ１０
型エマルジョンを作成し、次いで有機溶媒をエバポレー
ションで除去してリポソームをつくる方法である。これ
らの従来法によれば、内部に取り込ませろ水溶液が低粘
度である場合にはリポソームが生成するが１０ｃＰ（４
℃）以上の高粘度になると極端に収率が悪くなるととも
に所望のリポソームが得られないことがあり、リポソー
ム利用上大きな制約となっていた。例えば、人工赤血球
としてヘモグロビン水溶液を含有するリポソームが知ら
れているが粘度の制約のため、ヘモグロビン濃度を天然
のそれである３５％（Ｗ／Ｗ）にまで高めることができ
ず、せいぜい１５９６程度であり、酸素運搬能の低いも
のしか得られていない。
［発明が解決しようとする問題点］ 従って本発明の目的は内部に高粘度の水溶液を取り込ん
でなるリポソームの製造方法を提供することにある。
［問題点を解決するための手段］ 本発明は上記目的を達成するために下記の構成を有する
。
１）　リポソーム膜形成脂質を有機溶媒に溶解し、該溶
液から溶媒を留去し、残留物に高粘度の水溶液を加え、
振盪処理または超音波処理することにより均一な懸濁液
とし、該懸濁液を不活性ガスで加圧し、不活性ガスを該
懸濁液に十分浸透させた後、該懸濁液を細隙から高圧吐
出処理することを特徴とするリポソームの製法。
２）　水溶液の粘度がｔｏ　〜３，０００ｃＰ　　（４
℃）である第１項記載のリポソームの製法。
３）　不活性ガスによる加圧が８０〜１３０　ｋｇ／ｃ
Ｊである第１項記載のリポソームの製法。
４）　ガス加圧式高圧吐出型乳化機を使用して懸濁液を
高圧吐出処理する第３項記載のリポソームの製法。
本発明におけるリポソーム膜形成脂質には特に制限はな
く、リポソームを形成するものであれば天然または合成
の脂質が使用可能である。特にリン脂質が好適に使用さ
れ、その例として、レシチン、ホスファチジルエタノー
ルアミン、ホスファチジン酸、ホスファチジルセリン、
ホスファチジルセリントール、ホスファチジルグリセロ
ール、スフィンゴミエリン、カルシオリピンおよびこれ
らを常法に従って水素添加したものがあげられ、これら
を組合せて用いることもできる。さらにリポソーム膜の
構成成分には所望によりステロール等の膜構造強化剤や
電荷付与物質（例えばステアリン酸、オレイン酸、リノ
ール酸、リルン酸、ホスファチジン酸、ホスファチジル
グリセロール等）の崩壊時間調節剤を添加することがで
きる。
リポソームの内部に取り込まれる高粘度水溶液には特に
制限はなく、任意の種類の化学物質の水溶液が使用され
うる。化学物質の例としては、前述したヘモグロビンの
他、β−グルクロンダーゼ、ヘキソサミンダーゼ、アミ
ノグルコシダーゼ等の高分子化合物があげられる。
水溶液の粘度は、リポソームの用途に応じて溶質の種類
および粘度が決定され、それに従って決定される。本発
明においては１ｏｃＰ　〜３，０００ｃＰ（４°Ｃ）の
範囲の粘度を有する水溶液が使用される。１０ｃＰ（４
℃）以下の粘度の水溶液も本発明の方法において使用可
能であるが、これらは従来の製法においても使用するこ
とができる。人工赤血球を作製する場合には、ヘモグロ
ビン濃度３０〜６０％（Ｗ／Ｗ）の水溶液を使用するの
が好ましく、この場合の粘変は１０〜８．０００ｃＰ　
　（４℃）である。
本発明のリポソームは、リポソーム膜形成脂質を有機溶
媒に溶解し、該溶液から溶媒を留去し、残留物に高粘度
の水溶液を加え、振盪処理するかまたは超音波処理する
ことにより均一な懸濁液とし、該懸濁液を不活性ガスで
加圧し、不活性ガスを該懸濁液に十分浸透させた後、該
懸濁液を細隙から高圧吐出処理することによって製造さ
れる。
上記方法において、均一な懸濁液を調製するまでの工程
は前述した薄膜法として知られるリポソームの製造方法
と同じであり、それ自体公知の方法に従って実施される
。有機溶媒はリポソームの用途によって適宜選択される
が、通常クロロホルム、エタノール等が用いられる。
かくして得られた懸濁液は細隙ノズル付きの加圧容器内
で不活性ガス（例えば窒素もしくはアルゴンガス）で加
圧される。加圧は８０〜１３０　ｋｇ／ｃｄが適当であ
