JPS63238558A - 妊娠障害の測定方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、妊娠障害の検出のための新規な方法に関する
。より詳細には、本発明は、妊娠の比較的早期段階にお
いて胎盤損傷を検出するための新規な方法に関する。

〔発明の背景〕

知られているように、危険性の高い妊娠は妊娠の約１０
〜２５％を構成する。危険性の高い妊娠障害の中で、次
のものを挙げることができる：糖尿病、腎臓病（例えば
、慢性腎孟腎炎、慢性糸球体腎炎および腎不全）、心臓
病（例えば、−次肺高血圧症）。妊娠の進行を制御する
ための公知の方法は、臨床的徴候および症状がすでに明
らかになった段階で妊娠障害の状態を検出するという不
都合を有している。

胎盤機能が正常であるかどうかの指示を与えるかまたは
切迫した胎児の死を予測するために示唆されたいくつか
のホルモンアッセイがある。最も広範に使用されている
試験は次のものである：尿エストリオール、尿の全エス
トロゲン、血清の非接合エストリオールおよび血清の胎
盤性ラクトゲン。知られているように、エストリオール
は、胎児副腎皮質および胎児肝臓から誘導された前駆体
から胎盤によって生産される発情性化合物である。

接合型のエストリオールは母親の尿中に排出される。血
清エストリオールは、全エストリオールとしてまたは非
接合エストリオールとして測定することができる。血清
エストリオールは、通常は、接合された部分への母親の
関与を排除するために非接合エストリオールとして測定
される。尿エストリオールは全エストリオールとしてま
たは全エストロゲンとして測定することができる。なぜ
ならば、エストリオールは通常、尿中の全エストロゲン
の約９０％を構成しているからである。

エストリオールは、妊娠の９週目程度の早期にイムノア
ッセイによって検出することができる。

その後、エストリオール値は最後のトリメスターまで徐
々にではあるが着実に増加し、最後のトリメスターの時
により明白な増加が見られる。エストリオール測定のし
ｎ法的使用は、胎児胎盤単位の顕著な急性の異常、例え
ば、死んだまたは死にかかっている胎盤が、エストリオ
ール量の増加を持続できないことによってまたはエスト
リオール量の突然の著しいおよび持続した減少によって
証明されるという事実に基づいている。ご（最近の報告
〔エム、シャルフ（Ｍ、５ｃｈａｒｆ）等、ジェイ、オ
ブステノト、シネツク、リプロド、パイオル、（Ｊ。

０ｂｓｔｅｔ、Ｇｙｎｅｃ、ｒｅｐｒｏｄ、Ｂｉｏｌ、
）１７３６５〜７５．１９８４年〕は、分娩前の病理学
的試験としての異常な血清中の遊離エストリオールと患
者との間の低い相関性からみて、エストリオール測定は
妊娠障害における実際の分娩後の状態を評価するための
確実な予測手段と考えることができないと結論している
。

尿中の全エストロゲンは用いられた最初の試験だった。

なぜならば、全エストロゲンはＦ　卓的臨床的技術によ
って分析評価可能だからである。しかしながら、尿中の
グルコースはその結果を不正に増加させ、そしである種
の他の物質、例えば、ウロビリノゲンも干渉し得る。一
方で、母親の高血圧症、子燗前症、重度の貧血および損
傷を受けた腎機能は尿エストロゲンまたはエストリオー
ル分泌を相当に減少させ得る。それらの含有量の減少は
、重度の先天性異常を有する多くの胎児においても可変
的な程度で生じ得る。また、妊婦にヘッド安静を続けさ
せると、エストリオール分泌値が、歩行している妊婦か
ら測定されたレベルより約２０〜３０％増加したという
報告もある。

尿または血清エストリオール検体の採集および値の解釈
に関連した問題のために、ならびに不正の陽性および陰
性の試験結果が無視できない程度存在しているために、
臨床に携わる人の大部分はこれらの測定値を胎盤の損傷
と相関させることを控えている。さらに、これら従来の
方法はすべて、妊娠障害の出現の早期段階においてそれ
らの障害を明らかにしなかった。これら従来方法は、特
定の病気がすでに存在している場合にそれらの障害を明
らかにしたに過ぎなかった。

