JPS6322005A - ナス科植物の土壌病害防除方法 - Google Patents

ナス科植物の土壌病害防除方法

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JPS6322005A
JPS6322005A JP61163831A JP16383186A JPS6322005A JP S6322005 A JPS6322005 A JP S6322005A JP 61163831 A JP61163831 A JP 61163831A JP 16383186 A JP16383186 A JP 16383186A JP S6322005 A JPS6322005 A JP S6322005A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 [産業上の利用分野コ ナス科植物の土壌伝染性病害として、大きな被害をもた
らしているタバコ立枯病およびナス科植物青枯病は、学
名シュドモナス・ソラナシアラム(Pseudomon
as solanacearum) g5t3の植物体
内への5染・寄生によって発病する難防除病害である。
この発明は、タバコ立枯病およびタバコ以外のナス科植
物、例えばナス、トマト、ジャガイモ、ピーマンなどの
ナス科植物青枯病の防除方法に関するものである。
[従来の技術] タバコ立枯病およびナス科植物青枯病の防除方法として
は、従来クロルピクリンや臭化メチルなどの土壌消毒剤
を用いる土壌殺菌消毒が広〈実施されている。しかしな
がら、このような農薬の使用による土壌殺菌方法は、土
壌に生息する有益な微生物を含めて無差別に殺菌し、栽
培土壌を「死んだ土」にしてしまう欠点がある。さらに
、これらの農薬の使用は、例えば土壌中に有害なハロゲ
ン化物の蓄積などの自然環境に対する弊害ないしは悪影
響をもたらすおそれもある。
、そこで、本発明者らは、上記土壌殺菌消毒剤に代わる
ナス科植物の土壌伝染性病害を防除する方法として、先
に ■非病原性のシュドモナス・ソラナシアラム・M4S菌
株(微工研条寄第700号)の生菌をナス科植物の根部
に接種する方法(特許協力条約に基づいて公開された国
際出願、国際公開番号wO8■非病原性のシュドモナス
・ソラナシアラムM4S凹株の生菌をナス下4植物の根
部に接種し、さらに原菌と病原性のシュドモナス・ソラ
ナシアラムを溶菌するバクテリオファージの増殖液を、
ナス科植物の根部に散布施用する方法(特願昭60−2
61354号〉 ■前記■の改良方法である、同菌株の生菌を高分子物質
を用いて固定化し、得られた固定化物を土壌に施用する
方法(特願昭60−288013号)などについて発明
を行い、特許出願したところである。
[発明が解決しようとする問題点] 前記従来技術■において述べた方法、すなわちシュドモ
ナス・ソラナシアラム・M、4 S菌株の生菌をナスf
−1植物の根部に接種する方法は、圃場における発病の
抑制効果が高いものでなく、特にその持続性に問題があ
る0次いでその改良法として出頭した二つの方法、すな
わち、前記■の、該生菌の根部接種につづいて、原菌と
病原性のシュドモナス・ソラナシアラムの両者を溶ヱす
るバクテリオファージの増殖液を根部に散布施用する方
法、および前記■の、該生菌を高分子物質を用いて固定
化し、得られた固定化物を土壌に施用する方法は、いず
れも広域の栽培圃場で実用に供されるためには、防除効
果3さらに高める必要がある。
[問題点を解決するための手段] 本発明は、前記従来技術(■に配穀の発明方法と改良し
たものであり、その目的は、さらに侵れな防除効果を発
揮するタバコ立枯病及びナス科植物青枯病の防除方法を
提供することである。すなわち、本発明は、非病原性の
細菌であるシュドモナス・ソラナシアラム・M4S菌株
の生菌および該菌と病原性の細菌であるシュドモナス・
ソラナシアラムの両者を溶菌するバクテリオファージと
を固定化して得られた固定化物を土壌に施用することを
特徴とするタバコ立枯病およびナス科植物青枯病の防除
方法である。
本発明の方法に用いられる非病原性の絽苗であるシュド
モナス・ソラナシアラム・M4S菌株(以下、M4S苗
と略記する)は、微工研菌寄第7370号として198