る。不活性ガスが懸濁液に十分浸透したのち、懸濁液を
ノズルから吐出処理する。
懸濁液を高圧吐出処理する工程は、高圧吐出型乳化機、
好ましくはフレンチプレスを用いて懸濁液を上記の圧力
を保持しつつ細隙から１〜数回吐出させることによって
実施される。その際懸濁液中の粒子が機器壁に高エネル
ギーで衝突するとともに懸濁液中のガスが急激に膨張す
る。この衝突およびガス膨張によりリポソームが形成さ
れると考えられ、高圧で吐出されるほどリポソームの粒
径は小さくなる。かくして得られるリポソーム液は常法
に従って洗浄され、超遠心処理等によって採取される。
次に実施例を示して本発明をさらに具体的に説明する。
実施例 ■）赤血球膜除去ヘモグロビンの調製 常法に従って調製した赤血球膜除去ヘモグロビン（ＳＦ
Ｈ）水溶液（ヘモグロビン濃度８％（ｗ／ｗ））１２Ｉ
を透析用ダイアライザーＴ　Ａ　Ｆ　ＬＯＷ（チル七社
製のセルロース系中空糸ダイアライザー）を用いて限外
濾過により濃縮し、ヘモグロビン濃度５０％（ｗ／ｗ）
のＳＦＨ水溶液約１．８　ｆＪを得る。
２）リポソーム形成脂質の調製 水素添加率８０％の精製ホスファチジルコリン２７．７
６　ｇ、コレステロール６．９６ｇ、水素添加率８０％
の精製ホスファチジン酸３．７５ｇをクロロホルムに溶
解する。該脂質溶液をナスフラスコに入れ、エバポレー
ションを行ないクロロホルムを除去シ、ナスフラスコの
底に脂質膜を形成させ゛る。さらに真空乾燥を１６時間
行ないクロロホルムを完全に除去する。
３）ＳＦＨ・脂質の懸濁液作成 前記ＳＦＨ調製工程で得られた５０％ＳＦＨのうち、３
００　ｍｌを該脂質膜に添加して、振盪または超音波に
より均一な懸濁液とし、これを原料溶液とする。
該原料溶液を細隙ノズル付きの加圧容器（図１）に入れ
チッ素ガスを導入し１３０　ｋｇ／ｃｄに加圧する。
３０分間放置し、チッ素ガスを十分に原料溶液に浸透さ
せる。次にノズルのバルブを徐々に開放し、１３０　ｋ
ｇ／ｃｄの圧力を維持しながら原料溶液を吐出させる。
５）ヘモグロビン含有リポソームの精製加圧吐出後の液
を生理食塩水で１０倍に希釈し遠心（１７，００Ｏｒｐ
ｍ、　３０ａ＋ｉｎ）により、ヘモグロビン含有リポソ
ームの沈殿として分離する。上澄のカプセル化に関与し
なかったヘモグロビン溶液をデカンテーションで除き、
その後生理食塩水でヘモグロビン含有リポソーム沈殿を
懸濁させ、再度遠心を行なう。以下同様の操作を上澄に
ヘモグロビンが検出されなくなるまで繰り返す。
６）粗大粒子の除去 精製後のヘモグロビン含有リポソームの懸濁液を０．４
μのニュー７リポアメンブレン（材質：ポリカーボネイ
ト）にて濾過して粗大粒子を取り除く。
７）ヘモグロビン濃度調製 最終的にリポソームを生理食塩水に懸濁し、へモグロビ
ン濃度１０％に調製したリポソーム懸濁液が１８０　ｍ
ｌ得られた。
［発明の効果］ 本発明によれば、内部に高粘度の水溶液を取り込んだリ
ポソームの製法が提供される。従って高分子化合物を高
濃度に溶解した水溶液を含有するリポソームを作製する
ことができ、リポソームのより広範な利用が可能となる
。例えばヘモグロビン濃度３０〜６０９６　（ｗ／ｗ）
の水溶液（１０〜３．０００ｃＰ　　（４℃））を含有
するリポソームを調製することができ、このものは従来
の人工赤血球に比較してヘモグロビン濃度が高いので酸
素運搬能が優れている。
さらに本発明の製法においては、リポソーム膜形成脂質
の懸濁液が細隙から高圧吐出される際に、懸濁液中の不
活性ガスが圧力膨張するので従来の高圧吐出法に比較し
てリポソームが効率よく形成される。その結果、吐出処
理の回数が少なくてすみ、ヘモグロビンのような酸化に
不安定な物質のリポソーム化に好適に使用される。
７、補正の内容　　　　　　　　　　　　　　　　　　
２手続補正音 昭和６２年１２月２８日 特許庁長官　　小　川　邦　夫　　殿 ｌ、事件の表示 昭和６２年特許願第４２８２７号 ２、発明の名称 リポソームの製法 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 住所　　東京都渋谷区幡ケ谷２丁目４４番１号名称　テ