以下余白 〔発明の１既要〕 本発明の目的は、妊娠障害出現の早期段階においてそれ
らの障害を検出するための簡単な方法を提供することに
ある。本発明の別の目的は、妊娠障害を検出するための
簡単な方法であって高感度の方法を提供することにある
。本発明のさらに別の目的は、妊娠障害を検出するため
の簡単な方法であって、関連した他の外来因子によって
形容を受けない方法を提供することにある。本発明は、
抗原性化合物が、ヒト胎盤に特異的な特定の蛋白質を用
いて、病理学的関連組織から体液中に放出され、そして
引き続いて測定され得るアプローチに基づいている。従
って、本発明は、生物学的流体試料を分析することによ
って妊娠障害を測定する方法であって、以下の（ａ）〜
（ｄ）工程を含む方法からなる： （ａ）次の物理化学的特性：　（１）アルブミン（ａｌ
ｂｕｍｅｎ）に特異的範囲の電気泳動移動度：　（２）
４．６〜４．９の範囲の等電点；　　（３）　３５，０
００ダルトン以下の分子量；および（４）１％以下の炭
水化物含量、によって特徴付けられる非ホルモン性のヒ
ト由来胎盤性可溶性蛋白質からなる抗原を放射性沃素に
よって標識（ラベリンｊ゛）する工程；（ｂ）前記生物
学的流体試料を、前記標識された抗原、およびその胎盤
性抗原と適合性である第１の抗体と共にインキュベーシ
ョンする工程；（Ｃ）工程（ｂ）で得られた生成物に、
固体組成物に結合した第２の抗体を適用して複合体を沈
澱させる工程；および（ｄ）前記複合体の放射能を測定
することによって妊娠障害の程度を確定する工程。

驚くべきことに、特定の蛋白質と共に上記手順を用いて
、妊婦の胎盤損傷の早期検出を確立し得ることが見い出
された。このことは、胎盤の病気の進行した段階での妊
娠障害の存在後にのみそれらの障害を測定することを主
張している公知の従来の試験と対照的である。

本発明に対して適当であることが見い出されている、上
記物理化学的特性を有する可溶性蛋白質は、最近数年以
内に発見されたものであり、Ｐ　Ｐ　１．３と呼ばれて
いる。この蛋白質は、欧州特許出願番号１０１，６０３
　Ｃヘーリングヴエルケ・アクチェンゲゼルシャフト（
Ｂｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ　Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｓ
ｃｈａｆｔ））に記載されている。この特許出願明細書
に記載されているように、この蛋白質は、栄養膜特性を
もった腫瘍検出の診断目的に対して有用であることがで
きる。

妊娠障害の発生の予測に対して胎盤の蛋白質を利用する
という本発明に係る発見は、種々の胎盤性蛋白質がこの
目的に対して価値を有していないということを明記〔ブ
リティッシュ・ジャーナル・オヴ・オブステトリクス・
アンド・シネコロジー（Ｂｒｉｔｉｓｈ　Ｊｏｕｒｎａ
ｌ　ｏｆ　０ｂｓｔｅＬｒｉｃｓ　ａｎｄ　Ｇｙｎａｅ
ｃｏｌｏｇｙ）、１９８４年１２月、Ｖｏｌ、９１．１
２２４頁〕してこれらの蛋白′：、雫を３Ａ　Ｊしてい
る従来の所説からみて全く予想外のことである。本発明
者は、上記４つの物理化学的性質の全てを有するわけで
はない種々の胎盤性蛋白質を用いた多くの実験を行なっ
て、実際に本発明には通していないが前記性質の１つま
たは２つを有している多くの胎盤性蛋白質が存在してい
ることを見い出した。従って、例えばＰＰ−４は３５、
０００の分子量（すなわち、本発明によって必要とされ
る量）を有しているが、その炭水化物含量は２．４％で
あり本発明によって必要とされる１％以下の含量と比較
すると適当でないことがわかった。