3年12月14日に工業技術院微生物工業技術研究所に
寄託されている。これは、タバコ立枯病菌として知られ
るシュドモナス・ソラナシアラム・u−7=株からの突
然変移によって得られたもので、病原性を有する同種線
菌と競合してよく生育し、病原性細菌の生育を阻害し、
さらにナスf4 種物に対して病原性を全く有さない特
徴を有する公知の菌株である。
M4S菌を培養する方法は、例えば、公知のCPG培地
(カザミノH1g、ブドウ糖10g、ペプトン10g、
水1000(>に接種し、28〜30°Cで48時開前
後振盪培養する。こうして得られた培養液を遠心分で器
を用いて集菌し、湿菌体を得る。
また、この発明に用いられる〕〈クテリオファージ(以
下、ファージと略記する)は、微生物学実験法(微生物
研究法懇談会編、昭和50年講談社サイエンティフィッ
ク刊)に配穀されている方法を応用して分離することが
できる。すなわち、例えば、タバコ立枯病に5染したタ
バコの茎を一辺が1cm以下の側辺に切断し、そのLo
gをLoomlの殺百水に懸濁し、1時間振盪する。そ
ののち、上澄を10000 rpmで10分間遠心分離
し、その上澄部をミリポアフィルタ−(0,45μm)
で1通する。
次いで、炉液0.1mtを病原性のシュドモナス・ソラ
ナシアラムを含む公知のCPG培地SOm lに接種し
、48時間振盪培養する。得られた培養P液を遠心分離
し、その上澄をミリポアフィルタ−で涙過したのち、段
階希釈し、希釈液0.4m lを病原性のシュドモナス
・ソラナシアラム菌を含むCPG寒天寒天培地3定l濁
し、これを直径9cmのシャーレに流し込み、30°C
で24時時開養する。シャーレ上に形成された溶菌斑か
らファージを分離する。
分離したファージ株は、M 4 S菌を含むCPG寒天
寒天培地3定l濁し、これを直径9cmのシャーレに流
し込み、30°Cで24時開培養し、ここで形成された
溶凹斑より、再度ファージを分なする。分離されたファ
ージは、M2S苗と病原性のシュドモナス・ソラナシア
ラム菌の両者と溶菌する性質を有する。
ファージの大量培養は、M 4 S菌の培養に準じる。
すなわち、M4S菌と同時にファージを植菌した液体培
地で、28〜30℃で、36〜72時間振盪培養する。
得られた培養液を高3!!(例えば、15000回転/
分回転速心分離し、その上澄をファージ液として用いる
。実際に以下に述べる固定化にあたっては、ファージ数
をLm!あたり、1011〜109個に調整して用いる
次にM4S菌の湿菌体とファージ液の両者を高分子物質
あるいはそのモノマーを用いて固定化を行う0面体およ
びファージの固定化方法は、包括法として公知の方法(
「酵素工学」、福井三部ら編、p157〜202)でよ
い、すなわち、天然物質であるデンプンおよびその誘導
体、コンニャク粉およびその精製物、アルギン酸および
その塩、ゼラチン、あるいはカラギーナン等の藻類由来
の多糖質物質などの高分子物質をゾル状にし、M4S菌
の湿菌体およびファージ液を加えてゲル化させればよい
、また、ポリアクリルアミドやアクリルアミド酸コポリ
マーのモノマーをM4S菌の湿菌体とファージ液に加え
てゲル化させてもよい、さらに、ポリビニルアルコール
、光硬化性樹脂などのプレポリマーをM4SSの湿菌体
とファージ液に加えてゲル化させて固定化する方法も可
能である。
得られた固定化物1粒あたり(平均粒径: 2〜3mm
)に含まれる生きているM4SNの菌数は1×10S 
以上、好ましくはI X 10’ 以上である必要があ
り、また生きているファージの個数は 1×104 以
上、好ましくはI X 10’ 以上である必要がある
かくして得られたM4S菌およびファージの固定化物を
土壌に施用することにより、ナス科植物の土壌病害に対
して、優れた防除効果を発揮する。
施用方法は特に限定されないが、本国に基肥を施す日も
しくは畦を形成する日から移植当田(この間は、約2〜
4週間)に、10ホあたり21程度土壌とよく混ぜ合わ
せて施用する。堆肥その他の肥料と混用しても差し支え
ない。
[発明の作用コ 本発明の方法によって、ナス科柩物の土壌病害すなわち
タバコ立枯病およびタバコ以外のナス科植物の青枯病が
防除される機構は次のように考えられる。