ルモ株式会社 ４、代理人 ５、補正命令の日付　（自発） ■）特許請求の範囲を別紙のとおりに補正します。
２）第４頁下から第２行の「高粘度の」を削除します。
以　　上 １）　　ＩＪポソーム膜形成脂質を有機溶媒に溶解し、
該溶液から溶媒を留去し、残留物に水溶液を加え、振盪
処理また超音波処理することにより均一な懸濁液とし、
該懸濁液を不活性ガスで加圧し、不活性ガスを該懸濁液
に十分浸透させた後、該懸濁液を細隙から高圧吐出処理
することを特徴とするリポソームの製法。
２）水溶液の粘度が１０−３　、０ＯＯｃＰ　（４°Ｃ
）である特許請求の範囲第１項記載のリポソームの製法
。
３）不活性ガスによる加圧が８０〜１３０ｋｇ／　ａｍ
２である特許請求の範囲第１項記載のリポソームの製法
。
４）ガス加圧式高圧吐出型乳化機を使用して懸濁液を高
圧吐出処理する特許請求の範囲第３項記載のリポソーム
の製法。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １）リポソーム膜形成脂質を有機溶媒に溶解し、該溶液
    から溶媒を留去し、残留物に高粘度の水溶液を加え、振
    盪処理または超音波処理することにより均一な懸濁液と
    し、該懸濁液を不活性ガスで加圧し、不活性ガスを該懸
    濁液に十分浸透させた後、該懸濁液を細隙から高圧吐出
    処理することを特徴とするリポソームの製法。 ２）水溶液の粘度が１０〜３，０００ｃＰ（４℃）であ
    る特許請求の範囲第１項記載のリポソームの製法。 ３）不活性ガスによる加圧が８０〜１３０ｋｇ／ｃｍ＾
    ２である特許請求の範囲第１項記載のリポソームの製法
    。 ４）ガス加圧式高圧吐出型乳化機を使用して懸濁液を高
    圧吐出処理する特許請求の範囲第３項記載のリポソーム
    の製法。
JP62042827A 1987-02-27 1987-02-27 リポソ−ムの製法 Granted JPS63209746A (ja)

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JP62042827A JPS63209746A (ja) 1987-02-27 1987-02-27 リポソ−ムの製法
DE8888902213T DE3872875T2 (de) 1987-02-27 1988-02-26 Verfahren zur herstellung von liposomen.
AU13648/88A AU608304B2 (en) 1987-02-27 1988-02-26 Process for preparing liposome
US07/408,485 US5049391A (en) 1987-02-27 1988-02-26 Liposome encapsulated hemoglobin
PCT/JP1988/000208 WO1988006437A1 (fr) 1987-02-27 1988-02-26 Procede de preparation de liposomes
EP88902213A EP0357773B1 (en) 1987-02-27 1988-02-26 Process for preparing liposomes

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WO2012137834A1 (ja) * 2011-04-04 2012-10-11 学校法人早稲田大学 小胞体の製造方法

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JPS5989620A (ja) * 1982-10-05 1984-05-23 パルフユ−ム・クリスチヤン・デイオ−ル 水和脂質カメラ相分散液の均質化方法及びその方法により製造される分散液

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