ＰＰ−９と呼ばれる別の胎盤性蛋白質はエイチ・ボーン
（１１，Ｂｏｈｎ）等によって記載され特徴づけられた
〔ニュー・ソルブル・プラセンタル・ティシュ−赤プロ
テインズ（Ｎｅｗ　５ｏｌｕｂｌｅ　ｐｌａｎｃｅｎｔ
ａｌｔｉｓｓｕｅ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ）　；イミスノロ
ジー・オヴ・ヒユーマン・プラセンタル・プロテインズ
（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙｏｆ　ｈｕｍａｎ　Ｐｌａｃｅ
ｎｔａｌ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）、プラセンタル・サブル
メント（Ｐｌａｃｅｎｔａｌ　ＳｕＰＰｌｅｍｅｎｔ）
　４．１９８２年、ブレジャー出版社（Ｐｒａｅｇｅｒ
　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ））　ｏその等電点は６．４〜
６．７であり炭水化物含量は５．５％であることが示さ
れているが、これらは本発明に従うものではない。本発
明者は、ＰＰ−９が妊娠障害の発生の予測において価値
を有しないため木方法に適していないことを見い出した
。

本発明者は、上記４つの物理化学的性質のすべてを有す
る胎盤性蛋白質、例えばＰＰ−１３、のみが本発明の方
法に適しており、一方、他の胎盤性蛋白質は不適当であ
るという理由を理論的に説明する段階にはまだ到ってい
ない。しかしながら、このような理論的な説明は本発明
の範囲を越えるものである。

本発明に係る抗原測定に対して、分析される生物学的流
体の中で、次のものが挙げられる：血液、羊水または尿
。

〔好ましい態様の記載〕

放射性沃素によって蛋白質を標識する第１の工程は、ラ
ジオイムノアッセイとして当業者に知られている。知ら
れているように、ラジオイムノアッセイは１、一定量の
抗体の結合部位に対する、既知過剰量の放射線標識され
た抗原と未知可変量の標識されていない抗原との競合に
基づいている。

抗原を標識するために選ばれた特定の特異的方法はいわ
ゆる固相抗体である。この標識（ラベリング）は、ラク
トペルオキシダーゼ−］Ｉ２０□を用いてマーカロニス
　（門ａｒｃｈａ　Ｉｏｎ　ｉｓ）の方法〔バイオケミ
カル・ジャーナル（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｊｏｕｒ
ｎａｌ）、Ｖｏｌ。

１．１３．１９６３年〕に従って実施した。混合物のア
ルカリ度のため、少量のリン酸緩衝溶液も添加して混合
物が中性点に到達するようにした。放射性同位体の使用
は、免疫反応をより容易に観察され得るようにしたので
本発明において利用されることが好ましく、その際特異
的蛋白質は高感度で測定され得る。

抗原によって結合された放射性沃素はガンマカウンター
〔例えば、パノカード（Ｐａｃｋａｒｄ）社製オートガ
ンマ（Ａｕｔｏ　Ｇａｍｍａ））を用いてカウントされ
そしてそれに対して収率が計算される。この収率の計算
には次式を用いる： 目的の複合体（ＡＧ　−ＡＢ）を得るために最も好まし
い抗体の濃度は１　／１０，０００〜１１５０，０００
である。

この範囲において、特異的結合と抗体？震度との間に直
線の相関があることが発見された。このことは第１図に
明白に表われている。第１図において、特異的結合（％
で表わされる）はｒ’Ｐ−１３蛋白質の濃度に対して与
えられている。放射性沃素の収率に基づいて、標識され
た抗原の比活性を計算し、引き続いてこれを標準評価曲
線と相関させる。

第２工程において、工程（ａ）で得られた標識された抗
原を生物学的流体（血液、羊水または尿）および第１の
抗体と相関させる。この抗体は、ＮａＮａ　（１ｇ／　
Ａ＞およびトリス−１１（Ｊ２　　（０，０２モル／ｌ
）からなる緩衝液（ｐＨ７，４）によって稀釈された、
ラビットにおけるこの胎盤性抗原の抗血清から得られた
ものである。

第３工程において、固体支持体に結合された、ロバ（ｄ
ｏｎｋｅｙ）の血清中に生じた第２の抗体を工程（ｂ）
の生成物と混合し、沈澱した複合体を遠心によって分５
１ｆジホスフェート・ハソファー・サリン（Ｐｈｏｓｐ
ｈａｔｅ　Ｂｕｆｆｅｒ　５ａｌｉｎ）？Ｓ液を用いて
洗浄した。