すなわち、苗移植前に土壌に施用した固定化物に含まれ
るM4S菌が植物体内に侵入し、M4S菌の作用により
、植物自身が持つ防御反応が誘起される。ついで、M 
4 S菌とともに固定化されたファージがM4S菌の増
殖に伴いM4S菌を溶菌しながら、植物体内に移行する
(ファージは菌寄生性を有し、ファージが植物体内に移
行することは実験的に確認されている)、このファージ
が後から侵入した病原性のシュドモナス・ソラナシアラ
ムの増殖を阻害し、発病を抑制する。
本発明方法は、M4S菌およびファージの固定化物を苗
移植前に土壌中に混入する点に特徴がある。土壌中の生
きたM4S菌は、移植後新たに伸長した根からも、順次
侵入しその防除効果を発揮するだけでなく、λff43
百とともに固定化されたファージもM4S菌の増殖に伴
い、植物体内に順次移行、分布することが可能となり、
持続的な防除効果を発揮する。かくして、本発明の方法
により、ナス科植物の土壌病害の防除効果は持続性を発
揮し、本圃での防除効果を一層高めることが可能となっ
た。
次に本発明方法の実施に使用したM 4 S ’:3お
よびファージの固定化物の製造例および圃場試験の実施
例について説明する。
[製造例] 製造例1 カザミノ酸0.1%、ブドウ糖1%、ペプトン1%を含
む液体培地にM4S菌を接種し、30°Cで40時間培
養した。この培養液を遠心分離器を用いて集菌し、湿菌
体を得た。また、カザミノ酸0−1%、ブドウ糖1%、
ペプトン1%を含む液体培地にM4S菌およびファージ
を同時に接種し、30″Cで60時間培養した。この培
養液は遠心分離し、その上澄をミリポアフィルタ−(0
,45μm)で?過し、ファージ液を得た。
湿菌体Logを11の脱塩水に懸濁して得られた菌体懸
濁液と、ファージ液0.21に対して、3%アルギン酸
ナトリウム水溶液31を混合し、アルギン酸ナトリウム
悲濁液を調製した。これを145%塩化カルシウム水溶
液中に滴下させる方法により、アルギン酸カルシウムに
よる直径2〜3 mmの球状のM4S菌およびファージ
の固定化物を得た。
得られた固定化物はおよそ1×106 個/粒のM4S
欝およびlX104  個/粒のファージを含んでいた
製造例2 酵母エキス1%、ブドウ糖1.5%を含む液体培地にM
4S菌を接種し、30°Cで48時間培養しな。
培養液を遠心分離器き用いて集菌し、湿菌体を得た。ま
た、酵母エキス1%、ブドウ糖1.5%を含む液体培地
にM4S菌およびファージを同時に接種し、30°Cで
66時間培養した。培養液は遠心分離し、その上澄とし
てファージ液を得た。
湿菌体1gに対して滅菌水を用いて150mtの菌体懸
濁液を調製した。一方、18.7%アクリルアミド(ア
クリルアミドを96%、N、 N’−メチレンビスアク
リルアミドを4%含む)水溶1750m!、0.23%
N、 N、 N’ 、 N’−テトラメチルエチレンジ
アミン水溶液250m lおよび、0.28%過硫酸ア
ンモニウム水溶液500m lをそれぞれ調製した。こ
れら3種顕の水溶液と菌体懸濁液およびファージ液50
m lを混合したのち静置すると、混合液は固化した。
この固化物をメツシュを用いて2〜3[ff11の立方
体となし、M4S菌およびファージの固定化物を得た。
得られた固定fヒ物には、およそ1×106個/粒のM
4S菌およびlX105個/粒のファージを含んでいた
[実施例] 実施例 1 品種、土壌、時期、気象、肥培管理などのタバコ栽培の
条件を同一にして、本発明の防除方法と前記した従来の
発明方法との防除効果の優劣を比較するため、以下のよ
うな試験を行った。
試験はタバコ植物として、白遠州1号を用い、1辺が2
8.5cmの塩化ビニル樹脂製のポット(25本植え)
で栽培した苗を供試した。苗床において、播種後6週間
経過して葉数が8〜9枚/本に生育した苗を本国に移植
した。
本国は、日本たばこ産業(株)宇都宮試験場内のタバコ
立枯病汚染区域に設定し、これを以下の5つの試験区に
区分して試験を行った。1区あたりの苗の移植本数は1
80本とした。
(1)M4Siおよびファージ固定化物の土壌施用区(
本発明方法) (2>M43iおよびファージの苗処理区(特願昭6’
0−261354号の方法) (3) M 4 S苗固定化物の土壌施用区(特願昭6
9 288013号の方法) (4)M2S凹の苗処理区(国際公開W O85/○3
519の方法) (5)無処理区 (1)本発明のM 4 S 9およびファージ固定化物
の土壌施用区は、以下の通り処理した。すなわち、前記
製造例1で調製して得られた固定化物をタバコ苗移植の
2週間前の基肥入れ時に堆肥に混入して、10イあたつ
2,51となるようにタバコ圃場に施用した。タバコ苗
の移植は慣行に従った。
(2> M 4 S菌およびファージの苫処理区(FF
願昭60−261354号の方法)は、以下のように処
理した。すなわち、M4S菌の生菌と濃度がI X 1
0”個/mjとなるように滅菌水を用いて、M4S菌懸
濁液を調製し、これを深さ20Tlとなるように苗処理
槽に入れた。これに移植5日前のタバコ苗をポットのま
ま1時開浸漬した。さらに移植の前日にこの苗にファー
ジ液(IXIO”個/m()を1株あたり100m(ず
っとなるように散布した。
タバコ苗の移植は慣行に従った。
(3) M 43百固定化物の土壌施用区(特願昭60
−288013号の方法)は、以下のように処理した。
すなわち、前記(1)記載の方法のうち、ファージを混
入しないで同様にして調÷%lたλ・14S菌固定化物
(入り4S菌:1×106個/粒)3タバコ苗移植の2
週間前の基肥入れ時に堆肥に混入して、10耐あたり2
,5jとなるようにタバコ圃場に施用した。タバコ苗の
移植は慣行に従った。
(4)M4S菌の苗処理区(国際公開WO351035
19の方法)は、以下の通り処理した。
すなわち、M4S菌の生菌をI X 1010個/ m
 lの濃度となるように滅菌水を用いて、M4S菌懸濁
液を調製し、これを深さ2Gとなるように苗処理槽に入
れた。これに移!5日前のタバコ苗をポットのまま1時
間浸漬した。タバコ苗の移植は慣行に従った。
(5)無処理区は対照区として、何の処理も行わず、慣
行に従ってタバコ苗を移植した。
苗を本圃に移植したのち、タバコ立枯病の発病状態を調
査した4発病程度は、以下に示す指数を用いて平均罹病
指数を求め、これより防除率を算出した。
指数   0 : 健全 1 : 下位葉1〜2枚が萎凋 3 : 半数の葉が萎凋 5 : 全葉が黄化萎凋 10:  枯死 防除率(%) タバコ苗の移植83日後および103日後の調査結果を
表−1および表−2に示した。
表−1 表−2 実施例2 前記製造例2で調製して得られた固定化物を用いて、ト
マト青枯病の発生を調べた。すなわち、乾土1gあたり
5X10’個の菌数になるように、病原性のシュドモナ
ス・ソラナシアラム菌を加えた黒ボク土に対して、50
分の1の割合で固定化物を加えた土をポットに入れ、そ
の日のうちに、ここに播種後28日経過したトマト(福
井100号)の苗をポットあたり1本ずつ25本移植し
た。対照として、病原性のシュドモナス・ソラナシアラ
ム苗だけを加えた黒ボク土をポットに入れ、同様にトマ
トの苗をポットあたり1本ずつ25本移植した。
苗の移植65日後に、トマト青枯病の発病状況を調査し
た0発病程度、防除率は実施例1と同様にして求めた。
その結果を表−3に示した。ただし、試験区はそれぞれ (1)M4S菌およびファージ固定化物の土壌施用区(
本発明方法) (2)対照区(無処理) とした。
表−3 [発明の効果] 実施例から明らかなように、本発明の方法によりナス科
植物の土壌病害の防除効果をより一層寓めることが可能
となった。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1.  シュドモナス・ソラナシアラム・M4S菌株の生菌お
    よび該菌と病原性のシュドモナス・ソラナシアラムとの
    両者を溶菌するバクテリオファージを固定化して得られ
    た固定化物を土壌に施用することを特徴とするタバコ立
    枯病およびナス科植物青枯病の防除方法。
JP61163831A 1986-07-14 1986-07-14 ナス科植物の土壌病害防除方法 Expired - Lifetime JPH0617291B2 (ja)

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