最後に、第４工程において、洗浄した複合体中の放射能
をオート・ガンマ（Ａｕｔｏ　Ｇａｍｍａ）　（パソカ
−ド社″！ｊＡ）によって測定した。

この方法の上記工程によって以下のデータを得ることが
できる： （１）実験の系に導入された全放射能の程度水準；（２
）標識された抗原と第２の抗体との非特異的結合の程度
； （３）抗原とその特異的抗体とのゼロ結合；（４）一連
の既知濃度の標識されていない抗原を利用することによ
る系の検定（ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ）。

第２図には、″５■放射能（１分間当りのカウント数で
表わされる）対ＰＰ−１３蛋白質濃度Ｃｎｇ／−で表わ
される）を相関させた、蛋白質のラジオイムノアッセイ
検定曲線が示されている。

本発明に係る方法を次の４群の集団試料に適用した：　
（１）成人男性；　（２）妊娠していない成人女性；　
（３）無症候の妊娠している成人女性；（４）症候性の
妊娠している成人女性。まったく同一の試薬および試薬
量を用いて同一の手順をこれら４群すべてに適用した。

得られた結果を第３図に示す。第３図において、上記４
群についての血清中の累積分布対ＰＰ−１３蛋白質の濃
度を相関させている。第３図に示されているグラフから
認め得るように、妊娠女性の群は男性の群ならびに妊娠
していない女性の群とは異なっている。同じく第３図の
グラフから認め得るように、同し蓄積分布で成人男性お
よび妊娠していない女性について実質的に等濃度の蛋白
質が存在する。しかしながら、無症候の妊娠している女
性と症候性の妊娠している女性との間には鮮明な蛋白質
濃度の相違があり、この濃度はとりわけ約０．４の蓄積
分布において無症候群の場合より症候群で実質的に高い
値であり、その差は蛋白質濃度が０．７ｎｇ／ｍ１以上
の場合にとりわけ感知し得るものである。この解析方法
はシーゲル・ニス（Ｓｉｅｇｅｌ　Ｓ）　（ノン−パラ
メトリック・スタティスティクス・フォー・ザ・ビヘイ
ビアラル・サイエンシズ（Ｎｏｎ−ｐａｒａｍｅｔｒｉ
ｃｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｂｅｈａｖ
ｉｏｕｒａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ）、マグロ−ヒル（Ｍ
ｃ、Ｇｒａｗ−Ｈｉｌｌ）、１９５６年、ニューヨーク
〕による。

下記第１表において、上記４群の集団試料について、本
発明に係る方法を用いて測定された、抗原として選ばれ
たＰＰ　−１３蛋白質の分布パターンに関するい（らか
の統計的値を示す。試験した血液試料中の蛋白質濃度は
０．３〜２．４ｎｇｌ−の範囲であった。

数　　　　　１８　　　４８　　　　９２　　　　１５
０平均 （ｎｇ／ｍｌ　）　０．５８　０，６１　０，８２　　
０．９５標準偏差　　０．１４　　　０．２０　　　０
．１６　　　　０．３４第１の四 分位数　　　０．４６　　　０．４８　　　０．７１　
　　　０．７１第２の四 分位数　　　０．５８　　　０．５６　　　０．８２　
　　　０．９０上記第１表に示されている結果から認め
得るように、男性および妊娠していない女性の血液試料
中の蛋白質量は実質的に同じである。蛋白質量は妊娠し
ている女性においてより高いように思われる。妊娠して
いる女性の約７５％で蛋白質量は約０．７１ｎｇ／ｍ１
である。この表中に表われているこの差は、マンーホイ
ットニー判定１準（Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙｃｒｉｔ
ｅｒｉｕｍ）を用いた統計的観点（Ｐ　＝０．００３５
）から存意である。健康でない妊娠女性の約５０％にお
いて（健康な妊娠女性の約２・５％と比較して）蛋白質
の値が０．９　ｎｇ／　ｍｊより高いことも認められ得
る。

本発明の別の態様に従い、上記した４つの物理化学的特
性を有する胎盤性蛋白質、例えば、ＰＰ−１３は診断に
対してばかりでなく妊娠の進行状態および胎盤損傷の発
生を監視することに対しても利用され得る。この方法は
、ｂｌ！している女性に対する医学的処置による任意の
病的症状、例えば、糖尿病、貧血、高血圧病、腎臓病お
よび甲状腺疾患（ｔｈｙｒｏｉｄ）等を明らかにし得る
。その結果に基づいて、医師は、妊娠を中止させるべき
かどうか、または薬の星を変えるべきかどうか、または
妊婦によって摂取される薬を完全に変えるべきかどうか
までも決定する。

従って、本発明に係る方法による妊娠監視は高い重要性
を有しており、この分野に通じている人によってその真
価が最もよく認められるであろう。

これは、胎盤性蛋白質がそれらの間に存在する差異から
みて妊娠に特異的なものではあり得ないと結論している
従来の所説からみて、最も驚くに値する発見である。

以下に所定の好ましい態様および組成物を用いて本発明
を詳細に記載するが、本発明をこれら特定の態様に限定
しようとするものでないことが理解されよう。一方で、
本明細書の特許請求の範囲によって示されている本発明
の範囲内に含まれ得る他の方法、変形または他の成分を
包含することが意図されている。詳細は、例示によるも
のであり、本発明に係る方法の実施手順の実例となる説
明の目的で示されるものであり、それらに限定されない
ことが理解されるべきである。

以下の例において利用される試薬および供給源は以下の
通りである： 蛋白１丁Ｃプロティン）ＰＰ−１３、ベーリングヴエル
ケ・アクチェンゲゼルシャフト　（Ｂｅｈｒｉｎｇｗｅ
ｒｋｅ八ｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌへｓｃｈａｆｔ）　　製
、　Ｌｏｔ　　ＮＩＬ　　２１１／２３３　　；アンチ
ＰＰ−１３、抗血清、Ｌｏｔ　ＮＩＬ　１６０ＺＢ　；
放射性沃素（＋２５１　）、イスラエル・ニューフレア
中センター（Ｉｓｒａｅｌ　Ｎｕｃｌｅａｒ　Ｃｅｎｔ
ｅｒ）製、水酸化ナトリウムの？容？＆　（ｐ）！＝８
〜１１）中、１５〜２０μＣ１／ｌｒｇの比活性を有す
る； ラクトペルオキシダーゼ、シグマ（Ｓｉｇｍａ）　（ミ
ズーリ州セントルイス在）製、Ｌｏｔ階２００５　；過
酸化水素、３０％濃度、シグマ製、Ｌｏｔ　ＮＱＨ−１
００９゜ 測定に使用した機器は以下の通りである：ガンマ・カウ
ンター（Ｇａｍｍａ　Ｃｏｕｎｔｅｒ）、イスラエルの
エルシント　（Ｅｌｓｃｉｎｔ）製〔インテグレイティ
ソド・ニューフレア・スペクトロメーター（Ｉｎｔｅｇ
ｒａｔｅｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ　Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅ
ｒ）、ｌＮＳ−１１８型〕　； オート・ガンマ（Ａｕｔｏ　Ｇａｍｍａ）４００　ＧＤ
、米国パンカード（Ｐａｃｋａｒｄ）製； クールド・ウルトラ・セントリフユージ（Ｃｏｏｌｅｄ
Ｕｌｔｒａ　Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ）　、、西独へラエ
ウス（ｔｌｅｒａｅｕｓ）のクリオフユージ（Ｃｒｙｏ
ｆｕｇｅ）製；カラムセファテックスＧ−１ｏｏ（９×
５５０ｍ１＋）；フラクションコレクター、ファーマシ
ア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）製、Ｆｒａｃ−１００（スウ
ェーデン）。

工程上 標識（ラベリング）は放射性沃素（＋２５Ｉ）によって
、室温において、１秒間に２回転の速度で回転する、マ
グネテックスクーラーによって操作される金属棒を底部
に有する２　ｍ／プラスチック製試験管内で行なった。

以下の試薬を導入した：１０ｐｌのリン６１緩衝溶液（
ｐＨ＝　７．２　）中３μｇの胎盤性蛋白質； ６μｌのリン酸緩衝溶液中ｌｌ１ｇのラクトペルオキシ
ダーゼ； ２　ｔｄ　（７）ＮａＯＩｌ　（ｐＨ＝　８〜１１　）
中３２５〜３５０ｐｃｉの１２Ｊ、および １０μｌのリン酸緩衝？′８液中９ナノモルの過酸化水
素。

反応溶液は、１ｕｇのラクトペルオキシダーゼおよび３
２５μＣｉのＩＺＪが添加された５ｇｇのＰＰ−１３か
らなっていた。その反応溶液に一般的な比較的筋いアル
カリ度のため、３ｐｌ量のリン酸緩衝溶液（０，４Ｍ）
を添加してｐＨを中性値に到らせた。沃化反応は過酸化
水素の添加によって開始され約３分間続けられた。この
沃化反応は次の組成からなる溶液３００μｌを添加する
ことによって停止された。

この組成は次の通りである：１０ｇ／Ｉ２のウシ血清ア
ルブミンを含有するリン酸緩衝溶液；ＮａＴ（２ｇ／ｊ
り　　；ＮａＮｚ　（Ｉ　ｇ／ｌ）およびＮａＣ１１（
８，５ｇ　／　１　）。さらに１分間の撹拌後、この混
合物を、リン酸緩衝溶液ト１％ウシ血゛清アルブミンお
よび０．１％Ｎ　ａ　Ｎ　３からなる？容ン夜によって
セファデックスＧ−１００カラム上に通して、ｉｕｌＭ
の沃素および他の試薬から、標識された蛋白質を抽出し
た。得られた両分から、沃化の程度をガンマカウンター
（エルシント製）によって測定した。計算された収率は
６４．６％であることがわかった。

標識された抗原の比活性を計算するために、１０μｌの
試料を取り再びバソカード・ガンマ・カウンターによっ
てカウントし、そして８６１７８ｃｐｍ／ｎｇであるこ
とを見い出した。

工■工 緩衝液（トリスＨ（ｊ！　、ｐＨ＝　７．４．０．０２
ｍ／ｆｆおよびＮａＮ３．１　ｇ／ｊｌり中０．２ｎｇ
／ｍ１〜６４ｎｇ／ｍｌの範囲の種々の濃度の抗原の標
準溶液を調製した。

標識された抗原はｌｎｇ／ｍ／の稀釈溶液からなってい
た。第１の抗体は、緩衝液（上記と同じ組成を有する）
中に稀釈された胎盤性抗原の抗血清であった。

工■± 第２の抗体はロバの血清中で生じた。試験はプラスチッ
ク製の試験管中で実施した。その実施概要は下記第２表
に記載する。

以下金白 第−Ｉ−表 全放射能　　２００　　　　　　　　　　−　　　１０
０−−非特異的 結合　　　　２００　　　　　　　　　　−　　　１０
０　　−　　５００ゼロ結合　　１００　　　　　　　
　　　−　　　１００　　１００　　５００標　卓　　
　　　　　　　　１００　　　　−　　　１００　　１
００　　５００標識された抗原と血清の試料または各標
準との間の反応を約１８時間実施した後、第２の抗体を
添力ｎ　して約１０分間撹拌した。混合物を室温で３０
分間（１０００Ｘ　Ｃで）遠心し、この沈澱を５００μ
ｌのリン酸緩衝溶液で洗浄し再度遠心した。

洗浄された沈澱中の放射能をバソカード・ガンマ・カウ
ンターによって測定した。得られた結果を第１図に要約
する。第１図から、１１５０，０００の濃度を有する抗
体（Ａｂ）は０．４〜３２　ｎｇ／　ｍｌの抗原濃度に
対して十分な結合範囲を与えたことが明らかと思われる
。

試験試料中の抗原濃度を計算するために、２５Ｉの放射
能（１分間当りのカウント数で表わされる）対ＰＰ−１
３？Ｑ度（ｎｇ／＋＋＋７で表わされる）を相関させて
検定曲線を調製した（第２図に示す）。

次の４群の集団試料〔成人男性、妊娠していない成人女
性、無症候の妊娠している成人女性および症候性の妊娠
している成人女性〕について、この例に記載の方法に従
って得られた結果を第３図にグラフ様式で示す。

炭−１ 工程ａ、ｂ、ｃおよび第２表に記載したと同じ試薬、手
順および実施概要を用いて、明らかな羊水の７試料を分
析した。

これらの測定結果を第３表に要約する。

以下ぶ白 第−」Ｌ−表 １　　　　　　　　　　１．２４ ２　　　　　　　　　　２．９９ ３　　　　　　　　　　３．６６ ４　　　　　　　　　　２．０７ ５　　　　　　　　　３．１３ ５　　　　　　　　　１．５７ 上記結果に基づき、ＰＰ−１３の濃度対特異的結合（％
で表わされる）および＋２５７放射能（１分間当りのカ
ウントｐで表わされる）を相関させたグラフを描いた。

これらのグラフは、ヒ１−血゛清を分析した、例１に基
づく第１図および第２図に示されている、血清を用いて
得られたグラフと同じであつ７°　　　　　　　　　　
　　　　　　　以下ぶ白

【図面の簡単な説明】

第１図は、特異的結合の割合（％）対ＰＰ−１３蛋白質
の濃度の相関関係を示す図である。 第２図は、＋５１放射能対ＰＰ−１３蛋白質の７店度の
相関関係を示す図である。 第３図は、４群の集団試料に対する血清中の蓄積分布を
示す図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、生物学的流体試料を分析することによって妊娠障害
   を測定する方法であって、下記の工程：（ａ）次の物理
   化学的特性： （１）アルブミンに特異的である範囲の電気泳動移動度
   ； （２）４．６〜４．９の範囲の等電点； （３）３５，０００ダルトン以下の分子量；および（４
   ）１％以下の炭水化物含量 によって特徴付けられる、非ホルモン性のヒト由来胎盤
   性可溶性蛋白質からなる抗原を放射性沃素によって標識
   する工程、 （ｂ）前記生物学的流体試料を、前記標識された抗原、
   および前記胎盤性抗原と適合性である第１の抗体と一緒
   にインキュベーションする工程、（ｃ）工程（ｂ）で得
   られた生成物に、固体組成物に結合された第２の抗体を
   適用して、複合体を沈澱させる工程、および （ｄ）前記複合体中の放射能を測定することによって、
   妊娠障害の程度を確定する工程 を含んでなる方法。 ２、前記生物学的流体が血液、羊水および尿からなる群
   より選ばれる、特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３、前記非ホルモン性のヒト由来胎盤性可溶性蛋白質が
   ＰＰ−１３である、特許請求の範囲第１項記載の方法。 ４、前記蛋白質の量が約０．７１ｍｇ／ｍｌである、特
   許請求の範囲第１項から第３項までのいずれかに記載の
   方法。 ５、蛋白質の標識が下記の工程： （ａ）固体吸着剤を用いて、標識された抗原を抽出する
   工程、 （ｂ）該抗原によって特異的に結合された放射性沃素お
   よびそれに対する収率をカウントする工程、（ｃ）標識
   された抗原の比活性を計算する工程、および （ｄ）前記比活性を標準評価曲線と相関させる工程 を含んでいる、特許請求の範囲第１項記載の方法。 ６、前記第１の抗体が、動物中の前記胎盤性抗原の抗血
   清から得られたものである、特許請求の範囲第１項記載
   の方法。 ７、前記抗血清がｐＨ約７．４の緩衝液によって稀釈さ
   れている、特許請求の範囲第６項記載の方法。 ８、前記緩衝液がＮａＮ＿３およびトリス−ＨＣｌから
   なる、特許請求の範囲第７項記載の方法。 ９、適当な複合体ＡＧ−ＡＢを得るために、前記第１の
   抗体の濃度が１／１０，０００〜１／５０，０００であ
   る、特許請求の範囲第６項から第８項までのいずれかに
   記載の方法。 １０、前記標識された抗原の放射能がオート・ガンマに
   よってカウントされる、特許請求の範囲第１項記載の方
   法。